CN104530075A - 一种新的倍半萜化合物,其药物组合物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，具体涉及从没药中分离得到的一种新的倍半萜化合物Ⅰ，其药物组合物及其制备方法和用途。该化合物是一种新颖的倍半萜化合物，体外试验具有显著抑制肿瘤细胞生长的作用，可以用来制备抗肿瘤药物。

Description

一种新的倍半萜化合物,其药物组合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及从没药中分离得到的一种新的倍半萜化合物Ⅰ，其药物组合物及其制备方法和用途。

背景技术

没药（Myrrha），又名末药、明没药、蜜儿粒，为橄榄科植物地丁树Commiphora myrrha Engl.和哈地丁树Commiphora molmol Engl.的干燥树脂，分为天然没药和胶质没药。其味苦，性平，归心、肝、脾经。没药始载于宋《开宝本草》，为常用中药之一，具有行气活血、消肿定痛的功效，用于治疗痈疽肿痛、损伤瘀血、经闭血、经闭瘕、胸腹诸痛，外用可敛疮生肌。国外对没药化学成分和生物活性研究早有报道，已分离鉴定了300多个次生代谢产物，包括萜类、甾体、黄酮、木脂素等化学成分。其生物活性主要为细胞毒、抗菌、镇痛、抗氧化、抗炎等。没药中含有丰富的倍半萜成分，其骨架类型多样，已发现吉玛烷型、桉烷型、愈创木烷型等倍半萜结构120 多个，并含有大量呋喃倍半萜。其倍半萜类成分具有麻醉、抗菌、抗高血糖等活性。

随着生命科学研究的飞速发展，人们对肿瘤机制的研究不断深入，肿瘤细胞内信号转导、细胞周期调控、细胞凋亡、血管生成以及细胞转移、浸润等各种基本过程正在被逐步阐明，许多抗肿瘤药物随之研发，其中对天然药物的研 究占有相当大的比例。这些天然药物除通过抑制增殖或诱导凋亡等直接杀伤外，还通过免疫调节、抑制转移等间接调节作用于肿瘤细胞。由于天然药物极其丰富多样，从中寻找抗肿瘤药物有着广阔的资源优势和应用前景，为开发高效、低度的抗肿瘤药物提供了宝贵的化合物库，可预见其在肿瘤治疗中将发挥更大的作用。

发明人在对没药化学成分研究过程中，分离得到了一种新的倍半萜化合物Ⅰ，目前并未有文献报道，更未有该化合物的活性报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种从没药中分离得到的一种新的倍半萜化合物Ⅰ，其药物组合物及其制备方法和用途。

本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：

具有下述结构式的倍半萜化合物Ⅰ，

药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1所述的化合物Ⅰ和药学上可接受的载体。

化合物Ⅰ的制备方法：将没药粉碎，95%乙醇回流提取3次，每次4h，减压浓缩得乙醇浸膏。浸膏用水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯各萃取3次，乙酸乙酯萃取物减压浓缩得乙酸乙酯提取物。乙酸乙酯提取物以硅胶柱色谱法分离，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱（20:1，15:1，10:1，5:1）得到4个组分。组分4以硅胶柱色谱法分离，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱（8:1，7:1，6:1）得到3个组分。组分3经半制备制备液相纯化制备，甲醇-水等度洗脱（78:22）得到纯的化合物Ⅰ。

化合物Ⅰ在制备抗肿瘤药物中的应用。

上述药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物Ⅰ，其余为药物学上可接受的、对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。

所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控释片、硬或软胶囊、滴丸、微丸、水性或油混悬剂、乳剂、可分散的散剂或颗粒剂、口服溶液、糖浆剂等；用于注射时，可制成灭菌的水性或油性溶液、无菌粉末、脂质体、乳剂、微乳剂、纳米乳剂或微囊。

具体实施方式

实施例1：

将没药（5kg）粉碎，95%乙醇回流提取3次（3×15L），每次4h，减压浓缩得乙醇浸膏（385g）。浸膏用水混悬（2L），依次用石油醚、乙酸乙酯各萃取3次（3×2L），乙酸乙酯萃取物减压浓缩得乙酸乙酯提取物（95g）。乙酸乙酯提取物以硅胶柱色谱法分离，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱（20:1，15:1，10:1，5:1）得到4个组分。组分4（28g）以硅胶柱色谱法分离，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱（8:1，7:1，6:1）得到3个组分。组分3（11g）经半制备制备液相纯化制备，甲醇-水等度洗脱（78:22）得到纯的化合物Ⅰ（28mg）。

化合物Ⅰ结构确证：无定型白色粉末；HR-ESIMS显示[M+H]⁺为m/z 333.1726，综合核磁碳谱和氢谱可得分子式为C₁₉H₂₄O₅，不饱和度为8；红外IR显示羟基(3380 cm^-1)、羰基(1718 cm^-1)和碳碳双键(1648, 1615 cm^-1)存在；¹H-NMR (CDCl₃, δppm, 600 MHz)和¹³C-NMR(CDCl₃, δppm, 150 MHz)数据见表1。

表1 ¹H NMR和¹³C NMR信号归属

实施例2：

采用MTT法观察离体条件下化合物Ⅰ对4种肿瘤细胞株人乳腺癌细胞（MCF）、小鼠肺上皮癌细胞（L929）、黑色素瘤细胞（A375-S2）、人宫颈癌细胞(HeLa)的细胞毒作用。

1、实验准备

1.1 试剂与药品：化合物Ⅰ，纯度> 98 %，自制。DMSO（GIBCO）；M TT（SIGMA）；5-氟脲嘧啶（5-FU），上海旭东海普药业有限公司产品。

1.2 细胞株：南京大学赠送。

1.3 细胞培养：RPMI-1640培养液，加入10%的胎牛血清，1%的抗菌素（10000U/mL青霉素和1000μg/mL），2 mmoL/L 谷氨酰胺，置于5%的CO₂培养箱中培养。

2、实验方法：

MCF、L929、A375-S2、HeLa肿瘤细胞，按常规方法培养，细胞贴壁后，吸出培养液，将细胞分为5-FU阳性对照组、各不同浓度药物组，每组设3个平行孔，每孔加入含药物的培养液100μL，同时设不加药物的阴性对照组、不含细胞的空白组。继续培养，弃上清，每孔加入100μL新鲜配制的含0.2 mg/mL MTT无血清培养液，继续培养，弃上清，DMSO溶解，超声振荡混匀，用酶标仪在570 nm测吸收度（A），计算肿瘤细胞生长抑制率。

抑制率（%）=（A_{阴性对照组}-A_药物组）/（A_{阴性对照组}-A_空白组）×100%

3、结果

化合物Ⅰ在0.1~100μg/mL的药物浓度内，对3种肿瘤细胞株（L929、HeLa和MCF）具有明显的抑瘤效果，且呈现较好的量效依赖关系，对A375-S2的作用不明显。经量效曲线作图可求得L929 、HeLa、MCF3种细胞的IC50分别为：1.2、18.2、19.8 μg/mL。抑制率见表2。

表2 不同浓度化合物Ⅰ对4种肿瘤细胞株的抑制率（%）

实施例3：

注射液制剂的制备：

按实施例1方法先制得化合物Ⅰ，以及利用有机酸（酒石酸、柠檬酸、甲酸、乙二酸等）或无机酸（盐酸、硫酸、磷酸等）制成的盐，按常规加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。

实施例4：

粉针剂的制备：

按实施例1方法先制得化合物Ⅰ，以及利用有机酸（酒石酸、柠檬酸、甲酸、乙二酸等）或无机酸（盐酸、硫酸、磷酸等）制成的盐，将其溶于无菌注射用水中，搅拌使溶，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于安瓿中，低温冷冻干燥后无菌熔封得粉针剂。

实施例5：

粉剂的制备：

按实施例1方法先制得化合物Ⅰ，以及利用有机酸（酒石酸、柠檬酸、甲酸、乙二酸等）或无机酸（盐酸、硫酸、磷酸等）制成的盐，与赋形剂重量比为 9:1的比例加入赋形剂，制成粉剂。

实施例6：

片剂的制备：

按实施例1方法先制得化合物Ⅰ，以及利用有机酸（酒石酸、柠檬酸、甲酸、乙二酸等）或无机酸（盐酸、硫酸、磷酸等）制成的盐，按其与赋形剂重量比为1:5~1:10的比例加入赋形剂， 制粒压片。

实施例7：

口服液制剂的制备：

按实施例1方法先制得化合物Ⅰ，以及利用有机酸（酒石酸、柠檬酸、甲酸、乙二酸等）或无机酸（盐酸、硫酸、磷酸等）制成的盐，按常规口服液制法制成口服液。

实施例8：

胶囊剂、颗粒剂、或冲剂的制备：

按实施例1方法先制得化合物Ⅰ，以及利用有机酸（酒石酸、柠檬酸、甲酸、乙二酸等）或无机酸（盐酸、硫酸、磷酸等）制成的盐，按其与赋形剂重量比为5:1的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂或冲剂。

Claims (6)

1.具有下述结构式的倍半萜化合物Ⅰ，

。

2.药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1所述的化合物Ⅰ和药学上可接受的载体。

3.权利要求1所述的化合物Ⅰ的制备方法，其特征在于：将没药粉碎，95%乙醇回流提取3次，每次4h，减压浓缩得乙醇浸膏，浸膏用水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯各萃取3次，乙酸乙酯萃取物减压浓缩得乙酸乙酯提取物，乙酸乙酯提取物以硅胶柱色谱法分离，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱（20:1，15:1，10:1，5:1）得到4个组分，组分4以硅胶柱色谱法分离，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱（8:1，7:1，6:1）得到3个组分。

4.组分3经半制备制备液相纯化制备，甲醇-水等度洗脱（78:22）得到纯的化合物Ⅰ。

5.权利要求1所述的化合物Ⅰ在制备抗肿瘤药物中的应用。

6.权利要求2所述的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。