CN101885752A - 柴胡不定根系培养转化合成皂苷的方法 - Google Patents
柴胡不定根系培养转化合成皂苷的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101885752A CN101885752A CN 201010224379 CN201010224379A CN101885752A CN 101885752 A CN101885752 A CN 101885752A CN 201010224379 CN201010224379 CN 201010224379 CN 201010224379 A CN201010224379 A CN 201010224379A CN 101885752 A CN101885752 A CN 101885752A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- substratum
- root
- culture
- sucrose
- root system
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 title claims abstract description 14
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 title claims abstract description 14
- 238000012258 culturing Methods 0.000 title claims abstract description 4
- 241000202726 Bupleurum Species 0.000 title abstract description 5
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 title abstract 4
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 title abstract 2
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 claims abstract description 24
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims abstract description 9
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 26
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 26
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 26
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 22
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims description 22
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims description 22
- GWEHVDNNLFDJLR-UHFFFAOYSA-N 1,3-diphenylurea Chemical compound C=1C=CC=CC=1NC(=O)NC1=CC=CC=C1 GWEHVDNNLFDJLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 13
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 13
- 244000236521 Bupleurum rotundifolium Species 0.000 claims description 9
- 235000015221 Bupleurum rotundifolium Nutrition 0.000 claims description 9
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 claims description 9
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 8
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 6
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 6
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000005631 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid Substances 0.000 claims description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 14
- 230000006698 induction Effects 0.000 abstract description 11
- 239000002609 medium Substances 0.000 abstract description 7
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 abstract description 4
- 230000009466 transformation Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 abstract 4
- 229930192014 saikosaponin Natural products 0.000 abstract 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract 2
- KYWSCMDFVARMPN-LCSVLAELSA-N Saikosaponin D Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@]([C@H]3[C@]([C@@H]4[C@@]([C@@]5(C[C@@H](O)[C@]67CO[C@]5([C@@H]6CC(C)(C)CC7)C=C4)C)(C)CC3)(C)CC2)(C)CO)O[C@@H]([C@@H]1O)C)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O KYWSCMDFVARMPN-LCSVLAELSA-N 0.000 abstract 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 11
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 5
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- RCTYPNKXASFOBE-UHFFFAOYSA-M chloromercury Chemical compound [Hg]Cl RCTYPNKXASFOBE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 3
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- 230000003570 biosynthesizing effect Effects 0.000 description 2
- 230000032459 dedifferentiation Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000000763 evoking effect Effects 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 239000012092 media component Substances 0.000 description 2
- 238000004161 plant tissue culture Methods 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 241000589156 Agrobacterium rhizogenes Species 0.000 description 1
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 1
- 241000202722 Bupleurum falcatum Species 0.000 description 1
- 241000125183 Crithmum maritimum Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002082 anti-convulsion Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 239000012567 medical material Substances 0.000 description 1
- 238000009343 monoculture Methods 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001603 reducing effect Effects 0.000 description 1
- QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N reserpine Chemical compound O([C@H]1[C@@H]([C@H]([C@H]2C[C@@H]3C4=C(C5=CC=C(OC)C=C5N4)CCN3C[C@H]2C1)C(=O)OC)OC)C(=O)C1=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C1 QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000001932 seasonal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明提供了一种柴胡不定根系培养转化合成皂苷的方法，步骤包括：外植体的消毒；愈伤组织的诱导与增殖；不定根的分化诱导；不定根的增殖和不定根系的形成；柴胡皂苷的生物合成和转化。本发明选择北柴胡或狭叶柴胡的根切段为外植体；筛选了愈伤组织诱导的培养基组成成分；筛选了不定根诱导的条件；筛选了不定根增殖和不定根系形成的培养基组成成分；筛选了柴胡皂苷转化合成的培养基。该培养基对于不定根增殖、不定根系的形成和皂苷合成具有很好的促进作用。不定根的月增殖速率最高可达10.554，月干重增殖倍数最高可达10.352，柴胡皂苷a和d的总量最高可达0.149％。
Description
技术领域
本发明涉及植物组织培养及生物转化，具体属于一种药用植物柴胡不定根诱导、不定根系形成及其生物转化合成柴胡皂苷的方法。
背景技术
柴胡是多年生草本植物，也是常用大宗中药材，具有抗病毒、抗细菌内毒素、抗炎、抗肿瘤、抗惊厥、解热、降血脂及促进分泌、保肝、提高免疫力等功效，药用价值很高，并且柴胡药材的单一成分疗效确切，其中柴胡皂苷是最主要的药用成分和药材质量检测指标。
中国药典(2005年版)收录伞形科植物北柴胡Bupleurum Chinese DC.(又称硬苗柴胡)和狭叶柴胡Bupleurum scorzonerifilium Willd.(又称软苗柴胡或红柴胡)为药用柴胡的原植物，北柴胡和狭叶柴胡的根为柴胡药材的正品。
柴胡的需求量逐年增大，但野生药材严重短缺，人工栽培品已成为市场药材供应的主要来源。人工栽培生产柴胡药材一般需要二年，生长周期长；种植面积的盲目性和产量的不确定性直接影响到药材的价格和药农的种植积极性；生产中种植类型的混杂影响到药材品质的均一性，影响到临床用药的准确性和稳定性。
许多药用植物以根入药，因此根的离体培养对于应用现代生物技术方法生产药用成分具有特殊的意义。目前已经实现了人参毛状根的规模化培养。在柴胡根的离体培养方面，只有关于三岛柴胡毛状根培养的报道，是通过发根农杆菌侵染或转基因技术获得的，其诱导过程复杂，培养周期长，成本较高。
发明内容
本发明的目的是提供一种柴胡不定根系培养转化合成皂苷的方法，该方法所获取的根产物的生物量大，柴胡皂苷的相对产率高，适宜规模化生产。
本发明应用植物组织培养方法，建立了正品药材北柴胡和狭叶柴胡不定根系的诱导、培养及生物转化合成体系，可大量生产优质柴胡的根并从中获取有效药用成分。为提高柴胡药材质量和产量、实现生产的规模化和可控性提供了一条快速而有效的途径。
本发明提供的一种柴胡不定根系培养转化合成皂苷的方法，具体步骤包括：
(1)外植体的消毒：取田间柴胡根切成小段，消毒，制得外植体；
(2)愈伤组织的诱导与增殖：将经消毒处理的外植体接种于A培养基中，在25±2℃、黑暗条件下培养30d～40d得到愈伤组织，每隔25～35d继代培养一次，继代培养2～3次，A培养基配方为：B5培养基+0mg/L～0.5mg/L KT+1.0mg/L～3.0mg/L 2，4-D+2.5％～3.5％蔗糖+0.7％琼脂，pH 5.8～6.0；A培养基优选为：B5培养基+0.2mg/L KT+1.0mg/L2，4-D+3.0％蔗糖+0.7％琼脂，pH 5.8；在该培养基中接种1w后根两端膨大，接种2w～3w后膨大部位迅速形成疏松、淡黄色的愈伤组织。
(3)不定根的分化诱导：将继代培养后的愈伤组织转接到B培养基中，在25±2℃、黑暗条件下培养30d～40d，愈伤组织分化出不定根；B培养基配方为：B5培养基+0.5mg/L～2.0mg/L二苯基脲双磺酸钙+2.5％～3.5％蔗糖+0.7％琼脂，pH 5.8～6.0；B培养基优选为：B5培养基+1.0mg/L二苯基脲双磺酸钙+3.0％蔗糖+0.7％琼脂，pH 5.8；该培养基对愈伤组织分化不定根具有良好的促进作用，生根率最高可达97.3％。
(4)不定根的增殖和不定根系的形成：不定根接种到C培养基中，在26℃恒温、100rpm摇床转速下暗培养30d～40d；C培养基配方为：1/2MS培养基+0mg/L～2.0mg/L二苯基脲双磺酸钙+4.0％～6.0％蔗糖，pH 5.8～6.0；C培养基优选为：1/2MS培养基+1.0mg/L二苯基脲双磺酸钙+5.0％蔗糖，pH 5.8；该培养基对柴胡不定根增殖和不定根系的形成具有良好的促进作用。
(5)柴胡皂苷的生物转化和合成：取增殖后的不定根系转移到D培养基中，在26℃恒温、100rpm摇床转速下暗培养30d～40d；D培养基为：1/2MS培养基+0mg/L～1.0mg/L二苯基脲双磺酸钙+1.0mmol/L～3.0mmol/L丙酮酸钠+0.37g/L～1.85g/L MgSO4+1.9g/L～9.5g/L KNO3+4.0％～6.0％蔗糖，pH 5.8～6.0；D培养基优选为：1/2MS培养基+0.5mg/L二苯基脲双磺酸钙+2.0mmol/L丙酮酸钠+0.37g/L MgSO4+5.7g/L KNO3+5.0％蔗糖，pH 5.8；该培养基对于不定根系的生长和皂苷合成具有很好的促进作用，不定根的月增殖速率最高可达10.554，月干重增殖倍数最高可达10.352。
(6)将在D培养基中培养后的不定根系取出并烘干，提取得到柴胡皂苷；经测定，柴胡皂苷a和d的总量最高可达0.149％。
所述的柴胡是北柴胡或狭叶柴胡，优选北柴胡。
所述的二苯基脲双磺酸钙具有促进植物根系发达，增加作物干物质积累的作用。二苯基脲双磺酸钙可从太原山大新化工有限公司购得，或按ZL98104734.3制得。
与现有技术相比，本发明具有以下优点和效果：
(1)本发明以优质北柴胡或狭叶柴胡的根切段作为外植体，取材容易，更新方便。
(2)本发明所诱导的柴胡不定根的基因型一致，不定根系生长速度快，药用成分含量均一。
(3)本发明以不定根系为单一培养物，所获取根的生物量大。
(4)本发明在不定根系诱导和培养过程中，培养基中所添加的成分均为无毒物质，其中包括生理活性物质——二苯基脲双磺酸钙。
(5)本发明液体培养基中所添加的物质成本低廉，生物转化体系简单、高效。
(6)本发明生产周期短，培养体系的条件和生产过程可控；不受季节影响，一年四季均可生产，可根据市场供求关系合理安排和调整生产规模。
附图说明
图1柴胡根切段脱分化形成愈伤组织
图2柴胡愈伤组织分化出不定根
图3柴胡不定根分化形成不定根系
图4柴胡皂苷生物合成和转化体系中的不定根系
具体实施方式
实施例1
将取自山西太谷(原产于山西左权)种植地的北柴胡根切段作为外植体，流水冲去浮土，切成2cm～3cm长的切段，经75％乙醇浸泡30s，0.1％HgCl2水溶液消毒10min，无菌水冲洗四次后，接种于添加2，4-D 1.0mg/L、KT 0.2mg/L、蔗糖3.0％，琼脂0.7％，pH 5.8的B5培养基上(A培养基)，在25±2℃、黑暗下培养，4w后得到愈伤组织(如图1)。30d继代一次，继代培养三次以后得到大量的淡黄色的愈伤组织。
将淡黄色的愈伤组织转入生根诱导培养基(B培养基)。生根诱导培养基的组成为：B5培养基+1.0mg/L二苯基脲双磺酸钙+3.0％蔗糖+0.7％琼脂，pH 5.8。35d后分化出不定根(如图2)。
生根40d后，选取健壮的不定根转入不定根增殖和不定根系形成培养基(C培养基)，培养基组分为：1/2MS培养基+二苯基脲双磺酸钙1.0mg/L+5.0％蔗糖，pH 5.8。30d后得到北柴胡不定根系(如图3)。
将生长旺盛的柴胡不定根系接种到柴胡皂苷生物转化和合成培养基(D培养基)，培养基的组成为：1/2MS培养基+0.5mg/L二苯基脲双磺酸钙+2.0mmol/L丙酮酸钠+0.37g/LMgSO4+5.7g/L KNO3+5.0％蔗糖，pH 5.8。30d后得到健壮的北柴胡不定根系(如图4)。
将不定根系取出置于烘箱中，105℃保持30min使酶系失活，再60℃烘干至恒重。精密称取干燥的材料0.5g，研磨后置于150mL圆底烧瓶中，加入8％NH4-CH3OH 25mL回流提取1h，回流T＝80℃。过滤取滤液，然后将滤渣重新用同样的条件回流提取1h，重复三次。将三次的滤液汇总，水浴浓缩至干，残留物用甲醇溶解，定容至25mL容量瓶中。取其中1mL到5mL容量瓶中，加入1mL 8％HCl-CH3OH，在30℃下反应24h后加入1mL 8％KOH-CH3OH，然后用甲醇定容。提取出的柴胡皂苷利用HPLC测定，色谱条件为：Hypersil ODS-C18柱(150mm×4.6mm，5μm)；柱温：室温；UV检测波长：250nm；流动相：乙腈-水(40∶60)；流速：1.0mL/min；进样量：20μL。经测定，不定根的月增殖速率达10.554g，月干重增殖倍数达10.352，柴胡皂苷a和d的总量达0.149％。
实施例2
将取自山西陵川田间的北柴胡根切段，流水冲去浮土，切成长2cm～3cm长的切段，经75％乙醇浸泡30s，0.1％HgCl2水溶液消毒10min，无菌水冲洗四次后，接种于含有2，4-D1.0mg/L、KT 0.2mg/L、蔗糖3.0％，pH 5.8的B5培养基上(A培养基)，在25±2℃、黑暗下培养，2w～4w后外植体脱分化形成愈伤组织，继代培养三次以后得到大量愈伤组织。
选取致密、淡黄色的愈伤组织转入筛选得到的生根诱导培养基(B培养基)。B培养基组成为：B5培养基+1.0mg/L二苯基脲双磺酸钙+3.0％蔗糖+0.7％琼脂，pH 5.8。在继代培养过程中，不定根不断分化出新根。
每30d为一代，继代培养多次后得到大量的北柴胡不定根系(同实施例1)。
将生长旺盛的柴胡不定根系转接到柴胡皂苷的生物转化和合成培养基(D培养基)中进行不定根有效成分的生物合成转化(同实施例1)。
柴胡皂苷的提取和测定同实施例1。经测定，不定根的月增殖速率达10.314g，月干重增殖倍数达9.46，柴胡皂苷a和d的总量达0.136％。
实施例3
将取自山西芮城栽培地的北柴胡根切段，经消毒后接种到培养基中诱导愈伤组织形成、诱导不定根分化、进行不定根增殖和不定根系形成培养、进行不定根有效成分的生物转化合成。培养条件、培养基以及柴胡皂苷的提取和测定同实施例1。经测定，不定根的月增殖速率达7.212g，月干重增殖倍数达6.67，柴胡皂苷a和d的总量达0.127％。
实施例4
将取自山西方山的狭叶柴胡根切段作为外植体，流水冲去浮土，切成2cm～3cm长的切段，经75％乙醇浸泡30s，0.1％HgCl2水溶液消毒10min，无菌水冲洗四次后，接种于添加2，4-D 1.5mg/L、KT 0.1mg/L、蔗糖3.0％，琼脂0.7％，pH 5.8的B5培养基上(A培养基)，在25±2℃、黑暗下培养，4w后得到愈伤组织。30d继代一次，继代培养三次以后得到大量的淡黄色的愈伤组织。
将淡黄色的愈伤组织转入生根诱导培养基(B培养基)。生根诱导培养基的组成为：B5培养基+1.5mg/L二苯基脲双磺酸钙+3.0％蔗糖+0.7％琼脂，pH 5.8。35d后分化出不定根。
生根40d后，选取健壮的不定根转入不定根增殖和不定根系形成培养基(C培养基)，培养基组分为：1/2MS培养基+二苯基脲双磺酸钙1.5mg/L+5.0％蔗糖，pH 5.8。30d后得到北柴胡不定根系。
将生长旺盛的柴胡不定根系接种到柴胡皂苷生物转化和合成培养基(D培养基)，培养基的组成为：1/2MS培养基+0.5mg/L二苯基脲双磺酸钙+1.5mmol/L丙酮酸钠+1.85g/LMgSO4+9.5g/L KNO3+5.0％蔗糖，pH 5.8。30d后得到健壮的北柴胡不定根系。提取和测定同实施例1，不定根的月增殖速率达6.457g，月干重增殖倍数达5.894，柴胡皂苷a和d的总量可达0.108％。
实施例5
将取自山西方山的狭叶柴胡根切段，经消毒后接种到培养基中诱导愈伤组织形成、诱导不定根分化、进行不定根增殖和不定根系的形成培养及不定根有效成分的生物转化合成。培养条件、培养基以及柴胡皂苷的提取和测定同实施例1。经测定，不定根的月增殖速率达6.783g，月干重增殖倍数达6.05，柴胡皂苷a和d的总量可达0.118％。
Claims (6)
1.一种柴胡不定根系培养转化合成皂苷的方法，其特征在于，步骤包括：
(1)取田间柴胡根切成小段，消毒，制得外植体；
(2)将经消毒处理的外植体接种于A培养基中，在25±2℃、黑暗条件下培养30d～40d诱导出愈伤组织，每隔25～35d继代培养一次，继代培养2～3次；A培养基配方为：B5培养基+0mg/L～0.5mg/L KT+1.0mg/L～3.0mg/L 2，4-D+2.5％～3.5％蔗糖+0.7％琼脂，pH 5.8～6.0；
(3)将继代培养后的愈伤组织转接到B培养基中，在25±2℃、黑暗条件下培养30d～40d，愈伤组织分化出不定根；B培养基配方为：B5培养基+0.5mg/L～2.0mg/L二苯基脲双磺酸钙+2.5％～3.5％蔗糖+0.7％琼脂，pH 5.8～6.0；
(4)将不定根接种到C培养基中，在26℃恒温、100rpm摇床转速下暗培养30d～40d后增殖形成不定根系；C培养基配方为：1/2MS培养基+0mg/L～2.0mg/L二苯基脲双磺酸钙+4.0％～6.0％蔗糖，pH 5.8～6.0；
(5)取不定根系转移到D培养基中，在26℃恒温、100rpm摇床转速下暗培养30d～40d；D培养基为：1/2MS培养基+0mg/L～1.0mg/L二苯基脲双磺酸钙+1.0mmol/L～3.0mmol/L丙酮酸钠+0.37g/L～1.85g/L MgSO4+1.9g/L～9.5g/L KNO3+4.0％～6.0％蔗糖，pH 5.8～6.0；
(6)D培养基培养后的不定根系经过提取，得到柴胡皂苷。
2.如权利要求1所述的一种柴胡不定根系培养转化合成皂苷的方法，其特征在于，所述的A培养基为：B5培养基+0.2mg/LKT+1.0mg/L2，4-D+3.0％蔗糖+0.7％琼脂，pH 5.8。
3.如权利要求1所述的一种柴胡不定根系培养转化合成皂苷的方法，其特征在于，所述的B培养基为：B5培养基+1.0mg/L二苯基脲双磺酸钙+3.0％蔗糖+0.7％琼脂，pH 5.8。
4.如权利要求1所述的一种柴胡不定根系培养转化合成皂苷的方法，其特征在于，所述的C培养基为：1/2MS培养基+1.0mg/L二苯基脲双磺酸钙+5.0％蔗糖，pH 5.8。
5.如权利要求1所述的一种柴胡不定根系培养转化合成皂苷的方法，其特征在于，所述的D培养基为：1/2MS培养基+0.5mg/L二苯基脲双磺酸钙+2.0mmol/L丙酮酸钠+0.37g/L MgSO4+5.7g/L KNO3+5.0％蔗糖，pH 5.8。
6.如权利要求1所述的一种柴胡不定根系培养转化合成皂苷的方法，其特征在于，所述的柴胡是北柴胡或狭叶柴胡。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 201010224379 CN101885752B (zh) | 2010-07-09 | 2010-07-09 | 柴胡不定根系培养转化合成皂苷的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 201010224379 CN101885752B (zh) | 2010-07-09 | 2010-07-09 | 柴胡不定根系培养转化合成皂苷的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101885752A true CN101885752A (zh) | 2010-11-17 |
| CN101885752B CN101885752B (zh) | 2013-01-02 |
Family
ID=43071865
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 201010224379 Expired - Fee Related CN101885752B (zh) | 2010-07-09 | 2010-07-09 | 柴胡不定根系培养转化合成皂苷的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101885752B (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102293157A (zh) * | 2011-07-25 | 2011-12-28 | 哈尔滨工业大学 | 黑水缬草不定根培养生产缬草素的方法 |
| CN102870672A (zh) * | 2011-07-12 | 2013-01-16 | 中国林业科学研究院林业研究所 | 狼毒不定根的诱导及组织培养的方法 |
| CN103261197A (zh) * | 2010-11-26 | 2013-08-21 | 三菱瓦斯化学株式会社 | 溶解性高的吡咯并喹啉醌盐及其制造方法 |
-
2010
- 2010-07-09 CN CN 201010224379 patent/CN101885752B/zh not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 《J Hubei Univ, Nat Sci》 20000131 Chen YQ等 Effect of p recursors and chemical on the growth and 91-94 1-6 第22卷, 第1期 * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103261197A (zh) * | 2010-11-26 | 2013-08-21 | 三菱瓦斯化学株式会社 | 溶解性高的吡咯并喹啉醌盐及其制造方法 |
| US8946423B2 (en) | 2010-11-26 | 2015-02-03 | Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc. | Highly soluble salt of pyrroloquinoline quinone and method for producing the same |
| CN103261197B (zh) * | 2010-11-26 | 2016-03-02 | 三菱瓦斯化学株式会社 | 溶解性高的吡咯并喹啉醌盐及其制造方法 |
| CN102870672A (zh) * | 2011-07-12 | 2013-01-16 | 中国林业科学研究院林业研究所 | 狼毒不定根的诱导及组织培养的方法 |
| CN102293157A (zh) * | 2011-07-25 | 2011-12-28 | 哈尔滨工业大学 | 黑水缬草不定根培养生产缬草素的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101885752B (zh) | 2013-01-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104920214B (zh) | 一种提高三七组培苗皂苷产量的方法 | |
| Arumugam et al. | In vitro micropropagation using corm bud explants: an endangered medicinal plant of Gloriosa superba L | |
| CN103694034B (zh) | 一种以蓝藻为基料的银杏树专用复合肥料的制备方法 | |
| CN101491214B (zh) | 半夏人工种茎的生产方法 | |
| Zhou et al. | Effects of temperature, light, nutrients and smoke-water on seed germination and seedling growth of Astragalus membranaceus, Panax notoginseng and Magnolia officinalis—Highly traded Chinese medicinal plants | |
| Thong-On et al. | Field evaluation of in vitro-induced tetraploid and diploid Centella asiatica (L.) Urban | |
| CN107114223A (zh) | 一种铁皮石斛的栽培方法 | |
| Zhang et al. | Improving large-scale biomass and total alkaloid production of Dendrobium nobile Lindl. using a temporary immersion bioreactor system and MeJA elicitation | |
| CN101885752B (zh) | 柴胡不定根系培养转化合成皂苷的方法 | |
| CN101157936B (zh) | 一种诱导甘草产生毛状根的方法 | |
| Sharma et al. | In vitro propagation from seeds and enhanced synthesis of podophyllotoxin from root callus of SinoPodophyllum hexandrum Royle TS Ying (Himalayan Mayapple)− An endangered medicinal plant | |
| CN102112142A (zh) | 用于提高甘草或甘草提取物中甘草素含量的提取方法 | |
| CN102972266A (zh) | 一种适宜三七无土栽培的基质 | |
| CN101475929B (zh) | 一种利用白桦悬浮培养生产齐墩果酸的方法 | |
| CN101953300A (zh) | 温郁金1号的组织培养法 | |
| CN104770298B (zh) | 一种山豆根毛状根的诱导方法 | |
| CN103548695B (zh) | 一种岩黄连组织培养快速繁殖方法 | |
| CN110604049B (zh) | 一种铁皮石斛返野生生态种植方法 | |
| CN103651146B (zh) | 一种生产蕲山药试管微块茎的方法 | |
| CN101658136A (zh) | 一种富含龙胆苦苷的坚龙胆组织培养方法 | |
| CN102511387A (zh) | 一种适用于多倍体黄芩优良品种规模化生产的技术流程 | |
| CN102293157B (zh) | 黑水缬草不定根培养生产缬草素的方法 | |
| CN105746347B (zh) | 一种岩黄连的离体保存方法 | |
| CN102893858B (zh) | 一种通过培养龙牙楤木体细胞胚生产有用次生代谢物质的方法 | |
| CN112293250A (zh) | 一种甘松愈伤组织细胞的培养方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20130102 Termination date: 20150709 |
|
| EXPY | Termination of patent right or utility model |