CN101940179B

CN101940179B - 斑节对虾的育苗方法

Info

Publication number: CN101940179B
Application number: CN2010102709372A
Authority: CN
Inventors: 蔡俊鹏; 孙丽滢
Original assignee: South China University of Technology SCUT
Current assignee: South China University of Technology SCUT
Priority date: 2010-08-31
Filing date: 2010-08-31
Publication date: 2012-12-05
Anticipated expiration: 2030-08-31
Also published as: CN101940179A

Abstract

本发明公开了一种斑节对虾的育苗方法，具体步骤如下：(1)制备蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合菌液；(2)在育苗池中投放蛭弧菌混合菌液，使海水中蛭弧菌含量达到10¹pfu/mL以上，曝气5-12h；(3)将斑节对虾无节幼体以6～12万尾/m³的密度投入上述育苗池中；(4)育苗过程中，定期投喂饵料，幼体投放后至少每隔5天投放一次蛭弧菌混合菌液，浓度在10pfu/mL以上；待仔虾发育到15天时或仔虾体长全部达到1厘米以上时，即得到斑节对虾虾苗。本发明通过在水质处理及饵料中投放蛭弧菌混合菌液，再配合科学的育苗质量管理可有效减少育苗过程中的换水次数，甚至不换水，来提高虾苗的出产率，并提高虾苗成活率和免疫力。

Description

斑节对虾的育苗方法

技术领域

本发明属于对虾养殖育苗技术领域，涉及一种使用蛭弧菌游泳体和蛭质体混合菌液进行斑节对虾育苗的方法。

背景技术

斑节对虾俗称草虾，在我国有较长的养殖历史，是世界一大高产虾类之一。该虾具有生长快、适应性强、食性杂、个体大、耐干旱、易运输等优点，是深受养殖者和消费者欢迎的名贵虾类。斑节对虾人工育苗是一项既具高难度技术，又具高利润的工作。这几年，海区水质受到不同程度的污染，斑节对虾育苗工作风险更大。引起斑节对虾虾苗发病的原因很多，有生物因素的，如病毒、细菌、真菌、原生动物、附着性藻类；有非生物因素的，如水质、水温、光照、营养等。

微生态制剂是协调人与自然的关系，促进水产养殖业健康发展的有效途径。在育苗时使用微生态制剂：一方面可以增加营养，另一方面可以维持育苗池生态平衡，改善养殖环境，避免由于抗生素、激素和消毒剂的滥用造成的对病原微生物产生抗药性。并能有效降解氮、亚硝酸氮、硫化氢等有害物质，因此减少了换水量，大大提高了经济效益，使水环境稳定，利于对虾养殖业的可持续发展。

蛭弧菌是寄生于其他细菌，并能导致宿主细菌裂解的一类细菌。比一般细菌小，能通过细菌滤器，有类似噬菌体的作用，是一种很有前景的可用来消除水体中致病菌，提高水产养殖成活率的微生物制剂。蛭弧菌的生活史可分为脱离宿主细菌、具有鞭毛、自由游泳的游泳体状态和在宿主细菌内生长发育的蛭质体状态。已有的研究表明，作为一种有益微生物制剂，无论是在食品工业还是在(海洋)水产养殖等领域，蛭弧菌的应用均是安全的。例如：在国外，Lenzand Hespell(1978)研究发现，蛭弧菌及对动物及人的细胞不具侵染性[LenzR.W.，Hespell R.B.Attempts to grow bedellovibriosmicurgically-injected into animal cells.Archives of Microbiology，1978，119(3)：245-248]。在国内，林茂等(2006)研究了蛭弧菌对鱼类细胞的作用，发现它对鱼类细菌没有侵染作用[林茂，杨先乐，薛晖，曹海鹏，邱军强。蛭弧菌BDH2102对鱼类细胞及病原菌的作用。微生物学通报，2006，33(1)：7-11]。

到目前为止，还没有在斑节对虾育苗过程中使用蛭弧菌游泳体和蛭质体混合菌液的研究报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的不足，通过开发适合于斑节对虾育苗过程中控制水体细菌污染，防治斑节对虾种苗病害，提高免疫力的新育苗方法，提供一种培育健康、优质、存活率高的节水型斑节对虾种苗的新技术。

发明所述的使用蛭弧菌蛭质体和游泳体混合菌液(简称蛭弧菌混合菌液)培育斑节对虾种苗技术的内容具体如下：

一种斑节对虾的育苗方法，具体步骤如下：

(1)制备蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合菌液，其中，蛭弧菌菌株为蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDFM05，由中国典型培养物保藏中心保藏，其简称为CCTCC，保藏编号为：CCTCC NO：M 209172，保藏日期为2009年8月7日；

(2)在育苗池中投放蛭弧菌混合菌液，使海水中蛭弧菌含量达到10¹pfu/mL以上，曝气5-12h；

(3)将斑节对虾无节幼体以6～12万尾/m³的密度投入上述育苗池中；

(4)育苗过程中，定期投喂饵料，幼体投放后至少每隔5天投放一次蛭弧菌混合菌液，使海水中蛭弧菌浓度在10pfu/mL以上；待仔虾发育到15天时或仔虾体长全部达到1厘米以上时，即得到斑节对虾虾苗。

优选地，步骤(2)和(4)所述蛭弧菌混合菌液的浓度为10¹～10⁷pfu/mL。

优选地，步骤(3)中所述斑节对虾无节幼体的培育方法为：

挑选出活力良好，虾体无损伤，性腺成熟度好的亲虾放入产卵槽，每一产卵槽放入亲虾1～2尾，产卵槽水深保持70～90cm，并微量充气；及时清除水槽周围的浅橙红色且带有腥味的产卵粘稠物；将产卵后的亲虾移出，让卵继续在产卵槽中孵化，孵化时增大充气量，水温保持28～30℃，盐度28～33‰，卵孵化后要彻底清洁一次，吸出池底污物及未孵化出的卵子，计算出斑节对虾无节幼体数量，并根据无节幼体数量的多少选取优质健康的无节幼体移入育苗池。所述产卵槽中投放蛭弧菌混合菌液，使产卵槽的海水中蛭弧菌含量达到 10¹pfu/mL以上。

优选地，所述海水经砂滤和沉淀处理，且育苗过程中海水全程不换。

优选地，步骤(3)所述蛭弧菌混合菌液的投放间隔为5～15天，使水中的蛭弧菌浓度在10¹～10⁷pfu/mL。

优选地，步骤(4)所投喂的饵料先用浓度10¹～10⁷pfu/mL蛭弧菌混合菌液浸泡15～45min。

优选地，步骤(4)所述定期投喂饵料是从溞状幼体开始投喂配合饵料，每天投喂8次；在溞状幼体中加投单胞藻和轮虫；在糠虾期幼体中投单胞藻，后期投卤虫无节幼体；仔虾生长期投卤虫无节幼体。

优选地，步骤(4)所述育苗过程中的条件控制：盐度幼体前期为28～33‰，后期逐渐降低到14～25‰；水温在26～31℃，pH值7.8～8.7；连续充气并随幼体发育充气量逐渐增加；溞状幼体期间忌直射、强光，以免使幼体弯曲，应保持光照强度在203.8～305.7lx；在糠虾幼体之后逐渐加强光照强度，到仔虾期后可让太阳光直接照射，以锻炼其对外界环境的适应力。

优选地，步骤(4)所述充气量控制为：无节幼体期间充气使水面呈微波状，溞状幼体期微沸腾状，糠虾幼体期沸腾状；仔虾期后，气量加到最大至强沸腾状；所述光线控制为：在溞状幼体期间弱光照射；在糠虾幼体之后逐渐加强光照强度，到仔虾期后，采用太阳光直接照射。

优选地，所述蛭弧菌混合菌液的制备方法如下：

(1)蛭弧菌蛭质体的制备方法为：在含有宿主菌副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)的DNB(dilute nutrient broth)液体培养基(营养肉汤0.8g，酪蛋白酸水解物0.5g，酵母精提物0.1g，溶于1000ml蒸馏水中，pH值为7.2～7.6)中接入蛭弧菌，于25～35℃、150～300rpm培养36～48h，得到含蛭弧菌蛭质体和蛭弧菌游泳体的培养液，培养液经4℃6000～8000rpm离心15～20min后，去除含蛭弧菌游泳体的上清液，得到的沉淀即是蛭弧菌蛭质体；

(2)蛭弧菌游泳体的制备方法为：将蛭弧菌蛭质体制备方法中的含蛭弧菌游泳体的上清经16000～18000rpm离心15～20min后，得到的沉淀即是蛭弧菌游泳体；

(3)所述蛭弧菌游泳体和蛭质体用DNB液体培养基(营养肉汤0.8g，酪蛋白酸水解物0.5g，酵母精提物0.1g，溶于1000ml蒸馏水中，pH值为7.2～7.6)、无菌水、生理盐水和0.2mol/L pH值为7.2～7.6的磷酸盐缓冲液中的一种分别进行悬浮，得到两种菌液，再将两种菌液按游泳体和蛭质体细菌数 1∶1的比例混合，即制得混合菌液。

与现有方法相比本技术方案具有以下优点：

1、本发明所述的蛭弧菌混合菌液在斑节对虾育苗中效果显著。

本方案于实际使用，可明显提高斑节对虾育苗的成功率和免疫力，且使用蛭弧菌游泳体和蛭质体混合菌液，兼具游泳体起效快，活力强和蛭质体制备、保存容易，杀菌作用时间更久和环境耐受力更强的优点。

2、本发明所述的蛭弧菌混合菌液在斑节对虾育苗中安全性好。

蛭弧菌可侵染、裂解宿主细菌的特性使之可有效裂解消除水体中可能产生斑节对虾种苗病害的细菌，且其在裂解完宿主细菌后，会因饥饿而自动消亡，从而克服了抗生素滥用带来的副作用和常规消毒剂NaClO、漂白粉等造成的氯残留的不利影响。同时，已有研究已证明，蛭弧菌对人等无毒无害。

3、所述蛭弧菌混合菌液可有效提高种苗免疫力

蛭弧菌混合菌液可调节虾苗自身的菌系，维护肠道系统环境，促进免疫系统的发育，增强苗种的体质，方案于实际实施中各项免疫指标的测定也都高于使用传统的方法。且混合菌液中的蛭质体所携带的宿主副溶血弧菌虽已无活性，但免疫原性并未被破坏，故可发挥疫苗的作用。

4、本发明方案全程不用换水和添水，有效避免了由于换水带来的病害。且减少了污水的排放，降低对环境的影响，是一种绿色、环保、低碳的节水型新育苗技术。

附图说明

图1为实施例1育苗试验后免疫因素酚氧化酶(Phenoloxidase，PO)检测结果

图2为实施例1育苗试验后免疫因素超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase，SOD)检测结果

图3为实施例1免疫保护率(RPS)检测结果。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步具体详细描述，但本发明的实施方式不限于此，对于未特别注明的工艺参数，可参照常规技术进行。

实施例

一实验分组

实验分A.B.C.D四大组，每组均设2个平行对照。其中：

A组(对照组)：

A1：按现有的工业育苗方法实施。

A2：按本发明方案实施但全程不用蛭弧菌蛭质体、游泳体混合菌液浸泡饵料和泼洒于水体

B组(蛭弧菌蛭质体和游泳体的混合菌液浸泡饲料组)

B1：全程用10¹pfu/mL蛭弧菌混合菌液浸泡所有饵料；

B2：全程用10³pfu/mL蛭弧菌混合菌液浸泡所有饵料；

B3：全程用10⁵pfu/mL蛭弧菌混合菌液浸泡所有饵料；

B4：全程用10⁷pfu/mL蛭弧菌混合菌液浸泡所有饵料。

C组(蛭弧菌蛭质体、游泳体混合菌液泼洒于水体组)

C1.1～C1.3：用蛭弧菌混合菌液均匀泼洒于水体中，使水体中蛭弧菌浓度为10¹pfu/mL，幼苗培育期分别间隔5天、10天、15天泼洒菌液一次；

C2.1～C2.3：用蛭弧菌混合菌液均匀泼洒于水体中，使水体中蛭弧菌浓度为10³pfu/mL，幼苗培育期分别间隔5天、10天、15天泼洒菌液一次；

C3.1～C3.3：用蛭弧菌混合菌液均匀泼洒于水体中，使水体中蛭弧菌浓度为10¹pfu/mL，幼苗培育期分别间隔5天、10天、15天泼洒菌液一次；

C4.1～C4.3：用蛭弧菌混合菌液均匀泼洒于水体中，使水体中蛭弧菌浓度为10¹pfu/mL，幼苗培育期分别间隔5天、10天、15天泼洒菌液一次；

D组(蛭弧菌蛭质体、游泳体混合菌液泼洒于水体和浸泡饵料)

用蛭弧菌混合菌液泼洒于水体和浸泡所有饵料，浓度和换水间隔设置同C组。

二实验步骤

1.一种用于斑节对虾育苗的蛭弧菌蛭质体和游泳体混合菌液的制备

所用蛭弧菌菌株为蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDFM05，由中国典型培养物保藏中心保藏，其简称为CCTCC，保藏编号为：CCTCC NO：M 209172，保藏日期为2009年8月7日。

蛭弧菌BDFM05蛭质体通过以下方法制备：在100mL含有1×10⁶cfu/mL 宿主菌副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus，购于美国典型物种保藏中心American Type Culture Collection，编号：ATCC 17802)的DNB(dilute nutrientbroth)液体培养基(营养肉汤0.8g，酪蛋白酸水解物0.5g，酵母精提物0.1g，溶于1000ml蒸馏水中，pH值为7.2～7.6)中接入1mL 1×10³pfu/mL蛭弧菌，于28℃、200rpm培养36h，得到含蛭弧菌蛭质体和游泳体的培养液，培养液经4℃6000rpm离心20min后，去除含蛭弧菌游泳体的上清液，得到的沉淀即是蛭弧菌蛭质体；

蛭弧菌游泳体的制备方法为：将蛭弧菌蛭质体制备方法中的含蛭弧菌游泳体的上清经16000rpm离心20min后，得到的沉淀即是蛭弧菌游泳体；

蛭弧菌游泳体和蛭质体分别用1mL DNB液体培养基(营养肉汤0.8g，酪蛋白酸水解物0.5g，酵母精提物0.1g，溶于1000ml蒸馏水中，pH值为7.2～7.6)、悬浮，得到两种菌液；然后将上述两种菌液按蛭弧菌游泳体和蛭弧菌蛭质体细菌数1∶1的比例混合，得到蛭弧菌混合菌液。

2.育苗用水水质处理

A2及B/C/D组产卵槽和育苗池的海水均为经过砂滤、沉淀的新鲜海水，然后向B/C/D组水体中加入蛭弧菌混合菌液，使水体中蛭弧菌含量达到10¹～～10⁷pfu/mL，曝气8h。A1组用水和目前工业育苗用水处理方法保持一致。

3.亲虾的选择和产卵及受精卵孵化

挑选出活力良好，虾体无损伤，性腺成熟度好的亲虾放入产卵槽，产卵槽通常使用0.5t的水池，每池放入亲虾2尾，产卵槽水深保持70cm，并微量充气。产卵期应及时清除水槽周围的浅橙红色且带有腥味的产卵粘稠物。

产卵后将亲虾移出，让卵继续在产卵槽中孵化，孵化时为使卵能充分滚动应增大充气量，水温保持28℃，盐度30‰，卵孵化后要彻底清洁一次，吸出池底污物及未孵化出的卵子，计算出无节幼体数量，并根据无节幼体数量的多少选取优质健康的无节幼体移入育苗池。

4.幼体培育

育苗池中无节幼体的饲育密度范围控制在6～12万尾/m³。盐度幼体前期为30‰，后期逐渐降低到15‰；水温在28℃，pH值8.0，溶氧8mg/L。无节幼体期间充气使水面呈微波状，溞状幼体期微沸腾状，糠虾幼体期沸腾状；仔虾期后加大充气量至强沸腾状。在溞状幼体期间忌直射、强光，保持光照强度在260lx；在糠虾幼体之后逐渐加强光照强度，到仔虾期后可让太阳光直接照射，以锻炼其对外界环境的适应力。

从溞状幼体开始投喂0号(Z1～M3)或1号(P1～P15)规格的配合饵料，每天投喂8次。另外，在溞状幼体中加投单胞藻和轮虫；糠虾期幼体中投单胞藻，后期投卤虫无节幼体；仔虾期投卤虫无节幼体。所有投喂的饵料需事先使用10¹～10⁷pfu/mL蛭弧菌混合菌液浸泡30min。

幼体培育期每5～15天向育苗池均匀泼洒一次蛭弧菌混合菌液，使池水中泼洒的蛭弧菌浓度在10¹～10⁷pfu/mL。

待仔虾发育到15天时(P15)或仔虾体长全部达到1厘米以上时，即可出苗销售。

5.免疫因素测定

(1)酚氧化酶及超氧化物歧化酶测定

育苗试验结束后饥饿24小时，每组取样100个，20只/管放于6个分别盛有3mL Hank’s液(pH值7～8)的离心管中，贮于-80℃以备抗免疫指标的测定。测定时取出样品，使其在冰上融化，进行匀浆，然后6000r/min，-4℃离心5min，取上清用于免疫指标的测定。

酚氧化酶(Phenoloxidase，PO)：以左旋多巴(L-dopa)为底物，采用改进的Ashida方法，以OD490对反应时间作图，以实验条件下每分钟OD值增加0.001定义为1个酶活力单位。

超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)：测定采用YI Sun等(ASimple Method for Clinical Assay of Superoxide Dismutase[J].Clin.Chem.1988：497-500)的方法。一个酶活力单位定义为：在试验条件下，硝基四氮唑溶液(NBT)被SOD抑制50％所需的酶蛋白量。

(2)免疫保护率的测定：

免疫保护率的测定：

于预先消毒的盛有5L砂滤海水(盐度15‰)的水池中进行。

以A1组为对照组，其他(B-D组)为免疫实验组，每个组随机取100尾仔虾，平均分成两组。向每组的水体中加入副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus，购于美国典型物种保藏中心American Type CultureCollection，编号：ATCC 17802)，使终浓度达到10⁷cfu/mL；两组均正常投饵，攻毒5d后实验结束。考虑到仔虾有一定自然死亡率，因此采用相对存活率(Relative Percentage Survival，RPS)计算式：

RPS(％)＝(1-免疫组死亡率/对照组死亡率)×100％

6.水质检测项目包括：色臭味，酸碱度pH，氨态氮，亚硝酸盐氮，硫化物。其中pH用数字式pH计测定(分辨率0.01pH)；氨态氮用次溴酸纳氧化法法测定(GB12763.4-91)；亚硝酸盐氮用重氮-偶氮光度法测定(GB12763.4-91)；硫化物用对氨基二甲基苯胺光度法(亚甲蓝法)(GB16489-96)。

三、结果

所有结果均为两个平行样的平均值

表1斑节对虾育苗成活率情况

由表1知实验组成功率最低的47.3％也要远远好于对照组A1：33.7％和A2：12.2％，可见蛭弧菌混合菌液可有效提高斑节对虾的育苗成功率。

从B，C，D大组组内的对比可知随着加蛭弧菌BDFM05混合菌液浓度的升高，育苗成功率也显著提升，但随着加入蛭弧菌BDFM05混合菌液间隔时间的延长，斑节对虾的育苗成功率变化趋势却不明显。可见育苗成功率与蛭弧菌混合菌液浓度呈正比同时和加入蛭弧菌混合菌液的间隔时间关系却不大，所以从育苗成本考虑可以适当延长投菌间隔时间。

从B，C，D大组组间对比可知只向水体中加入蛭弧菌混合菌液的实验组效果要好于只用蛭弧菌处理饵料的实验组，但二者效果对比并不显著，且二者的效果都要远远差于同时用蛭弧菌混合菌液处理水体和饵料。因此本方案在实施时建议采用蛭弧菌混合菌液处理饵料和水质相结合的方式。

免疫因素测定：酚氧化酶(PO)的结果如图1所示，未加蛭弧菌蛭质体、游泳体混合菌液处理的A组酶活明显低于其他使用蛭弧菌混合菌液处理水体、饵料，且高浓度蛭弧菌处理的实验组PO酶活要高于低浓度组，而加菌间隔时间长的组的PO酶活却只是略低于加菌时间间隔短的组，其中酶活最高的D4.1组要比对照组A1、A2组酶活高出1个数量级。B、C、D三大组中使用蛭弧菌处理水体而不处理饵料的C组酶活明显低于水体、饵料均用蛭弧菌处理的小组，但效果略好于只用蛭弧菌处理饵料而不处理水体的B组。

超氧化物歧化酶(SOD)结果如图2所示，其结果规律同酚氧化酶相似。

免疫保护率测定结果(图3)更显示了蛭弧菌蛭质体、游泳体混合菌液效果优于对照，以工业方法育苗的A1组作为对照组，其死亡率高达95％，而加入了蛭弧菌混合菌液的免疫实验组死亡率都要低于50％，故而RPS都要高于50％，RPS最高组D4.1可达到90％。

水质检测结果除A2组水体已有异味，水色浑浊外，其他组水质监测结果均符合《渔业水质标准》(GB 11607-1989)和《海水虾类育苗水质标准》(GB/T21673-2008)标准，但A1组的氨态氮，亚硝酸盐氮，硫化物测定值均高于试验组B、C、D的。其中，A组氨态氮的检测结果为0.532mg/L，B/C/D组均≤0.311mg/L；亚硝酸盐氮A组检测结果为：0.019mg/L，B/C/D组均≤0.013mg/L；硫化物A组检测结果为：0.124mg/L，B/C/D组均≤0.113mg/L。

综合以上结果可以证明，蛭弧菌蛭质体、游泳体混合菌液不仅可有效提高育苗成活率，更能提高虾苗的免疫力。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.斑节对虾的育苗方法，其特征在于，具体步骤如下：

(2)在育苗池中投放蛭弧菌混合菌液，使海水中蛭弧菌混合菌含量达到10¹pfu/mL以上，曝气5-12h；

(4)育苗过程中，定期投喂饵料，幼体投放后至少每隔5天投放一次蛭弧菌混合菌液，使海水中蛭弧菌混合菌浓度在10pfu/mL以上；待仔虾发育到15天时或仔虾体长全部达到1厘米以上时，即得到斑节对虾虾苗；

所述蛭弧菌混合菌液的制备方法如下：

(a)蛭弧菌蛭质体的制备方法为：在含有宿主菌副溶血弧菌的DNB液体培养基中接入蛭弧菌BDFM05，于25～35℃、150～300rpm培养36～48h，得到含蛭弧菌蛭质体和蛭弧菌游泳体的培养液，培养液经4℃、6000～8000rpm离心15～20min后，去除含蛭弧菌游泳体的上清，得到的沉淀即是蛭弧菌蛭质体；

(b)蛭弧菌游泳体的制备方法为：将蛭弧菌蛭质体制备方法中的含蛭弧菌游泳体的上清经16000～18000rpm离心15～20min后，得到的沉淀即是蛭弧菌游泳体；

(c)所述蛭弧菌游泳体和蛭质体用DNB液体培养基、无菌水、生理盐水和0.2mol/L pH值为7.2～7.6的磷酸盐缓冲液中的一种分别进行悬浮，得到两种菌液，再将两种菌液按游泳体和蛭质体细菌数1∶1的比例混合，即制得混合菌液。

2.根据权利要求1所述的斑节对虾的育苗方法，其特征在于，步骤(2)和(4)所述蛭弧菌混合菌的浓度为10¹～10⁷pfu/mL。

3.根据权利要求1或2所述的斑节对虾的育苗方法，其特征在于，步骤(3)中所述斑节对虾无节幼体的培育方法为：

将性腺成熟的亲虾放入产卵槽，每一产卵槽放入亲虾1～2尾，产卵槽水深保持70～90cm，并微量充气；及时清除水槽周围的浅橙红色且带有腥味的产卵粘稠物；将产卵后的亲虾移出，让卵继续在产卵槽中孵化，孵化时增大充气量，水温保持28～30℃，盐度28～33‰，卵孵化后，即得到斑节对虾无节幼体；所述产卵槽中投放蛭弧菌混合菌液，使产卵槽的海水中蛭弧菌含量达到10¹pfu/mL以上。

4.根据权利要求3所述的斑节对虾的育苗方法，其特征在于，所述海水经砂滤和沉淀处理，且育苗过程中海水全程不换。

5.根据权利要求1所述的斑节对虾的育苗方法，其特征在于，步骤(4)所投喂的饵料先用浓度10¹～10⁷pfu/mL蛭弧菌混合菌液浸泡15～45min。

6.根据权利要求1或5所述的斑节对虾的育苗方法，其特征在于，步骤(4)所述定期投喂饵料是从溞状幼体开始投喂配合饵料，每天投喂8次；在溞状幼体中加投单胞藻和轮虫；在糠虾期幼体中投单胞藻，后期投卤虫无节幼体；仔虾生长期投卤虫无节幼体。

7.根据权利要求1或5所述的斑节对虾的育苗方法，其特征在于，步骤(4)所述育苗过程中的条件控制：盐度幼体前期为28～33‰，后期逐渐降低到14～25‰；水温在26～31℃，pH值7.8～8.7；连续充气并随幼体发育充气量逐渐增加；幼体前期用弱光线照射。

8.根据权利要求7所述的斑节对虾的育苗方法，其特征在于，步骤(4)所述充气量控制为：无节幼体期间充气使水面呈微波状，溞状幼体期微沸腾状，糠虾幼体期沸腾状；仔虾期后，气量加到最大至强沸腾状；所述光线控制为：在溞状幼体期间弱光照射；在糠虾幼体之后逐渐加强光照强度，到仔虾期后，采用太阳光直接照射。