CN101864487B - 检测猪脂肪沉积能力的引物及其方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种检测猪脂肪沉积能力的引物及其方法与应用。检测猪脂肪沉积能力的引物，其核苷酸序列如序列表中序列1和序列2所示。检测猪脂肪沉积能力的方法，是以待测猪基因组DNA为模板，以序列表中序列1和序列2所示的DNA分子为引物，进行PCR扩增，Fnu4H I限制性内切酶酶切PCR扩增产物，检测Fnu4H I限制性内切酶酶切产物的大小；所述TP526TT基因型的猪脂肪沉积能力小于所述TP526CC基因型的猪或所述TP526CT基因型的猪。本发明检测猪脂肪沉积能力的方法，能通过简单的PCR扩增和酶切确定待测猪的基因型，以TP526TT基因型的猪进行育种可获得候选的瘦肉型的猪品系。
Description
技术领域
本发明涉及一种检测猪脂肪沉积能力的引物及其方法与应用。
背景技术
随着社会经济和人们消费水平的提高，改善肉质已经成为适应消费需求和应对畜禽业提高质量与寻求发展的重要议题之一。脂肪含量是影响肉质性状的一个重要的因素，且在动物维持正常的生理代谢和生理功能中起着非常重要的作用。脂肪是机体的主要成分之一，是维持正常生命活动所必需的物质基础。合理的脂肪储备是必须的，但当所摄入的能量超过维持身体正常需要时，多余的能量便被转化为体脂而沉积下来。在动物体内，脂肪蓄积的组织主要是脂肪组织，维持适当含量的皮下脂肪，可以使胴体的外观比较好，提高产品等级；适当的肌间脂肪(IMF)可以提高口感，产品的风味、嫩度和多汁性。因此，如何控制胴体脂肪沉积已经成为畜禽遗传育种学研究的热点之一。目前利用FSHβ辅助选择猪产仔数、矮小基因辅助选择鸡的体型等已经取得实质性进展，获得畜禽经济性状的功能基因及其标记，并利用其来加速畜禽重要经济性状的育种进展是动物遗传育种领域的重要创新。由于猪胴体脂肪和瘦肉含量是影响猪肉品种和消费的重要因素，采用分子生物学方法获得低脂肪、高瘦肉率的猪育种方法没有实质性突破。
发明内容
本发明的目的是提供一种可用于检测猪脂肪沉积能力的引物及其方法与应用。
本发明所提供的检测猪脂肪沉积能力的引物，其核苷酸序列如序列表中序列1和序列2所示。
本发明所提供的检测猪脂肪沉积能力的方法，是以待测猪基因组DNA为模板，以序列表中序列1和序列2所示的DNA分子为引物，进行PCR扩增，Fnu4HⅠ限制性内切酶酶切PCR扩增产物，检测Fnu4HⅠ限制性内切酶酶切产物的大小；
当酶切产物含有三条DNA片段，大小分别在200～300bp、100～150bp和小于100bp，待测猪为TP526CC基因型；
当酶切产物含有三条DNA片段，大小分别在200～300bp、150～200bp和小于100bp，待测猪为TP526TT基因型；
当酶切产物含有四条DNA片段，一条DNA片段大小在200～300bp、另一条DNA片段大小小于100bp，其余两条DNA片段的大小在100～200bp，待测猪为TP526CT基因型；
所述TP526TT基因型的猪脂肪沉积能力小于所述TP526CC基因型的猪或所述TP526CT基因型的猪。
本发明的检测猪脂肪沉积能力的方法，其中：所述检测Fnu4HⅠ限制性内切酶酶切产物的大小的方法为琼脂糖凝胶电泳。
本发明所提供的培育瘦肉型猪的方法，是用所述检测猪脂肪沉积的方法方法检测猪，获得TP526TT基因型的猪，以所述TP526TT基因型的猪为亲本进行育种获得瘦肉型的猪。
本发明检测猪脂肪沉积的方法，能通过简单的PCR扩增和酶切确定待测猪的基因型，TP526TT基因型猪的背膘显著低于TP526CC基因型和TP526CT基因型(P＜0.01)，以TP526TT基因型的猪进行育种可获得候选的瘦肉型的猪品系。
附图说明
图1为Fnu4HⅠ限制性内切酶对PCR产物进行酶切的图谱。
具体实施方式
实施例、
一、鉴定TP526T/C基因型
提取定远猪、长白猪等猪基因组DNA。以提取的基因组DNA为模板，TPS和TPA为引物进行PCR扩增，引物TPS和TPA的核苷酸序列如下：
TPS：5′-CACAGCTGGGAAATTGCAG-3′
TPA：5′-CACAATTTCCACGCTGCTAT-3′
PCR扩增体系：总体系25μL，10μM/L TPS 1.0μL，10μM/L TPA，1.0μL 10×PCR缓冲液2.5μL，2mM/L dNTPs 2.0μL，5U/μL Taq DNA聚合酶0.5μL，100ng/μL模板1.0μL，其余用超纯水补齐。
PCR扩增条件94℃预变性5min；94℃变性30s，56℃退火15s，72℃延伸45s，35个循环，最后72℃延伸10min，4℃保存。
用Fnu4HⅠ限制性内切酶对PCR产物进行酶切。
15μL酶切反应体系：100ng PCR产物，3U的Fnu4HⅠ限制性内切酶，1.5μL的10×缓冲液，加超纯水至15μL。
37℃过夜消化，3％的琼脂糖凝胶电泳检测，凝胶成像仪分析和拍照，统计基因型。
凝胶成像结果如图1所示，酶切后的PCR产物，在琼脂糖凝胶上呈现三条带，三条带的大小分别在200～300bp、100～150bp和小于100bp，该猪为TP526CC基因型(图1的泳道1，3，5和7)；PCR产物经过测序与预期结果一致。
酶切后的PCR产物，在琼脂糖凝胶上呈现四条带，一条带的大小在200～300bp、另一条带的大小小于100bp，其余两条带的大小在100～200bp，该猪为TP526CT基因型(图1的泳道2，4，6和9)；PCR产物经过测序与预期结果一致。
酶切后的PCR产物，在琼脂糖凝胶上呈现三条带，三条带的大小分别在200～300bp、150～200bp和小于100bp，该猪为TP526TT基因型(图1的泳道8和10)；PCR产物经过测序与预期结果一致。
二、TP526T/C基因型与猪脂肪沉积和瘦肉率的相关性
脂肪型定远猪107头(体重为80～85kg的肥育猪)、瘦肉型长白猪、瘦肉型大白猪和瘦肉型杜洛克猪共89头(体重为95～100kg的肥育猪)，同一饲养标准，用步骤(一)的方法鉴定基因型，用Piglog105测膘器检测三点平均背膘厚，结果见表1。
表明，TP526TT基因型猪的背膘显著低于TP526CC基因型和TP526CT基因型(P＜0.01)，
在实际的猪育种中，选择TP526TT基因型的猪进行育种可获得候选的瘦肉型的猪品系。
表1.不同基因型与猪背膘厚之关联性
以上的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通工程技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明的权利要求书确定的保护范围内。
序列表
<110>安徽农业大学
<120>检测猪脂肪沉积能力的引物及其方法与应用
<160>2
<210>1
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<400>1
cacagctggg aaattgcag 19
<210>2
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<400>2
cacaatttcc acgctgctat 20
Claims (4)
1.一种检测猪脂肪沉积能力的引物，其核苷酸序列如序列表中序列1和序列2所示，其中所述猪为脂肪型定远猪、瘦肉型长白猪、瘦肉型大白猪或瘦肉型杜洛克猪。
2.一种检测猪脂肪沉积能力的方法，是以待测猪基因组DNA为模板，以序列表中序列1和序列2所示的DNA分子为引物，进行PCR扩增，Fnu4H I限制性内切酶酶切PCR扩增产物，检测Fnu4H I限制性内切酶酶切产物的大小；
当酶切产物含有三条DNA片段，大小分别在200～300bp、100～150bp和小于100bp，待测猪为TP526CC基因型；
当酶切产物含有三条DNA片段，大小分别在200～300bp、150～200bp和小于100bp，待测猪为TP526TT基因型；
当酶切产物含有四条DNA片段，一条DNA片段大小在200～300bp、另一条DNA片段大小小于100bp，其余两条DNA片段的大小在100～200bp，待测猪为TP526CT基因型；
所述TP526TT基因型的猪脂肪沉积能力小于所述TP526CC基因型的猪或所述TP526CT基因型的猪；
所述猪为脂肪型定远猪、瘦肉型长白猪、瘦肉型大白猪或瘦肉型杜洛克猪。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述检测Fnu4H I限制性内切酶酶切产物的大小的方法为琼脂糖凝胶电泳。
4.培育瘦肉型猪的方法，是用权利要求2或3所述的方法检测猪，获得TP526TT基因型的猪，以所述TP526TT基因型的猪为亲本进行育种获得瘦肉型的猪。
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