CN107114223A - 一种铁皮石斛的栽培方法 - Google Patents

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周杭杰
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Abstract

本发明公开了一种铁皮石斛的栽培方法，取铁皮石斛原球茎，经组织培养、移栽、管理和采收，即得。本发明方法培养铁皮石斛时，最终产出的铁皮石斛品质好，有效成分含量高，特别是石斛碱的含量的高。

Description

一种铁皮石斛的栽培方法
技术领域
本发明涉及一种铁皮石斛的栽培方法，特别是一种石斛碱含量高的铁皮石斛的栽培方法。
背景技术
铁皮石斛别称铁皮兰、吊兰、云南铁皮、铁皮吊兰，是兰科石斛属多年生草本植物，铁皮石斛是石斛类药材的上品，素有“中华仙草-药中黄金”之美称，以茎入药，含有多糖、石斛碱、生物碱等有效成分，具有滋阴清热、生津益胃、润喉明目等功效，在抗肿瘤、提高人体免疫力、治疗胃肠道疾病、抗衰老、抗氧化、抗血小板聚集、降低血糖、治疗白内障等方面均有良好疗效。
现代药理学研究表明，铁皮石斛对非特异性及特异性免疫均有增强作用，在抗肿瘤、抗氧化、降低血糖以及白内障的治疗等方面，药理作用显著。其化学成分较复杂，已确定的化合物类型主要有：生物碱类、多糖类、菲类、联苄母核类，其中生物碱类、多糖类药理活性较为显著。石斛碱型倍半萜类生物碱为石斛属植物特有，其中石斛碱是最早发现，研究最多的生物碱；金钗石斛碱与非甾体类抗炎药药理作用相似，具有免疫调节、抗炎、扩张血管等作用。
随着铁皮石斛的保健功效被人们广泛的认识和接受，野生铁皮石斛已远远不能满足人们的需求。人们已经开始采用人工栽培铁皮石斛，铁皮石斛的栽培方法中，培养基是铁皮石斛赖以生存的条件，不同的培养原料和配方可对铁皮石斛的生长、产量和活性成分等产生重要的影响。现有技术中铁皮石斛用的培养基及现有栽培方法，不利于产出的铁皮石斛的品质保证。特别是不能保证铁皮石斛中石斛碱含量，使得最终得到的铁皮石斛中石斛碱含量低。
发明内容
本发明的目的，是提供一种铁皮石斛的栽培方法，本发明方法培养铁皮石斛时，最终产出的铁皮石斛品质好，有效成分含量高，特别是石斛碱的含量的高。
本发明是这样实现的。
一种铁皮石斛的栽培方法，取铁皮石斛原球茎，经组织培养、移栽、管理和采收，即得。
前述的铁皮石斛的栽培方法，具体包括以下步骤：
(1)取铁皮石斛原球茎，于生根培养基中培养，直至长出1-2片真叶高度为1.5-2.5cm的铁皮石斛幼苗；
(2)取高度为1.5-2.5cm、含1-2片真叶的铁皮石斛幼苗，接种于幼苗培养基中，培养50-60天，得铁皮石斛移栽幼苗；
(3)取铁皮石斛移栽幼苗移栽到大棚中，所述大棚宽6-8米，长20-50米，硼高1.7-2.5米，棚顶覆盖塑料薄膜和70-80％遮阴度的遮阴网，棚内安装自来水管，棚四周和入口装有防虫网；棚内搭建畦底架空的种植畦，用木架作为种植畦的框架，然后铺设孔径为0.3-0.5cm的塑料平板作为基质支撑面，然后在畦面上铺设4-6cm的基质；
(4)在种植畦的基质上挖2-3cm深的小洞，取铁皮石斛移栽幼苗，用0.3-0.5％的高锰酸钾稀释液浸根消毒后，将幼苗根部放入小洞内，然后用基质盖好，栽培密度为100-200丛/平方米，每丛2-5株，丛距为5-10cm；
(5)保证大棚内温度白天保持在18-22℃，夜晚15-20℃，湿度控制在80％-90％，移栽后移栽后10-15天喷施0.4-0.6％尿素水溶液；
(6)控制基质正常含水量在30-40％，空气湿度保持60％-70％，每10-15天喷1次水，可每15-20天喷1次0.5％～0.8％磷酸二氢钾水溶液；
(7)每月用40％乐果乳油1000倍水溶液或50％马拉硫磷1000倍水溶液喷施进行叶面防治，防虫采用防虫网；
(8)采收：11月至次年4月份间进行采收，剪大留小，剪老留嫩。
前述的铁皮石斛的栽培方法，所述步骤(1)中，所述生根培养基为:在每升MS培养基中添加1-3mgNAA、维生素C 2-5mg、陈皮粉末3-8mg、琼脂3-8mg和土豆泥1-5mg，混匀，即得。
前述的铁皮石斛的栽培方法，所述生根培养基为:在每升MS培养基中添加2mgNAA、维生素C 3.5mg、陈皮粉末6mg、琼脂6mg和土豆泥3mg，混匀，即得。
前述的铁皮石斛的栽培方法，所述步骤(2)中，所述幼苗培养基主要由按重量份计算的玉米糊100-120份、淫羊藿粉末50-60份和当归粉末50-60份混匀后得到。
前述的铁皮石斛的栽培方法，所述幼苗培养基主要由按重量份计算的玉米糊110份、淫羊藿粉末55份和当归粉末55份混匀后得到。
前述的铁皮石斛的栽培方法，所述基质主要由按重量份计算的黄豆渣10-20份、马铃薯泥10-20份、香蕉泥10-20份、椰子汁20-30份和中药渣50-60份混匀后得到。
前述的铁皮石斛的栽培方法，所述基质主要由按重量份计算的黄豆渣15份、马铃薯泥15份、香蕉泥15份、椰子汁25份和中药渣55份混匀后得到。
前述的铁皮石斛的栽培方法，所述中药渣主要由按重量份计算的忍冬藤5-15份、丹参10-20份、肉桂5-15份、鸡内金10-20份、山楂5-15份、白芨5-15份和茵陈5-15份按下述方法制备：忍冬藤、丹参、肉桂、鸡内金、山楂、白芨和茵陈，加8-12倍量水浸泡20-30min后，煎煮2-3h，过滤，取滤渣，干燥，粉碎成粗颗粒，即得。
前述的铁皮石斛的栽培方法，所述中药渣主要由按重量份计算的忍冬藤10份、丹参15份、肉桂10份、鸡内金15份、山楂10份、白芨10份和茵陈10份按下述方法制备：忍冬藤、丹参、肉桂、鸡内金、山楂、白芨和茵陈，加10倍量水浸泡25min后，煎煮2.5h，过滤，取滤渣，干燥，粉碎成粗颗粒，即得。
申请人对本发明进行了大量的实验研究，部分实验如下：
实验例1石斛碱含量考察.
1材料与方法
1.1材料
1.1.1铁皮石斛1：按实施例1进行栽培，采收得到铁皮石斛1。
1.1.2铁皮石斛2：栽培时，培养基中不含忍冬藤、丹参、肉桂、鸡内金、山楂、白芨和茵陈，其余方法同实施例1进行栽培后，采收得到铁皮石斛2。
1.2仪器和试剂
石斛碱标准品：成都曼思特生物技术有限公司，MUST-12080608。A E240电子天平：瑞士MEITLER；HH-s数控恒温水浴锅：金华市文华科教实验仪器厂；BM 510旋转蒸发仪：日本YAMATO公司；6890N气相色谱仪：美国安捷伦公司；UV-2450紫外分光光度计：日本岛津公司；甲醇(色谱纯)：天津市科密欧化学试剂有限公司；其余试剂均为分析纯；苯酚：上海凌峰化学试剂有限公司；硫酸：上海凌峰化学试剂有限公司。
2方法
2.1供试品溶液的制备
2.1.1供试品溶液1的制备：
取本发明铁皮石斛(铁皮石斛1)样品，置烘箱中50℃，干燥，粉碎，过三号筛，取过滤后药材粉末3.34g，加200mL 90％乙醇，回流1小时，过滤，倾出上清液，再加100mL90％乙醇，回流1小时，倾出上清液，合并上述2次上清液，置旋转蒸发仪浓缩，水浴锅50℃蒸干，干燥品加甲醇溶解，定容至25mL，即得供试品溶液1。
2.1.2供试品溶液2的制备
取铁皮石斛2样品，置烘箱中50℃，干燥，粉碎，过三号筛，取过滤后药材粉末3.34g，加200mL 90％乙醇，回流1小时，过滤，倾出上清液，再加100mL90％乙醇，回流1小时，倾出上清液，合并上述2次上清液，置旋转蒸发仪浓缩，水浴锅50℃蒸干，干燥品加甲醇溶解，定容至25mL，即得供试品溶液2。
2.2对照品溶液的制备
精密称取石斛碱对照品50.01lmg至100mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，得500.1mg/L石斛碱对照品母液。50.01mg/L溶液，作为对照品溶液，备用。
2.3色谱条件
色谱柱：D B-1毛细管柱(30mm×0.25mm，0.25um)；程序升温：初始温度为80℃，以10℃/min的速率升温至250℃，保持5分钟；进样口温度为250℃，检测器温度为250℃，进样量10uL，理论塔板数按石斛碱计，不低于10000。
2.4标准曲线制备
精密量取对照品溶液0.2、0.5、0.8、1.0、2.0、4.0mL分别置于10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。按上述色谱条件测定。以峰面积积分为纵坐标，对照品进样量为横坐标进行线性回归，回归方程为A＝0.7522C-0.0252，r＝0.9997，表明石斛碱在0.10-2.00ug范围内具有良好的线性关系。
2.5精密度试验
精密吸取石斛碱对照品溶液l0ul，连续6次进样，记录峰面积，石斛碱峰面积的RSD为1.58％，表明仪器精密度良好。
2.6重复性试验
按上述方法制备6份供试品溶液1和供试品溶液2，按上述色谱条件进行测定。石斛碱峰面积的RSD分别为2.05％和2.06％。
2.7稳定性试验
取同一供试品溶液1，在室温下放置，分别于0、2、4、6、8、l2小时进样，记录石斛碱峰面积，RSD为2.88％。结果表明，供试品溶液1在12小时内稳定。
取同一供试品溶液2，在室温下放置，分别于0、2、4、6、8、l2小时进样，记录石斛碱峰面积，RSD为2.89％。结果表明，供试品溶液2在12小时内稳定。
2.8回收率试验
取已知含量0.46mg/g)的铁皮石斛粉末6份，每份约1.65g，精密称定。准确加入石斛碱对照品母液2mL，按上述方法制备供试品溶液1和供试品溶液2，在上述色谱条件下进行测定，计算回收率。结果平均回收率为97.1％和96.8％，RSD分别为2.5％和2.6％。
2.9样品含量测定
按上述供试品溶液1和供试品溶液2的制备方法和测定条件，分成6份，测定6份铁皮石斛1样品和6份铁皮石斛2样品中石斛碱的含量，记录结果，结果取平均值，结果见表1。
表1石斛碱含量测定结果
由表可知，本发明方法栽培得到的铁皮石斛，最终采收的铁皮石斛中石斛碱的含量较高。铁皮石斛的品质好。
与现有技术相比，本发明方法培养铁皮石斛时，最终产出的铁皮石斛品质好，有效成分含量高，特别是石斛碱的含量的高。
具体实施方式
实施例1。
一种铁皮石斛的栽培方法，具体包括以下步骤：
(1)取铁皮石斛原球茎，于生根培养基中培养，直至长出1-2片真叶高度为1.5-2.5cm的铁皮石斛幼苗；所述生根培养基为:在每升MS培养基中添加2mgNAA、维生素C3.5mg、陈皮粉末6mg、琼脂6mg和土豆泥3mg，混匀，即得；
(2)取高度为1.5-2.5cm、含1-2片真叶的铁皮石斛幼苗，接种于幼苗培养基中，培养55天，得铁皮石斛移栽幼苗；所述幼苗培养基由玉米糊110kg、淫羊藿粉末55kg和当归粉末55kg混匀后得到；
(3)取铁皮石斛移栽幼苗移栽到大棚中，所述大棚宽6-8米，长20-50米，硼高1.7-2.5米，棚顶覆盖塑料薄膜和75％遮阴度的遮阴网，棚内安装自来水管，棚四周和入口装有防虫网；棚内搭建畦底架空的种植畦，用木架作为种植畦的框架，然后铺设孔径为0.3-0.5cm的塑料平板作为基质支撑面，然后在畦面上铺设4-6cm的基质；
(4)在种植畦的基质上挖2-3cm深的小洞，取铁皮石斛移栽幼苗，用0.3-0.5％的高锰酸钾稀释液浸根消毒后，将幼苗根部放入小洞内，然后用基质盖好，栽培密度为100-200丛/平方米，每丛2-5株，丛距为5-10cm；
(5)保证大棚内温度白天保持在18-22℃，夜晚15-20℃，湿度控制在80％-90％，移栽后移栽后13天喷施0.4-0.6％尿素水溶液；
(6)控制基质正常含水量在30-40％，空气湿度保持60％-70％，每13天喷1次水，可每18天喷1次0.5％～0.8％磷酸二氢钾水溶液；
(7)每月用40％乐果乳油1000倍水溶液喷施，进行叶面防治，防虫采用防虫网；
(8)采收：11月至次年4月份间进行采收，剪大留小，剪老留嫩。
所述基质由黄豆渣15kg、马铃薯泥15kg、香蕉泥15kg、椰子汁25kg和中药渣55kg混匀后得到；所述中药渣由忍冬藤10kg、丹参15kg、肉桂10kg、鸡内金15kg、山楂10kg、白芨10kg和茵陈10kg按下述方法制备：忍冬藤、丹参、肉桂、鸡内金、山楂、白芨和茵陈，加10倍量水浸泡25min后，煎煮2.5h，过滤，取滤渣，干燥，粉碎成粗颗粒，即得。
实施例2.
(1)取铁皮石斛原球茎，于生根培养基中培养，直至长出1-2片真叶高度为1.5-2.5cm的铁皮石斛幼苗；所述生根培养基为:在每升MS培养基中添加3mgNAA、维生素C 5mg、陈皮粉末8mg、琼脂8mg和土豆泥5mg，混匀，即得；
(2)取高度为1.5-2.5cm、含1-2片真叶的铁皮石斛幼苗，接种于幼苗培养基中，培养60天，得铁皮石斛移栽幼苗；所述幼苗培养基由玉米糊120kg、淫羊藿粉末60kg和当归粉末60kg混匀后得到；
(3)取铁皮石斛移栽幼苗移栽到大棚中，所述大棚宽8米，长50米，硼高2.5米，棚顶覆盖塑料薄膜和80％遮阴度的遮阴网，棚内安装自来水管，棚四周和入口装有防虫网；棚内搭建畦底架空的种植畦，用木架作为种植畦的框架，然后铺设孔径为0.3-0.5cm的塑料平板作为基质支撑面，然后在畦面上铺设4-6cm的基质；
(4)在种植畦的基质上挖2-3cm深的小洞，取铁皮石斛移栽幼苗，用0.3-0.5％的高锰酸钾稀释液浸根消毒后，将幼苗根部放入小洞内，然后用基质盖好，栽培密度为100-200丛/平方米，每丛2-5株，丛距为5-10cm；
(5)保证大棚内温度白天保持在18-22℃，夜晚15-20℃，湿度控制在80％-90％，移栽后移栽后15天喷施0.4-0.6％尿素水溶液；
(6)控制基质正常含水量在30-40％，空气湿度保持60％-70％，每15天喷1次水，可每20天喷1次0.5％～0.8％磷酸二氢钾水溶液；
(7)每月用50％马拉硫磷1000倍水溶液喷施进行叶面防治，防虫采用防虫网；
(8)采收：11月至次年4月份间进行采收，剪大留小，剪老留嫩。
所述基质由黄豆渣20kg、马铃薯泥20kg、香蕉泥20kg、椰子汁30kg和中药渣60kg混匀后得到；所述中药渣由忍冬藤15kg、丹参20kg、肉桂15kg、鸡内金20kg、山楂15kg、白芨15kg和茵陈15kg按下述方法制备：忍冬藤、丹参、肉桂、鸡内金、山楂、白芨和茵陈，加12倍量水浸泡30min后，煎煮3h，过滤，取滤渣，干燥，粉碎成粗颗粒，即得。
实施例3.
(1)取铁皮石斛原球茎，于生根培养基中培养，直至长出1-2片真叶高度为1.5-2.5cm的铁皮石斛幼苗；所述生根培养基为:在每升MS培养基中添加1mgNAA、维生素C 2mg、陈皮粉末3mg、琼脂3mg和土豆泥1mg，混匀，即得；
(2)取高度为1.5-2.5cm、含1-2片真叶的铁皮石斛幼苗，接种于幼苗培养基中，培养50天，得铁皮石斛移栽幼苗；所述幼苗培养基由玉米糊100kg、淫羊藿粉末50kg和当归粉末50kg混匀后得到；
(3)取铁皮石斛移栽幼苗移栽到大棚中，所述大棚宽6米，长20米，硼高1.7米，棚顶覆盖塑料薄膜和70％遮阴度的遮阴网，棚内安装自来水管，棚四周和入口装有防虫网；棚内搭建畦底架空的种植畦，用木架作为种植畦的框架，然后铺设孔径为0.3-0.5cm的塑料平板作为基质支撑面，然后在畦面上铺设4-6cm的基质；
(4)在种植畦的基质上挖2-3cm深的小洞，取铁皮石斛移栽幼苗，用0.3-0.5％的高锰酸钾稀释液浸根消毒后，将幼苗根部放入小洞内，然后用基质盖好，栽培密度为100-200丛/平方米，每丛2-5株，丛距为5-10cm；
(5)保证大棚内温度白天保持在18-22℃，夜晚15-20℃，湿度控制在80％-90％，移栽后移栽后10天喷施0.4-0.6％尿素水溶液；
(6)控制基质正常含水量在30-40％，空气湿度保持60％-70％，每10天喷1次水，可每15天喷1次0.5％～0.8％磷酸二氢钾水溶液；
(7)每月用40％乐果乳油1000倍水溶液喷施进行叶面防治，防虫采用防虫网；
(8)采收：11月至次年4月份间进行采收，剪大留小，剪老留嫩。
所述基质由黄豆渣10kg、马铃薯泥10kg、香蕉泥10kg、椰子汁20kg和中药渣50kg混匀后得到；所述中药渣由忍冬藤5kg、丹参10kg、肉桂5kg、鸡内金10kg、山楂5kg、白芨5kg和茵陈5kg按下述方法制备：忍冬藤、丹参、肉桂、鸡内金、山楂、白芨和茵陈，加8倍量水浸泡20min后，煎煮2h，过滤，取滤渣，干燥，粉碎成粗颗粒，即得。

Claims (10)

1.一种铁皮石斛的栽培方法，其特征在于：取铁皮石斛原球茎，经组织培养、移栽、管理和采收，即得。
2.如权利要求1所述的铁皮石斛的栽培方法，其特征在于：具体包括以下步骤：
取铁皮石斛原球茎，于生根培养基中培养，直至长出1-2片真叶高度为1.5-2.5cm的铁皮石斛幼苗；
取高度为1.5-2.5cm、含1-2片真叶的铁皮石斛幼苗，接种于幼苗培养基中，培养50-60天，得铁皮石斛移栽幼苗；
取铁皮石斛移栽幼苗移栽到大棚中，所述大棚宽6-8米，长20-50米，硼高1.7-2.5米，棚顶覆盖塑料薄膜和70-80%遮阴度的遮阴网，棚内安装自来水管，棚四周和入口装有防虫网；棚内搭建畦底架空的种植畦，用木架作为种植畦的框架，然后铺设孔径为0.3-0.5cm的塑料平板作为基质支撑面，然后在畦面上铺设4-6cm的基质；
在种植畦的基质上挖2-3cm深的小洞，取铁皮石斛移栽幼苗，用0.3-0.5％的高锰酸钾稀释液浸根消毒后，将幼苗根部放入小洞内，然后用基质盖好，栽培密度为100-200丛/平方米，每丛2-5株，丛距为5-10cm；
（5）保证大棚内温度白天保持在18-22℃，夜晚15-20℃，湿度控制在80％-90％，移栽后移栽后10-15天喷施0.4-0.6%尿素水溶液；
（6）控制基质正常含水量在30-40％ ，空气湿度保持60％-70％，每10-15天喷1次水，可每15-20天喷1次 0.5％～0.8％磷酸二氢钾水溶液；
（7）每月用40％乐果乳油1000倍水溶液或50％马拉硫磷1 000倍水溶液喷施进行叶面防治，防虫采用防虫网；
（8）采收：11月至次年4月份间进行采收，剪大留小，剪老留嫩。
3.如权利要求2所述的铁皮石斛的栽培方法，其特征在于：所述步骤（1）中，所述生根培养基为:在每升MS培养基中添加1-3mgNAA、维生素C 2-5mg、陈皮粉末3-8mg、琼脂3-8mg和土豆泥1-5mg，混匀，即得。
4.如权利要求3所述的铁皮石斛的栽培方法，其特征在于：所述生根培养基为:在每升MS培养基中添加2mgNAA、维生素C 3.5mg、陈皮粉末6mg、琼脂6mg和土豆泥3mg，混匀，即得。
5.如权利要求2所述的铁皮石斛的栽培方法，其特征在于：所述步骤（2）中，所述幼苗培养基主要由按重量份计算的玉米糊100-120份、淫羊藿粉末50-60份和当归粉末50-60份混匀后得到。
6.如权利要求5所述的铁皮石斛的栽培方法，其特征在于：所述幼苗培养基主要由按重量份计算的玉米糊110份、淫羊藿粉末55份和当归粉末55份混匀后得到。
7.如权利要求2所述的铁皮石斛的栽培方法，其特征在于：所述基质主要由按重量份计算的黄豆渣10-20份、马铃薯泥10-20份、香蕉泥10-20份、椰子汁20-30份和中药渣50-60份混匀后得到。
8.如权利要求7所述的铁皮石斛的栽培方法，其特征在于：所述基质主要由按重量份计算的黄豆渣15份、马铃薯泥15份、香蕉泥15份、椰子汁25份和中药渣55份混匀后得到。
9.如权利要求7或8所述的铁皮石斛的栽培方法，其特征在于：所述中药渣主要由按重量份计算的忍冬藤5-15份、丹参10-20份、肉桂5-15份、鸡内金10-20份、山楂5-15份、白芨5-15份和茵陈5-15份按下述方法制备：忍冬藤、丹参、肉桂、鸡内金、山楂、白芨和茵陈，加8-12倍量水浸泡20-30min后，煎煮2-3h，过滤，取滤渣，干燥，粉碎成粗颗粒，即得。
10.如权利要求9所述的铁皮石斛的栽培方法，其特征在于：所述中药渣主要由按重量份计算的忍冬藤10份、丹参15份、肉桂10份、鸡内金15份、山楂10份、白芨10份和茵陈10份按下述方法制备：忍冬藤、丹参、肉桂、鸡内金、山楂、白芨和茵陈，加10倍量水浸泡25min后，煎煮2.5h，过滤，取滤渣，干燥，粉碎成粗颗粒，即得。
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