CN101921224B - 1-（3-氨基丙基）哌嗪-4-氨基酰胺类化合物及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了1-(3-氨基丙基)哌嗪-4-氨基酰胺类化合物及其制备方法与应用。本发明所提供化合物的结构通式如式I所示，其中，R1为未取代的或被1-3个取代基取代的下列基团：苯基、苄基、萘基、C5-C10芳香性杂环基或C4-C7饱和杂环基，所述杂环基中包括1-3个选自N、O和S中的至少一种杂原子，所述取代基选自下列原子或基团：卤素、巯基、羟基、CF3、CN、NO2和SO2CH3；X为亚甲基、羰基或者不存在。经HIV-1感染的Bal(R5)的淋巴组织样细胞活性筛选，发现该系列化合物具有很强的抗HIV活性。其中活性最强化合物的IC50值达到10nM，选择指数大于14,545，可发展为抗艾滋病药物。
Description
技术领域
本发明涉及1-(3-氨基丙基)哌嗪-4-氨基酰胺类化合物及其制备方法与应用。
背景技术
艾滋病(AIDS)是由人类免疫缺陷病毒(HIV)感染引起的以免疫功能缺陷为主要表现的疾病，自从1981年美国报告首例AIDS以来，艾滋病目前已是世界上造成死亡病例最多的传染病，鸡尾酒疗法的问世大大降低了HIV-1感染者的死亡率。然而，HIV-1已对目前几乎所有的抗病毒药物都产生了耐药性，且抗病毒药物普遍存在毒性大等缺点。因而，发现和发展作用机制确切、结构类型新颖的抗HIV药物仍是一项重要的任务。
作为趋化因子受体家族成员的CCR5受体，是HIV-1进入细胞的重要辅助受体。某些对R5型HIV-1有抵抗力的人群中，CCR5基因的编码区缺失了32对碱基(ccr5Δ32)，ccr5Δ32/ccr5Δ32纯合子基因型的人群可不感染HIV-1，而CCR5/ccr5Δ32杂合子基因型的人群受感染率也比普通人群低35％，而且机体生理功能不发生影响(Liu R，et al.，Cell，1996，86(3)：9367-9377)。体内或体外合成的CCR5受体抑制剂，如RANTES、AOP-RANTES、MIP-1α、MIP-1β、Met-RANTES和LD78β(MIP-1αisoform)等在体外都能抗R5型病毒感染(Aquaro S，et al.，J Virol.2001，75(9)：4402-4406)。因此，CCR5是抗HIV-1药物设计的良好靶点。CCR5拮抗剂通过与CCR5受体结合，使CCR5构象发生改变，从而导致gp120与CCR5的亲和力降低，进一步降低HIV-1的感染能力；或使CCR5发生内源化，使到达细胞表面的CCR5数量减少，导致HIV-1与CCR5在细胞表面结合的数量减少，从而干扰CCR5与病毒糖蛋白的结合，起到抗病毒作用(Kazmierski W，et al.，Bioorg Med Chem.2003，11(13)：2663-2676)。
小分子CCR5抑制剂的研究已经取得了一定的进展，按结构类型不同可分为苯并环庚烯类化合物，哌啶类化合物，螺环二酮哌啶类化合物，托品烷类化合物，4-哌啶-1-丁胺类化合物，吡咯烷类化合物等几大类。目前进入临床阶段的CCR5小分子拮抗剂有TAK-652(BabaM，et al.，Antimicrob Agents Chemother.2005，49(11)：4584-4591)、TAK-220(Shinichi Imamura，et al.，J Med Chem.2006；49：2784-2793)、SCH-D(StrizkiJM，et al.，Antimicrob Agents Chemother.49：4911-19)、UK-427857(Wood A，et al.，Prog in Med Chem.2005，43：239-71)、GW-873140(Nichols，W.G.，et al.，AntimicrobAgents Chemother.52：858-865)等，其中马拉维若(UK-427857)于2007年8月作为抗HIV的第一个CCR5抑制剂被FDA批准上市。最近也有不少新的CCR5抑制剂见诸报道(Lemoine RC，et al.，Bioorg Med Chem Lett.2010，doi：10.1016/j.bmcl.2010.02.004；Rena Nishizawa，Bioorg Med Chem Lett.2010，20：763-766；Lemoine RC，et al.，BioorgMed Chem Lett.2010(20)：704-708；Lemoine RC，et al.，Bioorg Med Chem Lett.2010(20)：1674-1676)。
综上所述，CCR5拮抗剂可以用于AIDS和其他与CCR5相关疾病的治疗。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有拮抗HIV活性的化合物或其药学上可接受的盐，可用于治疗艾滋病。
本发明所提供的化合物的结构式如式Ⅰ所示：
(式Ⅰ)
其中，R1为未取代的或被1-3个取代基取代的下列基团：苯基、苄基、萘基、C5-C10芳香性杂环基或C4-C7饱和杂环基，所述杂环基中包括1-3个选自N、O和S中的至少一种杂原子，所述取代基选自下列原子或基团：卤素、巯基、羟基、CF3、CN、NO2和SO2CH3；
X为亚甲基、羰基或者不存在。
本发明所提供的化合物优选下述任意一种：
1)1-乙酰基-N-[3-(4-苄基哌嗪-1-基)丙基]-N-(3-氯-4-甲基苯基)哌啶-4-甲酰胺(式Ⅰ中，X为亚甲基，R1为苯基的化合物)；
2)1-乙酰基-N-[3-(4-苯甲酰基哌嗪-1-基)丙基]-N-(3-氯-4-甲基苯基)哌啶-4-甲酰胺(式Ⅰ中，X为羰基，R1为苯基的化合物)；
3)1-乙酰基-N-{3-[1-(2-氯-噻唑-5-基-亚甲基)哌嗪-1-基]丙基}-N-(3-氯-4-甲基苯基)哌啶-4-甲酰胺(式Ⅰ中，X为亚甲基，R1为5-2-氯-噻唑基的化合物)；
4)1-乙酰基-N-{3-[4-(吡啶-4-亚甲基)哌嗪-1-基)丙基}-N-(3-氯-4-甲基苯基)哌啶-4-甲酰胺(式Ⅰ中，X为亚甲基，R1为4-吡啶基的化合物)；
5)1-乙酰基-N-{3-[4-(吡啶-3-亚甲基)哌嗪-1-基]丙基}-N-(3-氯-4-甲基苯基)哌啶-4-甲酰胺(式Ⅰ中，X为亚甲基，R1为3-吡啶基的化合物)；
6)1-乙酰基-N-{3-[4-(6-氯-吡啶-3-亚甲基)-哌嗪-1-基]丙基}-N-(3-氯-4-甲基苯基)哌啶-4-甲酰胺(式Ⅰ中，X为亚甲基，R1为3-6-氯-吡啶基的化合物)；
7)1-乙酰基-N-{3-[4-(4-氟-苄基)-哌嗪-1-基]丙基}-N-(3-氯-4-甲基苯基)哌啶-4-甲酰胺(式Ⅰ中，X为亚甲基，R1为4-氟-苯基的化合物)；
8)1-乙酰基-N-{3-[4-(4-甲砜基-苄基)-哌嗪-1-基]丙基}-N-(3-氯-4-甲基苯基)哌啶-4-甲酰胺(式Ⅰ中，X为亚甲基，R1为4-甲砜基-苄基的化合物)；
9)1-乙酰基-N-{3-[4-(吡啶-2-基)哌嗪-1-基]丙基}-N-(3-氯-4-甲基苯基)哌啶-4-甲酰胺(式Ⅰ中，X不存在，R1为2-吡啶基的化合物)。
式Ⅰ所示化合物药学上可接受的盐为式Ⅰ所示的化合物与下述任意一种酸所形成的盐：盐酸、酒石酸、枸橼酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、磷酸和甲磺酸。
本发明所提供的式Ⅰ所示化合物制备方法的流程如下：
具体包括下述步骤：
1)在碱存在下，用KI作催化剂，使3-氯-4-甲基苯胺与1-溴-3-氯丙烷进行亲核取代反应，得到N-(3-氯丙基)-3-氯-4-甲基苯胺；
2)在碱存在下，N-(3-氯丙基)-3-氯-4-甲基苯胺与1-乙酰基-4-哌啶甲酰氯发生偶联反应，得到1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-氯甲基)-4-哌啶甲酰胺；
3)在碱存在下，用KI作催化剂，1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-氯甲基)-4-哌啶甲酰胺与N-取代哌嗪发生亲核取代反应，得到式Ⅰ所示化合物。
步骤3)中的N-取代哌嗪的制备流程如下：
其中，R1和X的定义如上所述，boc代表叔丁基；N-boc哌嗪在碱存在下与卤代烷或者羧酸反应得到化合物IV，经三氟乙酸脱保护得到中间体V。
本发明的另一个目的是提供式Ⅰ所示化合物的应用。
本发明所提供的式Ⅰ化合物或其药学上可接受的盐可用于制备HIV-1抑制剂以及制备用于治疗艾滋病的药物。
本发明所提供的药物，其活性成分包含治疗有效量的一种或多种式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的盐。
此外，所述药物的活性成分中还可包含蛋白酶抑制剂和/或逆转录酶抑制剂。
所述治疗艾滋病的药物可通过注射、喷射、滴鼻、滴眼、渗透、吸收、物理或化学介导的方法导入机体如肌肉、皮内、皮下、静脉、粘膜组织；或是被其他物质混合或包裹后导入机体。
需要的时候，在上述药物中还可以加入一种或多种药学上可接受的载体。所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。
用式Ⅰ化合物或其药学上可接受的盐制备的药物可以制成注射液、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。
本发明提供了一类具有拮抗HIV活性的化合物。在抗HIV抑制剂的设计中，发明人选取1-(3-氨基丙基)哌啶-4-氨基酰胺类CCR5抑制剂(阳性对照化合物结构式见表1)为结构模板。通过对阳性对照化合物的发现和优化过程研究分析，发现其骨架中的1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-氯丙基)-4-哌啶甲酰胺结构(即左侧结构)对于活性起着至关重要的作用，这可以在此类化合物和CCR5受体的假定结合模式分析得到证实(Rama Kondru，et al，.Mol Pharmacol，2008；73：789-800)。此类化合物在与CCR5受体相互作用过程中，起关键作用的是右侧哌啶环上的N原子和CCR5受体中Glu283之间的盐桥作用，以及左侧结构中的乙酰基和受体中Ile198之间的疏水作用。阳性化合物抑制[125I]-RANTES与表达CCR5的CHO细胞结合的IC50值为0.62nM，具有较强的抗病毒活性；但其水溶性较差，毒性也不够理想(Shinichi Imamura，et al，.Bioorg Med Chem，2005；13：397-416)。
基于这些认识，从降低毒性、增加水溶性考虑，发明人将阳性对照化合物右侧的哌啶结构替换为哌嗪结构，此外还对右侧的取代基团进行优化，设计并合成了通式Ⅰ所示的1-(3-氨基丙基)哌嗪-4-氨基酰胺类化合物。经HIV-1感染的Bal(R5)的淋巴组织样细胞活性筛选，发现该系列化合物具有很强的抗HIV活性。其中活性最强化合物的IC50值达到10nM，与阳性化合物相似，但毒性比阳性化合物低。优选的化合物，如DMX-B06，选择指数均明显大于阳性对照化合物(结果见表1)。此外，由于设计的化合物含有两个或三个可中和的三级胺或吡啶，水溶性大大由于阳性化合物(部分化合物的溶解度结果见表2)，优选化合物的盐(如甲磺酸盐、盐酸盐)溶解度达到每毫升10毫克，更适合于制剂或用于妇女外用预防艾滋病毒。
附图说明
图1为实施例1制备的化合物的核磁共振氢谱图。
图2为实施例1制备的化合物的质谱图。
图3为实施例6制备的化合物的核磁共振氢谱图。
图4为实施例6制备的化合物的质谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步地说明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不限制本发明的范围。下述实施例中所述方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
下述实施例中溶剂和试剂的缩写如下：
N，N-二甲基甲酰胺(DMF)；二氯甲烷(DCM)；N，N-二异丙基乙胺胺(DIEA)。
实施例1、1-乙酰基-N-[3-(4-苄基哌嗪-1-基)丙基]-N-(3-氯-4-甲基苯基)哌啶-4-甲酰胺(DMX-B01)的合成(式Ⅰ中，X为亚甲基，R1为苯基的化合物)
1、N-(3-氯丙基)-3-氯-4-甲基苯胺的制备
向3-氯-4-甲基苯胺(7.08g，50mmol)的DMF(5mL)溶液中，加入1-溴-3-氯丙烷(15.5mL，50mmol)，碘化钾(0.83g，5mmol)和三乙胺(30mL)。该混合物在室温下搅拌3天。然后蒸干溶剂，用乙醚(100mL)稀释，并用食盐水洗，分离的有机相用硫酸钠干燥并在减压下浓缩。浓缩物经柱层析分离(乙酸乙酯/石油醚＝1∶25，v/v)，得到淡棕色油状物即为N-(3-氯丙基)-3-氯-4-甲基苯胺(10g，收率92％)。
结构确证数据如下：
MS(Turbo Spray)m/z(M+1)：218.3。
2、1-乙酰基-4-哌啶甲酸的制备
N2保护下，向4-哌啶甲酸(3.9g，30mmol)的DMF(30mL)溶液中，加入无水碳酸钾(6.9g，50mmol)，冰浴冷却下，向反应液中滴加乙酰氯(3.14g，40mmol)。完毕后，室温搅拌1个小时。过滤，将母液旋干，残留物用乙酸乙酯结晶，得白色固体(2.7g，收率52.6％)，mp：174-176℃。
结构确证数据如下：
1H NMR(400Hz，CDCl3)：δ10.39(br，1H)，4.40(d，J＝13.2Hz，1H)，3.80(d，J＝13.2Hz，2H)，3.17(t，J＝11.2Hz，1H)，2.187(s，J＝11.2Hz，1H)，2.59(m，1H)，2.13(s，3H)，1.97(m，2H)，1.71(m，2H)；MS(Turbo Spray)m/z(M+1)：172.2。
3、1-乙酰基-4-哌啶甲酰氯的制备
N2保护下，将1-乙酰基-4-哌啶甲酸(0.86g，5mmol)的乙腈(10mL)溶液用冰浴冷却，缓慢向反应液中滴加草酰氯(0.6g，6mmol)，完毕后将反应液升至室温，搅拌三个小时，旋干，留待后用。
4、1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-氯丙基)-4-哌啶甲酰胺的制备
在搅拌下，N-(3-氯丙基)-3-氯-4-甲基苯胺(0.84g，4mmol)和N，N-二异丙基乙胺DIEA(1.2g，10mmol)溶解于乙腈(10mL)中，冰浴下分批加入1-乙酰基-4-哌啶甲酰氯。完毕后反应液在冰浴下搅拌半个小时，升到室温继续搅拌2个小时。旋干反应液，残渣用乙酸乙酯(30mL)溶解，饱和碳酸氢钠溶液(30mL)洗，水相用乙酸乙酯(2×20mL)反萃，合并有机相，MgSO4干燥并在减压下浓缩。浓缩物经柱层析分离(甲醇/二氯甲烷＝1∶20，v/v)，得到产物为淡黄色油状物(1.23g，收率83％)。
结构确证数据如下：
MS(Turbo Spray)m/z(M+1)：371.2。
5、1-Boc-4-苄基哌嗪的制备
N2保护下，向1-Boc-哌嗪(0.93g，5mmol)的二氯甲烷(15mL)溶液中，加入无水碳酸钾(0.83g，6mmol)，然后冰浴下，缓慢向反应液中滴加溴化苄(1.02g，6mmol)，完毕后将反应液升至室温，搅拌过夜。旋干反应液，残渣用乙酸乙酯(30mL)溶解，饱和碳酸氢钠溶液(30mL)洗，水相用乙酸乙酯(2×20mL)反萃，合并有机相，MgSO4干燥并在减压下浓缩。浓缩物经柱层析分离(甲醇/二氯甲烷＝1∶20，v/v)，得到黄色油状物产物(1.26g，收率91.3％)。
6、1-苄基哌嗪的制备
取上步产品1-Boc-4-苄基哌嗪(1.26g，4.6mmol)用二氯甲烷(DCM)(10mL)溶解，然后加入三氟乙酸(5mL)，室温搅拌一个小时。旋干反应液，残渣用DCM(10mL)溶解，饱和碳酸氢钠溶液(10mL)洗，水相用DCM(5×5mL)反萃，合并有机相，MgSO4干燥并在减压下浓缩，得到黄色油状物产物(0.71g，88％)。
7、DMX-B01的制备
将步骤4)制备的1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-氯丙基)-4-哌啶甲酰胺(0.37g，1mmol)，步骤6)制备的1-苄基哌嗪(0.19g，1.1mmol)，碘化钾(0.17g，1mmol)，无水碳酸钾(0.14g，1mmol)的混合物溶于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)(10mL)中，回流过夜。将反应液转至分液漏斗中，用乙酸乙酯(30mL)溶解，饱和碳酸氢钠溶液(30mL)洗，水相用乙酸乙酯(2×20mL)反萃，合并有机相，MgSO4干燥并在减压下浓缩。浓缩物经柱层析分离(甲醇/二氯甲烷＝1∶10，v/v)，得到产物为淡黄色泡状固体(0.1g，收率20％)。
结构确证数据如下：
1H NMR(400Hz，CDCl3)：δ7.40(m，5H)，7.26(m，1H)，7.18(m，1H)，6.96(d，J＝7.2Hz，1H)，5.30(s，2H)，4.51(d，J＝13.6Hz，1H)，3.74(m，5H)，3.41(m，2H)，2.84(m，1H)，2.42(s，3H)，2.35(m，9H)，2.10(m，1H)，2.04(s，3H)，1.64(m，8H).
MS(Turbo Spray)m/z(M+1)：511.5。
实施例2、1-乙酰基-N-[3-(4-苯甲酰基哌嗪-1-基)丙基]-N-(3-氯-4-甲基苯基)哌啶-4-甲酰胺(DMX-B02)的合成(式Ⅰ中，X为羰基，R1为苯基的化合物)
按照实施例1制备目标化合物DMX-B01的方法，由1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-氯丙基)-4-哌啶甲酰胺(0.37g，1.0mmol)和1-苯甲酰基哌嗪三氟乙酸盐(0.45g，1.5mmol)(安伯科技公司提供)反应，得0.2g黄色泡状固体，收率38％。
结构确证数据如下：
1H NMR(400Hz，CDCl3)：δ7.31(m，6H)，7.17(m，1H)，6.97(d，J＝6.4Hz，1H)，4.52(d，J＝13.6Hz，1H)，3.74(m，3H)，3.51(m，2H)，2.47(m，4H)，2.42(s，3H)，2.34(m，6H)，2.04(s，3H)，1.70(m，6H)；
MS(Turbo Spray)m/z(M+1)：525.6。
实施例3、1-乙酰基-N-{3-[1-(2-氯-噻唑-5-基-亚甲基)哌嗪-1-基]丙基}-N-(3-氯-4-甲基苯基)哌啶-4-甲酰胺(DMX-B03)的合成(式Ⅰ中，X为亚甲基，R1为5-2-氯-噻唑基的化合物)
按上述制备目标化合物DMXB01的方法，由1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-氯丙基)-4-哌啶甲酰胺(0.37g，1.0mmol)和1-(2-氯-噻唑-5-基-甲基)哌嗪二盐酸盐(0.26g，0.9mmol)(安伯科技公司提供)反应，得0.35g黄色泡状固体，收率70％。
结构确证数据如下：
1H NMR(400Hz，CDCl3)：δ7.34(m，2H)，7.18(s，1H)，6.98(d，J＝1.72Hz，1H)，4.52(d，J＝13.4Hz，1H)，3.77(d，J＝13.7Hz，3H)，3.65(m，4H)，2.85(m，1H)，2.47(m，3H)，2.42(s，3H)，2.34(m，6H)，2.05(s，3H)，1.66(m，6H)；
MS(Turbo Spray)m/z(M+1)：554.5。
实施例4、1-乙酰基-N-{3-[4-(吡啶-4-亚甲基)哌嗪-1-基)丙基}-N-(3-氯-4-甲基苯基)哌啶-4-甲酰胺(DMX-B04)的合成(式Ⅰ中，X为亚甲基，R1为4-吡啶基的化合物)
按上述制备目标化合物DMX-B01的方法，由1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-氯丙基)-4-哌啶甲酰胺(0.41g，1.1mmol)和1-(吡啶-4-亚甲基)-哌嗪二盐酸盐(0.25g，1.0mmol)(安伯科技公司提供)反应，得0.3g黄色泡状固体，收率58％。
结构确证数据如下：
1H NMR(400Hz，CDCl3)：δ8.53(d，J＝5.32Hz，2H)，7.27(m，3H)，7.18(d，J＝1.96Hz，2H)，6.98(d，J＝7Hz，1H)，4.52(d，J＝13.2Hz，1H)，3.76(d，J＝13.8Hz，1H)，3.66(t，J＝7.3Hz，2H)，3.50(s，2H)，2.84(m，1H)，2.48(m，5H)，2.42(s，3H)，2.34(m，5H)，2.05(s，3H)，1.64(m，6H)；
MS(Turbo Spray)m/z(M+1)：512.4。
实施例5、1-乙酰基-N-{3-[4-(吡啶-3-亚甲基)哌嗪-1-基]丙基}-N-(3-氯-4-甲基苯基)哌啶-4-甲酰胺(DMX-B05)的合成(式Ⅰ中，X为亚甲基，R1为3-吡啶基的化合物)
按上述制备目标化合物DMX-B01的方法，由1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-氯丙基)-4-哌啶甲酰胺(0.37g，1.0mol)和1-(吡啶-3-亚甲基)-哌嗪二盐酸盐(0.23g，0.9mmol)(安伯科技公司提供)反应，得0.35g黄色泡状固体，收率76％。
结构确证数据如下：
1H NMR(400Hz，CDCl3)：δ8.53(br，2H)，7.65(d，J＝7.84Hz，1H)，7.27(m，1H)，7.18(d，J＝1.96Hz，2H)，6.98(d，J＝6.72Hz，1H)，4.52(d，J＝13.48Hz，1H)，3.76(d，J＝13.72Hz，1H)，3.66(t，J＝7.88Hz，2H)，3.50(s，2H)，2.84(m，1H)，2.48(m，5H)，2.42(s，3H)，2.34(m，5H)，2.05(s，3H)，1.65(m，6H)；
MS(Turbo Spray)m/z(M+1)：512.4。
实施例6、1-乙酰基-N-{3-[4-(6-氯-吡啶-3-亚甲基)-哌嗪-1-基]丙基}-N-(3-氯-4-甲基苯基)哌啶-4-甲酰胺(DMX-B06)的合成(式Ⅰ中，X为亚甲基，R1为3-6-氯-吡啶基的化合物)
按上述制备目标化合物DMX-B01的方法，由1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-氯丙基)-4-哌啶甲酰胺(0.37g，1.1mmol)和1-(6-氯-吡啶-3-甲基)-哌嗪二盐酸盐(0.28g，1.0mmol)(安伯科技公司提供)反应，得0.29g黄色泡状固体，收率53％。
结构确证数据如下：
1H NMR(400Hz，CDCl3)：δ8.29(d，J＝2.24Hz，2H)，7.63(m，1H)，7.29(m，2H)，7.18(d，J＝1.96Hz，2H)，6.98(d，J＝7.28Hz，1H)，4.52(d，J＝13.44Hz，1H)，3.76(d，J＝13.72Hz，1H)，3.66(t，J＝7.56Hz，2H)，3.48(s，2H)，2.84(m，1H)，2.48(m，5H)，2.42(s，3H)，2.34(m，5H)，2.05(s，3H)，1.69(m，6H)；MS(Turbo Spray)m/z(M+1)：546.5。
实施例7、1-乙酰基-N-{3-[4-(4-氟-苄基)-哌嗪-1-基]丙基}-N-(3-氯-4-甲基苯基)哌啶-4-甲酰胺(DMX-B07)的合成(式Ⅰ中，X为亚甲基，R1为4-氟-苯基的化合物)
按上述制备目标化合物DMX-B01的方法，由1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-氯丙基)-4-哌啶甲酰胺(0.37g，1.0mmol)和1-(4-氟-苄基)-哌嗪(0.2g，1.0mmol)(安伯科技公司提供)反应，得0.34g黄色泡状固体，收率64％。
结构确证数据如下：
1H NMR(400Hz，CDCl3)：δ7.28(m，4H)，7.18(d，J＝1.96Hz，1H)，6.99(m，3H)，4.52(d，J＝13.44Hz，1H)，3.76(d，J＝13.72Hz，1H)，3.65(t，J＝7.84Hz，2H)，3.46(s，2H)，2.84(m，1H)，2.48(m，4H)，2.42(s，3H)，2.34(m，5H)，2.05(s，3H)，1.64(m，6H)；MS(Turbo Spray)m/z(M+1)：528.8。
实施例8、1-乙酰基-N-{3-[4-(4-甲砜基-苄基)-哌嗪-1-基]丙基}-N-(3-氯-4-甲基苯基)哌啶-4-甲酰胺(DMX-B08)的合成(式Ⅰ中，X为亚甲基，R1为4-甲砜基-苯基的化合物)
按上述制备目标化合物DMX-B01的方法，由1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-氯丙基)-4-哌啶甲酰胺(0.18g，0.5mmol)和1-(4-甲砜基-苄基)-哌嗪(0.09g，0.25mmol)(安伯科技公司提供)反应，得0.06g黄色泡状固体，收率41％。
结构确证数据如下：
1H NMR(400Hz，CDCl3)：δ7.89(d，J＝8.16Hz，2H)，7.53(d，J＝8.12Hz，2H)，7.29(m，1H)，7.18(s，1H)，6.99(br，1H)，4.52(d，J＝13.2Hz，1H)，3.76(d，J＝13.72Hz，1H)，3.66(t，J＝7.04Hz，2H)，3.58(s，2H)，3.06(s，3H)，2.84(m，1H)，2.48(m，5H)，2.42(s，3H)，2.34(m，5H)，2.05(s，3H)，1.64(m，6H)；MS(Turbo Spray)m/z(M+1)：589.5。
实施例9、1-乙酰基-N-{3-[4-(吡啶-2-基)哌嗪-1-基]丙基}-N-(3-氯-4-甲基苯基)哌啶-4-甲酰胺(DMX-B09)的合成(式Ⅰ中，X不存在，R1为2-吡啶基的化合物)
按上述制备目标化合物DMX-B01的方法，由1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-氯丙基)-4-哌啶甲酰胺(0.34g，0.9mmol)和1-(吡啶-2-基)-哌嗪盐酸盐(0.18g，0.9mmol)(安伯科技公司提供)反应，得0.30g黄色泡状固体，收率67％。
结构确证数据如下：
1H NMR(400Hz，CDCl3)：δ8.19(m，1H)，7.48(m，1H)，7.29(m，1H)，7.20(d，J＝1.96Hz，2H)，6.99(d，J＝6.72Hz，1H)，6.64(m，2H)，4.53(d，J＝13.44Hz，1H)，3.77(d，J＝13.6Hz，1H)，3.70(t，J＝5.88Hz，2H)，3.52(s，4H)，2.85(m，1H)，2.51(s，4H)，2.43(s，3H)，2.37(m，4H)，2.05(s，3H)，1.74(m，6H)；MS(Turbo Spray)m/z(M+1)：498.4。
实施例10、1-乙酰基-N-[3-(4-苄基哌啶-1-基)丙基]-N-(3-氯-4-甲基苯基)哌啶-4-甲酰胺的合成(阳性化合物的合成)
按上述制备目标化合物DMX-B01的方法，由1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-氯丙基)-4-哌啶甲酰胺(0.21g，0.57mmol)和4-苄基哌啶(0.11g，0.62mmol)反应，得0.21g黄色泡状固体，收率72％。
结构确证数据如下：
1H NMR(400Hz，CDCl3)：δ10.75(br，1H)，7.36(m，6H)，7.12(m，2H)，5.31(s，2H)，4.54(d，J＝13.6Hz，1H)，3.71(m，5H)，3.05(m，1H)，2.84(m，1H)，2.67(m，1H)，2.63(m，2H)，2.42(s，3H)，2.37(m，2H)，2.11(m，4H)，2.05(s，3H)，1.88(m，4H)，1.63(m，4H)；MS(Turbo Spray)m/z(M+1)：511.6。
实施例11、式Ⅰ化合物的体外抗HIV活性试验
1、实验试剂
HIV-1菌株Bal(R5)由美国国立卫生研究院艾滋病研究所提供；淋巴样细胞系CEMX1745.25M7表达受体CD4和辅助受体CXCR4和CCR5用来检测化合物的抗病毒活性。CEMx1745.25M7细胞在含有10％纤维蛋白原(FBS)、1μg/ml嘌罗霉素和200μg/ml G418的RPMI-1640培养基中培养。
2、抑制活性的测定方法
为了测定化合物对HIV-1 Bal感染CEMx1745.25M7细胞的抑制活性，不同浓度梯度的50μl待测化合物在相同的HIV-1病毒量中，于37℃培养30分钟。然后，加入100μl CEMx1745.25M7细胞(5x105/ml)。在37℃培养整晚后，用不含化合物新鲜培养基替代现在的培养基。在细胞感染三天后，采集并溶解细胞，通过测定萤光活性来计算萤光酶活性抑制比例和IC50值。
3、体外细胞毒性的测定方法
通过XTT试验确定化合物对CEMx1745.25M7细胞的体外细胞毒性。不同浓度梯度的100μL的待测化合物加入到相同体积的细胞中(5×105/mL)(96孔板)。在37℃培养4天后，向培养液中加入含有0.02μM PMS的1mg/mL XTT溶液50μL。培养4小时后，通过酶标仪测定450nm的吸光度，并通过CalcuSyn程序计算CC50值。
按照上述方法，对所合成的目标化合物进行了初步活性评价，具体结果见表1。IC50值反映了目标化合物对HIV感染的细胞的抑制情况；CC50反映了目标化合物本身对感染的细胞的毒性情况；SI值(CC50/IC50)反映了化合物对细胞毒性的浓度相对于抗HIV活性所需浓度的值。
表1拮抗剂的抑制活性及毒性测定结果
注：a：CCR5受体抑制剂，阳性对照。
表1所列的9个化合物中，大多数显示出极佳的抗病毒活性，其中化合物DMX-B06的活性最强，IC50值为10nM，与对照阳性化合物活性相当，但选择性大于14545，是对照化合物高两倍以上。因此，本发明化合物为强效CCR5拮抗剂，可用治疗和预防HIV-1的侵入。
实施例12、优选化合物的溶解度试验
试验方法：依据中国药典2010版二部范例有关溶解度的定义及结果判定方法，分别考察了优选化合物DMX-B06、DMX-B07、DMX-B08和对照阳性化合物在水、0.1MHCl中的溶解度。结果见表2。
表2溶解度试验结果
三个优选化合物不成盐时，在水中的溶解度也较低，而在0.1M的HCl溶液中溶解度大大提高，溶解度达到10mg/ml，而阳性化合物溶解度为1mg/ml，这是由于优选化合物含有更多可以成盐含N杂环。将优选化合物用甲磺酸中和后，三个优选化合物的溶解度与其在0.1M的HCl溶液中溶解度相似，而对照化合物甲磺酸盐的溶解度仍较低。
Claims (8)
1.式I所示的化合物或其药学上可接受的盐：
(式I)
式I中，X、R1选自下述6)-8)中的任意一种：
6)式I中，X为亚甲基，R1为6-氯-吡啶-3-基的化合物；
7)式I中，X为亚甲基，R1为4-氟-苯基的化合物；
8)式I中，X为亚甲基，R1为4-甲砜基-苯基的化合物。
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：所述化合物药学上可接受的盐为式I所示的化合物与下述任意一种酸所形成的盐：盐酸、酒石酸、枸橼酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、磷酸和甲磺酸。
3.制备权利要求1中所述式I所示化合物的方法，包括下述步骤：
1)在碱存在下，用KI作催化剂，使3-氯-4-甲基苯胺与1-溴-3-氯丙烷进行亲核取代反应，得到N-(3-氯丙基)-3-氯-4-甲基苯胺；
2)在碱存在下，N-(3-氯丙基)-3-氯-4-甲基苯胺与1-乙酰基-4-哌啶甲酰氯发生偶联反应，得到1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-氯甲基)-4-哌啶甲酰胺；
3)在碱存在下，用KI作催化剂，1-乙酰基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N-(3-氯甲基)-4-哌啶甲酰胺与式V所示化合物N-取代哌嗪发生亲核取代反应，得到式I所示化合物；
(式V)
式V中的X、R1与权利要求1所述式I中的X、R1相同。
4.权利要求1中所述式I所示的化合物或其药学上可接受的盐在制备HIV-1抑制剂中的应用。
5.一种HIV-1抑制剂，其活性成分为权利要求1中所述式I所示的化合物或其药学上可接受的盐。
6.一种治疗艾滋病的药物，其活性成分包含治疗有效量的至少一种权利要求1中所述式I所示的化合物或其药学上可接受的盐。
7.根据权利要求6所述的药物，其特征在于：所述药物的活性成分还包含蛋白酶抑制剂和/或逆转录酶抑制剂。
8.根据权利要求6所述的药物，其特征在于：所述药物的活性成分为治疗有效量的至少一种权利要求1中所述式I所示的化合物或其药学上可接受的盐。
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