CN101915848A - Rbd蛋白在制备sars病人辅助诊断试剂中的应用 - Google Patents
Rbd蛋白在制备sars病人辅助诊断试剂中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101915848A CN101915848A CN201010226354XA CN201010226354A CN101915848A CN 101915848 A CN101915848 A CN 101915848A CN 201010226354X A CN201010226354X A CN 201010226354XA CN 201010226354 A CN201010226354 A CN 201010226354A CN 101915848 A CN101915848 A CN 101915848A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- albumen
- rbd
- sequence
- sars
- recombinant
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明公开了RBD蛋白在制备SARS病人辅助诊断试剂中的应用。所述RBD蛋白为如下(a)或(b):(a)氨基酸序列如序列表的序列1所示的蛋白;(b)序列表的序列2自5’末端第37至753位核苷酸所示DNA编码的蛋白。基于RBD的免疫学监测方法(如ELISA、WB、胶体金快速诊断等)具有高度的灵敏度和特异性,可以用于SARS-CoV感染的临床诊断和流行病学调查。
Description
技术领域
本发明涉及RBD蛋白在制备SARS病人辅助诊断试剂中的应用。
背景技术
严重急性呼吸综合症(Severe Acute Respiratory Syndromes,简称SARS)由一种新型的冠状病毒(SARS-CoV)感染引起,导致以发热、干咳、胸闷为主要症状,严重者出现快速进展的呼吸系统衰竭,是一种新的呼吸道传染病,传染性极强、病情进展快速。2002/2003年的SARS全球爆发引起8000多人感染,导致约10%的感染者死亡,严重威胁人类健康和社会安定。现有的研究认为,SARS病毒可能来源于动物,由蝙蝠经果子狸作为中介而传人,但有待于进一步研究。因此,SARS-CoV重现引起再次爆发的可能性不能完全排除,开发有效的SARS诊断试剂及其他防治手段仍很重要。
SARS-CoV感染的实验室检测方法主要有(1)聚合酶链反应(PCR):用于检测SARS-CoV的病毒核酸,包括逆转录PCR、实时PCR、套式PCR和增强的实时PCR等;(2)特异性抗体检测:用于检测血清中针对SARS-CoV的特异性抗体的方法有ELISA、间接IFA I等。血清抗体的特异性检测不但用于临床实验室诊断,也可用于流行病学调查。目前市场上销售的试剂盒主要采用裂解的SARS-CoV全病毒(viral lysates)为抗原,检测灵敏度和特异性都有待于提高。同时,制备病毒存在严重的安全隐患。发展基因工程重组抗原用于SARS-CoV的血清学检测十分必要。
类似其它的冠状病毒,SARS-CoV是一个有囊膜的正链RNA病毒,基因组接近30Kb,除编码多聚酶外,编码的结构蛋白主要有包膜刺突蛋白S(spike)、膜蛋白M(membrane)和E(envelope)、核衣壳蛋白N(nucleocapsid)。冠状病毒的S蛋白主要负责病毒与细胞受体的结合、膜融合及进入,但同时也是诱导中和抗体的主要免疫原。
同其它冠状病毒的S蛋白一样,SARS-CoV的S蛋白属于I型跨膜糖蛋白,由S1和S2两个结构域组成。S1位于整个蛋白的N末端,负责病毒与靶细胞的受体结合。已经证明血管紧张素转换酶(ACE2)是SARS-CoV的功能受体。位于S1中间区域的片段是受体结合结构域(RBD),由318-510位的193个氨基酸组成,对介导病毒感染至关重要。S2位于整个蛋白的C末端,主要包含融合肽和两个七残基重复序列(HR1和HR2)等功能片段,主司病毒和靶细胞之间的膜融合,也是病毒感染的关键部位。
发明内容
本发明的目的是提供RBD蛋白在制备SARS病人辅助诊断试剂中的应用。
本发明提供了RBD蛋白的新用途,即RBD蛋白在制备SARS病人辅助诊断试剂中的应用;所述RBD蛋白为如下(a)或(b):
(a)氨基酸序列如序列表的序列1所示的蛋白;
(b)序列表的序列2自5’末端第37至753位核苷酸所示DNA编码的蛋白。
所述RBD蛋白可采用如下方法制备:
(1)将序列表的序列2所示的DNA插入表达质粒,得到重组质粒;
(2)将步骤(1)得到的重组质粒转染哺乳动物细胞,得到重组细胞;
(3)培养重组细胞,得到RBD蛋白。
常规的表达质粒和哺乳动物细胞均可采用。所述表达质粒具体可为pcDNA4/myc-His A。所述哺乳动物细胞具体可为293T细胞。
基于以上用途,所述RBD蛋白可用于制备SARS病人辅助诊断试剂盒。
本发明还保护一种辅助诊断SARS病人的试剂盒,包括RBD蛋白;所述RBD蛋白为如下(a)或(b):
(a)氨基酸序列如序列表的序列1所示的蛋白;
(b)序列表的序列2自5’末端第37至753位核苷酸所示DNA编码的蛋白。
所述RBD蛋白的编码基因具体可如序列表的序列2自5’末端第37至753位核苷酸所示。
所述RBD蛋白可采用如下方法制备:
(1)将序列表的序列2所示的DNA插入表达质粒,得到重组质粒;
(2)将步骤(1)得到的重组质粒转染哺乳动物细胞,得到重组细胞;
(3)培养重组细胞,得到RBD蛋白。
常规的表达质粒和哺乳动物细胞均可采用。所述表达质粒具体可为pcDNA4/myc-His A。所述哺乳动物细胞具体可为293T细胞。
本发明提供采用SARS-CoV的S蛋白受体结合区(RBD)作为抗原,通过病毒特异性抗体检测SARS冠状病毒(SARS-CoV)。重组RBD抗原可在原核、酵母、昆虫和真核细胞及任何表达系统中制备和生产。基于RBD的免疫学监测方法(如ELISA、WB、胶体金快速诊断等)具有高度的灵敏度和特异性,可以用于SARS-CoV感染的临床诊断和流行病学调查。
附图说明
图1为RBD重组蛋白的鉴定;A:SDS-PAGE;B:Western-blot。
图2为实施例2的结果。
图3为实施例3的结果;A:OD450值;B:阳性率。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明,但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料,如无特殊说明,均为自常规生化试剂商店购买得到的。下述实施例中的%,如无特殊说明,均为质量百分含量。以下实施例中的定量试验,均设置三次重复实验,结果取平均值。
实施例1、RBD重组蛋白的制备
一、基因的合成
人工合成编码SARS-CoV包膜刺突蛋白S(spike)受体结合区的DNA(序列表的序列2所示DNA)。序列2所示DNA是根据SARS病毒株Tor2的相应序列进行密码子优化,并分别在5’和3’末端加入Kpn I和Xho I酶切位点得到的,编码Tor2刺突蛋白S蛋白的317-535位氨基酸残基(序列表的序列1所示蛋白)。
二、重组质粒的构建和扩增
1、重组质粒的构建
①用限制性内切酶Kpn I和Xho I双酶切步骤1合成的DNA(序列2所示DNA),回收纯化酶切产物。
②用限制性内切酶Kpn I和Xho I双酶切真核细胞表达质粒pcDNA 4/myc-His A(购自美国Invitrogen),回收纯化载体骨架。
③将步骤①回收的酶切产物和步骤②回收的载体骨架用T4连接酶连接,得到连接产物。
④将连接产物进行测序,测序结果表明,得到了重组质粒pcDNA 4-RBD(在pcDNA4/myc-His A的Kpn I和Xho I酶切位点之间插入了序列表的序列2所示的DNA)。
2、重组质粒的扩增
(1)转化
取0.5μl重组质粒pcDNA 4-RBD转化大肠杆菌Stbl2(购自Invitrogen,目录号:10268-019):置冰上20分钟;42℃热激40秒;置冰上3分钟;每管加500μl LB培养基,37℃摇床45分钟。
取50μl菌液涂布于含氨苄青霉素(Amp+)培养皿中,37℃恒温培养14-16小时。
(2)质粒提取
①挑单克隆菌落于250ml的LB培养基中,37℃、250rpm培养14-16小时。
②离心收集菌体。
③质粒提取(QIAGEN plasmid Mini,Midi and Maxi Kits,QIAGEN)。
④扩增的重组质粒放-20℃保存,备用。
三、RBD重组蛋白的表达和纯化
1、RBD重组蛋白的表达
①转染前1天,铺293T细胞(购自Clontech Laboratories,Inc,目录号:632180)于75cm2培养瓶(用无抗生素含10%FBS的DMEM培养基)。
②将1.5ml OPTI-MEM(无血清培养基,Invitrogen)和16μg重组质粒pcDNA 4-RBD混匀,室温放置5分钟。
③将1.5ml OPTI-MEM和40μl转染试剂PEI(Sigma,1mg/ml)混匀,室温放置5分钟。
④将步骤②的溶液和步骤③的溶液混匀,室温孵育20分钟。
⑤将3ml步骤④的混合液加入293T细胞已长成单层的75cm2培养瓶中(293T细胞长满瓶面积的60-80%时较好),轻轻混匀,进行转染。
⑥37℃,5%的CO2孵箱中培养6-8小时,用新鲜并预热的(37℃)OPTI-MEM(无血清培养基)替换原有的DMEM培养基。
⑦转染48小时后收获培养上清(含重组表达的RBD蛋白)。
⑧在收获的培养上清中加入蛋白酶抑制剂,10000g、4℃、离心15分钟(去除培养上清中的杂质),上清用于重组蛋白的纯化。
2、RBD重组蛋白的纯化(通过重力流方法纯化目的蛋白)
清洗缓冲液:50mM NaH2PO4,pH8.0;300mM NaCl;20mM咪唑。
洗脱缓冲液:50mM NaH2PO4,pH8.0;300mM NaCl;500mM咪唑。
①纯化柱的准备:加1ml悬浮的Ni-NTA树脂(Invitrogen)至纯化柱(柱长为8.5cm,内径为1cm)。
②纯化柱的平衡:用10倍Ni-NTA柱体积的清洗缓冲液清洗柱子,将纯化柱置于4℃环境中。
③将步骤1得到的上清滴加至平衡后的Ni-NTA柱(每3秒一滴)。
④以10倍Ni-NTA柱体积的PBS(0.01M,pH7.4)清洗Ni-NTA柱,然后以10倍柱体积的清洗缓冲液清洗Ni-NTA柱。
⑤洗脱目的蛋白:用5倍Ni-NTA柱体积的洗脱缓冲液洗脱目的蛋白,收集洗脱下来的溶液。
⑥将洗脱下来的溶液加入15ml离心超滤装置(Amicon Ultra-Centrifugal FilterUnits 15ml离心超滤装置;MILLIPORE),5500g、4℃、离心15分钟。
⑦加入PBS(0.01M,pH7.4),5500g、4℃,重新离心15分钟。
⑧加入PBS(0.01M,pH7.4),5500g、4℃,重新离心15分钟。
⑨以PBS(0.01M/L,pH7.4)收集超滤管内浓缩的RBD重组蛋白,调整其终浓度为1mg/ml(使用Pierce BCA Protein Assay Kit(Thermo)测定蛋白浓度),用于步骤四的鉴定以及实施例2、3的检测。
四、RBD重组蛋白的鉴定
1、SDS-PAGE方法鉴定(依据分子量鉴定)
将步骤三得到的RBD重组蛋白进行10%SDS-PAGE电泳。
结果见图1A。RBD重组蛋白具有预期条带(分子量约30KDa)。
2、Western blot分析(依据抗6-his标签的抗体进行鉴定)
①将步骤三得到的RBD重组蛋白进行10%SDS-PAGE电泳。
②将RBD重组蛋白转于PVDF膜上,用5%的脱脂奶粉溶液封闭1小时。
③用PBS洗膜3次,每次10分钟。
④加HRP标记的anti-his-IgG 37℃,孵育1小时。
⑤用PBS洗膜3次,每次10分钟。
⑥加SuperECL plus超敏发光液,暗室中曝光感光胶片。
含6-his的蛋白可使感光胶片上对应位置出现清晰的条带。结果见图1B。
实施例2、RBD重组蛋白在检测SARS-CoV抗体中的应用
以实施例1制备的RBD重组蛋白作为抗原,采用ELISA法检测35份SARS病人血清(知情志愿者)和25份健康人血清(知情志愿者)。
每份血清的检测方法如下:
(1)用实施例1制备的RBD重组蛋白溶液包被96孔ELISA测定板(Corning Costar,Acton,MA),每孔包被100ng,4℃过夜。
(2)用350μl封闭液(3%脱脂奶粉)封闭,37℃放置2小时。
(3)加入100μl 100倍稀释的血清,37℃温育1小时;然后用含0.1%吐温20的洗涤液反复洗涤3次,拍干。
(4)加入100μl HRP酶标记的羊抗人IgG(Invitrogen,Carlsbad,CA),37℃温育1小时,用洗涤液反复洗涤3次,拍干。
(5)加入100μl 3,3’,5,5’-四甲基联苯氨(TMB)底物液显色反应。
(6)使用50μl终止液(1M H2SO4)终止反应后,于ELISA微孔板阅读仪(Bio-Rad,Hercules,CA)获得450/630nm双波长读数。
OD450值结果见图2。设置阈值为0.18,大于该阈值为阳性、小于等于该阈值为阴性。所有恢复期SARS病人的血清标本均为阳性结果,即血清与RBD重组蛋白强反应。健康人的血清标本均为阴性结果。结果表明:RBD重组蛋白作为抗原,用于检测患者SARS-CoV抗体具有很高的敏感度和特异性,可以用于制备诊断试剂盒。
实施例3、RBD重组蛋白在检测SARS-CoV抗体中的应用
血清样本来自如下SARS患者(知情志愿者):发病后3个月(M3),19例;发病后12个月(1年)(M12),19例;发病后18个月(M18),19例;发病后24个月(2年)(M24),19例;发病后36个月(3年)(M36),19例。
一、用实施例1制备的RBD重组蛋白溶液作为抗原检测各个血清样本
每份血清的检测方法如下:
(1)用实施例1制备的RBD重组蛋白溶液包被96孔ELISA测定板(Corning Costar,Acton,MA),每孔包被100ng,4℃过夜。
(2)用350μl封闭液(3%脱脂奶粉)封闭,37℃放置2小时。
(3)加入100μl 100倍稀释的血清,37℃温育1小时;然后用洗涤液反复洗涤5次,拍干。
(4)加入100μl HRP酶标记的羊抗人IgG(Invitrogen,Carlsbad,CA),37℃温育40分钟,用洗涤液反复洗涤5次,拍干。
(5)加入100μl 3,3’,5,5’-四甲基联苯氨(TMB)底物液显色反应。
(6)使用50μl终止液(1M H2SO4)终止反应后,于ELISA微孔板阅读仪(Bio-Rad,Hercules,CA)获得450/630nm双波长读数。
设置阈值为0.23,大于该阈值为阳性、小于等于该阈值为阴性。
二、用市售试剂盒检测各个血清样本
以市场销售的试剂盒(北京华大GBI诊断试剂公司,采用裂解病毒作为抗原)对各个血清样本进行平行检测,作为对照。检测时按说明书进行操作,待测血清标本稀释10倍。阈值为0.18,大于该阈值为阳性、小于等于该阈值为阴性。
三、检测效果比较
将处于发病后相同时期的19份血清样本,取OD450值的平均值,结果见图3A(RBD-His为步骤一的结果;Kit为步骤二的结果)。将处于发病后相同时期的19份血清样本,计算阳性率,结果见图3B(RBD-His为步骤一的结果;Kit为步骤二的结果)。
步骤一中,RBD重组蛋白作为抗原方法对3个月、12个月、18个月、24个月和36个月的血清标本检测的阳性率分别为:100%,100%,100%,95%和95%。步骤二中,市售试剂盒对3个月、12个月、18个月、24个月和36个月的血清标本检测的阳性率分别为:100%,95%,84%,84%和42%。
步骤二中,血清的稀释度为步骤一中血清稀释度的10倍。对于同一血清样本,步骤一的OD450值均显著高于步骤二的OD450值。结果表明:以RBD重组蛋白作为抗原检测SARS-CoV特异抗体具有较高的灵敏度。
Claims (10)
1.RBD蛋白在制备SARS病人辅助诊断试剂中的应用;所述RBD蛋白为如下(a)或(b):
(a)氨基酸序列如序列表的序列1所示的蛋白;
(b)序列表的序列2自5’末端第37至753位核苷酸所示DNA编码的蛋白。
2.如权利要求1所述的应用,其特征在于:(b)所述RBD蛋白的制备方法如下:
(1)将序列表的序列2所示的DNA插入表达质粒,得到重组质粒;
(2)将步骤(1)得到的重组质粒转染哺乳动物细胞,得到重组细胞;
(3)培养重组细胞,得到RBD蛋白。
3.如权利要求2所述的应用,其特征在于:所述表达质粒为pcDNA 4/myc-His A;所述哺乳动物细胞为293T细胞。
4.RBD蛋白在制备SARS病人辅助诊断试剂盒中的应用;所述RBD蛋白为如下(a)或(b):
(a)氨基酸序列如序列表的序列1所示的蛋白;
(b)序列表的序列2自5’末端第37-753位核苷酸所示DNA编码的蛋白。
5.如权利要求4所述的应用,其特征在于:(b)所述RBD蛋白的制备方法如下:
(1)将序列表的序列2所示的DNA插入表达质粒,得到重组质粒;
(2)将步骤(1)得到的重组质粒转染哺乳动物细胞,得到重组细胞;
(3)培养重组细胞,得到RBD蛋白。
6.如权利要求5所述的应用,其特征在于:所述表达质粒为pcDNA 4/myc-His A;所述哺乳动物细胞为293T细胞。
7.辅助诊断SARS病人的试剂盒,包括RBD蛋白;所述RBD蛋白为如下(a)或(b):
(a)氨基酸序列如序列表的序列1所示的蛋白;
(b)序列表的序列2自5’末端第37至753位核苷酸所示DNA编码的蛋白。
8.如权利要求7所述的试剂盒,其特征在于:(b)所述RBD蛋白的编码基因如序列表的序列2自5’末端第37至753位核苷酸所示。
9.如权利要求8所述的试剂盒,其特征在于:(b)所述RBD蛋白的制备方法如下:
(1)将序列表的序列2所示的DNA插入表达质粒,得到重组质粒;
(2)将步骤(1)得到的重组质粒转染哺乳动物细胞,得到重组细胞;
(3)培养重组细胞,得到RBD蛋白。
10.如权利要求9所述的试剂盒,其特征在于:所述表达质粒为pcDNA 4/myc-HisA;所述哺乳动物细胞为293T细胞。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201010226354XA CN101915848B (zh) | 2010-07-06 | 2010-07-06 | Rbd蛋白在制备sars病人辅助诊断试剂中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201010226354XA CN101915848B (zh) | 2010-07-06 | 2010-07-06 | Rbd蛋白在制备sars病人辅助诊断试剂中的应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN101915848A true CN101915848A (zh) | 2010-12-15 |
CN101915848B CN101915848B (zh) | 2013-09-25 |
Family
ID=43323409
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201010226354XA Expired - Fee Related CN101915848B (zh) | 2010-07-06 | 2010-07-06 | Rbd蛋白在制备sars病人辅助诊断试剂中的应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN101915848B (zh) |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111024954A (zh) * | 2020-03-09 | 2020-04-17 | 深圳市易瑞生物技术股份有限公司 | 联合检测covid-19抗原和抗体的胶体金免疫层析装置及其使用法 |
CN111273016A (zh) * | 2020-02-26 | 2020-06-12 | 浙江诺迦生物科技有限公司 | 一种基于s蛋白配体与ace2受体竞争法层析的冠状病毒快速检测的试剂盒 |
CN111471088A (zh) * | 2020-04-21 | 2020-07-31 | 北京中科微盾生物科技有限责任公司 | 一种抑制sars-cov-2感染的多肽、组合物及其用途 |
CN112394180A (zh) * | 2021-01-19 | 2021-02-23 | 南京立顶医疗科技有限公司 | 一种SARS-CoV-2中和抗体的检测方法、检测试剂盒 |
CN113009153A (zh) * | 2021-02-25 | 2021-06-22 | 山东莱博生物科技有限公司 | 一种基于磁微粒化学发光的新冠病毒中和抗体检测试剂盒及其应用 |
CN113252908A (zh) * | 2021-06-09 | 2021-08-13 | 泛肽生物科技(浙江)有限公司 | 一种检测新型冠状病毒中和抗体的流式试剂盒及检测方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005081716A2 (en) * | 2003-11-24 | 2005-09-09 | The Johns Hopkins University | DNA VACCINES TARGETING ANTIGENS OF THE SEVERE ACUTE RESPIRATORY SYNDROME CORONAVIRUS (SARS-CoV) |
CN101186637A (zh) * | 2007-11-14 | 2008-05-28 | 中国科学院微生物研究所 | 抑制流感病毒感染的方法及其药物 |
CN101370516A (zh) * | 2006-01-19 | 2009-02-18 | 美国政府(由卫生和人类服务部国立卫生研究院的部长所代表) | SARS-CoV刺突糖蛋白的可溶片段 |
-
2010
- 2010-07-06 CN CN201010226354XA patent/CN101915848B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005081716A2 (en) * | 2003-11-24 | 2005-09-09 | The Johns Hopkins University | DNA VACCINES TARGETING ANTIGENS OF THE SEVERE ACUTE RESPIRATORY SYNDROME CORONAVIRUS (SARS-CoV) |
CN101370516A (zh) * | 2006-01-19 | 2009-02-18 | 美国政府(由卫生和人类服务部国立卫生研究院的部长所代表) | SARS-CoV刺突糖蛋白的可溶片段 |
CN101186637A (zh) * | 2007-11-14 | 2008-05-28 | 中国科学院微生物研究所 | 抑制流感病毒感染的方法及其药物 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
LANYING DU: "A 219-mer CHO-Expressing Receptor-Binding Domain of SARS-CoV S Protein Induces Potent Immune Responses and Protective Immunity", 《VIRAL IMMUNOLOGY》 * |
LANYING DU: "Recombinant receptor-binding domain of SARS-CoV spike protein expressed in mammalian, insect and E.coli cells elicits potent neutralizing antibody and protective immunity", 《VIROLOGY》 * |
YUXIAN HE: "Cross-Neutralization of Human and Palm Civet Severe Acute Respiratory Syndrome Coronaviruses by Antibodies Targeting the Receptor-Binding Domain of Spike Protein", 《THE JOURNAL OF IMMUNOLOGY》 * |
Cited By (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111273016A (zh) * | 2020-02-26 | 2020-06-12 | 浙江诺迦生物科技有限公司 | 一种基于s蛋白配体与ace2受体竞争法层析的冠状病毒快速检测的试剂盒 |
CN111273016B (zh) * | 2020-02-26 | 2021-06-15 | 浙江诺迦生物科技有限公司 | 一种基于s蛋白配体与ace2受体竞争法层析的冠状病毒快速检测的试剂盒 |
CN111024954A (zh) * | 2020-03-09 | 2020-04-17 | 深圳市易瑞生物技术股份有限公司 | 联合检测covid-19抗原和抗体的胶体金免疫层析装置及其使用法 |
CN111471088A (zh) * | 2020-04-21 | 2020-07-31 | 北京中科微盾生物科技有限责任公司 | 一种抑制sars-cov-2感染的多肽、组合物及其用途 |
CN112394180A (zh) * | 2021-01-19 | 2021-02-23 | 南京立顶医疗科技有限公司 | 一种SARS-CoV-2中和抗体的检测方法、检测试剂盒 |
CN113009153A (zh) * | 2021-02-25 | 2021-06-22 | 山东莱博生物科技有限公司 | 一种基于磁微粒化学发光的新冠病毒中和抗体检测试剂盒及其应用 |
CN113009153B (zh) * | 2021-02-25 | 2023-12-15 | 山东莱博生物科技有限公司 | 一种基于磁微粒化学发光的新冠病毒中和抗体检测试剂盒及其应用 |
CN113252908A (zh) * | 2021-06-09 | 2021-08-13 | 泛肽生物科技(浙江)有限公司 | 一种检测新型冠状病毒中和抗体的流式试剂盒及检测方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN101915848B (zh) | 2013-09-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Bossart et al. | Membrane fusion tropism and heterotypic functional activities of the Nipah virus and Hendra virus envelope glycoproteins | |
CN101915848B (zh) | Rbd蛋白在制备sars病人辅助诊断试剂中的应用 | |
CN111499765A (zh) | 一种冠状病毒融合蛋白及其制备方法与应用 | |
CN103760365B (zh) | 一种检测猪瘟病毒Erns及E2抗原的BAS-ELISA试剂盒 | |
Rémond et al. | Diagnosis and screening of foot-and-mouth disease | |
Mordasini et al. | Analysis of the antibody response to an immunodominant epitope of the envelope glycoprotein of a lentivirus and its diagnostic potential | |
CN106442981B (zh) | 一种人博卡病毒1型抗体间接elisa诊断试剂盒 | |
CN104181297B (zh) | 一种检测羊伪狂犬病毒抗体的elisa试剂盒 | |
CN107664697A (zh) | 表达载体及其制备方法、pedv‑s1蛋白及包含该蛋白的间接elisa检测试剂盒 | |
CN103499693A (zh) | 猪瘟病毒抗体竞争AlphaLISA检测试剂盒及检测方法 | |
CN102778565A (zh) | 1型登革热快速金标诊断试纸条 | |
CN103570817B (zh) | 间日疟原虫PvMSP1重组抗原蛋白、其制备方法和用途 | |
CN110568189B (zh) | 犬腺病毒1型抗体elisa检测试剂盒及其应用 | |
Höfner et al. | A hemi-nested PCR assay for the detection and identification of vesicular stomatitis virus nucleic acid | |
CN107664694B (zh) | 一种基于e2蛋白检测猪非典型瘟病毒抗体的elisa试剂盒 | |
CN105063065A (zh) | 密码子优化型1型鸭甲肝病毒vp1基因及其重组蛋白的应用 | |
Li et al. | Packaging of Rift Valley fever virus pseudoviruses and establishment of a neutralization assay method | |
Abed et al. | Development of a Western blot assay for detection of bovine immunodeficiency-like virus using capsid and transmembrane envelope proteins expressed from recombinant baculovirus | |
CN106397546A (zh) | 一种o型口蹄疫病毒人工重组抗原及其制备与应用 | |
BEYGI et al. | Cloning and expression of the G1 epitope of bovine ephemeral fever virus G glycoprotein in Escherichia coli | |
CN107098980A (zh) | 一种检测风疹病毒抗体的融合蛋白及其制备方法 | |
CN107253983A (zh) | 一种检测弓形虫抗体的重组蛋白组合物及其制备方法 | |
CN106520699A (zh) | 一种重组hek‑293t细胞及其分泌的抗寨卡病毒融合蛋白 | |
CN110554187B (zh) | 一种用于检测牛病毒性腹泻病毒抗体的表达蛋白、elisa试剂盒及其制备方法和应用 | |
CN101979406B (zh) | 南非ⅱ型口蹄疫多抗原表位蛋白、其制备方法及应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20130925 Termination date: 20150706 |
|
EXPY | Termination of patent right or utility model |