CN116099007A - 一种局麻药与生物碱的帕莫酸盐缓释组合物 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，涉及一种局麻药与生物碱的帕莫酸组合物的制备及其在镇痛中的应用。本发明所述的局麻药选自布比卡因、罗哌卡因、左布比卡因、辛可卡因、甲哌卡因、普鲁卡因、利多卡因和丁卡因其中的任何一种。本发明所述的生物碱选自马钱子碱，延胡索乙素，汉防己甲素，青藤碱，吴茱萸碱，吴茱萸次碱，草乌甲素，高乌甲素，千金藤素，罗通定，氯化两面针碱，石杉碱甲和小檗碱其中的任何一种。本发明所述的组合物内局麻药与生物碱的摩尔数之和与帕莫酸的摩尔数比例范围在3∶1～1∶2之间。本发明所述的组合物适用于各种疼痛的缓解。

Description

一种局麻药与生物碱的帕莫酸盐缓释组合物

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及局麻药和生物碱与帕莫酸的组合物的配比、制备方法及应用。

背景技术

疼痛是指伤害性刺激引起机体的不愉快感觉和情感经历，它是继呼吸、血压、脉搏、心率之后的第五大生命体征，疼痛控制不佳将会对机体各个系统产生影响，如疼痛引发应激反应，促使体内多种激素释放，此外，疼痛还兴奋交感神经，升高血压，加快心率和心肌耗氧量，使患者精神、情绪改变。术后疼痛是一种特殊类型的疼痛，产生的机制主要与手术引起的外周敏感化、中枢敏感化、术中高剂量阿片类药物诱发的痛觉过敏以及末梢神经损伤导致的神经性疼痛有关。疼痛是不可避免的，大于80％的患者在术后急性期会经历疼痛。术后疼痛与身体功能和生活质量受损、发病率增加、恢复时间延长、并发症风险增加和慢性术后疼痛有关，控制不佳还会增加住院时间、再入院率和下床时间，导致更高的医疗费用。

阿片类药物通常被认为是缓解术后急性疼痛的金标准，在术后急性期服用阿片类药物会增加与阿片相关的不良反应和长期使用阿片类药物的风险，例如滥用、误用、成瘾、过量、转移，因此有必要采取措施限制手术后阿片类药物服用量。

1993年Kehlet等提出了多模式镇痛的概念，多模式镇痛是指联合应用不同作用机制的药物和/或不同镇痛方法，避免单一镇痛方法的不足，发挥镇痛协同或相加功效，从而降低单一用药剂量和副作用，快速起效，延长镇痛时间。作用于疼痛病理生理的不同时相和/或不同靶位，以达到效应-不良反应比最大化。多模式镇痛的应用不仅能为术后患者提供良好的镇痛，而且还能降低阿片类药物相关的不良反应，从而为疼痛管理提供了更多的治疗方案。多模式镇痛的方法很多，在术后镇痛方面的应用主要包括以下三种：阿片类药物或曲马多与非甾体抗炎药(NSAIDs)复合应用；阿片类药物与局麻药复合用于区域阻滞；局部麻醉药切口浸润(区域阻滞或神经干阻滞)联合全身性镇痛药物。

阿片类药物或曲马多与NSAIDs或对乙酰氨基酚的复合应用是治疗术后疼痛尤其是中重度疼痛的常用药物组合。一般认为，NSAIDs或对乙酰氨基酚与阿片类药物配合使用，在大手术中可降低吗啡用量约20％～50％，显著降低了阿片类药物的不良反应。

NSAIDs类药物是当今多模式镇痛的基础用药，但存在心脑血管、肾脏以及消化道的不良反应等缺点。近年来，国内上市了一批阿片受体激动拮抗剂，包括地佐辛、喷他佐辛、布托啡诺等，作用机制为激动κ阿片受体，部分拮抗μ受体，降低了呼吸抑制、成瘾等不良反应的发生，此类药与吗啡合用时，可降低吗啡的不良反应，但镇痛作用未必相加，或有可能减弱，不能发挥1+1大于2的协同作用。

局部麻醉剂通常用作非阿片类镇痛剂的替代品。然而，单独使用局部麻醉剂，无论是局部渗透还是区域阻滞，术后镇痛持续时间短(≤12小时)。在炎症过程中发生的组织酸中毒(即由于损伤、感染或手术)会减少局部麻醉剂对神经细胞的渗透，这会削弱镇痛作用，疼痛会持续数天。鉴于患者在术后72小时内经历最剧烈的疼痛，需要在术后提供可以持久缓解疼痛的局部麻醉剂。Neosaxitoxin、(布比卡因和美洛昔康聚合物凝胶)、(布比卡因胶原蛋白植入剂)、(布比卡因的蔗糖醋酸异丁酸酯缓释制剂)和(布比卡因多囊脂质体)是一些上市局部麻醉剂的配方，旨在持续缓解术后疼痛。

生物碱(alkaloid)是指来源于植物界的一类含氮有机化合物，多呈碱性，有较复杂的环状结构，氮原子结合在环内，有显著生物活性，是中草药中重要的有效成分之一。近年来的研究发现，生物碱具有抗肿瘤、抗菌消炎、抗病毒、抗心律失常、镇痛、解痉等生物活性。

本发明旨在创造一种天然植物中生物碱与局麻药的特殊组合物，发挥较长时间的镇痛效果，同时具有抑制炎性反应的作用，比目前文献报道、或者已经上市产品更优秀的镇痛表现。

发明内容

本发明提供一种局麻药/生物碱的帕莫酸盐组合物，发挥出长效抗炎、镇痛的优势。

本发明所述生物碱，是存在于自然界中的一类含氮的碱性有机化合物，有显著的生物活性，是重要的中草药有效成分。本发明涉及的生物碱、局麻药物的分子式和CAS编号如下：

马钱子碱的分子式为C₂₁H₂₂O₂N₂，CAS号57-24-9。汉防己甲素的分子式为C₃₈H₄₂N₂O₆，CAS号518-34-3。青藤碱的分子式为C₁₉H₂₃NO₄，CAS号115-53-7。吴茱萸碱的分子式为C₁₉H₁₇N₃O，CAS号：518-17-2。吴茱萸次碱的分子式为：C₁₈H₁₃N₃O，CAS号：84-26-4。草乌甲素的分子式为C₃₅H₄₉NO₉，CAS号：107668-79-1。高乌甲素的分子式为C₃₂H₄₄N₂O₈，CAS号：32854-75-4。千金藤素的分子式为C₃₇H₃₈N₂O₆，CAS号：481-49-2。罗通定的分子式为，C₂₁H₂₅NO₄，CAS号：10097-84-4。氯化两面针碱的分子式为：C₂₁H₁₈NO₄Cl，CAS号：13063-04-2。石杉碱甲的分子式为C₁₅H₁₈N₂O，CAS号：120786-18-7。布比卡因分子式为C₁₈H₃₀N₂O，CAS号：1330172-81-0。左布比卡因分子式为C₁₈H₂₈N₂O，CAS号：27262-47-1。罗哌卡因的分子式为C₁₇H₂₆N₂O，CAS号：84057-95-4。辛可卡因的分子式为C₂₀H₂₉N₃O₂，CAS号：85-79-0。甲哌卡因的分子式为C₁₅H₂₂N₂O，CAS号：22801-44-1。普鲁卡因的分子式为C₁₃H₂₀N₂O₂，CAS号：59-46-1。利多卡因的分子式为C₁₄H₂₂N₂O，CAS号：137-58-6。丁卡因的分子式为C₁₅H₂₄N₂O₂，CAS号：94-24-6。帕莫酸(又名双羟萘酸)的分子式为C₂₃H₁₆O₆，CAS号：130-85-8。

为了获得长效抗炎、镇痛效果的组合，本发明尝试了将局麻药、生物碱联合与各种不同的酸根成盐反应，这些酸根包括：棕榈酸、花生酸、硬脂酸、酒石酸、二对甲基苯甲酰酒石酸、十二烷酸、十四烷酸、富马酸、马来酸、己酸钠、癸酸钠、肉豆蔻酸钠、油酸钠、苯磺酸、樟脑磺酸钠、乙二磺酸二钠、庚烷磺酸钠、辛烷磺酸钠、癸烷磺酸钠、十二烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠和脱氧胆酸钠等，但是均不能达到预期的效果。在此基础上，发明人经过大量的摸索后，将局麻药和生物碱与帕莫酸以特定的比例配合，反应得到的局麻药/生物碱的帕莫酸盐，其水溶解度降低，或者油溶性提高，在此基础上，进一步制成药物递送系统。

本发明的目的在于提供一种局麻药和生物碱(“局麻药/生物碱”)的帕莫酸盐，首次将局麻药与生物碱联合，共同与帕莫酸作用成盐，延长局麻药和生物碱体内滞留时间，从而实现缓慢释放目的。更重要的，局麻药与生物碱的联合应用，展现多模式镇痛优势，进一步提高抗炎、镇痛功效。此外，将局麻药和生物碱联合，与帕莫酸盐制成长效制剂，患者可实现每天至每3个月给药一次，提高药物的治疗效果与患者的依从性，减少不良反应的发生。

本发明使用的帕莫酸结构中含有2个羧基，可全部解离成带2个负电荷的羧酸根离子，理论上可以同2个相同的阳离子成盐，同样也可以同2个不同的阳离子成盐，而局麻药和生物碱都能解离成为阳离子，这就为阳离子和局麻药与帕莫酸形成复盐提供理论基础，复盐的结构式可用如下示意图表示。

本发明提供了局麻药/生物碱的帕莫酸盐，结构可用分子通式“(局麻药)_a-(C₂₃H₁₆O₆)_c-(生物碱)_b-·nH₂O”表示，其中，右下角字母a、b和c分别代表局麻药、生物碱、帕莫酸的分子数，由于成盐的随机性，以及abc不同摩尔比的盐无法全部分离精制，该结构式中a、b和c的数值是根据含量测定计算得到，a，b和c都是小数。本发明提供的局麻药/生物碱的帕莫酸盐，(a+b)∶c＝3∶1～1∶2，n＝0～10。

本发明所述的局麻药/生物碱的帕莫酸盐，包括晶型物、溶剂化物形式或无定形物，其中，n＝0时晶型物为无水晶型，n不为0时晶型物为水合物晶型，所述晶型物也可以为多晶型物。

本发明所述盐或多晶型物的固体形式可以具有多种不同的内部结构和理化性质，这取决于用于合成所述盐体的反应条件或结晶化/共结晶化的条件。此外，本发明所述盐或多晶型物的固体形式可以是该盐的共晶体的结晶或无定形形式的混合物。

本发明所公开的局麻药/生物碱的帕莫酸盐的制备方法，包括以下方法：

方法1：常温下将局麻药和生物碱，溶解或分散于酸性水溶液中，将其滴加到帕莫酸的碱水溶液中，进行中和反应，生成局麻药/生物碱的帕莫酸盐，搅拌，析出沉淀物，过滤，使用水洗，干燥，即得；其中所述的酸性水溶液，为含有有机酸或无机矿酸及其盐中的一种以上的组合，酸的种类具体包括盐酸、硫酸、磷酸、乙酸、草酸、枸橼酸或苹果酸，盐为钾、钠或铵离子，优选磷酸与磷酸钠盐的组合；所述的碱性水溶液，碱选自氨水、碳酸钾、碳酸钠、三乙胺、吡啶、氢氧化钠或氢氧化钾中的一种，优选氢氧化钠。

方法2：将局麻药与生物碱溶于酸性溶液，连同帕莫酸碱水溶液加入到第二反应溶剂中，搅拌反应，析出沉淀物，过滤得滤渣，加适量去离子水水洗，干燥，即得；局麻药、生物碱、帕莫酸可按照方法1中所述分别制成可溶性的溶液；第二反应溶剂选自水、甲醇、乙醇、丙酮、四氢呋喃、乙腈中的一种或者几种的混合溶剂。

方法3：将局麻药、生物碱和帕莫酸加入到有机溶剂中，局麻药/生物碱的重量之和(单位：g)与有机溶剂的体积(单位：ml)比为1∶(3～80)，加热至温度为28～90℃，搅拌溶解1～2小时后，静置或搅拌1～72小时，旋蒸除去适量溶剂，析出沉淀物(或静置后取上层清液急速冷却，或静置后取上层清液自然冷却，或静置后取上层清液自然挥发)，过滤得滤渣，在35～50℃下真空干燥得成品。其中，所述的有机溶剂可以为醇类溶剂，例如甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、2-丁醇、2-甲基-1-丙醇和2-甲基-2-丙醇或叔丁醇；酯类溶剂，例如乙酸乙酯、乙酸甲酯、甲酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸正丙酯、乙酸异丙酯、乙酸正丁酯、乙酸异丁酯、乙酸仲丁酯或乙酸叔丁酯；醚类溶剂，例如二乙基醚、二丁基醚、丁基甲基醚、仲丁基甲基醚、四氢呋喃、二氧杂环乙烷、二甲氧基乙烷、二甘醇二甲基醚、甲基四氢呋喃、二氧六环、乙二醇二甲醚、甲基叔丁基醚或异丙醚；酮类溶剂，例如丙酮、甲乙酮、甲基异丁基酮、环己酮或4-甲基-2-戊酮；烷烃类溶剂，例如二氯甲烷，1，2-二氯乙烷、氯仿、四氯化碳、硝基乙烷、正己烷、环己烷、戊烷或正庚烷；芳烃类溶剂，例如苯、甲苯或二甲苯；腈类溶剂，例如乙腈或丙二腈；酰胺类溶剂，例如甲酰胺、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮和六甲基磷三酰胺；所述有机溶剂优选乙醇、甲醇、乙醚、丙酮、乙酸乙酯、二甲亚砜、二甲基甲酰胺、四氢呋喃中的一种或至少两种的混合溶剂。

方法4：将局麻药与生物碱，加入有机溶剂和水性介质的混合溶剂中，加热回流溶解，溶解温度为30～90℃，再加入帕莫酸，搅拌溶解；再加入适量混合溶剂，室温静置或搅拌析晶，旋蒸除去适量溶剂，放置1-72小时后有晶体析出，过滤除去溶剂得滤渣，在40～50℃下真空干燥得成品。其中，所述的有机溶剂优选甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、二甲亚砜、二甲基甲酰胺、四氢呋喃中的一种或至少两种的混合溶剂，水性介质优选水、磷酸盐、碳酸盐、醋酸盐、氯化物的一种或至少两种混合。

本发明并不局限于上述的酸、碱、无机盐、有机溶剂种类，其他种类的试剂也可以制成局麻药/生物碱的帕莫酸盐。

本发明在上述制备方法的基础上，利用成盐过程可以发生在油相、水相等体系中的特点，进一步扩展制备方法，将成盐过程与制剂制备过程整合，制成局麻药/生物碱的帕莫酸盐缓释制剂组合物。

本发明提供了一种局麻药/生物碱的帕莫酸盐的可注射混悬液，该混悬液包括局麻药/生物碱的帕莫酸盐、混悬溶剂和药学上可接受的辅料。以低溶解度的局麻药/生物碱的帕莫酸盐为活性成分，配合混悬溶剂和药学上可接受的辅料，制成可供注射的混悬液，在体内形成药物贮库，减缓体内释药速度，达到长效治疗的目的。

本发明所述局麻药/生物碱的帕莫酸盐混悬液的平均粒径不大于20μm，可以不大于19μm，可以不大于18μm，可以不大于17μm，可以不大于16μm，可以不大于15μm，可以不大于14μm，可以不大于13μm，可以不大于12μm，可以不大于11μm，可以不大于10μm，可以不大于9μm，可以不大于8μm，可以不大于7μm，可以不大于6μm，可以不大于5μm，可以不大于4μm，可以不大于3μm，可以不大于2μm，可以不大于1μm，可以不大于0.5μm，还可以不大于0.3μm。上述粒径特征使该混悬液具有体内均匀释放药物的优势，可有效避免突释或释放速度过缓。

本发明所述混悬液包含药学上可接受的辅料，具体种类包括润湿剂、助悬剂、密度调节剂和渗透压调节剂的一种或者几种的组合，具体选择描述如下：

所述混悬溶剂选自：注射用水、生理盐水中的一种或者至少一种的混合物；

所述润湿剂选自：聚山梨酯-20、聚山梨酯-40、聚山梨酯-60、聚山梨酯-80、大豆磷脂、卵磷脂、泊洛沙姆、维生素E琥珀酸聚乙二醇酯(TPGS)、聚乙烯己内酰胺-聚醋酸乙烯酯-聚乙二醇接枝共聚物(Soluplus)中的一种或者至少一种的混合物；

所述助悬剂选自：羧甲基纤维素钠、聚维酮、聚乙二醇、壳聚糖或其衍生物、海藻酸盐、甲基纤维素、聚乙烯醇、黄原胶、阿拉伯胶中的一种或者至少一种的混合物；

所述密度调节剂选自：甘油、丙二醇、聚乙二醇中的一种或者至少一种的混合物；

等渗调节剂选自：葡萄糖、果糖、蔗糖、海藻糖、氯化钠、右旋糖酐、甘露醇、山梨醇中的一种或者至少一种的混合物；

上述润湿剂的用量可以为局麻药/生物碱的帕莫酸盐组合物总量的0.02～8wt％，上述助悬剂的用量可以为药物组合物总量的0.3～40wt％。

本发明提供的上述助悬剂、润湿剂、密度调节剂，同样也适用于本发明所述的其他剂型组合物。

本发明还提供了上述局麻药/生物碱的帕莫酸盐的可注射冻干粉或干混悬剂。干混悬剂和冻干粉的优势在于提高物理和化学稳定性。

本发明还提供上述局麻药/生物碱的帕莫酸盐的可注射冻干粉的制备方法，包括以下步骤：将局麻药/生物碱的帕莫酸盐粉末加入预定量混悬溶剂和药学上可接受的辅料，经研磨至预定粒度，补足剩余混悬溶剂以及药用辅料，混匀，分装于西林瓶中，以冷冻干燥的方式冻干，即得。

本发明还提供了上述局麻药/生物碱的帕莫酸盐的干混悬剂制备方法，包括以下步骤：将局麻药/生物碱的帕莫酸盐粉末研磨至预定粒度，得局麻药/生物碱的帕莫酸盐干粉，备用；将助悬剂、润湿剂和渗透压调节剂混匀，研磨至预定的粒度，备用；将上述局麻药/生物碱的帕莫酸盐粉末和基质混匀，即得。

本发明提供一种局麻药/生物碱的帕莫酸盐凝胶递送系统，包含局麻药/生物碱的帕莫酸盐、凝胶材料、溶剂、pH调节剂；

所述的凝胶材料中，可以是聚合物或小分子。

所述的聚合物是指包含重复结构单元的分子，通过化学键以线性、环状、支化、交联、树枝状或其组合方式连接，其可以是合成来源、生物来源或两者的结合。聚合物还可以包含一个或多个其他化学基团和/或一个或多个部分，例如一个或多个官能团。可溶性聚合物具有至少0.5kDa的分子量，至少1kDa的分子量、至少2kDa的分子量、至少3kDa的分子量或至少5kDa的分子量。如果聚合物是可溶的，则其优选具有至多1000kDa，如至多750kDa，如至多500kDa，如至多300kDa的分子量，如至多200kDa，如至多100kDa。对于不溶性聚合物，例如交联水凝胶，不能提供有意义的分子量范围。

凝胶材料的具体种类选自：2-甲基丙烯酰基-氧乙基磷酸胆碱、聚丙烯酸、聚丙烯酸酯、聚丙烯酰胺、聚烷氧基聚合物、聚酰胺、聚酰氨基胺、聚氨基酸，聚酸酐，聚天冬酰胺，聚丁酸，聚乙醇酸，聚对苯二甲酸丁二醇酯，聚己内酯，聚碳酸酯，聚氰基丙烯酸酯，聚二甲基丙烯酰胺，聚酯，聚乙烯，聚乙二醇，聚环氧乙烷，聚磷酸乙酯，聚乙基恶唑啉，聚丙烯酸羟乙酯，聚羟乙基-恶唑啉，聚羟甲基丙烯酸酯、聚羟丙基甲基丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸烷基酯、聚羟丙基恶唑啉、聚乳酸、聚乳酸乙醇酸共聚物、聚甲基丙烯酸酯、聚甲基恶唑啉、聚磷腈、聚原酸酯、聚恶唑啉、聚丙二醇、聚硅氧烷、聚氨基甲酸酯、聚乙烯醇、聚乙烯基胺、聚乙烯基甲基醚、聚乙烯基吡咯烷酮、有机硅、纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、几丁质、壳聚糖及其衍生物(氯化物、羧甲基化、季铵盐等)、壳寡糖、海藻酸盐、葡聚糖、糊精、明胶、纤维蛋白胶、胶体硅酸镁或硅酸钠，磷脂及其衍生物、羟基磷灰石凝胶、磷酸三钙凝胶、黄原胶、角叉菜胶、透明质酸或衍生物、官能化透明质酸、甘露聚糖、果胶、鼠李糖、半乳糖醛酸、淀粉、羟烷基淀粉、羟乙基淀粉或其他基于碳水化合物的聚合物、木聚糖或其共聚物。

本发明所述的凝胶剂采用的溶剂，具体为水、乙醇、低分子量聚乙二醇、甘油、丙二醇中的至少一种；该凝胶递送系统任选地包含一种或多种药学可用的材料。可分类为缓冲剂、等渗调节剂、防腐剂、抗吸附剂、抗氧剂、增粘剂/增稠剂或其他助剂。在某些情况下，一种材料可能具有双重甚至三重功能。

缓冲剂是维持体液pH稳定，能被生理耐受的具有缓冲能力的水溶性无机盐、有机酸或有机碱，具体种类包括磷酸盐、磷酸二氢盐、磷酸一氢盐、碳酸氢盐、琥珀酸盐、乳酸、氨丁三醇、硼酸、组氨酸、柠檬酸盐、乙酸盐、硫酸盐、硝酸盐、氯化物、氢氧化物，阳离子可以是Na⁺、K⁺、NH₄ ⁺等。

抗氧剂可抵御局麻药、生物碱被环境中的氧所破坏，具体种类包括抗坏血酸、四氢嘧啶、蛋氨酸、谷胱甘肽、硫代甘油、桑黄素、聚乙烯亚胺、没食子酸丙酯、维生素E等抗氧化剂。此外，诸如柠檬酸、依地酸二钠、六磷酸盐、巯基乙酸等螯合剂也可以使用，提高抗氧能力。

本领域技术人员理解，由聚合反应得到的聚合产物并非都具有相同的分子量，而是呈现出分子量分布特征。因此，如本文所用，分子量范围、分子量、聚合物中单体的数量范围和聚合物中的单体数量是指单体的数均分子量。如本文所用，术语“数均分子量M_n和质均分子量M_w”指分别单个聚合物的分子量的数学平均值和质量平均值。

本发明提供一种局麻药/生物碱的帕莫酸盐的凝胶制备方法，将局麻药/生物碱的帕莫酸盐和胶凝材料加入玻璃容器中，然后根据局部麻醉剂的性质加热至约35℃至70℃以用于将材料混合均匀，形成均匀凝胶后，自然冷却至环境温度，加入其他材料，搅拌均匀，即得。

本发明还提供了一种局麻药/生物碱的帕莫酸盐乳剂，包含上述局麻药/生物碱的帕莫酸盐、以及药学上可接受的辅料。

本发明所述药学上可接受的辅料包括乳化剂、辅助乳化剂、油相、注射用水。

所述乳化剂和助乳化剂是亲水-亲油平衡(HLB)值在3～16之间的非离子表面活性剂，或者磷脂及其衍生物；

所述乳化剂具体种类选自：聚山梨酯20，聚山梨酯40，聚山梨酯60，聚山梨酯80，聚氧乙烯蓖麻油(EL35)，单亚油酸甘油酯，聚氧乙烯氢化蓖麻油(RH40或RH60)，大豆磷脂、卵磷脂、聚氧乙烯-15-羟基硬脂酸酯(solutol HS15)、聚乙二醇-7硬脂酸酯、聚氧乙烯十二烷醚(Brij35)、聚氧乙烯硬脂酸酯(Brij78)、油酸聚乙二醇甘油酯、烷基糖苷、聚甘油脂肪酸酯、泊洛沙姆188、泊洛沙姆407中的至少一种；

所述辅助乳化剂选自：乙醇、丙二醇、二乙二醇单乙醚(transcutol)、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯(labrasol)、Soluplus、月桂酸聚乙二醇甘油酯(gelucire44/14)中的至少一种；

所述油相为一种或多种植物油、动物油或合成矿物油，具体选自：蓖麻油、大豆油、玉米油、橄榄油、亚麻籽油、亚油酸乙酯、葵花籽油、鱼油、葡萄籽油、椰子油、花生油、芝麻油、小麦胚芽油、棉籽油、杏仁油、中链和/或长链脂肪酸甘油三酯、中链和/长链脂肪酸酯、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、油酸、亚油酸中的至少一种；

所述的局麻药/生物碱的帕莫酸盐乳剂，还含有渗透压调节剂、物理稳定剂、抗氧剂、增稠剂中的一种或多种；

本发明提供的乳剂稳定剂，具体种类选自甘氨酸、脯氨酸、环糊精、羟丙甲纤维素、组氨酸、甜菜碱、白蛋白、L-肉碱、牛磺酸、单硬脂酸甘油酯、果胶、聚乙烯醇和丙二醇。稳定剂浓度在本领域技术范围内，取决于特定的稳定剂和组合物，可以在0.0001％到20％w/v之间波动。

本发明提供的乳剂，还使用增稠剂。增稠剂是本领域技术人员已知的。

本发明使用的抗氧剂可以包含在乳剂组合物。具体种类涉及α-生育酚、黄酮类物质(例如白藜芦醇、表没食子儿茶素-3-没食子酸酯、槲皮素、柚皮素、飞燕草素)、辅酶Q10、去甲二氢愈创木酸、抗坏血酸钠、L-抗坏血酸、N-乙酰肌肽、柠檬酸、异抗坏血酸、L-6-抗坏血酸棕榈酸酯、肌肽、谷胱甘肽、L-半胱氨酸、抗坏血酸半胱氨酸。该抗氧剂用量可以由技术人员确定，取决于所使用的特定抗氧化剂和组合物的其他组分。用量范围在0.0001％和5.0％w/v之间，包括端点。

本发明所述乳化剂的用量可以为局麻药/生物碱的帕莫酸盐药物组合物总量的0.1～60％w/v，辅助乳化剂的用量可以为药物组合物总量的0.05～60％w/v，油相的用量可以为药物组合物总量的0.005～30％w/v。

本发明所述局麻药/生物碱的帕莫酸盐乳剂组合物，其特征在于，乳液粒子的平均粒径为15nm～900nm；并且多分散系数(PDI)在0.020～0.380，或0.020～0.300，或0.020～0.200的范围内，或小于0.200；

本发明所述的局麻药/生物碱的帕莫酸盐乳剂组合物中，局麻药或生物碱的浓度为0.001mg/ml至150mg/ml，或0.01mg/ml至120g/ml，或0.01mg/ml至100mg/ml；

本发明还提供局麻药/生物碱的帕莫酸盐乳剂组合物的制备方法，包括以下步骤：

a)制备脂质相，将局麻药/生物碱的帕莫酸盐，与部分乳化剂和助乳化剂溶解于油相；b)制备水相，另取一些乳化剂和助乳化剂溶解在水中；c)用水相滴定脂质相得到粗乳；d)使用高压均质、探头超声或高压微射流进一步处理得到乳剂

本发明还提供局麻药/生物碱的帕莫酸盐的固体脂质纳米粒，包含脂质相、水、表面活性剂、助表面活性剂和脂质助溶剂；所述的脂质相为甘油酯与脂肪酸的脂质和助溶剂的混合物；其中局麻药/生物碱的帕莫酸盐包埋或溶解于在脂质相中；

所述甘油酯选自甘油单酯、甘油二酯、甘油三酯或它们的混合物，具体种类包括山嵛酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三油酸甘油酯、三棕榈酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、油酰聚氧乙烯6甘油酯、亚油酰聚乙二醇6甘油酯、聚甘油3二油酸酯、甘油单亚油酸酯、甘油单油酸酯、二甘醇单乙醚、甘油二山嵛酸酯、甘油二硬脂酸酯、甘油二棕榈硬脂酸酯、亚油酰聚氧化甘油6甘油酯、山嵛基醇、鲸蜡醇和鲸蜡醇钾；

所述的脂肪酸选自饱和C4-C28脂肪酸、不饱和C4-C28脂肪酸；

所述表面活性剂选自环氧乙烷共聚物、环氧丙烷共聚物、泊洛沙姆、失水山梨糖醇环氧乙烷/环氧丙烷共聚物、聚山梨酯20、聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯80、山梨糖酯、月桂山梨坦、棕榈山梨坦、油酸山梨坦、硬脂山梨坦、烷基芳基聚醚醇聚合物、泰洛沙泊、胆汁盐、胆酸盐、甘胆酸盐、牛磺胆酸盐、牛磺脱氧胆酸盐、双子表面活性剂、醇、二甘醇单乙醚、烷基糖苷、(氢化蓖麻油、长链脂肪醇)或它们的混合物；

所述辅助表面活性剂选自大豆磷脂、卵磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油、磷脂酸、磷酯酰丝氨酸或它们的混合物；

所述脂质助溶剂选自聚乙二醇、聚维酮、聚乙烯醇、甘油、transcutol、labrasol、gelucire44/14、氢化植物甘油酯、柠檬酸/乳酸/亚麻酸/油酸甘油酯、聚甘油-4-椰油酸酯、聚甘油-3-癸酸酯、capoylate及其衍生物、聚丙二醇、丙二醇或它们的混合物。

所述局麻药/生物碱的帕莫酸盐的固体脂质纳米粒中的助溶剂浓度为5％至8％w/w，所述上述固体脂质纳米粒中表面活性剂的浓度为8％至12％w/w。

所述局麻药/生物碱的帕莫酸盐的固体脂质纳米粒粒径在20～5000nm范围内。

所述局麻药/生物碱的帕莫酸盐的固体脂质纳米粒具有球形、椭圆形、长方形、各向异性和棒状。

本发明提供的局麻药/生物碱的帕莫酸盐的固体脂质纳米粒的方法，该方法包括以下步骤：(a)按照上述成盐制备工艺，将局麻药、生物碱、帕莫酸盐溶解于有机溶剂，搅拌1～3小时后，旋蒸除去有机溶剂，加入脂质助溶剂，在脂质熔点10℃以上的温度范围保存1～2小时；(b)将熔化的脂质添加到步骤(a)中以获得热脂质相；(c)制备包含水、表面活性剂和助表面活性剂的水性表面活性剂相，并将水性表面活性剂相保持在高于脂质熔化温度10℃以上的温度；(d)将步骤(b)的热脂质相加入步骤(c)的水性表面活性剂相中，以4000～20000rpm的高速剪切5～10分钟，得到初级粗乳液；(e)将步骤(d)的初级粗乳液在500至2000bar下进行2至10个循环的高压均质以获得局麻药/生物碱的帕莫酸盐的脂质纳米粒混悬液。

本发明还提供乳化超声低温固化法制备固体脂质纳米粒，采用上述方案a～d步骤制备初级粗乳液，将其置冰浴中(2～8℃)探头超声，即得固体脂质纳米粒混悬液。

所述局麻药/生物碱的帕莫酸盐的固体脂质纳米粒混悬液在2至25％的甘露醇、海藻糖、蔗糖、乳糖、葡萄糖中的至少一种喷雾干燥或冻干，即得固体脂质纳米粒组合物；

本发明还提供局麻药/生物碱的帕莫酸盐的药物递送系统为聚合物纳米粒，组成该递送系统的药学上可接受的辅料包括聚合物材料、等渗调节剂、缓冲剂。

本发明所述的聚合物材料，主要由两亲嵌段共聚物组成，该嵌段共聚物由AB二嵌段、ABA三嵌段或BAB三嵌段共聚物组成。所述两亲嵌段共聚物为具有亲水嵌段(B)和疏水嵌段(A)的嵌段共聚物，所述亲水嵌段(B)为选自由聚乙二醇、聚乙烯醇、聚维酮、聚丙烯酰胺或其衍生物组成的组中的至少一种，疏水性嵌段(A)是选自由聚酯、聚酸酐、聚氨基酸、聚原酸酯、聚磷腈、聚碳酸酯或其衍生物组成的组中的至少一种。其中所述胶束组成由紧密堆积的疏水聚合物核心和外部亲水聚合物层组成。

本发明还提供接枝型聚合物材料，具体选自壳聚糖的聚乙二醇接枝聚合物。

本发明还提供一种天然来源的聚合物材料，具体种类选自：白蛋白、酪蛋白、磷脂及其衍生物中的至少一种。

所述亲水嵌段(B)的数均分子量为500～50000道尔顿，所述疏水嵌段(A)的数均分子量为500～50000道尔顿。

本发明提供局麻药/生物碱的帕莫酸盐的聚合物纳米粒，基本由以下组成：

(a)含有70.00％至99.99％重量比的可生物降解的聚合物材料，和

(b)0.000001％-30％重量比的局麻药/生物碱的帕莫酸盐，其物理地包载于所述聚合物药物载体的疏水性聚合物核心内，并且不与所述疏水性聚合物核心共价结合。

本发明提供局麻药/生物碱的帕莫酸盐的聚合物纳米粒的制备方法，包括如下2个制备方案。方案一：

1)按上述成盐方法，制备局麻药/生物碱的帕莫酸盐；

2)取聚合物材料，加水或缓冲液，制成空白聚合物溶液；

3)将局麻药/生物碱的帕莫酸盐与空白聚合物溶液混合；

4)将所得混合物进行搅拌、加热、超声处理、溶剂蒸发或透析，得载药聚合物纳米粒溶液。

方案二：取局麻药、生物碱、帕莫酸、聚合物材料，置茄形瓶中，加有机溶剂溶解，作为贮备液。于20～40℃真空条件下旋转蒸发铺膜，加去离子水适量，20～50℃涡旋震荡3～30分钟，使用微孔滤膜过滤，即得。或者，取上述贮备液，置透析袋(截留分子量在3000以上)内，以水进行透析48小时，每4小时更换一次水，直至有机溶剂全部被除去，取透析袋内溶液，得载药聚合物纳米粒溶液。

所述有机溶剂为选自醇、丙酮、四氢呋喃、乙腈、二氧六环、乙醚、二氯甲烷、氯仿、二甲亚砜、二甲基甲酰胺中的至少一种。

其中所述醇为选自甲醇、乙醇、丙醇和丁醇中的至少一种。

所述有机溶剂的用量为所述组合物总重量的1.5至20wt％。

所述的聚合物纳米粒溶液制备方法，其特征在于，将局麻药/生物碱的帕莫酸盐和两亲嵌段共聚物胶束材料溶解于有机溶剂中的温度为30℃～70℃。

所述的聚合物纳米溶液制备方法，其特征在于，将水溶液加入到有机溶剂中，所得混合物形成纳米粒的步骤在20℃～50℃范围内下进行。

本发明所述的上述局麻药/生物碱的帕莫酸盐的聚合物纳米粒溶液，加入适量pH调节剂、渗透压调节剂，经冷冻干燥，制成局麻药/生物碱的帕莫酸盐的聚合物纳米粒的冻干粉。

本发明还提供一种局麻药/生物碱的帕莫酸盐微球组合物，该微球由局麻药/生物碱的帕莫酸盐、药学可用的微球材料、乳化剂和/或复凝聚材料组成。本发明所述的微球材料，具体为聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)或壳聚糖；乳化剂具体为聚乙烯醇(PVA)或泊洛沙姆其中至少一种；复凝聚材料为负电荷材料，具体种类包括三聚磷酸盐、海藻酸盐、透明质酸盐其中至少一种。

所述的局麻药/生物碱的帕莫酸盐微球，其特征在于，PLGA的重均分子量(Mw)为4000～80000道尔顿，乳酸单元和羟基乙酸单元的摩尔比为90∶10～10∶90；优选的，PLGA的重均分子量(Mw)为5000～60000道尔顿，乳酸单元和羟基乙酸单元的摩尔比为75∶25～50∶50；更为优选的，乳酸单元和羟基乙酸单元的摩尔比为75∶25或50∶50。

基于100重量份的局麻药或生物碱，丙交酯乙交酯共聚物的用量为100重量份～3000重量份，优选为200重量份～2000重量份，还优选为300～1000重量份。

本发明提供的微球，特征在于微球的粒径D90不大于150μm，优选不大于100μm，D10不小于0.7μm，优选不小于1μm，另外，优选地，优选D50在10～50μm，优选10～40μm的范围内。

本发明还提供微球递送系统的制备方法，有如下2个方案：

方案一为水包油包固体(S/O/W)复乳溶剂挥发法：先按照上述成盐方法制备局麻药/生物碱的帕莫酸盐，微粉化处理，备用；将PLGA溶解于适量有机溶剂中；将微粉化的局麻药/生物碱的帕莫酸盐粉末添加到上述PLGA溶液中；在冰浴中使用高速剪切机，以10000rpm以上的转速对PLGA体系剪切均质2分钟，形成油包固体乳液(S/O)；加适量乳化剂溶液稳定S/O乳，涡旋混合以形成S/O/W复乳。在搅拌条件下，将形成的复乳液转移到含有乳化剂的水溶液中，挥发除去有机溶剂。蒸发阶段的温度为25～42℃，蒸发时间为6～24小时。有机溶剂除尽之后，用去离子水反复洗涤微球并筛分以获得均匀的粒度。最后，将微球冻干48小时以干燥微球并储存在4℃干燥容器中，即得。

方案二为O/W乳液溶剂挥发法：(1)油/水相的制备，(a)将取局麻药、生物碱、帕莫酸和聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶于有机溶剂中，涡旋、超声促使其溶解形成均一的油相体系；Cb)将乳化剂溶于水，制得水相，浓度为0.3％～3％，将水相维持在10～30℃备用；(2)将油相缓慢加入到水相中，高速剪切乳化，乳液继续低速搅拌，挥干有机溶剂；(3)将步骤(2)所得微球用水洗涤，过筛收集微球，筛分调整粒度，冷冻干燥，即得。

本发明提供的方案二，还可以进行非均相反应制备微球，将局麻药、生物碱与聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶解于有机溶剂制成油相；将帕莫酸用弱碱处理溶解于包含了乳化剂的水相；按方案二操作，将油相、水相混合，高速剪切制备O/W乳，挥干有机溶剂、水洗、筛分、冻干，即得。

所述的有机溶剂选自二氯甲烷、氯仿、苯甲醇、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二甲亚砜、甲醇、乙酸乙酯、乙醚其中的一种、两种或两种以上混合溶剂。

本发明还提供了凝聚法制备微球的方法：将局麻药、生物碱溶于壳聚糖溶液中，将帕莫酸溶于负电荷的凝聚材料中制成溶液，将二者混合，高速剪切形成微球，离心分离获取微球，水洗三次除去游离的离子，冻干，即得。

所述步骤(2)中油相水相体积比控制在1∶10～200；优选的体积比为1∶10～100。

所述的局麻药/生物碱的帕莫酸盐微球的体内外释放周期可以达到2周，可以达到3周，可以达到1个月，可以达到2个月。

本发明还提供一种局麻药/生物碱的帕莫酸盐的植入剂组合物，包含生物可降解聚合物、与水溶液可混溶的生物相容性有机溶剂。溶剂在相转化期间扩散到水性介质中，不溶性固体组合物沉淀从而形成稳定的植入物，达到缓慢释放的效果。

本发明所述可生物降解的聚合物选自PLGA、聚己内酯(PCL)、聚乳酸(PLA)、聚乙醇酸(PGA)、聚丁二酸丁二醇酯(PBS)、乙酸异丁酸蔗糖酯(SAIB)、单或双亚油酸甘油酯、单或双油酸甘油酯、植烷三醇；所述与水混溶的生物相容性有机溶剂选自N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、二甲亚砜(DMSO)、聚乙二醇(PEG)、丙酮、甲醇、乙醇、labrasol、聚山梨酯、Gelucire、Brij78、三乙酸甘油酯、泊洛沙姆中的至少一种。

生物可降解聚合物与水混溶性生物相容性有机溶剂的比例为1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶6、1∶7、1∶8、1∶9或1∶10w/v。

本发明提供局麻药/生物碱的帕莫酸盐植入剂的制备方法：称取局麻药、生物碱、帕莫酸，加四氢呋喃/甲醇混合溶剂溶解，搅拌2小时，旋转蒸发除去全部溶剂，按处方加入可降解生物聚合物和生物相容性有机溶剂，搅拌均匀，即得。

所述的局麻药/生物碱的帕莫酸盐植入剂组合物的体内外释放周期可以达到3周，可以达到1个月，可以达到2个月，可以达到3个月。

本发明合适的给药途径为非胃肠道给药，具体包括皮下注射、皮内注射、鞘内注射、硬膜外注射等，此外，本发明还可以通过口服，直肠，鼻部，局部(包括口含和舌下)或阴道给药该组合物，优选的途径可以根据患者疾病的不同而改变。

本发明所提供组合物可以用于防治急性疼痛、慢性疼痛、神经性疼痛、伤害性疼痛、轻度和重度至中度疼痛、痛觉过敏、异常性疼痛或癌症疼痛，包括糖尿病神经病变或糖尿病周围神经病变、骨关节炎，类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、肩周炎。

本发明递送系统的单次给药剂量根据患者的体重、给药方法和疾病或疼痛的严重性而变化。本发明的组合物的单次给药量为5-1500mg或10-1200mg，优选剂量为10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、60mg、70mg、80mg、100mg、120mg、140mg、150mg、160mg、180mg、200mg、220mg、240mg、260mg、280mg、300mg、320mg、340mg、350mg、360mg、380mg、400mg、420mg、450mg、460mg、480mg、500mg、520mg、540mg、550mg、570mg、580mg、600mg、620mg、640mg、650mg、680mg、700mg、720mg、740mg、750mg、780mg、800mg、820mg、840mg、850mg、860mg、880mg、900mg、920mg、940mg、950mg、980mg、1000mg、1020mg、1040mg、1050mg、1060mg、1080mg、1100mg、1120mg、1140mg、1150mg、1160mg、1180mg或1200mg(以局麻药、生物碱重量计算)。

本发明提供作为活性成分的上述局麻药/生物碱的帕莫酸盐，与药学上可接受的赋形剂和/或载体组成的药物递送系统组合物，给药后，其中所述的活性成分进入人体内发挥药效的持续时间至少12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、120小时、144小时、168小时、192小时、216小时、240小时、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、60天、90天。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明的一种局麻药/生物碱的帕莫酸盐组合物，延长了药物在体内的释放时间，达到了发挥长效治疗的目的。

本发明的局麻药/生物碱的帕莫酸盐组合物，经稳定性实验表明，在高温(60℃)，高湿(60℃，水溶液)，研磨条件下晶型无变化，具有很好的稳定性。

本发明的局麻药/生物碱的帕莫酸盐组合物的制备方法，具有操作方法简单、产品稳定性好的特点。

本发明局部注射或涂布局麻药/生物碱的帕莫酸盐的药物递送系统，提高体内镇痛/抗炎功效，实现给药部位缓慢释放药物，延长体内持续发挥药效的时间。

利用本发明的局麻药/生物碱的帕莫酸盐，制成稳定的长效制剂，可实现每天至每月给药一次，对患者来说大大提高药物的使用效率，增强药物的治疗效果，提高患者的依从性，减少不良反应的发生。

附图说明

图1为布比卡因/汉防己甲素的帕莫酸盐(实施例4)的粉末X衍射图谱

图2为布比卡因/汉防己甲素的帕莫酸盐(实施例4)的DSC图谱

图3为利多卡因/青藤碱的帕莫酸盐(实施例9)的粉末X衍射图谱

图4为利多卡因/青藤碱的帕莫酸盐(实施例9)的DSC图谱

图5为利多卡因/青藤碱的帕莫酸盐(实施例9)的红外光谱

图6为罗哌卡因/罗通定的帕莫酸盐(实施例20)的粉末X衍射图谱

图7为罗哌卡因/罗通定的帕莫酸盐(实施例20)的DSC图谱

图8为罗哌卡因/罗通定的帕莫酸盐(实施例20)的红外光谱

图9为罗哌卡因/草乌甲素的帕莫酸盐微晶(实施例37)的粉末X衍射图谱

图10为左布比卡因/千金藤素的帕莫酸盐微晶(实施例39)的粉末X衍射图谱

图11为局麻药/生物碱的帕莫酸盐干混悬剂组合物抑制百分率-时间关系曲线

图12为局麻药和生物碱的帕莫酸盐凝胶组合物的缩足阈值-术后时间关系曲线

图13为局麻药和生物碱的帕莫酸盐乳剂组合物的缩足阈值-术后时间关系曲线

图14为局麻药和生物碱的帕莫酸盐植入剂组合物的最大比例效应-时间关系曲线

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作进一步说明。本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。除非另有定义，本文所有技术和科学术语与本发明技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本说明书中所使用的术语只是为了描述实施例，不在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意组合/所有组合。

(一)局麻药/生物碱的帕莫酸盐的构建可行性

实施例1-30的制备方法分别为前述的方法1水性介质法、方法2溶剂法等制备方法，处方和制备条件如下所示：

实施例1-3的制备方法：常温下将局麻药、马钱子碱和帕莫酸，共同溶解于二甲基亚砜(DMSO)中，加入适量蒸馏水，放置直到析出浅黄色粉末的产物。

实施例4-6的制备方法：常温下将局麻药、汉防己甲素和帕莫酸，共同溶解在二甲基亚砜中，再加入适量乙腈，放置直到析出浅黄色粉末的产物。

实施例7-9的制备方法：常温下将局麻药、青藤碱、稀盐酸溶解于适量水中，将帕莫酸和氢氧化钠分别加入到等量的水中，搅拌溶解，将上述制备的局麻药/生物碱水溶液滴加到帕莫酸的NaOH水溶液中进行中和反应，加毕搅拌2小时，过滤，滤饼水洗3次，50℃鼓风干燥，得到黄色固体。

实施例10-12的制备方法：将局麻药、石杉碱甲溶解于酸性乙醇溶液中，将帕莫酸溶解于碱性乙醇溶液中，将前者滴入后者，搅拌4小时，静置，抽滤除去滤液，残渣用水洗3次，真空干燥，即得浅黄色固体。

实施例13-15的制备方法：将局麻药、草乌甲素和帕莫酸，溶解于适量DMSO中，室温搅拌使溶液澄清，加入适量二氯甲烷，降温至4℃，搅拌6小时后过滤，滤渣于50℃减压干燥，得到淡黄色固体粉末。

实施例16-18的制备方法：将局麻药、千金藤素和帕莫酸共同溶解于四氢呋喃，再加入乙酸乙酯，于55℃反应4h后旋转蒸发挥干适量溶剂。加入乙酸乙酯-二氯甲烷混合液(体积比2∶1)，待析出结晶后过滤得到产物，产物经50℃真空干燥，并于玻璃瓶中室温、干燥、避光保存。

实施例19-21的制备方法：将局麻药与罗通定溶于酸性水溶液中制成溶液；另称取帕莫酸，加入碱性甲醇溶液中制成溶液。将上述二溶液混合后，加入到适量甲醇中，搅拌反应，析出沉淀物，过滤，水洗，干燥，即得。

实施例22-24的制备方法：将局麻药、生物碱和帕莫酸，共同溶解在常温下四氢呋喃中，再加入丙酮和正庚烷的混合溶剂，静置析出浅黄色粉末的产物。

实施例25-27的制备方法：将局麻药、吴茱萸碱和帕莫酸加到四氢呋喃中，室温搅拌，反应12小时后过滤，50℃减压干燥，得到浅黄色粉末。

实施例28-30的制备方法：将局麻药、小檗碱、帕莫酸溶解于甲醇中，加热至50℃搅拌4小时，冷却至4℃，旋蒸除去甲醇，得将黄色残渣，干燥，即得。

实施例31和32的制备方法：将局麻药和生物碱加入到氯仿-甲醇-酸性缓冲液(体积比为1∶2∶1)的混合溶液中溶解，将帕莫酸加入到氯仿-甲醇-碱性缓冲液(体积比为1∶2∶1)的混合溶液中溶解。将这两份溶液混合，搅拌30分钟后，加入适量氯仿和水，使氯仿-甲醇-水的体积比为1∶1∶1，从而形成双相系统。取上层甲醇/水相，旋转蒸发除去残留的氯仿和甲醇，真空干燥，即得。

实施例33和34的制备方法为：将局麻药和生物碱溶解于氯仿-酸水混合溶液中(体积比为1∶1)，将帕莫酸溶解于氯仿-碱水混合溶液中(体积比为1∶1)。将上述混合溶液混合，以700rpm转速搅拌4小时，静置分层，取有机相，旋转蒸发除去有机溶剂，过滤得滤渣，干燥，即得。

实施例35的制备方法为：将丁卡因和小檗碱共同溶于适量甲醇中，另取帕莫酸二钠溶于适量甲醇中，室温搅拌，将二者混合，滴加少量醋酸，调节混合溶液的pH值至6.0-7.0，搅拌8小时后过滤，滤渣于0℃减压干燥。

取实施例4、实施例9、实施例20粉末，分别进行粉末X行射(XRPD)分析、差示扫描量热分析(DSC)和红外光谱(IR)分析。XRPD粉末行射分析结果分别如图1、图3和图6所示，布比卡因/汉防己甲素的帕莫酸盐(实施例4)、利多卡因/青藤碱的帕莫酸盐(实施例9)和罗哌卡因/罗通定的帕莫酸盐(实施例20)，呈现无定型状态。

DSC结果(图2、4、7)表明，在250℃～300℃范围有吸热峰，该峰与文献报道的吸热峰接近，在300℃以上没有吸热峰，而文献报道帕莫酸固体粉末在330℃左右产生吸热熔融峰，表明局麻药/生物碱的帕莫酸盐的热分析特征与局麻药接近；此外，在～85℃附近产生的吸热峰为溶剂合物蒸发所引起，表明局麻药/生物碱的帕莫酸盐含有一定量的溶剂化物。帕莫酸特征峰的消失可能是由于局麻药/生物碱阳离子与帕莫酸阴离子之间产生了静电相互作用所致。

红外结果表明(如图5、8所示)，文献报道在帕莫酸结构中，羧基中的-OH在2500cm^-1～3200cm^-1范围内分子振动产生的宽峰，而在局麻药/生物碱的帕莫酸盐中，该宽峰被抑制；文献报道中帕莫酸中的-C＝O在～1651cm^-1处的强吸收峰，而在成盐中也被抑制；在3100cm^-1～3500cm^-1之间观察到一个宽峰。由以上结果可知，局麻药/生物碱与帕莫酸成盐。

取干燥后的局麻药/生物碱的帕莫酸盐，采用HPLC法测定局麻药、生物碱、帕莫酸的含量并计算局麻药与生物碱的含量之比，根据各自分子量，计算局麻药与生物碱的摩尔数之和与帕莫酸摩尔比(定义为“总摩尔比”)；称重法测定产率。上述测定结果如下表所示：

由上述表格结果可见，所有实施例均为类白色至浅黄色粉末，总摩尔比在3∶1～1∶2之间，局麻药与生物碱的含量之比在1∶100～100∶1之间。

本发明所述局麻药/生物碱的帕莫酸盐的无定型物，其特征在于，所述局麻药/生物碱的帕莫酸盐的无定型物具有基本上如图2所示的X-射线粉末衍射图。

本发明晶型结构可以使用本领域普通技术人员已知的各种分析技术分析，包括但不限于X射线粉末衍射(XRD)、示差扫描热法(DSC)和/或热重分析。本发明描述的和保护的数值为近似值，数值变化可归因于设备的校准、设备误差、试剂或晶体纯度、粒度、样本大小以及其他因素。

(二)局麻药/生物碱的帕莫酸盐物理稳定性的考察：

分别将局麻药/生物碱的帕莫酸盐，在60℃条件下放置1个月，通过XRD检测样品的晶型是否有改变，DSC考察峰位是否改变。研究结果表明，上述实施例样品室温放置1个月后，晶型未发生改变，无定型物没有晶体生成，物理稳定性较好。

(三)干混悬剂的制备和评价

按上表配方称取局麻药、生物碱，溶解于酸性缓冲液中，将帕莫酸与适量氢氧化钠加入水中，调节溶液pH值，搅拌溶解；将上述局麻药/生物碱溶液滴加至帕莫酸溶液，边加边搅拌，滴加完毕，继续搅拌2小时，过滤，滤饼水洗3次，取适量滤渣，分别测定局麻药、生物碱、帕莫酸的含量。

按上表处方称取润湿剂、稳定剂、局麻药/生物碱的帕莫酸盐以及注射用水，分别使用高速剪切机(10000rpm，30分钟～1小时)、高压均质机(800bar进行2～10个循环，1500bar进行1～5个循环)进行均质，最后加入渗透压调节剂、助悬剂，搅拌均匀，灌装于西林瓶中，加塞，压盖，于湿热121℃灭菌15分钟，放冷至室温，转移至-20℃冷冻室内，预冻6小时，转移至冻干机中，在-40℃的温度下干燥48小时，取出，即得干混悬剂。分别测定粒径、PDI、局麻药与生物碱含量并计算含量之比和总摩尔比，结果如下表所示：

	粒径(μm)	PDI	局麻药/生物碱含量之比	总摩尔比
					实施例36	2.034	0.216	0.10	2.00
实施例37	2.146	0.230	2.08	1.92
					实施例38	0.924	0.190	1.95	1.25
实施例39	1.477	0.219	0.21	1.75
					对照例1	1.925	0.178	--	--
对照例2	1.132	0.211	--	--
					对照例3	1.572	0.270	--	--
对照例4	1.462	0.223	--	--
					对照例5	0.799	0.258	--	--
对照例6	0.951	0.207	--	--
					对照例7	1.741	0.238	--	--
对照例8	1.556	0.245	--	--

结果表明，所有样品平均粒径在0.8～2.1μm范围，PDI均小于0.28，粒径分布均匀；局麻药与生物碱的剂量比在0.1～2.08范围内，摩尔比在1.25～2.0范围内。

采用XRD测定实施例37和39粉末，测定结果(图9和图10)表明罗哌卡因/草乌甲素的帕莫酸盐(实施例37)和左布比卡因/千金藤素的帕莫酸盐(实施例39)呈现无定型状态。

干混悬剂稳定性实验：分别对干混悬剂(实施例36和38)于室温条件(25℃)放置6个月，分别于3，6月考察其性状、再分散性(加适量水再分散后的平均粒径和PDI)、沉降体积比，结果如下表。结果表明，各实施例在室温放置6个月均较稳定，各检测项符合要求。

豚鼠皮丘实验：分别取实施例36-39，对照例1-8，分别加注射用水分散，配制成具有相同药物浓度的混悬液用于动物给药，混悬液中局麻药以及生物碱的浓度如下表所示：

	局麻药浓度(％)	生物碱浓度(％)
			实施例36	0.2	2
实施例37	0.3	0.14
			实施例38	2.9	1.49
实施例39	0.08	0.38
			对照例1	0.2	0
对照例2	0.3	0
			对照例3	2.9	0
对照例4	0.08	0
			对照例5	0	2
对照例6	0	0.14
			对照例7	0	1.49
对照例8	0	0.38

取重量250～300g的健康雄性SPF豚鼠65只，分成13组[4组实施例36-39；8组对照例1-8，前期研究结果表明空白干混悬剂不具备任何镇痛作用，因此未设定空白制剂组；0.5％w/v罗哌卡因水溶液作为阳性对照组(对照例9)]，每组5只。于豚鼠背部选择两个皮丘点，分别皮下注射混悬液(实施例36-39，对照例1-9)0.1ml产生皮丘，标记皮丘边缘。用自制的测试针按左、中、右、上、中、下顺序刺激6次皮丘范围内皮肤，两次针刺时间间隔3～5s，皮肤出现收缩反应记为阳性。给药后15分、30分、1小时、2小时、3小时、4小时、6小时、8小时、12小时、24小时、36小时、48小时、72小时，记录每组样品10个皮丘在各时间点的阳性反应次数，并计算抑制率，将其作为纵坐标，以给药后时间为横坐标，绘制效应-时间曲线，结果见附图11。所有组豚鼠均在注射给药15分钟时产生明显的镇痛效果，阳性对照组局部镇痛持续时间2～3小时，而实施例36-39局部镇痛持续时间可达72小时，作用时间明显长于局麻药的帕莫酸盐混悬液(对照例1-4)，而生物碱的帕莫酸盐混悬液(对照例5-8)局部镇痛持续时间只有1～5小时。

(四)凝胶的制备和评价

按上表处方制备局麻药/生物碱的帕莫酸盐凝胶(实施例40-43、对照例9-16)：称取局麻药和/或生物碱、帕莫酸，加入四氢呋喃溶解成溶液，加适量甲醇稀释，搅拌3小时后，旋蒸除去有机溶剂，真空干燥，得微黄色粉末，粉碎整粒，过筛，取适量，HPLC分别测定局麻药、生物碱和帕莫酸的含量。

实施例40、对照例9和13的凝胶制备方法：称取PEG-PLA-PEG，加适量水，搅拌溶解，备用；称局麻药/生物碱的帕莫酸盐粉末，研磨，加入PEG-PLA-PEG溶液，研磨均匀，即得。

实施例41、对照例10和14的凝胶制备方法：使用蒸馏水分别配制1.5％w/v羧甲基壳聚糖(质均分子量M_w为6×10⁵，脱乙酰度为82％，取代度为0.9)溶液、壳寡糖(质均分子量M_w为2000，脱乙酰度为96％)溶液、海藻酸钠(M_w为7×10⁶，G/M比为3)溶液和葡萄糖酸内酯(GDL)作为贮备液。将羧甲基壳聚糖溶液与海藻酸钠溶液等比例混合，持续搅拌1小时，再加入适量壳寡糖溶液，制成澄清溶液“CCA”。取局麻药/生物碱的帕莫酸盐粉末，研磨均匀，加入上述CCA溶液中研磨混匀，再加入GDL溶液继续研磨，并在37℃下孵育即得。

实施例42，对照例11和15的制备方法：按上表处方称取局麻药/生物碱的帕莫酸盐粉末，按比例加入蒸馏水，充分研磨混匀，用双腔推液器将预先配制好的纤维蛋白原溶液和凝血酶溶液以相同体积同时推至上述混合体系中，即得。

实施例43、对照例12和16的凝胶制备方法：称取甲哌卡因/千金藤素的帕莫酸盐，加入处方量的磷脂S100、中链甘油三酯(MCT)、乙醇溶液，研磨搅拌均匀。采用HPLC测定凝胶剂中局麻药与生物碱的含量之比与总摩尔比。结果如下表所示。

	局麻药浓度(％)	生物碱浓度(％)	局麻药/生物碱含量之比	总摩尔比
					实施例40	0.05	1.00	0.05	2.69
实施例41	0.1	3.33	0.03	1.56
					实施例42	2.1	4.12	0.51	1.38
实施例43	5.8	0.20	28.92	1.03
					对照例9	0.05	0	--	--
对照例10	0.1	0	--	--
					对照例11	2.1	0	--	--
对照例12	5.8	0	--	--
					对照例13	0	1	--	--
对照例14	0	3.33	--	--
					对照例15	0	4.12	--	--
对照例16	0	0.2	--	--

由结果可知，局麻药/生物碱剂量比在0.03～29范围之间，摩尔比在1.03～2.7之间。

大鼠足底切口涂抹镇痛实验：取雄性大鼠，吸入麻醉，从左后足底近端0.5cm处向趾部作一个长度约为1cm的切口。切开皮肤、筋膜后，用眼科镊挑起足底肌肉并纵向切割。按压止血，在切口处内外涂步空白凝胶(对照例17)，含药凝胶组(实施例40-43)以及对照组(对照例9-16)，涂抹体积为0.5ml。于给药后0.5小时、1小时、2小时、3小时、4小时、6小时、12小时、24小时、36小时、48小时和72小时，使用纤毛机械刺激针垂直刺激大鼠左后足底，记录大鼠出现阳性反应(快速撤足)与阴性反应，并计算50％缩足阈值(PWT)。

试验结果如附图12所示，所有样品给药后1小时开始显示镇痛效果，3小时时，实施例40-43显示出更强的镇痛效果，镇痛效果可维持到72小时；局麻药的帕莫酸盐凝胶，显示出一定的镇痛功效，效果可维持48小时，而生物碱的帕莫酸盐凝胶与空白凝胶具有相近的效果，可认为未显示出镇痛效果。实施例40-43显示出1～72小时的镇痛功效，优于对照例9-16。

(五)乳剂的制备和大鼠足底切口抗炎镇痛功效评价

成分	实施例45	对照例19	对照例23
				罗哌卡因	9.0份	9.0份	--
马钱子碱	0.1份	--	0.1份
				帕莫酸	4.5份	4.5份	0.05份
肉豆蔻酸异丙酯	15份	15份	15份
				聚山梨酯80	2.7份	2.7份	2.7份
Cremophor RH40	1.2份	1.2份	1.2份
				PEG400	1.8份	1.8份	1.8份
α-生育酚	0.2份	0.2份	0.2份
				注射用水	100份	100份	100份

成分	实施例46	对照例20	对照例24
				利多卡因	1份	1份	--
小檗碱	5份	--	5份
				帕莫酸	3份	0.5份	2.5份
蛋黄卵磷脂	0.5份	0.5份	0.5份
				泊洛沙姆188	0.2份	0.2份	0.2份
大豆油	3份	3份	3份
				油酸	0.02份	0.02份	0.02份
丙二醇	0.8份	0.8份	0.8份
				依地酸二钠	0.01份	0.01份	0.01份
注射用水	35份	35份	35份

按上表处方将局麻药、生物碱和帕莫酸，溶解于乙醇/四氢呋喃的混合溶剂中，搅拌2小时，旋蒸除尽有机溶剂。加入油相、乳化剂和助乳化剂，加热搅拌2小时，室温下通过高压均质工艺制备乳剂，于4℃条件下贮存，即得。使用激光粒度仪测定乳剂的粒径和PDI，用HPLC测定乳剂中局麻药、生物碱和帕莫酸的含量，分别计算局麻药/生物碱的含量之比，局麻药/生物碱与帕莫酸的总摩尔比。

由结果可知，乳剂的平均粒径在200～600nm范围内，PDI在0.28以下。

大鼠足底切口局部注射镇痛实验：采用上述操作(凝胶剂动物实验)制备大鼠足底切口模型，并随机分为乳剂组(实施例44-47、对照例18-25)和空白对照组(氯化钠注射液)，造模后2小时，于切口部位分别皮下注射乳剂和氯化钠注射液，给药体积为0.5ml；各组于造模前(基础阈值)、给药后1小时、2小时、3小时、4小时、6小时、12小时、24小时、36小时和48小时，测定50％缩足阈值(PWT)；此外，给药后2、6、12、24、36和48小时，分别采集实施例大鼠的血液，分离血清，利用酶联免疫吸附试验检测炎性细胞因子白细胞介素(IL)-1β和IL-6的表达。所有样品PWT结果如附图13所示，所有样品给药后1小时开始显示镇痛效果，2小时时，实施例44-47显示出更强的镇痛效果，镇痛效果可维持到48小时；局麻药的帕莫酸盐乳剂，显示出一定的镇痛功效，并呈现2-12小时的持续镇痛效果，而生物碱的帕莫酸盐乳剂与空白对照组具有相近的效果，可认为未显示出镇痛作用。实施例44-47显示出2-48小时的镇痛功效，优于对照例18-25。大鼠血清炎性因子测定结果如下表所示。

由上表结果可知，与对照组相比，乳剂组(实施例44-47)在给药后2、6、12、24、36、48小时，IL-1β和IL-6表达明显降低。结论，在预先切口部位局部浸润乳剂，通过抑制炎症细胞因子IL-1β和IL-6释放，有效抑制大鼠术后引起的炎症，提高镇痛作用效果。

(六)固体脂质纳米粒的制备和骨折镇痛功效的评价

成分	实施例48	对照例27	对照例31
				布比卡因	5份	5份	--
马钱子碱	0.1份	--	0.1份
				帕莫酸	9.4份	9份	0.18份
单硬脂酸甘油酯	20份	20份	20份
				聚山梨酯80	5份	5份	5份
丙二醇	5份	5份	5份
				注射用水	500份	500份	500份

采用乳化超声低温固化法制备固体脂质纳米粒(实施例48，对照例27和对照例31)。原辅料称量如上表所示，取处方量的单硬脂酸甘油酯、布比卡因和/或马钱子碱、帕莫酸，加入到二氯甲烷/四氢呋喃混合溶剂中溶解，并通过旋转蒸发仪除去有机溶剂，取固体残渣加热至75℃形成澄清透明的溶液，作为油相，保温备用；另取处方量的聚山梨酯80溶解到注射用水中，加热至75℃，作为水相，保温备用；将该水相加入到油相中，4000rpm高速剪切30min，得到乳白色混悬液，冰浴探头超声，冻干，即得。

成分	实施例49	对照例28	对照例32
				罗哌卡因	4份	4份	--
石杉碱甲	0.1份	--	0.1份
				帕莫酸	7.2份	7份	0.18份
山嵛酸甘油酯	8份	8份	8份
				聚山梨酯80	16份	16份	16份
磷脂	0.8份	0.8份	0.8份
				泊洛沙姆188	2份	2份	2份
聚乙二醇600	16份	16份	16份
				注射用水	200份	200份	200份

成分	实施例50	对照例29	对照例33
				利多卡因	5份	5份	--
罗通定	1份	--	1份
				帕莫酸	3.5份	3份	0.6份
硬脂酸	8份	8份	8份
				泊洛沙姆188	10.8份	10.8份	10.8份
卵磷脂	9份	9份	9份
				注射用水	400份	400份	400份

高压均质法制备固体脂质纳米粒(实施例49，50，对照例28，29，32，33)。原辅料称量如上表所示，称取表面活性剂、助表面活性剂和注射用水并加热至约80℃制备水相。将脂质、脂质助溶剂在70～75℃下加热熔化并加入局麻药、生物碱和帕莫酸，搅匀，作为脂质混合物。将脂质混合物经高速剪切(8000rpm，8分钟)，加入到水相中制成粗乳液，通过高压均质机(600～1200bar，3个循环)，冷却至室温，冻干，即得。

成分	实施例51	对照例30	对照例34
				辛可卡因	1份	1份	--
青藤碱	4.5份	--	4.5份
				帕莫酸	2份	0.4份	1.6份
油酸聚乙二醇甘油酯	14份	14份	14份
				聚氧乙烯35蓖麻油	28份	28份	28份
二乙二醇单乙基醚	9份	9份	9份
				注射用水	50份	50份	50份

实施例51、对照例30、对照例34的制备方法：按上表处方称取辛可卡因和/或青藤碱、帕莫酸，加乙醇/四氢呋喃溶解，搅拌2小时，旋转蒸法除去有机溶剂，加入油相，搅拌均匀，加热至75℃；取水、助表面活性剂和表面活性剂混合之后加热，使其温度和脂质相同，一边搅拌一边加入到脂类中，冷却，冻干，即得。使用激光粒度仪测定固体脂质纳米粒的粒径和PDI，使用HPLC测定脂质纳米粒中局麻药、生物碱和帕莫酸的含量，分别计算局麻药、生物碱的含量比，局麻药/生物碱与帕莫酸的摩尔比和固体脂质纳米粒的包封率(以局麻药计)。

	粒径(nm)	PDI	局麻药/生物碱含量之比	总摩尔比	包封率(％)
						实施例48	239.7	0.275	47.77	0.54	82.5
实施例49	350.6	0.183	39.01	0.60	81.2
						实施例50	275.0	0.298	5.11	2.08	81.4
实施例51	264.1	0.217	0.24	2.18	76.1
						对照例27	222.0	0.247	--	--	--
对照例28	313.5	0.242	--	--	--
						对照例29	425.7	0.227	--	--	--
对照例30	469.7	0.191	--	--	--
						对照例31	205.3	0.177	--	--	--
对照例32	365.1	0.297	--	--	--
						对照例33	262.4	0.294	--	--	--
对照例34	330.9	0.244	--	--	--

分别取实施例48-51，对照例27-34，分别加注射用水分散，配制成具有相同浓度的混悬液用于动物给药，混悬液中局麻药以及生物碱的浓度如下表所示：

	局麻药浓度(％)	生物碱浓度(％)
			实施例48	12	0.25
实施例49	7.8	0.2
			实施例50	3.4	0.67
实施例51	12	0.25
			对照例27	12	0
对照例28	7.8	0
			对照例29	3.4	0
对照例30	12	0
			对照例31	0	0.25
对照例32	0	0.2
			对照例33	0	0.67
对照例34	0	0.25

由上表所示，实施例48与对照例27和对照例31，局麻药或生物碱的浓度相同，以此类推，每个实施例都有2个具有相同剂量的对照例，用于动物药效高低的比较。

大鼠骨折模型抗炎镇痛功效的评价：取雄性SD大鼠(约200g)70只，饲养7天适应环境后，取65只大鼠，麻醉诱导，先行股骨干穿针固定，使用骨折模型工具制造单侧股骨干骨折，通过X光或骨折专有体征判断骨折是否成功。剩余5只SD大鼠，健康组。所制备的65只大鼠闭合骨折全身炎症模型，随机分为13组(每组5只)，于骨折部位肌肉注射固体脂质纳米粒(实施例48-51，对照例27-34)以及生理盐水(模型组)。分别于给药后不同时间，通过行为学观察记录疼痛评分。大鼠疼痛行为分为4级：0级，双后足平分在地面，活动无异常；1级，骨折侧足掌轻微接触地面，活动有跛行；2级，骨折侧足抬起，不接触地面；3级，大鼠舔咬或抽动骨折足。使用疼痛加权法评分(PIS)评估大鼠行为学表现，计算方法：PIS＝(T₁+2×T₂+3×T₃)/5×60；T₁，T₂，T₃分别为5分钟内出现1级、2级、3级的时间(秒)。分别给药后24、48、72和96小时取尾静脉血，使用ELISA法测大鼠CRP和IL-6的表达量。

PIS测定结果如下表所示。

	0.5h	1h	6h	12h	24h	48h	72h	96h
									模型组	3	3	3	3	3	3	2.8	2.9
实施例48	2.1	2.1	2.2	2.2	2.4	2.3	2.2	2.1
									实施例49	2	2.2	2	2	2	2.1	2.2	2.4
实施例50	1.9	1.9	2	1.9	2.2	2.3	2	2.1
									实施例51	2	2	2.2	1.9	2.3	2.1	2.1	2.2
对照例27	2	2.3	2.1	2.5	3	3	2.9	2.9
									对照例28	2.4	2.3	2.2	2.4	3	3	2.8	2.8
对照例29	2.2	2.3	2.4	2.3	3	3	2.8	3
									对照例30	2.4	2.7	2.5	2.3	3	3	3	2.9
对照例31	2.6	2.3	3	3	3	3	2.8	2.8
									对照例32	2.8	2.4	3	3	3	3	2.8	2.9
对照例33	2.4	2.1	3	3	3	3	2.8	2.7
									对照例34	2.3	2.2	3	3	3	3	2.9	2.8

炎性因子表达量测定结果如下表所示。

行为学观察结果显示出，局麻药/生物碱的帕莫酸盐的固体脂质纳米粒显著降低大鼠疼痛加权法评分，改善疼痛反应，持续到96小时，而单独局麻药的帕莫酸盐固体脂质纳米粒(对照例27-30)，仅能在0.5～12小时内降低PIS，表明镇痛作用仅维持12小时，生物碱的帕莫酸盐脂质固体脂质纳米粒(对照例31-34)只能在前1小时内显示一定的镇痛功效。此外，局部注射局麻药/生物碱的帕莫酸盐的固体脂质纳米粒，明显降低CRP，IL-6表达量。结论：局麻药/生物碱的帕莫酸盐的固体脂质纳米粒，局部注射明显降低了股骨干闭合骨折全身炎症模型大鼠的疼痛以及炎症反应，提示其在局部注射镇痛中应用的可行性。

(七)聚合物纳米粒的制备和大鼠坐骨神经痛抑制效应评价

	实施例52	对照例35	对照例39
				布比卡因	5份	5份	--
草乌甲素	1份	--	1份
				帕莫酸	2.5份	2份	0.4份
人血白蛋白	25份	25份	25份
				蒸馏水	100份	100份	100份

通过高压均质法制备聚合物纳米粒(实施例52，对照例35和对照例39)，称取布比卡因和/或草乌甲素、帕莫酸，溶解于氯仿/四氢呋喃混合溶剂中作为有机相，备用；另量取人血清白蛋白与适量蒸馏水混合，温热溶解，降温至0℃，在剪切机不断搅拌分散水相的情况下加入有机相，10000rpm剪切1min得初乳，将初乳转移至高压微射流中均质后，挥发除去有机溶剂，过滤，冻干即得。

	实施例53	对照例36	对照例40
				罗哌卡因	1份	1份	--
汉防己甲素	15份	--	15份
				帕莫酸	12.5份	0.5份	12份
mPEG-PLA(5k∶4k)	45份	45份	45份
				甘露醇	74份	74份	74份
注射用水	100份	100份	100份

通过乳化-蒸发法制备聚合物纳米粒(实施例53，对照例36，40)，将局麻药、生物碱和帕莫酸混合，用二氯甲烷/四氢呋喃溶解，搅拌2小时转移到含聚合物胶束材料的水溶液中形成混合体系。使用探针超声仪，对混合物进行冰浴超声处理以形成O/W乳液，蒸发除去有机溶剂，使用微孔滤膜过滤除去沉淀，加入冻干保护剂和渗透压调节剂，冻干，即得。

通过旋转铺膜法制备聚合物纳米粒(实施例54，对照例37和对照例41)，称取局麻药、生物碱、帕莫酸，加入四氢呋喃-乙醇混合溶剂溶解，搅拌2小时，置茄形瓶中，加入聚合物材料，继续搅拌30分钟，旋转蒸发除去溶剂，铺膜，使用注射用水，涡旋震荡水化，按上表处方加入冻干保护剂和渗透压调节剂，冻干，即得。

	实施例55	对照例38	对照例42
				普鲁卡因	1份	1份	--
罗通定	1份	--	1份
				帕莫酸	2份	1.4份	0.6份
Soluplus	5份	5份	5份
				TPGS	5份	5份	5份
蔗糖	1份	1份	1份
				水	100份	100份	100份

通过透析法制备聚合物纳米粒(实施例55，对照例38和对照例42)：按上表称取局麻药、生物碱、帕莫酸，使用DMSO/乙腈混合液溶解，搅拌2小时，加入聚合物胶束材料，继续搅拌1小时，使用透析袋(截留分子量8500-14000)于4℃条件下使用去离子水透析，每隔2小时，更换一次去离子水，48小时候，加入冻干保护剂和渗透压调节剂，冻干即得。

使用激光粒度仪测定聚合物纳米粒的平均粒径和PDI，使用HPLC测定聚合物纳米粒中局麻药、生物碱和帕莫酸的含量，分别计算局麻药、生物碱的含量比，局麻药/生物碱与帕莫酸的摩尔比和局麻药的包封率。

	粒径(nm)	PDI	局麻药/生物碱剂量比	摩尔比	包封率(％)
						实施例52	217.6	0.297	4.48	2.31	78.4
实施例53	310.5	0.184	0.07	0.97	82.3
						实施例54	241.0	0.259	19.46	2.00	87.5
实施例55	314.4	0.222	0.97	1.07	77.7
						对照例35	199.5	0.198	--	--	--
对照例36	307.7	0.208	--	--	--
						对照例37	200.2	0.174	--	--	--
对照例38	196.4	0.266	--	--	--
						对照例39	282.9	0.243	--	--	--
对照例40	300.9	0.243	--	--	--
						对照例41	303.3	0.230	--	--	--
对照例42	227.7	0.190	--	--	--

分别取实施例52-55，对照例35-42，分别加注射用水分散，配制成具有相同浓度的混悬液用于动物给药，混悬液中局麻药以及生物碱的浓度如下表所示：

	局麻药浓度(％)	生物碱浓度(％)
			实施例52	2.7	0.6
实施例53	0.2	2.86
			实施例54	1.8	0.09
实施例55	4.3	4.43
			对照例35	2.7	0
对照例36	0.2	0
			对照例37	1.8	0
对照例38	4.3	0
			对照例39	0	0.6
对照例40	0	2.86
			对照例41	0	0.09
对照例42	0	4.43

由上表所示，实施例52与对照例35和对照例39，局麻药或生物碱的浓度相同，以此类推，每个实施例都有2个具有相同剂量的对照例，用于动物药效高低的比较。

大鼠鞘内注射给药镇痛功效的评价：取雄性SD大鼠70只，随机分为健康组、模型组、聚合物纳米粒给药组，每组5只。对模型组与给药组大鼠进行麻醉，通过手术损伤坐骨神经，然后对给药组大鼠进行鞘内置管，术后鞘内给予聚合物纳米粒组(实施例52-55，对照例35-42)，给药体积为10μl，模型组不做任何处理。分别于术前1天、术后1小时、4小时、6小时、12小时、24小时、36小时和48小时，观察测定各组大鼠机械缩足反射阈值(MWT)。术后3天采用ELISA法检测聚合物纳米粒给药组(实施例52-55)大鼠血清中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平。MWT测定结果如下表所示。

聚合物纳米粒组(实施例52-55)在术后12小时仍具有镇痛作用，而对照例35-42，只维持4小时的镇痛功效。大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平测定结果如下表所示。

	TNF-α表达量(ng/ml)	IL-1β表达量(ng/ml)	IL-6表达量(pg/ml)
				健康组	21.87	22.31	46.35
模型组	111.7	44.3	127.16
				实施例52	61.01	34.44	76.65
实施例53	67.71	34.93	78.06
				实施例54	62.34	33.02	75.79
实施例55	64.06	31.62	73.96

与模型组比较，聚合物纳米粒(实施例52-55)在术后3小时，明显降低了炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)表达，表明聚合物纳米粒组合物具有良好的镇痛/抗炎功效。

(八)微球的制备及大鼠抗关节炎/镇痛效果评价

	实施例56	对照例43	对照例47
				布比卡因	1份	1份	--
小檗碱	35份	--	35份
				帕莫酸	20份	0.6份	19.5份
PLGA(75∶25，粘度0.32-0.44dL/g)	200份	200份	200份
				0.5％w/v PVA	适量	适量	适量

实施例56、对照例43和47的制备方法：按实施例13-15的方法制备布比卡因和/或小檗碱的帕莫酸盐。将PLGA溶解在二氯甲烷中，将局麻药和/或生物碱的帕莫酸盐粉末添加到上述PLGA溶液中，研磨搅拌均匀，使用高速剪切机在冰浴中以10000rpm的速度将悬浮液剪切2分钟以形成S/O体系。加0.5％w/v PVA溶液适量，剧烈涡旋30秒形成复乳，在350rpm转速搅拌下，立即将形成的复乳液转移到更大体积的0.5％PVA溶液中，旋蒸除去二氯甲烷固化形成微球。用去离子水反复洗去微球表面残留的物质，筛分以获得均匀的粒度。将微球冻干48小时并储存在4℃的干燥器中，即得。

实施例57、对照例44和48的微球制备方法：按上表配方称取罗哌卡因和/或吴茱萸碱、帕莫酸，加入二氯甲烷/四氢呋喃混合溶剂搅拌溶解，再加入PLGA，搅拌溶解均匀，作为油相；配制质量浓度为0.8％w/v PVA水溶液为水相，冷却到10～25℃备用；将油相缓慢加入到0.8％w/v PVA水溶液中，在剪切机的作用下以1300rpm剪切1min；然后，室温低速搅拌4h挥发溶剂以固化；将固化微球转移至含有0.25％泊洛沙姆的乙醇-水(20/80，v/v)溶液中继续搅拌1h，将所得的微球混悬液经滤网筛分，并用水洗涤3次，冷冻干燥，即得。

	实施例58	对照例45	对照例49
				利多卡因	10份	10份	--
草乌甲素	1份	--	1份
				帕莫酸	7份	6.4份	0.6份
PLGA(50∶50粘度0.16-0.24dL/g)	80份	80份	80份
				0.8％w/v PVA	适量	适量	适量

实施例58、对照例45和49的制备方法：按上表配方称取利多卡因和/或草乌甲素，加入二氯甲烷搅拌溶解，加入PLGA，搅拌均匀，作为油相；配制质量浓度为0.8％w/v PVA水溶液为水相，调节适当的pH值，按处方加入帕莫酸搅拌溶解，备用；将油相缓慢加入到0.8％PVA水溶液中，在剪切机的作用下以1300rpm剪切1min；室温低速搅拌4h后，将微球转移至含有0.25％泊洛沙姆的乙醇-水(20/80，v/v)溶液中继续搅拌1h，将所得的微球混悬液经滤网筛分，并用水洗涤3次，冷冻干燥，即得。

	实施例59	对照例46	对照例50
				左布比卡因	1份	1份	--
石杉碱甲	8份	--	8份
				帕莫酸	5份	0.55份	4.4份
壳聚糖	0.1份	0.1份	0.1份
				三聚磷酸钠	0.25份	0.25份	0.25份

实施例59、对照例46和50的制备方法：分别配制0.1％w/v的壳聚糖(粘度200～200000cps，脱乙酰度：75-85％，溶剂为0.1％v/v乙酸溶液)，0.25％w/v三聚磷酸钠(TPP)溶液(溶剂为PBS)，备用。按上表配方称左布比卡因和/或石杉碱甲，溶于适量壳聚糖溶液中，搅拌均匀；称帕莫酸溶解于适量TPP溶液，搅拌均匀，将上述两溶液混合，在室温下搅拌1小时形成微球悬浮液，高速离心10分钟，用去离子水洗涤微球三次。冷冻干燥，得微球冻干制剂。使用激光粒度仪测定所有微球(实施例56-59，对照例43-50)的粒径和跨距，采用HPLC法测定微球中局麻药、生物碱、帕莫酸的含量，分别计算局麻药/生物碱的含量之比，局麻药/生物碱与帕莫酸的总摩尔比。

	平均粒径(μm)	跨距	局麻药/生物碱含量之比	总摩尔比
					实施例56	12.8	0.701	0.03	1.57
实施例57	13.1	0.675	4.34	1.29
					实施例58	6.3	0.588	8.66	1.94
实施例59	12.9	0.545	0.13	2.31
					对照例43	11.6	0.759	--	--
对照例44	11.5	0.801	--	--
					对照例45	11.9	0.912	--	--
对照例46	12.9	0.573	--	--
					对照例47	14.6	0.775	--	--
对照例48	15.1	0.672	--	--
					对照例49	14.0	0.766	--	--
对照例50	13.4	0.618	--	--

分别取实施例56-59，对照例43-50，分别加注射用水分散，配制成具有相同浓度的混悬液用于动物给药，混悬液中局麻药以及生物碱的浓度如下表所示：

	局麻药浓度(％)	生物碱浓度(％)
			实施例56	0.3	10
实施例57	4.8	1.11
			实施例58	6.9	0.8
实施例59	0.78	6
			对照例43	0.3	0
对照例44	4.8	0
			对照例45	6.9	0
对照例46	0.78	0
			对照例47	0	10
对照例48	0	1.11
			对照例49	0	0.8
对照例50	0	6

由上表所示，实施例56与对照例43和对照例47，局麻药或生物碱的浓度相同，以此类推，每个实施例都有2个具有相同剂量的对照例，用于动物药效高低的比较。

大鼠抗关节炎功效评价：将112只雄性SD大鼠随机分为若干组(n＝8)，包括健康组、模型组和微球组(实施例56-59，对照例43-50)。对于模型组和微球组大鼠，于右足底皮垫处注射0.1ml弗氏完全佐剂引发炎症，健康组大鼠右足底皮垫下注射0.1ml氯化钠注射液。建模后第20天，各组大鼠关节腔内注射80μl氯化钠注射液(模型组)或80μl微球(微球组)。

关节炎指数评分：分别于建模当天以及建模后18、20天，给药后1、3、7、14、21天，进行关节炎指数评分，以评价弗氏完全佐剂建立大鼠慢性关节炎模型的效果并观察各组抗炎作用。每只大鼠关节炎指数评分标准如下：0分，关节正常；1分，踝关节出现红斑和轻微肿胀；2分，从踝关节到跖关节或掌关节处出现红斑和轻微肿胀；3分，从踝关节到跖关节或掌关节处出现红斑和中度肿胀；4分，从踝关节到跖关节出现红斑和重度肿胀。四肢累计评分总和为该大鼠关节炎指数。各组关节炎指数测定结果如下表所示。

由上表可知，在微球组(实施例56-59)作用下，大鼠关节炎指数明显低于模型组，表明微球组合物具有良好的抗炎功效。其中，实施例58抗炎效果从给药后1天至给药后14天均能保持，其他3组抗炎效果可延长至21天。对照例43-46仅在给药后1天降低关节炎指数，表明抗炎效果可维持1天；对照例47-50具有较好的降低关节炎指数功效，效果可维持到3～14天(对照例47，48)、1～7天(对照例49)或1～14天(对照例50)，但关节炎指数明显高于实施例56-59。综上，微球组合物(实施例56-59)，显示出更优越的关节炎指数降低功效。

热缩足反应潜伏期(TWL)测试：在给药前3h、给药后3小时、6小时、12小时、1天、3天、7天、14天、21天，对各组大鼠进行热缩足反应潜伏期测试，将大鼠放入有机玻璃笼中，待其充分安静后，用热光源透过玻璃台照射大鼠右足底。记录从开始照射至出现缩足反应的时间为TWL，为防止组织灼伤，当30s仍未出现缩足反应时则停止照射并记录TWL为30s。重复测量5次，取平均值。TWL测定结果如下表所示。

由上表结果可知，微球组合物(实施例56-59)显著增加TWL，且明显优于对照例43-50，表明，微球组合物对大鼠关节炎所致疼痛具有长效抑制作用，效果可维持到第21天。

关节液炎性因子测定：取大鼠麻醉，对大鼠右后肢踝关节酒精消毒，手术刀切开右踝关节囊，用注射器抽取生理盐水反复冲洗关节腔，收集关节液于离心管中，于低温高速离心机以3000rpm离心15min，取上清液置于EP管中，放在-20℃保存。采用ELISA法检测大鼠关节液中IL-1β、TNF-α和IL-6表达水平，测定结果如下表所示。

由上表结果可知，微球组合物(实施例56-59)明显降低了大鼠关节液炎性因子的表达，且优于对照例，这可能成为微球组组合物具有抗炎功效的机制之一。

(八)植入剂的制备和坐骨神经阻滞大鼠镇痛效果评价

实施例60-63植入剂的制备方法：按上表处方，称取局麻药、生物碱和帕莫酸，加入乙酸乙酯/四氢呋喃混合溶剂中，于55℃搅拌2小时，加入聚合物继续搅拌1小时，旋转蒸发除去有机溶剂，再加入溶剂，加热，搅拌均匀，即得。

对照例51-58植入剂的制备方法：按上表处方，分别称取局麻药和帕莫酸，或者生物碱与帕莫酸，用乙酸乙酯/四氢呋喃混合溶剂溶解，于55℃搅拌2小时，加入聚合物继续搅拌1小时，旋转蒸发除去有机溶剂，再加入溶剂，加热，搅拌均匀，即得。

HPLC法测定植入剂(实施例60-63)中局麻药、生物碱和帕莫酸的含量，计算含量之比和总摩尔比，如下表所示：

坐骨神经阻滞实验：取96只雄性SD大鼠，每组8只，将大鼠用2％异氟烷麻醉后侧卧，分别注入0.5ml植入剂(实施例60-63，对照例51-58)至坐骨神经周围。大鼠的右后肢不做任何处理，作为左后肢的对照。将大鼠置56℃的圆盘上计时，记录大鼠抬起后足或舔后爪的所需要的时间(定义为热潜伏期)，并用最大比例效应(MPE)表示热潜伏期，采用以下方程进行计算：

式中，B为大鼠的基础热潜伏期，P为允许的最大热潜伏期，C为各时间点检测大鼠的热潜伏期。

研究结果表明(图14)：所有组在给药后MPE值均达到100％，表示已经进入完全阻滞状态，各组的坐骨神经阻滞起效时间并无明显差异，表明活性成分在缓释材料中的缓慢释放并未影响药物的起效时间。植入剂组合物(实施例60-63)的MPE值在注射7～40天后MPE值开始逐渐下降，而对照例51-54在注射后3小时～4天之后，MPE开始下降；对照例55-58从注射2小时后，MPE即开始降低，且下降更为快速。将有效感觉阻滞时间定义为从药物注射到MPE值下降至50％所需时间。根据图14所示，给予植入剂组合物(实施例60-63)的大鼠，有效感觉阻滞持续时间分别为32、45、59和16天，与对照例51-54(16.8小时、5.2天、1.9天、4.8天)相比明显延长，而对照例55-58，有效感觉阻滞时间均不超过12小时。因此，植入剂组合物显著增强了镇痛作用的维持时间。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干改变或改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种局麻药和生物碱的帕莫酸盐组合物，由局麻药和生物碱的帕莫酸盐以及药学上可接受的赋形剂和/或载体组成；所述的组合物内局麻药与生物碱的摩尔数之和与帕莫酸的摩尔数比例范围在3∶1～1∶2之间。

2.权利要求1所述的组合物中，局麻药选自布比卡因、罗哌卡因、左布比卡因、辛可卡因、甲哌卡因、普鲁卡因、利多卡因和丁卡因其中的任何一种。

3.权利要求1所述的组合物中，生物碱选自马钱子碱，延胡索乙素，汉防己甲素，青藤碱，吴茱萸碱，吴茱萸次碱，草乌甲素，高乌甲素，千金藤素，罗通定，氯化两面针碱，石杉碱甲和小檗碱其中的任何一种。

4.权利要求1所述的组合物中，局麻药与生物碱的重量比例为100∶1～1∶100，更优选为80∶1～1∶80，更优选为50∶1～1∶50，更优选为30∶1～1∶30，更优选为20∶1～1∶20。

5.权利要求1所述的组合物，其制备方法包含以下任何一种方法：

方法1：常温下称取局麻药和生物碱溶解或分散于酸性水溶液中，将其滴加到帕莫酸的碱水溶液中，进行中和反应，生成局麻药/生物碱的帕莫酸盐，搅拌，析出沉淀物，过滤，使用去离子水洗去游离的离子，干燥；其中所述的酸性水溶液，为含有有机酸或无机矿酸及其盐中的一种以上的组合，酸的种类具体包括盐酸、硫酸、磷酸、乙酸、草酸、枸橼酸或苹果酸，盐为钾、钠或铵离子，优选磷酸与磷酸钠盐的组合；所述的碱性水溶液，碱选自氨水、碳酸钾、碳酸钠、三乙胺、吡啶、氢氧化钠或氢氧化钾中的一种，优选氢氧化钠。

方法2：将局麻药与生物碱溶于酸性溶液，连同帕莫酸碱水溶液加入到第二反应溶剂中，搅拌反应，析出沉淀物，过滤得滤渣，加适量去离子水水洗去离子，干燥；局麻药、生物碱、帕莫酸可按照方法1中所述分别制成可溶性的溶液；第二反应溶剂选自水、甲醇、乙醇、丙酮、四氢呋喃、乙腈中的一种或者几种的混合溶剂。

方法3：将局麻药、生物碱和帕莫酸加入到有机溶剂中，局麻药/生物碱的重量之和(单位：g)与有机溶剂的体积(单位：ml)比为1∶(3～80)，加热至温度为28～90℃，搅拌溶解1～2小时后，静置或搅拌1～72小时，析出沉淀物(或静置后取上层清液急速冷却，或静置后取上层清液自然冷却，或静置后取上层清液自然挥发)，过滤得滤渣，在35～50℃下真空干燥。

方法4：将局麻药与生物碱加入有机溶剂和水性介质的混合溶剂中，加热回流溶解，溶解温度为30～90℃，再加入帕莫酸，搅拌溶解，室温静置或搅拌析晶，1～72小时后有晶体析出，过滤除去溶剂得滤渣，在40～50℃下真空干燥得成品；其中，所述的有机溶剂优选甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、二甲亚砜、二甲基甲酰胺、四氢呋喃中的一种或至少两种的混合溶剂，水性介质优选水、磷酸盐、碳酸盐、醋酸盐、氯化物的一种或至少两种混合。

6.权利要求1所述的组合物为晶型或无定型物。

7.权利要求1所述的组合物为无水、水合物或溶剂合物形式。

8.权利要求1所述的组合物可以制成干混悬剂、凝胶剂、乳剂、固体脂质纳米粒、聚合物纳米粒、微球以及植入剂给药剂型。

9.权利要求8所述的给药剂型的给药方式为鞘内注射、皮下注射、肌肉注射、神经周围(阻滞)注射、硬膜外注射、在手术前、术中或术后于手术切口处浸润注射或涂布给药。

10.权利要求1所述的组合物适用于各种疼痛的缓解，具体包括急性疼痛、慢性疼痛、神经性疼痛、伤害性疼痛、轻度和重度至中度疼痛、痛觉过敏、异常性疼痛、癌症疼痛，糖尿病神经病变或糖尿病周围神经病变引起的疼痛、骨关节炎、类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、肩周炎引起的疼痛。

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