CN101890018B - 一种酪氨酸蛋白激酶抑制剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种酪氨酸蛋白激酶抑制剂，其中，该酪氨酸蛋白激酶抑制剂为由通式(1)表示的化合物，其中，R为由具有配位功能的基团取代的芳氨基、六元芳杂环氨基、五元杂环氨基、稠杂环氨基中的一种或几种。本发明提供的酪氨酸蛋白激酶抑制剂具有较高的选择性、较低的毒副作用和较强的水溶性，此外，该酪氨酸蛋白激酶抑制剂还能够用于取代细胞毒性有机金属钌配合物中的一个或多个配体，所制得的配合物既能作用于蛋白激酶(或蛋白磷酸酶)和也能作用于DNA的多靶点组合分子抗肿瘤化合物。本发明提供的蛋白激酶抑制剂还有助于降低肿瘤细胞对药物产生抗药性的可能性。
Description
技术领域
本发明涉及一种酪氨酸蛋白激酶抑制剂及其制备方法。
背景技术
临床使用的抗肿瘤化学药物包括细胞毒性药物和分子靶向药物两大类。细胞毒性抗肿瘤药物(如顺铂等)都是非特异性的，它们在抑制和杀伤异常增殖的肿瘤细胞的同时，对其它增殖较快的正常细胞也同样产生抑制和杀伤作用，由此产生的毒副作用以及肿瘤细胞对药物先天或获得性的抗药性等问题一直是制约细胞毒性化疗药物临床应用的瓶颈。
近十年来，针对肿瘤细胞特异的增殖、分化和凋亡机制，设计和合成高选择性的分子靶向治疗药物得到迅速发展。酪氨酸蛋白激酶抑制剂(TKI)imatinib(GleevecTM)、gefitinib(IressaTM)和erlotinib等分子靶向药物相继进入临床使用，使蛋白激酶成为后基因时代最重要的药物作用靶点之一。但是，许多对肿瘤细胞异常高表达的蛋白激酶有很好抑制活性的小分子化合物，由于水溶性差或毒副作用大而不能在临床被应用。另一方面，尽管第一代TKI抗肿瘤治疗药物取得了极大的成功，但在临床应用中，绝大部分对第一代TKI药物敏感的癌症病人会由于编码靶酶的基因突变而产生抗药性。因而，能克服第一代TKI治疗药物获得性抗药性的新一代TKI抗肿瘤药物，如Dasatinib和Sutent等相继问世。Sutent是一种多靶点的酪氨酸激酶抑制剂，能有效抑制血管内皮细胞生长因子受体(VEGFR)、血小板衍生生长因子受体(PDGFR)和KIT的活化，对由于基因突变导致Imitinib抗药性的胃肠基质肿瘤(GIST)有很好的活性。另外，一系列被称为Combi-molecule(组合分子)的喹唑啉衍生物也得到药物化学家们的关注。喹唑啉衍生物含有丙烯酰或三氮烯类取代基，能与位于表皮生长因子受体(EGFR)ATP结合域内的半胱氨酸残基发生烷基化反应，不可逆地抑制EGFR的自磷酸化。与此同时，细胞内水解产生的三氮烯组分还能与DNA反应，烷基化DNA，进一步加强TKI抗肿瘤药物的活性，对高表达EGFR的NIH3T3HER14细胞的增殖产生显著抑制作用。但是，这一类组合分子化合物中细胞毒性(烷基化)单元的毒副作用使它们的研究仍然停留在实验室研究阶段。
发明内容
本发明的目的是克服现有的酪氨酸蛋白激酶抑制剂体系不含有能与细胞毒性有机金属类配合物配位的系列，且细胞毒性药物毒副作用较大、水溶性较差的缺陷而提供一种能与细胞毒性有机金属钌配合物配位、细胞毒性药物毒副作用小、水溶性好的酪氨酸蛋白激酶抑制剂。
本发明提供了一种酪氨酸蛋白激酶抑制剂，其中，该酪氨酸蛋白激酶抑制剂为由通式(1)表示的化合物：
其中，R为由具有配位功能的基团取代的芳氨基、六元芳杂环氨基、五元杂环氨基、稠杂环氨基中的一种或几种。
本发明还提供了上述酪氨酸蛋白激酶抑制剂的制备方法，其中，该方法包括将第一反应物与第二反应物在有机溶剂中接触，所述第一反应物为4-卤-6，7-二甲氧基喹唑啉，所述第二反应物为由具有配位功能的基团取代的芳香胺、氨基吡啶、氨基嘧啶、氨基噻唑和氨基稠杂环化合物中的一种或几种，接触反应的条件使得第一反应物中4位的卤素与第二反应物中的氨基发生缩合反应。
本发明提供的酪氨酸蛋白激酶抑制剂具有较高的选择性、较低的毒副作用和较强的水溶性，此外，该酪氨酸蛋白激酶抑制剂还能够用于取代细胞毒性有机金属钌配合物中的一个或多个配体，所制得的配合物既能作用于蛋白激酶(或蛋白磷酸酶)和也能作用于DNA的多靶点组合分子抗肿瘤化合物。本发明提供的蛋白激酶抑制剂还有助于降低肿瘤细胞对药物产生抗药性的可能性。
本发明提供的蛋白激酶抑制剂由于含有潜在金属配位位点，因此能够用于合成含金属配位中心的组合分子抗肿瘤化合物。与此同时，酶联免疫吸附分析(ELISA)测定结果表明，所合成的化合物对酪氨酸蛋白激酶EGFR有很好的抑制活性。
附图说明
图1-5为本发明提供的酪氨酸蛋白激酶抑制剂的X射线衍射晶体结构图。
具体实施方式
根据本发明提供的酪氨蛋白酸激酶抑制剂，其中，该酪氨酸蛋白激酶抑制剂为由通式(1)表示的化合物：
其中，R为由具有配位功能的基团取代的芳氨基、六元芳杂环氨基、五元杂环氨基、稠杂环氨基中的一种或几种。
按照本发明，所述具有配位功能的基团可以是各种能与金属特别是钌形成配位体的基团。所述具有配位功能的基团取代的芳氨基可以为下述通式(2)所示：
其中，在通式(2)中，R1、R2、R3、R4和R5各自独立地为氢原子、氟原子、氯原子、氨基、苯基、氨苯基、苯氨基、-SCH3、-SH、-COOH、碳原子数为1-3的烷基中的一种，且R1-R5中至少有一个基团选自-SCH3、-SH、-COOH、苯基、氨基、氨苯基和苯氨基中的一种；优选情况下，所述具有配位功能的基团取代的芳氨基可以为由如下通式(14)-(17)所示基团中的一种：
其中，在通式(14)中，R15和R16可以各自独立地为氢原子、氟原子、氯原子、氨基、苯基、氨苯基、苯氨基、-SCH3、-SH、-COOH、碳原子数为1-3的烷基中的一种，且R15和R16中至少有一个基团选自-SCH3、-SH、-COOH、苯基、氨基、氨苯基和苯氨基中的一种；更优选情况下，R15为F、H、-NH2、苯氨基、氨苯基和碳原子数为1-3的烷基中的一种，R16为Cl、H、-SCH3、-SH和-COOH中的一种。
按照本发明，所述具有配位功能的基团取代的芳氨基还可以为由结构式(13)所示的结构：
按照本发明，所述六元芳杂环氨基可以为如下通式(3)所示：
其中，在通式(3)中，R6、R7各自独立地为碳原子或氮原子，且R6和R7中的至少一个为氮原子；R8、R9和R10各自独立地为氢原子、氨基、碳原子数为1-3的烷基中的一种，且R8、R9和R10中的至少一个基团为氨基；优选情况下，所述六元芳杂环氨基可以由下述通式(18)所示：
其中，氨基的位置可以位于吡啶氮的对位、间位或邻位，如下述结构式所示：
按照本发明，所述五元杂环氨基可以为如下通式(4)所示：
其中，在通式(4)中，R11、R12和R13各自独立地选自氢原子、碳原子数为1-3的烷基、氨基中的一种，且R11、R12和R13中的至少一个基团为氨基；优选情况下，所述五元杂环氨基可以为由下述结构式所示的五元杂环氨基：
按照本发明，所述稠杂环氨基可以由下述通式(5)-(12)所示：
其中，通式(8)-(9)中的R14可以为碳原子数为1-3的烷基、2-吡啶基或亚甲基-2-吡啶基。
根据本发明，所述酪氨酸蛋白激酶抑制剂的制备方法包括将第一反应物与第二反应物在有机溶剂中接触，所述第一反应物为4-卤-6，7-二甲氧基喹唑啉，所述第二反应物为由具有配位功能的基团取代的芳香胺、氨基吡啶、氨基嘧啶、氨基噻唑和氨基稠杂环化合物中的一种或几种，接触反应的条件使得第一反应物中4位的卤素与第二反应物中的氨基发生缩合反应。其中，所述4-卤-6，7-二甲氧基喹唑啉优选为4-氯-6，7-二甲氧基喹唑啉和/或4-溴-6，7-二甲氧基喹唑啉。
所述第一反应物与第二反应物的摩尔比可以为1∶(1-3)，优选为1∶(1-1.5)；所述有机溶剂可以选自异丙醇、乙醇和甲苯中的一种或几种，以第一反应物与第二反应物的总量为100毫克为基准，所述有机溶剂的用量可以为20-50毫升，优选为20-40毫升。
按照本发明提供的方法，其中，所述由具有配位功能的基团取代的芳香胺为通式(19)所示或者为由结构式(31)所示，所述氨基吡啶为通式(20)所示，所述氨基嘧啶为通式(21)所示，所述氨基噻唑为通式(22)所示，所述氨基稠杂环化合物为通式(23)-(30)所示：
其中，在通式(19)中，R17、R18、R19、R20和R21各自独立地为氢原子、氟原子、氯原子、氨基、苯基、氨基苯、苯氨基、-SCH3、-SH、-COOH和碳原子数为1-3的烷基中的一种，且R17-R21中至少有一个基团选自-SCH3、-SH、-COOH、苯基、氨基、氨基苯和苯氨基中的一种；在通式(20)中，R22、R23、R24、R25和R26各自独立地为氢原子、氨基、碳原子数为1-3的烷基中的一种，且R22、R23、R24、R25和R26中的至少一个基团为氨基；在通式(21)中，R27、R28、R29和R30各自独立地选自氢原子、碳原子数为1-3的烷基、氨基中的一种，且R27、R28、R29和R30中的至少一个基团为氨基；在通式(22)中，R31、R32和R33各自独立地选自氢原子、碳原子数为1-3的烷基、氨基中的一种，且R31、R32和R33中的至少一个基团为氨基；在通式(26)-(27)中，R36为碳原子数为1-3的烷基、2-吡啶基或亚甲基-2-吡啶基。
优选情况下，所述第二反应物中通式(19)所述的化合物优选为如通式(32)至(35)所示化合物中的一种或几种；所述第二反应物中通式(20)所述的化合物优选为如通式(36)所示化合物：
其中，通式(32)中的R34为F、H、NH2、苯氨基、氨苯基和碳原子数为1-3的烷基中的一种，R35为Cl、H、-SCH3、-SH和-COOH中的一种；且R34和R35中至少有一个基团选自-SCH3、-SH、-COOH、-NH2、氨苯基和苯氨基中的一种。
按照本发明，所述第一反应物和第二反应物均可以商购得到，也可以按照本各种常规的制备方法制备得到。
按照本发明，当所述第二反应物为由通式(23)-(25)所述的稠杂环化合物时，所述反应还优选在催化剂的存在下进行，所述催化剂可以选自Pd2(dba)3(三(二亚苄基丙酮)二钯(O))、三叔丁基磷((t-Bu)3P)和叔丁醇钠(t-BuONa)中的一种或几种；当以所述稠杂环胺的摩尔数为1时，所述催化剂的用量可以为(0.01-0.015)∶(0.05-0.1)∶(2-4)。
例如，由通式(26)-(27)表示的化合物的制备方法可以包括：
(1)将硝基取代的1，2-二氨基苯与碳原子数为1-3的饱和脂肪酸、2-吡啶基甲酸和2-吡啶基乙酸中的一种在盐酸水溶液、磷酸和多聚磷酸中的一种或几种溶液中，在回流条件下，回流3-5小时，冷却，并调节反应得到的混合物的pH值为9-10，过滤，洗涤后重结晶得到硝基取代的苯并咪唑；所述硝基取代的1，2-二氨基苯与碳原子数为1-3的饱和脂肪酸、2-吡啶基甲酸和2吡啶基乙酸中的一种的摩尔比可以为1∶1-1∶3，以1克硝基取代1，2-二氨基苯的量为基准，所述酸或酸的水溶液的体积为8-20毫升，盐酸水溶液的浓度一般为5摩尔/升的盐酸水溶液。
(2)在贵金属催化剂的存在下，将步骤(1)得到的硝基取代的苯并咪唑与水合肼在有机溶剂中接触，然后冷却，除去溶剂，过滤，洗涤，得到氨基取代的苯并咪唑；所述接触的条件包括，接触的时间为1-5小时，接触的温度为60-80℃，以0.1克所述硝基取代的苯并咪唑的量计，水合肼的用量为0.3-0.5毫升，催化剂的用量为0.1-0.5克，所述有机溶剂可以为乙醇，有机溶剂的用量为5-15毫升，所述贵金属催化剂通常为钯/碳催化剂。
在步骤(1)中，所述调节反应得到的混合物的pH值的方法可以为各种常规的方法，例如，采用各种碱性溶液调节pH值，如氢氧化钠或氢氧化钾溶液等；所述洗涤的方法可以采用常规的水洗的方法，洗涤的次数使无氢氧根离子被检出即可；所述重结晶的方法可以为各种常规的方法，例如，将反应产物溶于水和乙醇的混合溶液中，蒸发，析出，而进行重结晶。
在步骤(2)中，所述除去溶剂的方法可以采用常规的方法，例如蒸发的方法；所述洗涤的方法可以采用反应用溶剂进行洗涤，以除去未反应的原料，例如，乙醇和/或乙醚。
具体而言，如果反应产物为由通式(26)所述的化合物，则反应原料为3-硝基-1，2-二氨基苯；如果反应产物为由通式(27)所述的化合物，则反应原料为4-硝基-1，2-二氨基苯。
例如，由通式(28)-(30)所示的化合物的制备方法可以包括：在贵金属催化剂的存在下，将硝基取代的-8-羟基喹啉与水合肼在有机溶剂中接触，过滤，除去溶剂，洗涤并干燥；所述接触的条件包括接触的温度为80-85℃，接触的时间为2-5小时；以每克硝基取代的-8-羟基喹啉的重量计，水合肼的用量可以为0.5-1毫升，催化剂的用量可以为0.1-0.3克，溶剂的用量可以为30-50毫升。
所述有机溶剂可以选自异丙醇、丙酮和乙醇中的一种或几种。
所述催化剂可以为各种贵金属催化剂，例如，钯/碳催化剂。
所述除去溶剂的方法可以采用各种方法，例如减压蒸馏的方法。
所述洗涤的方法可以采用各种常规的方法，例如用异丙醇和/或乙醚洗涤，以除去部分未反应的原料。
所述干燥的方法和条件为本领域技术人员所公知，例如，所述干燥的温度可以为40-80℃，优选为60-70℃；干燥的时间可以为2-12小时，优选为5-8小时。
具体而言，如果反应产物为由通式(28)所述的化合物，则反应原料为5-硝基-8-羟基喹啉；如果反应产物为由通式(29)所述的化合物，则反应原料为6-硝基-8-羟基喹啉；反应产物为由通式(30)所述的化合物，则反应原料为7-硝基-8-羟基喹啉。
按照本发明，所述R为通式(13)所述基团的酪氨酸蛋白激酶抑制剂的制备方法优选为包括下述步骤的方法：
(1)将4-卤-6，7-二甲氧基喹唑啉与1，4-苯二胺在第一有机溶剂中接触，过滤，得到第一反应物；接触的条件包括接触的温度为70-90℃，接触的时间为2-5小时；所述4-卤-6，7-二甲氧基喹唑啉与1，4-苯二胺的摩尔比为1∶1-1.2；所述第一有机溶剂选自异丙醇、丙酮和乙醇中的一种或几种，以100毫克所述反应物的总重量为基准，所述溶剂的用量为20-50毫升；
(2)将中性红与三聚氰氯和碱金属的碳酸盐在第二有机溶剂中接触，分离，得到第二反应物；所述接触的条件包括接触的温度为0-5℃，接触的时间为1-5小时；所述中性红与三聚氰氯和碱金属的碳酸盐的摩尔比为2∶(2.5-3)∶(3-3.5)；所述第二有机溶剂选自异丙醇、丙酮和乙醇中的一种或几种，以中性红和三聚氰氯的总量为100毫克为基准，所述溶剂的用量可以为20-50毫升；所述分离得到第二反应物的方法可以采用常规的方法，例如将该反应混合物与冰水或冰块混合，将反应物析出，冰水或冰块的用量只要使反应物能够析出即可；
(3)将步骤(1)得到的第一反应物与步骤(2)得到的第二反应物在第三有机溶剂中接触，接触的条件包括接触的温度为10-25℃，接触的时间为1-5小时；所述第一反应物与第二反应物的摩尔比为1∶(1-2)，所述第三有机溶剂选自四氢呋喃和/或丙酮；以所述第一反应物和第二反应物的总量为100毫克为基准，所述溶剂的用量可以为20-50毫升，将得到的产物分离纯化的方法可以采用常规的方法，例如将该反应混合物与冰水或冰块混合，将反应物析出，冰水或冰块的用量只要使反应物能够析出即可。
实施例1
本实施例用于说明本发明提供的酪氨酸蛋白激酶抑制剂的制备。
将由上述反应式中的第一反应物(1)(购自上海氟德化工有限公司)与第二反应物(2)(购自Sigma公司)在异丁醇中加热回流，所述第一反应物为4-氯-6，7-二甲氧基喹唑啉，所述第二反应物分别为
所述第一反应物与第二反应物的摩尔比均为1∶1，以第一反应物和第二反应物的总量为100毫克为基准，异丁醇的用量为15毫升；所述加热回流的条件包括回流的温度为80℃，回流的时间为4小时，分别得到化合物LQ1001、LQ1002、LQ1003、LQ1004、LQ1005、LQ1006、LQ1007、LQ1008、LQ1009、LQ10010。
分别通过核磁共振和质谱对上述制得的化合物进行表征：
LQ1001：C16H13N3O2 FCl，calc.MW＝333.5，ESI-MS(m/z)：[M+H]+ 334.2
1H NMR：(氘代DMSO)δ(ppm)：11.502(s，1H，2-H)，8.874(s，1H，8-H)，8.348(s，1H，5-H)，8.026(dd，1H，5’-H)，7.737(m，1H，2’-H)7.531(t，1H，6’-H)7.347(s，1H，N-H)4.002(s，6H，-CH3)；
LQ1002：C16H15N3O2，cal.MW＝281.1，ESI-MS(m/z)：[M+H]+：282.2.2
1H NMR：(氘代DMSO)δ(ppm)：11.370(s，1H，2-H)，8.812(s，1H，8-H)，8.313(s，1H，5-H)，7.677(m，2H，3’-H)，7.476(m，2H，4’-H，N-H)7.312(m，2H，2’-H)4.000(d，6H，-CH3)
LQ1003：C22H20N4O2，cal.MW＝372.1，ESI-MS(m/z)：[M+H]+：373.3
1H NMR：(氘代DMSO)δ(ppm)：11.107(s，1H，2-H)，8.774(s，1H，8-H)，8.364(s，1H，N-H)，8.182(s，1H，5-H)7.491(dd，2H，3”-H)，7.250(m，3H，2”-H，N-H)7.110(m，4H，2’-H，3’-H)，6.847(t，1H，4”-H)，3.996(d，6H，-CH3)
LQ1004：C22H20N4O2，cal.MW＝372.1，ESI-MS(m/z)：[M+H]+：373.3
1H NMR：(氘代DMSO)δ(ppm)：9.459(s，1H，2-H)，8.446(s，1H，8-H)，7.854(s，1H，5-H)，7.786(d，2H，2”-H)，7.565(d，2H，3’-H)7.372(d，2H，2’-H)，7.176(s，1H，N-H)，6.645(d，2H，3”-H)，5.166(s，2H，-NH2)，3.926(d，6H，-CH3)
LQ1005：C16H16N4O2，cal.MW＝296.3，ESI-MS(m/z)：[M+H]+：297.0
1H NMR：(氘代DMSO)δ(ppm)：10.852(s，1H，)，8.690(s，1H，)，8.106(s，1H，)，7.320(d，2H)，7.253(s，1H，)6.723(d，2H)，3.979(d，6H)，1.236(s，2H)
LQ1006：C17H17N3O2S，cal.MW＝327.4，ESI-MS(m/z)：[M+H]+：328.0
1H NMR：(氘代DMSO)δ(ppm)：11.223(s，1H，)，8.843(s，1H，)，8.243(s，1H，)，7.615(s 1H)，7.497(m，2H，)7.320(s，1H)，7.223(d，1H)，4.018(d，6H)，2.520(s，3H)
LQ1007：C22H19N3O2，cal.MW＝357.4，ESI-MS(m/z)：[M+H]+：358.0
1H NMR：(氘代DMSO)δ(ppm)：9.269(s，1H，)，8.197(s，1H，)，7.598(s，1H，)，7.473(m，6H)，7.250(d，3H，)7.086(s，1H)，，4.003(d，6H)
LQ1008：C22H19N3O2，cal.MW＝357.4，ESI-MS(m/z)：[M+H]+：358.0
1H NMR：(氘代DMSO)δ(ppm)：11.269(s，1H，)，8.828(s，1H，)，8.243(s，1H，)，7.991(s，1H)，7.696(s，3H，)7.610(m，2H)，7.494(m，2H)7.406(s，1H)，7.298(s，1H)，4.012(d，6H)
LQ1009：C22H19N3O2，cal.MW＝357.4，ESI-MS(m/z)：[M+H]+：358.0
1H NMR：(氘代DMSO)δ(ppm)：11.234(s，1H，)，8.836(s，1H，)，8.246(s，1H，)，7.798(s，4H)，7.722(d，2H，)7.488(s，2H)，7.382(s，1H)，7.310(d，1H)，4.021(d，6H)
LQ1010：C15H14N4O2，calc.MW＝282.2，ESI-MS(m/z)：[M+H]+283.1
1H NMR：(氘代DMSO)δ(ppm)：9.160(s，1H，2-H)，9.006(s，1H，N-H)，8.634(d，2H，3’-H)，7.604(s，1H，8-H)，7.151(s，1H，5-H)，4.058(s，3H，-CH3)，3.938(s，3H，-CH3)
LQ1007、LQ1008和LQ1009的X射线衍射晶体结构分别如图1-3所示。
实施例2
本实施例用于说明本发明提供的酪氨酸蛋白激酶抑制剂的制备。
将摩尔比为1∶1的上述反应式中的第一反应物(1)4-氯-6，7-二甲氧基喹唑啉与第二反应物(3)5-氨基菲洛林(由Sigma公司购得)，在催化剂Pd2(dba)3、t(Bu)3P和t-BuONa的存在下(所述催化剂Pd2(dba)3、t(Bu)3P和t-BuONa与第一反应物(1)的摩尔比为0.0125∶0.075∶3∶1)，在甲苯中加热回流28小时后冷却至室温，过滤，用甲苯和乙醚洗涤至将未反应的原料除去，在乙醇中重结晶，得淡黄色固体。通过核磁共振和质谱表征为目标产物LS1001。
LS1001：C22H17N5O2 Calc.MW＝383.3，ESI-MS(m/z)：[M+H]+384.1。
1H NMR：(氘代DMSO)δ(ppm)：10.1197(s，1H)，9.1047(d，1H)，9.0564(s，1H)，8.4577(m，2H)，8.1917(s，1H)，8.0957(s，1H)，8.0312(s，1H)，7.7149(m，2H)，7.1858(s，1H)，3.9501(d，6H)
LS1001的X射线衍射晶体结构如图4所示。
实施例3
本实施例用于说明本发明提供的酪氨酸蛋白激酶抑制剂的制备
(4) (5)
将由上述反应式中的第一反应物(4)与第二反应物(5)在四氢呋喃溶剂中，在室温(20℃)下搅拌反应约3小时，将反应液倒入冰块中，搅拌至冰块融化，析出红色产物，用甲醇重结晶纯化产物，得到化合物LQ1011，以第一反应物(4)与第二反应物(5)的总量为100毫克为基准，所述溶剂的用量为20毫升。
分别通过核磁共振和质谱对上述制得的化合物进行表征：
LQ1011：C34H30ClN11O2 Calc.MW＝660.127，ESI-MS(m/z)：661.5。
1H NMR：(氘代DMSO)δ(ppm)：10.333(s，1H)，10.018(s，1H)，9.405(m，1H)，8.267(m，1H)，7.968(d，2H)，7.744(m，4H)，7.505(m，2H)，7.160(s，2H)，6.832(s，1H)，3.934(d，6H)，3.934(d，6H)，2.956(s，6H)，2.535(s，3H，)。
其中所述第一反应物(4)和第二反应物(5)分别通过下面两个反应自合成得到：
所述第一反应物(4)的制备方法包括：将摩尔比为1∶1的4-氯-6，7-二甲氧基喹唑啉与1，4-苯二胺在80℃下，在异丙醇中搅拌反应约4小时，过滤，分别用乙醇和乙醚洗涤将未反应的原料除去，将滤饼粗产品在DMF中进行重结晶，得橙红色纯品。
经核磁及质谱检测为目标产物。LQ1005：C16H16N4O2，cal.MW＝296.3，ESI-MS(m/z)：[M+H]+：297.0。1H NMR：(氘代DMSO)δ(ppm)：10.852(s，1H，)，8.690(s，1H，)，8.106(s，1H，)，7.320(d，2H)，7.253(s，1H，)6.723(d，2H)，3.979(d，6H)，1.236(s，2H)
第二反应物(5)的制备方法包括：将分散于丙酮中的中性红(由国药集团化学试剂有限公司购得)(中性红与丙酮的用量比例150mg∶30ml)，滴加到溶于丙酮的三聚氰氯(三聚氰氯与丙酮的用量比例110mg∶7ml)中，中性红与三聚氰氯的摩尔比为2∶3，在冰浴(0-5℃)下，搅拌反应30分钟后，滴加入Na2CO3(Na2CO3与中性红的摩尔比为1∶1.25，10分钟滴完后，继续反应约2小时，将反应液倒入冰块中，搅拌至冰融化，过滤，干燥滤饼得粗品，柱层析分离，淋洗液为石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1(体积比)，得纯品，经质谱检测为目标产物。C18H15Cl2N7，cal.MW＝400.26，ESI-MS(m/z)：[M+H]+：401.36.
实施例4
本实施例用于说明本发明提供的酪氨酸蛋白激酶抑制剂的制备。
将由上述反应式中的第一反应物(1)与第二反应物(6)在异丙醇中加热回流，所述第一反应物为4-氯-6，7-二甲氧基喹唑啉，所述第二反应物分别为
和
所述第一反应物与第二反应物的摩尔比分别为1∶1、1∶1，以第一反应物与第二反应的总量为100毫克为基准，溶剂的用量为20毫升；所述加热回流的条件包括回流的温度为80℃，回流的时间为4小时，过滤，分别用乙醇和乙醚洗涤将未反应的原料除去，将滤饼粗产品在DMF中进行重结晶，分别得到化合物LS1002、LS1003。
LS1002：C17H15N5O2 Calc.MW＝321.3，ESI-MS(m/z)：322.1
1H NMR：(氘代DMSO)δ(ppm)：11.63(s，1H)，9.38(s，1H)，8.83(s，1H)，8.42(s，1H)，8.24(s，1H)，7.92-7.84(m，2H)，7.37(s，1H)，4.04(s，3H)，4.01(s，3H).
LS1003：C18H17N5O2 Calc.MW＝335.4，ESI-MS(m/z)：336.1
1H NMR：(氘代DMSO)δ(ppm)9.87(s，1H)，8.48(s，1H)，8.04(s，1H)，7.96(s，1H)，7.55(s，2H)，7.2(s，1H)，3.98(s，3H)，3.94(s，3H)，2.58(s，3H).
其中，所述第二反应物(6)的制备方法为将摩尔比为1∶3的4-硝基-1，2-二氨基苯与甲酸或乙酸，在浓度为5摩尔/升盐酸溶液中回流4小时，放置冷却后，用浓度为10重量％NaOH溶液将pH值调至10，析出大量固体。过滤，用水洗涤，在水中进行重结晶，得到5-硝基苯并咪唑或2-甲基-5-硝基苯并咪唑；
将0.4克钯炭催化剂分散在12毫升乙醇溶剂中，加入2.4毫升水合肼，加热至回流，加入0.8克5-硝基苯并咪唑的乙醇溶液30ml，反应3小时后，静止冷却，旋蒸除去大部分溶剂，静置后，有固体析出，用乙醇、乙醚洗涤，得5-氨基苯并咪唑。
自制得的第二反应物如5-硝基苯并咪唑、5-氨基苯并咪唑分别通过质谱和核磁共振表征：
5-硝基苯并咪唑
C7H5N3O2 cal.MW＝163.1，ESI-MS(m/z)：[M+H]+：164.3；
HNMR：(氘代DMSO)：13.088(s，1H)，8.544(s，2H)，8.128(d，1H)，7.764(s，1H)
5-氨基苯并咪唑
C7H7N3 cal.MW＝133.1，ESI-MS(m/z)：[M+H]+：134.3
实施例5
本实施例用于说明本发明提供的酪氨酸蛋白激酶抑制剂的制备。
将由上述反应式中的第一反应物(1)与第二反应物(7)在乙醇溶剂中加热回流，所述第一反应物为4-氯-6，7-二甲氧基喹唑啉，所述第二反应物为5-氨基-8-羟基喹啉，所述第一反应物与第二反应物的摩尔比为1∶1，以第一反应物(1)与第二反应物(7)的总量为100毫克为基准，溶剂的用量为20毫升；回流的时间为3小时，过滤析出物，用热乙醇洗涤3次，再用乙醚洗涤，干燥即可得到纯化合物JLY1001。
其中，第二反应物(7)5-氨基-8-羟基喹啉的制备方法包括：将100毫升异丙醇和2克5-硝基-8-羟基喹啉加入到250毫升三口瓶中，搅拌下加热，升至指定温度80℃，加入0.25克Pd/C催化剂和1.5毫升水合肼并控温80-85℃反应4小时后，趁热过滤，滤液经减压蒸去异丙醇，冷却后所得固体用异丙醇和乙醚洗涤后，将产物在室温下真空干燥5小时。通过质谱方法证明所得化合物为上述第二反应物5-氨基-8-羟基喹啉。
分别通过核磁共振和质谱对上述制得的化合物进行表征：
JLY1001：C19H16N4O3 Calc.MW＝348.36，ESI-MS(m/z)：[M+H]+ 349.1。
1H NMR(DMSO-d6)：δ(ppm)：11.36(s，1H)，10.23(s，1H)，8.93(s，1H)，8.61(s，1H)，8.24(m，2H)，7.57(m，2H)，7.30(s，1H)，7.20(d，J＝4.0Hz，1H)，4.0(s，6H).
JLY1001的X射线衍射晶体结构如图5所示。
实施例6-10
该实施例用于说明体外激酶抑制的活性测定
应用酶联免疫吸附分析(Enzyme Immunosorbent Assay，ELISA)分别测定由实施例1-5合成的化合物的激酶抑制活性(实施例1-5合成的化合物的浓度分别为40μM(微摩尔/升)、4μM、400nM(纳摩尔/升)、40nM、4nM、400pM(皮摩尔/升)、40pM、4pM)。使用CST公司的蛋白激酶检测试剂盒：PTP1B(Tyr66)Biotinylated Peptide作为激酶EGFR(Epidermal Growth FactorReceptor)的底物。分别加入由实施例1-5合成的化合物的激酶抑制剂，使用Spectramax M5(USA，Molecular Devices)型酶标仪，采用分光光度法，测定特定波长450nm处的光吸收OD值，根据下式计算化合物对细胞的抑制生长率，通过OriginPro 7.0数据处理软件由上述抑制生长率的数值得到δ曲线，考察本发明实施例1-5合成的化合物的激酶抑制剂对激酶底物的磷酸化反应的抑制程度，从而得到IC50值(即对激酶底物的磷酸化抑制程度达到50％时的激酶抑制剂的浓度值)。实验结果是两次独立的平行实验的平均值，变动一般为±15％。15种EGFR抑制剂IC50的测定结果如下表1所示。
表1
| 化合物编号 | EGFRIC50(μM) | 分子量 | 稳定性 | 溶解性 |
| LQ1001 | 0.015 | 333.7 | 空气中稳定，光稳定 | 易溶DMSO，微溶水，溶于甲醇乙醇 |
| LQ1002 | 4 | 281.3 | 空气中稳定，光稳定 | 易溶DMSO，微溶水，溶于甲醇乙醇 |
| LQ1003 | 0.45 | 372.4 | 空气中稳定，光稳定 | 易溶DMSO，微溶水，溶于甲醇乙醇 |
| LQ1004 | 0.05 | 372.4 | 空气中稳定，光稳定 | 易溶DMSO，微溶水，溶于甲醇乙醇 |
| LQ1005 | 0.5 | 296.3 | 空气中稳定，光稳定 | 易溶DMSO，微溶水，溶于甲醇乙醇 |
| LQ1006 | 1.0 | 327.4 | 空气中稳定，光稳定 | 易溶DMSO，微溶水，溶于甲醇乙醇 |
| LQ1007 | 0.45 | 357.4 | 空气中稳定，光稳定 | 易溶DMSO，微溶水，溶于甲醇乙醇 |
| LQ1008 | 0.1 | 357.4 | 空气中稳定，光稳定 | 易溶DMSO，微溶水，溶于甲醇乙醇 |
| LQ1009 | 3.0 | 357.4 | 空气中稳定，光稳定 | 易溶DMSO，微溶水，溶于甲醇乙醇 |
| LQ1010 | 0.026 | 282.3 | 空气中稳定，光稳定 | 易溶DMSO，微溶水，溶于甲醇乙醇 |
| LS1001 | 0.05 | 383.4 | 空气中稳定，光稳定 | 易溶DMSO，微溶水，溶于甲醇乙醇 |
| LQ1011 | 4.0 | 660.1 | 空气中稳定，光稳定 | 易溶DMSO，微溶水，溶于甲醇乙醇 |
| LS1002 | 0.025 | 321.3 | 空气中稳定，光稳定 | 易溶DMSO，微溶水，溶于甲醇乙醇 |
| LS1003 | 0.015 | 335.4 | 空气中稳定，光稳定 | 易溶DMSO，微溶水，溶于甲醇乙醇 |
| JLY1001 | 0.026 | 348.4 | 空气中稳定，光稳定 | 易溶DMSO，微溶水，溶于甲醇乙醇 |
上表中，易溶DMSO是指在常温常压下，在DMSO中的溶解度不低于1.0克，微溶于水是指在常温常压下，在水中的溶解度为0.09-0.10克，溶于甲醇乙醇是指在常温常压下，在甲醇中的溶解度为1.0-9.9克，在乙醇中的溶解度为1.0-9.9克。
从上表1中的结果可以看出，本发明提供的酪氨酸蛋白激酶抑制剂，即Iressa类有机小分子对EGFR蛋白激酶均表现出良好的抑制活性，此外，本发明提供的蛋白激酶抑制剂能够用于取代细胞毒性有机金属钌配合物中的一个或多个配体，所制得的配合物既能作用于蛋白激酶(或蛋白磷酸酶)也能作用于DNA的多靶点组合分子抗肿瘤化合物。本发明提供的蛋白激酶抑制剂还有助于降低肿瘤细胞对药物产生抗药性的可能性为能够与毒性。
Claims (5)
1.一种酪氨酸蛋白激酶抑制剂，其特征在于，该酪氨酸蛋白激酶抑制剂为由通式(1)表示的化合物：
其中，R为由具有配位功能的基团取代的芳氨基、六元芳杂环氨基、稠杂环氨基中的一种或几种；所述由具有配位功能的基团取代的芳氨基具有通式(13)-（17）所示的结构，所述六元芳杂环氨基具有通式(18)所示的结构，所述稠杂环氨基具有式(5)-(12)所示的结构：
其中，在通式(8)中，R14为H或碳原子数为1-3的烷基；在通式(9)中，R14为碳原子数为1-3的烷基，
其中，通式(14)中的R15为F、H、-NH2、苯氨基和氨苯基中的一种，R16为Cl、H和-SCH3中的一种。
2.权利要求1所述酪氨酸蛋白激酶抑制剂的制备方法，其特征在于，该方法包括将第一反应物与第二反应物在有机溶剂中接触，所述第一反应物为4-卤-6,7-二甲氧基喹唑啉，所述第二反应物为由具有配位功能的基团取代的芳香胺、氨基吡啶和氨基稠杂环化合物中的一种或几种，接触反应的条件使得第一反应物中4位的卤素与第二反应物中的氨基发生缩合反应。
3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述由具有配位功能的基团取代的芳香胺为通式（31）-（35）所示，所述氨基吡啶为通式(36)所示，所述氨基稠杂环化合物为通式(23)-(30)所示：
在通式(26)中，R36为碳原子数为1-3的烷基；在通式(27)中，R36为H或碳原子数为1-3的烷基，
其中，通式(32)中的R34为F、H、-NH2、苯氨基和氨苯基中的一种，R35为Cl、H和-SCH3中的一种。
4.根据权利要求2所述的方法，其中，所述第一反应物与第二反应物的摩尔比为1:（1-3），所述有机溶剂选自异丙醇、乙醇和甲苯中的一种或几种，以第一反应物与第二反应物的总量为100毫克为基准，所述有机溶剂的用量为20-50毫升。
5.权利要求1中R为通式(13)所示基团的酪氨酸蛋白激酶抑制剂的制备方法，其特征在于，该方法包括：
（1）将4-卤-6,7-二甲氧基喹唑啉与1,4-苯二胺在第一有机溶剂中接触，过滤，得到第一反应物；接触的条件包括接触的温度为70-90℃，接触的时间为2-5小时；所述4-卤-6,7-二甲氧基喹唑啉与1,4-苯二胺的摩尔比为1:(1-1.2)；所述第一有机溶剂选自异丙醇、丙酮和乙醇中的一种或几种，有机溶剂的用量：以4-卤-6,7-二甲氧基喹唑啉和1,4-苯二胺的总量为100毫克为基准，所述溶剂的用量为20-50毫升；
（2）将中性红与三聚氰氯和碱金属的碳酸盐在第二有机溶剂中接触，分离，得到第二反应物；所述接触的条件包括接触的温度为0-5℃，接触的时间为1-5小时；所述中性红与三聚氰氯和碱金属的碳酸盐的摩尔比为2:(2.5-3):(3-3.5)；所述第二有机溶剂选自异丙醇、丙酮和乙醇中的一种或几种，以中性红和三聚氰氯的总量为100毫克为基准，所述溶剂的用量为20-50毫升；
（3）将步骤（1）得到的第一反应物与步骤（2）得到的第二反应物在第三有机溶剂中接触，接触的条件包括接触的温度为10-25℃，接触的时间为1-5小时；所述步骤（1）得到的第一反应物与步骤（2）得到的第二反应物的摩尔比为1:(1-2)，所述第三有机溶剂选自四氢呋喃和/或丙酮；以所述第一反应物和第二反应物的总量为100毫克为基准，所述溶剂的用量为20-50毫升。
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