CN101891800B - 饱和脂肪链醇rgd五肽酯化合物及其合成方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了饱和脂肪链醇RGD五肽酯化合物及其合成方法和用途。本发明化合物的通式为：Arg-Gly-Asp-AA-Glu-O(CH₂)nCH₃；其中，n为9、11或13；AA选自苯丙氨酸、丝氨酸或缬氨酸。将饱和脂肪链醇CH₃(CH₂)₈CH₂OH、CH₃(CH₂)₁₀CH₂OH或CH₃(CH₂)₁₂CH₂OH分别与保护基保护的RGD肽的羧端缀合，脱去保护基，即得本发明化合物。本发明饱和脂肪链醇RGD五肽酯化合物除具有优秀的口服抗血栓活性外，还具有优秀的自组装性能，可作为制备微乳、脂质体等药物载体的制剂材料或靶向制剂材料。

Description

饱和脂肪链醇RGD五肽酯化合物及其合成方法和用途

技术领域

本发明涉及酯类化合物，尤其涉及饱和脂肪链醇与RGD肽的羧端缀合而得到的饱和脂肪链醇RGD五肽酯化合物，本发明还涉及该饱和脂肪链醇RGD五肽酯作为抗血栓剂、药物载体或药物靶向制剂材料中的用途，属于生物医药领域

背景技术

在未来的5年到10年基因治疗会有可把基因传送至细胞的理想载体。从生物制剂的立场看，基因转导系统就是药物释放系统(DDS)。有多种化学合成的小分子构建的基因转导系统受到关注，其中阳离子脂质构成的基因转导系统是关注热点。阳离子脂质在药学领域遍用于构建脂质体运载小分子(包括多肽)药物。与在DDS中一样，在基因转导系统中阳离子脂质体有明显好处，例如可通过电荷吸附与DNA形成复合物并有效避免被细胞内溶酶体降解、可将DNA高效导入细胞、对DNA的尺寸没有限制、操作简便等。阳离子脂质的基本构造如下，包括高级脂肪链构成的疏水臂和亲水的阳离子头。

细胞黏附在细胞黏附性疾病(癌转移、血栓形成、化学致炎和骨质疏松)的发展过程中起关键作用。调节性糖蛋白例如RGD肽与整合素受体有很强的结合能力，可参与细胞黏附过程。例如RGD肽与血小板、肿瘤细胞及骨基表面的GP IIb/IIIa受体特异性结合可干预血栓、癌转移和骨质疏松的发展过程。RGD肽的这种作用赋予了含RGD序列的化合物一种重要性质，即含RGD序列的化合物可以向血栓、癌转移和骨质疏松的患病部位富集。在这样一个前提下，把RGD肽与高级脂肪链缀合，便可以获得靶向药质体。

发明内容

本发明目的之一是提供一种饱和脂肪链醇RGD五肽酯化合物；

本发明目的之二是提供一种合成上述饱和脂肪链醇RGD五肽酯化合物的方法；

本发明目的之三是将上述饱和脂肪链醇RGD五肽酯化合物应用于制备药物或药物载体或药物靶向制剂材料。

本发明上述目的是通过以下技术方案来实现的：

饱和脂肪链醇RGD五肽酯化合物，其结构式为通式I所示：

Arg-Gly-Asp-AA-Glu-O(CH₂)nCH₃通式I

其中，n为9、11或13；AA选自Phe(苯丙氨酸)、Ser丝氨酸或Val(缬氨酸)；

本发明目的之二是提供一种合成上述饱和脂肪链醇RGD五肽酯化合物的方法；

一种合成上述饱和脂肪链醇RGD五肽酯化合物的方法，包括：

(1)分别合成用保护基保护的RGDSE、RGDVE、RGDFE；

(2)将CH₃(CH₂)₈CH₂OH、CH₃(CH₂)₁₀CH₂OH或CH₃(CH₂)₁₂CH₂OH分别与保护基保护的RGDSE、RGDVE或RGDFE的羧端偶联，脱去保护基，即得。

本发明结合了下述认识或依据完成了上述技术方案：把基因传送至细胞的理想载体(基因转导系统)是基因治疗的关键任务之一及从生物制剂的立场看基因转导系统与药物释放系统(DDS)具有等同性、依据虽然有多种化学合成的小分子构建的基因转导系统都受到关注但是格外看好阳离子脂质构成的基因转导系统、依据阳离子脂质体可通过电荷吸附与DNA形成复合物并有效避免被细胞内溶酶体降解、依据阳离子脂质体可将DNA高效导入细胞、依据阳离子脂质体对DNA的尺寸没有限制，以及依据含RGD序列的化合物可以向血栓、炎症、癌转移和骨质疏松的患病部位富集。

本发明人基于上述认识，把饱和脂肪链醇CH₃(CH₂)₈CH₂OH、CH₃(CH₂)₁₀CH₂OH或CH₃(CH₂)₁₂CH₂OH分别与RGD肽的羧端缀合，使制得的分子获得四种性能，即依赖于饱和脂肪链醇烷基链的疏水性、依赖于RGD肽的胍基和α-氨基质子化形成的阳离子性质和亲水性和依赖于RGD肽对GP IIb/IIIa受体特异亲和作用获得的靶向性。这样一来，把RGD肽与饱和脂肪链醇CH₃(CH₂)₈CH₂OH、CH₃(CH₂)₁₀CH₂OH或CH₃(CH₂)₁₂CH₂OH缀合制得的分子便成为靶向阳离子药质体。

在大鼠血栓形成模型上的评价试验结果表明，本发明饱和脂肪链醇RGD五肽酯化合物具有优秀的口服抗血栓活性，可作为抗血栓剂应用；在水相检测了本发明9种饱和脂肪链醇RGD五肽酯化合物自组装成为纳米颗粒的性能，试验结果表明，本发明的饱和脂肪链醇RGD五肽酯化合物具有优秀的自组装性能，可作为制备微乳、脂质体等的制剂材料。因为本发明的9种饱和脂肪链醇RGD五肽酯的抗血栓活性来自RGD肽对GP IIb/IIIa受体特异亲和作用，所以这种抗血栓活性又表征了9种饱和脂肪链醇RGD五肽酯的靶向性，所以本发明的饱和脂肪链醇RGD五肽酯化合物可作为靶向制剂材料。

本发明的又一目的是提供一种含有本发明上述通式化合物的药用组合物，该药用组合物由治疗上有效剂量的本发明化合物与药学上可接受的赋型剂或者辅加剂组成；即：将有效量的本发明化合物与药学上可接受的载体或稀释剂配合后，按本领域常规的制剂方法将其制备成任意一种适宜的药物组合物。通常该组合物适合于口服给药和注射给药，也适合其他的给药方法。该组合物可以是片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、锭剂、栓剂，或口服液等液体制剂形式。根据不同的给药方法，本发明药物组合物可以含有0.1％-99％重量，优选10-60％重量的本发明化合物。

本发明所涉及到的氨基酸的缩略术语的说明：

R(Arg)：精氨酸

G(Gly)：甘氨酸

D(Asp)：天冬氨酸

E(Glu)：谷氨酸

F(Phe)：苯丙氨酸；

S(Ser)：丝氨酸；

V(Val)：缬氨酸

附图说明

图1本发明饱和脂肪链醇RGD五肽酯的合成路线图；I)DCC，HOBt，NMM；II)4NHCl-EtOAc；III)H₂，Pd/C，4N HCl/EtOAc；IV)H₂，Pd/C；其中AA＝Phe，Val或Ser。

图2由透射电镜描述的本发明代表性化合物在水相组装的纳米球。

图3由扫描电镜描述的本发明代表性化合物组装的纳米球。

具体实施方式

为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。

实施例1 RGDFEO(CH₂)₁₃CH₃的制备

1)Boc-Arg(NO2)-Gly-OBzl的制备

称取0.867g(2.7mmol)Boc-Arg(NO2)-OH于100ml茄瓶中，用3ml无水DMF溶解，再加适量无水THF。然后，加入0.367g(2.7mmol)N-羟基苯并三氮唑(HOBt)，并使完全溶解。冰浴下加入0.615g(2.9mmol)二环己基羰二亚胺(DCC)，搅拌10分钟左右，得到反应液(I)，待用。将0.961g(2.8mmol)TosOH·H-Gly-OBzl用5ml无水DMF溶解，然后加入1mlN-甲基吗啉(NMM)，调pH 8-9，得到反应液(II)。冰浴下把反应液(II)加入反应液(I)中，先冰浴下搅拌1h，再室温搅拌24h，TLC(氯仿∶甲醇＝10∶1)显示Boc-Arg(NO₂)-OH消失。滤除二环己基脲(DCU)，滤液吹去DMF。残留物用50ml氯仿溶解。得到的溶液依次用5％NaHCO₃水溶液、饱和NaCl水溶液、5％KHSO₄水溶液和饱和NaCl水溶液洗。氯仿层用无水Na₂SO₄干燥。6小时后过滤，滤液减压浓缩至干，得到1.1g(86.88％)标题化合物，为白色固体。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-4.31$ (c＝2，CH₃OH)；Mp 72-73℃；ESI-MS(m/z)467[M+H]⁺

2)Boc-Arg(NO2)-Gly的制备

将1.1g(2.3mmol)Boc-Arg(NO₂)-Gly-OBzl溶于10ml甲醇。冰浴下将得到的溶液用NaOH(2N)水溶液调pH12并搅拌2h，TLC(氯仿∶甲醇＝5∶1)显示Boc-Arg(NO₂)-Gly-OBzl消失。反应混合物用饱和KHSO₄调pH＝7，减压浓缩除甲醇。残留物用饱和KHSO₄调pH＝2，用乙酸乙酯萃取3次。合并乙酸乙酯相，用无水Na₂SO₄干燥。过滤，滤液减压浓缩至干，得0.792g(90％)标题化合物，为白色固体。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-2.1644$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 99-100℃；ESI-MS(m/z)375[M-H]^-

3)Boc-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备

按照Boc-Arg(NO₂)-Gly-OBzl的制备方法由4.95g(14.2mmol)Boc-Glu(OBzl)-OH和3g(14.6mmol)肉豆蔻醇(十四醇)得到6.68g(89％)标题化合物，为白色蜡状物。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-17.60$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 38-39℃；ESI-MS(m/z)534[M+H]⁺.

4)HCl·Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备

将1.10g(2mmol)Boc-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃溶解在10ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)溶液中，室温搅拌2小时，TLC(展开剂CHCl₃∶MeOH＝15∶1)显示原料点消失，减压浓缩除去乙酸乙酯，残留物反复用少量乙醚进行减压浓缩以除去氯化氢，最后0.792g(82％)标题化合物，为白色蜡状物，直接用于下一步反应。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-13.26$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 48-50℃；ESI-MS(m/z)434[M+H]⁺

5)Boc-Phe-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备

按Boc-Arg(NO₂)-Gly-OBzl的制备方法，由0.957g(3.6mmol)Boc-Phe-OH和1.49g(3.1mmol)HCl·H-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃得到2.051g(95％)标题化合物，为淡黄色蜡状物。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-11.36$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 58-60℃；ESI-MS(m/z)681[M+H]⁺

6)HCl·H-Phe-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备

按HCl·H-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备方法，由2.05g(3.0mmol)Boc-Phe-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃制得1.850g(99.56％)标题化合物，为深黄色油状物，直接用于下一步反应。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-16.70$ (c＝1，CH₃OH)。ESI-MS(m/z)581[M+H]⁺

7)Boc-Asp(OBzl)-Phe-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备

按Boc-Arg(NO₂)-Gly-OBzl的制备方法，由1.08g(3.3mmol)Boc-Asp(OBzl)-OH和1.85g(3.1mmol)HCl·H-Phe-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃得2.494g(88％)标题化合物，为淡黄色蜡状物。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-32.03$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 89-91℃；ESI-MS(m/z)886[M+H]⁺.

8)HCl·Asp(OBzl)-Phe-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备

按HCl·Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备方法，由2.49g(2.8mmol)Boc-Asp(OBzl)-Phe-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃制得2.25g(97％)标题化合物，为深黄色油状物，直接用于下一步反应。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-1.53$ (c＝1，CH₃OH)；ESI-MS(m/z)：786[M+H]⁺

9)Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备

按Boc-Arg(NO₂)-Gly-OBzl的制备方法，由1.13g(3.0mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly-OH和2.25g(2.8mmol)HCl·Asp(OBzl)-Phe-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃得2.9g(92％)标题化合物，为白色固体。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-5.63$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 128-130℃；ESI-MS(m/z)1143[M+H]⁺

10)Arg-Gly-Asp-Phe-Glu-O(CH₂)₁₃CH₃[RGDFEO(CH₂)₁₃CH₃]的制备

将0.50g(0.4mmol)Boc-Arg(NO₂)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃置于100ml茄形瓶中，用甲醇溶解。加0.10gPd/C(20％)、通H₂(0.02Mba)，室温搅拌至原料点消失。滤除Pd/C、滤液减压浓缩至干，加5ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)溶液，室温搅拌2小时，TLC显示原料点消失，减压浓缩除去乙酸乙酯，残留物反复用少量乙醚进行减压浓缩以除去氯化氢气。最后加少量乙醚将残留物研磨成0.325g(91％)标题化合物，为白色固体粉末。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-34.80$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 145-146℃；ESI-MS(m/z)：818[M+H]⁺

实施例2 RGDSEO(CH₂)₁₃CH₃的制备

1)Boc-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备

按Boc-Arg(NO₂)-Gly-OBzl的制备方法，由1.065g(3.6mmol)Boc-Ser(Bzl)-OH和1.49g(3.1mmol)HCl·H-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃得2.241g(99％)标题化合物，为淡黄色蜡状物。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-21.03$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 40-42℃；ESI-MS(m/z)711[M+H]⁺.

2)HCl·Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备

按HCl·Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备方法，由2.240g(3.1mmol)Boc-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃制得2.030g(99％)标题化合物，为淡黄色油状物，直接用于下一步反应。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-3.66$ (c＝1，CH₃OH)；ESI-MS(m/z)611[M+H]⁺.

3)Boc-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备

按Boc-Arg(NO₂)-Gly-OBzl的制备方法，由1.128g(3.4mmol)Boc-Asp(OBzl)和2.03g(3.3mmol))HCl·Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃得2.612g(85％)标题化合物，为淡黄色蜡状物。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-31.40$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 72-74℃；ESI-MS(m/z)：916[M+H]⁺.

4)HCl·Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备

按HCl·Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备方法，由2.6g(2.8mmol)Boc-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃制得2.35g(97％)标题化合物，为深黄色油状物，直接用于下一步反应。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-1.36$ (c＝1，CH₃OH)；ESI-MS(m/z)816[M+H]⁺.

5)Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备

按Boc-Arg(NO₂)-Gly-OBzl的制备方法，由1.138g(3.0mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly-OH和2.35g(2.8mmol)HCl·Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃得3.0g(92％)标题化合物，为淡黄色蜡状物。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-22.16$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 104-105℃；ESI-MS(m/z)1174[M+H]⁺.

6)Arg-Gly-Asp-Ser-Glu-O(CH₂)₁₃CH₃[RGDSEO(CH₂)₁₃CH₃]的制备

按照Arg-Gly-Asp-Phe-Glu-O(CH₂)₁₃CH₃的制备方法，由0.50g Boc-Arg(NO₂)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃制得0.298g(92.％)标题化合物，为白色固体粉末。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-13.83$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 159-163℃；ESI-MS(m/z)：759[M+H]⁺.

实施例3 RGDVEO(CH₂)₁₃CH₃的制备

1)Boc-Val-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备

按Boc-Arg(NO₂)-Gly-OBzl的制备方法，由0.378g(1.7mmol)Boc-Val和0.779g(1.6mmol)HCl·Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃得0.92g(88％)标题化合物，为淡黄色油状物。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-31.00$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 43-45℃；ESI-MS(m/z)633[M+H]⁺

2)HCl·Val-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备

按HCl·Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备方法，由0.92g(1.4mmol)Boc-Val-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃制得0.80g(97％)标题化合物，为深黄色油状物，直接用于下一步反应。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-2.86$ (c＝1，CH₃OH)；ESI-MS(m/z)533[M+H]⁺

3)Boc-Asp(OBzl)-Val-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备

按Boc-Arg(NO₂)-Gly-OBzl的制备方法，由0.51g(3.0mmol)Boc-Asp(OBzl)和0.8g(3.0mmol)HCl·Val-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃得1.170g(99％)标题化合物，为淡黄色油状物。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-23.43$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 72-74℃；ESI-MS(m/z)838[M+H]⁺

4)HCl·Asp(OBzl)-Val-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备

按HCl·Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备方法，由1.17g(1.3mmol)Boc-Asp(OBzl)-Val-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃制得1.07g(99％)标题化合物，为淡黄色油状物，直接用于下一步反应。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-5.36$ (c＝1，CH₃OH)；ESI-MS(m/z)738[M+H]⁺

5)Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备

按Boc-Arg(NO₂)-Gly-OBzl的制备方法，由0.573g(1.5mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly和1.07g(1.4mmol)HCl·Asp(OBzl)-Val-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃得1.244g(78％)标题化合物，为淡黄色固体。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-4.16$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 119-122℃；ESI-MS(m/z)1096[M+H]⁺

6)Arg-Gly-Asp-Val-Glu-O(CH₂)₁₃CH₃[RGDVEO(CH₂)₁₃CH]的制备

按照Arg-Gly-Asp-Phe-Glu-O(CH₂)₁₃CH₃的制备方法，由0.40g(0.36mmol)Boc-Arg(NO₂)-Gly-Asp(OBzl)-Val-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃ CH₃制得0.253g(90％)标题化合物，为白色固体粉末。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-21.00$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 183-185℃；ESI-MS(m/z)771[M+H]⁺

实施例4 RGDFEO(CH₂)₁₁CH₃的制备

1)Boc-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃的制备

按Boc-Arg(NO₂)-Gly-OBzl的制备方法，由7.60g(22.5mmol)Boc-Glu(OBzl)和4.0g(21.5mmol)月桂醇(十二醇)得9.517g(87％)标题化合物，为白色蜡状物。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-10.56$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 27-28℃；ESI-MS(m/z)506[M+H]⁺

2)HCl·Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃的制备

按HCl·Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备方法，由2.3g(4.5mmol)Boc-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃制得2.01g(100％)标题化合物，为淡黄色蜡状物，直接用于下一步反应。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}$ $=-14.56$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 39-40℃；ESI-MS(m/z)406[M+H]⁺

3)Boc-Phe-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃的制备

按Boc-Arg(NO₂)-Gly-OBzl的制备方法，由1.22g(4.6mmol)Boc-Phe和2.0g(4.5mmol)HCl·Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃得2.95g(100％)标题化合物，为淡黄色蜡状物。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-3.90$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 59-62℃；ESI-MS(m/z)653[M+H]⁺

4)HCl·Phe-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃的制备

按HCl·Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备方法，由2.95g(4.5mmol)Boc-Phe-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃制得2.66g(100％)标题化合物，为淡黄色油状物，直接用于下一步反应。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-14.66$ (c＝1，CH₃OH)；ESI-MS(m/z)553[M+H]⁺

5)Boc-Asp(OBzl)-Phe-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃的制备

按Boc-Arg(NO₂)-Gly-OBzl的制备方法，由1.34g(4.1mmol)Boc-Asp(OBzl)和2.39g(4.0mmol)HCl·Phe-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃得3.45g(99％)标题化合物，为淡黄色蜡状物。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-23.06$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 94-96℃；ESI-MS(m/z)858[M+H]⁺

6)HCl·Asp(OBzl)-Phe-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃的制备

按HCl·Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备方法，由3.48g(4.0mmol)Boc-Asp(OBzl)-Phe-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃制得0.712g(95％)标题化合物，为淡黄色油状物，直接用于下一步反应。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-1.06$ (c＝1，CH₃OH)；ESI-MS(m/z)：758[M+H]⁺

7)Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃的制备

按Boc-Arg(NO₂)-Gly-OBzl的制备方法，由1.54g(4.0mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly和3.2g(4.0mmol)HCl·Asp(OBzl)-Phe-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃得4.40g(97％)标题化合物，为淡黄色蜡状物。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-9.93$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 128-130℃；ESI-MS(m/z)1116[M+H]⁺

8)Arg-Gly-Asp-Phe-Glu-O(CH₂)₁₁CH₃[RGDFEO(CH₂)₁₁CH₃]的制备

按照Arg-Gly-Asp-Phe-Glu-O(CH₂)₁₃CH₃的制备方法，由0.5g(0.44mmol)Boc-Arg(NO₂)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃制得0.378g(93％)标题化合物，为白色固体粉末。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-15.83$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 140-142℃；ESI-MS(m/z)791[M+H]⁺

实施例5 RGDSEO(CH₂)₁₁CH₃的制备

1)Boc-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃的制备

按Boc-Arg(NO₂)-Gly-OBzl的制备方法，由1.36g(4.6mmol)Boc-Ser(Bzl)和2.0g(4.5mmol)HCl·Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃得3.0g(97％)标题化合物，为淡黄色蜡状物。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-21.83$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 40-41℃；ESI-MS(m/z)683[M+H]⁺

2)HCl·Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃的制备

按HCl·H-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备方法，由3.0g(4.3mmol)Boc-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃制得2.60g(94％)标题化合物，为淡黄色油状物，直接用于下一步反应。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-13.90$ (c＝1，CH₃OH)；ESI-MS(m/z)583[M+H]⁺

3)Boc-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃的制备

按Boc-Arg(NO₂)-Gly-OBzl的制备方法，由1.34g(4.1mmol)Boc-Asp(OBzl)和2.51g(4.0mmol)HCl·Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃得3.5g(97％)标题化合物，为淡黄色蜡状物。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-5.73$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 89-91℃；ESI-MS(m/z)888[M+H]⁺

4)HCl·Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃的制备

按HCl·Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备方法，由3.5g(3.9mmol)Boc-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃制得3.20g(96％)标题化合物，为淡黄色油状物，直接用于下一步反应。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-8.90$ (c＝1，CH₃OH)；ESI-MS(m/z)788[M+H]⁺

5)Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃的制备

按Boc-Arg(NO₂)-Gly-OBzl的制备方法，由1.54g(4.0mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly和3.30g(4.0mmol)HCl·Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃得4.3g(93％)标题化合物，为淡黄色蜡状物。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-14.73$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 102-104℃；ESI-MS(m/z)1146[M+H]⁺

6)Arg-Gly-Asp-Ser-Glu-O(CH₂)₁₁CH₃[RGDSEO(CH₂)₁₁CH₃]的制备

按照Arg-Gly-Asp-Phe-Glu-O(CH₂)₁₃CH₃的制备方法，由0.5g(0.43mmol)Boc-Arg(NO₂)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁ CH₃制得0.291g(91％)标题化合物，为白色固体粉末。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-15.50$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 139-140℃；ESI-MS(m/z)731[M+H]⁺

实施例6 RGDVEO(CH₂)₁₁CH₃的制备

1)Boc-Val-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃的制备

按Boc-Arg(NO₂)-Gly-OBzl的制备方法，由1.0g(4.6mmol)Boc-Val和2.0g(4.5mmol)HCl·Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃得2.73g(100％)标题化合物，为淡黄色蜡状物。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-13.96$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 40-42℃；ESI-MS(m/z)：605[M+H]⁺

2)HCl·Val-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃的制备

按HCl.Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备方法，由2.73g(4.5mmol)Boc-Val-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃制得2.40g(98％)标题化合物，为淡黄色油状物，直接用于下一步反应。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-4.16$ (c＝1，CH₃OH)ESI-MS(m/z)：505[M+H]⁺

3)Boc-Asp(OBzl)-Val-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃的制备

按Boc-Arg(NO₂)-Gly-OBzl的制备方法，由1.34g(4.1mmol)Boc-Asp(OBzl)和2.2g(4.0mmol)HCl·Val-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃得3.10g(94％)标题化合物，为淡黄色蜡状物。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-24.73$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 95-96℃；ESI-MS(m/z)810[M+H]⁺

4)HCl·Asp(OBzl)-Val-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃的制备

按HCl·Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备方法，由3.10g(3.8mmol)Boc-Asp(OBzl)-Val-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃制得2.80g(98％)标题化合物，为淡黄色油状物，直接用于下一步反应。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-27.76$ (c＝1，CH₃OH)；ESI-MS(m/z)710[M+H]⁺

5)Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃的制备

按Boc-Arg(NO₂)-Gly-OBzl的制备方法，由1.54g(4.0mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly和2.80g(3.7mmol)HCl·Asp(OBzl)-Val-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁CH₃得3.90g(97％)标题化合物，为淡黄色蜡状物。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-29.06$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 121-122℃；ESI-MS(m/z)：1068[M+H]⁺

6)Arg-Gly-Asp-Val-Glu-O(CH₂)₁₁CH₃[RGDVEO(CH₂)₁₁CH₃]的制备

按照Arg-Gly-Asp-Phe-Glu-O(CH₂)₁₃CH₃的制备方法，由0.5g(0.46mmol)Boc-Arg(NO₂)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₁ CH₃制得0.313g(90％)标题化合物，为白色固体粉末。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-31.23$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 180-182℃；ESI-MS(m/z)743[M+H]⁺

实施例7 RGDFEO(CH₂)₉CH₃的制备

1)Boc-Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃的制备

按Boc-Arg(NO₂)-Gly-OBzl的制备方法，由9.0g(26mmol)Boc-Glu(OBzl)和4.34g(27.4mmol)月桂醇(十二醇)得9.30g(73％)标题化合物，为白色蜡状物。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-33.60$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 28-29℃；ESI-MS(m/z)478[M+H]⁺

2)HCl·Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃的制备

按HCl·Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备方法，由1.6g(3.3mmol)Boc-Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃制得1.38g(99％)标题化合物，为透明油状物，直接用于下一步反应。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-5.03$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 47-49℃；ESI-MS(m/z)378[M+H]⁺.

3)Boc-Phe-Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃的制备

按Boc-Arg(NO₂)-Gly-OBzl的制备方法，由0.902g(3.4mmol)Boc-Phe和1.38g(3.3mmol)HCl·Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃得1.872g(90％)标题化合物，为淡黄色蜡状物。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-22.53$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 69-70℃；ESI-MS(m/z)625[M+H]⁺.

4)HCl·Phe-Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃的制备

按HCl·Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备方法，由1.872g(3.0mmol)Boc-Phe-Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃制得1.681g(100％)标题化合物，为淡黄色油状物，直接用于下一步反应。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-10.23$ (c＝1，CH₃OH)ESI-MS(m/z)525[M+H]⁺.

5)Boc-Asp(OBzl)-Phe-Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃的制备

按Boc-Arg(NO₂)-Gly-OBzl的制备方法，由0.988g(3.0mmol)Boc-Asp(OBzl)和1.681g(2.9mmol)HCl·Phe-Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃得2.23g(90％)标题化合物，为淡黄色蜡状物。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-26.93$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 96-97℃；ESI-MS(m/z)830[M+H]⁺.

6)HCl·Asp(OBzl)-Phe-Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃的制备

按HCl·Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备方法，由2.23g(2.6mmol)Boc-Asp(OBzl)-Phe-Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃制得2.05g(100％)标题化合物，为淡黄色油状物，直接用于下一步反应。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-0.83$ (c＝1，CH₃OH)；ESI-MS(m/z)730[M+H]⁺

7)Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃的制备

按Boc-Arg(NO₂)-Gly-OBzl的制备方法，由1.03g(2.7mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly-OH和2.05g(2.6mmol)HCl·Asp(OBzl)-Phe-Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃得2.75g(94％)标题化合物，为淡黄色蜡状物。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-23.00$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 129-130℃；ESI-MS(m/z)1089[M+H]⁺.

8)Arg-Gly-Asp-Phe-Glu-O(CH₂)₉CH₃[RGDFEO(CH₂)₉CH₃]的制备

按照Arg-Gly-Asp-Phe-Glu-O(CH₂)₁₃CH₃的制备方法，由0.5g(0.45mmol)Boc-Arg(NO₂)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-Glu(OBzl)-O(CH₂)₉ CH₃制得0.315g(89％)标题化合物，为白色固体粉末。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-26.33$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 126-128℃；ESI-MS(m/z)763[M+H]⁺.

实施例8 RGDSEO(CH₂)₉CH₃的制备

1)Boc-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃的制备

按Boc-Arg(NO₂)-Gly-OBzl的制备方法，由1.0g(3.3mmol)Boc-Ser(Bzl)和1.38g(3.3mmol)HCl·Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃得1.962g(90％)标题化合物，为淡黄色油状物。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-59.60$ (c＝1，CH₃OH)；ESI-MS(m/z)655[M+H]⁺.

2)HCl·Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃的制备

按HCl·Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备方法，由1.962g(3.0mmol)Boc-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃制得1.771g(100％)标题化合物，为淡黄色油状物，直接用于下一步反应。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-2.96$ (c＝1，CH₃OH)；ESI-MS(m/z)555[M+H]⁺.

3)Boc-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃的制备

按Boc-Arg(NO₂)-Gly-OBzl的制备方法，由0.988g(3.0mmol)Boc-Asp(OBzl)和1.771g(2.9mmol)HCl·Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃得2.32g(90％)标题化合物，为淡黄色蜡状物。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-24.16$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 84-85℃；ESI-MS(m/z)860[M+H]⁺.

4)HCl·Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃的制备

按HCl·Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备方法，由2.32g(2.7mmol)Boc-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃制得2.14g(100％)标题化合物，为淡黄色油状物，直接用于下一步反应。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-5.60$ (c＝1，CH₃OH)；ESI-MS(m/z)760[M+H]⁺.

5)Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃的制备

按Boc-Arg(NO₂)-Gly-OBzl的制备方法，由1.03g(2.7mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly和2.14g(2.6mmol)HCl·Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃得2.87g(95％)标题化合物，为淡黄色蜡状物。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-4.16$ (c＝1，CH₃OH)；Mp102-103℃；ESI-MS(m/z)1118[M+H]⁺

6)Arg-Gly-Asp-Ser-Glu-O(CH₂)₉CH₃[RGDSEO(CH₂)₉CH₃]的制备

按照Arg-Gly-Asp-Phe-Glu-O(CH₂)₁₃CH₃的制备方法，由0.5g(0.44mmol)Boc-Arg(NO₂)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-O(CH₂)₉ CH₃制得0.343g(91％)标题化合物，为白色固体粉末。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-22.13$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 144-145℃；ESI-MS(m/z)：703[M+H]⁺

实施例9 RGDVEO(CH₂)₉CH₃的制备

1)Boc-Val-Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃的制备

按Boc-Arg(NO₂)-Gly-OBzl的制备方法，由0.738(3.4mmol)Boc-Val和1.38g(3.3mmol)HCl·Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃得1.729g(90％)标题化合物，为淡黄色蜡状物。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-1.66$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 48-50℃；ESI-MS(m/z)555[M+H]⁺.

2)HCl·Val-Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃的制备

按HCl·Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备方法，由1.729g(3.0mmol)Boc-Val-Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃制得1.538g(100％)标题化合物，为淡黄色油状物，直接用于下一步反应。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-4.23$ (c＝1，CH₃OH)；ESI-MS(m/z)477[M+H]⁺.

3)Boc-Asp(OBzl)-Val-Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃的制备

按Boc-Arg(NO₂)-Gly-OBzl的制备方法，由0.988g(3.0mmol)Boc-Asp(OBzl)-OH和1.538g(3.0mmol)HCl·H-Val-Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃得2.10g(90％)标题化合物，为淡黄色蜡状物。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-14.80$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 97-98℃；ESI-MS(m/z)782[M+H]⁺

4)HCl·Asp(OBzl)-Val-Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃的制备

按HCl·Glu(OBzl)-O(CH₂)₁₃CH₃的制备方法，由2.10g(2.6mmol)Boc-Asp(OBzl)-Val-Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃制得1.92g(100％)标题化合物，为淡黄色油状物，直接用于下一步反应。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-28.43$ (c＝1，CH₃OH)；ESI-MS(m/z)682[M+H]⁺.

5)Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃的制备

按Boc-Arg(NO₂)-Gly-OBzl的制备方法，由1.03g(2.7mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly和1.92g(2.6mmol)HCl·Asp(OBzl)-Val-Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃得2.49g(89％)标题化合物，为淡黄色蜡状物。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-23.36$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 132-134℃；ESI-MS(m/z)：1040[M+H]⁺.

6)Arg-Gly-Asp-Val-Glu-O(CH₂)₉CH₃[RGDVEO(CH₂)₉CH₃]的制备

按照Arg-Gly-Asp-Phe-Glu-O(CH₂)₁₃CH₃的制备方法，由0.5g(0.48mmol)Boc-Arg(NO₂)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-O(CH₂)₉CH₃制得0.32g(93％)标题化合物，为白色固体粉末。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=-32.43$ (c＝1，CH₃OH)；Mp 185-187℃；ESI-MS(m/z)715[M+H]⁺.

试验例1本发明化合物静脉给药的抗血栓活性试验

1)给药剂量

阿斯匹林和本发明化合物在给药前分别配制成生理盐水溶液。分为三组，空白对照组、阿斯匹林组和试验组，其中，空白对照组静脉给予生理盐水(剂量为3ml/kg)、阿斯匹林组静脉给予阿斯匹林的生理盐水溶液(剂量为12mg/kg)、试验组静脉给予本发明化合物(实施例1-9所制备的化合物)的生理盐水溶液(剂量为10nmol/kg)。

2)大鼠手术与器械

SD大鼠(雄性，180～210g)按1.2g/kg剂量腹腔注射乌拉坦溶液进行麻醉。麻醉大鼠仰卧位固定，分离右颈总动脉，左侧静脉端，各自于近心端夹动脉夹，近心端和远心端分别穿入手术线，将远心端的手术线结扎，准备插管。

3)插管

插管为硅烷化过的聚乙烯胶管，分三段，中段为聚乙烯胶管，长60.0mm，内径3.5mm；两端为相同的聚乙烯管，管长100.0mm，内径1.0mm，外径2.0mm该管的一端拉成尖管(用于插入大鼠颈动脉或静脉)，外径为1.0mm。将编好号的EP管中分别装入6cm长的黑色手术线，称重；然后取出丝线，按照编号放入准备好的插管的中段较粗的插管中。

用注射器通过尖管端将管中注满肝素生理盐水溶液(50IU/kg)，然后将插管的静脉端插入大鼠左侧颈静脉，将计算量的肝素缓缓注入大鼠体内，然后注入计算量的本发明药物。夹闭右侧颈动脉，动脉远心端结扎，将插管的动脉端插入分离好的大鼠右颈动脉，打开动脉夹，使血液开始循环。并同时开始计时。此过程中插管中央的粗管中的丝线上会因为血液循环而产生血栓。

4)血栓称重

计时开始15分钟后，剪断动静脉插管，停止循环，用眼科镊小心取出丝线，在滤纸上轻轻蘸掉血滴，放入事先称重好的EP管中，精确称重并记录。计算出血栓的湿重。每个药品重复10次给药。统计各组的血栓湿重(X±SD)，并做t检验。

5)结果

结果列入表1。结果表明，在10nmol/kg剂量下本发明化合物有很好的抗血栓活性。可见，本发明化合物都是优秀的抗血栓剂。

表1本发明化合物经静脉给药的抗血栓活性

化合物	血栓湿重( ±SD mg)
		NS	42.23±6.50
阿司匹林	21.33±6.19a
		RGDFE O(CH2)9CH3	28.06±6.30a
RGDSE O(CH2)9CH3	28.98±6.03a
		RGDVEO(CH2)9CH3	25.30±6.14a
RGDFEO(CH2)11CH3	28.34±8.69a
		RGDSE O(CH2)11CH3	29.21±6.46a
RGDVE O(CH2)11CH3	28.35±7.33a
		RGDFE O(CH2)13CH3	28.01±9.87a
RGDSE O(CH2)13CH3	27.65±8.21a
		RGDVE O(CH2)13CH3	26.97±4.41a

n＝10；NS＝生理盐水；a与生理盐水组相比，P＜0.001；

试验例2本发明化合物在水相中组装成为纳米球试验

1)本发明9种阳离子药质体(实施例1-9所制备的化合物)按照10^-5mol/l的浓度配置成为水溶液，在激光散射纳米粒度仪(ZetaPlus JEM-1230)上连续测定8天，观察粒径大小及其稳定性，结果见表2和表3。得到的数据表明，本发明9种阳离子药质体在水相中可以自组装成为稳定的纳米球，因而是优秀的微乳和脂质体药物的制备材料。

表2本发明的9种阳离子药质体在水中自组装成为纳米球的粒径

化合物	尺寸(nm)
		RGDFE O(CH2)9CH3	249
RGDSE O(CH2)9CH3	165
		RGDVEO(CH2)9CH3	238
RGDFE O(CH2)11CH3	123
		RGDSE O(CH2)11CH3	191
RGDVE O(CH2)11CH3	212
		RGDFE O(CH2)13CH3	178
RGDSE O(CH2)13CH3	191
		RGDVE O(CH2)13CH3	150

表3本发明的9种阳离子药质体在水中自组装成为纳米球的粒径稳定性

2)按照透射电镜的测定要求，配制本发明9种阳离子药质体(实施例1-9所制备)的水溶液，置于铜网上挥发干后测定本发明化合物在水相组装的纳米球的图。结果表明，由本发明9种阳离子药质体组装的纳米球在透射电镜下可以看到均匀的粒状态。这里给出的是代表性化合物RGDFEO(CH₂)₁₃CH₃的透射电镜图(图2)。

3)按照扫描电镜的测定要求，配制本发明9种阳离子药质体(实施例1-9所制备)的水溶液，冷冻干燥后测定本发明的化合物的微观结构和粒径。结果表明，由本发明9种阳离子药质体组装的纳米球在扫描电镜下可以看到均匀的粒状态。这里给出的是代表性化合物RGDFEO(CH₂)₁₃CH₃的扫描电镜图(图3)。

Claims (5)

1.饱和脂肪链醇RGD五肽酯化合物，其结构式为通式I所示：

Arg-Gly-Asp-AA-Glu-O(CH₂)nCH₃通式I

其中，n为9、11或13；AA选自苯丙氨酸、丝氨酸或缬氨酸。

2.一种制备权利要求1所述的饱和脂肪链醇和RGD五肽的酯的方法，包括：

(1)分别合成用保护基保护的RGDSE、RGDVE、RGDFE；

(2)将CH₃(CH₂)₈CH₂OH、CH₃(CH₂)₁₀CH₂OH或CH₃(CH₂)₁₂CH₂OH分别与保护基保护的RGDSE、RGDVE或RGDFE的羧端偶联，脱去保护基，即得。

3.一种药物组合物，其特征在于：由治疗或预防上有效量的权利要求1所述的饱和脂肪链醇RGD五肽酯化合物和药学上可接受的载体或辅料所组成。

4.权利要求1所述的饱和脂肪链醇RGD五肽酯化合物在制备抗血栓药物中的用途。

5.权利要求1所述的饱和脂肪链醇RGD五肽酯化合物在制备微乳或脂质体药物载体的制剂材料中的用途。

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