CN101868224A - 从基体表面除去水不溶性物质的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种借助包含疏水蛋白的干燥固体载体从基体表面除去水不溶性物质的方法。

Description

从基体表面除去水不溶性物质的方法
本发明涉及一种借助包含疏水蛋白的干燥固体载体从基体表面除去水不溶性物质的方法。
在日常生活中借助载体从基体上除去水不溶性物质的方法尤其由家用领域已知。这些清洁或喷雾组合物中的大多数以及还有用于除去化妆品或用于皮肤清洁的化妆品组合物基于包含有机溶剂如醇和乳化剂或洗涤剂的溶液，以溶解基体上的水不溶性物质。此外，该类组合物还可以包含颗粒如擦洗剂或磨肤剂，它们通过机械摩擦而产生清洁效果。这些制剂中的大多数施用于基体上并随后用由纺织品、纸或脱脂棉制成的布擦除，由此清洁该基体。
近年来包含用于清洁基体的对应制剂的潮湿材料的供应不断增加。特别是在化妆品领域已知含有对应制剂的潮湿清洁抹布或所谓的脱脂棉垫。
疏水蛋白在化妆品制剂中的使用本身是已知的。疏水蛋白是具有约100-150个氨基酸的小蛋白，其存在于丝状真菌，例如裂褶菌(Schizophyllum commune)中。它们通常具有8个半胱氨酸单元。疏水蛋白可以由天然源分离，但也可以借助基因工程方法得到，例如如WO2006/082251或WO 2006/131564所公开。
US 20030217419 A1描述了来自裂褶菌的化妆品制剂用疏水蛋白SC3在处理治疗材料中的用途。这里形成耐受几次洗发剂洗涤的化妆品积存。
现有技术还提出了将疏水蛋白用于其他应用中。
WO 96/41882提出了将疏水蛋白作为乳化剂、增稠剂、表面活性物质用于疏水表面的亲水化，用于改进亲水基体的耐水性，用于生产水包油乳液或油包水乳液。此外，提出了药物应用如生产软膏或霜剂以及化妆品应用如用于皮肤保护或用于生产洗发剂或护发素。
EP 1 252 516公开了用包含疏水蛋白的溶液在30-80℃的温度下涂敷各种基体。此外，例如提出了作为破乳剂(WO 2006/103251)、作为蒸发抑制剂(WO 2006/128877)或染污抑制剂(WO 2006/103215)的用途。
本发明的目的是提供一种从基体表面除去水不溶性物质的方法，该方法具有各种各样的用途。此外，该方法对基体表面温和。另外，该方法简单且允许很少处理即可除去水不溶性物质。
此外，本发明的目的是提供疏水蛋白的新用途。
这些目的由开头所述方法和本发明的其他主题实现。本发明的另一主题涉及除去皮脂和/或化妆品的化妆方法，其中用包含疏水蛋白的载体处理皮肤和/或头发表面。此外，本发明提供了包含疏水蛋白的载体在除去水不溶性物质中的用途。本发明的特殊实施方案可以在权利要求书、说明书和实施例中找到。此外，本发明还包括优选实施方案的组合。
本发明的特殊特征在于负载有疏水蛋白的干燥固体载体吸收大量水不溶性物质且同时仅少量再次释放吸收的物质这一事实。
在本发明方法中，使用包含疏水蛋白的干燥固体载体。
疏水蛋白是表面活性多肽。它们可以由天然源分离，但也可以借助基因工程方法得到。
原则上讲，一种类型或另一类型的疏水蛋白是合适的。
“疏水蛋白”可以理解为指通式(I)的多肽：
Xn-C1-X1-50-C2-X0-5-C3-X1-100-C4-X1-100-C5-X1-50-C6-X0-5-C7-X1-50-C8-Xm(I)
其中X可以为20种天然氨基酸(Phe，Leu，Ser，Tyr，Cys，Trp，Pro，His，Gln，Arg，Ile，Met，Thr，Asn，Lys，Val，Ala，Asp，Glu，Gly)中的任一种。这里基团X可以各自相同或不同。这里紧邻X的指数在每种情况下为氨基酸在特定部分序列X中的数目，C为半胱氨酸、丙氨酸、丝氨酸、甘氨酸、蛋氨酸或苏氨酸，其中C所表示的基团中至少4个为半胱氨酸且指数n和m相互独立地为自然数。m和n通常都不为0，但通常为1或更大。例如m和n相互独立地为1-500。优选m和n相互独立地为15-300。由C1-C8命名的氨基酸优选为半胱氨酸；然而，它们还可以被具有类似空间填充的其他氨基酸替换，优选被丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、蛋氨酸或甘氨酸替换。然而，位置C1-C8中的至少4个，优选至少5个，特别优选至少6个，尤其是至少7个应由半胱氨酸组成。在本发明蛋白中的半胱氨酸可以还原形式存在或者相互形成二硫桥。特别优选分子内形成C-C桥，尤其是具有至少1个，优选2个，特别优选3个，非常特别优选4个分子内二硫桥的那些。在具有类似空间填充的氨基酸对半胱氨酸的上述替换中，可以相互形成分子内二硫桥的那些C位置对有利地被替换。
若半胱氨酸、丝氨酸、丙氨酸、甘氨酸、蛋氨酸或苏氨酸也用于称为X的位置，则通式中各C位置的数目可以相应变化。
优选使用通式(II)的疏水蛋白来实施本发明：
Xn-C1-X3-25-C2-X0-2-C3-X5-50-C4-X2-35-C5-X2-15-C6-X0-2-C7-X3-35-C8-Xm  (II)
其中X和C具有上述含义且紧邻X的指数具有上述含义，其中指数n和m为自然数。m和n通常都不为0，但通常为1或更大。例如m和n可以相互独立地为1-500。优选m和n相互独立地为15-300且C所表示的基团中至少6个为半胱氨酸。特别优选所有基团C为半胱氨酸。
特别优选使用通式(III)的疏水蛋白：
Xn-C1-X5-9-C2-C3-X11-39-C4-X2-23-C5-X5-9-C6-C7-X6-18-C8-Xm  (III)，
其中X和C具有上述含义，并且紧邻X的指数具有上述含义。指数n和m尤其为1-200的自然数。C所表示的基团中至少6个通常为半胱氨酸。特别优选所有基团C为半胱氨酸。
基团Xn和Xm可以为与疏水蛋白的其他成分自然连接的肽序列。然而，对于一种或两种基团，这些还可以为不与疏水蛋白的其他成分自然连接的肽序列。这些还应理解为指其中自然存在于该蛋白中的肽序列由不是自然存在于该蛋白中的肽序列扩展的那些基团Xn和/或Xm。
基团Xn和/或Xm可以完全或部分包含不是自然存在于该蛋白中的肽序列。不是自然存在于该蛋白中的肽序列(基团Xn和/或Xm可以部分或完全由其组成)也在下文称为融合伴侣。这些融合伴侣通常为至少20个，优选至少35个氨基酸长。这些例如可以是具有20-500个，优选30-400个，特别优选35-100个氨基酸的序列。
融合伴侣例如已经公开于WO 2006/082251、WO 2006/082253和WO2006/131564中。
融合伴侣可以选自大量蛋白。可以只有一种融合伴侣与多肽的基团相连，或者多种融合伴侣与多肽的基团相连。然而，例如还可以是在位置Xn或Xm处的两种融合伴侣与多肽的基团相连。
特别合适的融合伴侣是天然存在于微生物中的蛋白，尤其是存在于大肠杆菌(Escherichia coli)或枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)中的蛋白。该类融合伴侣的实例是序列yaad(SEQ ID NO：16，WO 2006/082251)，yaae(SEQID NO：18，WO 2006/082251)，遍在蛋白和硫氧还蛋白。高度合适的还有这些指定序列的片段或衍生物，其仅包含部分，例如70-99％，优选5-50％，特别优选10-40％的指定序列，或者其中各氨基酸或核苷酸与指定序列相比发生变化，其中百分数数据在每种情况下涉及氨基酸数目。
在另一优选实施方案中，疏水蛋白除了指定融合伴侣外还具有，所谓的亲和结构域(亲和标记/亲和尾)作为基团Xn或Xm之一或作为该基团的端部成分。在这里，这些以原则上已知的方式为可能与某些互补基团相互作用并且可以用于更容易后处理和提纯蛋白的锚固基团。该类亲和结构域的实例包括基团(His)k、(Arg)k、(Asp)k、(Phe)k或(Cys)k，其中k通常为1-10的自然数。优选它可以为基团(His)k，其中k为4-6。这里基团Xn和/或Xm可以仅由该亲和结构域组成或由与多肽的基团自然或不自然连接的氨基酸和该亲和结构域组成。
在另一优选实施方案中，疏水蛋白还可以在其多肽序列中改性，例如通过糖基化、乙酰化或通过化学交联，例如用戊二醛化学交联。
所用疏水蛋白的一种生物学性能是当表面如载体表面被该蛋白覆盖时表面性能发生变化。
表面性能的变化可以由试验方法测定，例如通过测量用该蛋白涂敷表面之前和之后水滴的接触角并确定这两种测量结果的差。
接触角测量程序原则上对本领域熟练技术人员是已知的。测量在室温下用5μl的水滴并使用玻璃薄层作为基体进行。用于测量接触角的合适方法实例的准确试验条件给于试验部分中。在其中所述条件下，所用疏水蛋白可以扩大接触角。因此，疏水蛋白可以使接触角的变化扩大，例如扩大至少20°，优选至少25°，特别优选至少30°、40°、45°，尤其是50°，在每种情况下与相同尺寸的水滴和未涂敷玻璃表面的接触角相比较。
对实施本发明特别优选的疏水蛋白是dewA、rodA、hypA、hypB、sc3、basf1、basf2型疏水蛋白。这些疏水蛋白(包括其序列)例如公开于WO2006/82251中。除非另有说明，下述序列指WO 2006/82251中所公开的序列。含SEQ-ID号的综述表格可以在WO 2006/82251第20页中找到。
根据本发明特别合适的是疏水蛋白yaad-Xa-dewA-his(SEQ ID NO：20)，yaad-Xa-rodA-his(SEQ ID NO：22)或yaad-Xa-basf1-his(SEQ ID NO：24)，其中多肽序列表述在括号中，以及用于其编码的核酸序列，尤其是根据SEQ ID NO：19、21、23的序列。特别优选可以使用yaad-Xa-dewA-his(SEQ ID NO：20)。特别优选的实施方案还有由示为SEQ ID NO.20、22或24的多肽序列开始通过置换、插入或缺失至少1个，至多10个，优选5个氨基酸，特别优选所有氨基酸的5％而得到且仍具有起始蛋白的生物学性能的至少50％的蛋白。在这里，蛋白的生物学性能应理解为指前面已经描述的接触角变化。
特别适合进行本发明的疏水蛋白是通过缩短yaad融合伴侣而衍生于yaad-Xa-dewA-his(SEQ ID NO：20)、yaad-Xa-rodA-his(SEQ ID NO：22)或yaad-Xa-basf1-his(SEQ ID NO：24)的疏水蛋白。代替具有294个氨基酸的完整yaad融合伴侣(SEQ ID NO：16)，可以有利地使用缩短的yaad基团。然而，缩短的基团应包含至少20个，优选至少35个氨基酸。例如，可以使用具有20-293个，优选25-250个，特别优选35-150个，例如35-100个氨基酸的缩短基团。该蛋白的一个实例是yaad40-Xa-dewA-his(SEQ IDNO：26，PCT/EP2006/064720)，其具有缩短至40个氨基酸的yaad基团。
在融合伴侣与多肽基团之间的切割位点可以用于切开该融合伴侣(例如通过蛋氨酸上的BrCN切割，Xa因子切割，肠激酶切割，凝血酶切割，TEV切割等)。
根据本发明存在于载体中的疏水蛋白或用于生产化妆品组合物的疏水蛋白可以通过肽合成的已知方法化学制备，例如按照Merrifield通过固相合成制备。
天然疏水蛋白可以使用合适方法由天然源分离。例如可以参考
Figure GPA00001075075000051
等人，Eur.J Cell Bio.63，122-129(1994)或WO 96/41882。
由嗜热踝节菌(Talaromyces thermophilus)得到不含融合伴侣的疏水蛋白的基因工程生产方法例如由US 2006/0040349描述。
包含融合伴侣的疏水蛋白的制备可以优选通过如下基因工程方法进行，其中将编码该融合伴侣的核酸序列和编码多肽基团的核酸序列，尤其是DNA序列结合，从而在宿主生物体中通过结合核酸序列的基因表达生产所需蛋白。一种这类制备方法例如公开于WO 2006/082251或WO2006/082253中。融合伴侣使得疏水蛋白的制备显著更容易。在基因工程方法中包含融合伴侣的疏水蛋白以比不包含融合伴侣的疏水蛋白显著更好的产率生产。
通过基因工程方法由宿主生物体生产的疏水蛋白可以以原则上已知的方式后处理并且可以使用已知的色谱方法提纯。
通常将提纯的疏水蛋白用于实施本发明。
在优选实施方案中，可以使用WO 2006/082253第11/12页中公开的简化后处理和提纯方法。
为此，首先由发酵培养液中分离出发酵细胞，破碎并由包函体分离细胞碎片。后者可以有利地通过离心进行。最后可以破碎包函体，例如通过酸、碱和/或洗涤剂以原则上已知的方式破碎，以释放疏水蛋白。含有根据本发明使用的疏水蛋白的包函体通常可以仅使用0.1M NaOH在约1小时内完全溶解。
必要的话可以在调节至所需pH之后不经进一步提纯而将所得溶液用于实施本发明。然而，疏水蛋白还可以作为固体与溶液分离。分离优选借助喷雾造粒或喷雾干燥进行，如WO 2006/082253第12页所述。在简化后处理和提纯方法之后得到的产物除了细胞碎片的残留外还包含通常为约80-90重量％的蛋白。取决于发酵条件，疏水蛋白的量通常为30-80重量％，相对于所有蛋白的量。
包含疏水蛋白的分离产物可以作为固体储存。
疏水蛋白可以直接或在切割和分离出融合伴侣之后用于实施本发明。切割有利地在包函体分离及其溶解之后进行。
根据本发明，疏水蛋白可以存在于干燥固体载体中。另外，干燥固体载体可以包含疏水蛋白或不同疏水蛋白的组合物，例如包含两种或三种疏水蛋白的组合物。
该载体为固体且是干燥的。干燥在这里是指该载体不含水分或者仅具有小水分含量。该水分含量可以通过借助重量分析测量法测定残留水分而确定。为此，首先在室温下确定未负载载体的重量。在负载该载体之后，相应地将其干燥。在干燥之后，确定现已负载的载体重量。由这些值之间的差得到残留水分，其表述为基于未负载载体(100％)的百分数。然而，这里应注意的是用来负载载体的物质(疏水蛋白等)同样对已负载载体的重量有贡献。本发明载体的残留水分可以至多为25％，优选至多12％，特别优选至多7％，非常特别优选至多3％。然而，该载体还可以绝对具有不可检测的残留水分。
优选该载体为本身具有并不完全光滑但不规则的表面的材料。例如，任何表面可以具有凹陷。该载体还可以具有空腔、泡孔和/或小孔。然而，该载体还可以由纤维状材料或包含纤维的材料制成。优选该载体为泡沫、海绵、非织造织物、纸和/或脱脂棉。
在一个实施方案中，该载体具有亲水表面。
在本发明的一个实施方案中，若表面不拒水，则将其称为亲水的。亲水表面通常对水具有小于90°的接触角。
此外，在特殊实施方案中，载体具有小孔度。
在本发明的一个实施方案中，载体为泡沫。泡沫是其结构由许多泡孔(空腔，由基础材料围成的小孔)形成的塑料。基本上所有塑料都适合发泡。在一个实施方案中，优选适合化妆品用途的泡沫。
在本发明的特殊实施方案中，载体为开孔泡沫，尤其是基于蜜胺-甲醛树脂的开孔泡沫。
基于聚氨酯的泡沫的生产方法例如由WO 2005/103107或WO2006/008054已知。
基于蜜胺-甲醛树脂的泡沫的生产方法例如公开于EP-A 17 672、EP-A37 470和WO 01/94436中。据此，将分散或溶解于含水介质中的蜜胺-甲醛预缩合物、挥发剂、分散剂和硬化剂的混合物加热、发泡并固化。加热例如可以借助热空气、蒸汽或微波辐射进行。蜜胺/甲醛预缩合物在该混合物中的浓度通常为55-85重量％，优选63-80重量％。
基于蜜胺-甲醛树脂的开孔泡沫的粗密度通常为3-100kg/m3，优选5-20kg/m3。术语“粗密度”以原则上已知的方式指包括孔体积在内的泡沫密度。泡孔数通常为50-300个泡孔/25mm。平均孔度通常为100-250μm(测量方法：带有分子探针的系统NMR分析或电子显微法)。拉伸强度优选为100-150kPa且断裂伸长率为8-20％(拉伸强度和断裂伸长率的测量方法：Werstoff-Führer Kunststoffe，Hellerich，Harsch，Haenle，第9版，CarlHansen Verlag，2004，第259-275页)。
在本发明的另一实施方案中，载体为海绵或海绵状材料。
海绵通常应理解为指由气体填充的例如多面体形泡孔组成的固体或半固体弹性泡沫，这些泡孔由高度粘稠和/或固体泡孔支柱限定。可以使用天然海绵，半合成或合成生产的海绵状结构。合成海绵状材料的实例是聚氨酯、聚丙烯酸酯、聚(甲基)丙烯酸衍生物、乙酸乙烯酯的均聚物和共聚物。天然和半合成聚合物尤其包括纤维素、纤维素醚或纤维素酯如乙酸纤维素和乙酸邻苯二甲酸纤维素。天然聚合物的实例是多糖如藻酸盐、西黄耆胶、黄原胶、瓜尔胶及其盐和衍生物。可以使用几丁质和几丁质衍生物。在下文中，优选使用具有纤维结构的物质，如硬蛋白，例如胶原蛋白、角蛋白、贝壳硬蛋白、纤蛋白、弹性蛋白和几丁质。此外，还可以使用相互稳定交联的多糖。
在本发明的另一实施方案中，载体由纺织品、非织造织物、纸和/或脱脂棉制成。
该类材料可以是编织或针织的或者可以呈复合材料形式。复合材料根据DIN 61210 T2(不再生效)包括非织造织物、纸、脱脂棉和毡，它们根据本发明都能使用。非织造织物是由纺纱用短纤维(即具有有限长度的纤维)或长丝(环形纤维)制成的松散材料，这些纤维大多数由聚丙烯、聚酯或粘胶生产，它们通常通过纤维所固有的粘附力保持在一起。在这里各纤维可以具有优选的方向(取向的或交叉铺置纤网)或未取向(无规纤网)。非织造织物可以通过针刺法、相互缠结或借助强水射流盘绕而机械结合。粘接的非织造织物通过用液体粘合剂(例如丙烯酸酯聚合物、SBR/NBR、聚乙烯基酯、聚氨酯分散体)将纤维胶合在一起而形成或通过熔融或溶解已经在生产过程中加入非织造织物中的所谓的粘合纤维而形成。在粘结过程中，纤维表面部分被合适的化学品溶解并通过压力粘合或在升高的温度下熔结[J.Falbe，M.Regnitz：-Chemie-Lexikon，第9版，Thieme-Verlag，Stuttgart(1992)]。
在本发明的另一实施方案中，脱脂棉指由纤维绒组成且压实后的松散纤维团，其中纤维通过其自然粘附而保持在一起。它们由棉毛、羊毛、铁兰、纤维素以及石英，尤其是矿物纤维组成。脱脂棉优选以脱脂棉垫或脱脂棉包的形式或以其组合使用。
对本发明而言，纺织品应理解为指纺织纤维、半成品纺织品和成品纺织品以及由其生产的包含用于技术目的的纺织品结构的制品。纺织品可以由天然来源的材料如棉、羊毛或亚麻制成，或由混合织物，例如棉/聚酯、棉/聚酰胺制成。纺织品还可以由聚丙烯腈、聚酰胺和尤其是聚酯或天然来源的材料与聚丙烯腈、聚酰胺和尤其是聚酯的混合物组成。
纸通常为由60-95％机械或化学蒸煮纤维(大多数为植物来源的)组成的扁平材料，这些纤维在含水悬浮液中粘合在一起并在加入助剂下通过在筛上脱水而硬化得到纸页。纸由纤维、助剂和水组成。除了来自化学浆、机械浆和破布(例如棉、大麻纤维)的植物纤维外，还使用动物、矿物或合成纤维。此外，作为再生纤维的再循环纸就量而言代表了最重要的造纸用纤维源。
在特殊实施方案中，本发明载体为呈抹布形式的纸，如纸手帕、化妆抹布、洗涤布、纸手巾、纸清洁布或厨房抹布。
在另一实施方案中，将干燥固体载体连于施涂器。该施涂器例如可以由塑料、玻璃、木材、金属或纺织品制成。可以将一种载体或多种相同载体，例如两种或三种泡沫连于施涂器。
在另一实施方案中，可以将载体组合连于施涂器。下表给出了由在每种情况下由“x”表征的材料的组合组成的载体T1-T68。
  载体   泡沫   海绵   纺织品   非织造织物   纸   脱脂棉
  T1   x   x   x   x   x   x
  T2   x   x   x   x   x
  T3   x   x   x   x   x
  载体   泡沫   海绵   纺织品   非织造织物   纸   脱脂棉
  T4   x   x   x   x   x
  T5   x   x   x   x   x
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  T68   x   x
使特定载体负载疏水蛋白。这可以是一种疏水蛋白或不同疏水蛋白的混合物，例如两种或三种不同疏水蛋白的混合物。
在本发明的一个实施方案中，使该载体负载包含疏水蛋白的混合物。
原则上可以以任何方式使该载体负载疏水蛋白。本领域熟练技术人员当然知道各种负载方法。
在一个方案中，使用所谓的“浸渍方法”，其中将载体浸渍于浸渍浴中或拖过浴。
第二方案为“喷雾方法”，其中将该混合物喷雾于载体上。
所用其他方法是所谓的洗提方法。在这些方法中，载体例如以非织造织物、纸、纺织品或复合网经过连续负载含疏水蛋白的混合物的洗提板、卷轴或喷嘴。
在本发明的一个实施方案中，将包含疏水蛋白和至少水或含水溶剂混合物的混合物用于负载载体。
合适的含水溶剂混合物包含水和一种或多种水溶混性溶剂。该类组分的选择的限制仅在于疏水蛋白和其他组分必须在该混合物中充分可溶。该类混合物通常包含至少50重量％，优选至少65重量％，特别优选至少80重量％的水。非常特别优选仅使用水。本领域熟练技术人员取决于混合物的所需性能对水溶混性溶剂进行适当选择。合适的水溶混性溶剂实例包括一元醇，如甲醇、乙醇或丙醇，高级醇如乙二醇或聚醚多元醇以及醚醇如丁基乙二醇或甲氧基丙醇。
优选用于处理的混合物具有的pH为4或更高，优选6或更高，特别优选7或更高。pH尤其为4-11，优选6-10，特别优选7-9.5，非常特别优选7.5-9。例如pH可以为7.5-8.5或8.5-9。
为了调节pH，该混合物优选包含合适的缓冲剂。本领域熟练技术人员取决于对负载所设计的pH选择合适的缓冲剂。例如可以提到磷酸二氢钾缓冲剂、三(羟甲基)氨基甲烷缓冲剂(三羟甲基氨基甲烷缓冲剂)、硼砂缓冲剂、碳酸氢钠缓冲剂和磷酸氢钠缓冲剂。优选三羟甲基氨基甲烷缓冲剂。
缓冲剂在该溶液中的浓度由本领域熟练技术人员根据该混合物的所需性能确定。本领域熟练技术人员通常确保充分的缓冲能力以使载体的最均匀负载成为可能。已经证明0.001-1mol/l，优选0.005-0.1mol/l，特别优选0.01-0.05mol/l的浓度是有用的。
疏水蛋白在该混合物中的浓度由本领域熟练技术人员根据负载的所需性能选择。在更高浓度下通常可以实现更快速的负载。已经证明浓度通常为0.1-1000μg/ml，优选1-500μg/ml，特别优选10-250μg/ml，非常特别优选30-200μg/ml，例如50-100μg/ml是有用的。
此外，所用混合物可以任选包含其他组分。其他组分的实例包括表面活性剂。合适的表面活性剂例如是包含聚烷氧基，尤其是聚氧乙烯基团的非离子表面活性剂。实例包括聚氧乙烯硬脂酸酯，烷氧基化酚等。合适表面活性剂的其他实例包括聚乙二醇(20)脱水山梨醇单月桂酸酯
Figure GPA00001075075000131
Figure GPA00001075075000132
聚乙二醇(20)脱水山梨醇单棕榈酸酯
Figure GPA00001075075000133
聚乙二醇(20)脱水山梨醇单硬脂酸酯聚乙二醇(20)脱水山梨醇单油酸酯
Figure GPA00001075075000135
Figure GPA00001075075000136
环己基甲基-βD-麦芽糖苷、环己基乙基-βD-麦芽糖苷、环己基-正己基-βD-麦芽糖苷、正十一烷基-βD-麦芽糖苷、正辛基-βD-吡喃麦芽糖苷、正辛基-βD-吡喃葡糖苷、正辛基-βD-吡喃葡糖苷、正十二烷酰基蔗糖。其他表面活性剂例如公开于WO 2005/68087第9页第10行至第10页第2行。表面活性剂的浓度通常为0.001-0.5重量％，优选0.01-0.25重量％，特别优选0.1-0.2重量％，在每种情况下基于该制剂中所有组分的量。
此外，还可以向该混合物中加入金属离子，尤其是二价金属离子。金属离子可能有助于更均匀的负载。合适的二价金属离子例如包括碱土金属离子如Ca2+离子。该类金属离子优选可以作为可溶于配制剂中的盐加入，例如以氯化物、硝酸盐或碳酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、葡糖酸盐、氢氧化物、乳酸盐、硫酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐形式。例如可以加入氯化钙或氯化镁。溶解度任选还可以通过合适的助剂如络合剂提高。存在的话，基于该金属离子的浓度通常为0.01-10mmol/l，优选0.1-5mmol/l，特别优选0.5-2mmol/l。
在本发明的一个实施方案中，除了包含疏水蛋白的混合物外，载体还负载有化妆品如凝胶、泡沫、喷雾剂、软膏、霜剂、乳液、悬浮液、洗剂、乳剂或糊剂。这些化妆品可以在皮肤和头发上带来其他积极效果。
化妆品可以包含下列成分：
●染料，例如本领域熟练技术人员由化妆品手册已知的那些；
●化妆品和/或皮肤病活性成分，例如着色活性成分，皮肤和头发着色剂，调色剂，晒黑剂，漂白剂，角蛋白硬化物质，抗菌活性成分，光过滤活性成分，驱避活性成分，充血物质，溶角蛋白和促角蛋白物质，去头屑活性成分，消炎药，角化物质，抗氧化活性成分以及起自由基清除剂作用的活性成分，皮肤润湿物质或保湿物质，加脂活性成分，抗红斑或抗过敏活性成分及其混合物；
●用于皮肤护理和保护的化妆品组合物，用于装饰性化妆品的指甲护理组合物，皮肤化妆品组合物，例如爽肤水、面膜和其他化妆水。
制剂可以通过将上述含疏水蛋白的混合物与所需额外的上述组分混合并稀释到所需浓度而得到。制剂当然还可以通过相应地溶解分离的固体疏水蛋白而得到。
载体在任何情况下用含疏水蛋白的混合物或含疏水蛋白的制剂处理。为了确保载体的均匀负载，该载体应尽可能完全用该混合物或制剂饱和。负载尤其可以通过将载体浸渍在该混合物或制剂中，用该混合物或制剂喷雾或用该混合物或制剂灌注而进行。
通常要求一定的接触时间以负载该载体。本领域熟练技术人员根据所需结果选择合适的接触时间。典型接触时间的实例是0.1-12小时，这并不意欲将本发明限于此。例如可以通过施加压力或真空而影响该时间。
接触时间通常取决于温度和疏水蛋白在该混合物或制剂中的浓度。在负载工艺过程中温度越高且浓度越高，接触时间可以越短。在负载工艺过程中的温度可以为室温或者可以为升高的温度。温度例如可以为5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110或120℃。优选温度为15-120℃，特别优选20-100℃，并且例如为40-100℃或70-90℃。温度例如可以通过加热待负载的载体浸渍于其中的浴而引入。然而，还可以随后加热浸渍过的载体，例如借助IR射线。
在本发明的优选实施方案中，负载疏水蛋白在微波辐射下进行。结果接触时间可以非常显著地缩短。取决于能量输入，在某些情况下仅几秒钟就足以使该载体负载疏水蛋白。
在负载之后，将溶剂从载体中除去。优选可以通过施加压力而从载体中机械除去溶剂。任选还可以用水或优选含水溶剂混合物预先洗涤该载体。溶剂的除去例如可以通过在空气中简单蒸发而进行。然而，溶剂的除去还可以通过提高温度和/或使用合适的气流和/或施加真空而变得更容易。例如可以通过在干燥箱中加热负载的载体或将加热的气流吹于其上而使蒸发更容易。还可以将各种方法组合，例如通过在对流干燥箱或烘道中干燥。此外，负载的载体还可以借助辐射，尤其是IR辐射加热以除去溶剂。为此，可以使用所有类型的宽带IR发射体，例如NIR、MIR或NIR发射体。然而，例如还可以使用IR激光。该类辐射源可以各种辐射几何尺寸市购。
干燥过程中的温度和干燥时间由本领域熟练技术人员设定。已经证明有用的是干燥温度通常为30-130℃，优选50-120℃，特别优选70-110℃，非常特别优选75-105℃并且例如为85-100℃。在这里想要的是载体本身的温度。在干燥器中的温度当然也可以更高。当然，干燥温度越高，干燥时间越短。同样，若在不足一大气压下进行干燥，则干燥温度可以更低且干燥时间更短。干燥时间也由载体的所需残留水分含量控制且可能以决定性方式影响该含量。
在载体负载和干燥过程中的温度处理可以有利地相互结合。因此，例如可以首先用该混合物或制剂在室温下处理载体，然后在升高的温度下干燥和热处理。在该方法的优选实施方案中，至少在两个步骤“负载”或“干燥”中的一个中使用升高的温度。优选在两个步骤中都使用高于室温的温度。
负载可以在载体的生产工艺之后直接进行，例如由载体制造商自己进行。然而，当然还可以直到较后的时间才进行，例如由其他加工商或在将该载体输送到最终用户之后由该最终用户自己进行。
在本发明的第二实施方案中，可以通过在疏水蛋白存在下生产载体而得到负载的载体。
在本发明的另一实施方案中，可以通过在疏水蛋白存在下生产泡沫而得到负载的载体。
在生产基于蜜胺-甲醛缩合产物的开孔泡沫的情况下，为此可以将疏水蛋白和任选其他上述成分与上述蜜胺-甲醛预缩合物的上述水溶液或水分散体、挥发剂、分散剂和硬化剂混合。然后可以原则上已知的方式将该混合物加热、发泡和固化。
本发明载体和本发明方法的特殊优点在于疏水蛋白在载体上的干燥状态下也保持稳定。
本发明的干燥固体载体优选用于除去水不溶性物质的方法中。
这些通常为多种物质，但也可以仅存在一种物质。
根据本发明从基体表面除去的物质在水中的溶解度可以从基本水不溶性到完全水不溶性。这些物质在室温下在水中的溶解度通常为约1g/l。然而，在室温下在水中的溶解度还可以小于1g/l。
在本发明的一个实施方案中，水不溶性物质为脂肪、油、蜡和/或包含脂肪、蜡和/或油的组合物。除了油、脂肪和/或蜡外，组合物还可以包含其他物质。
在一个实施方案中，该组合物还可以包含油、脂肪和蜡的组合：
a)油、蜡和脂肪
b)油和蜡
c)油和脂肪
d)蜡和脂肪
在本发明的一个实施方案中，油为具有较低蒸气压的水不溶性液体有机化合物。油包括脂油、芳香油、矿物油和硅油。
脂油是在室温下为液体的脂肪，即甘油三脂肪酸酯的混合物，而脂肪在室温下为固体。
芳香油是来自植物或植物部分的油状、水蒸气挥发性提取物，其取决于植物来源而具有强烈的特征性气味。它们大多数由萜烯组成(实例：柠檬油)。然而，芳香油还可以以合成方式生产。
矿物油由原油或煤得到且为烃化合物。从化学角度看，该物质混合物中的大多数化合物为链烷烃类型。
硅油基于硅-氧单元和有机侧链的聚合物和共聚物。它们对氧化、热和影响相对不敏感。
在本发明的一个实施方案中，脂肪为三元醇甘油(1，2，3-丙三醇)与三种，大多数情况下不同的，主要是偶数和未支化的脂族单羧酸，所谓的脂肪酸的酯。
在本发明的一个实施方案中，蜡为当前由其机械物理性能限定的物质。相反，它们的化学组成和来源变化很大。若一种物质可以在20℃下捏合，为固体或脆硬，具有粗至细结晶结构，颜色呈半透明至不透明，但不呈玻璃状，在40℃以上熔融而不分解，在熔点以上一点即可呈液体(有点粘稠)，具有高度温度依赖性稠度和溶解度并且可以使用轻微压力抛光，则将其称为蜡。
动物和植物蜡包括类脂。这些物质混合物的主要组分是脂肪酸与长链脂族伯醇的酯。杨梅酯例如为棕榈酸与肉豆蔻醇的酯并且为蜂蜡的主要成分。这些酯的结构不同于为甘油三脂肪酸酯的脂肪。
动物蜡例如为鲸蜡和蜂蜡。植物蜡例如为甘蔗蜡、蜡棕的加洛巴蜡。霍霍巴油不是甘油三酯且因此实际上不是油，而从化学上看是液态蜡。
地质地蜡(地蜡以及由其生产的纯地蜡)基本由烃组成。
合成蜡主要由原油得到。主产物为硬石蜡，其例如用于蜡烛或鞋油。对于特殊应用，将天然蜡化学改性或完全合成(聚乙烯，共聚物)。大豆蜡也可以通过氢化由大豆生产。
在本发明的一个实施方案中，水不溶性物质为皮脂和/或化妆品。
在本发明的一个实施方案中，化妆品应理解为指装饰性化妆品或美容品。
装饰性化妆品是施用于(面部)皮肤、嘴唇、头发或指甲上一次使用的物质，唯一或主要的目的是短时间内显著改变它们的外观，大多数情况下是就颜色而言，但这种改变是可逆的。
皮脂通常为皮肤表面脂肪，其在较低程度上由角质脂肪、角化副产物组成，并且源于皮脂腺。皮脂的平均组成为：甘油三酯(19.5-49.4％质量含量)，蜡酯(22.6-29.5％质量含量)，脂肪酸(7.9-39.0％质量含量)，角鲨烯(10.1-13.9％质量含量)，甘油二酯(1.3-4.3％质量含量)，胆甾醇酯(1.5-2.6％质量含量)，胆甾醇(1.2-2.3％质量含量)。
在本发明的一个实施方案中，将包含疏水蛋白的载体用于从皮肤除去皮脂的化妆方法中。
在本发明的另一实施方案中，将包含疏水蛋白的载体用于从头发除去皮脂的化妆方法中。在本发明的另一实施方案中，将包含疏水蛋白的载体用于从皮肤除去化妆品的化妆方法中。在本发明的另一实施方案中，将包含疏水蛋白的载体用于从头发除去化妆品的化妆方法中。在本发明的另一实施方案中，将包含疏水蛋白的载体用于从皮肤除去化妆品和皮脂的化妆方法中。在本发明的另一实施方案中，将包含疏水蛋白的载体用于从头发除去化妆品和皮脂的化妆方法中。
在本发明方法中，从基体表面除去水不溶性物质。
所用基体可以是固体。固体可以是无定形、结晶或部分结晶的。基体可以由一种或多种固体组成。基体可以包含气体和/或液体包夹物。
在本发明的一个实施方案中，基体由水或玻璃、塑料、木材、金属、纺织品、羽毛、毛皮、皮肤和/或头发组成。
水例如可以包括海水、海洋水、河水、溪水、水塘水和游泳池水。
玻璃可以包括工业玻璃，光学玻璃和装饰性玻璃。这些的实例是片状玻璃如窗玻璃和镜子。
塑料通常为其基础成分是合成或半合成生产的具有有机基团的聚合物的固体。塑料用于许多领域，例如用于汽车构造、建筑工业、家用领域和花园。
木材通常包括木质化植物组织。在一个实施方案中，木材还应理解为指涂敷木材，例如正如在家具、镶木地板和类似地板覆盖物以及玩具制造中所使用的。
术语金属通常应理解为指所有除了氢、碳、磷、硒、碘、氦、氖、氩、氪、氙、氡和ununoctium以外的化学元素。此外，术语金属也包括不锈钢，例如家用电器或刀具的不锈钢。不锈钢(根据DIN EN 10020)是具有特定纯度的合金化或非合金化钢的名称，例如其硫和磷含量(所谓的铁伴生物)不超过0.025％的钢。
此外，该术语还覆盖金属合金。
在本发明的一个实施方案中，术语毛皮涉及动物毛皮。在本发明的一个实施方案中，术语羽毛涉及动物羽毛。
在本发明的一个实施方案中，术语皮肤涉及人类面部皮肤。
基体表面主要是待处理基体的外层。基体表面可以是光滑的，均匀的，并不完全光滑但为不规则的，例如各表面可以具有凹陷。基体表面还可以具有空腔、泡孔和/或小孔。
本发明方法的特征在于包含疏水蛋白的载体的简单和容易处理。负载有疏水蛋白的干燥固体载体通过简单接触基体表面，例如以在温和压力下擦拭或搽抹的形式而除去水不溶性物质。
本发明方法确保使用载体轻柔地除去水不溶性物质。
除了用于已经描述的化妆品领域外，本发明可以用于许多其他领域如家庭、环境、运输和工业中。
例如在工业上可以将本发明方法用于清洁工业装置或装置部件。这主要在无水区或可以使用本发明的干燥固体载体彻底清洁的区域极为令人感兴趣。
本发明例如还可以用于除去陆地和/或水体中的油污染物。相比于常规方法的一个优点是使用本发明方法，负载有疏水蛋白的载体吸收更多的油且所述油仅以非常小的量再次释放。因此，首先仅产生非常少的需要处置的油污染材料，其次油的释放降低防止了环境和人类的进一步污染。
此外，汽车或汽车部件如轮毂的清洁可以使用本发明进行。例如轮毂上的污垢易于被本发明载体吸收，并且由于所述载体仅以非常小的量再次释放污垢，所以清洁工人并不与除去的污垢接触。
具有非常低的残留水分的本发明干抹布还高度适合从光滑表面如塑料表面、镜子或窗格玻璃上除去污垢(例如指印)。本发明方法的优点是不必清洁整个表面，而是可以部分进行清洁。
本发明的优点是可以提供一种可以广泛使用的从基体表面除去水不溶性物质的方法。此外，该方法对基体表面温和。另外，该方法简单且允许以很少操作除去水不溶性物质。
实施例1：
借助负载有疏水蛋白的泡沫除去皮脂
将密度为9kg/m3的开孔蜜胺-甲醛泡沫(
Figure GPA00001075075000191
BASFAktiengesellschaft)的立方体形样品(2.5cm×2.5cm×2.5cm)用0.1g/l疏水蛋白A(WO 2007/14897的SEQ ID 20)或疏水蛋白B(WO 2007/14897的SEQ ID26)的溶液饱和。将含该饱和泡沫立方体的溶液在60℃下加热15小时。然后滗析水溶液。通过挤压从泡沫立方体中除去大部分的吸收液体，用超纯水洗涤几次，挤压并在40℃下干燥至恒重。
天然皮脂的除去在未处理的人皮肤上在前额区域测试。在温和压力下使小的切割立方体(边长约2.5cm)在皮肤上通过。
皮肤上残留的天然皮脂的测定使用Courage+Khazaka ElectronicGmbH的皮脂计SM810评价。在测量之前，必须按照制造商的说明在用于油脂测量的膜上对仪器进行调零。
结果表
  编号   样品   天然皮脂残留(％)
  K   对照(不含疏水蛋白的海绵)   100
  C1   含疏水蛋白B的海绵   21
  C2   含疏水蛋白A的海绵   28
“K”在这里表示对照试验，且“C”表示根据本发明的对比试验。在未处理的人皮肤上测量时，负载的泡沫立方体显示出对天然皮脂的改进除去。
实施例2：
用于吸收合成皮脂的负载有疏水蛋白的泡沫立方体
对于该试验，将20g合成皮脂(组成见下文)置于表面皿中并将密度为9kg/m3的开孔蜜胺-甲醛泡沫(
Figure GPA00001075075000201
BASF Aktiengesellschaft)的泡沫立方体(边长为15×15mm)浸渍1分钟。在这里比较未处理的泡沫立方体、负载有疏水蛋白B的泡沫立方体和“负载有”酪蛋白的泡沫立方体(类似于疏水蛋白B的负载，见实施例1)。
同样还使用纯甘油三辛酸/癸酸酯(
Figure GPA00001075075000202
812，Sasol)进行试验。
皮脂/甘油三酯的吸收量借助分析天平确定。
相对于泡沫立方体的重量计算皮脂/甘油三酯吸收。然后将泡沫立方体置于滤纸(
Figure GPA00001075075000203
型1243/90)上30分钟。再次使用分析天平确定重量并计算皮脂转移。
另外，将立方体置于水上并观察其行为。
结果：
  编号   载体：泡沫立方体   皮脂吸收，％   皮脂转移，％
  C3   负载有疏水蛋白B   74.5   3
  K2   未处理   60.5   4
  K3   负载有酪蛋白   39.8   5
发现本发明载体(C3)能够吸收最大量的合成皮脂并随后转移最少量的合成皮脂。负载有任意选择的对比蛋白(酪蛋白)的载体显示出明显降低的皮脂吸收以及随后更高的皮脂转移。
合成皮脂的组成：
41.0％   甘油三酯
25.0％   蜡酯
16.0％   脂肪酸
13.0％   角鲨烯
1.0％    甘油二酯
2.0％    胆甾醇酯
2.0％    胆甾醇
实施例3：
用疏水蛋白B负载脱脂棉垫
溶液制备：
疏水蛋白B：首先在室温下将疏水蛋白B(颗粒或粉末)预溶于水中。最大溶解度为50mg/ml(＝5％)。
为了提高速率，将该溶液加热到60℃。在完全溶解之后，借助Bradford测定蛋白含量。
负载缓冲剂：负载缓冲剂为50mM三羟甲基氨基甲烷缓冲剂。加入1mM CaCl2并用32％HCl将pH调节至8。
开始负载：
将缓冲剂倾入烧杯中，加入预溶的疏水蛋白B直到最终浓度为50μg/ml并搅拌。
将脱脂棉垫放入烧杯中。将它们完全浸入溶液中。
温育：
覆盖烧杯，然后在50℃下在加热箱中温育16小时。
洗涤：
然后在流动的软化水下彻底洗涤该垫。
干燥：
在加热箱中于50℃下将脱脂棉垫干燥24小时。
活性：
然后通过将一滴水(约50μl)置于脱脂棉垫上来检测负载成功与否。若与没有浸泡的未处理垫(约5秒)相比该滴水在用疏水蛋白处理的垫表面上保留更长于，则进一步使用该负载的脱脂棉垫。
实施例4：
用于吸收合成皮脂的负载有疏水蛋白的脱脂棉垫
1.试验：
对于该试验，将20g合成皮脂(组成见实施例2)或在试验变型中将甘油三辛酸/癸酸酯(
Figure GPA00001075075000221
812，Sasol)置于表面皿上，并将未处理和负载有疏水蛋白B的脱脂棉垫浸渍1分钟(负载见实施例3)。
将脱脂棉垫用砝码加载，然后置于含水容器中。
2.试验：
将一滴水置于未处理和负载有疏水蛋白B的脱脂棉垫上并观察水滴会多快渗入(负载见实施例3)。
结果：
对于试验1：
未处理的脱脂棉垫再次快速转移皮脂/甘油三酯。脱脂棉垫显著溶胀。
用疏水蛋白B处理的脱脂棉垫显著更好地保留皮脂/甘油三酯且也保持尺寸稳定。
对于试验2：
在未处理脱脂棉垫的情况下，水滴立即渗入，而用疏水蛋白B处理的脱脂棉垫在表面将水滴保留显著更长(水珠效果)。
实施例5
借助涂有疏水蛋白的泡沫吸收和包夹油或皮脂
下列试验说明涂有疏水蛋白的Basotect海绵显示出非常良好的油吸收，该油也因疏水蛋白涂敷而保留在海绵中。与十二烷基硫酸钠所显示的效果相比，该效果并不是基于可能的表面活性剂性能。
在每种情况下，将5个密度为9kg/m3的开孔蜜胺-甲醛泡沫(
Figure GPA00001075075000231
BASF AG)的立方体形样品(2.5cm×2.5cm×2.5cm)放入玻璃烧瓶中并用疏水蛋白A(WO 2007/14897的SEQ ID 20)或疏水蛋白B(WO 2007/14897的SEQ ID 26)的0.1g/l溶液饱和。同样，为了对比，将一个立方体用浓度为1％的SDS溶液(十二烷基硫酸钠)饱和。将含有饱和泡沫立方体的溶液在60℃下加热15小时。然后滗析溶液。
通过挤压从泡沫立方体中除去大部分吸收的液体，用超纯水洗涤几次，挤压并在40℃下干燥至恒重。
图1-5：
图1：处理的Basotect立方体
然后将立方体浸于为了更好地目测观察而已用苏丹红染色的环聚二甲基硅氧烷中。
图2：在浸于环聚二甲基硅氧烷/苏丹红中之后处理的Basotect立方体
然后将立方体浸于水中。这里可以清楚地看出用SDS处理的Basotect海绵立即再次释放环聚二甲基硅氧烷油并且该油没有保留在海绵中。与此相反，用疏水蛋白A或B涂敷的立方体很少显示出该油的释放。
图3：在水中含有吸收的环聚二甲基硅氧烷油的涂敷Basotect立方体
在浸渍之后立即可以看到涂有SDS海绵的渗出，而涂有疏水蛋白的海绵不释放任何油。
图4：可见与涂有SDS的海绵相反，甚至在延长的等待时间(30分钟)之后涂有疏水蛋白的海绵不释放任何油。
按照该浸渍程序，使用解剖刀将立方体小心切片。这里由于疏水蛋白处理过的海绵的强烈红色着色，可以见到该油保留在海绵中，而用SDS处理的海绵导致没有可辨认的海绵涂敷且几乎完全再次释放该油。
图5：水浴之后切片的Basotect立方体。强烈红色着色显示环聚二甲基硅氧烷油保留在涂有疏水蛋白的海绵中。相反，SDS看上去没有导致涂敷且油轻易从海绵再次逃逸。
使用疏水蛋白A和疏水蛋白B获得同样的结果。代替环聚二甲基硅氧烷，使用其他油或皮脂也显示出该效果。

Claims (12)

1.一种借助包含疏水蛋白的干燥固体载体从基体表面除去水不溶性物质的方法。
2.根据权利要求1的方法，其中所述水不溶性物质为脂肪、油、蜡或包含脂肪、蜡和/或油的组合物。
3.根据权利要求1或2的方法，其中所述水不溶性物质是皮脂和/或化妆品。
4.根据权利要求1-3中任一项的方法，其中所述基体为水或玻璃、塑料、木材、金属、纺织品、皮肤和/或头发。
5.根据权利要求1-4中任一项的方法，其中所述干燥固体载体由泡沫、海绵、纺织品、非织造织物、纸和/或脱脂棉制成。
6.一种除去皮脂和/或化妆品的化妆方法，其中皮肤和/或头发表面用包含疏水蛋白的干燥固体载体处理。
7.包含疏水蛋白的干燥固体载体在从基体表面除去水不溶性物质中的用途。
8.根据权利要求7的用途，其中所述水不溶性物质为脂肪、油、蜡或包含脂肪、蜡和/或油的组合物。
9.根据权利要求7或8的用途，其中所述水不溶性物质为皮脂和/或化妆品。
10.根据权利要求7-9中任一项的用途，其中所述基体为水或玻璃、塑料、木材、金属、纺织品、皮肤和/或头发。
11.根据权利要求7-10中任一项的用途，其中所述干燥固体载体由泡沫、海绵、纺织品、非织造织物、纸和/或脱脂棉制成。
12.包含疏水蛋白的干燥固体载体在从皮肤和/或头发表面除去皮脂和/或化妆品的化妆方法中的用途。
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