CN101914609A

CN101914609A - 一种大肠菌群的快速检测方法

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Publication number: CN101914609A
Application number: CN 201010266411
Authority: CN
Inventors: 殷涌光
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2010-08-27
Filing date: 2010-08-27
Publication date: 2010-12-15
Anticipated expiration: 2030-08-27
Also published as: CN101914609B

Abstract

本发明涉及一种大肠菌群的快速检测方法。利用大肠菌群细胞在短时间培养过程中会产气，可以发酵乳糖产酸，使大肠菌群细胞与伊红美兰结合，而使伊红美兰混合培养溶液生成的紫黑色或紫红色沉淀，通过生物显微镜镜检计数，将紫黑色或紫红色沉淀细菌经过革兰氏染色呈现阴性的细菌的图像个数，来计数大肠菌群数量的大肠菌群快速检测方法；或者由于伊红美兰混合培养溶液生成的紫黑色或紫红色的沉淀，而使伊红美兰混合培养溶液颜色变化，利用伊红美兰混合培养溶液颜色变化的程度与大肠菌群细胞数量相关的特性，识别大肠菌群细胞数的大肠菌群快速检测方法，本发明方法适合生物学界、医药界、食品界以及各种物品中大肠菌群的快速检测。

Description

一种大肠菌群的快速检测方法

技术领域

本发明涉及一种大肠菌群的快速检测方法。本发明涉及一种利用大肠菌群细胞在短时间培养过程中会产气，可以发酵乳糖产酸，使大肠菌群细胞与伊红美兰结合而使伊红美兰混合培养溶液生成的紫黑色(或紫红色)沉淀，通过生物显微镜镜检计数将紫黑色(或紫红色)沉淀细菌经过革兰氏染色呈现阴性的细菌的图像个数来计数大肠菌群数量的大肠菌群快速检测方法；或者由于大肠菌群细胞与伊红美兰结合而使伊红美兰混合培养溶液生成的紫黑色的沉淀，而使伊红美兰混合培养溶液颜色变化，利用伊红美兰混合培养溶液颜色变化的程度与大肠菌群细胞数量相关的特性识别大肠菌群细胞数的大肠菌群快速检测方法，本发明方法适合生物学界、医药界、食品界以及各种物品中大肠菌群的快速检测。

背景技术

微生物大肠菌群的快速、准确的检测，是生物学界、医药界、食品界需要亟待解决的突出问题。目前，普遍采用的大肠菌群的检测方法为多管发酵法，该法检测结果准确、可靠，但由于其检测时间长(72h)，而影响了其在食品和水质监测中的应用，尤其是在检测样品多和检测时间紧的情况下。经过长时间培养后得到的检测结果很难用于指导生产，而当前的食品生产过程监测和水质监测中迫切需要能够快速检测到大肠菌群数的检测方法，尤其是在水质监测中，该问题更加明显。因此，尽可能的缩短其检测时间的研究工作是非常有意义的。

国标中大肠菌群检测采用多管发酵技术(MTF)对大肠菌群计数。多管发酵技术是目前普遍采用的一种大肠菌群计数方法，可以得到食品中的大肠菌群的最大可能数(mostprobable number，MPN)。按照GB/T4789.3-2003中的操作步骤，多管发酵法的一般步骤是将不同稀释度的待检样品接种于乳糖胆盐发酵管中，每一个稀释度接种三管，置36℃±1℃温箱内，培养24h±2h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，要将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36℃±1℃温箱内，培养18h-24h，然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验，共需72小时的检测时间。

发明内容

本发明的目的在于提出一种大肠菌群的快速检测方法，使用该方法可以快速检测样品中的大肠菌群数量。本发明以伊红、美兰和溴甲酚紫作为指示剂，将伊红美兰加入到乳糖胆盐发酵培养基中，调配成溶液，用乳酸将溶液调成中性，利用大肠菌群能发酵乳糖产酸，从而使伊红美兰与大肠菌群细胞结合而产生沉淀、混合溶液变色的特性，同时，利用大肠菌群细胞在酸性环境中，由于甲酸脱氢酶的作用，还会使甲酸分解成CO₂和H₂，试管中会有产气现象，因此通过短时间的培养后溶液中有产气现象，同时用检测混合培养溶液的沉淀中的细胞数来检测大肠菌群的数目；或者用混合溶液颜色的变化程度来判断待测样品中大肠菌群的数目。本发明方法适合各种生物学界、医药界、食品界以及各种物品中微生物大肠菌群的快速检测。

本发明的大肠菌群快速检测方法，其原理如下：

大肠菌群细菌具有产生分解乳糖的酶而酶解乳糖产生乳酸；大肠菌群细胞在酸性环境中，由于甲酸脱氢酶的作用，还会使甲酸分解成CO₂和H₂，试管中会有产气现象。因此，大肠菌群细胞在短时间培养过程中有产气现象，同时，大肠菌群在有胆盐或其他等效选择因子存在时，在35℃～37℃生长能分解乳糖而产生乳酸，使培养基的pH值降低。在酸性条件下，溴甲酚紫显示黄色，细菌带正电荷，而染上伊红，伊红与美蓝相结合形成紫黑色或紫红色的细菌沉淀从溶液中析出，从而使溶液颜色变化。而在中性或碱性环境中伊红与美蓝不结合，溶液保持原色。大肠菌群的检出率与大肠菌群细菌产酸量呈正相关关系，溶液中大肠菌群的数目越多，形成的紫黑色或紫红色的细菌沉淀也就越多，溶液颜色也就变化的越多，溶液颜色变化从紫黑色或紫红色向橘黄色、黄色变化，菌越少溶液颜色越接近紫黑色或紫红色，菌越多溶液颜色越接近橘黄色或黄色。大肠菌群的检出率可通过对混合培养溶液沉淀中的细胞且经过革兰氏染色呈阴性的细胞数来确定；或者大肠菌群的检出率通过混合培养溶液的颜色来确定。

本发明通过样品在加有伊红美兰的乳糖胆盐培养基溶液中短时间培养后，培养液中有产气现象，同时培养液有沉淀产生，通过计数沉淀中细胞数来检测培养液中大肠菌群的数量；或者通过培养液的颜色来判断培养液中大肠菌群的数量。

本发明通过计数沉淀中细胞数来检测培养液中大肠菌群的数量采用生物显微镜镜检方法。

将检测样品经过处理，利用大肠菌群细胞在伊红美兰混合培养溶液中短时间培养过程中会产气，发酵乳糖产酸，使伊红美兰混合培养溶液生成紫黑色或紫红色的细菌沉淀，从而使伊红美兰混合培养溶液颜色变化，通过生物显微镜镜检计数，用紫黑色或紫红色沉淀细菌经过革兰氏染色呈现阴性的细菌的图像个数来计数大肠菌群数量。

将样品经本发明处理过程处理，并使用本发明的培养液，经过短时间(5min～150min)培养后，培养液中有产气现象，同时培养液有沉淀产生，将培养液用膜过滤器浓缩，取出膜过滤器上部浓缩了的带有沉淀的菌液；或者采用离心浓缩，弃去上清液，用移液器取出底部浓缩了的带有沉淀的菌液。将移液器取出的浓缩了的菌液，涂在载玻片上，经干燥固定，经革兰氏染色，干燥，显示为革兰氏阴性菌时，通过生物显微镜镜检载玻片上的经过革兰氏染色呈现阴性的细菌的图像个数来计数大肠菌群数量。

大肠菌群细菌具有产生分解乳糖的酶而酶解乳糖产生乳酸，在酸性条件下，大肠菌群细菌带正电荷，而染上伊红，伊红与美蓝相结合形成紫黑色或紫红色的絮状沉淀从溶液中析出，大肠菌群细菌附着有紫黑色或紫红色的沉淀，通过生物显微镜镜检计数，用紫黑色或紫红色沉淀细菌且经过革兰氏染色呈现阴性的细菌的图像个数来计数大肠菌群数量。

本发明利用伊红与美兰相结合形成紫黑色或紫红色的细菌沉淀从溶液中析出，从而使溶液颜色变化，利用伊红美兰混合培养溶液颜色变化的程度与大肠菌群细胞数量相关的关系特征，通过伊红美兰混合培养溶液的颜色来识别大肠菌群细胞数，具体计数法包括：比色法或分光光度法。

比色法：

先将不同数量的大肠菌群数的样品经本发明处理过程处理，接种在本发明的培养液中，经过短时间培养后，培养液中有产气现象，同时将不同数量的大肠菌群数的培养液颜色制成标准比色板，建立培养液颜色与大肠菌群数之间的对应关系。

在检测其他待检样品时，按照同样方法处理和培养，培养液中有产气现象，同时将培养液与标准比色板进行颜色对比，根据样品颜色与标准比色板颜色比对的结果，按照标准比色板颜色与大肠菌群数的对应关系来确定该样品的大肠菌群数。

分光光度法：

在同样条件和同样培养液情况下，先将不同数量的大肠菌群数的样品经本发明处理过程处理，接种在本发明的培养液中，经过短时间培养后，培养液中有产气现象，同时分别取一定量的各种数量的大肠菌群数的经过离心的上清培养液置于透明的比色皿内，用分光光度计扫描，选择入射光吸收最大波长，使用相同波长分别采集不同数量大肠菌群数样品的透明比色皿内培养液的分光光度值，并记录存储分光光度值作为标准分光光度值，建立培养液标准分光光度值与大肠菌群数之间的对应关系。

在检测其他待检样品时，按照同样方法处理和培养，培养液中有产气现象，同时按上述方法取与上述相同数量经过离心的上清培养液置于同样的透明的比色皿内，用分光光度计使用与上述相同扫描波长采集透明的比色皿内培养液的分光光度值，并与记录存储的标准分光光度值进行对比，根据比对的结果确定该样品的大肠菌群数。

采用本发明的大肠菌群快速检测方法，其检测样品处理培养步骤如下：

1、伊红美兰混合培养溶液的配制

按照22.5g乳糖胆盐培养基粉末：0.409g～0.727g伊红：0.066g～0.118g美兰：500mL蒸馏水的比例，溶于蒸馏水中，然后，按照溶液1mL∶30μL1％乳酸溶液的比例加入乳酸，配制成伊红美兰混合培养溶液，伊红美兰混合培养溶液为中性，pH值为6.95～7.07，放在电炉上煮沸，用锡纸封口，灭菌后待用；

2、检测步骤

(1)以无菌操作取样品25g或25mL，粉碎后放入装有175mL无菌生理盐水的灭菌玻璃瓶中(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，混合均匀；

(2)采用中速定量滤纸过滤样品匀液，用50mL无菌生理盐水均匀冲洗残留在滤纸上的物质，继续收集滤液，制成1∶10的样品匀液；

(3)取1mL样品匀液用膜过滤器浓缩出少量菌液，取膜过滤器上部浓缩了的菌液加入到无菌离心管中；

(4)用移液管移取0.3mL～1mL伊红美兰混合培养溶液，加入到盛有样品浓缩菌液的离心管中，盖上离心管的盖子，放入36℃±1℃恒温箱中短时间培养5min～150min。

(5)用手指弹击离心管，当培养液有气泡产生且有沉淀时，进行大肠菌群数量的检测。

3、检测方法

1)通过计数沉淀中细胞数来检测培养液中大肠菌群的数量。

(1)将离心管中培养液取出，用膜过滤器浓缩出少量菌液，取出膜过滤器上部浓缩了的带有沉淀的菌液；或者将离心管离心，弃去上清液，用移液器取出底部少量浓缩了的带有沉淀的菌液。

(2)将移液器取出的浓缩了的菌液，涂在载玻片上，经干燥固定，经革兰氏染色，干燥，显示为革兰氏阴性菌时，检测计数。

(3)将经革兰氏染色为阴性菌时用生物显微镜镜检。记录革兰氏染色为阴性的细菌的图像个数来计数大肠菌群数量。

2)通过培养液的颜色来判断培养液中大肠菌群的数量。

①比色法

培养液中有产气现象，用吸水纸吸取离心管中的伊红美兰混合培养溶液，与标准比色板颜色对比，查找与标准比色板颜色相同的颜色或介于两种颜色之间，读取与比色板颜色对应的大肠菌群数或估计介于两种颜色之间的大肠菌群数即为检测到的样品的大肠菌群数。

②分光光度法

培养液中有产气现象，将离心管离心，取离心管上清液置于透明的比色皿内，用分光光度计扫描，选择与制作标准分光光度值时相同的入射光波长采集透明比色皿内培养液的分光光度值，并与记录存储的标准分光光度值进行对比，根据比对的结果确定该样品的大肠菌群数。

附图说明

图1显微镜下经革兰氏染色呈阴性菌的细菌图像。

图2样品不同大肠菌群数时的培养液颜色。

图3标准分光光度值标准曲线。

具体实施方式

以下通过实施例的具体描述对本发明作进一步详细说明。

实施例：

1通过计数沉淀中细胞数来判断培养液中大肠菌群的数量。

1)、伊红美兰混合培养溶液的配制

配制3种伊红美兰混合培养溶液，分别为：

a.、按照22.5g乳酸胆盐培养基粉末：409mg伊红：66mg美兰：500mL蒸馏水的比例，溶于蒸馏水中，按照溶液1mL∶30μL1％乳酸溶液的比例加入乳酸，配制成伊红美兰混合培养溶液，伊红美兰混合培养溶液为中性，pH为6.95～7.07。放在电炉上煮沸，用锡纸封口，灭菌后待用；

b、按照22.5g乳酸胆盐培养基粉末：550mg伊红：89mg美兰：500mL蒸馏水的比例，溶于蒸馏水中，按照溶液1mL∶30μL1％乳酸溶液的比例加入乳酸，配制成伊红美兰混合培养溶液，伊红美兰混合培养溶液为中性，pH为6.95～7.07。放在电炉上煮沸，用锡纸封口，灭菌后待用；

c、按照22.5g乳酸胆盐培养基粉末：727mg伊红：118mg美兰：500mL蒸馏水的比例，溶于蒸馏水中，按照溶液1mL∶30μL1％乳酸溶液的比例加入乳酸，配制成伊红美兰混合培养溶液，伊红美兰混合培养溶液为中性，pH为6.95～7.07。放在电炉上煮沸，用锡纸封口，灭菌后待用。

2)、检测步骤

(3)取1mL样品匀液用膜过滤器浓缩出少量菌液，取膜过滤器上部浓缩了的菌液加入到无菌离心管中；本实施例用膜过滤器分别浓缩5μL、10μL和20μL菌液，加入到1.5mL离心管中。

(4)用移液管分别移取0.3mL、0.5mL和1mL伊红美兰混合培养溶液，加入到盛有样品浓缩菌液的离心管中，盖上离心管的盖子，放入36℃±1℃恒温箱中短时间培养。本实施例分别培养5min、10min和20min。

(5)用手指弹击离心管，当培养液有气泡产生且有沉淀时进行大肠菌群数的检测。

3)、检测方法

(1)将离心管中培养液取出，用膜过滤器浓缩出少量菌液，取出膜过滤器上部浓缩了的带有沉淀的菌液，本实施例用膜过滤器分别浓缩并取出1μL、5μL和10μL菌液；或者将离心管以高速10000r/min～14000r/min的速度离心处理3min～5min，弃去上清液，用移液器取出底部出少量浓缩了的带有沉淀的菌液。

(2)将移液器取出的浓缩了的菌液，涂在载玻片上，经干燥固定。

(3)革兰氏染色：

①采用95％的乙醇脱色，将菌体上的紫黑色脱去；

②草酸铵结晶紫染1分钟；然后用清水冲洗；

③加碘液覆盖涂面染1分钟；水洗，用吸水纸吸去水分；

④加95％酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，30秒后水洗，吸去水分；

⑤用沙黄染10秒钟后，清水冲洗；干燥。

⑥沙黄染色的结果：革兰氏阴性菌体呈红色空心，革兰氏阳性菌体都呈紫色实心。

⑦经革兰氏染色为阴性菌时，检测计数。

(4)大肠菌群数的检测

将经革兰氏染色为阴性菌时用生物显微镜镜检，经革兰氏染色为革兰氏阴性菌的细菌图像见图1。记录革兰氏染色为阴性的且呈现空心状态的细菌的图像个数来计数大肠菌群数量。检测结果见表表6、表7、表8、表9、表10和表11。

2、通过培养液的颜色用比色法来判断培养液中大肠菌群的数量。

1)、伊红美兰混合培养溶液的配制

配制3种伊红美兰混合培养溶液，分别为：

a.、按照22.5g乳酸胆盐培养基粉末：409mg伊红：66mg美兰：500mL蒸馏水的比例，溶于蒸馏水中，按照溶液1mL∶30μL1％乳酸溶液的比例加入乳酸，配制成伊红美兰混合培养溶液，伊红美兰混合培养溶液为中性，pH为6.95～7.07。放在电炉上煮沸，用锡纸封口，灭菌后待用。

b、按照22.5g乳酸胆盐培养基粉末：550mg伊红：89mg美兰：500mL蒸馏水的比例，溶于蒸馏水中，按照溶液1mL∶30μL1％乳酸溶液的比例加入乳酸，配制成伊红美兰混合培养溶液，伊红美兰混合培养溶液为中性，pH为6.95～7.07。放在电炉上煮沸，用锡纸封口，灭菌后待用。

2)、检测步骤

(4)用移液管分别移取0.3mL、0.5mL和1mL伊红美兰混合培养溶液，加入到盛有样品浓缩菌液的离心管中，盖上离心管的盖子，放入36℃±1℃恒温箱中短时间培养，本实施例分别培养130min和150min。

3)、检测方法

用确定数量的纯菌制作标准比色板。将经过培养后的离心管用2500r/min～5000r/min离心2min～4min，本实施例用3000r/min离心2min，取离心管上层一定量的上清液置于离心管或其他容器内，本实施例为取3个平行样，分别为各0.2mL、0.5mL和0.9mL，将3个平行样合在一起分别为0.6mL、1.5mL和2.7mL，置于离心管中，用吸水纸吸取离心管中的伊红美兰混合培养溶液的上清液，将不同数量的大肠菌群数的伊红美兰混合培养溶液颜色制成标准比色板，建立培养液颜色与大肠菌群数之间的对应关系。标准比色板的颜色从菌数为0MPN值的紫红色到菌数为130MPN值的橘黄色，制成的标准比色板对应的菌数分别为0、3、16、30、38、64、90、110和130MPN值。图2为不同大肠菌群数时上清液的颜色。

在检测样品时，按照同样方法处理和培养，培养液中有产气现象，用吸水纸吸取离心管中的伊红美兰混合培养溶液，与标准比色板颜色比对，查找与标准比色板颜色相同的颜色或介于两种颜色之间，读取与比色板颜色对应的大肠菌群数或估计介于两种颜色之间的大肠菌群数即为检测到的样品的大肠菌群数。

(1)、瓶装矿泉水检测

a)多管发酵法检测阳性管数见表1：

表1

b)比色法：吸水纸颜色与标准比色板零菌数颜色相同，确定其MPN值为0MPN。

(2)、盒装饼干检测

a)多管发酵法检测阳性管数见表2：

表2

b)比色法：吸水纸颜色与标准比色板比较，其颜色介于标准比色板菌数为0MPN和3MPN之间，因此，得到MPN值为＜3.0。

(3)、果蔬汁饮料检测

a)多管发酵法检测阳性管数见表3：

表3

b)比色法：吸水纸颜色与标准比色板比较，其颜色介于标准比色板菌数为90MPN值和110MPN值之间，因此，得到其MPN值介于90和110之间，得到MPN值为＜110。

(4)、香辛料检测

a)多管发酵法检测阳性管数见表4：

表4

b)比色法：吸水纸颜色与标准比色板比较，其颜色介于标准比色板3号和标准比色板菌数为30MPN值和38MPN值之间，因此，其MPN值介于30和38之间，得到MPN值为＜38。

(5)、仁果制品检测

a)多管发酵法检测阳性管数见表5：

表5

3、通过培养液的颜色用分光光度法来判断培养液中大肠菌群的数量。

1)、伊红美兰混合培养溶液的配制

配制3种伊红美兰混合培养溶液，分别为：

2)、检测步骤

3)、检测方法

用确定数量的纯菌制作标准分光光度值。将离心管用2500r/min～5000r/min离心2min～4min，本实施例用3000r/min离心2min，取离心管上层一定量的上清液置于透明的各种规格的比色皿内，本实施例使用1cm比色皿，取3个平行样各0.9mL，合在一起共2.7mL上清液，用分光光度计，本实施例使用722N型，上海菁华科学仪器有限公司生产分光光度计在波长400nm～700nm范围内扫描，选择入射光吸收最大波长，本实施例选择为500nm，采集透明比色皿内培养液的分光光度值，并记录存储分光光度值作为标准分光光度值，建立培养液标准分光光度值与大肠菌群数之间的对应关系。标准分光光度值的标准曲线见图3。

标准分光光度值的回归方程为：

y＝-16.029x+6.4005 (1)

R²＝0.9911 (2)

式中：y：预测大肠菌群数，

x：样品的分光光度值

R：相关系数

在检测其他待检样品时，按照同样方法处理和培养，培养液中有产气现象，同时按上述方法取同样数量培养液置于同样的透明的比色皿内，用分光光度计采集透明的比色皿内培养液的分光光度值，并与记录存储的标准分光光度值进行对比，根据比对的结果确定该样品的大肠菌群数。检测结果见表6、表7、表8、表9、表10和表11。

表6软糖类食品的大肠菌群MPN值检测

表7焙烤类食品的大肠菌群MPN值检测

表8非发酵性豆制品的大肠菌群MPN值检测

表9果蔬汁饮料类食品的大肠菌群MPN值检测

表10膨化食品类的大肠菌群MPN值检测

表11肉灌肠类食品的大肠菌群MPN值检测

Claims

1.一种大肠菌群的快速检测方法，其特征在于，将检测样品经过处理，利用大肠菌群细胞在伊红美兰混合培养溶液中短时间培养过程中会产气，发酵乳糖产酸，使伊红美兰混合培养溶液生成紫黑色或紫红色的细菌沉淀，从而使伊红美兰混合培养溶液颜色变化，通过生物显微镜镜检计数，用紫黑色或紫红色沉淀细菌经过革兰氏染色呈现阴性的细菌的图像个数来计数大肠菌群数量；

利用伊红美兰混合培养溶液颜色变化的程度与大肠菌群细胞数量相关的特性，通过伊红美兰混合培养溶液的颜色来识别大肠菌群细胞数，具体计数法分别为：比色法或分光光度法。

2.根据权利要求1所述的一种大肠菌群的快速检测方法，其特征在于，所说的短时间培养为5min～150min。

3.根据权利要求1所述的一种大肠菌群的快速检测方法，其特征在于，所述的检测样品处理培养包括以下步骤：

1)以无菌操作取样品25g或25mL，粉碎后放入装有175mL无菌生理盐水的灭菌玻璃瓶中，瓶内预置适当数量的玻璃珠，混合均匀；

2)采用中速定量滤纸过滤样品匀液，用50mL无菌生理盐水均匀冲洗残留在滤纸上的物质，继续收集滤液，制成1∶10的样品匀液；

3)采用膜过滤器浓缩1mL待检测样品浓缩出少量菌液，取膜过滤器上部浓缩的菌液加入无菌离心管中；

4)用移液管移取0.3mL～1mL伊红美兰混合培养溶液，加入到盛有样品浓缩菌液的离心管中，盖上离心管的盖子，放入36℃±1℃恒温箱中短时间培养。

4.根据权利要求1所述的一种大肠菌群的快速检测方法，其特征在于，所述的伊红美兰混合培养溶液的制取包括以下步骤：

按照22.5g乳糖胆盐发酵培养基粉末：0.409g～0.727g伊红：0.066g～0.182g美兰：500mL蒸馏水的比例，溶于蒸馏水中，然后，按照溶液1mL∶30μL1％乳酸溶液的比例加入乳酸，配制成伊红美兰混合培养溶液，伊红美兰混合培养溶液为中性，pH为6.95～7.07，放在电炉上煮沸，用锡纸封口，灭菌后待用。

5.根据权利要求1、2、3或4所述的一种大肠菌群的快速检测方法，其特征在于，比色法按以下步骤进行：

1)先将不同数量的大肠菌群数的样品经过所述的检测样品处理培养步骤处理，放于按所述的伊红美兰混合培养溶液的制取步骤制取的伊红美兰混合培养溶液中，经过5min～150min短时间培养后，伊红美兰混合培养溶液中有产气现象，将有各种数量的大肠菌群数的伊红美兰混合培养溶液颜色制成标准比色板，建立伊红美兰混合培养溶液颜色与大肠菌群数之间的对应关系；

2)在检测其他待检样品时，按照上述1)同样方法处理和培养，伊红美兰混合培养溶液中有产气现象，用吸水纸吸取伊红美兰混合培养溶液，并与标准比色板进行颜色对比，根据样品颜色与标准比色板颜色比对的结果，按照标准比色板颜色与大肠菌群数的对应关系来确定该样品的大肠菌群数。

6.根据权利要求1、2、3或4所述的一种大肠菌群的快速检测方法，其特征在于，分光光度法按以下步骤进行：

1)先将不同数量的大肠菌群数的样品经过所述的检测样品处理培养步骤处理，放于按所述的伊红美兰混合培养溶液的制取步骤制取的伊红美兰混合培养溶液中，经过5min～150min短时间培养后，伊红美兰混合培养溶液中有产气现象，经过离心处理，分别取上层一定量的上清液置于透明的各种规格的比色皿内，用分光光度计扫描，选择入射光吸收最大波长，使用相同波长分别采集各种数量大肠菌群数样品的透明比色皿内伊红美兰混合培养溶液的分光光度值，并分别记录存储各种数量大肠菌群数时的分光光度值作为标准分光光度值，建立伊红美兰混合培养溶液标准分光光度值与大肠菌群数之间的对应关系；

2)在检测其他待检样品时，按照上述1)同样的步骤与数量，用分光光度计采集透明的比色皿内伊红美兰混合培养溶液的分光光度值，与记录存储的标准分光光度值进行对比，根据比对的结果确定该样品的大肠菌群数。