CN101879153A - 一种左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释微球组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释微球组合物，按重量百分比该组合物由以下组分组成：可降解的疏水聚合物50％-99％，左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物1％-50％，其中左旋多巴甲酯和苄丝肼的重量比为1∶1-4∶1。本发明还提供了混和药物缓释微球组合物制备方法。本发明克服现有的单一的口服给药方案，和需要频繁的口服，造成这类病人经常漏服，达不到有效的治疗；提供用一种W/O/W的制备方法。其粒径的大小可以根据不同需要，进行控制，不污染环境；可以避免对左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物的治疗的作用影响。溶液的表面光滑圆整，溶液规整无粘连，粒径可以根据需要进行调控从1μm到500μm，其冻干粉剂为白色细腻、疏松，不会塌陷、不粘连，再分散性良好。

Description

一种左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释微球组合物及其制备方法

【技术领域】

本发明涉及的是一种药物制剂技术领域的组合物及其制备方法，尤其是一种左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释微球组合物及其制备方法。

【背景技术】

制药行业从药物发现，到临床的应用，最后一个环节是药物制剂。其中相当一部分药物需要长期频繁的给药才能治愈；还有一部分需要局部给药由于系统给药的毒性大。要达到这些目的，原料药必须要制备成相应的剂型。例如需要长期给药但在体内的半衰期短的药物，宜制备成缓释或控释剂型；对于一些肿瘤的治疗，需要一些药物靶向于病照，例如靶向于肿瘤血管的栓塞微米球制剂等；对帕金森病，症状性帕金森综合症由于现有的口服制剂，每日需要服用三次，但是对于这类病人来说，是十分不便的，因为他们本来行动和记忆有问题，如果能用一次药可以达到一个星期甚至一个月的效果，这对于他们来说是非常好的一件事情；我们基于这个药物存在的这类问题开发了具有长期疗效的左旋多巴缓释制剂。

经对现有技术文献的检索发现，[Claudia Klingler，Bernd W.Müller，Hartwig Steckel，Insulin-micro-and nanoparticles for pulmonarydelivery，International Journal of Pharmaceutics，377(2009)173-179]，[Claudia Klingler，BerndW.Müller，Hartwig Steckel，左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物的微纳米粒用于肺部给药，国际药学杂志，377(2009)173-179]Claudia Klingler等人在该文献报道了利用喷雾干燥的方法制备2μm的溶液用于肺部给药，但是在用药安全、方便仍然存在非常大的问题，正如曾经参加了Exubera早期临床试验的洛杉矶查尔斯德鲁大学(CharlesR.DrewUniversity)医学教授Mayer Davidson说：“Exubera(左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物的吸入剂)的体积比较大，使用起来不方便。另外，使用Exubera的患者还需要使用长效左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物来维持血糖的水平，并需要定期进行肺功能检测。”辉瑞Exubera撤市之后，诺和诺德也终止了吸入性左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物的开发。但是目前没有制备左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释微球的方法报道，同时单一的左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释微球容易被体内酶降解而失活。

【发明内容】

本发明的目的在于填补现在还没有制备左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物和苄丝肼混和药物缓释制剂制备方法，提供一种左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释微球组合物及其制备方法。本发明利用水包油-油包水(W/O/W)制备微球方法进一步微囊包在具有缓释的高分子材料中。使其制备的微球表面光滑圆整，均匀度好，溶液规整无粘连；包封率高，突释小，载药量高。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释微球组合物，按重量百分比该组合物由以下组分组成：

可降解的疏水聚合物                50％-99％

左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物      1％-50％，

其中左旋多巴甲酯和苄丝肼的重量比为1∶1-4∶1。

所述的可降解的疏水聚合物选自聚乳酸-羟基乙酸、聚乳酸或聚己内酯一种或其混合物。

所述的组合物粒径为40-500μm。

所述的组合物粒径为250-500μm。

一种制备左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释微球组合物的方法，该方法包括以下步骤：

a，将左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物制备成水溶液；

b，将步骤a得到的水溶液加入到可降解的疏水聚合物有机溶液中，

c，将步骤b得到的混悬液加入到重量百分比浓度为0％-10％的氯化钠溶液和重量百分比浓度为1％-5％聚乙烯醇表面活性剂中乳化；

d，将步骤c得到的复乳溶液加入到重量百分比浓度为1％-10％的氯化钠溶液固化；

e，将步骤d得到的微球进行离心收集，除去表面活性剂和氯化钠，得到混和药物缓释微球组合物。

步骤b中所述的可降解的疏水聚合物选自聚乳酸-羟基乙酸、聚乳酸或聚己内酯一种或其混合物，可降解的疏水聚合物有机溶液中的有机溶剂为：二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、庚烷、氯仿或丙酮。

所述的聚乳酸-羟基乙酸、聚乳酸或聚己内酯的分子量的大小分别为：6000-500,000、6000-1,000,000或10,000-5,000,000。

所述的聚乳酸-羟基乙酸、聚乳酸、聚己内酯或它们的任意混合物的有机溶液重量百分比浓度为5％-30％。

步骤c中所述的乳化时间1-5min，步骤d中所述的固化时间1-4小时。

本发明优点在于：本发明克服现有的单一的口服给药方案，和需要频繁的口服，造成这类病人经常漏服，达不到有效的治疗；提供用一种W/O/W的制备方法。其粒径的大小可以根据不同需要，进行控制，不污染环境；可以避免对左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物的治疗的作用影响。溶液的表面光滑圆整，溶液规整无粘连，粒径可以根据需要进行调控从1μm到500μm，其冻干粉剂为白色细腻、疏松，不会塌陷、不粘连，再分散性良好。

【附图说明】

图1左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释PLGA微球组合物扫描电镜图。

图2左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释PLGA微球组合物体外释放曲线图。

【具体实施方式】

下面结合附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。

实施例一

①左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物溶液制备

a)将市场购买的100mg左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物(按照重量比为1∶1)，配制成重量百分比浓度为2.5％；

②左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释微球组合物制备

a)将①得的左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物溶液分别量取0.2mL、0.5mL或1mL和分别称取595mg的聚羟基乙酸-聚乳酸(PLGA分子量为6000)、37.5mg的聚羟基乙酸-聚乳酸(PLGA分子量为250,000)或25mg的聚羟基乙酸-聚乳酸(PLGA分子量为500,000)并分别配制成重量百分比浓度为30％、15％或5％的二氯甲烷的有机溶液；将用30％浓度的和0.2mL、15％的和0.5mL或5％的和1mL的上述溶液的顺序一一对应混和并搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，即油包水(W/O)乳液；将制备成左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物的百分含量为1％、25％或50％缓释微球。

b)把步骤(a)得乳液按照上述的顺序一一分别加到重量百分比浓度为1％氯化钠和1％的聚乙二醇(PVA的分子量为1,000,000)水溶液10mL、5％氯化钠和2.5％的聚乙二醇(PVA的分子量为500,000)水溶液10mL、或10％氯化钠和2.5％的聚乙二醇(PVA的分子量为1,000,000)水溶液10mL并搅拌、漩涡或超声0.1-5分钟形成复乳；

(c)把步骤(b)的复乳加到浓度为1％、5％或10％的1000mL氯化钠溶液固化1-4小时；

(d)把步骤(c)得到的微球进行离心收集，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球组合物(上述制备的微球的扫描电镜图如图1所示，微球的表面光滑、粒径分布均匀，粒径为约40-100μm；其它的粒径分别约为60-150μm、和200-500μm，图上均未显示)。

制备成左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物的含量为1％的微球在体外释放曲线如图2所示，结果显示没有突释和不完全释放，其它也有类似的结果但图上未显示。

稳定性试验考察：把左旋多巴甲酯与苄丝肼和本发明制备的左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释微球同时放在可见光照射，然后回收分别检测左旋多巴甲酯和苄丝肼的含量，发现左旋多巴甲酯在一年后活性下降6-10％，而微球几乎不变约0-1.0％；苄丝肼在一年后活性下降5-10％，而微球几乎不变约0-0.8％。

体内血药浓度考察：用于同剂量的左旋多巴甲酯与苄丝肼口服制剂和左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释微球比较，发现微球剂型明显好于口服制剂，左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释微球剂型的苄丝肼体内血药浓度的总面积高于口服的约30％；左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释微球发现微球剂型的左旋多巴甲酯也明显好于口服制剂，其体内血药浓度的总面积高于口服的约40％。

实施例二

①左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物溶液制备

a)将市场购买的100mg左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物(按照重量比为2∶1)，配制成重量百分比浓度为2.5％；

②左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释微球组合物制备

a)将①得的左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物溶液分别量取0.2mL、0.5mL或1mL和分别称取595mg的聚乳酸(PLA分子量为6000)、37.5mg的聚乳酸(PLA分子量为250,000)或25mg的聚乳酸(PLA分子量为500,000)并分别配制成重量百分比浓度为30％、15％或5％的二氯甲烷的有机溶液；将用30％浓度的和0.2mL、15％的和0.5mL或5％的和1mL的上述溶液的顺序一一对应混和并搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，即油包水(W/O)乳液；将制备成左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物的百分含量为1％、25％或50％缓释微球。

b)把步骤(a)得乳液分别加到重量百分比浓度为1％氯化钠和1％的聚乙二醇(PVA的分子量为1,000,000)水溶液10mL、5％氯化钠和2.5％的聚乙二醇(PVA的分子量为500,000)水溶液10mL、或10％氯化钠和2.5％的聚乙二醇(PVA的分子量为1,000,000)水溶液10mL并搅拌、漩涡或超声0.1-5分钟形成复乳；

(c)把步骤(b)的复乳加到浓度为1％、5％或10％的1000mL氯化钠溶液固化1-4小时；

(d)把步骤(c)得到的微球进行离心收集，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球组合物(上述制备的微球的扫描电镜图类似如图1所示，微球的表面光滑、粒径分布均匀，粒径为约45-100μm；其它的粒径分别约为60-170μm、和250-500μm，图上均未显示)。

制备成左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物的含量为1％的微球在体外释放结果显示没有突释和不完全释放，其它也有类似的结果但图上未显示。

稳定性试验考察：把左旋多巴甲酯与苄丝肼和本发明制备的左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释微球同时放在可见光照射，然后回收分别检测左旋多巴甲酯和苄丝肼的含量，发现左旋多巴甲酯在一年后活性下降6-8％，而微球几乎不变约0-1.0％；苄丝肼在一年后活性下降5-9.1％，而微球几乎不变约0-0.78％。

体内血药浓度考察：用于同剂量的左旋多巴甲酯与苄丝肼口服制剂和左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释微球比较，发现微球剂型明显好于口服制剂，左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释微球剂型的苄丝肼体内血药浓度的总面积高于口服的约31％；左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释微球发现微球剂型的左旋多巴甲酯也明显好于口服制剂，其体内血药浓度的总面积高于口服的约42％。

实施例三

①左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物溶液制备

a)将市场购买的100mg左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物(按照重量比为3∶1)，配制成重量百分比浓度为2.5％；

②左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释微球组合物制备

a)将①得的左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物溶液分别量取0.2mL、0.5mL或1mL和分别称取595mg的聚己内酯(PCL分子量为10,000)、37.5mg的聚己内酯(PCL分子量为2,500,000)或25mg的聚己内酯(PCL分子量为5,000,000)并分别配制成重量百分比浓度为30％、15％或5％的二氯甲烷的有机溶液；将用30％浓度的和0.2mL、15％的和0.5mL或5％的和1mL的上述溶液的顺序一一对应混和并搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，即油包水(W/O)乳液；将制备成左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物的百分含量为1％、25％或50％缓释微球。

b)把步骤(a)得乳液分别加到重量百分比浓度为1％氯化钠和1％的聚乙二醇(PVA的分子量为1,000,000)水溶液10mL、5％氯化钠和2.5％的聚乙二醇(PVA的分子量为500,000)水溶液10mL、或10％氯化钠和2.5％的聚乙二醇(PVA的分子量为1,000,000)水溶液10mL并搅拌、漩涡或超声0.1-5分钟形成复乳；

(c)把步骤(b)的复乳加到浓度为1％、5％或10％的1000mL氯化钠溶液固化1-4小时；

(d)把步骤(c)得到的微球进行离心收集，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球组合物(上述制备的微球的扫描电镜图类似如图1所示，微球的表面光滑、粒径分布均匀，粒径为约50-100μm；其它的粒径分别约为65-150μm、和250-500μm，图上均未显示)。

制备成左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物的含量为1％的微球在体外释放结果显示没有突释和不完全释放，其它也有类似的结果但图上未显示。

稳定性试验考察：把左旋多巴甲酯与苄丝肼和本发明制备的左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释微球同时放在可见光照射，然后回收分别检测左旋多巴甲酯和苄丝肼的含量，发现左旋多巴甲酯在一年后活性下降6-7％，而微球几乎不变约0-1.0％；苄丝肼在一年后活性下降5-9.5％，而微球几乎不变约0-0.72％。

体内血药浓度考察：用于同剂量的左旋多巴甲酯与苄丝肼口服制剂和左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释微球比较，发现微球剂型明显好于口服制剂，左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释微球剂型的苄丝肼体内血药浓度的总面积高于口服的约31.5％；左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释微球发现微球剂型的左旋多巴甲酯也明显好于口服制剂，其体内血药浓度的总面积高于口服的约42.5％。

实施例四

①左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物溶液制备

a)将市场购买的100mg左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物(按照重量比为4∶1)，配制成重量百分比浓度为2.5％；

②左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释微球组合物制备

a)将①得的左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物溶液分别量取0.2mL、0.5mL或1mL和分别称取100mg聚羟基乙酸-聚乳酸(PLGA分子量为6000)、200mg聚乳酸(PLA分子量为6000)和295mg聚己内酯(PCL分子量为10,000)共595mg的聚合物混合物；12.5mg聚羟基乙酸-聚乳酸(PLGA分子量为20,000)、15mg聚乳酸(PLA分子量为50,000)和10mg聚己内酯(PCL分子量为10,000)共37.5mg的聚合物混合物；或5mg聚羟基乙酸-聚乳酸(PLGA分子量为50,000)、7mg聚乳酸(PLA分子量为500,000)和13mg聚己内酯(PCL分子量为1,000,000)共25mg的聚合物混合物；并分别配制成重量百分比浓度为30％、15％或5％的二氯甲烷的有机溶液；将用30％浓度的和0.2mL、15％的和0.5mL或5％的和1mL的上述溶液的顺序一一对应混和并搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，即油包水(W/O)乳液；将制备成左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物的百分含量为1％、25％或50％的缓释微球。

b)把步骤(a)得乳液分别加到重量百分比浓度为1％氯化钠和1％的聚乙二醇(PVA的分子量为1,000,000)水溶液10mL、5％氯化钠和2.5％的聚乙二醇(PVA的分子量为500,000)水溶液10mL、或10％氯化钠和2.5％的聚乙二醇(PVA的分子量为1,000,000)水溶液10mL并搅拌、漩涡或超声0.1-5分钟形成复乳；

(c)把步骤(b)的复乳加到浓度为1％、5％或10％的1000mL氯化钠溶液固化1-4小时；

(d)把步骤(c)得到的微球进行离心收集，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球组合物(上述制备的微球的扫描电镜图类似如图1所示，微球的表面光滑、粒径分布均匀，粒径为约55-100μm；其它的粒径分别约为65-150μm、和250-500μm，图上均未显示)。

制备成左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物的含量为1％的微球在体外释放结果显示没有突释和不完全释放，其它也有类似的结果但图上未显示。

稳定性试验考察：把左旋多巴甲酯与苄丝肼和本发明制备的左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释微球同时放在可见光照射，然后回收分别检测左旋多巴甲酯和苄丝肼的含量，发现左旋多巴甲酯在一年后活性下降6-7％，而微球几乎不变约0-1.0％；苄丝肼在一年后活性下降5-8.5％，而微球几乎不变约0-0.72％。

体内血药浓度考察：用于同剂量的左旋多巴甲酯与苄丝肼口服制剂和左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释微球比较，发现微球剂型明显好于口服制剂，左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释微球剂型的苄丝肼体内血药浓度的总面积高于口服的约31.7％；左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释微球发现微球剂型的左旋多巴甲酯也明显好于口服制剂，其体内血药浓度的总面积高于口服的约43.5％。

实施例五：平行实验

为了科学评价以下各组药物的性能，我们用平行试验的方法，同时检测下列各组的稳定性、体内血药浓度和包封率。

各组药物分组情况如下：

A组：左旋多巴甲酯缓释微球采用本发明W/O/W的方法制备得到，其中左旋多巴甲酯含量为5％，高分子辅料含量为95％。

B组：苄丝肼缓释微球采用本发明的W/O/W方法制备得到，其中苄丝肼含量为5％，高分子辅料含量为95％。

C组：苄丝肼缓释微球采用本发明的(S/O/W)方法制备得到，其中苄丝肼含量为5％，高分子辅料含量为95％。

D组：左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释微球(W/O/W)方法制备得到，其中苄丝肼含量为2.5％，左旋多巴甲酯含量为2.5％，高分子辅料含量为95％。

E组：司来吉兰缓释微球采用中国专利申请号200910201414.X专利文献报道的O1/O2乳化液中干燥方法制备得到司来吉兰缓释微球，其中司来吉兰缓释微球中的卡巴拉汀含量为5％，高分子辅料含量为95％。

F组：卡巴拉汀缓释微球采用中国专利申请号200910201416.9专利文献报道的O1/O2乳化液中干燥方法制备得到卡巴拉汀缓释微球，其中卡巴拉汀缓释微球中的卡巴拉汀含量为5％，高分子辅料含量为95％。

H组：左旋多巴纳米制剂采用中国专利申请号200410030559.5专利文献报道的方法制备得到左旋多巴纳米制剂。

各组药物实验结果如下：

实施例六用途实验

1.偏侧帕金森病大鼠模型的制作

SD大鼠(180-220g)3％戊巴比妥醛麻醉后，剃毛刀剪去头部的毛，先后用2％碘酒与75％酒精棉球消毒头部皮肤。沿矢状缝作6cm长切口，小心剥离筋膜和肌肉，推开骨膜，暴露骨缝，用3％的双氧水洗洁，然后插入耳棒，先将一侧的耳棒轻轻插入外耳道，碰到骨性外耳道底后将耳棒固定，然后把另一侧耳棒同样插入同定，调整上颌固定器的螺丝，将大鼠的上门齿塞进上齿固定板的槽内，并装好两侧眼眶固定杆，最后旋紧全部螺丝。参照Paxinos和Watson的大鼠全脑立体定位图谱，坐标为(1)前囟后3.7mm，矢状缝右侧1.7mm，颅骨骨膜下7.8mm，门齿线-2.4mm；(2)前囟后4.4mm，矢状缝右侧1.2mm，颅骨骨膜下7.8mm，门齿线-2.4mm。6-OHDA(无菌生理盐水新鲜配制，含0.2％抗坏血酸，浓度为4mg/ml)二靶点毁损一侧纹状体建立PD大鼠偏侧毁损模型。微量进样器每点注射6-OHDA 4ul，注射速度1ul/min，留针3分钟。术后三周大鼠腹腔内注射阿朴吗啡0.5mg/kg(用含1％抗坏血酸的生理盐水新鲜配制)，诱导其向健侧旋转，每周一次，每次30分钟，连续四周，旋转次数在7次/分以上并保持稳定者视为建模成功大鼠。

2.实验分组

将48只制模成功帕金森大鼠随机分成八组：每组6只。

第一组：PD组(生理盐水治疗，每天一次，连续两周)

第二组：苄丝肼组(10mg/kg，s.c.每天一次，连续两周)

第三组：左旋多巴甲酯组(10mg/kg，s.c.每天一次，连续两周)，

第四组：左旋多巴甲酯和苄丝肼组(5mg的左旋多巴甲酯/kg，s.c.和5mg的苄丝肼/kg，s.c.每天一次，连续两周)

第五组：苄丝肼微球组180mg/kg，皮下注射、肌肉注射、腹腔注射或颅腔注射一次，其中180mg苄丝肼微球中含有苄丝肼90mg)，

第六组：左旋多巴甲酯微球组(180mg/kg，皮下注射、肌肉注射、腹腔注射或颅腔注射一次，其中180mg左旋多巴甲酯微球中含有左旋多巴甲酯90mg)，

第七组：左旋多巴甲酯微球和苄丝肼微球组(70mg苄丝肼微球/kg，皮下注射、肌肉注射、腹腔注射或颅腔注射一次，其中70mg苄丝肼微球中含有苄丝肼35mg，70mg左旋多巴甲酯微球/kg，皮下注射、肌肉注射、腹腔注射或颅腔注射一次，其中70mg左旋多巴甲酯微球中含有左旋多巴甲酯35mg)，

第八组：左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物微球组(140mg/kg，皮下注射、肌肉注射、腹腔注射或颅腔注射一次，其中140mg混和药物微球中含有苄丝肼35mg和左旋多巴甲酯35mg)。

3.异常不自主运动(AIM)评分

在治疗的第1，2，4，6，8，10，12，14天进行AIM评分，每组大鼠给予相应治疗后每隔20分钟进行一次AIM评分，共进行2小时，每次观察1分钟。共分成4部分进行评分(上肢AIM、口面部AIM、轴性AIM和运动AIM)，每部分又根据其有无和严重程度分5个等级(0-4)：0：无；1：AIM存在不到观察时间的50％；2：AIM存在大于观察时间的50％；3：持续存在，刺激使停止；4：持续存在，刺激不能使之停止。各组异常不自主运动(AIM)评分结果见表1

表1：各组异常不自主运动(AIM)评分结果

各组	上肢AIM	口面部AIM	轴性AIM	运动AIM	总分
						第一组	4	4	4	4	16
第二组	4	4	4	4	16
						第三组	3	3	3	3	12
第四组	3	2	3	2	10

各组	上肢AIM	口面部AIM	轴性AIM	运动AIM	总分
						第五组	4	4	4	4	16
第六组	3	2	2	2	9
						第七组	2	1	2	1	6
第八组	1	1	1	2	5

4.前肢功能测定

我们进行大鼠前肢功能测定。方法如下：实验者一手固定大鼠躯体后半部和后肢，使其离地，另一手固定一侧前肢使另一前肢着地，以大鼠正手方向斜向一侧移动大鼠(5s内移动90cm)，记录移动时着地侧前肢步数。交替测量两侧上肢的跨步数。前肢功能测定结果见表2

表2前肢功能测定结果

5.结果

从表1的结果可知：微球皮下注射降低各种类型的AIM评分。从表2的结果可知：6-OHDA损伤后大鼠的前肢协调能力下降，微球皮下注射后其协调能力上升，这表明左旋多巴引起的异动症阻碍了大鼠的协调功能。但微球皮下注射明显减轻大鼠协调能力的下降。

左旋多巴甲酯能通过血脑屏障，但是左旋多巴甲酯，左旋多巴甲酯微纳米，左旋多巴甲酯缓释微球容易被体内酶降解而失活。苄丝肼虽然不能通过血脑屏障，但是可以防止左旋多巴甲酯，被体内的酶降解，苄丝肼和左旋多巴甲酯起到协同的作用。从表1的结果可知：两药(第七组：左旋多巴甲酯微球和苄丝肼微球组，第八组：左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物微球组)有明显协同作用，较单用(第五组：苄丝肼微球组，第六组：左旋多巴甲酯微球组)可显著降低AIM评分，两药组合在提高疗效的同时可大幅降低治疗费用。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物缓释微球组合物，按重量百分比该组合物由以下组分组成：

可降解的疏水聚合物                50％-99％

左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物      1％-50％，

其中左旋多巴甲酯和苄丝肼的重量比为1∶1-4∶1。

2.根据权利要求1所述的混和药物缓释微球组合物，其特征在于：所述的可降解的疏水聚合物选自聚乳酸-羟基乙酸、聚乳酸或聚己内酯一种或其混合物。

3.根据权利要求1或2所述的混和药物缓释微球组合物，其特征在于：所述的组合物粒径为40-500μm。

4.根据权利要求3所述的混和药物缓释微球组合物，其特征在于：所述的组合物粒径为250-500μm。

5.制备权利要求1所述的混和药物缓释微球组合物的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：

a，将左旋多巴甲酯和苄丝肼混和药物制备成水溶液；

b，将步骤a得到的水溶液加入到可降解的疏水聚合物有机溶液中，

c，将步骤b得到的混悬液加入到重量百分比浓度为0％-10％的氯化钠溶液和重量百分比浓度为1％-5％聚乙烯醇表面活性剂中乳化；

d，将步骤c得到的复乳溶液加入到重量百分比浓度为1％-10％的氯化钠溶液固化；

e，将步骤d得到的微球进行离心收集，除去表面活性剂和氯化钠，得到混和药物缓释微球组合物。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：步骤b中所述的可降解的疏水聚合物选自聚乳酸-羟基乙酸、聚乳酸或聚己内酯一种或其混合物，可降解的疏水聚合物有机溶液中的有机溶剂为：二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、庚烷、氯仿或丙酮。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：所述的聚乳酸-羟基乙酸、聚乳酸或聚己内酯的分子量的大小分别为：6000-500,000、6000-1,000,000或10,000-5,000,000。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述的聚乳酸-羟基乙酸、聚乳酸、聚己内酯或它们的任意混合物的有机溶液浓度为5％-30％。

9.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：步骤c中所述的乳化时间1-5min，步骤d中所述的固化时间1-4小时。

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