CN101863872A - 一种荜茇碱的提取方法和包含荜茇碱的药物组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种荜茇碱的提取方法,其包括首先用无水乙醇提取,得到醇提物,再经连续两次硅胶柱分离,结晶之后可获得纯荜茇碱的晶体。本发明的提取方法除去了大量杂质,得到了纯度高达85~95%的荜茇碱,并且该方法的成本低、提取效率高,无需采用紧缺、有毒的试剂和技术复杂的设备,便于批量成产,特别地,按照本发明的提取方法得到的荜茇碱毒性低而活性强。本发明还提供包含所述荜茇碱的药物制剂、其制备方法及其在制备治疗高脂血症的药物中的应用。
Description
技术领域
本发明涉及一种荜茇碱的提取方法、包含按照该提取方法得到的荜茇碱的药物组合物及其在治疗高脂血症的药物组合物中的应用。
背景技术
荜茇(Piper longum L.)属于胡椒科,是蒙医常用的一种药材。蒙医理论认为:属于医治“巴达干”类药物,本品味辛,性温,腻、锐、轻、燥;有调理胃火,祛“巴达干·赫依”,滋补强壮、平喘、祛痰,止痛、调元,等功效。以荜茇入药的蒙药处方五味清浊散,主治胃火衰败,清浊未分离证,不思饮食。所谓清浊未分离证,相当于现代医学的代谢紊乱病变,如高脂血症。五味清浊散临床疗效很好。
根据文献报道,荜茇中主要包含生物碱、挥发油和木脂素等成分。现代研究表明,荜茇对心血管系统具有抗心肌缺血缺氧、降血脂、扩冠、抗心律、抗胃溃疡、抗惊厥、镇静、抗炎杀菌等作用,有很好的药用价值。长期以来,由于对于荜茇中各种具体组分的提取存在一定的困难,人们普遍采用荜茇提取物或其生物碱提取物的形式来用于医学应用。比如中国专利申请CN101554409A公开了一种用于肿瘤或心血管疾病的提取物,其是从荜茇中分离得到由荜茇生物碱组成的提取物,该提取物是多种生物碱的混合物;CN101352487A也公开了一种用于治疗高血脂、镇痛、抗炎或胃溃疡的荜茇提取物,其也是包含7种荜茇酰胺化合物和胡椒酸甲酯的混合物;CN1322543A公开了一种降血脂药的制备方法,其中也采用的是从荜茇中提取得到的不皂化物,包含7种生物碱类物质。
针对荜茇的进一步研究发现,从荜茇中提取得到的胡椒碱具有显著的降血脂的活性(包兰兰等,“胡椒碱降血脂作用的实验研究”,中国民族医药杂志,2004,10(1):22-23),但其具有一定的毒性(DawareM.B.Mujumdar A M.Ghaskadbi s.Reproductivtoxicity of piperine inSwiss albino mice Planta Med.2000.66(3):231-236),致使进一步的开发受到一定的限制。
荜茇碱(PiPerlonguminine),简称PPA,别名:荜拨亭、荜茇宁、荜拨明碱、胡椒亭、毕拨明宁碱、胡椒明宁碱、荜茇宁酰胺,结构如下:
N-异丁基-5-(3,4-亚甲双氧苯基)-2E,4E-戊二烯酰胺
是从蒙药荜茇中提取得到的有效成份,白色针状结晶,C16H19NO3,mp 160.0-162.0℃(甲醇),。经研究发现,该类化合物不仅具有同胡椒碱类似的降血脂作用,而且毒性很低,比如中国专利申请CN1634029A中就公开了异丁胡椒酰胺在制备降血脂药物或保健品中的应用,但是,由于现有的技术从荜茇中提取该类胡椒酰胺类物质比较困难,常规方法的提取率低且提取费用高,该专利申请CN1634029A采用了化学合成该化合物的方法来获得高纯度的异丁胡椒酰胺,其不仅合成条件要求严格、合成费用昂贵。更重要的是在合成中使用了具有剧毒的甲醇作为溶剂,由于甲醇在药物工业禁用的,因此,其将其用于药用是有害且不被允许的。
因而,特别地考虑到安全性,本领域迫切需要一种成本低、提取效率高、简单方便的从天然植物荜茇中提取荜茇碱的方法。
本发明人发现,首先用无水乙醇提取荜茇,得到醇提物,再经连续两次硅胶柱分离,结晶之后可获得纯荜茇碱的晶体,从而完成了本发明。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种荜茇碱的提取方法,其包括如下步骤:
(1)取荜茇药材颗粒,加入约6~8倍量(w/v)的无水乙醇,在45~55℃,优选约50℃下加热回流4~5小时,之后冷却至室温,过滤得滤液;给滤渣中再加约2倍量(w/v)的无水乙醇,在45~55℃,优选约50℃下加热回流1小时,之后冷却至室温,过滤得滤液;合并两次得到的滤液,回收乙醇,得到醇提物;
(2)将得到的醇提物经100~200目硅胶柱层析,以正己烷-乙酸乙酯为洗脱液,匀速洗脱,洗脱速度为约4ml/min,并用高效液相色谱法或薄层层析法分析,依次得到6种组分,回收洗脱液,得到固体状F1~F6,其中F4与F5是以混合物的形式存在;
(3)将F4+5的混合物再次经100~200目硅胶柱层析,以正己烷-乙酸乙酯为洗脱液,洗脱速度为3.8~4.2ml/min,依次洗脱得到3种组分:F4、F5(1)和F5(2),回收洗脱液;
(4)将组分F4再次经100~200目硅胶柱层析来纯化,以正己烷-乙酸乙酯为洗脱液洗脱,洗脱速度为3.0~3.5ml/min,用高效液相色谱法或薄层层析法分析,保留其中含有单一组分的洗脱部分,回收洗脱液将得到较纯的单体组分,在无水乙醇中重结晶,得到白色针状结晶:荜茇碱晶体。本发明提取得到的荜茇碱晶体的纯度高达85~90%.
在本文中的提取方法中,其中步骤(1)中荜茇药材颗粒的粒径为14~20目;其中洗脱液正己烷-乙酸乙酯中,正己烷与乙酸乙酯的体积比为1.5∶1;其中回收洗脱液是指通过蒸发回收的,比如在减压条件下40~50℃,常压条件下78~80℃范围内蒸发回收;其中过滤可以采用滤膜过滤,所述滤膜是本领域常规使用的普通滤膜,常速滤速时孔径为200~100μm。
在本文中,荜茇药材是指天然胡椒科植物荜茇的未成熟果实。
本发明的另一个目的是提供一种用于治疗高脂血症的药物组合物,其包括按照上述提取方法制备得到的荜茇碱与药学可接受的载体。该药物组合物可以是片剂或胶囊等固体制剂。
在所述药物组合物中,药学可接受的载体可以为淀粉、糊精、滑石粉。在一个实施方案中,根据本发明的药物组合物制备的片剂或胶囊中,荜茇碱、淀粉、糊精、滑石粉的重量比例为10.0∶77.7∶17.3∶5,片剂中包衣增重量占重量的3.9~4.1%。
本发明的包含荜茇碱的片剂是通过如下方法制备的:将按照本发明的方法提取得到的荜茇碱PPA粉碎,加入淀粉和糊精混匀,40%的乙醇润湿,16目制粒,50℃干燥1小时,整粒,加入滑石粉混匀,压片得素片,薄膜包衣使增重3.9~4.1%,即得。其中所述薄膜包衣可以采用如下方法:将胃溶型薄膜包衣预混剂与95%乙醇搅拌溶解一小时以上,使充分溶解混合均匀即可,其中包衣预混剂的用量为荜茇碱量的4%左右,包衣预混剂∶95%乙醇=1∶10(w/v);将所述素片置包衣锅内,转动并打开热风使药片温度达到35~40℃时,开始采用喷射仪器喷包衣预混剂,边吹热风边喷,使喷雾量均匀适度;热风量控在不致药片潮湿为宜,包衣结束后,用40℃烘干1小时。
本发明的包含荜茇碱的胶囊是通过如下方法制备的:将按照本发明的方法提取得到的荜茇碱PPA粉碎,加入淀粉和糊精混匀,用40%的乙醇润湿,16目制粒,50℃干燥1小时,整粒,加入滑石粉混匀,装相应规格的胶囊得胶囊剂。
本发明还提供所述荜茇碱或药物组合物在制备用于治疗高脂血症、动脉硬化、脂肪肝或肝硬化的药物中的用途,特别是在治疗高脂血症的药物中的用途。
在本发明中,“w/v”是指重量(g)/体积(ml)比,比如步骤(1)中,“荜茇药材颗粒的约6~8倍量(w/v)的无水乙醇”是指荜茇药材颗粒的重量(g)∶无水乙醇(ml)的体积=1∶6~8。
本发明的提取方法简单易行、无污染、安全性极高,且提取效率高,极易提纯、分离和回收;处方设计合理,辅料经济来源丰富,并可最大程度地保护药物的稳定性和生物利用度。
下面将参照附图说明和实施例进一步详细阐述本发明,但应当理解,本发明并不限于这些实施例以及使用的制备方法。
附图说明
图1为按照实施例1的方法提取得到的PPA的13C NMR图谱;
图2为按照实施例1的方法提取得到的PPA的13C NMR和DEPT(135°)图谱;
图3为按照实施例1的方法提取得到的PPA的1H NMR图谱;
图4为按照实施例1的方法提取得到的PPA的局部1H NMR图谱;
图5为按照实施例1的方法提取得到的PPA的局部1H NMR图谱;
图6为按照实施例1的方法提取得到的PPA的IR图谱;
图7为按照实施例1的方法提取得到的PPA的GCT-MS图谱。
具体实施方案
实施例1荜茇碱的提取
按照如下步骤从荜茇中提取荜茇碱:
(1)取500g荜茇药材颗粒(14目)置回流装置中,加入3000ml无水乙醇,在50℃下加热回流4小时,之后冷却至室温,滤膜(100~200μm)过滤得滤液。给滤渣中再加无水乙醇1000ml,在50℃下加热回流1小时,之后冷却至室温,滤膜(100~200μm)过滤得滤液;合并两次滤液,回收乙醇,得到醇提物;
(2)将得到的醇提物经100目硅胶柱层析,以1.5∶1(v/v)正己烷-乙酸乙酯为洗脱液,匀速(4.0ml/min)洗脱(经高效液相色谱法分析)依次得到6种组分:回收洗脱液,得到固体状F1~F6,其中F4与F5是以混合物的形式存在;
(3)将F4+5的混合物再次经100目硅胶柱层析,以1.5∶1(v/v)正己烷-乙酸乙酯为洗脱液,洗脱速度为4.0ml/min,依次洗脱得到3种组分:F4、F5(1)和F5(2);
(4)将组分F4再次经100目硅胶柱层析来纯化,以1.5∶1(v/v)正己烷-乙酸乙酯为洗脱液洗脱,洗脱速度为3.3ml/min,保留其中含有单一组分的洗脱部分,回收洗脱液,将得到的组分在无水乙醇中进行重结晶,得到白色针状结晶,经液相色谱测定:纯度为85%。
Mp:160.0-162.0℃(甲醇)
元素分析:理论值:C,70.29;H,7.011;N,5.127;
实测值:C,70.39;H,7.306;N,5.010
实施例1的方法提取得到的荜茇碱的13C NMR图、13C NMR和DEPT(135°)图、1H NMR图、局部1H NMR图谱、局部1H NMR图、IR图、GCT-MS图谱依次参见图1至图7。
1H和13CNMR数据参见表1
从1H-1H COSY可以看出,PPA有如下几个片段:CH3-CH-(0.93,1.81),-CH2-CH-(3.17,1.81),-CH2-NH-(3.17,5.77),-CH-CH-(5.92,7.35),-CH-CH-(7.35,6.66),-CH-CH-(6.66,6.74),-CH-CH-(6.75,6.86)。
IR图谱有以下几个特殊吸收峰(见图6):3295、1548(N-H),1644(共轭的羰基双键),1606(共轭的双键),998(双键上的反式二氢),1258、1037(亚甲双氧基),1467、1447、1191、1161(C(CH3)),960-965之间没峰表明(2E-4E)-二烯酰胺体系存在[6][7],855(苯环上的孤独氢),795(苯环上的相邻两个氢)cm-1(见图7)。
UV图谱有以下几个特殊吸收峰:310nm(3,4-亚甲双氧苯乙烯反式共轭体系),241nm(共轭的不饱和酰胺),341nm(长链共轭体系存在)。
根据1H NMR、13C NMR、IR、UV等,证实其具有如下结构:
即就是,按照本发明的提取方法得到的化合物就是荜茇碱。
实施例2荜茇碱的提取
(1)取500g荜茇药材颗粒(16目)置回流装置中,加入3500ml无水乙醇,在45℃下加热回流4小时,之后冷却至室温,过滤(100~200μm孔径滤膜)得滤液。给滤渣中再加无水乙醇1000ml,在45℃下加热回流1小时,之后冷却至室温,过滤得滤液;合并两次滤液,回收乙醇,得到醇提物;
(2)将得到的醇提物经100目硅胶柱层析,以1.5∶1(v/v)正己烷-乙酸乙酯为洗脱液,匀速(4.0ml/min)洗脱(经高效液相色谱法分析)依次得到6种组分:回收洗脱液,得到固体状F1~F6,其中F4与F5是以混合物的形式存在;
(3)将F4+5的混合物再次经100目硅胶柱层析,以1.5∶1(v/v)正己烷-乙酸乙酯为洗脱液,洗脱速度为4.0ml/min,依次洗脱得到3种组分:F4、F5(1)和F5(2);
(4)将组分F4再次经100目硅胶柱层析来纯化,以正己烷-乙酸乙酯为洗脱液洗脱,洗脱速度为3.0ml/min,保留其中含有单一组分的洗脱部分,回收洗脱液,将得到的组分在无水乙醇中进行重结晶,得到白色针状结晶,经液相测定:纯度为88.1%。
Mp:160.0-162.0℃(甲醇)
元素分析:理论值:C,70.29;H,7.011;N,5.127;
实测值:C,70.30;H,7.206;N,5.110
实施例3荜茇碱的提取
(1)取500g荜茇药材颗粒(20目)置回流装置中,加入3000ml无水乙醇,在48℃下加热回流4.5小时,之后冷却至室温,过滤得滤液。给滤渣中再加无水乙醇1000ml,在48℃下加热回流1小时,之后冷却至室温,过滤得滤液;合并两次滤液,回收乙醇,得到醇提物;
(2)将得到的醇提物经200目硅胶柱层析,以1.5∶1(v/v)正己烷-乙酸乙酯为洗脱液,匀速洗脱(经高效液相色谱法分析),依次得到6种组分:回收洗脱液,得到固体状F1~F6,其中F4与F5是以混合物的形式存在;
(3)将F4+5的混合物再次经200目硅胶柱层析,以1.5∶1(v/v)正己烷-乙酸乙酯为洗脱液,洗脱速度为4.0ml/min,依次洗脱得到3种组分:F4、F5(1)和F5(2);
(4)将组分F4再次经200目硅胶柱层析来纯化,以正己烷-乙酸乙酯为洗脱液洗脱,速度为3.0ml/min,保留其中含有单一组分的洗脱部分,回收洗脱液,将得到的组分在无水乙醇中进行重结晶,得到白色针状结晶,经液相测定:纯度为86%。
Mp:160.0-162.0℃(甲醇)
元素分析:理论值:C,70.29;H,7.011;N,5.127;
实测值:C,70.34;H,7.206;N,5.019
实施例4荜茇碱的提取
(1)取500g荜茇药材颗粒(18目)置回流装置,加入4000ml无水乙醇,在55℃下加热回流5小时,之后冷却至室温,过滤(150μm孔径滤膜)得滤液。给滤渣中再加无水乙醇1000ml,在55℃下加热回流1小时,之后冷却至室温,过滤得滤液;合并两次滤液,回收乙醇,得到醇提物;
(2)将得到的醇提物经200目硅胶柱层析,以1.5∶1(v/v)正己烷-乙酸乙酯为洗脱液,匀速洗脱(经高效液相色谱法分析),依次得到6种组分:回收洗脱液,得到固体状F1~F6,其中F4与F5是以混合物的形式存在;
(3)将F4+5的混合物再次经200目硅胶柱层析,以1.5∶1(v/v)正己烷-乙酸乙酯为洗脱液,洗脱速度为4.2ml/min,依次洗脱得到3种组分:F4、F5(1)和F5(2);
(4)将组分F4再次经200目硅胶柱层析来纯化,以正己烷-乙酸乙酯为洗脱液同上法洗脱,速度为3.0ml/min,保留其中含有单一组分的洗脱部分,回收洗脱液将得到的组分。在无水乙醇中进行重结晶,得到白色针状结晶,经液相测定:纯度为90%。
Mp:160.0-162.0℃(甲醇)
元素分析:理论值:C,70.29;H,7.011;N,5.127;
实测值:C,70.34;H,7.206;N,5.019
实施例5荜茇碱的片剂
片剂组成:
组分 含量
*荜茇碱 10.0g
淀粉 77.7g
糊精 17.3g
滑石粉 5g
**胃溶型薄膜包衣预混剂 4.0g
注解:*荜茇碱采用根据实施例1的方法提取得到的。
**胃溶型薄膜包衣预混剂是胃溶型薄膜包衣预混剂(捷彩):含有用于薄膜包衣的多种药用辅料的混合物,着白色,无嗅粉末。批准文号:沪卫药准字(2009)第28011号,由上海现代浦东药厂有限公司生产。国家药品生产企业许可证号:沪XyzF20000117。
制备方法:取荜茇碱粉碎,加入淀粉和糊精混匀,用40%的乙醇润湿,16目制粒,50℃干燥1小时,整粒,加入滑石粉混匀,压片得素片。将胃溶型薄膜包衣预混剂与95%乙醇搅拌溶解一小时,使充分溶解混合均匀即可。其中包衣预混剂∶95%乙醇=10g∶100ml;将所述素片置包衣锅内,转动并打开热风使药片温度达到35~40℃时,开始喷包衣预混剂,边吹热风边喷,使喷雾量均匀适度;热风量控在不致药片潮湿为宜,包衣结束后,用40℃烘干1小时,即得薄膜片,经检验,其符合《中国药典(2005年版一部)片剂项下各项规定。
实施例6荜茇碱的片剂
片剂组成:
组分 含量
荜茇碱 10.0g
淀粉 77.7g
糊精 17.3g
胃溶型薄膜包衣预混剂 4.0g
(注解同实施例5)
制备方法:取荜茇碱粉碎,加入淀粉和糊精混匀,用40%的乙醇润湿,16目制粒,50℃干燥1小时,整粒,压片得素片。将胃溶型薄膜包衣预混剂与95%乙醇搅拌溶解一小时,使充分溶解混合均匀即可。其中包衣预混剂∶95%乙醇=10g∶100ml;将所述素片置包衣锅内,转动并打开热风使药片温度达到35~40℃时,开始喷包衣预混剂,边吹热风边喷,使喷雾量均匀适度;热风量控在不致药片潮湿为宜,包衣结束后,用40℃烘干1小时,即得薄膜片。经检验片重差异较实施例5大。
实施例7荜茇碱的胶囊
处方组成:
组分 含量
荜茇碱 10.0g
淀粉 77.7g
糊精 17.3g
滑石粉 5g
制备方法:取实施例2的方法得到的PPA粉碎,加入淀粉和糊精混匀,用40%的乙醇润湿,16目制粒,50℃干燥1小时,整粒,加入滑石粉混匀,装相应规格的胶囊得胶囊剂。经检验符合《中国药典》(2005年版一部)胶囊剂项下各项规定。
荜茇碱(PPA)的急性毒性试验(5000mg/kg剂量水平的限度试验)
目的:初步判断PPA的毒性大小及安全范围,拟定药效实验的给药剂量提供依据。经预试发现本品毒性很小,无法测出LD50。故本试验,以上下法选择了5000mg/kg剂量水平的限度试验。
试验试剂:取实施例5制得的荜茇碱片剂适量,用0.5%的羧甲基纤维素钠水溶液配制成20%混悬剂。
空白对照:0.5%的羧甲基纤维素钠水溶液。
试验方法:取小白鼠15只,雌雄个半,体重20±2g,适应性饲养24小时,禁食12小时,按性别均衡随机分为试验组(10只)和对照组(5只),试验组经灌胃一次给试验试剂0.25ml/10g(5g/kg体重),同时对照组经灌胃一次空白对照。给药后连续观察14天。
试验结果:在给药后及其观察期间动物状态良好,活动自如,饮食量可,无一死亡。观察第14天后脱椎处死,肉眼尸检未发现异常。第4天至第14天,小鼠体重增长均匀(见表2)。说明PPA是毒性很小。根据毒性试验原理,如果该药物超过5g/kg剂量给药没有死亡,确定其LD50大于5g/kg,判定该药物为无毒级药物。
而从荜茇中提取的总提取物或总化合物(从荜茇中95%乙醇提取,经15%的KOH水溶液皂化,用超临界精馏工艺得到的混合物)LD50为0.3g/kg,其实验鼠安全剂量为300mg·kg-1·d-1。而按照本发明的方法提取得到的PPT的LD50大于5g/kg,实验鼠安全剂量为5000mg·kg-1·d-1以上,安全性为前者的20倍以上。说明按照本发明的方法提取得到的PPA毒性很低或无毒性。
表2小鼠急性中毒情况(n=10)
表3小鼠体重变化(g)
药效学实验
PPA对大白鼠实验性高脂血症模型的调脂作用。
药剂:辛伐他汀、实施例5制得的PPA片剂,总碱混合物(从荜茇中95%乙醇提取,经15%的KOH水溶液皂化,用超临界精馏工艺得到的混合物)片剂(按照实施例5法代替PPA制得),分别研细,用0.5%的羧甲基纤维素钠水溶液配制成不同浓度的混悬液。
高脂饲料配方:胆固醇1%,蛋黄粉7.5%,猪油8%,基础饲料83.5%。
实验方法:取雄性Wister大白鼠50只,体重170±10g;用常规饲料适应性饲养48小时,按体重均衡随机分为5组,每组10只。
Ⅰ空白组:饲喂足够的普通饲料;
Ⅱ模型组:饲喂高脂饲料20g/日·只,如果不足以常规饲料补充,实验灌胃等容量蒸馏水;
Ⅲ阳性组:饲喂高脂饲料20g/日·只,如果不足以常规饲料补充,实验灌胃辛伐他汀混悬液10mg/kg·体重;
Ⅳ总碱组:饲喂高脂饲料20g/日·只,不足以常规饲料补充,实验灌胃总碱混合物片剂混悬液10mg/kg·体重。
ⅤPPA组:饲喂高脂饲料20g/日·只,不足以常规饲料补充,实验灌胃实施例5制得的PPA片剂的混悬液10mg/kg·体重。
各组动物每天固定时间经灌胃给药一次,全部自由饮水,实验给药15天。末次给药起禁食不禁水12小时,空腹断头采血测定血清4项血脂指标。实验过程中每隔三天测一次空腹体重。实验结果见表4。
1.给药15天对血清胆固醇的影响PPA组的结果显著降低血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c),提高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c);活性强度与辛伐他汀相当。
表4PPA片对大白鼠高脂症模型TC的影响(单位mmol/L,n=10)
注:**表示与空白组比较p小于0.01;*表示p小于0.05;#与模型组比较p小于0.05。
@表示PPA组与总碱组比较p小于0.05。
2.给药15天对大白鼠体重的影响
表5提取得到的PPA对实验大白鼠平均体重增长的影响(g)
从表5可见,各组之间的大白鼠平均体重增长无显著差异。说明PPA对实验大白鼠体重增长没有明显影响。
3讨论 给药本发明的方法提取得到的PPA 15天,对实验性雄性Wister大白鼠高脂血症模型的TC、TG、和LDL-c具有显著地抑制作用,显著提高HDL-c水平;在降血清总胆固醇方面的作用显著地高于总碱混合物,对动物体重没有影响。说明本发明的方法提取得到的PPA是较为理想的调脂天然成分,比荜茇总碱混合物作用优越。
Claims (10)
1.一种荜茇碱的提取方法,其包括如下步骤:
(1)取荜茇药材颗粒,加入约6~8倍量(w/v)的无水乙醇,在45~55℃,优选50℃下加热回流4~5小时,之后冷却至室温,过滤得滤液;给滤渣中再加2倍量(w/v)的无水乙醇,在45~55℃,优选50℃下加热回流1小时,之后冷却至室温,过滤得滤液;合并两次得到的滤液,回收乙醇,得到醇提物;
(2)将得到的醇提物经100~200目硅胶柱层析,以正己烷-乙酸乙酯为洗脱液,匀速洗脱,洗脱速度为4ml/min,并用高效液相色谱法或薄层层析法分析,依次得到6种组分,回收洗脱液,得到固体状F1~F6,其中F4与F5是以混合物的形式存在;
(3)将F4+5的混合物再次经100~200目硅胶柱层析,以正己烷-乙酸乙酯为洗脱液,洗脱速度为3.8~4.2ml/min,依次洗脱得到3种组分:F4、F5(1)和F5(2),回收洗脱液;
(4)将组分F4再次经100~200目硅胶柱层析来纯化,以正己烷-乙酸乙酯为洗脱液洗脱,洗脱速度为3.0~3.5ml/min,用高效液相色谱法或薄层层析法分析,保留其中含有单一组分的洗脱部分,回收洗脱液将得到较纯的单体组分,在无水乙醇中重结晶,得到白色针状结晶:荜茇碱晶体。
2.权利要求1的荜茇碱的提取方法,其中荜茇药材颗粒的粒径为14~20目。
3.权利要求1的荜茇碱的提取方法,其中洗脱液正己烷-乙酸乙酯中正己烷与乙酸乙酯的体积比为1.5∶1。
4.一种用于治疗高脂血症的药物组合物,其包括根据权利要求1-3中任一项的方法制备得到的荜茇碱与药学可接受的载体。
5.权利要求5的药物组合物,其中所述药物组合物是片剂或胶囊制剂。
6.权利要求5的药物组合物,其中所述片剂包括所述荜茇碱、淀粉、糊精、滑石粉,任选地,可以采用胃溶型薄膜包衣预混剂对其进行包衣。
7.根据权利要求6的药物组合物,其中所述片剂中荜茇碱、淀粉、糊精、滑石粉的重量比例为10.0∶77.7∶17.3∶5,包衣增重量占药片重量的3.9~4.1%。
8.权利要求7的片剂的制备方法,其包括:将荜茇碱粉碎,加入淀粉和糊精混匀,40%的乙醇润湿,16目制粒,50℃干燥1小时,整粒,加入滑石粉混匀,压片得素片,薄膜包衣使增重3.9~4.1%,即得。
9.权利要求8的片剂的制备方法,其中所述薄膜包衣采用如下方法:将胃溶型薄膜包衣预混剂与95%乙醇搅拌溶解一小时以上,使充分溶解混合均匀即可,其中包衣预混剂的用量为荜茇碱量的4%,包衣预混剂∶95%乙醇=1∶10(w/v);将所述素片置包衣锅内,转动并打开热风使药片温度达到35~40℃时,开始喷包衣预混剂,边吹热风边喷,使喷雾量均匀适度;热风量控在不致药片潮湿为宜,包衣结束后,用40℃烘干1小时。
10.权利要求1-3中任一项的方法制备得到的荜茇碱或权利要求4-7中任一项的药物组合物在制备用于治疗高脂血症、动脉硬化、脂肪肝、肝硬化的药物中的用途。
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