CN102070597A - 一种酰胺类生物碱及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种酰胺类生物碱及其制备方法。本发明酰胺类生物碱的名称是N-(2′-羟基-乙基)-N-甲基-3，4-亚甲二氧基-苯基。其提取方法是：将干燥的光轴苎叶蒟粉碎，用溶剂回流提取，提取液浓缩得浸膏。浸膏依次采用石油醚、乙酸乙酯和水萃取，得到不同极性部位。乙酸乙酯部位进行硅胶柱层析分离，用石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱，得到各个组分。合并含有目标化合物的各级分，进行硅胶柱层析分离，用石油醚-乙酸乙酯组成的洗脱剂反复洗脱，然后用石油醚-丙酮重结晶精制，得到本发明化合物。本发明化合物可以应用于制备治疗抑郁症药物。

Description

一种酰胺类生物碱及其制备方法

技术领域

本发明属医药领域，具体是一种从光轴苎叶蒟植物中分离得到的酰胺类生物碱及其制备方法和用途。

背景技术

抑郁症是以持久的情绪障碍为主要症状的一种精神疾病。统计显示，抑郁症终身犯病率为6.1-9.5％，约13-20％的人一生曾有一次或一次以上的抑郁体验，15％的重度抑郁症患者因自杀导致死亡。随着社会的发展，抑郁症有持续增长的趋势。

中枢神经系统中单胺类神经递质代谢絮乱是抑郁症的主要生化特征，提高脑部单胺类神经递质含量可达到抗抑郁的目的。但是目前市场上广泛应用的抗抑郁合成药物只对个别单胺类神经递质的含量有影响，比如氟西汀只影响5-羟色胺的含量，针对单一环节的药物难以取得满意的疗效，而且合成抗抑郁药物大多存在抗抑郁谱窄、副作用大、药价高和停药易复发等缺陷。因此，国内外在抗抑郁药的研制与开发方面越来越重视天然药物的抗抑郁作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种从光轴苎叶蒟中分离出的新化合物，活性实验证明该化合物具有抗抑郁作用。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

1.一种酰胺类生物碱

1.1该酰胺类生物碱的名称是N-(2′-羟基-乙基)-N-甲基-3，4-亚甲二氧基-苯基；

1.2化学结构式：

1.3分子式：C₁₁H₁₃NO₄；

1.4理化性质：白色粉末，易溶于乙酸乙酯、丙酮、甲醇等有机溶剂，难溶于水。

2.酰胺类生物碱的制备方法是以干燥的光轴苎叶蒟为原料，粉碎、溶剂提取，提取液过滤后浓缩得浸膏；浸膏经过部位分离得到含有目标化合物的部位，该部位反复进行硅胶柱层析分离，然后重结晶精制，得到本发明的N-(2′-羟基-乙基)-N-甲基-3，4-亚甲二氧基-苯基，具体操作步骤如下：

(1)将干燥的光轴苎叶蒟全株粉碎，加入95％乙醇，回流提取，过滤，滤渣再重复提取，合并滤液，减压浓缩得乙醇提取物浸膏；

(2)将乙醇提取物浸膏用蒸馏水配成混悬液，分别依次用等体积石油醚、乙酸乙酯反复萃取多次，合并相同萃取液，将萃取液减压浓缩，挥去溶剂，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、水萃取物；

(3)取适量乙酸乙酯萃取物用溶剂溶解后用等量100-200目硅胶拌样，挥干溶剂，湿法装柱，依次按石油醚∶乙酸乙酯＝9∶1、8∶2、6∶4、4∶6、2∶8和100％甲醇梯度洗脱，每20mL等量收集洗脱液，洗脱液经过薄层色谱分析，合并相似组分，得到5个部分，其中只有第5个部分含有本发明化合物；

(4)取上步骤的第5个部分继续进行硅胶柱层析，依次用石油醚∶乙酸乙酯＝80∶20，70∶30，60∶40梯度洗脱，每20mL等量收集洗脱液，合并相似组分，再用石油醚∶乙酸乙酯＝80∶20洗脱相似组分，得到的淡黄色粉末用石油醚-丙酮重结晶得白色固体，即为N-(2′-羟基-乙基)-N-甲基-3，4-亚甲二氧基-苯基。

3.N-(2′-羟基-乙基)-N-甲基-3，4-亚甲二氧基-苯基的用途：用该化合物进行小鼠强迫游泳实验，结果证明，该化合物能缩短小鼠强迫游泳不动时间，与盐酸氯米帕明的抗抑郁作用相当，可用于抑郁症的治疗。

本发明的有益效果：利用我国华南地区广泛分布的植物光轴苎叶蒟为原料，经过干燥、粉碎、溶剂提取、浓缩、层析分离、结晶得到本发明酰胺类生物碱N-(2′-羟基-乙基)-N-甲基-3，4-亚甲二氧基-苯基。用该化合物进行小鼠强迫游泳实验，结果证明，该化合物能缩短小鼠强迫游泳不动时间，与盐酸氯米帕明的抗抑郁作用相当，可用于抑郁症的治疗。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的描述。

实施例1

取6.3kg光轴苎叶蒟植物全株，干燥，粉碎，过40目筛，分批用6倍药材量95％乙醇(mL/g)回流提取2次，每次2h，趁热过滤，合并滤液，减压浓缩得乙醇提取物200g。提取物用700mL去离子水混悬，依次用等体积石油醚、乙酸乙酯萃取五次，合并各次萃取液，减压浓缩挥去溶剂，得石油醚提取物54g、乙酸乙酯提取物62g、水提取物84g。

25g乙酸乙酯提取物用溶剂溶解后用等量100-200目硅胶拌样，挥干溶剂，称取450g的100-200目硅胶湿法装柱(6×50cm)，依次按石油醚∶乙酸乙酯＝9∶1、8∶2、6∶4、4∶6、2∶8和100％甲醇梯度洗脱，等量收集(250mL)，合并相似组分，得到5个部分，Fr1部分3g，Fr2部分4.2g，Fr3部分3.8g，Fr4部分2g，Fr5部分3.7g。

Fr5部分3.7g硅胶柱层析，用石油醚∶乙酸乙酯＝80∶20，70∶30，60∶40梯度洗脱，合并7-20瓶，再进行硅胶柱层析，用石油醚∶乙酸乙酯＝80∶20洗脱，得到的淡黄色粉末用石油醚-丙酮重结晶得白色固体8mg，即为本发明化合物。

实施例2

用本发明的制备方法，以光轴苎叶蒟为原料分离得到本发明本发明酰胺类生物碱N-(2′-羟基-乙基)-N-甲基-3，4-亚甲二氧基-苯基，对其结构进行鉴定，试验方法和结果如下：

物性：白色粉末，易溶于乙酸乙酯、丙酮、甲醇等有机溶剂，难溶于水。

EI/MS(m/z)：224(M+1，9.75)、223(M⁺，5.27)、178(4.28)、165(61.49)、149(3.99)、121(12.63)、77(57.33)、74(5.34)、45(100.00)。

IR(KBr)：3448.08cm^-1、2925.84cm^-1、2848.00cm^-1、1439.15cm^-1、1711.57cm^-1、1633.73cm^-1、1267.89cm^-1、1230-1030cm^-1、1044.02cm^-1.

¹H-NMR和¹³C-NMR数据见表1。

表1本发明化合物的NMR数据对照表(CDCl₃)

实施例3

抗抑郁活性实验

1.给药方式与动物分组

石油醚提取物、乙酸乙酯提取物和本发明化合物分散在0.2％的CMC-Na水溶液中制备成混悬液；阳性对照药盐酸氯米帕明分散在水中制备成混悬液；水提取物用蒸馏水配制成溶液。

小鼠灌胃给药剂量分别是：石油醚提取物、乙酸乙酯提取物和水提取物各50mg·kg^-1、100mg·kg^-1；盐酸氯米帕明30mg·kg^-1；空白对照组等体积的0.2％CMC-Na水溶液；本发明化合物5mg·kg^-1、10mg·kg^-1。动物给药体积均为0.2mL/10g。

取96只体重(20±2)g的雄性昆明种小白鼠，饲养在(25±1)℃室内，自由饮水进食，适应1周。随机分成8组，每组12只，每日上午9时灌胃给药，1日1次，连续给药10天，末次灌胃1h后进行强迫游泳实验。

2.强迫游泳实验

将末次灌胃1h的小鼠放入水深10cm烧杯(直径14cm，高18cm)中，水温(25±1)℃，观察6min，记录后4min内小鼠游泳的累计不动时间(小鼠不动的标准判断为四肢完全不动或足部轻拍划水以维持身体在水面上)。

3.强迫游泳实验

以

表示结果，数据统计处理采用两样本均数差别的t检验：查临界t值，将计算所得t值的绝对值与其比较，然后作出统计推断。计算公式如下：

$S_{{\stackrel{\‾}{x}}_1-{\stackrel{\‾}{x}}_2}=\sqrt{\frac{\mathrm{\Σ}{(x_1-{\stackrel{\‾}{x}}_1)}^2+\mathrm{\Σ}{(x_2-{\stackrel{\‾}{x}}_2)}^2}{n(n-1)}}=\sqrt{\frac{{S_1}^2}{n}+\frac{{S_2}^2}{n}}$

$t=\frac{{\stackrel{\‾}{x}}_1-{\stackrel{\‾}{x}}_2}{S_{{\stackrel{\‾}{x}}_1-{\stackrel{\‾}{x}}_2}}$

其中：

为均数差异的标准误差，n₁、n₂，

S₁ ²、S₂ ²分别为两样本例数、平均数、均方。

4.强迫游泳实验

实验结果如表2所示。与空白对照组比较，本发明化合物5mg·kg^-1、10mg·kg^-1剂量组均能不同程度的缩短小鼠强迫游泳不动时间，并且5mg·kg^-1剂量组与盐酸氯米帕明30mg·kg^-1剂量的抗抑郁作用相当，说明本化合物具有较强的抗抑郁作用。

表2化合物对强迫小鼠游泳不动时间的影响

Claims (2)

1.一种酰胺类生物碱，其特征在于：

1.1该酰胺类生物碱的名称是N-(2′-羟基-乙基)-N-甲基-3，4-亚甲二氧基-苯基；

1.2化学结构式：

1.3分子式：C₁₁H₁₃NO₄；

1.4理化性质：白色粉末，易溶于乙酸乙酯、丙酮、甲醇等有机溶剂，难溶于水。

2.如权利要求1所述的酰胺类生物碱的制备方法，其特征是：它以干燥的光轴苎叶蒟为原料，粉碎、溶剂提取，提取液过滤后浓缩得浸膏；浸膏经过部位分离得到含有目标化合物的部位，该部位反复进行硅胶柱层析分离，然后重结晶精制，得到本发明的N-(2′-羟基-乙基)-N-甲基-3，4-亚甲二氧基-苯基，具体操作步骤如下：

(1)将干燥的光轴苎叶蒟全株粉碎，加入95％乙醇，回流提取，过滤，滤渣再重复提取，合并滤液，减压浓缩得乙醇提取物浸膏；

(2)将乙醇提取物浸膏用蒸馏水配成混悬液，分别依次用等体积石油醚、乙酸乙酯反复萃取多次，合并相同萃取液，将萃取液减压浓缩，挥去溶剂，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、水萃取物；

(3)取适量乙酸乙酯萃取物用溶剂溶解后用等量100-200目硅胶拌样，挥干溶剂，湿法装柱，依次按石油醚∶乙酸乙酯＝9∶1、8∶2、6∶4、4∶6、2∶8和100％甲醇梯度洗脱，每20mL等量收集洗脱液，洗脱液经过薄层色谱分析，合并相似组分，得到5个部分，其中只有第5个部分含有本发明化合物；

(4)取上步骤的第5个部分继续进行硅胶柱层析，依次用石油醚∶乙酸乙酯＝80∶20，70∶30，60∶40梯度洗脱，每20mL等量收集洗脱液，合并相似组分，再用石油醚∶乙酸乙酯＝80∶20洗脱相似组分，得到的淡黄色粉末用石油醚-丙酮重结晶得白色固体，即为N-(2′-羟基-乙基)-N-甲基-3，4-亚甲二氧基-苯基。