CN101851600A - 生产盾壳霉菌分生孢子的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种以农业废弃物为原料，生产盾壳霉菌分生孢子的方法，包括如下步骤：(1)将农业废弃物粉碎，烘干；(2)制备基质混合物；(3)制备孢子悬浮液；(4)接种；(5)培养。本发明采用农业废弃物制备盾壳霉菌分生孢子，经过测定，最终产孢量达到1.58×109～6.0×109个/克基质，与单一小麦发酵产孢量无显著差异。但本发明克服了现有技术中成本高的缺陷，成本非常低，可以利用农业废弃物，且生产效果非常好。
Description
技术领域
本发明涉及一种生产盾壳霉菌分生孢子的方法。
背景技术
盾壳霉是防治油菜菌核病的生防菌，可作为高效生物农药。盾壳霉应用于生产实践的首要前提是得到大量的有活性的分生孢子。研究发现，盾壳霉在液体发酵条件下不产生分生孢子，半固体条件下产孢量极少或不产孢；利用PDA平板固体培养盾壳霉可产生大量的分生孢子，但此生产方式不便用于工业扩大培养生产。还有另外一种方法，就是使用小麦、燕麦、大麦等作为基质培养盾壳霉，由于这些基质含有大量的碳、氮源，可使盾壳霉产生大量分生孢子，且可直接用于工业发酵罐扩大培养生产，也相对简化了分生孢子制剂制作的后续工序。但由于基质价格昂贵，培养成本高，不利于推广应用。
发明内容
为了克服现有技术中存在的上述问题，本发明提供了一种以农业废弃物为原料，生产盾壳霉菌分生孢子的方法，本发明是这样实现的：
一种生产盾壳霉菌分生孢子的方法，包括如下步骤：
(1)基质准备：将农业废弃物粉碎，使粉碎后废弃物颗粒长度不超过8mm，50℃烘干机烘干至恒重；
(2)按照基质与发酵液重量比为1∶3至1∶5的范围称取基质与发酵液，混合均匀，放置3～6小时后，湿热灭菌1小时，冷却，制得基质混合物；
(3)孢子悬浮液制备：取活化培养后的盾壳霉，水洗分生孢子，稀释成孢子数量为1×106个/ml的孢子悬浮液；
(4)接种：吸取1ml孢子悬浮液放入到步骤(2)制得的基质混合物中，震荡混匀，放置在生化培养箱中培养；
(5)培养：控制培养条件为20℃、黑暗条件，每天振荡容器一次，震荡一周，一周以后静止培养，总计培养20天～26天，即制得盾壳霉菌分生孢子。
更进一步的方案是：所述的农业废弃物为谷壳、玉米杆、油菜杆、稻草、玉米芯、小麦杆、麸皮中的一种或几种。
更进一步的方案是：所述的发酵液为含有10g/L的蔗糖和10g/L的蛋白胨，以及少量KH2PO4、MgSO4、ZnSO4、MnCl2、CuSO4的水溶液，pH值为6.5，其中KH2PO4、MgSO4、ZnSO4、MnCl2、CuSO4的总浓度为1g/L。
本发明采用农业废弃物制备盾壳霉菌分生孢子，经过测定，最终产孢量达到1.58×109～6.0×109个/克基质，与单一小麦发酵产孢量无显著差异。但本发明克服了现有技术中成本高的缺陷，成本非常低，可以利用农业废弃物，且生产效果非常好。
具体实施方式
实施例一
一种生产盾壳霉菌分生孢子的方法，包括如下步骤：
(1)基质准备：将玉米杆粉碎，使粉碎后废弃物颗粒长度不超过8mm，50℃烘干机烘干至恒重；
(2)按照基质与发酵液重量比为1∶4的标准称取基质与发酵液，混合均匀，放置4小时后，湿热灭菌1小时，冷却，制得基质混合物；
(3)孢子悬浮液制备：取活化培养后的盾壳霉，水洗分生孢子，稀释成孢子数量为1×106个/ml的孢子悬浮液；
(4)接种：吸取1ml孢子悬浮液放入到步骤(2)制得的基质混合物中，震荡混匀，放置在生化培养箱中培养；
(5)培养：控制培养条件为20℃、黑暗条件，每天振荡容器一次，震荡一周，一周以后静止培养，总计培养23天，即制得盾壳霉菌分生孢子。
其中的发酵液为含有10g/L的蔗糖和10g/L的蛋白胨，以及少量KH2PO4、MgSO4、ZnSO4、MnCl2、CuSO4的水溶液，pH值为6.5，其中KH2PO4、MgSO4、ZnSO4、MnCl2、CuSO4的总浓度为1g/L。
产孢量测定：将附满盾壳霉孢子的培养基质倒入干净的容器中，加入少量水，用小型粉碎搅拌机粉碎搅拌，洗脱附着在基质上的孢子，至基质成匀浆，用孔径63um的尼龙布过滤，用清水反复清洗基质，至洗出的水中无或极少孢子为止，稀释孢子悬浮液至固定体积，显微镜下血球计数板镜检计数，换算成每克基质产孢量。制得的孢子量为2.3×109个/克基质。
实施例二
所用的农业废弃物为麸皮，基质与发酵液重量比为1∶5，放置时间为3小时，培养时间为20天，其余与实施例一相同，制得的孢子量为5.8×109个/克基质。
实施例三
所用的农业废弃物为谷壳、稻草按1∶1的比例混合，基质与发酵液重量比为1∶3，放置时间为6小时，培养时间为26天，其余与实施例一相同，制得的孢子量为6.0×109个/克基质。
Claims (3)
1.一种生产盾壳霉菌分生孢子的方法，包括如下步骤：
(1)基质准备：将农业废弃物粉碎，使粉碎后废弃物颗粒长度不超过8mm，50℃烘干机烘干至恒重；
(2)按照基质与发酵液重量比为1∶3至1∶5的范围称取基质与发酵液，混合均匀，放置3～6小时后，湿热灭菌1小时，冷却，制得基质混合物；
(3)孢子悬浮液制备：取活化培养后的盾壳霉，水洗分生孢子，稀释成孢子数量为1×106个/ml的孢子悬浮液；
(4)接种：吸取1ml孢子悬浮液放入到步骤(2)制得的基质混合物中，震荡混匀，放置在生化培养箱中培养；
(5)培养：控制培养条件为20℃、黑暗条件，每天振荡容器一次，震荡一周，一周以后静止培养，总计培养20天～26天，即制得盾壳霉菌分生孢子。
2.根据权利要求1所述的生产盾壳霉菌分生孢子的方法，其特征在于：所述的农业废弃物为谷壳、玉米杆、油菜杆、稻草、玉米芯、小麦杆、麸皮中的一种或几种。
3.根据权利要求1或2所述的生产盾壳霉菌分生孢子的方法，其特征在于：所述的发酵液为含有10g/L的蔗糖和10g/L的蛋白胨，以及少量KH2PO4、MgSO4、ZnSO4、MnCl2、CuSO4的水溶液，pH值为6.5，其中KH2PO4、MgSO4、ZnSO4、MnCl2、CuSO4的总浓度为1g/L。
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