CN101849002A - 在细胞中稳定保持外来基因的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及使外来基因表达来制备上述外来基因所编码的蛋白或肽的方法，该方法包括：在可以表达的状态下插入任意外来基因，以准备在可以表达的状态下具有编码氨酰tRNA合成酶的基因的重组载体的步骤；准备使编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因缺失的突变宿主细胞等的步骤；用重组载体转化突变宿主细胞得到转化体的步骤；培养转化体，以制备上述外来基因所编码的蛋白或肽的步骤。根据本发明，可以提供：在不使用抗生素、且对培养基组成没有限制的情况下能够在宿主细胞中维持重组DNA克隆载体的新手段；和利用该手段来制备外来基因所编码的蛋白或肽的方法。

Description

在细胞中稳定保持外来基因的方法

技术领域

本发明涉及在细胞中稳定保持外来基因的方法。更详细而言，本发明涉及该方法中使用的、包含编码氨酰tRNA合成酶的基因的重组载体、用于表达编码氨酰tRNA合成酶的基因以外的任意外来基因的突变宿主细胞、以及表达编码氨酰tRNA合成酶的基因以外的外来基因来制备上述外来基因所编码的蛋白或肽的方法。需要说明的是，作为相关申请的相互参照，本申请主张2007年7月13日申请的日本特愿2007-1839831号的优先权，其全部内容作为公开而特别引用于此。

背景技术

将重组DNA技术应用于实际中，并尝试着利用所得的转化细胞来生产目标分子时，通常转化细胞内的染色体外基因(即其中所含的目标外来基因)的存在极不稳定，产生非常难以生产目标分子的问题。

实验室中通常所用的克隆和表达载体通常是多拷贝重组载体，通过每个细胞基因组的多个重组载体来确保向其后代稳定遗传。但是，向这些重组载体中导入外来基因会给细胞的增殖循环期间带来各种程度的不稳定性。在工业生产步骤中，有时需要1000L培养物，需要50世代以上的世代交替后的10¹⁶个以上的细胞。因此，为了确保细胞中重组载体的存在、进而确保外来基因的表达，人们希望使细胞中的重组载体稳定直至发酵槽内的培养结束。

已知有几种使携带外来基因的重组载体在细胞中稳定的方法。

其中的一种方法包含以下内容：先使抗生素耐性基因包含在重组载体中，之后向培养基中加入适当的抗生素。保持有含抗生素耐性基因的重组载体的细胞被筛选，未保持该重组载体的细胞不被筛选而被排除。

通过插入抗生素耐性基因使重组载体稳定，这通常在实验室中进行，但由于下述理由，在工业规模的生产中并不优选。

(i)使用抗生素耐性菌株有可能给环境带来危险。

(ii)培养中所必需的抗生素量使生产成本显著增加。

(iii)在用于人和动物的物质的生产中应避免使用抗生素。

补充染色体的营养要求突然突变的方法也是已知的重组载体稳定化方法之一(参照Genetics.1989 May；122(1)：19～27(以下，有时还称作非专利文献1)和Curr Genet.1989 Sep；16(3)：159～63(以下，有时还称作非专利文献2)，这些内容作为公开而特别引用于此)。在该方法中，必需严格限制发酵培养基的组成，在不向培养基中加入宿主细菌所必需的营养的情况下进行发酵。而且，通过营养共生，在重组载体消失后细胞仍有可能增殖。

发明内容

发明所要解决的课题

如上所述，上述两种筛选方法依赖于培养基的特殊处理。这样的限制会导致发酵步骤的费用增加、以及为了提高生产率而能够采取的筛选自由度受限。

因此，人们迫切希望开发在不使用抗生素、且对培养基组成没有限制的情况下能够维持重组DNA克隆载体的其他筛选方法。

因此，本发明的目的在于提供：在不使用抗生素、且没有限制的情况下能够维持重组DNA克隆载体的新手段和利用该手段来制备外来基因所编码的蛋白或肽的方法。

解决课题的方法

本发明人等为了解决上述课题进行各种研究，发现根据带有氨酰tRNA合成酶基因的染色体外基因与使该氨酰tRNA合成酶活性产生缺失的染色体突变宿主细胞的互补性，在不使用抗生素、且不限制培养基组成的情况下能够维持重组DNA克隆载体，从而完成了本发明。本发明基于仅确保含有染色体外基因的细胞生存，所述染色体外基因带有氨酰tRNA合成酶基因。

本发明如下。

(1)重组载体，该重组载体具有在可以表达的状态下能够插入编码氨酰tRNA合成酶的基因以外的任意外来基因的位点、且

在可以表达的状态下具有编码氨酰tRNA合成酶的基因，

上述重组载体在突变宿主中使用，所述突变宿主是使编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因缺失、或者使编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因的表达降低至宿主细胞无法生长的程度。

(2)(1)所述的重组载体，其中氨酰tRNA合成酶为：色氨酰tRNA合成酶、丙氨酰tRNA合成酶、精氨酰tRNA合成酶、天冬酰胺酰tRNA合成酶、天冬氨酰tRNA合成酶、半胱氨酰tRNA合成酶、谷氨酰胺tRNA合成酶、谷氨酸tRNA合成酶、甘氨酸tRNA合成酶、组氨酰tRNA合成酶、异亮氨酰tRNA合成酶、亮氨酰tRNA合成酶、赖氨酸tRNA合成酶、甲硫氨酰tRNA合成酶、苯丙氨酸tRNA合成酶、脯氨酰tRNA合成酶、丝氨酰tRNA合成酶、苏氨酰tRNA合成酶、酪氨酰tRNA合成酶或缬氨酰tRNA合成酶。

(3)(1)或(2)所述的重组载体，该重组载体具有质粒、噬菌体或逆转录转座子的形态。

(4)突变宿主细胞，该突变宿主细胞是使编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因缺失、或者使编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因的表达降低至宿主细胞无法生长的程度，

上述突变宿主细胞经重组载体转化后使用，所述重组载体具有在可以表达的状态下能够插入编码氨酰tRNA合成酶的基因以外的任意外来基因的位点、且

在可以表达的状态下具有编码氨酰tRNA合成酶的基因。

(5)(4)所述的突变宿主细胞，其中氨酰tRNA合成酶为：色氨酰tRNA合成酶、丙氨酰tRNA合成酶、精氨酰tRNA合成酶、天冬酰胺酰tRNA合成酶、天冬氨酰tRNA合成酶、半胱氨酰tRNA合成酶、谷氨酰胺tRNA合成酶、谷氨酸tRNA合成酶、甘氨酸tRNA合成酶、组氨酰tRNA合成酶、异亮氨酰tRNA合成酶、亮氨酰tRNA合成酶、赖氨酸tRNA合成酶、甲硫氨酰tRNA合成酶、苯丙氨酸tRNA合成酶、脯氨酰tRNA合成酶、丝氨酰tRNA合成酶、苏氨酰tRNA合成酶、酪氨酰tRNA合成酶或缬氨酰tRNA合成酶。

(6)(4)或(5)所述的突变宿主细胞，其中带有突变的宿主细胞为细菌、酵母、动物细胞或植物细胞。

(7)(4)或(5)所述的突变宿主细胞，其中带有突变的宿主细胞为细菌或酵母。

(8)(6)或(7)所述的突变宿主细胞，其中细菌为芽孢杆菌属细菌。

(9)使编码氨酰tRNA合成酶的基因以外的外来基因表达来制备上述外来基因所编码的蛋白或肽的方法，该方法包括下述步骤：

准备重组载体的步骤，所述重组载体具有在可以表达的状态下能够插入任意外来基因的位点、且在可以表达的状态下具有编码氨酰tRNA合成酶的基因，在上述重组载体的、在可以表达的状态下能够插入任意外来基因的位点插入有期望的外来基因；

准备突变宿主细胞的步骤，所述突变宿主细胞是使编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因缺失、或者使编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因的表达降低至宿主细胞无法生长的程度；

用上述重组载体转化上述突变宿主细胞得到转化体的步骤；

培养上述转化体来制备上述外来基因所编码的蛋白或肽的步骤。

(10)在宿主细胞内稳定维持目标重组载体的方法，该方法包括：

使上述宿主细胞中所含的、编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因缺失或者使其降低至宿主细胞无法生长的程度，之后以上述宿主细胞作为突变宿主细胞；

使上述目标重组载体在可以表达的状态下含有编码氨酰tRNA合成酶的基因；

用在可以表达的状态下含有上述编码氨酰tRNA合成酶的基因的目标重组载体转化上述突变宿主细胞。

(11)(10)所述的方法，其中上述重组载体具有在可以表达的状态下能够插入编码氨酰tRNA合成酶的基因以外的任意外来基因的位点。

(12)(9)～(11)中任一项所述的方法，其中氨酰tRNA合成酶为：色氨酰tRNA合成酶、丙氨酰tRNA合成酶、精氨酰tRNA合成酶、天冬酰胺酰tRNA合成酶、天冬氨酰tRNA合成酶、半胱氨酰tRNA合成酶、谷氨酰胺tRNA合成酶、谷氨酸tRNA合成酶、甘氨酸tRNA合成酶、组氨酰tRNA合成酶、异亮氨酰tRNA合成酶、亮氨酰tRNA合成酶、赖氨酸tRNA合成酶、甲硫氨酰tRNA合成酶、苯丙氨酸tRNA合成酶、脯氨酰tRNA合成酶、丝氨酰tRNA合成酶、苏氨酰tRNA合成酶、酪氨酰tRNA合成酶或缬氨酰tRNA合成酶。

(13)(9)～(12)中任一项所述的方法，其中带有突变的宿主细胞为细菌、酵母、动物细胞或植物细胞。

(14)(9)～(12)中任一项所述的方法，其中带有突变的宿主细胞为细菌或酵母。

(15)(13)或(14)所述的方法，其中细菌为芽孢杆菌属细菌。

(16)(9)～(15)中任一项所述的方法，其中外来基因编码的蛋白为选自氧化还原酶、转移酶、水解酶、磷酸化酶、裂解酶、异构酶、合成酶或修饰酶的一种酶。

(17)(1)～(3)中任一项所述的重组载体在制备外来基因所编码的蛋白或肽中的应用。

(18)(4)～(8)中任一项所述的突变宿主细胞在制备外来基因所编码的蛋白或肽中的应用。

发明效果

根据本发明，在不使用抗生素、且不限制培养基组成的情况下可以维持重组DNA克隆载体，其结果，在工业生产中也可以使细胞中的重组载体稳定至发酵槽内的培养结束。

附图简述

图1显示质粒回收溶液的电泳结果。

具体实施方式

[重组载体]

本发明涉及重组载体，该重组载体满足下述(1)～(3)：(1)在可以表达的状态下具有编码氨酰tRNA合成酶的基因；(2)具有在可以表达的状态下能够插入编码氨酰tRNA合成酶的基因以外的任意外来基因的位点；且(3)在突变宿主中使用，所述突变宿主是使编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因缺失、或者使编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因的表达降低至宿主细胞无法生长的程度。

(1)在可以表达的状态下具有编码氨酰tRNA合成酶的基因的重组载体。

本发明的重组载体在可以表达的状态下含有编码氨酰tRNA合成酶基因的基因。该重组载体在可以在期望宿主细胞内表达的状态下含有编码氨酰tRNA合成酶基因的基因，用于转化该宿主细胞。因此，本发明的重组载体只要具有能够实现所述宿主细胞的转化的形态即可，例如可以具有质粒、噬菌体、逆转录转座子的形态。

氨酰tRNA合成酶对应于20种氨基酸，有20多种(部分有多种)，例如丙氨酸所对应的氨酰tRNA合成酶称作丙氨酰tRNA合成酶(丙氨酰-tRNA合成酶或丙氨酸-tRNA合成酶)。氨酰tRNA合成酶的具体例子有：例如色氨酰tRNA合成酶、丙氨酰tRNA合成酶、精氨酰tRNA合成酶、天冬酰胺酰tRNA合成酶、天冬氨酰tRNA合成酶、半胱氨酰tRNA合成酶、谷氨酰胺tRNA合成酶、谷氨酸tRNA合成酶、甘氨酸tRNA合成酶、组氨酰tRNA合成酶、异亮氨酰tRNA合成酶、亮氨酰tRNA合成酶、赖氨酸tRNA合成酶、甲硫氨酰tRNA合成酶、苯丙氨酸tRNA合成酶、脯氨酰tRNA合成酶、丝氨酰tRNA合成酶、苏氨酰tRNA合成酶、酪氨酰tRNA合成酶或缬氨酰tRNA合成酶。

将色氨酸所对应的氨酰tRNA合成酶称为色氨酰tRNA合成酶，色氨酰tRNA合成酶缺失的细胞株由于无法进行含有色氨酸的蛋白的合成，所以无法增殖。

氨酰tRNA合成酶基因包含在原核生物到真核生物的所有生物中。例如，大肠杆菌中包含：丙氨酰-tRNA合成酶(SEQ ID NO：1)、精氨酰-tRNA合成酶(SEQ ID NO：2)、天冬酰胺酰-tRNA合成酶(SEQID NO：3)、天冬氨酰-tRNA合成酶(SEQ ID NO：4)、半胱氨酰-tRNA合成酶(SEQ ID NO：5)、谷氨酰胺-tRNA合成酶(SEQ ID NO：6)、谷氨酸-tRNA合成酶(SEQ ID NO：7)、甘氨酸-tRNA合成酶(α亚单位)(SEQ ID NO：8)、甘氨酸-tRNA合成酶(β亚单位)(SEQ ID NO：9)、组氨酰-tRNA合成酶(SEQ ID NO：10)、异亮氨酰-tRNA合成酶(SEQ IDNO：11)、亮氨酰-tRNA合成酶(SEQ ID NO：12)、赖氨酸-tRNA合成酶(组成型)(SEQ ID NO：13)、赖氨酸-tRNA合成酶(诱导型)(SEQ IDNO：14)、甲硫氨酰-tRNA合成酶(SEQ ID NO：15)、苯丙氨酸-tRNA合成酶(α亚单位)(SEQ ID NO：16)、苯丙氨酸-tRNA合成酶(β亚单位)(SEQ ID NO：17)、预测赖氨酰-tRNA合成酶(SEQ ID NO：18)、脯氨酰-tRNA合成酶(SEQ ID NO：19)、丝氨酰-tRNA合成酶(在硒代半胱氨酰-tRNA上负载丝氨酸)(SEQ ID NO：20)、苏氨酰-tRNA合成酶(SEQ ID NO：21)、色氨酰-tRNA合成酶(SEQ ID NO：22)、酪氨酰-tRNA合成酶(SEQ ID NO：23)、缬氨酰-tRNA合成酶(SEQ ID NO：24)。

已知枯草杆菌中包含：丙氨酰-tRNA合成酶(SEQ ID NO：25)、精氨酰-tRNA合成酶(SEQ ID NO：26)、天冬酰胺酰-tRNA合成酶(SEQID NO：27)、天冬氨酰-tRNA合成酶(SEQ ID NO：28)、半胱氨酰-tRNA合成酶(SEQ ID NO：29)、谷氨酰-tRNA合成酶(SEQ ID NO：30)、谷氨酰-tRNA酰胺转移酶(亚单位a)(SEQ ID NO：31)、甘氨酸tRNA合成酶(α亚单位)(SEQ ID NO：32)、甘氨酸tRNA合成酶(β亚单位)(SEQID NO：33)、组氨酰tRNA合成酶(hisS)(SEQ ID NO：34)、异亮氨酰-tRNA合成酶(SEQ ID NO：35)、亮氨酰-tRNA合成酶(SEQ ID NO：36)、赖氨酸tRNA合成酶(组成型)(SEQ ID NO：37)、组氨酰tRNA合成酶(hisZ)(SEQ ID NO：38)、甲硫氨酰-tRNA合成酶(SEQ ID NO：39)、苯丙氨酸tRNA合成酶(α亚单位)(SEQ ID NO：40)、苯丙氨酸tRNA合成酶(β亚单位)(SEQ ID NO：41)、相似于苯丙氨酰-tRNA合成酶(ytpR)(SEQ ID NO：42)、脯氨酰-tRNA合成酶(SEQ ID NO：43)、丝氨酰-tRNA合成酶(在硒代半胱氨酰-tRNA上负载丝氨酸)(SEQ IDNO：44)、苏氨酰-tRNA合成酶(主要)(SEQ ID NO：45)、苏氨酰-tRNA合成酶(次要)(SEQ ID NO：46)、色氨酰-tRNA合成酶(SEQ ID NO：47)、酪氨酰-tRNA合成酶(主要)(SEQ ID NO：48)、酪氨酰-tRNA合成酶(次要)(SEQ ID NO：49)、缬氨酰-tRNA合成酶(SEQ ID NO：50)、谷氨酰-tRNA酰胺转移酶(亚单位b)(SEQ ID NO：51)、谷氨酰-tRNA酰胺转移酶(亚单位c)(SEQ ID NO：52)等。

本发明的重组载体在可以表达的状态下具有编码氨酰tRNA合成酶的基因。因此，除氨酰tRNA合成酶基因以外，为了形成可以表达该基因的状态而使用大肠杆菌(Escherichia coli)或枯草杆菌(Bacillus subtilis)等细菌作为宿主时，通常还具有例如启动子、操纵基因区(包含启动子、操纵基因和核糖体结合区(SD区))、起始密码子、编码生产目标蛋白的DNA、终止密码子、终止区和能够复制质粒的单元等。使用酵母等真菌细胞或动物细胞作为宿主细胞时，通常具有启动子、起始密码子、编码信号肽和生产目标蛋白的DNA、以及终止密码子等。本发明的重组载体根据需要可以包含增强子等顺式元件、编码生产目标蛋白的DNA的5’侧或3’侧的非翻译区、剪接接合部、聚腺苷酸化位点、能够复制的单元、同源区域、筛选标记。上述元件只要是用于表达编码生产目标蛋白的基因的宿主所对应的元件即可，没有特别限定，可以根据技术常识来筛选。

需要说明的是，对筛选标记没有特别限定，例如当用于基因表达的宿主为细菌时，可以使用耐药性基因(例如，氨苄青霉素耐性基因、新霉素耐性基因、环己酰亚胺耐性基因、四霉素耐性基因等)；当宿主为细菌以外的例如酵母等时，还可以使用以营养要求性基因(例如HIS4、URA3、LEU2、ARG4等)等为代表的公知的各种筛选标记。

(2)本发明的重组载体具有在可以表达的状态下能够插入编码氨酰tRNA合成酶的基因以外的任意外来基因的位点。如下所述，该位点是使用本发明的宿主细胞，在可以表达的状态下能够插入编码欲生产的蛋白的外来基因的位点。

“在可以表达的状态下能够插入基因”是指通常编码蛋白的基因的表达要求用于将其基因信息转录到mRNA上的RNA聚合酶识别位点和用于将mRNA的信息翻译成肽的核糖体结合区存在于编码该蛋白的基因的起始密码子的上游。归纳起来，“在可以表达的状态下具有基因”是指将其基因的起始密码子到终止密码子转录到mRNA中所必需的序列存在于起始密码子的上游，并且用于将其mRNA的信息翻译成肽的序列存在于起始密码子的上游。此处所说的“起始密码子”并不限于原染色体上的该基因的起始密码子序列，只要是发挥起始密码子功能的密码子均可。此处所说的“核糖体结合区”例如只要是不被集中在具有包含原核生物的5’-aaaggagg-3’的共有序列的序列中、且为核糖体能够识别的序列即可，并不限于原染色体上作为该基因的核糖体结合区的序列，只要是核糖体能够识别的序列即可使用。

本发明的重组载体的构建可以按照DNA重组的一般方法、例如文献Molecular Cloning(1989)(Cold Spring Harbor Lab)中记载的方法来进行。该文献内容作为公开特别引用于此。

作为载体，质粒载体的例子有：例如pRS413、pRS415、pRS416、YCp50、pAUR112或pAUR123等YCp型大肠杆菌-酵母穿梭载体；pRS403、pRS404、pRS405、pRS406、pAUR101或pAUR135等YIp型大肠杆菌-酵母穿梭载体；来自大肠杆菌的质粒(例如pBR322、pBR325、pUC18、pUC19、pUC119、pTV118N、pTV119N、pBluescript、pHSG298、pHSG396或pTrc99A等ColE系质粒；pACYC177或pACYC184等p1A系质粒；pMW118、pMW119、pMW218或pMW219等pSC101系质粒等)；来自枯草杆菌的质粒(例如pUB110、pTP5等)；pHY300PLK等大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体。噬菌体载体的例子有：λ噬菌体(例如Charon 4A、Charon21A、EMBL4、λgt100、gt11、zap)、ψX174、M13mp18、M13mp19等。作为逆转录转座子，例如有Ty因子等。此外，还可以使用以融合蛋白的形式表达的表达载体、例如pGEX系列(ファルマシア制)、pMAL系列(Biolabs社制)。

(3)本发明的重组载体在突变宿主中使用，所述突变宿主是使编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因缺失、或者使编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因的表达降低至宿主细胞无法生长的程度。有关该突变宿主在后面阐述。

[宿主细胞(突变宿主)]

本发明涉及突变宿主细胞，该突变宿主细胞满足下述(4)～(6)：(4)使编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因缺失、或者使编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因的表达降低至宿主细胞无法生长的程度；(5)具有在可以表达的状态下能够插入编码氨酰tRNA合成酶的基因以外的任意外来基因的位点；且(6)用在可以表达的状态下具有编码氨酰tRNA合成酶的基因的重组载体转化后使用。

(4)本发明的突变宿主细胞，其突变前的宿主细胞例如有：大肠杆菌或枯草杆菌等细菌；酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、粟酒裂殖酵母(Saccharomyces pombe)、毕赤酵母(Pichia pastoris)等酵母；sf9或sf21等昆虫细胞；COS细胞、中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)等动物细胞；烟草等植物细胞。优选为大肠杆菌或枯草杆菌等细菌和酵母。

通常，细胞为了自身增殖而具有编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因。相对于此，在本发明中，使细胞本来所具有的编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因缺失、或者使编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因的表达降低至宿主细胞无法生长的程度。使编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因缺失或者使该基因表达降低可以按照以下的方法进行。

[基因缺失(失活)]

“失活”一词包含妨碍染色体基因中一个以上基因的功能表达的方法。失活通过核酸基因序列的缺失、置换(例如突变)、抑制和/或插入等来进行。在几个实施方式中，突变微生物优选包含发生稳定且不可逆的失活的一个以上基因的失活。

(由插入引起的失活)

此处使用的“插入序列”一词是指被导入微生物染色体内的DNA序列。在几个实施方式中，插入序列可以是被转化的细胞的基因组中已经存在或不存在的序列(即、相同或不同的序列)。并且，在另一实施方式中，插入序列有时包含筛选标记。在又一实施方式中，插入序列有时包含两个同源框(homoeobox)。

此处使用的“同源框”是指与微生物染色体的序列同源的核酸序列。更具体而言，根据本发明，“同源框”是指与失活的基因相邻的编码区或与部分基因具有约80～100％序列同源性、约90～100％序列同源性或约95％～100％序列同源性的上游或下游区域。这些序列以置换微生物染色体的一部分为目的。同源框并非用以限定本发明，其包含约1碱基对(bp)～20万碱基(kb)。优选同源框包含：约1bp～10.0kb；1bp～5.0kb；1bp～2.5kb；1bp～1.0kb和0.25kb～2.5kb。同源框包含约10.0kb、5.0kb、2.5kb、2.0kb、1.5kb、1.0kb、0.5kb、0.25kb和0.1kb。在几个实施方式中，筛选标记的5’和3’末端与同源框相邻，其中同源框包含与该基因的编码区近邻的核酸序列。

此处使用的“筛选标记”一词是指能够在宿主细胞中表达的核苷酸序列，通过筛选标记的表达，在对应的筛选因子的存在下、或不存在必须营养素的条件下，包含表达基因的细胞可以生长。此处使用的“可筛选标记”和“筛选标记”是指能够在宿主细胞中表达的核酸(例如基因)，包含载体的这些宿主的筛选可以简单地进行。对该筛选标记的例子没有限定，有抗微生物剂等。因此，“筛选标记”是指宿主细胞赋予整合有目的插入DNA或发生了其它反应的记号的基因。通常，筛选标记是指为了能够区别转化时未接受外来序列的细胞与包含外来DNA的细胞而赋予宿主细胞抗菌耐性或代谢优点的基因。筛选标记的例子有：抗微生物耐性标记等(参照例如ampR；phleoR；specR；kanR；eryR；tetR；cmpR；和neoR；例如Guerot-Fleury，Gene，167：335～337[1995]；Palmeros等人，Gene 247：255～264[2000]；和Trieu-Cuot等人，Gene、23：331～341[1983]，这些内容作为公开而特别引用于此)。在几个特别优选的实施方式中，本发明提供氯霉素耐性基因(例如存在于pC194上的基因、以及存在于地衣芽孢杆菌基因组中的耐性基因)。该耐性基因在本发明和与整合在染色体上的表达盒和整合质粒的染色体扩增有关的实施方式中特别有用。

例如，当色氨酰tRNA合成酶基因(trpS)为失活基因时，DNA构建体包含筛选标记作为插入序列，具有抑制其活性的trpS基因。筛选标记插入trpS编码序列部分的内侧。DNA构建体与宿主染色体中的trpS基因本质上具有相同的序列，在双重交叉的情况下，trpS基因由于筛选标记的插入而失活。

(由缺失引起的失活)

在几个优选实施方式中，失活通过缺失来实现。在几个优选实施方式中，基因通过同源重组而缺失。例如，在几个实施方式中，当缺失的基因为trpS时，使用包含插入序列的DNA构建体，所述插入序列具有与同源框的两侧相邻的筛选标记。同源框在染色体trpS基因的核酸侧翼区具有相同的核苷酸序列。DNA构建体与微生物宿主染色体的同源序列一致，在双重交叉的情况下，trpS基因从宿主染色体中被切除。

此处使用的基因的“缺失”一词是指编码序列全体的缺失、一部分编码序列的缺失、或包含侧翼区的编码序列的缺失。只要染色体中残留的序列不发挥缺失前的生物活性即可，缺失可以是部分缺失。编码序列的侧翼区可以在5’和3’末端包含约1bp～约500bp。侧翼区可以大于500bp，但根据本发明优选该区不包含能够失活或缺失的其它基因。最终，缺失基因事实上是没有功能的。简而言之，“缺失”一词以1个以上的核苷酸或氨基酸残基分别被除去(即不存在)的核苷酸或氨基酸序列的变化来定义。

此处使用的“侧翼序列”是指位于对象序列的上游或下游的序列(例如基因A-B-C，基因B位于A和C基因序列的侧翼(位于侧面))。在优选实施方式中，插入序列位于同源框两侧的侧面。在几个实施方式中，侧翼序列仅存在于一方侧(3’侧或5’侧)，但在优选实施方式中，其位于序列两侧的侧面。各同源框的序列与微生物染色体中的序列同源。这些序列的目的在于在微生物染色体中整合新的构建体、以及用插入序列置换微生物染色体的一部分。在优选实施方式中，筛选标记的5’和3’末端位于包含一部分失活染色体片段的多核苷酸序列的侧面。

(由突变引起的失活)

在另一实施方式中，通过基因突变而发生失活。基因突变的方法有多种，对其没有限定，可以列举出：位点特异性突变、随机突变发生和gapped-duplex法(例如参照Moring等人、Biotech.2：646[1984]；以及Kramer等人、Nucleic Acids Res.，12：9441[1984]，这些内容作为公开而特别引用于此)。

在优选实施方式中，在染色体上的至少一个密码子中利用突变诱发来产生突变。在又一实施方式中，突变DNA序列与野生型序列具有40％以上、45％以上、50％以上、55％以上、60％以上、65％以上、70％以上、75％以上、80％以上、85％以上、90％以上、95％以上或98％以上的同源性。在另一实施方式中，使用公知的突变诱发程序、例如UV照射、亚硝基胍等化学突变剂在体内产生突变DNA。

即使在氨酰tRNA合成酶活性发生缺失的染色体突变内，也优选使用氨酰tRNA合成酶基因自身的缺失。但是，只要使用带有对应基因的染色体外基因，调节氨酰tRNA合成酶生合成的其它基因也可使用。当为氨酰tRNA合成酶基因缺失株时，染色体外基因中适合插入的基因对应于该氨酰tRNA合成酶基因。

为了避免具有氨酰tRNA合成酶的染色体外基因与染色体的突变氨酰tRNA合成酶基因之间的同源性重组的可能性，优选使目标氨酰tRNA合成酶基因实质上从染色体上缺失。

(5)和(6)的重组载体与上述(1)和(2)的重组载体相同。

[功能]

使编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因缺失的突变宿主细胞、或者使编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因的表达降低至宿主细胞无法生长的程度的突变宿主细胞由于无法表达编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因，所以保持原样，已经无法增殖。

相对于此，通过包含在可以表达的状态下具有编码氨酰tRNA合成酶的基因的重组载体，可以维持增殖。即，氨酰tRNA合成酶的缺失可以通过向染色体外基因上导入该氨酰tRNA合成酶基因来互补。但是，万一细胞失去了该染色体外基因，则该细胞已经变得无法增殖。

因此，本发明的突变宿主细胞在上述关系的基础上，在培养基中不含抗生素、或者不排除或不限制满足特定营养要求性的营养成分的情况下，能够使插入有外来基因的重组载体稳定，并将其维持在宿主细胞中。因此，本发明的突变宿主细胞具有以下优点、即可以适用于工业规模生产所使用的任意培养基中。

并且，本发明的突变宿主细胞用于表达编码氨酰tRNA合成酶的基因以外的任意外来基因。本发明的宿主细胞包含在可以表达的状态下在上述突变宿主中具有上述编码氨酰tRNA合成酶的基因的重组载体，并且，该重组载体具有在可以表达的状态下能够插入外来基因的位点，通过在该位点插入期望外来基因，可以使插入有期望外来基因的重组载体稳定，并将其维持在宿主细胞中。并且，使外来基因表达，可以用于生产外来基因所编码的期望蛋白。

[制备蛋白或肽的方法]

本发明涉及使编码氨酰tRNA合成酶的基因以外的外来基因表达来制备上述外来基因所编码的蛋白或肽的方法。该方法包括以下步骤。

(10)准备重组载体的步骤，所述重组载体具有在可以表达的状态下能够插入任意外来基因的位点、并且在可以表达的状态下具有编码氨酰tRNA合成酶的基因，在上述重组载体的、在可以表达的状态下能够插入任意外来基因的位点插入有期望外来基因；

(11)准备突变宿主细胞的步骤，所述突变宿主细胞使编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因缺失、或者使编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因的表达降低至宿主细胞无法生长的程度；

(12)用上述重组载体转化上述突变宿主细胞得到转化体的步骤；

(13)培养上述转化体来制备上述外来基因所编码的蛋白或肽的步骤。

(10)准备重组载体的步骤

在该步骤中准备重组载体，所述重组载体具有在可以表达的状态下能够插入任意外来基因的位点、并且在可以表达的状态下具有编码氨酰tRNA合成酶的基因，在上述重组载体的、在可以表达的状态下能够插入任意外来基因的位点插入有期望外来基因。上述重组载体为之前说明的本发明的重组载体。在本发明的制造方法中准备重组载体，其中在该重组载体的、在可以表达的状态下能够插入任意外来基因的位点插入有期望外来基因。具体而言，在适当的载体中插入编码氨酰tRNA合成酶的基因和期望外来基因。基因的插入可以按照常规方法进行。所有基因均在可以表达的状态下插入。

“关于插入两个基因的一般说明”

向重组载体中插入氨酰tRNA合成酶基因和任意外来基因，这可以按照DNA重组的一般方法、例如文献Molecular Cloning(1989)(Cold Spring Harbor Lab.)中记载的方法来进行。该文献的全部内容作为公开而特别引用于此。各基因在重组载体中的插入位置只要是不参与重组载体复制的位置即可，基本上可以是任意位置，插入位置根据使用的载体而不同。例如，可使用的重组载体的例子有：来自大肠杆菌的质粒(例如pBR322、pBR325、pUC18、pUC19、pUC119、pTV118N、pTV119N、pBluescript、pHSG298、pHSG396或pTrc99A等ColE系质粒；pACYC177或pACYC184等p1A系质粒；pMW118、pMW119、pMW218或pMW219等pSC101系质粒等)；来自枯草杆菌的质粒(例如pUB 110、pTP5等)；pHY300PLK等大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体。

例如，以大肠杆菌-枯草杆菌的穿梭载体pHY300PLK质粒为例，可以在多克隆位点、即EcoRI位点插入氨酰tRNA合成酶基因，同样在多克隆位点、即BamHI位点插入任意的外来基因。以下稍详细说明本例。

以具有任意外来基因的生物染色体DNA为模板，采用PCR扩增来扩增包含从启动子位点到终止密码子的该任意外来基因，将其与用限制酶BamHI消化pHY300PLK而得到的DNA片段进行连接反应，使用所得的连接反应混合物来转化大肠杆菌，筛选包含在pHY300PLK的BamHI位点根据目的插入有包含从启动子位点到终止密码子的任意外来基因的质粒的转化体，由该转化体制备质粒。接着将如上制备的质粒用限制酶EcoRI消化，切断该质粒。以枯草杆菌168(Bacillus subtilis 168)株的染色体DNA为模板，利用PCR扩增来扩增包含从启动子位点到终止密码子的氨酰tRNA合成酶基因，之后与来自被EcoRI切断的、已构建好的质粒的DNA片段进行连接反应，使用所得的连接反应混合物来转化大肠杆菌，筛选包含在构建好的质粒的EcoRI位点根据目的插入有氨酰tRNA合成酶基因的质粒的转化体，由该转化体可以制备目的质粒。

(11)准备突变宿主细胞的步骤

在该步骤中准备突变宿主细胞，所述突变宿主细胞是使编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因缺失、或者使编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因的表达降低至宿主细胞无法生长的程度。该突变宿主细胞是上述说明的本发明的突变宿主细胞。其制备方法如下。

作为突变宿主细胞的制备程序，除了将存在于宿主染色体上的目的基因按计划删除或使之失活的方法以外，还可以列举：赋予随机的基因的删除或失活突变、之后利用适当方法进行基因解析或蛋白生产性评价的方法。

删除目的基因或使之失活时，例如可以使用同源重组的方法。即，将包含一部分目的基因的DNA片段克隆到适当的质粒载体中，将所得的环状重组质粒或直链上的DNA片段整合到宿主细胞内，通过目的基因的一部分区域的同源重组截断亲本微生物基因组上的目的基因，使之失活。或者，采用PCR等方法构建导入有由碱基置换或碱基插入等引起的失活突变的目的基因、或者包含目的基因的外侧区域但不包含目的基因的直链状DNA片段等，之后将其整合到亲本微生物细胞内，使在亲本微生物基因组的目的基因内的突变位置的外侧两个区域、或目的基因外侧的两个区域发生两次交叉同源重组，从而可以与基因组上的删除或失活的目的基因的基因片段进行置换。

(12)得到转化体的步骤

使用步骤(10)中制备的重组载体来转化步骤(11)中制备的突变宿主细胞。利用重组载体进行的宿主细胞的转化也可以按照常规方法来实施。

对向宿主细胞中导入(转化)重组载体的方法没有特别限定，根据导入的宿主细胞的种类或重组载体的形态，可以适当筛选转化法、转染法、感受态细胞法、电穿孔等方法。

此处使用的“宿主细胞”是指具有为新导入的DNA序列发挥宿主或表达媒体作用的能力的细胞。

需要说明的是，对重组载体在宿主细胞内的存在形式没有特别限定，可以是被插入染色体中或者被置换整合，还可以以质粒状态存在。

需要说明的是，重组载体中所含的编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因与在突变宿主细胞中缺失的编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因、或者表达被降低至宿主细胞无法生长的程度的编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因为同种的基因。例如，在突变宿主细胞中，缺失的编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因、或者表达被降低至宿主细胞无法生长的程度的编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因为丙氨酰tRNA合成酶基因时，重组载体中所含的也是丙氨酰tRNA合成酶基因。

(13)制备蛋白或肽的步骤

培养步骤(12)中得到的转化体来制备外来基因所编码的蛋白或肽。转化体的培养要根据宿主细胞的种类，使用适当的培养基，在适当的培养条件下实施。作为宿主细胞，只要能够生产外来基因所编码的蛋白或肽即可，可以是野生型宿主细胞，也可以是施行了突变的宿主细胞。具体可以列举：枯草杆菌等芽孢杆菌(Bacillus)属细菌或大肠杆菌(Escherihia)属细菌、梭菌(Clostridium)属细菌、或酵母等，其中优选芽孢杆菌属细菌。从全基因组信息已明确、基因工程学、基因组工程学技术已确立的角度以及具有将蛋白分泌生产到菌体外的能力的角度考虑，特别优选枯草杆菌。

本说明书中所说的“芽孢杆菌属”包含通常已知的芽孢杆菌属所包含的所有种类，对其没有限定，意思是指例如枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)、嗜碱芽孢杆菌(Bacillus alkalophilus)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)、耐盐芽孢杆菌(Bacillus halodurans)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)和苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)等。需要说明的是，芽孢杆菌属在分类上接受重新编组，该属还包含重新分类的种。例如有：地芽孢杆菌(Geobacillus)属、耐碱芽孢杆菌(Alkalibacillus)属、双芽孢杆菌(Amphibacillus)属、Amylobacillus属、厌氧芽孢杆菌(Anoxybacillus)属、Goribacillus属、Cerasibacillus属、薄壁芽孢杆菌(Gracilibacillus)属、Halolactibacillus属、Halalkalibacillus属、Filobacillus属、Jeotgalibacillus属、需盐芽孢杆菌(Salibacillus)属、Oceanobacillus属、Marinibacillus属、Lysinibacillus属、Lentibacillus属、解脲芽孢杆菌(Ureibacillus)属、Salinibacillus属、Pontibacillus属、Piscibacillus属、Paraliobacillus属、枝芽孢杆菌(Virgibacillus)属、Salsuginibacillus属、Tenuibacillus属、Thalassobacillus属、Thermalkalibacillus属、Tumebacillus属等，这些菌属也包含在本说明书所说的芽孢杆菌属中。

例如，当宿主细胞为枯草杆菌时，作为培养所使用的培养基的种类，只要是包含适当的氮源、碳源、矿物质、且本发明的枯草杆菌宿主繁殖、可以生产目标蛋白的培养基即可。例如，通过重组枯草杆菌168株来生产外来基因所编码的蛋白或肽时，可以使用混合有葡萄糖或果糖等单糖类；蔗糖、麦芽糖等双糖类或可溶性淀粉等多糖类等作为碳源的培养基；或者混合有蛋白胨类、大豆提取物、酵母提取物、鱼肉提取物、玉米浆(CSL)、金属盐等作为氮源的培养基等。

此外，培养基的pH值只要是所用的重组生物体能够生育的范围的pH值即可，但是，例如为枯草杆菌时，优选调节至pH6.0～8.0，培养条件可以是在15～42℃、优选28～37℃下振荡或通气搅拌培养2～7天。

上述培养后回收目标蛋白或肽。目标蛋白或多肽的回收方法可以按照常规方法进行。回收的目标蛋白或多肽根据需要还可以进一步按照常规方法进行纯化。

按照本发明的制造方法生产的目标蛋白或肽的例子有：例如作为食品用、药品用、化妆品用、洗涤剂用、纤维处理用、医疗检查药用等有用的酶或生理活性因子等蛋白或多肽。

对目标蛋白或肽基因没有特别限定，包含洗剂、食品、纤维、饲料、化学品、医疗、诊断等各种产业用酶或生理活性肽等。除产业用酶的功能以外，还包含氧化还原酶(Oxidoreductase)、转移酶(Transferase)、水解酶(Hydrolase)、磷酸化酶(Phosphorylase)、裂解酶(Lyase)、异构酶(Isomerase)、合成酶(连接酶/合成酶)、修饰酶(Modifyingenzyme)等。可以进一步具体列举：纤维素酶、琼脂分解酶、γ-环糊精合成酶等糖分解酶基因等。

[在宿主细胞内稳定维持重组载体的方法]

本发明涉及在宿主细胞内稳定维持目标重组载体的方法。该方法包括以下(20)～(22)。

(20)使上述宿主细胞中所含的、编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因缺失、或者使其表达降低至宿主细胞无法生长的程度，以上述宿主细胞作为突变宿主细胞；

(21)在可以表达的状态下使上述目标重组载体含有编码氨酰tRNA合成酶的基因；

(22)用在可以表达的状态下含有上述编码氨酰tRNA合成酶的基因的目标重组载体转化上述突变宿主细胞。

(20)以宿主细胞作为突变宿主细胞的方法如上述突变宿主细胞的说明中所述。

(21)有关在可以表达的状态下使重组载体含有编码氨酰tRNA合成酶的基因，也如本发明的重组载体的说明中所述。上述重组载体具有在可以表达的状态下能够插入编码氨酰tRNA合成酶的基因以外的任意外来基因的位点，这一点也如上所述。

(22)关于突变宿主细胞的转化，也如制备上述蛋白或肽的方法的说明中所述。

本发明包含在宿主细胞内稳定维持目标重组载体的方法，在该方法中使用上述本发明的突变宿主细胞作为宿主细胞。本发明的这种方法是使上述细胞中所含的染色体外基因稳定的方法，例如，使氨酰tRNA合成酶产生缺陷的染色体突变是指该氨酰tRNA合成酶基因的至少一部分的缺失，而染色体外基因是指该氨酰tRNA合成酶基因。

根据本发明，例如在不存在抗生素所带来的筛选压力或不需要施加不含特定氨基酸限制的培养基的情况下，即可得到染色体外基因在完全培养基中稳定的转化细胞株。并且，根据本发明所述的方法，缺失了染色体外基因的细胞无法增殖。因此，本发明还涉及：通过氨酰tRNA合成酶基因和具有确实表达产业上有用的蛋白的要素的染色体外基因转化的细胞。本发明还涉及使用转化细胞来制造产业上有用的蛋白的方法，其特征在于：在完全培养基中培养通过本发明的染色体外基因转化的细胞。该染色体外基因能够进一步带有该蛋白的基因。

此处使用的“蛋白基因”一词是指参与肽链生成的DNA的染色体片段，在编码蛋白的区中可以包含也可以不包含先行或后续的区。

下述实施例是将具有色氨酰tRNA合成酶基因的质粒在氨酰tRNA合成酶之一、即色氨酰tRNA合成酶中具有缺陷的枯草杆菌中的稳定性与相同质粒在色氨酰tRNA合成酶中不具有缺陷的枯草杆菌中的稳定性比较后进行显示。并且，还将具有色氨酰tRNA合成酶基因的质粒在前述氨酰tRNA合成酶之一、即色氨酰tRNA合成酶中具有缺陷的枯草杆菌中的稳定性与不具有色氨酰tRNA合成酶基因的同种质粒在色氨酰tRNA合成酶中不具有缺陷的枯草杆菌中的稳定性比较后进行显示。

并且还展示了：带有色氨酰tRNA合成酶基因的这些重组载体还可用于表达编码同时存在于同一载体上的纤维素酶、琼脂分解酶的基因等的例子。

实施例

以下，通过实施例进一步详细说明本发明。

[实施例1]向枯草杆菌株中导入具有色氨酰tRNA合成酶基因的染色 体外基因

按下述方法构建带有色氨酰tRNA合成酶基因的染色体外基因、即质粒pDATS14。首先，以通用枯草杆菌-大肠杆菌的穿梭质粒、即pHY300PLK(ヤクルト社制)为模板，使用引物A和B进行PCR扩增。所得扩增片段用限制酶XhoI消化后，通过连接两末端形成环状质粒。使用该质粒转化大肠杆菌HB101株。由转化体制备质粒，将其作为pDA2。另一方面，以枯草杆菌ISW1214株的染色体为模板，使用引物C和D得到包含色氨酰tRNA合成酶基因及其邻近区域的DNA片段。用限制酶XhoI消化该DNA片段，并与预先用限制酶XhoI消化的pDA2连接。使用所得连接物转化大肠杆菌HB101株。由所得转化体制备质粒，将该质粒命名为pDATS14。接下来，使用pDATS14，通过原生质体转化法(参照参考文献Mol.Gen.Genet.168：111～115(1979)Chang，S.和Cohen，S.N.、其内容作为公开而特别引用于此)转化来自两种蛋白酶(碱性蛋白酶E、中性蛋白酶E)存在缺陷的枯草杆菌ISW1214株的突变株(参照参考文献Appl.Microbiol.Biotechnol 65：583～592(2004)Hatada，Y.等人、其内容作为公开而特别引用于此)，得到在染色体外带有色氨酰tRNA合成酶基因的枯草杆菌转化体。

[实施例2]用于破坏枯草杆菌株染色体上的色氨酰tRNA合成酶基因 的DNA片段的构建

以枯草杆菌ISW1214株的染色体为模板，使用引物E和F，得到包含色氨酰tRNA合成酶基因及其邻近区域的约2.5kb的DNA片段。将其用限制酶EcoRI和SalI消化。之后与预先通过EcoRI和SalI消化的通用性质粒pUC18连接，得到质粒pTSAF。另一方面，以通用性质粒pC194为模板，使用引物G和H，得到包含来自葡萄球菌的氯霉素耐性基因及其邻近区域的约1.6kb的DNA片段。再以pTSAF为模板，使用引物I和J进行PCR反应，得到DNA片段。将该DNA片段和包含氯霉素耐性基因及其邻近区域的约1.6kb的DNA片段用限制酶BamHI和XbaI消化后进行连接，然后用该连接物转化大肠杆菌HB101株。由转化体制备质粒，作为色氨酰tRNA合成酶基因破坏用质粒pINTTS。以pINTTS为模板，使用引物K和L进行PCR反应，得到直链状的色氨酰tRNA合成酶基因破坏用DNA片段。

[实施例3]枯草杆菌株染色体上的色氨酰tRNA合成酶基因的破坏

使用上述色氨酰tRNA合成酶基因破坏用DNA片段，采用感受态细胞法进一步转化上述带有染色体外色氨酰tRNA合成酶基因的转化体，得到获得了氯霉素耐性的转化体。由该转化体制备染色体DNA。使用引物M和N、或O和P，对该染色体DNA进行PCR反应，确认染色体的色氨酰tRNA合成酶基因所编码的区域与来自色氨酰tRNA合成酶基因破坏用DNA片段的氯霉素耐性基因发生了置换，将该菌株作为色氨酰tRNA合成酶基因缺失株、即DTS1451(pDATS14)株。

[实施例4]向DTS1451株中导入具有卡那霉素耐性基因的质粒

以枯草杆菌ISW1214株的染色体为模板，使用引物C和D，得到包含色氨酰tRNA合成酶基因及其邻近区域的DNA片段。用限制酶XhoI消化该DNA片段，之后与预先用限制酶XhoI消化的pDA2连接。使用所得连接物转化大肠杆菌HB101株。由所得转化体制备质粒，将该质粒命名为pDATS13。以通用性质粒pUB110为模板，使用引物Q和R，得到包含卡那霉素耐性基因及其邻近区域的DNA片段。用EcoRI消化该DNA片段，之后以pDATS14为模板，使用引物S和T采用PCR法进行扩增，再与通过EcoRI消化而得到的DNA片段连接。使用所得连接物转化大肠杆菌HB101株。由所得的具有卡那霉素耐性的转化体制备质粒，将质粒命名为pDATSK。使用pDATSK，采用原生质体转化法转化具有pDATS14的DTS1451株，利用包含30μg/mL卡那霉素的再生培养基(组成：琥珀酸钠8％、琼脂1％、酪蛋白氨基酸0.5％、酵母提取物0.5％、磷酸二氢钾0.15％、磷酸氢二钾0.35％、葡萄糖0.5％、硫酸镁0.4％、牛血清白蛋白0.01％、甲硫氨酸0.001％、亮氨酸0.001％)进行筛选。将所得转化体铺在添加有卡那霉素的LB琼脂培养基和含有7.5μg/mL四环素的再生培养基中，将具有卡那霉素耐性且具有四环素感受性的株命名为DTS1451(pDATSK)。

[实施例5]DTS1451株中的纤维素酶的生产

以作为纤维素酶生产菌的Bacillus akibai 1139株(JCM 9157T)(参照J.Gen.Microbiol.1986，132，2329～2335.Fukumori等人、Int J SystEvol Microbiol.(2005)55：2309～15.Nogi，Y.等人，其内容作为公开而特别引用于此)的染色体为模板，使用引物U和V进行PCR反应，得到包含纤维素酶及其邻近区域的DNA片段。将该DNA片段和pDATS13用限制酶BamHI消化后，再将两者连接起来，得到质粒pDATSC1。使用该质粒转化DTS1451(pDATSK)，利用添加有四环素的再生培养基进行筛选。将所得转化体铺在添加有卡那霉素的LB琼脂培养基和含有7.5μg/mL四环素的再生培养基中，将显示纤维素酶活性、并且具有卡那霉素感受性且具有四环素耐性的株命名为DTS1451(pDATSC1)。将DTS1451(pDATSC1)在PPS培养基(聚胨S3％、鱼肉提取物0.5％、酵母提取物0.05％、磷酸二氢钾0.1％、麦芽糖4％、硫酸镁0.02％、氯化钙0.05％)中(不含抗生素)、在30℃下以130rpm的转速搅拌培养72小时，测定所得培养上清中所含的纤维素酶活性。其结果，可以确认每1L培养液生产约1g的纤维素酶。

[实施例6]DTS1451株中的质粒pDATSC1的保持

将带有pDATSC1的DTS1451株铺在添加7.5μg/mL四环素或未添加四环素的LB培养基(聚胨1％、酵母提取物0.5％、氯化钠1％)中，在30℃下以130rpm的转速搅拌培养24小时。取10μL该培养液，继续接种在另外的100mL LB培养基中。再培养24小时，取10μL该培养液，继续接种在另外的100mL LB培养基中，同样培养24小时。之后，从培养细胞中回收质粒。其结果，在带有pDATSC1的DTS1451株中，无论四环素添加与否，每一种培养液的质粒含量均未见变化。另一方面，在带有pDATSC1的、氨酰tRNA合成酶基因没有缺失的枯草杆菌ISW1214株突变株中，观察到：在添加四环素的情况下，每种培养液的质粒含量得以维持，但在未添加四环素的情况下，质粒含量极度下降。并且，在将pDATSC1所带有的纤维素酶基因插入pDA2的BamHI识别位点制成质粒pDAC1，进行同样的试验时，在带有pDAC1的枯草杆菌ISW1214株突变株中，观察到：在添加四环素的情况下，每种培养液的质粒含量得以维持，但在未添加的情况下，质粒含量极度下降。为了容易判断这些结果，图1显示出从用未添加抗生素的培养基培养的各细胞中回收的质粒溶液的电泳结果。将电泳操作后的琼脂糖凝胶浸在溴化乙锭中，进行DNA染色。图1的电泳泳道1为质粒上含有氨酰tRNA合成酶基因、染色体上的该氨酰tRNA合成酶基因缺失宿主的转化的组合；电泳泳道2为质粒上含有氨酰tRNA合成酶基因、染色体上的该氨酰tRNA合成酶基因未缺失宿主的转化的组合；电泳泳道3为质粒上不含氨酰tRNA合成酶基因、染色体上的该氨酰tRNA合成酶基因未缺失宿主的转化的组合。

[实施例7]DTS1451株中的琼脂分解酶的生产

以作为琼脂分解酶生产菌的Microbulbifer sp.A94株(参照BiosciBiotechnol Biochem.(2004)68：1073～81.Ohta，Y.等人，其内容作为公开而特别引用于此)的染色体为模板，使用引物W、X进行PCR反应，得到编码琼脂分解酶的DNA片段。另一方面，以上述pDATSC1为模板，使用引物Y、Z进行PCR反应，将所得DNA片段的5’末端磷酸化，之后与编码琼脂分解酶的DNA片段连接。使用所得连接物转化大肠杆菌HB101，在得到的转化体中，将由具有琼脂分解活性的转化体制备的质粒命名为pDATSA1。使用该质粒转化DTS1451(pDATSK)，利用含7.5μg/mL四环素的再生培养基进行筛选。将所得转化体铺在添加有卡那霉素的LB琼脂培养基和含有7.5μg/mL四环素的再生培养基中，将显示琼脂分解酶活性、并且显示卡那霉素感受性且显示四环素耐性的株命名为DTS1451(pDATSA1)。将DTS1451(pDATSA1)在PPS培养基中(不含抗生素)、在30℃下以130rpm在转速搅拌培养72小时，测定所得培养上清中所含的琼脂分解酶活性。其结果，确认每1L培养液生产约0.1g的琼脂分解酶。接下来，以pDATSA1为模板，使用引物A1(SEQ ID NO：79)、引物B1(SEQ IDNO：80)进行PCR反应，所得DNA片段用XhoI消化后，通过连接反应形成闭合环。通过该操作形成暂且排除了色氨酰tRNA合成酶基因的质粒。事先用限制酶EcoRI切断该质粒，另一方面，以pDATSC1为模板，使用引物C1(SEQ ID NO：81)与D1(SEQ ID NO：82)、引物E1(SEQ ID NO：83)与F1(SEQ ID NO：84)、引物G1(SEQ ID NO：85)与H1(SEQ ID NO：86)的各个组合，对包含色氨酰tRNA合成酶基因及其邻近区域的DNA片段进行PCR扩增。将各PCR扩增DNA片段用限制酶EcoRI消化，之后与预先用限制酶EcoRI消化的上述质粒连接。分别使用所得连接物转化大肠杆菌HB101，在所得转化体中，将由具有琼脂分解活性的转化体制备的质粒命名为pDATSA2、pDATSA3、pDATSA4。确认pDATSA2、pDATSA3、pDATSA4的核苷酸序列，结果色氨酰tRNA合成酶基因及其周边部分分别为SEQ IDNO：87、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89所示的序列。接着，使用上述质粒转化DTS1451(pDATSK)，利用含7.5μg/mL四环素的再生培养基进行筛选。将转化体铺在添加有卡那霉素的LB琼脂培养基和含有7.5μg/mL四环素的再生培养基中，筛选显示琼脂分解酶活性、并且显示卡那霉素感受性且显示四环素耐性的株。将所得DTS1451(pDATSA2)、DTS1451(pDATSA3)、DTS1451(pDATSA4)在PPS培养基中(不含抗生素)、在30℃下以130rpm的转速搅拌培养72小时，测定所得培养上清中所含的琼脂分解酶活性。其结果，确认到上述三种均为每1L培养液生产约0.1g的琼脂分解酶。

[表1]

引物	核苷酸序列	SEQ ID NO：
			A	GTGCCTCGAGGATTAAGCATTGGTAACTGTC	53

引物	核苷酸序列	SEQ ID NO：
			B	TATTCTCGAGACATTAACCTAGAAAGCACTAAGG	54
C	CTGCCTGTCTCGAGGCTGATAGCAGTTATC	55
			D	CAACTCGAGGCTGGTCGGACAAACACCTAG	56
E	TGCGAATTCCGGATGTAAGGAGAACGGCTC	57
			F	CTTGTCGACGTACATCAGAAATCGTACATTCG	58
G	GGTGGATCCCCTCGCCGGCAATAGTTACCC	59
			H	AATCTAGACTTTCGTTATACAAATTTTAACC	60
I	TGTAGGATCCAATATGGGCAGAAAACACATG	61
			J	ATATCTAGATTCCACTCTGTGTACCAGTAGC	62
K	GTTAGCTCCTTCGGTCCTCC	63
			L	GTAACTGGCTTCAGCAGAGC	64
M	CTGCCACATCGTCTAGGCTGC	65
			N	CAGGAGTCCAAATACCAGAG	66
O	CCCTTGCCTATACTGTGGAC	67
			P	GTTACAATAGCGACGGAGAG	68
Q	GTCTGAATTCGAGGAAGGTTTACACCG	69
			R	CTGCGAATTCATCTTCATGGTGAACC	70
S	CATTGTCATTAGTTGGCTGG	71
			T	GCAAGAATTCAAAATCCATCTTCATCGG	72
U	GTGACTGAGGATCCGCTAGTTCCAGATCG	73
			V	CTCTTGGATCCCTTCATCATTCTATCACAC	74
W	GCAGATTGGGATGGAGTTCCCGTAC	75

引物	核苷酸序列	SEQ ID NO：
			X	TTACAGCTTCACAAAGCGGATTTC	76
Y	TGCTGCAAGAGCTGTCGGAAATAAAG	77
			Z	AAGAAGAAAAGAAAGAAGCTAAAG	78

                                           。

产业实用性

本发明在培养通过转化细菌等宿主细胞而得到的转化体来制造各种蛋白或肽的领域中有用。

序列表

<110>独立行政法人海洋研究开发机构

<120>在细胞中稳定保持外来基因的方法

<130>A85139H

<160>89

 

<210>1

<211>2631

<212>DNA

<213>大肠杆菌

 

<220>

<223>alaS丙氨酸-tRNA合成酶

 

<400>1

atgagcaaga gcaccgctga gatccgtcag gcgtttctcg actttttcca tagtaaggga    60

catcaggtag ttgccagcag ctccctggta ccccataacg acccaacttt gttgtttacc    120

aacgccggga tgaaccagtt caaggatgtg ttccttgggc tcgacaagcg taattattcc    180

cgcgctacca cttcccaacg ctgcgtgcgt gcgggtggta aacacaacga cctggaaaac    240

gtcggttaca ccgcgcgtca ccataccttc ttcgaaatgc tgggcaactt cagcttcggc    300

gactatttca aacacgatgc cattcagttt gcatgggaac tgctgaccag cgaaaaatgg    360

tttgccctgc cgaaagagcg tctgtgggtt accgtctatg aaagcgacga cgaagcctac    420

gaaatctggg aaaaagaagt agggatcccg cgcgaacgta ttattcgcat cggcgataac    480

aaaggtgcgc catacgcatc tgacaacttc tggcagatgg gtgacactgg tccgtgcggc    540

ccgtgcaccg aaatcttcta cgatcacggc gaccacattt gggggggccc tccgggaagc    600

ccggaagaag acggcgaccg ctacattgag atctggaaca tcgtcttcat gcagttcaac    660

cgccaggccg atggcacgat ggaaccgctg ccgaagccgt ctgtagatac cggtatgggt    720

ctggagcgta ttgctgcggt gctgcaacac gttaactcta actatgacat cgacctgttc    780

cgcacgctga tccaggcggt agcgaaagtc actggcgcaa ccgatctgag caataaatcg    840

ctgcgcgtaa tcgctgacca cattcgttct tgtgcgttcc tgatcgcgga tggcgtaatg    900

ccgtccaatg aaaaccgtgg ttatgtactg cgtcgtatca ttcgtcgcgc agtgcgtcac    960

ggtaatatgc tcggcgcgaa agaaaccttc ttctacaaac tggttggtcc gctgatcgac    1020

gttatgggct ctgcgggtga agacctgaaa cgccagcagg cgcaggttga gcaggtgctg  1080

aagactgaag aagagcagtt tgctcgtact ctggagcgcg gtctggcgtt gctggatgaa  1140

gagctggcaa aactttctgg tgatacgctg gatggtgaaa ctgctttccg tctgtacgac  1200

acctatggct tcccggttga cctgacggct gatgtttgtc gtgagcgcaa catcaaagtt  1260

gacgaagctg gttttgaagc tgcaatggaa gagcagcgtc gtcgcgcgcg cgaagccagc  1320

ggctttggtg ccgattacaa cgcaatgatc cgtgttgaca gtgcatctga atttaaaggc  1380

tatgaccatc tggaactgaa cggcaaagtg actgcgctgt ttgttgatgg taaagcggtt  1440

gatgccatca atgcaggcca ggaagctgtg gtcgtgctgg atcaaacgcc attctatgcg  1500

gaatccggcg gtcaggttgg cgataaaggc gaactgaaag gcgctaactt ctcctttgcg  1560

gtggaagata cgcagaaata cggccaggcg attggtcaca tcggtaaact tgctgcgggt  1620

tctctgaaag tgggcgacgc ggtgcaggct gatgttgatg aggctcgtcg cgcccgtatt  1680

cgtctgaatc actccgcaac gcacctgatg cacgctgcgc tgcgccaggt tctgggtact  1740

catgtatcgc agaaaggttc actggttaac gacaaggtgc tgcgcttcga cttctcacac  1800

aacgaagcga tgaaaccaga agagattcgt gcggtcgaag acctggtgaa cacacagatt  1860

cgtcgcaatt tgccgatcga aaccaacatc atggatctcg aagcggcgaa agcgaaaggt  1920

gcgatggcgc tgttcggcga gaagtatgat gagcgcgtac gcgtgctgag catgggcgat  1980

ttctctaccg agttgtgtgg cggtactcac gccagccgca ctggtgatat tggtctgttc  2040

cgcatcatct ctgaatcggg tactgctgca ggcgttcgtc gtatcgaagc ggtaaccgga  2100

gaaggtgcta tcgccaccgt tcatgcagac agcgatcgct taagcgaagt cgcgcatctg  2160

ctgaaaggcg atagcaataa tctggctgat aaagtgcgct cagtactgga acgtacgcgt  2220

cagctggaaa aagagttaca acagcttaaa gaacaagctg ccgcacagga gagcgcaaat  2280

ctttccagta aggcaattga tgttaatggt gttaagctgt tggttagcga gcttagcggt  2340

gttgagccga aaatgttgcg taccatggtt gacgatttaa aaaatcagct ggggtcgaca  2400

attatcgtgc tggcaacggt agtcgaaggt aaggtttctc tgattgcagg cgtatctaag  2460

gacgtcacag atcgtgtgaa agcaggggaa ctgattggta tggtcgctca gcaggtgggc  2520

ggcaagggtg gtggacgtcc tgacatggcg caagccggtg gtacggatgc tgcggcctta  2580

cctgcagcgt tagccagtgt gaaaggctgg gtcagcgcga aattgcaata a           2631

 

<210>2

<211>1734

<212>DNA

<213>大肠杆菌

 

<220>

<223>argS精氨酸-tRNA合成酶

 

<400>2

gtgaatattc aggctcttct ctcagaaaaa gtccgtcagg ccatgattgc ggcaggcgcg    60

cctgcggatt gcgaaccgca ggttcgtcag tcagcaaaag ttcagttcgg cgactatcag    120

gctaacggca tgatggcagt tgctaaaaaa ctgggtatgg caccgcgaca attagcagag    180

caggtgctga ctcatctgga tcttaacggt atcgccagca aagttgagat cgccggtcca    240

ggctttatca acattttcct tgatccggca ttcctggctg aacatgttca gcaggcgctg    300

gcgtccgatc gtctcggtgt tgctacgcca gaaaaacaga ccattgtggt tgactactct    360

gcgccaaacg tggcgaaaga gatgcatgtc ggtcacctgc gctctaccat tattggtgac    420

gcagcagtgc gtactctgga gttcctcggt cacaaagtga ttcgcgcaaa ccacgtcggc    480

gactggggca ctcagttcgg tatgctgatt gcatggctgg aaaagcagca gcaggaaaac    540

gccggtgaaa tggagctggc tgaccttgaa ggtttctacc gcgatgcgaa aaagcattac    600

gatgaagatg aagagttcgc cgagcgcgca cgtaactacg tggtaaaact gcaaagcggt    660

gacgaatatt tccgcgagat gtggcgcaaa ctggtcgaca tcaccatgac gcagaaccag    720

atcacctacg atcgtctcaa cgtgacgctg acccgtgatg acgtgatggg cgaaagcctc    780

tacaacccga tgctgccagg aattgtggcg gatctcaaag ccaaaggtct ggcagtagaa    840

agcgaagggg cgaccgtcgt attccttgat gagtttaaaa acaaggaagg cgaaccgatg    900

ggcgtgatca ttcagaagaa agatggcggc tatctctaca ccaccactga tatcgcctgt    960

gcgaaatatc gttatgaaac actgcatgcc gatcgcgtgc tgtattacat cgactcccgt    1020

cagcatcaac acctgatgca ggcatgggcg atcgtccgta aagcaggcta tgtaccggaa    1080

tccgtaccgc tggaacacca catgttcggc atgatgctgg gtaaagacgg caaaccgttc    1140

aaaacccgcg cgggtggtac agtgaaactg gccgatctgc tggatgaagc cctggaacgt    1200

gcacgccgtc tggtggcaga aaagaacccg gatatgccag ccgacgagct ggaaaaactg    1260

gctaacgcgg ttggtattgg tgcggtgaaa tatgcggatc tctccaaaaa ccgcaccacg    1320

gactacatct tcgactggga caacatgctg gcgtttgagg gtaataccgc gccatacatg    1380

cagtatgcat acacgcgtgt attgtccgtg ttccgtaaag cagaaattga cgaagagcaa    1440

ctggctgcag ctccggttat catccgtgaa gatcgtgaag cgcaactggc agctcgcctg    1500

ctgcagtttg aagaaaccct caccgtggtt gcccgtgaag gcacgccgca tgtaatgtgt    1560

gcttacctgt acgatctggc cggtctgttc tctggcttct acgagcactg cccgatcctc    1620

agcgcagaaa acgaagaagt gcgtaacagc cgtctaaaac tggcacaact gacggcgaag    1680

acgctgaagc tgggtctgga tacgctgggt attgagactg tagagcgtat gtaa          1734

<210>3

<211>1401

<212>DNA

<213>大肠杆菌

 

<220>

<223>asnS天冬酰胺-tRNA合成酶

 

<400>3

atgagcgttg tgcctgtagc cgacgtactc cagggccgtg tagccgttga cagcgaagtc    60

accgtgcgcg gatgggtacg tacccgccga gattcaaaag ctggcatctc cttcctcgcc    120

gtttatgacg gttcctgctt tgatcctgta caggctgtca tcaataattc tctgcccaat    180

tacaatgaag acgtcctgcg tctgaccacc ggctgctcgg tcattgtgac gggtaaagtc    240

gtggcgtcgc cgggccaggg gcaacaattt gaaattcagg ccagcaaggt tgaagttgct    300

ggttgggttg aagatccaga cacttacccg atggcggcaa aacgccacag cattgagtat    360

ctgcgtgaag tcgctcacct gcgtccgcgc acaaacctga ttggtgccgt cgcgcgcgtt    420

cgccatacgc tggcgcaggc gctgcatcgc ttctttaacg agcagggatt cttctgggtt    480

tcaacgccac tgattaccgc atctgatacc gaaggtgcag gcgaaatgtt ccgcgtttct    540

acgctggatc tggaaaacct gccgcgtaac gatcagggca aagtggattt cgacaaagac    600

ttctttggta aagagtcttt cctgaccgta tctggccagt tgaacggcga aacctacgct    660

tgcgcattgt ccaaaattta taccttcggc ccgactttcc gtgctgaaaa ctccaacacc    720

agccgtcacc tggcggaatt ctggatgctg gagccggaag tggcgtttgc taacctgaac    780

gatattgcgg gtctggctga agccatgctg aaatatgtct tcaaagcggt tctcgaagaa    840

cgcgctgacg acatgaaatt cttcgctgaa cgcgtagata aagatgccgt ttcacgtctg    900

gaacgcttca ttgaagccga ttttgcgcag gtggattata ccgacgcagt gaccattctc    960

gaaaactgcg gcaggaagtt tgaaaacccg gtttactggg gagtcgatct ctcttctgag    1020

catgagcgtt atctggcgga agaacacttt aaagcaccgg tagtggttaa aaactatccg    1080

aaagatatta aagcgttcta tatgcgcctt aacgaagacg gtaaaaccgt tgcggctatg    1140

gacgttctgg ctccgggcat cggtgagatc attggtggct cccagcgtga agaacgtctg    1200

gacgtgctgg acgagcgtat gctggaaatg ggcctgaata aagaagatta ctggtggtat    1260

cgcgatctgc gtcgctacgg tactgttccg cattcaggtt tcggtcttgg ttttgaacgt    1320

ctgattgctt acgtaactgg cgtgcaaaac gtacgtgatg tgattccgtt cccacgtact    1380

ccgcgtaacg ccagcttcta a                                              1401

<210>4

<211>1773

<212>DNA

<213>大肠杆菌

 

<220>

<223>aspS天冬氨酸-tRNA合成酶

 

<400>4

atgcgtacag aatattgtgg acagctccgt ttgtcccacg tggggcagca ggtgactctg    60

tgtggttggg tcaaccgtcg tcgtgatctt ggtagcctga tcttcatcga tatgcgcgac    120

cgcgaaggta tcgtgcaggt atttttcgat ccggatcgtg cggacgcgtt aaagctggcc    180

tctgaactgc gtaatgagtt ctgcattcag gtcacgggca ccgtacgtgc gcgtgacgaa    240

aaaaatatta accgcgatat ggcgaccggc gaaatcgaag tgctggcgtc ctcgctgact    300

atcatcaacc gcgcagatgt tctgccgctt gactctaacc acgtcaacac cgaagaagcg    360

cgtctgaaat accgctacct cgacctgcgt cgtccggaaa tggctcagcg cctgaaaacc    420

cgcgctaaaa tcaccagcct ggtgcgccgt tttatggatg accacggctt cctcgacatc    480

gaaactccga tgctgaccaa agccacgccg gaaggcgcgc gtgactacct ggtgccttct    540

cgtgtgcaca aaggtaaatt ctacgcactg ccgcaatccc cgcagttgtt caaacagctg    600

ctgatgatgt ccggttttga ccgttactat cagatcgtta aatgcttccg tgacgaagac    660

ctgcgtgctg accgtcagcc tgaatttact cagatcgatg tggaaacttc tttcatgacc    720

gcgccgcaag tgcgtgaagt gatggaagcg ctggtgcgtc atctgtggct ggaagtgaag    780

ggtgtggatc tgggcgattt cccggtaatg acctttgcgg aagcagaacg ccgttatggt    840

tctgataaac cggatctgcg taacccgatg gaactgactg acgttgctga tctgctgaaa    900

tctgttgagt ttgctgtatt tgcaggtccg gcgaacgatc cgaaaggtcg cgtagcggct    960

ctgcgcgttc cgggcggcgc atcgctgacc cgtaagcaga tcgacgaata cggtaacttc    1020

gttaaaatct acggcgcgaa aggtctggct tacatcaaag ttaacgaacg cgcgaaaggt    1080

ctggaaggta tcaacagccc ggtagcgaag ttccttaatg cagaaatcat cgaagacatc    1140

ctggatcgta ctgccgcgca agatggcgat atgattttct tcggtgccga caacaagaaa    1200

attgttgccg acgcgatggg tgcactgcgc ctgaaagtgg gtaaagacct tggtctgacc    1260

gacgaaagca aatgggcacc gctgtgggtt atcgacttcc cgatgtttga agacgacggt    1320

gaaggcggcc tgacggcaat gcaccatccg ttcacctcac cgaaagatat gacggctgca    1380

gaactgaaag ctgcaccgga aaatgcggtg gcgaacgctt acgatatggt catcaatggt    1440

tacgaagtgg gcggtggttc agtacgtatc cataatggtg atatgcagca gacggtgttt    1500

ggtattctgg gtatcaacga agaggaacag cgcgagaaat tcggcttcct gctcgacgct  1560

ctgaaatacg gtactccgcc gcacgcaggt ctggcattcg gtcttgaccg tctgaccatg  1620

ctgctgaccg gcaccgacaa tatccgtgac gttatcgcct tcccgaaaac cacggcggca  1680

gcgtgtctga tgactgaagc accgagcttt gctaacccga ctgcactggc tgagctgagc  1740

attcaggttg tgaagaaggc tgagaataac tga                               1773

 

<210>5

<211>1386

<212>DNA

<213>大肠杆菌

 

<220>

<223>cysS半胱氨酸-tRNA合成酶

 

<400>5

atgctaaaaa tcttcaatac tctgacacgc caaaaagagg aatttaagcc tattcacgcc    60

ggggaagtcg gcatgtacgt gtgtggaatc accgtttacg atctctgtca tatcggtcac    120

gggcgtacct ttgttgcttt tgacgtggtt gcgcgctatc tgcgtttcct cggctataaa    180

ctgaagtatg tgcgcaacat taccgatatc gacgacaaaa tcatcaaacg cgccaatgaa    240

aatggcgaaa gctttgtggc gatggtggat cgcatgatcg ccgaaatgca caaagatttt    300

gatgctttga acattctgcg cccggatatg gagccgcgcg cgacgcacca tatcgcagaa    360

attattgaac tcactgaaca actgatcgcc aaaggtcacg cttatgtggc ggacaacggc    420

gacgtgatgt tcgacgtccc gaccgatcca acttatggcg tgctgtcgcg tcaggatctc    480

gaccagctgc aggcaggcgc gcgcgttgac gtggtcgacg acaaacgcaa cccaatggac    540

ttcgttctgt ggaagatgtc gaaagagggc gaaccgagct ggccgtctcc gtggggcgcg    600

ggtcgtcctg gctggcacat tgaatgttcg gcaatgaact gcaagcagct gggtaaccac    660

tttgatatcc acggcggcgg ttcagacctg atgttcccgc accacgaaaa cgaaatcgcg    720

cagtccacct gtgcccatga tggtcagtat gtgaactact ggatgcactc ggggatggtg    780

atggttgacc gcgagaagat gtccaaatcg ctgggtaact tctttaccgt gcgcgatgtg    840

ctgaaatact acgacgcgga aaccgtgcgt tacttcctga tgtcgggcca ctatcgcagc    900

cagttgaact acagcgaaga gaacctgaag caggcgcgtg cggcgctgga gcgtctctac    960

actgcgctgc gcggcacaga taaaaccgtt gcgcctgccg gtggcgaagc gtttgaagcg    1020

cgctttattg aagcgatgga cgacgatttc aacaccccgg aagcctattc cgtactgttt    1080

gatatggcgc gtgaagtaaa ccgtctgaaa gcagaagata tggcagcggc gaatgcaatg    1140

gcatctcacc tgcgtaaact ttccgctgta ttgggcctgc tggagcaaga accggaagcg  1200

ttcctgcaaa gcggcgcgca ggcagacgac agcgaagtgg ctgagattga agcgttaatt  1260

caacagcgtc tggatgcccg taaagcgaaa gactgggcgg cggcggatgc ggcgcgtgat  1320

cgtcttaacg agatggggat cgtgctggaa gatggcccgc aagggaccac ctggcgtcgt  1380

aagtaa                                                             1386

 

<210>6

<211>1665

<212>DNA

<213>大肠杆菌

 

<220>

<223>glnS谷氨酰胺-tRNA合成酶

 

<400>6

atgagtgagg cagaagcccg cccgactaac tttatccgtc agatcatcga tgaagatctg    60

gccagtggta agcacaccac agtacacacc cgtttcccgc cggagccgaa tggctatctg    120

catattggcc atgcgaaatc tatctgcctg aacttcggga tcgcccagga ctataaaggc    180

cagtgcaacc tgcgtttcga cgacactaac ccggtaaaag aagatatcga gtatgttgag    240

tcgatcaaaa acgacgtaga gtggttaggt tttcactggt ctggtaacgt ccgttactcc    300

tccgattatt ttgatcagct ccacgcctat gcgatcgaac tgatcaataa aggcctggcg    360

tacgttgatg aactgacgcc ggaacagatc cgcgaatacc gcggcaccct gacgcaaccg    420

ggtaaaaaca gcccgtaccg cgaccgcagc gttgaagaga acctggcgct gttcgaaaaa    480

atgcgtgccg gtggttttga agaaggtaaa gcctgcctgc gtgcgaaaat cgacatggct    540

tcaccgttta tcgtgatgcg cgatccggtg ctgtaccgta ttaaatttgc tgaacaccac    600

cagactggca acaagtggtg catctacccg atgtacgact tcacccactg catcagcgat    660

gccctggaag gtattacgca ctctctgtgt acgcttgagt tccaggacaa ccgtcgtctg    720

tacgactggg tactggacaa catcacgatt cctgttcacc cgcgccagta tgagttctcg    780

cgcctgaatc tggaatacac cgtgatgtcc aagcgtaagt tgaacctgct ggtgaccgac    840

aagcacgttg aaggctggga tgacccgcgt atgccgacca tttccggtct gcgtcgtcgt    900

ggttacactg cggcttctat tcgtgagttc tgcaaacgca tcggcgtgac caagcaggac    960

aacaccattg agatggcgtc gctggaatcc tgcatccgtg aagatctcaa cgaaaatgcg    1020

ccgcgcgcaa tggcggttat cgatccggtg aaactggtta tcgaaaacta tcagggcgaa    1080

ggcgaaatgg ttaccatgcc gaaccatccg aacaaaccgg aaatgggcag ccgtcaggtg    1140

ccgtttagcg gtgagatttg gattgatcgc gccgatttcc gcgaagaagc taacaagcag    1200

tacaaacgtc tggtgctggg taaagaagtg cgtctgcgta atgcttatgt gattaaggca    1260

gaacgcgtcg agaaagatgc cgaaggtaat atcaccacca tcttctgtac ttatgacgcc    1320

gataccttaa gcaaagatcc ggcagatggt cgtaaagtca aaggtgttat tcactgggtg    1380

agcgcggcac atgcgctgcc ggttgaaatc cgtttgtatg accgtctgtt cagcgtgcct    1440

aacccaggtg ctgcggatga tttcctgtcg gtgattaacc cggaatcgct ggtgatcaaa    1500

cagggctttg ctgaaccgtc gctgaaagat gcggttgcgg gtaaagcatt ccagtttgag    1560

cgtgaaggtt acttctgcct cgatagccgc cattctacgg cggaaaaacc ggtatttaac    1620

cgcaccgttg ggctgcgtga tacctgggcg aaagtaggcg agtaa                    1665

 

<210>7

<211>1665

<212>DNA

<213>大肠杆菌

 

<220>

<223>gltX谷氨酸-tRNA合成酶

 

<400>7

atgagtgagg cagaagcccg cccgactaac tttatccgtc agatcatcga tgaagatctg    60

gccagtggta agcacaccac agtacacacc cgtttcccgc cggagccgaa tggctatctg    120

catattggcc atgcgaaatc tatctgcctg aacttcggga tcgcccagga ctataaaggc    180

cagtgcaacc tgcgtttcga cgacactaac ccggtaaaag aagatatcga gtatgttgag    240

tcgatcaaaa acgacgtaga gtggttaggt tttcactggt ctggtaacgt ccgttactcc    300

tccgattatt ttgatcagct ccacgcctat gcgatcgaac tgatcaataa aggcctggcg    360

tacgttgatg aactgacgcc ggaacagatc cgcgaatacc gcggcaccct gacgcaaccg    420

ggtaaaaaca gcccgtaccg cgaccgcagc gttgaagaga acctggcgct gttcgaaaaa    480

atgcgtgccg gtggttttga agaaggtaaa gcctgcctgc gtgcgaaaat cgacatggct    540

tcaccgttta tcgtgatgcg cgatccggtg ctgtaccgta ttaaatttgc tgaacaccac    600

cagactggca acaagtggtg catctacccg atgtacgact tcacccactg catcagcgat    660

gccctggaag gtattacgca ctctctgtgt acgcttgagt tccaggacaa ccgtcgtctg    720

tacgactggg tactggacaa catcacgatt cctgttcacc cgcgccagta tgagttctcg    780

cgcctgaatc tggaatacac cgtgatgtcc aagcgtaagt tgaacctgct ggtgaccgac    840

aagcacgttg aaggctggga tgacccgcgt atgccgacca tttccggtct gcgtcgtcgt    900

ggttacactg cggcttctat tcgtgagttc tgcaaacgca tcggcgtgac caagcaggac  960

aacaccattg agatggcgtc gctggaatcc tgcatccgtg aagatctcaa cgaaaatgcg  1020

ccgcgcgcaa tggcggttat cgatccggtg aaactggtta tcgaaaacta tcagggcgaa  1080

ggcgaaatgg ttaccatgcc gaaccatccg aacaaaccgg aaatgggcag ccgtcaggtg  1140

ccgtttagcg gtgagatttg gattgatcgc gccgatttcc gcgaagaagc taacaagcag  1200

tacaaacgtc tggtgctggg taaagaagtg cgtctgcgta atgcttatgt gattaaggca  1260

gaacgcgtcg agaaagatgc cgaaggtaat atcaccacca tcttctgtac ttatgacgcc  1320

gataccttaa gcaaagatcc ggcagatggt cgtaaagtca aaggtgttat tcactgggtg  1380

agcgcggcac atgcgctgcc ggttgaaatc cgtttgtatg accgtctgtt cagcgtgcct  1440

aacccaggtg ctgcggatga tttcctgtcg gtgattaacc cggaatcgct ggtgatcaaa  1500

cagggctttg ctgaaccgtc gctgaaagat gcggttgcgg gtaaagcatt ccagtttgag  1560

cgtgaaggtt acttctgcct cgatagccgc cattctacgg cggaaaaacc ggtatttaac  1620

cgcaccgttg ggctgcgtga tacctgggcg aaagtaggcg agtaa                  1665

 

<210>8

<211>912

<212>DNA

<213>大肠杆菌

 

<220>

<223>glyQ甘氨酸-tRNA合成酶，α-亚单位

 

<400>8

atgcaaaagt ttgataccag gaccttccag ggcttgatcc tgaccttaca ggattactgg    60

gctcgccagg gctgcaccat tgttcaacca ttggacatgg aagtcggcgc gggaacctct    120

cacccaatga cctgtctgcg cgagctgggg ccagaaccga tggcggctgc ttatgttcag    180

ccttctcgtc gcccgaccga tggtcgctac ggcgaaaacc ccaaccgttt acagcactac    240

tatcagttcc aggtggtcat taagccatcg ccggacaata ttcaggagct gtacctcggt    300

tctctgaaag agctgggcat ggacccgact attcacgaca tccgtttcgt ggaagataac    360

tgggaaaacc cgacgctggg tgcctgggga ctgggctggg aagtgtggct gaacggcatg    420

gaagtgacgc agttcactta cttccagcag gttggtggtc tggagtgtaa accggttacc    480

ggcgagatca cctacggtct ggaacgtctg gccatgtaca ttcagggcgt agacagcgtt    540

tacgacctgg tctggagcga cggcccgctg ggtaaaacca cctacggcga cgtgttccat    600

cagaacgaag tggagcagtc cacttacaac ttcgaatacg cggatgtgga cttcctgttc    660

acctgcttcg agcagtacga gaaagaagcg cagcagctgc tggcgctgga aaatccgctg    720

ccgctgccag cctacgagcg tattctgaaa gccgcccaca gcttcaacct gctggatgcg    780

cgtaaagcca tctccgtcac cgagcgtcag cgctacattc tgcgcattcg caccctgacc    840

aaagcagtgg cagaagcata ctacgcttcc cgtgaagccc tcggcttccc gatgtgcaac    900

aaagataagt aa                                                        912

 

<210>9

<211>2070

<212>DNA

<213>大肠杆菌

 

<220>

<223>glyS甘氨酸-tRNA合成酶，β-亚单位

 

<400>9

atgtctgaga aaacttttct ggtggaaatc ggcactgaag agctgccacc aaaagcactg    60

cgcagcctgg ctgagtcctt tgctgcgaac tttactgcgg agctggataa cgctggcctc    120

gcacacggca ccgttcaatg gtttgctgct ccgcgtcgtc tggcgctgaa agtagctaac    180

ctggcggaag cgcaaccgga tcgtgaaatc gaaaaacgcg gcccggcgat tgcccaggcg    240

ttcgacgctg aaggcaaacc gagcaaagcg gcagaaggtt gggcgcgtgg ttgcggtatt    300

accgttgacc aggctgagcg tctgactacc gataaaggcg aatggctgct gtatcgcgcc    360

catgtgaagg gcgaaagcac cgaagcactg ctgccgaata tggttgcgac ttctctggcg    420

aaactgccga tcccgaaact gatgcgttgg ggcgcaagcg acgtgcactt cgtgcgtccg    480

gtgcacaccg tgaccctgct gctgggcgac aaagtcattc cggcaaccat tctgggcatt    540

cagtccgatc gcgtgattcg cggccaccgc tttatgggcg agccggaatt caccatcgat    600

aacgccgatc agtatccgga aattctgcgt gagcgtggga aagtcatcgc cgattacgaa    660

gaacgtaagg cgaagattaa agccgatgcc gaagaagcag cgcgtaagat tggcggtaac    720

gctgacttaa gcgaaagcct gctggaagaa gtggcttcgc tggtggagtg gccggtcgtt    780

ctgaccgcaa aattcgaaga gaaattcctc gcggtgccgg ctgaagcgct ggtttacacc    840

atgaaaggtg accagaaata cttcccggtg tatgcgaacg acggcaaact gctgccgaac    900

tttatcttcg ttgccaacat cgaatcgaaa gatccgcagc agattatctc cggtaacgag    960

aaagtcgttc gtccgcgtct ggcggatgcc gagttcttct tcaacaccga ccgtaaaaaa    1020

cgtcttgaag ataacctgcc gcgcctgcaa accgtgttgt tccagcaaca gttggggacg    1080

ctgcgcgaca aaactgaccg catccaggcg ctggctggct ggattgctga acagattggc    1140

gctgacgtta accacgctac ccgtgcgggt ctgctgtcta agtgcgacct gatgaccaac  1200

atggtcttcg agttcaccga cacccagggc gttatgggga tgcactatgc gcgtcacgat  1260

ggcgaagcgg aagatgtcgc ggtggcgctg aatgagcagt atcagccgcg ttttgctggt  1320

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ctggcgggta tcttcggtat cggtcagcat ccgaaaggcg acaaagaccc gtttgcgctg  1440

cgtcgtgccg cgcttggcgt gctgcgaatt atcgttgaga agaacctcaa ccttgatctg  1500

caaacgctga ccgaagaagc ggtgcgtctg tatggcgata agctgactaa tgccaacgta  1560

gttgatgatg ttatcgactt tatgctcggt cgcttccgcg cctggtatca ggacgaaggt  1620

tataccgttg acaccatcca ggcggtactg gcgcgtcgtc cgactcgtcc ggctgatttc  1680

gatgcccgta tgaaagcggt atcgcatttc cgtaccctgg atgcagctgc tgcactggcg  1740

gcggcgaaca aacgtgtatc taacattctg gcgaaatctg acgaagtgct gagcgaccgc  1800

gtgaatgcct ctaccctgaa agagccggaa gaaattaaac tggcgatgca ggttgtggtg  1860

ctacgtgaca agctggagcc gtactttacg gaaggtcgtt accaggatgc gctggtcgaa  1920

ctggctgagc tgcgtgaacc ggttgatgct ttcttcgata aagtgatggt catggttgat  1980

gacaaagaat tgcgtatcaa ccgtctgacc atgctggaga aactgcgcga actgttcctg  2040

cgcgttgcgg atatttcgct gttgcaataa                                   2070

 

<210>10

<211>1275

<212>DNA

<213>大肠杆菌

 

<220>

<223>hisS组氨酸-tRNA合成酶

 

<400>10

gtggcaaaaa acattcaagc cattcgcggc atgaacgatt acctgcctgg cgaaacggcc    60

atctggcagc gcattgaagg cacactgaaa aacgtgctcg gcagctacgg ttacagtgaa    120

atccgcttgc cgattgtaga gcagaccccg ctattcaaac gtgcgattgg tgaagtcacc    180

gacgtggttg aaaaagagat gtacaccttt gaggatcgca atggcgacag cctgactctg    240

cgccctgaag ggacggcggg ctgtgtacgc gccggcatcg agcatggtct tctgtacaat    300

caggaacagc gtctgtggta tatcgggccg atgttccgtc acgagcgtcc gcagaaaggg    360

cgttatcgtc agttccatca gttgggctgc gaagttttcg gtctgcaagg tccggatatc    420

gacgctgaac tgattatgct cactgcccgc tggtggcgcg cgctgggtat ttccgagcac    480

gtaactcttg agctgaactc tatcggttcg ctggaagcac gcgccaatta ccgcgatgcg    540

ctggtggcat tccttgagca gcataaagaa aagctggacg aagactgcaa acgccgcatg    600

tacactaacc cgctgcgcgt gctggattca aaaaatccgg aagtgcaggc gcttctcaac    660

gacgctccgg cattaggtga ctatctggac gaggaatctc gtgagcattt tgccggtctg    720

tgcaaactgc tggagagcgc ggggatcgct tacaccgtaa accagcgtct ggtgcgtggt    780

ctggattact acaaccgtac cgttttcgag tgggtgacta acagtctcgg ctcccagggc    840

accgtgtgtg caggcggtcg ttatgacggt cttgtggaac aactgggcgg tcgtgcaaca    900

ccggctgtcg gttttgctat gggcctcgaa cgtcttgtat tgttagtaca ggccgttaat    960

ccggaattta aagccgatcc tgttgtcgat atatacctgg tggcttcagg tgctgataca    1020

caatctgcgg ctatggcatt agctgagcgt ctgcgtgatg aattaccggg cgtgaaattg    1080

atgaccaacc acggcggcgg caactttaag aaacagtttg cccgtgctga taaatggggt    1140

gcccgcgttg ctgtggtgct gggtgagtct gaagtggcta acggcacagc agtagtgaag    1200

gatttgcgct ctggtgagca aacggcagtt gcgcaggata gcgtagccgc gcatttgcgc    1260

acgttactgg gttaa                                                     1275

 

<210>11

<211>2817

<212>DNA

<213>大肠杆菌

 

<220>

<223>ileS异亮氨酸-tRNA合成酶

 

<400>11

atgagtgact ataaatcaac cctgaatttg ccggaaacag ggttcccgat gcgtggcgat    60

ctcgccaagc gcgaacccgg aatgctggcg cgttggactg atgatgatct gtacggcatc    120

atccgtgcgg ctaaaaaagg caaaaaaacc ttcattctgc atgatggccc tccttatgcg    180

aatggcagca ttcatattgg tcactcggtt aacaagattc tgaaagacat tatcgtgaag    240

tccaaagggc tttccggtta tgactcgccg tatgtgcctg gctgggactg ccacggtctg    300

ccgatcgagc tgaaagtcga gcaagaatac ggtaagccgg gtgagaaatt caccgccgcc    360

gagttccgcg ccaagtgccg cgaatacgcg gcgacccagg ttgacggtca acgcaaagac    420

tttatccgtc tgggcgtgct gggcgactgg tcgcacccgt acctgaccat ggacttcaaa    480

actgaagcca acatcatccg cgcgctgggc aaaatcatcg gcaacggtca cctgcacaaa    540

ggcgcgaagc cagttcactg gtgcgttgac tgccgttctg cgctggcgga agcggaagtt    600

gagtattacg acaaaacttc tccgtccatc gacgttgctt tccaggcagt cgatcaggat    660

gcactgaaag caaaatttgc cgtaagcaac gttaacggcc caatctcgct ggtaatctgg    720

accaccacgc cgtggactct gcctgccaac cgcgcaatct ctattgcacc agatttcgac    780

tatgcgctgg tgcagatcga cggtcaggcc gtgattctgg cgaaagatct ggttgaaagc    840

gtaatgcagc gtatcggcgt gaccgattac accattctcg gcacggtaaa aggtgcggag    900

cttgagctgc tgcgctttac ccatccgttt atgggcttcg acgttccggc aatcctcggc    960

gatcacgtta ccctggatgc cggtaccggt gccgttcaca ccgcgcctgg ccacggcccg    1020

gacgactatg tgatcggtca gaaatacggc ctggaaaccg ctaacccggt tggcccggac    1080

ggcacttatc tgccgggcac ttatccgacg ctggatggcg tgaacgtctt caaagcgaac    1140

gacatcgtcg ttgcgctgct gcaggaaaaa ggcgcgctgc tgcacgttga gaaaatgcag    1200

cacagctatc cgtgctgctg gcgtcacaaa acgccgatca tcttccgcgc gacgccgcag    1260

tggttcgtca gcatggatca gaaaggtctg cgtgcgcagt cactgaaaga gatcaaaggc    1320

gtgcagtgga tcccggactg gggccaggcg cgtatcgagt cgatggttgc taaccgtcct    1380

gactggtgta tctcccgtca gcgcacctgg ggtgtaccga tgtcactgtt cgtgcacaaa    1440

gacacggaag agctgcatcc gcgtaccctt gaactgatgg aagaagtggc aaaacgcgtt    1500

gaagtcgatg gcatccaggc gtggtgggat ctcgatgcga aagagatcct cggcgacgaa    1560

gctgatcagt acgtgaaagt gccggacaca ttggatgtat ggtttgactc cggatctacc    1620

cactcttctg ttgttgacgt gcgtccggaa tttgccggtc acgcagcgga catgtatctg    1680

gaaggttctg accaacaccg cggctggttc atgtcttccc taatgatctc caccgcgatg    1740

aagggtaaag cgccgtatcg tcaggtactg acccacggct ttaccgtgga tggtcagggc    1800

cgcaagatgt ctaaatccat cggcaatacc gtttcgccgc aggatgtgat gaacaaactg    1860

ggcgcggata ttctgcgtct gtgggtggca tcaaccgact acaccggtga aatggccgtt    1920

tctgacgaga tcctgaaacg tgctgccgat agctatcgtc gtatccgtaa caccgcgcgc    1980

ttcctgctgg caaacctgaa cggttttgat ccagcaaaag atatggtgaa accggaagag    2040

atggtggtac tggatcgctg ggccgtaggt tgtgcgaaag cggcacagga agacatcctc    2100

aaggcgtacg aagcatacga tttccacgaa gtggtacagc gtctgatgcg cttctgctcc    2160

gttgagatgg gttccttcta cctcgacatc atcaaagacc gtcagtacac cgccaaagcg    2220

gacagtgtgg cgcgtcgtag ctgccagact gcgctatatc acatcgcaga agcgctggtg    2280

cgctggatgg caccaatcct ctccttcacc gctgatgaag tgtggggcta cctgccgggc    2340

gaacgtgaaa aatacgtctt caccggtgag tggtacgaag gcctgtttgg cctggcagac    2400

agtgaagcga tgaacgatgc gttctgggac gagctgttga aagtgcgtgg cgaagtgaac    2460

aaagtcattg agcaagcgcg tgccgacaag aaagtgggtg gctcgctgga agcggcagta    2520

accttgtatg cagaaccgga actgtcggcg aaactgaccg cgctgggcga tgaattacga    2580

tttgtcctgt tgacctccgg cgctaccgtt gcagactata acgacgcacc tgctgatgct  2640

cagcagagcg aagtactcaa agggctgaaa gtcgcgttga gtaaagccga aggtgagaag  2700

tgcccacgct gctggcacta cacccaggat gtcggcaagg tggcggaaca cgcagaaatc  2760

tgcggccgct gtgtcagcaa cgtcgccggt gacggtgaaa aacgtaagtt tgcctga     2817

 

<210>12

<211>2583

<212>DNA

<213>大肠杆菌

 

<220>

<223>leuS亮氨酸-tRNA合成酶

 

<400>12

atgcaagagc aataccgccc ggaagagata gaatccaaag tacagcttca ttgggatgag    60

aagcgcacat ttgaagtaac cgaagacgag agcaaagaga agtattactg cctgtctatg    120

cttccctatc cttctggtcg actacacatg ggccacgtac gtaactacac catcggtgac    180

gtgatcgccc gctaccagcg tatgctgggc aaaaacgtcc tgcagccgat cggctgggac    240

gcgtttggtc tgcctgcgga aggcgcggcg gtgaaaaaca acaccgctcc ggcaccgtgg    300

acgtacgaca acatcgcgta tatgaaaaac cagctcaaaa tgctgggctt tggttatgac    360

tggagccgcg agctggcaac ctgtacgccg gaatactacc gttgggaaca gaaattcttc    420

accgagctgt ataaaaaagg cctggtatat aagaagactt ctgcggtcaa ctggtgcccg    480

aacgaccaga ccgtactggc gaacgaacaa gttatcgacg gctgctgctg gcgctgcgat    540

accaaagttg aacgtaaaga gatcccgcag tggtttatca aaatcactgc ttacgctgac    600

gagctgctca acgatctgga taaactggat cactggccag acaccgttaa aaccatgcag    660

cgtaactgga tcggtcgttc cgaaggcgtg gagatcacct tcaacgttaa cgactatgac    720

aacacgctga ccgtttacac tacccgcccg gacaccttta tgggttgtac ctacctggcg    780

gtagctgcgg gtcatccgct ggcgcagaaa gcggcggaaa ataatcctga actggcggcc    840

tttattgacg aatgccgtaa caccaaagtt gccgaagctg aaatggcgac gatggagaaa    900

aaaggcgtcg atactggctt taaagcggtt cacccattaa cgggcgaaga aattcccgtt    960

tgggcagcaa acttcgtatt gatggagtac ggcacgggcg cagttatggc ggtaccgggg    1020

cacgaccagc gcgactacga gtttgcctct aaatacggcc tgaacatcaa accggttatc    1080

ctggcagctg acggctctga gccagatctt tctcagcaag ccctgactga aaaaggcgtg    1140

ctgttcaact ctggcgagtt caacggtctt gaccatgaag cggccttcaa cgccatcgcc    1200

gataaactga ctgcgatggg cgttggcgag cgtaaagtga actaccgcct gcgcgactgg  1260

ggtgtttccc gtcagcgtta ctggggcgcg ccgattccga tggtgacgct ggaagacggt  1320

accgtaatgc cgaccccgga cgaccagctg ccggtgatcc tgccggaaga tgtggtaatg  1380

gacggcatta ccagcccgat taaagcagat ccggagtggg cgaaaactac cgttaacggt  1440

atgccagcac tgcgtgaaac cgacactttc gacaccttta tggagtcctc ctggtactat  1500

gcgcgctaca cttgcccgca gtacaaagaa ggtatgctgg attccgaagc ggctaactac  1560

tggctgccgg tggatatcta cattggtggt attgaacacg ccattatgca cctgctctac  1620

ttccgcttct tccacaaact gatgcgtgat gcaggcatgg tgaactctga cgaaccagcg  1680

aaacagttgc tgtgtcaggg tatggtgctg gcagatgcct tctactatgt tggcgaaaac  1740

ggcgaacgta actgggtttc cccggttgat gctatcgttg aacgtgacga gaaaggccgt  1800

atcgtgaaag cgaaagatgc ggcaggccat gaactggttt ataccggcat gagcaaaatg  1860

tccaagtcga agaacaacgg tatcgacccg caggtgatgg ttgaacgtta cggcgcggac  1920

accgttcgtc tgtttatgat gtttgcttct ccggctgata tgactctcga atggcaggaa  1980

tccggtgtgg aaggggctaa ccgcttcctg aaacgtgtct ggaaactggt ttacgagcac  2040

acagcaaaag gtgatgttgc ggcactgaac gttgatgcgc tgactgaaaa tcagaaagcg  2100

ctgcgtcgcg atgtgcataa aacgatcgct aaagtgaccg atgatatcgg ccgtcgtcag  2160

accttcaaca ccgcaattgc ggcgattatg gagctgatga acaaactggc gaaagcacca  2220

accgatggcg agcaggatcg cgctctgatg caggaagcac tgctggccgt tgtccgtatg  2280

cttaacccgt tcaccccgca catctgcttc acgctgtggc aggaactgaa aggcgaaggc  2340

gatatcgaca acgcgccgtg gccggttgct gacgaaaaag cgatggtgga agactccacg  2400

ctggtcgtgg tgcaggttaa cggtaaagtc cgtgccaaaa tcaccgttcc ggtggacgca  2460

acggaagaac aggttcgcga acgtgctggc caggaacatc tggtagcaaa atatcttgat  2520

ggcgttactg tacgtaaagt gatttacgta ccaggtaaac tcctcaatct ggtcgttggc  2580

taa                                                                2583

 

<210>13

<211>1518

<212>DNA

<213>大肠杆菌

 

<220>

<223>lysS赖氨酸-tRNA合成酶，组成型

 

<400>13

atgtctgaac aacacgcaca gggcgctgac gcggtagtcg atcttaacaa tgaactgaaa    60

acgcgtcgtg agaagctggc gaacctgcgc gagcagggga ttgccttccc gaacgatttc    120

cgtcgcgatc atacctctga ccaattgcac gcagaattcg acggcaaaga gaacgaagaa    180

ctggaagcgc tgaacatcga agtcgccgtt gctggccgca tgatgacccg tcgtattatg    240

ggtaaagcgt ctttcgttac cctgcaggac gttggcggtc gcattcagct gtacgttgcc    300

cgtgacgatc tcccggaagg cgtttataac gagcagttca aaaaatggga cctcggcgac    360

atcctcggcg cgaaaggtaa gctgttcaaa accaaaaccg gcgaactgtc tatccactgc    420

accgagttgc gtctgctgac caaagcactg cgtccgctgc cggataaatt ccacggcttg    480

caggatcagg aagcgcgcta tcgtcagcgt tatctcgatc tcatctccaa cgatgaatcc    540

cgcaacacct ttaaagtgcg ctcgcagatc ctctctggta ttcgccagtt catggtgaac    600

cgcggcttta tggaagttga aacgccgatg atgcaggtga tccctggcgg tgccgctgcg    660

cgtccgttta tcacccacca taacgcgctg gatctcgaca tgtacctgcg tatcgcgccg    720

gaactgtacc tcaagcgtct ggtggttggt ggcttcgagc gtgtattcga aatcaaccgt    780

aacttccgta acgaaggtat ttccgtacgt cataacccag agttcaccat gatggaactc    840

tacatggctt acgcagatta caaagatctg atcgagctga ccgaatcgct gttccgtact    900

ctggcacagg atattctcgg taagacggaa gtgacctacg gcgacgtgac gctggacttc    960

ggtaaaccgt tcgaaaaact gaccatgcgt gaagcgatca agaaatatcg cccggaaacc    1020

gacatggcgg atctggacaa cttcgactct gcgaaagcaa ttgctgaatc tatcggcatc    1080

cacgttgaga agagctgggg tctgggccgt atcgttaccg agatcttcga agaagtggca    1140

gaagcacatc tgattcagcc gaccttcatt actgaatatc cggcagaagt ttctccgctg    1200

gcgcgtcgta acgacgttaa cccggaaatc acagaccgct ttgagttctt cattggtggt    1260

cgtgaaatcg gtaacggctt tagcgagctg aatgacgcgg aagatcaggc gcaacgcttc    1320

ctggatcagg ttgccgcgaa agacgcaggt gacgacgaag cgatgttcta cgatgaagat    1380

tacgtcaccg cactggaaca tggcttaccg ccgacagcag gtctgggaat tggtatcgac    1440

cgtatggtaa tgctgttcac caacagccat accatccgcg acgttattct gttcccggcg    1500

atgcgtccgg taaaataa                                                  1518

 

<210>14

<211>1518

<212>DNA

<213>大肠杆菌

 

<220>

<223>lysU赖氨酸-tRNA合成酶，热诱导型

<400>14

atgtctgaac aagaaacacg gggagccaat gaggctattg attttaacga tgaactgaga    60

aatcgccgcg aaaaactggc ggcactacgt cagcaaggtg tggcgtttcc caatgatttt    120

cgccgcgacc atacctctga ccagttgcac gaagagtttg atgcgaagga taaccaggaa    180

ctggaatcct taaacattga agtctcggtt gctggccgaa tgatgacccg tcgtatcatg    240

gggaaagcct cctttgtaac gttgcaggat gtcggtggcc gtattcaact gtacgttgca    300

agagatagcc tgccagaagg tgtttataac gatcagttta aaaaatggga tctgggtgac    360

attatcggtg cccgcggtac gctgtttaag acgcaaacgg gtgagctttc cattcactgt    420

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cgtcaaacgt ttgttgtccg ttcaaaaatt ctggccgcta tccgtcaatt catggtcgcg    600

cgcggcttta tggaagtaga aaccccgatg atgcaggtaa ttccaggtgg ggcatctgct    660

cgcccgttta ttacccatca taatgctctg gatttagata tgtatctgcg tatcgcgccg    720

gagctgtatc tgaaacgtct ggttgtaggc ggttttgaac gggtattcga aatcaaccgt    780

aacttccgta atgaaggtat ttctgttcgc cataatcctg agttcacaat gatggaactc    840

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ctggcacaag aggttctggg taccactaaa gtcacttatg gcgagcatgt gtttgatttc    960

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gatatggccg acctggataa ttttgatgct gctaaagcat tagctgaatc tatcggtatt    1080

acggtagaga aaagctgggg gttgggacgt attgtcacag agatctttga tgaagtggca    1140

gaagcacatc tgattcagcc aacctttatt acggaatatc cggcagaagt gtccccgctg    1200

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caggaacagg ttaatgctaa agctgcaggt gacgacgaag ccatgttcta tgacgaagat    1380

tacgtgactg cgctggaata tggtctgccg ccaaccgctg gtctgggtat tggtatcgac    1440

cgaatgatta tgctgtttac taacagccat actattcgcg acgttattct cttcccggcg    1500

atgcgcccac agaaataa                                                  1518

 

<210>15

<211>2034

<212>DNA

<213>大肠杆菌

<220>

<223>metG甲硫氨酸-tRNA合成酶

 

<400>15

atgactcaag tcgcgaagaa aattctggtg acgtgcgcac tgccgtacgc taacggctca    60

atccacctcg gccatatgct ggagcacatc caggctgatg tctgggtccg ttaccagcga    120

atgcgcggcc acgaggtcaa cttcatctgc gccgacgatg cccacggtac accgatcatg    180

ctgaaagctc agcagcttgg tatcaccccg gagcagatga ttggcgaaat gagtcaggag    240

catcagactg atttcgcagg ctttaacatc agctatgaca actatcactc gacgcacagc    300

gaagagaacc gccagttgtc agaacttatc tactctcgcc tgaaagaaaa cggttttatt    360

aaaaaccgca ccatctctca gctgtacgat ccggaaaaag gcatgttcct gccggaccgt    420

tttgtgaaag gcacctgccc gaaatgtaaa tccccggatc aatacggcga taactgcgaa    480

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atgttgcagg catggacccg cagcggtgcg ttgcaggagc aggtggcaaa taaaatgcag    660

gagtggtttg aatctggcct gcaacagtgg gatatctccc gcgacgcccc ttacttcggt    720

tttgaaattc cgaacgcgcc gggcaaatat ttctacgtct ggctggacgc accgattggc    780

tacatgggtt ctttcaagaa tctgtgcgac aagcgcggcg acagcgtaag cttcgatgaa    840

tactggaaga aagactccac cgccgagctg taccacttca tcggtaaaga tattgtttac    900

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ctgtttgttc atggctatgt gacggtgaac ggcgcaaaga tgtccaagtc tcgcggcacc    1020

tttattaaag ccagcacctg gctgaatcat tttgacgcag acagcctgcg ttactactac    1080

actgcgaaac tctcttcgcg cattgatgat atcgatctca acctggaaga tttcgttcag    1140

cgtgtgaatg ccgatatcgt taacaaagtg gttaacctgg cctcccgtaa tgcgggcttt    1200

atcaacaagc gttttgacgg cgtgctggca agcgaactgg ctgacccgca gttgtacaaa    1260

accttcactg atgccgctga agtgattggt gaagcgtggg aaagccgtga atttggtaaa    1320

gccgtgcgcg aaatcatggc gctggctgat ctggctaacc gctatgtcga tgaacaggct    1380

ccgtgggtgg tggcgaaaca ggaaggccgc gatgccgacc tgcaggcaat ttgctcaatg    1440

ggcatcaacc tgttccgcgt gctgatgact tacctgaagc cggtactgcc gaaactgacc    1500

gagcgtgcag aagcattcct caatacggaa ctgacctggg atggtatcca gcaaccgctg    1560

ctgggccaca aagtgaatcc gttcaaggcg ctgtataacc gcatcgatat gaggcaggtt    1620

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attttcctgc taagcccgga tgccggtgct aaaccgggtc atcaggtgaa ataa          2034

 

<210>16

<211>984

<212>DNA

<213>大肠杆菌

 

<220>

<223>pheS苯丙氨酸-tRNA合成酶，α-亚单位

 

<400>16

atgtcacatc tcgcagaact ggttgccagt gcgaaggcgg ccattagcca ggcgtcagat    60

gttgccgcgt tagataatgt gcgcgtcgaa tatttgggta aaaaagggca cttaaccctt    120

cagatgacga ccctgcgtga gctgccgcca gaagagcgtc cggcagctgg tgcggttatc    180

aacgaagcga aagagcaggt tcagcaggcg ctgaatgcgc gtaaagcgga actggaaagc    240

gctgcactga atgcgcgtct ggcggcggaa acgattgatg tctctctgcc aggtcgtcgc    300

attgaaaacg gcggtctgca tccggttacc cgtaccatcg accgtatcga aagtttcttc    360

ggtgagcttg gctttaccgt ggcaaccggg ccggaaatcg aagacgatta tcataacttc    420

gatgctctga acattcctgg tcaccacccg gcgcgcgctg accacgacac tttctggttt    480

gacactaccc gcctgctgcg tacccagacc tctggcgtac agatccgcac catgaaagcc    540

cagcagccac cgattcgtat catcgcgcct ggccgtgttt atcgtaacga ctacgaccag    600

actcacacgc cgatgttcca tcagatggaa ggtctgattg ttgataccaa catcagcttt    660

accaacctga aaggcacgct gcacgacttc ctgcgtaact tctttgagga agatttgcag    720

attcgcttcc gtccttccta cttcccgttt accgaacctt ctgcagaagt ggacgtcatg    780

ggtaaaaacg gtaaatggct ggaagtgctg ggctgcggga tggtgcatcc gaacgtgttg    840

cgtaacgttg gcatcgaccc ggaagtttac tctggtttcg ccttcgggat ggggatggag    900

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cgtttcctca aacagtttaa ataa                                           984

 

<210>17

<211>2388

<212>DNA

<213>大肠杆菌

 

<220>

<223>pheT苯丙氨酸-tRNA合成酶，β-亚单位

 

<400>17

atgaaattca gtgaactgtg gttacgcgaa tgggtgaacc cggcgattga tagcgatgcg    60

ctggcaaatc aaatcactat ggcgggcctg gaagttgacg gtgtagaacc ggttgccggc    120

agcttccacg gcgtggtcgt tggtgaagtg gttgagtgtg cgcagcatcc gaacgctgac    180

aaactgcgtg tgacaaaagt gaatgtcggc ggcgatcgcc tgctggacat cgtctgcggt    240

gcgccaaact gccgtcaggg cctgcgtgta gcggtagcga ccattggtgc tgttctgccg    300

ggtgatttca aaattaaagc ggcgaaactg cgtggcgaac cgtctgaagg gatgctgtgc    360

tccttctctg aactgggcat ttctgacgat cacagcggca ttatcgaact gcctgcggat    420

gcgccgattg gcaccgatat ccgtgaatac ctgaaacttg atgacaacac catcgaaatc    480

agcgtgacgc caaaccgtgc cgactgctta ggcatcattg gtgttgcgcg tgacgttgcc    540

gtgctgaacc agctgccgct ggttcaaccg gaaatcgttc cggttggtgc gaccatcgac    600

gacacgctgc cgattacagt cgaagcgccg gaagcctgcc cgcgttatct tggccgtgtg    660

gtaaaaggca ttaacgttaa agcgccaact ccgctgtgga tgaaagaaaa actgcgtcgt    720

tgcgggatcc gttctatcga tgcagttgtt gacgtcacca actatgtgct gctcgaactg    780

ggccagccga tgcacgcttt cgataaagat cgcattgaag gcggcattgt ggtgcggatg    840

gcgaaagagg gcgaaacgct ggtgctgctc gacggtactg aagcgaagct gaatgctgac    900

actctggtca tcgccgacca caacaaggcg ctggcgatgg gcggcatctt cggtggcgaa    960

cactctggcg tgaatgacga aacacaaaac gtgctgctgg aatgcgcgtt ctttagcccg    1020

ctgtctatca ccggtcgtgc tcgtcgtcat ggcctgcata ccgatgcgtc tcaccgttat    1080

gagcgtggcg ttgatccggc actgcagcac aaagcgatgg aacgtgcgac ccgtctgctg    1140

atcgacatct gcggtggtga ggctggcccg gtaattgata tcaccaacga agcaacgctg    1200

ccgaagcgtg caaccatcac tctacgtcgt agcaaactgg atcgcctgat cggccatcat    1260

attgcggatg agcaggtaac tgacattctg cgtcgtctcg gctgcgaagt gaccgaaggc    1320

aaagacgaat ggcaggcagt tgcgccgagc tggcgtttcg atatggagat tgaagaagat    1380

ctggttgaag aagtcgcgcg tgtttacggc tacaacaaca tcccggatga gccggtacag    1440

gcaagcctga ttatgggtac tcaccgtgaa gctgacctgt cgctcaagcg cgtgaaaacg    1500

ctgctcaacg acaaaggcta tcaggaagtg atcacctaca gcttcgttga tccgaaagtg    1560

cagcagatga tccatccagg cgttgaagcc ttactgctgc caagcccgat ctctgttgaa    1620

atgtcagcaa tgcgtctttc tctgtggact ggcctgctgg caaccgtggt gtacaaccag    1680

aaccgtcagc agaaccgtgt gcgcattttc gaaagcggtc tgcgtttcgt accagatact    1740

caggcaccgt tgggcattcg tcaggatctg atgttagccg gtgtgatttg cggtaaccgt    1800

tacgaagagc actggaacct ggcaaaagag accgttgatt tctatgattt gaaaggcgat    1860

cttgaatccg ttctcgacct gaccggtaaa ctgaatgagg ttgagttccg tgcagaagcg    1920

aatccggcac tgcatccggg gcaatccgca gcgatttatc tgaaaggtga acgtattggt    1980

tttgttgggg ttgttcatcc tgaactggaa cgtaaactgg atcttaacgg tcgcactctg    2040

gtgttcgaac tggagtggaa caagctcgca gaccgcgtgg tgcctcaggc gcgcgagatt    2100

tctcgcttcc cggcgaaccg tcgtgacatc gcggtggtgg tcgcagaaaa cgttcccgca    2160

gcggatattt tatccgaatg taagaaagtt ggcgtaaatc aggtagttgg cgtaaactta    2220

tttgacgtgt accgcggtaa gggtgttgcg gaggggtata agagcctcgc cataagcctg    2280

atcctgcaag ataccagccg tacactcgaa gaagaggaga ttgccgctac cgtcgccaaa    2340

tgtgtagagg cattaaaaga gcgattccag gcatcattga gggattga                 2388

 

<210>18

<211>978

<212>DNA

<213>大肠杆菌

 

<220>

<223>赖氨酰-tRNA合成酶，genX

 

<400>18

atgagcgaaa cggcatcctg gcagccgagc gcatccattc ctaacttatt aaaacgcgcg    60

gcgattatgg cggagatccg tcgtttcttt gccgatcgtg gagtgctgga ggtggagacg    120

ccttgtatga gccaggcgac ggtaaccgat attcatttgg tcccgtttga gacacgtttc    180

gttggccccg ggcattcgca ggggatgaat ctctggttaa tgaccagccc ggaataccat    240

atgaaacgcc tgctggttgc cggttgtggg ccggtattcc agctgtgccg cagcttccgt    300

aatgaagaga tggggcgtta tcacaaccct gagttcacta tgctggagtg gtatcgaccg    360

cactatgata tgtaccggtt gatgaacgag gtggacgatc tcttacaaca ggtgctggac    420

tgcccggcag cagaaagcct ttcttatcaa caagctttct tgcgttatct ggaaattgac    480

ccgctctctg ccgacaaaac gcaactgcgg gaagtcgcag cgaaactgga tttgagcaat    540

gttgctgata ccgaagaaga ccgcgacacg ctgctacaat tgctgtttac ctttggcgta    600

gagccaaata ttggcaaaga aaaaccgacc tttgtgtacc actttccagc cagccaggca    660

tcactggcgc aaatcagtac cgaagatcat cgggtcgctg aacgctttga ggtttattat    720

aaaggtattg agctggcgaa tggtttccat gaattgacgg atgcccgtga gcagcaacaa    780

cgctttgaac aagataaccg taagcgcgcg gcgcgcggtt tgccgcagca ccccattgac    840

cagaatctga ttgaagcctt gaaagtcggt atgcctgact gttccggcgt ggcattaggt    900

gttgatcgtc tggtgatgtt ggcgctgggc gcggagacac tggctgaagt catcgccttt    960

agcgttgacc gggcataa                                                  978

 

<210>19

<211>1719

<212>DNA

<213>大肠杆菌

 

<220>

<223>proS脯氨酸-tRNA合成酶

 

<400>19

atgcgtacta gccaatacct gctctccact ctcaaggaga cacctgccga cgccgaggtg    60

atcagccatc agctgatgct gcgcgccggg atgatccgca agctggcctc cgggttatat    120

acctggctgc cgaccggcgt gcgcgttctg aaaaaagtcg aaaacatcgt gcgtgaagag    180

atgaacaacg ccggtgcgat cgaggtgtcg atgccggtgg ttcagccagc cgatttgtgg    240

caagagagtg gtcgttggga acagtacggt ccggaactgc tgcgttttgt tgaccgtggc    300

gagcgtccgt tcgtactcgg cccaactcat gaagaagtta tcactgacct gattcgtaac    360

gagcttagct cttacaaaca gctgccgctg aacttctatc agatccagac caagttccgc    420

gacgaagtgc gtccgcgttt cggcgtcatg cgttcccgcg aattcctgat gaaagatgct    480

tactctttcc atacttctca ggaatccctg caggaaacct acgatgcaat gtatgcggcc    540

tacagcaaaa tcttcagccg catggggctg gatttccgcg ccgtacaagc cgacaccggt    600

tctatcggcg gcagcgcctc tcacgaattc caggtgctgg cgcagagcgg tgaagacgat    660

gtggtcttct ccgacacctc tgactatgca gcgaacattg aactggcaga agctatcgcg    720

ccgaaagaac cgcgcgctgc tgctacccag gaaatgacgc tggttgatac gccgaacgcg    780

aaaaccatcg cggaactggt tgaacagttc aatctgccga ttgagaaaac ggttaagact    840

ctgctggtta aagcggttga aggcagcagc ttcccgcagg ttgcgctgct ggtgcgcggt    900

gatcacgagc tgaacgaagt taaagcagaa aaactgccgc aggttgcaag cccgctgact    960

ttcgcgaccg aagaagaaat tcgtgccgtg gttaaagccg gtccgggttc actgggtccg    1020

gtaaacatgc cgattccggt ggtgattgac cgtaccgttg cggcgatgag tgatttcgct    1080

gctggtgcta acatcgatgg taaacactac ttcggcatca actgggatcg cgatgtcgct    1140

accccggaag ttgcagatat ccgtaacgtg gtggctggcg atccaagccc ggatggccag    1200

ggtaggctgc tgatcaaacg tggtatcgaa gttggtcaca tcttccagct gggtaccaag    1260

tactccgaag cactgaaagc ctccgtacag ggtgaagatg gccgtaacca aatcctgacg    1320

atgggttgct acggtatcgg ggtaacgcgt gtggtagctg cggcgattga gcagaactac    1380

gacgaacgag gcatcgtatg gcctgacgct atcgcgccgt tccaggtggc gattctgccg    1440

atgaacatgc acaaatcctt ccgcgtacaa gagcttgctg agaaactgta cagcgaactg    1500

cgtgcacaag gtatcgaagt gctgctggat gaccgcaaag agcgtccggg cgtgatgttt    1560

gctgatatgg aactgatcgg tattccgcac actattgtgc tgggcgaccg taacctcgac    1620

aacgacgata tcgaatataa atatcgtcgc aacggcgaga aacagttaat taagactggt    1680

gacatcgtcg aatatctggt gaaacagatt aaaggctga                           1719

 

<210>20

<211>1293

<212>DNA

<213>大肠杆菌

 

<220>

<223>serS丝氨酸-tRNA合成酶

 

<400>20

atgctcgatc ccaatctgct gcgtaatgag ccagacgcag tcgctgaaaa actggcacgc    60

cggggcttta agctggatgt agataagctg ggcgctcttg aagagcgtcg taaagtattg    120

caggtcaaaa cggaaaacct gcaagcggag cgtaactccc gatcgaaatc cattggccag    180

gcgaaagcgc gcggggaaga tatcgagcct ttacgtctgg aagtgaacaa actgggcgaa    240

gagctggatg cagcaaaagc cgagctggat gctttacagg ctgaaattcg cgatatcgcg    300

ctgaccatcc ctaacctgcc tgcagatgaa gtgccggtag gtaaagacga aaatgacaac    360

gttgaagtca gccgctgggg taccccgcgt gagtttgact ttgaagttcg tgaccacgtg    420

acgctgggtg aaatgcactc tggcctcgac tttgcagctg cagttaagct gactggttcc    480

cgctttgtgg taatgaaagg gcagattgct cgcatgcacc gcgcactgtc gcagtttatg    540

ctggatctgc ataccgaaca gcatggctac agtgagaact atgttccgta cctggttaac    600

caggacacgc tgtacggtac gggtcaactg ccgaaatttg ctggcgatct gttccatact    660

cgtccgctgg aagaagaagc agacaccagt aactatgcgc tgatcccaac ggcagaagtt    720

ccgctgacta acctggtgcg cggtgaaatc atcgatgaag atgatctgcc aattaagatg    780

accgcccaca ccccatgctt ccgttctgaa gccggttcat atggtcgtga cacccgtggt    840

ctgatccgta tgcaccagtt cgacaaagtt gaaatggtgc agatcgtgcg cccagaagac    900

tcaatggcgg cgctggaaga gatgactggt catgcagaaa aagtcctgca gttgctgggc    960

ctgccgtacc gtaaaatcat cctttgcact ggcgacatgg gctttggcgc ttgcaaaact    1020

tacgacctgg aagtatggat cccggcacag aacacctacc gtgagatctc ttcctgctcc    1080

aacgtttggg atttccaggc acgtcgtatg caggcacgtt gccgcagcaa gtcggacaag    1140

aaaacccgtc tggttcatac cctgaacggt tctggtctgg ctgttggtcg tacgctggtt    1200

gcagtaatgg aaaactatca gcaggctgat ggtcgtattg aagtaccaga agttctgcgt    1260

ccgtatatga acggactgga atatattggc taa                                 1293

 

<210>21

<211>1929

<212>DNA

<213>大肠杆菌

 

<220>

<223>thrS苏氨酸-tRNA合成酶，自调节

 

<400>21

atgcctgtta taactcttcc tgatggcagc caacgccatt acgatcacgc tgtaagcccc    60

atggatgttg cgctggacat tggtccaggt ctggcgaaag cctgtatcgc agggcgcgtt    120

aatggcgaac tggttgatgc ttgcgatctg attgaaaacg acgcacaact gtcgatcatt    180

accgccaaag acgaagaagg tctggagatc attcgtcact cctgtgcgca cctgttaggg    240

cacgcgatta aacaactttg gccgcatacc aaaatggcaa tcggcccggt tattgacaac    300

ggtttttatt acgacgttga tcttgaccgc acgttaaccc aggaagatgt cgaagcactc    360

gagaagcgga tgcatgagct tgctgagaaa aactacgacg tcattaagaa gaaagtcagc    420

tggcacgaag cgcgtgaaac tttcgccaac cgtggggaga gctacaaagt ctccattctt    480

gacgaaaaca tcgcccatga tgacaagcca ggtctgtact tccatgaaga atatgtcgat    540

atgtgccgcg gtccgcacgt accgaacatg cgtttctgcc atcatttcaa actaatgaaa    600

acggcagggg cttactggcg tggcgacagc aacaacaaaa tgttgcaacg tatttacggt    660

acggcgtggg cagacaaaaa agcacttaac gcttacctgc agcgcctgga agaagccgcg    720

aaacgcgacc accgtaaaat cggtaaacag ctcgacctgt accatatgca ggaagaagcg    780

ccgggtatgg tattctggca caacgacggc tggaccatct tccgtgaact ggaagtgttt    840

gttcgttcta aactgaaaga gtaccagtat caggaagtta aaggtccgtt catgatggac    900

cgtgtcctgt gggaaaaaac cggtcactgg gacaactaca aagatgcaat gttcaccaca    960

tcttctgaga accgtgaata ctgcattaag ccgatgaact gcccgggtca cgtacaaatt    1020

ttcaaccagg ggctgaagtc ttatcgcgat ctgccgctgc gtatggccga gtttggtagc    1080

tgccaccgta acgagccgtc aggttcgctg catggcctga tgcgcgtgcg tggatttacc    1140

caggatgacg cgcatatctt ctgtactgaa gaacaaattc gcgatgaagt taacggatgt    1200

atccgtttag tctatgatat gtacagcact tttggcttcg agaagatcgt cgtcaaactc    1260

tccactcgtc ctgaaaaacg tattggcagc gacgaaatgt gggatcgtgc tgaggcggac    1320

ctggcggttg cgctggaaga aaacaacatc ccgtttgaat atcaactggg tgaaggcgct    1380

ttctacggtc cgaaaattga atttaccctg tatgactgcc tcgatcgtgc atggcagtgc    1440

ggtacagtac agctggactt ctctttgccg tctcgtctga gcgcttctta tgtaggcgaa    1500

gacaatgaac gtaaagtacc ggtaatgatt caccgcgcaa ttctggggtc gatggaacgt    1560

ttcatcggta tcctgaccga agagttcgct ggtttcttcc cgacctggct tgcgccggtt    1620

caggttgtta tcatgaatat taccgattca cagtctgaat acgttaacga attgacgcaa    1680

aaactatcaa atgcgggcat tcgtgttaaa gcagacttga gaaatgagaa gattggcttt    1740

aaaatccgcg agcacacttt gcgtcgcgtc ccatatatgc tggtctgtgg tgataaagag    1800

gtggaatcag gcaaagttgc cgttcgcacc cgccgtggta aagacctggg aagcatggac    1860

gtaaatgaag tgatcgagaa gctgcaacaa gagattcgca gccgcagtct taaacaattg    1920

gaggaataa                                                            1929

 

<210>22

<211>1005

<212>DNA

<213>大肠杆菌

 

<220>

<223>trpS色氨酸-tRNA合成酶

 

<400>22

atgactaagc ccatcgtttt tagtggcgca cagccctcag gtgaattgac cattggtaac    60

tacatgggtg cgctgcgtca gtgggtaaac atgcaggatg actaccattg catttactgt    120

atcgttgacc aacacgcgat caccgtgcgc caggatgcac agaagctgcg taaagcgacg    180

ctggatacgc tggccttgta tctggcttgt ggtatcgatc ctgagaaaag caccattttt    240

gttcagtccc acgtgccgga acatgcacag ttaggctggg cactgaactg ctatacctac    300

ttcggcgaac tgagtcgcat gacgcagttt aaagataaat ctgcgcgtta tgccgagaac    360

atcaacgctg gtctgtttga ctatccggtg ctgatggcag cggacatcct gctgtatcaa    420

actaatctgg taccggtggg tgaagaccag aaacagcacc tcgaactgag ccgcgatatt    480

gcccagcgtt tcaacgcgct gtatggcgag atctttaagg tgccggagcc gtttattccg    540

aaatctggcg cgcgcgtaat gtcgctgctg gagccgacca agaagatgtc caagtctgac    600

gataatcgca ataacgttat cggcctgctg gaagatccga aatcggtagt gaagaaaatc    660

aaacgtgcgg tcactgactc cgacgagccg ccggtagttc gctacgatgt gcagaacaaa    720

gcgggcgttt ccaacctgtt ggatatcctt tcagcggtaa cgggccagag catcccagaa    780

ctggaaaaac agttcgaagg caagatgtat ggtcatctga aaggtgaagt ggctgatgcc    840

gtttccggta tgctgactga attgcaggaa cgctatcacc gtttccgcaa cgatgaagcc    900

ttcctgcaac aggtgatgaa agatggcgcg gaaaaagcca gcgcgcacgc ttcccgtacg    960

ctaaaagcgg tgtacgaagc gattggtttt gtggcgaagc cgtaa                    1005

 

<210>23

<211>1275

<212>DNA

<213>大肠杆菌

 

<220>

<223>tyrS酪氨酸-tRNA合成酶

 

<400>23

atggcaagca gtaacttgat taaacaattg caagagcggg ggctggtagc ccaggtgacg    60

gacgaggaag cgttagcaga gcgactggcg caaggcccga tcgcgctcta ttgcggcttc    120

gatcctaccg ctgacagctt gcatttgggg catcttgttc cattgttatg cctgaaacgc    180

ttccagcagg cgggccacaa gccggttgcg ctggtaggcg gcgcgacggg tctgattggc    240

gacccgagct tcaaagctgc cgagcgtaag ctgaacaccg aagaaactgt tcaggagtgg    300

gtggacaaaa tccgtaagca ggttgccccg ttcctcgatt tcgactgtgg agaaaactct    360

gctatcgcgg cgaacaacta tgactggttc ggcaatatga atgtgctgac cttcctgcgc    420

gatattggca aacacttctc cgttaaccag atgatcaaca aagaagcggt taagcagcgt    480

ctcaaccgtg aagatcaggg gatttcgttc actgagtttt cctacaacct gttgcagggt    540

tatgacttcg cctgtctgaa caaacagtac ggtgtggtgc tgcaaattgg tggttctgac    600

cagtggggta acatcacttc tggtatcgac ctgacccgtc gtctgcatca gaatcaggtg    660

tttggcctga ccgttccgct gatcactaaa gcagatggca ccaaatttgg taaaactgaa    720

ggcggcgcag tctggttgga tccgaagaaa accagcccgt acaaattcta ccagttctgg  780

atcaacactg cggatgccga cgtttaccgc ttcctgaagt tcttcacctt tatgagcatt  840

gaagagatca acgccctgga agaagaagat aaaaacagcg gtaaagcacc gcgcgcccag  900

tatgtactgg cggagcaggt gactcgtctg gttcacggtg aagaaggttt acaggcggca  960

aaacgtatta ccgaatgcct gttcagcggt tctttgagtg cgctgagtga agcggacttc  1020

gaacagctgg cgcaggacgg cgtaccgatg gttgagatgg aaaagggcgc agacctgatg  1080

caggcactgg tcgattctga actgcaacct tcccgtggtc aggcacgtaa aactatcgcc  1140

tccaatgcca tcaccattaa cggtgaaaaa cagtccgatc ctgaatactt ctttaaagaa  1200

gaagatcgtc tgtttggtcg ttttacctta ctgcgtcgcg gtaaaaagaa ttactgtctg  1260

atttgctgga aataa                                                   1275

 

<210>24

<211>2856

<212>DNA

<213>大肠杆菌

 

<220>

<223>valS缬氨酸-tRNA合成酶

 

<400>24

atggaaaaga catataaccc acaagatatc gaacagccgc tttacgagca ctgggaaaag    60

cagggctact ttaagcctaa tggcgatgaa agccaggaaa gtttctgcat catgatcccg    120

ccgccgaacg tcaccggcag tttgcatatg ggtcacgcct tccagcaaac catcatggat    180

accatgatcc gctatcagcg catgcagggc aaaaacaccc tgtggcaggt cggtactgac    240

cacgccggga tcgctaccca gatggtcgtt gagcgcaaga ttgccgcaga agaaggtaaa    300

acccgtcacg actacggccg cgaagctttc atcgacaaaa tctgggaatg gaaagcggaa    360

tctggcggca ccattacccg tcagatgcgc cgtctcggca actccgtcga ctgggagcgt    420

gaacgcttca ccatggacga aggcctgtcc aatgcggtga aagaagtttt cgttcgtctg    480

tataaagaag acctgattta ccgtggcaaa cgcctggtaa actgggatcc gaaactgcgc    540

accgctatct ctgacctgga agtcgaaaac cgcgaatcga aaggttcgat gtggcacatc    600

cgctatccgc tggctgacgg tgcgaaaacc gcagacggta aagattatct ggtggtcgcg    660

actacccgtc cagaaaccct gctgggcgat actggcgtag ccgttaaccc ggaagatccg    720

cgttacaaag atctgattgg caaatatgtc attctgccgc tggttaaccg tcgtattccg    780

atcgttggcg acgaacacgc cgacatggaa aaaggcaccg gctgcgtgaa aatcactccg    840

gcgcacgact ttaacgacta tgaagtgggt aaacgtcacg ccctgccgat gatcaacatc    900

ctgacctttg acggcgatat ccgtgaaagc gcccaggtgt tcgataccaa aggtaacgaa    960

tctgacgttt attccagcga aatccctgca gagttccaga aactggagcg ttttgctgca    1020

cgtaaagcag tcgttgccgc agttgacgcg cttggcctgc tggaagaaat taaaccgcac    1080

gacctgaccg ttccttacgg cgaccgtggc ggcgtagtta tcgaaccaat gctgaccgac    1140

cagtggtacg tgcgtgccga tgtcctggcg aaaccggcgg ttgaagcggt tgagaacggc    1200

gacattcagt tcgtaccgaa gcagtacgaa aacatgtact tctcctggat gcgcgatatt    1260

caggactggt gtatctctcg tcagttgtgg tggggtcacc gtatcccggc atggtatgac    1320

gaagcgggta acgtttatgt tggccgcaac gaagacgaag tgcgtaaaga aaataacctc    1380

ggtgctgatg ttgtcctgcg tcaggacgaa gacgttctcg atacctggtt ctcttctgcg    1440

ctgtggacct tctctaccct tggctggccg gaaaataccg acgccctgcg tcagttccac    1500

ccaaccagcg tgatggtatc tggtttcgac atcattttct tctggattgc ccgcatgatc    1560

atgatgacca tgcacttcat caaagatgaa aatggcaaac cgcaggtgcc gttccacacc    1620

gtttacatga ccggcctgat tcgtgatgac gaaggccaga agatgtccaa atccaagggt    1680

aacgttatcg acccactgga tatggttgac ggtatttcgc tgccagaact gctggaaaaa    1740

cgtaccggca atatgatgca gccgcagctg gcggacaaaa tccgtaagcg caccgagaag    1800

cagttcccga acggtattga gccgcacggt actgacgcgc tgcgcttcac cctggcggcg    1860

ctggcgtcta ccggtcgtga catcaactgg gatatgaagc gtctggaagg ttaccgtaac    1920

ttctgtaaca agctgtggaa cgccagccgc tttgtgctga tgaacacaga aggtcaggat    1980

tgcggcttca acggcggcga aatgacgctg tcgctggcgg accgctggat tctggcggag    2040

ttcaaccaga ccatcaaagc gtaccgcgaa gcgctggaca gcttccgctt cgatatcgcc    2100

gcaggcattc tgtatgagtt cacctggaac cagttctgtg actggtatct cgagctgacc    2160

aagccggtaa tgaacggtgg caccgaagca gaactgcgcg gtactcgcca tacgctggtg    2220

actgtactgg aaggtctgct gcgcctcgcg catccgatca ttccgttcat caccgaaacc    2280

atctggcagc gtgtgaaagt actttgcggt atcactgccg acaccatcat gctgcagccg    2340

ttcccgcagt acgatgcatc tcaggttgat gaagccgcac tggccgacac cgaatggctg    2400

aaacaggcga tcgttgcggt acgtaacatc cgtgcagaaa tgaacatcgc gccgggcaaa    2460

ccgctggagc tgctgctgcg tggttgcagc gcggatgcag aacgtcgcgt aaatgaaaac    2520

cgtggcttcc tgcaaaccct ggcgcgtctg gaaagtatca ccgtgctgcc tgccgatgac    2580

aaaggtccgg tttccgttac gaagatcatc gacggtgcag agctgctgat cccgatggct    2640

ggcctcatca acaaagaaga tgagctggcg cgtctggcga aagaagtggc gaagattgaa    2700

ggtgaaatca gccgtatcga gaacaaactg gcgaacgaag gctttgtcgc ccgcgcaccg    2760

gaagcggtca tcgcgaaaga gcgtgagaag ctggaaggct atgcggaagc gaaagcgaaa    2820

ctgattgaac agcaggctgt tatcgccgcg ctgtaa                               2856

 

<210>25

<211>2634

<212>DNA

<213>枯草杆菌

 

<220>

<223>丙氨酰-tRNA合成酶

 

<400>25

atgaaacact taacttctgc ggaagtgcgt caaatgtttt tggatttctt taaagaaaaa    60

ggacatgcgg tagagccaag cgcgtcatta gtgcctcatg aggatccttc actgctttgg    120

atcaacagcg gtgttgcgac gctgaaaaaa tattttgacg gccgtgtcgt gccggaaaat    180

ccaagaatcg taaacgctca aaaagcgatc agaacaaacg atatagaaaa tgtaggtaaa    240

actgcgcgcc atcacacttt ctttgaaatg ctcggaaact tttccatcgg cgattatttc    300

aaagaagaag ccattacatg ggcttgggag tttttaacga gcgacaagtg gattggcttc    360

gacaaagagc ttctctctgt tacggttcat cctgaagatg aagaggcata tgagttttgg    420

gcgaaaaaaa tcggtattcc tgaagaaaga attatccgtc tggaagggaa cttctgggat    480

atcggtgaag ggccgagcgg accgaatacg gaaatctttt acgaccgcgg tgaagcatac    540

ggtaatgatc cagaagatcc ggagctttac ccaggcgggg aaaacgaccg ttacctggaa    600

gtatggaacc ttgtgttctc agagttcaac cataaccctg acggcacgta cacaccgctt    660

ccaaagaaaa atattgatac aggcatgggt cttgaaagaa tggtgtctgt catccagaat    720

gttccgacaa actttgacac cgatttgttt gttccgatca ttaaagcaac agaatcgatt    780

tctggtgaaa catatggcaa agacaatgtg aaagacactg cgtttaaagt gattgctgac    840

catatcagaa cggttgcctt tgctgtcagt gacggtgcgc tgccgtcaaa tgaaggccgc    900

ggctatgtat taagacgctt attacgccgt gccgtgcgtt atgccaaaac gatcaacatc    960

catcgtccgt tcatgtttga tttagtgccg gttgtcgcag aaatcatggc tgatttctat    1020

cctgaagtga aagagaaagc ggatttcatc gcaaaagtca ttaaaaccga ggaagaacgc    1080

ttccatgaga cccttaatga agggcttgcg atcctgtcag aaatgatcaa aaaagaaaaa    1140

gacaagggca gcagcgttat ctcaggtgct gatgtgttta aactgtatga tacgtatgga    1200

ttcccggttg aattgactga agaatacgca gaagacgaga acatgacggt tgaccatgag    1260

ggctttgagg aggaaatgaa ccagcagcgt gaacgggcaa gaaacgcccg ccaggatgtc    1320

ggcagcatgc aggtgcaggg cggcgcactg cgcgacgtga cagttgaaag cacatttgtc    1380

ggctactctc aaaccaaagc tgatgccaat atcattgtgc ttcttcagga cggccaatta    1440

atcgaagagg ctcatgaagg agaaagcgtt caaatcattc ttgatgaaac accgttctat    1500

gcagaaagcg gcggccaaat cggcgacaaa ggctatctcc gaagcgagca ggcagttgta    1560

agaattaaag atgttcaaaa agcgccgaac ggccagcatg tgcatgaagg tgttgtggag    1620

agcggtactg ttcaaaaagg cctgcatgtt acggctgaag ttgaagacca tatgagaagc    1680

ggcgtcatta aaaaccacac ggcaacgcat ttattgcatc aggctctaaa agatgttctt    1740

ggaactcatg tcaatcaggc gggctctctt gtaacggaaa accgccttcg ttttgacttc    1800

tcgcactttg gccaagtgac aaaagaagag ctcgaacaaa ttgaaagaat cgtaaacgaa    1860

aagatctggg cgagcatccc ggtcagcatt gatttgaaac cgatcgctga agcaaaagaa    1920

atgggtgcga tggcactgtt cggcgaaaaa tatggcgata ttgtccgtgt cgttcaagtt    1980

ggagattaca gcttagagct gtgcggcggc tgccacgtca gaaatacagc agaaatcggc    2040

ttgtttaaaa tcgtttctga atccggaatc ggagcaggca caagacggat tgaagctgta    2100

acgggacaag gcgcttacgt cgaaatgaac agccagattt ctgtattgaa gcagaccgct    2160

gacgagctga aaacaaatat caaagaagtg ccgaaacggg tcgcggctct gcaggctgaa    2220

ctgaaggatg cacaaagaga aaatgaatct cttcttgcaa aactaggcaa cgtggaagca    2280

ggagcaatcc tgtcgaaagt aaaagaagtt gacggcgtaa acgtgcttgc ggcaaaagta    2340

aatgcaaaag acatgaatca tctccgcact atggtcgatg aactcaaagc aaagcttggc    2400

tctgcggtga tcgtgcttgg tgcggtacaa aacgataaag ttaatatctc tgccggagtc    2460

acaaaggacc tcattgagaa aggacttcac gccggcaagc tggttaaaca agctgcggaa    2520

gtttgcggcg gaggcggcgg aggccgtccg gacatggcgc aggcaggcgg taaacagccg    2580

gaaaaattag aagaagcttt ggcttctgta gaagattggg tgaaatccgt ttta          2634

 

<210>26

<211>1668

<212>DNA

<213>枯草杆菌

 

<220>

<223>精氨酰-tRNA合成酶

 

<400>26

atgaacattg cggaacaaat gaaggacgtg ctgaaagaag aaatcaaagc ggccgttctg    60

aaagcgggac tggctgaaga aagccagatt cccaatgttg ttttagaaac accgaaagat    120

aaaacacacg gcgactactc aacgaatatg gcgatgcagt tggcaagagt ggcaaaaaaa    180

gcgccgcgtc aaatcgctga agagattgtc gcccattttg ataaagggaa ggcttcgatt    240

gaaaaactgg atatcgccgg cccgggtttt atcaatttct atatgaacaa tcaatattta    300

acaaagctga ttccgtctgt actggaagca ggggaagcat acggggaaac gaacatcgga    360

aacggtgaac gagttcaggt agaattcgta tcagcgaatc cgacgggaga ccttcacctc    420

gggcatgcgc gcggggcggc tgtcggcgat tccttgtgca acgtgctttc aaaagcgggt    480

tacgatgtaa gccgcgaata ctacattaac gatgcgggaa accaaatcaa caatctggcg    540

ctttctgttg aagtccgtta ctttgaagca ctcggattgg aaaaaccgat gccggaggat    600

ggctaccgcg gtgaggatat cattgcgatc ggaaagcgtc tcgctgagga atacggtgat    660

cgtttcgtta acgaagagga aagtgaacgc ctcgcgtttt tccgtgaata cggcctgaaa    720

tacgagctgg aaaagcttcg caaggacttg gaaaacttcc gtgtgccgtt tgatgtgtgg    780

tattcagaaa cttcactgta ccaaaatgga aaaatcgaca aggcgcttga agcgctccgc    840

gaaaaaggcc acgtctatga agaagacggc gcgacttggt tccgttccac gactttcggc    900

gatgataaag accgcgtatt gatcaagaag gacggcacgt acacgtacct tcttcctgat    960

atcgcgtatc ataaggacaa gcttgaccgc ggctttgata agctgatcaa cgtttggggc    1020

gccgatcacc acggctacat cccgcgtatg aaagcggcaa tcgaagcgct gggctatgaa    1080

aaaggaacgc ttgaagtaga aatcattcag ctcgttcacc tttacaaaaa cggcgagaaa    1140

atgaaaatga gcaaacggac cggtaaagcc gtaacgatgc gtgacctgat tgaagaagtc    1200

ggcttggatg ccgtgcgtta cttctttgca atgcgaagtg cagacaccca tatggatttt    1260

gacttagatc ttgctgtatc aacatctaac gaaaaccctg tgtattatgc acaatacgcg    1320

catgcccgta tttgcagcat gcttcgccaa ggggaagagc aggggcttaa accggcggca    1380

gatcttgatt tcagccatat tcaatcagaa aaagaatacg atctgctgaa aacgatcggc    1440

ggcttcccag aggcagtggc ggaagcagcg gaaaaacgaa ttccgcaccg tgtcactaac    1500

tatatttatg atctggcttc tgctctgcac agcttctaca acgcagagaa agtcatcgac    1560

cctgaaaatg aagagaaaag ccgcgcgcgc ctggctttaa tgaaggcaac gcaaattacg    1620

ctgaacaatg cgcttcagct gatcggcgta tcggctccgg aaaaaatg                 1668

 

<210>27

<211>1290

<212>DNA

<213>枯草杆菌

 

<220>

<223>天冬酰胺酰tRNA合成酶

<400>27

ttgaaaacaa caatcaacca agtgtacaag cacgtaggtg aggaagtaac gatcggagct    60

tgggtcgcta ataagcgttc aagcgggaaa attgcgtttt tacagcttcg ggacggtacc    120

ggttttattc agggtgtcgt agtaaaagcg gaagtggaag aaagcatttt ccaaacagct    180

aaatcagtga cgcaggaaac gtcgctctat ataaaaggga ttgtcaaaga ggacgagcgt    240

tctccgcttg gatatgaact tgctgtgaca gatattgaag tcattcacga agcgaccgat    300

tatccaatta caccaaaaga acacggaacg gaatttttga tggatcacag acatttatgg    360

ctgcgttcaa agcgccagca tgcgatcatg aaaatccgta atgaaatcat tcgcgcgact    420

tacgaattct ttaataacga aggcttcgta aaagtggatc cgccgatttt gactggaagc    480

gcacctgaag gaacaacaga actctttgcg acaaagtact ttgatgaaga tgcatatctg    540

tctcaaagcg gacagctcta catggaagct gcggcaatgg ctttaggaaa agtattctct    600

ttcggaccga cattcagagc ggaaaagtct aaaacaaagc gtcacttaat cgaattctgg    660

atgatcgaac cggaaatggc gtttgtagaa tttgaagaaa accttcaagt acaggaaaat    720

tacgtttctt tcatcgtgca atcagttctt aaaaattgca aaattgaact aaacacattg    780

ggaagagaca cgtcaaaact tgagcaaatc aaagccccgt tcccaagaat tacgtatgat    840

gaagcgattg aatttctgaa agaaaaaggc tttgacgata tcgagtgggg agatgatttc    900

ggagcgcctc atgaaacagc gattgctgaa cattatgaca aaccggtatt catcactcgc    960

tatccgacgt ccttaaaacc gttctatatg cagccggctt ctgaccgtga ggacgttgtg    1020

ctttgcgctg acttgattgc gccggaaggc tatggagaaa tcatcggcgg gtctgaacgg    1080

attcacgata tggaactttt ggaatcgcgt cttaaagaac atggactgga ttctgacgct    1140

tataaatggt atgctgaact tagaaaatat ggatcagttc ctcattccgg cttcggcctt    1200

ggattagagc ggacagtagc ttggatcagc ggagcgcctc acgttcgtga aacgattccg    1260

ttcccaagac tgttaaaccg tctgtatccg                                     1290

 

<210>28

<211>1776

<212>DNA

<213>枯草杆菌

 

<220>

<223>天冬氨酰-tRNA合成酶

 

<400>28

ttgtttggaa gaacatatta ttgcggtgat ataactgaaa aagcaattgg cgaatctgta    60

acgctgaaag gctgggtcca aaaaagacga gacctcggcg gattgatttt tattgacttg    120

cgtgaccgta cgggcattgt tcaagtcgtt tttaaccctg atgtgtcaaa agaagcgctt    180

gctattgcgg aaggcatcag aaatgaatac gtgcttgata ttcaaggaaa agtggtggcg    240

cgtgaagagg gaacagttaa tccgaatttg aaaacaggcg cgatcgaaat acatgctgat    300

ggagtgaacg tattaaatgc tgcaaagaca cctccatttg cgatttctga tcaagctgaa    360

gaagtgtcag aggacgttcg tttaaaacac cgttacttag atttgcgcag accggctatg    420

ttccagacga tgcagctgcg ccataacgtg acgaaagctg ttcgcagctt tttagatgaa    480

aatgggtttc ttgatattga aacgccgatt ttaacaggaa gcacgcctga aggcgcacgt    540

gactacttgg tgccgagccg tgtgcacgaa ggtgagttct acgcgctgcc gcagtctccg    600

cagctattta aacagcttct gatggtatca ggcattgaac gatattatca aattgcccgc    660

tgtttccgcg atgaagactt gcgtgcggac cgtcagcctg agtttacgca aattgatatt    720

gaaatgtcct ttatgagcca ggaagacatt atgtcattgg ctgaggagat gatggcaaag    780

gttatgcgtg aaacaaaagg tgaggaactt cagcttcctc ttcctcgaat gacgtatgac    840

gaagcaatga acaagtacgg gtctgataaa ccggatacgc gttttgacat gcttttgacg    900

gatgtgtctg acattgtaaa ggatacggaa tttaaagtgt tctcatcagc tgtagcaaac    960

ggcggcgtgg tcaaagccat caatgtaaaa ggcggtgccg gcgattactc cagaaaagac    1020

atcgacgctc ttggcgcttt tgctgcaaac tacggggcaa aagggcttgc ctgggtgaag    1080

gttgaggcag acggagtgaa aggcccgatc gctaaattct ttgatgaaga aaagcagtct    1140

aagctgattg aagcacttga tgctgctgaa ggtgatttgc tgctgttcgg agcggatcaa    1200

ttcgaagttg tggccgcatc actcggcgcc ctgcgcttaa agcttgggaa agaacgcgga    1260

ctgattgacg aaaaattgtt caatttctta tgggtcatcg actggccgct attagagcat    1320

gatccggaag aaggccgttt ttacgcagcg caccatccgt tcacaatgcc tgtccgagaa    1380

gaccttgagc tgattgaaac agcgcctgaa gacatgaaag cgcaagctta tgacctcgtc    1440

ttaaacggct atgagcttgg cggcggttca atccgtattt tcgaaaagga tattcaggaa    1500

aaaatgtttg cgcttctcgg cttctcacca gaagaagcgg ctgaacagtt cggattcctg    1560

ctggaagcat ttgaatacgg cgctcctccg cacggcggaa tcgcactcgg cttagaccgt    1620

ctcgttatgc ttctcgctgg acgtacgaac ctgagagata cgattgcatt cccgaaaacg    1680

gcaagtgcaa gctgcctgat gacagaagcg ccaggcgaag taagcgacgc ccagcttgac    1740

gagcttcatc tttctatcaa gaaaaaagtt aagaac                              1776

 

<210>29

<211>1398

<212>DNA

<213>枯草杆菌

 

<220>

<223>半胱氨酰-tRNA合成酶

 

<400>29

atgacaatca cactttataa tacattgact agacagaagg aaacattcgt tcctcttgaa    60

gagggaaaag tgaaaatgta tgtatgcgga cccacggttt acaattacat tcatatcggg    120

aacgcgcgtc cggcaatcgt ttacgatacg gttcgaaact atttagagta taaaggctat    180

gatgtgcagt atgtctctaa cttcacagac gtagacgata aattaattaa agcggcaaat    240

gaactcggtg aggatgtacc caccatttca gagcgtttta ttaaagcata ctttgaagac    300

gtaggtgcgc tcggctgccg aaaagccgac cttcatccgc gagtaatgga gaacatggat    360

gccattatcg aattcgtaga tcagctcgtg aaaaagggct acgcatatga atcagaaggt    420

gacgtatatt tcaaaaccag agcatttgaa gggtacggaa agctttctca gcaatcaatc    480

gatgaactaa gatcaggtgc acgcatccgg gtcggcgaga aaaaagaaga tgctcttgat    540

ttcgcactgt ggaaagcggc aaaagaagga gaaatctctt gggatagccc ttgggggaaa    600

gggcgtccgg gctggcacat tgaatgctca gcaatggtga aaaagtatct cggtgaccag    660

attgatatcc atgcgggcgg acaggattta acattccctc accatgaaaa cgaaattgcg    720

caatctgagg cgctgacagg caaaacgttt gcgaagtact ggcttcataa tggttatatc    780

aatattgata atgaaaaaat gtcaaaatca ctaggcaact ttgtgcttgt gcatgacatc    840

attaaacagc atgatccgca gcttttgaga ttctttatgc tatctgttca ttatcgccat    900

ccgattaact attcagaaga gcttctggag aatacgaaaa gcgcgttcag ccgtttaaaa    960

acagcgtaca gcaatcttca gcaccgtctg aacagcagta cgaatttaac cgaagatgac    1020

gatcaatggc ttgaaaaggt tgaagaacac cgcaaagcat tcgaagaaga gatggacgat    1080

gattttaata cggcgaatgc catttcagtc ttgtttgact tagcgaaaca cgccaattat    1140

tatcttcaga aagatcatac ggctgatcat gtgattacgg cgtttattga gatgtttgac    1200

cgcattgttt ctgtcctcgg tttttcgttg ggtgagcagg aacttctcga tcaagagatt    1260

gaagacttaa tcgaaaagcg aaatgaagcg cgccggaatc gcgattttgc attgtcagac    1320

cagatccgcg accagctgaa aagcatgaat atcattcttg aagatacggc tcaaggcact    1380

cgctggaaac ggggagaa                                                  1398

 

<210>30

<211>1449

<212>DNA

<213>枯草杆菌

 

<220>

<223>谷氨酰-tRNA合成酶

 

<400>30

atgggaaacg aagtacgcgt ccgttatgca ccgagtccaa ccggacattt gcatattgga    60

aatgccagaa cggcgctttt taattattta tttgcccgca atcaaggcgg taagtttatc    120

attcgagttg aggatactga taaaaagcgc aatattgagg gcggagaaca aagccagctg    180

aattatctga agtggctagg tattgactgg gatgagagtg tggatgtcgg aggagagtac    240

ggtccatacc gtcagtcaga gcgtaacgat atctataaag tgtactatga agagcttctt    300

gaaaaagggc ttgcttataa atgttactgt acggaagaag agcttgaaaa agagcgtgaa    360

gaacagattg cccgcggaga aatgcctcgt tattccggaa aacacagaga cctgactcag    420

gaagaacagg agaaatttat cgccgaaggc agaaaaccaa gtattcgttt ccgtgtgccg    480

gaaggaaaag tcatcgcctt caacgacatc gtaaaaggcg aaatttcttt tgaatcagat    540

ggcatcggcg acttcgttat tgtgaaaaag gacggaacgc ctacttataa cttcgcggta    600

gctattgatg actacttaat gaaaatgaca cacgtgctgc gcggtgagga tcatatttct    660

aacacaccga aacagattat gatctatcaa gcattcgggt gggatattcc tcagttcgga    720

cacatgacgc tgattgtaaa cgaaagccgt aaaaagctca gcaaacgtga tgaatccatt    780

attcaattca tcgagcagta caaagagctt ggctacctgc cagaagcgct gttcaacttt    840

atcggcttgt taggctggtc accggttgga gaagaagagc ttttcacaaa agagcagttt    900

attgaaattt ttgatgtaaa tcgtttatct aaatcaccag ctttgtttga tatgcataag    960

ctaaaatggg ttaacaacca atatgtgaag aagctggatc ttgatcaggt tgttgaactg    1020

acgcttccgc atttgcaaaa agccggcaaa gttggcactg agctttctgc tgaagaacaa    1080

gaatgggttc gtaaactgat ttccctgtat catgagcaat taagctacgg tgcggaaatt    1140

gttgagctga ctgatttgtt ctttacggat gagatcgagt ataatcaaga agcgaaagct    1200

gttctggaag aagaacaggt tcctgaagtg ctcagcacat tcgcagcgaa gcttgaagag    1260

cttgaggagt tcactccgga taatatcaaa gcatcgatca aagcagtgca gaaagaaact    1320

ggccataaag ggaaaaaact gtttatgccg attcgtgttg ctgtaacagg gcaaactcac    1380

ggtccggaac tgccgcaatc aattgaattg atcggtaaag agactgcaat tcagcgttta    1440

aagaatatc                                                            1449

 

<210>31

<211>1458

<212>DNA

<213>枯草杆菌

 

<220>

<223>谷氨酰-tRNA酰胺转移酶，亚单位a

 

<400>31

atgtcattat ttgatcataa aatcacagaa ttaaaacagc tcatacataa aaaagagatt    60

aagatttctg atctggttga tgaatcttat aaacgcatcc aagcggttga tgataaggta    120

caagcctttt tggcattaga tgaagaaaga gcgcgcgcat acgcgaagga gcttgatgag    180

gcggttgacg gccgttctga gcacggtctt cttttcggta tgccgatcgg cgtaaaagat    240

aatatcgtaa caaaagggct gcgcacaaca tgctccagca aaattctcga aaactttgat    300

ccgatttacg atgctactgt cgttcagcgc cttcaagacg ctgaagcggt cacaatcgga    360

aaactgaaca tggacgaatt cgccatgggg tcatctacag aaaactcagc ttacaagctg    420

acgaaaaacc cttggaacct ggatacagtt cccggcggtt caagcggcgg atctgcagct    480

gcggttgctg cgggagaagt tccgttttct cttggatctg acacaggcgg ctccatccgt    540

cagccggcat ctttctgcgg cgttgtcgga ttaaaaccta catacggacg tgtatctcgt    600

tacggcctgg tcgcatttgc gtcttcattg gaccaaatcg gaccgattac acgtacggtt    660

gaggataacg cgtttttact tcaagcgatt tccggcgtag acaaaatgga ctctacgagt    720

gcaaatgtgg acgtgcctga ttttctttct tcattaactg gcgacatcaa aggactgaaa    780

atcgccgttc cgaaagaata ccttggtgaa ggtgtcggca aagaagcgag agaatctgtc    840

ttggcagcgc tgaaagtcct tgaaggtctc ggcgctacat gggaagaagt gtctcttccg    900

cacagtaaat acgcgcttgc gacatattac ctgctgtcat cttctgaagc gtcagcgaac    960

cttgcacgct ttgacggcat ccgctacggc taccgcacag acaacgcgga taacctgatc    1020

gacctttaca agcaaacgcg cgctgaaggt ttcggaaatg aagtcaaacg ccgcatcatg    1080

ctcggaacgt ttgctttaag ctcaggctac tacgatgcgt actacaaaaa agcgcaaaaa    1140

gtgcgtacgt tgattaagaa ggatttcgag gacgtatttg aaaaatatga tgttattgtt    1200

ggaccgacta caccgacacc tgcgtttaaa atcggtgaaa acacgaagga tccgctcaca    1260

atgtacgcaa acgatatctt aacgattccg gtcaaccttg ccggcgtacc gggaatcagt    1320

gtgccatgcg gattagcaga cggacttccg ctcggcctgc aaatcatcgg aaaacacttt    1380

gatgaaagca ctgtataccg cgttgctcat gcatttgaac aagcaacaga ccatcataaa    1440

gcaaaacctg aactgtaa                                                  1458

 

<210>32

<211>885

<212>DNA

<213>枯草杆菌

 

<220>

<223>甘氨酸tRNA合成酶，α亚单位

 

<400>32

atgaatattc aagacatgat tctaaccttg caaaagcatt ggtccagtca gggctgtgtg    60

cttatgcagg cttacgatgt agaaaaagga gccggcacga tgagcccgta tacatttttg    120

cgcagtatcg gtcctgagcc gtggaaagtg gcttatgtag agccttccag acgtccggca    180

gacggccgct acggggagaa cccgaacaga ctgtatcagc atcatcagtt ccaggtcatt    240

attaaaccgt cacctgataa cattcaagag ctgtatttgg attccttgcg tgctcttgga    300

attgatccgc ttgagcacga tattcgcttt gttgaagaca actgggagaa tccgtcttta    360

ggctgcgcgg gtctaggctg ggaagtttgg cttgacggaa tggaaataac acaatttacg    420

tatttccagc aggtcggggg attagagtgt aaacccgttt ctgtagagat tacgtatgga    480

attgagcgtc tcgcgtctta tatccaggat aaagaaaacg tgtttgactt ggaatggacg    540

tcagggttta cagtaaaaga tttattcatg atggctgaat atgagcattc tgtttatacg    600

tttgaaacat cagacgtcga tatgctgttc caattgttca gcacatatga aaaagaagcg    660

atcaagcaaa tggacaacgg acttgttcat ccagcatatg actatgtgct gaaatgctcg    720

cacactttca acctgcttga tgccaaaggt gcgatctctg ttaccgagcg gacgggctat    780

atcgcaagag tgcggaattt agctagaaaa gtagcaaaaa cctactatga ggaacgagaa    840

aaactagggt tcccaatgct taaaggggag ggttcttctc atgag                    885

 

<210>33

<211>2037

<212>DNA

<213>枯草杆菌

 

<220>

<223>甘氨酸tRNA合成酶，β亚单位

 

<400>33

atgagtaaac aggatttact tttagagatc ggattagagg aaatgccggc gcgctttttg    60

aatgaaagca tggttcagct tggcgacaag ctgacaggct ggcttaaaga aaaaaatatt    120

actcacggtg aagtgaaact cttcaataca ccgagacgtc ttgctgtgtt cgttaaggat    180

gtcgcagaaa agcaggatga tataaaagaa gaagcaaaag ggcctgcgaa aaaaattgcc    240

cttgatgcgg acgggaactg gacaaaagcg gcaatcggct tttcaaaagg ccaaggcgca    300

aatgtggaag acctgtacat caaagaagta aaaggcatag agtatgtatt cgtgcaaaaa    360

ttccaagccg gccaagaaac gaagtcgctt ctgccagaat tgagcggttt aattacaagc    420

ttgcatttcc cgaaaaacat gcgctgggga aatgaagatt tgcgttatat ccgaccgatc    480

aaatggattg tcgcattatt tggacaggat gtcattccat tttcgatcac aaacgttgag    540

tctggacgga caacacaggg acaccgtttc ctcggacatg aagtgtcaat tgaatcacct    600

tcagcttatg aagagcagct caaaggacag catgttattg ctgatcctag cgtccgaaag    660

caaatgattc aatctcagct ggaaacaatg gctgctgaaa acaattggag cattccagtt    720

gacgaagacc ttcttgatga agtgaatcat ttagtagaat acccgacagc tctttacggt    780

tcatttgaat ccgagtttct gtcaattcct gaagaagtgc ttgtcacgac aatgaaagag    840

catcagcgct acttccctgt caaagacaaa aacggtgacc tgctgcctca ctttatcaca    900

gtccgaaacg gcaacagcca cgcgattgaa aatgtggccc gaggcaatga aaaagtgctg    960

cgcgcacgtt tatctgatgc ttcattcttc tacaaagaag atcagaaact aaacattgat    1020

gcaaatgtga agaagcttga aaatatcgtt ttccatgaag agcttggttc tcttgctgat    1080

aaggttagga gagtcacatc aatcgcagag aaacttgccg ttcgtcttca ggctgatgaa    1140

gatacattaa aacatgtgaa gcgggctgct gaaatttcta aattcgacct tgtgacgcat    1200

atgatatatg aattccctga acttcaagga attatgggcg aaaagtatgc gagaatgctt    1260

ggcgaagatg aagctgtggc tgcggcagtt aatgaacatt atatgcctag atcagcgggc    1320

ggagaaacgc cttctacttt caccggagct gttgtagcaa tggcggataa gcttgacaca    1380

atcgcttcat tcttctctat cggcgtaatt ccgaccggtt cccaggaccc ttacggactg    1440

ccccgccaag caagcggtat tgttgcgatt ctccttgacc gcaactgggg aatttcattt    1500

gaagagctgc ttactttcgt tcaaaccgat aaagaaaatg aactgctgga tttcttcact    1560

cagcgcttga aatatgtctt gaatgctgaa caaatcagac atgatgtcat tgacgccgtg    1620

ctggaaagct ctgagcttga gccgtactct gcgctgcata aagcacaagt actggagcaa    1680

aagcttggtg cacctggctt taaggaaaca gccgaagcgt taggccgagt gatctctatc    1740

agcaaaaaag gagtccgcgg agacattcag cctgatctgt ttgaaaatga atacgaagca    1800

aaactgtttg atgcctacca aacagcgaag gaaaatctgc aggaaaactt cagcaaaaaa    1860

gattatgagg cggcgcttgc ttcacttgca gccttaaaag aaccgatcga tgcttacttc    1920

gatcatacaa tggttatagc ggataatgag tcattaaagg caaatcgttt agcgcaaatg    1980

gtaagcttgg cggatgagat caagtccttt gcgaatatga atgcccttat tgtaaaa       2037

 

<210>34

<211>1272

<212>DNA

<213>枯草杆菌

 

<220>

<223>组氨酰tRNA合成酶

 

<400>34

atgggatata acattccgag aggaacacag gatattctgc ctggagaatc agatcgctgg    60

cagtttgttg aacaaattat gagagacact tgccgcactt atcaatataa agaaatccgc    120

acaccgattt ttgagcatac agaactgttt gccagaggcg tcggagaatc aacggatatc    180

gtacaaaaag aaatgtatac cttcgaggac cgcaaaggca gaagcctgac gcttcgtccg    240

gagggaacag ctgctgcggt tcgcgctttt aatgaaaaca agctgttcgc aaatcctgta    300

cagccgacaa agctttatta tgtcgggccg atgttccgtt atgaacgtcc tcagacgggc    360

cgttaccgcc agttttatca gtttggaatt gaagcgattg gttcgaaaga ccctgcaatc    420

gacgctgaag taatggcgct tgcgatgagt atttatgaaa aagcaggttt agaaaacgtt    480

aagcttgtca taaacagtct cggcgatcaa gatagccgca aaagctacag agaagcgctc    540

gtgaaacact tcgagcctcg catcgaagaa ttttgttcag actgccagtc ccggctgcac    600

acgaacccgc ttagaatttt ggactgcaaa aaagaccgtg atcatgagct gatgaaatcg    660

gcaccttcga ttttgacata tttaaatgaa gaatcagccg cttattttga aaaagtgaaa    720

caatacttaa atgatcttgg catttcgtat gaaatcgatc cgaaccttgt gagagggctg    780

gattattaca accacaccgc atttgaaatt atgagcaatg cggagggctt tggcgcgatt    840

acgacacttg ccggcggcgg acgctacgac gggcttgtcg aacagatcgg cggacctgaa    900

gcaccgggca tcggatttgc gatgagcatc gaacgcttgc ttgccgcaat tgatgctgaa    960

aaaagagagc tgcctgttga taagggaatc gactgctata tcgtcacact cggcgaaaaa    1020

gcaaaggatt attctgtttc attggtgtac aaactgagag aagcaggcat ttccagtgaa    1080

atcgattatg aaaataagaa aatgaaaggc cagtttaaaa cagctgatcg cttaaaggcc    1140

agatttattg cgattttggg tgaagatgag cttgcccaaa acaaaatcaa tgtaaaggat    1200

gcacagacgg gcgaacagat tgaagtggca cttgatgaat ttatacatgt gatgaaggca    1260

aaccaaaagg ga                                                        1272

 

<210>35

<211>2763

<212>DNA

<213>枯草杆菌

 

<220>

<223>异亮氨酰-tRNA合成酶

 

<400>35

atggatttta aagacacgct cttaatgccg aaaacagatt tcccgatgcg tggaaatttg    60

ccaaaccgtg agcctgacat tcaaaaaaaa tgggaggaag aagatatcta ccgtcttgtt    120

caggaacgga cgaaagaccg cccgaaattt gttttacatg acggacctcc gtatgcaaac    180

ggcgacatcc atatgggcca tgcacttaac aagattttga aagacttcat tgtccgctat    240

aaatcaatga gcggctacaa cgcaccgtat gtgccgggct gggatacaca cggattgcca    300

attgaaacag ctctgacaaa aaacaaaaag gtcaaccgca aagaaatgtc agtagcggaa    360

ttccgcaaac tatgcgaaga gtacgcttgg aagcaaatcg agggacagcg tgagcaattc    420

aaacgtcttg gtgtccgcgg tgactgggaa aacccatatg tgacattaaa accggaatac    480

gaagcgcagc aaatccgcgt atttggtgaa atggcaaaac gaggctacat ttacaaaggc    540

cttaaaccgg ttaactggtc accttcaagt gagtctgctc tggctgaagc cgagatcgaa    600

tatcaagata aacgttcagc atctatttac gtcgcttttg gtgtaaaaga cggaaaaggc    660

gttcttgaaa acggcgagcg catcatcatt tggacaacaa cgccgtggac aattccggcg    720

aacctcggaa tctcagtgca ccctgatctt gagtacagcg tgattgcagt aggtgaagac    780

cgctttgttg tagcaagtgc cttagtcgaa aatgttgcat cggcatgcgg atttgatcag    840

tatgaagtga caagaacggt caaagggaaa gaccttgaga acattatcgc tgaacacccg    900

ctatatggca gagactctct cgttatgctt ggtgaacacg taacaactga tgccggaaca    960

ggctgtgttc atacagcgcc tggacatggg gaagatgact ttatcatcgg ccaaaaatac    1020

ggtttagatg tgctttgccc ggtcgatgaa aaaggtgtaa tgacaagcga agctcctggc    1080

tttgaaggca tgttctatga tgatgcaaac aaagcgatca cacagcagct tgatgaaaaa    1140

ggcgcacttg tgaagcttga attcattact cattcttatc cgcatgattg gagaacaaaa    1200

aaaccaacca ttttcagagc aacagcgcaa tggtttgcgt ctattaaaga tttcagatca    1260

gacctgctgg atgccattaa agaaaccaaa tgggttcctg aatggggcga gcagcgtttg    1320

cacaacatgg ttcgggaccg cggagactgg tgtatttcca gacagcgtgc gtggggtgtg    1380

ccgattccgg tattttacgc tgaaaacgga gaaccggtta ttacagatga aaccattgaa    1440

catgtttctg aattgttcag acagcatgga tcaaacattt ggtttgaaaa agaagcaaag    1500

gatcttcttc cggaaggctt tacgcatcct ggcagcccga acggcacatt tacaaaagaa    1560

caggatatca tggatgtttg gtttgattca ggctcttcac atcaagcagt gcttgaagaa    1620

cgtgatgacc tcgttcgccc ggctgatcta tacctagagg gatctgacca atatcgcggc    1680

tggtttaact cttctctttc tacagcagta gccgtaacag ggaaagcgcc gtataaaggt    1740

gtgctcagcc atgggttcgc actggatgga gaaggacgta agatgagtaa atcaatcggt    1800

aacgttgttg ttccggctaa agtcatgaaa cagcttggtg ccgacatctt aagattatgg    1860

gtatcttcag tggattatca ggcggacgtt cgcgtgtctg acgccattct gaagcaggtt    1920

gcggaagtat atcgtaaaat ccgcaacacg ttccgtttcc ttcacggcaa ccttttcgat    1980

tttgatccaa aaacaaatgc ggtggctgtc gaagatcttc gcgaagtgga tcagtatatg    2040

ctgattaagc tgaacaagct gattgataaa gtgaaaaaag cgtatgatga gtacgaattt    2100

gcggttgtgt atcacagcat tcataatttc tgcacaatcg aattgagctc attctacctt    2160

gattttgcaa aagatattgt ctacatcgag catgcggatc atccggatag acgcagcatg    2220

cagacagtat cctacgaaac gcttcttgca ttagtgaagc tttcagcgcc tatccttcca    2280

catacggcag acgaattgtg gtctcattta acatttgttg aagagcagag cgttcagttg    2340

accgatatgc cggaaacaat cacggttcca aacagtgaag cgactgaaga aaaatttgac    2400

cgctttatgg ctcttcgtga tgacgtgtta aaagcattag aaactgcgcg aaatgaaaaa    2460

attatcggta aatctttgga agcaaacctg aaattgtatc caaacaaaga aaacaaggag  2520

ctcttggctt ccataaaaga aaacctttct cagctgttta ttgtgtctga actgacaatc  2580

agcgaagaaa atgaagcgcc gaacgatgcg caaagctttg cgacgggtaa aatcgctgtc  2640

gagaaagcgg aaggcgaaat gtgtgagaga tctcgtgtga tttcaaaaga tgtaggggca  2700

aatccgaaat atcctacact ttcattacgc aacgctgaaa tcgttgaaaa atactatcaa  2760

aaa                                                                2763

 

<210>36

<211>2412

<212>DNA

<213>枯草杆菌

 

<220>

<223>亮氨酸-tRNA合成酶

 

<400>36

ttgagttttc agcacaaaga gatagaaaag aaatggcaga catattggct tgaaaacaaa    60

acatttgcca ctcttgataa taatgaaaaa caaaaatttt acgcgctgga catgtttcct    120

tatccgtctg gagctgggtt gcacgtcggc catcctgaag gatacacagc tacggatatt    180

ctgtcccgca tgaagcgcat gcagggctat gatgtccttc atccaatggg ctgggacgca    240

ttcggcctgc cagctgaaca gtacgcgctt gacacaggga acgaccccgc tgtgtttacg    300

aagcagaata ttgataactt ccgccgccaa attcaagcgc ttggcttctc atatgactgg    360

gatcgcgaaa tcaatacgac tgaccctgaa tactataaat ggacgcaatg gattttctta    420

aagctatacg aaaaaggcct tgcttacgtt gacgaagtgc ctgtaaactg gtgccctgcg    480

ctcggtactg ttcttgccaa cgaagaagtc attgacggca agagcgaacg cggcggccat    540

ccggtagaga gacgcccaat gaagcagtgg atgctgaaaa tcaccgctta tgcggacagg    600

ctccttgagg acttggaaga gcttgattgg ccggaaagca ttaaagatat gcagcgcaac    660

tggatcggcc gttcggaagg cgctcacgtt cattttgcta tagatggaca tgatgattcc    720

tttacagtgt ttacaacaag accagatacg ctgtttggcg ctacatacac tgtccttgcc    780

ccggaacacg cattggtgga aaacatcaca acggcagagc aaaaagaagc tgttgaagct    840

tatatcaaag aaattcaatc aaagagtgac ctagaacgca cagatcttgc gaaaacaaag    900

acaggcgtat ttacaggagc gtatgcgatc aatcctgtaa acggagaaaa actgccgatt    960

tggattgcgg attatgttct tgcatcatac ggaacaggtg ctgtcatggc agttccagga    1020

cacgatgagc gtgattttga attcgccaaa acattcggcc ttccggtgaa ggaagtcgta    1080

aaaggcggga acgttgagga agcagcctat actggcgacg gcgagcacgt gaactctgat    1140

ttcctgaacg gccttcacaa acaggaagcg attgaaaaag tgatcgcttg gctggaagaa    1200

acgaaaaacg gtgagaagaa agtgacgtac cgtcttcgtg actggctctt cagccgccag    1260

cgttattggg gcgagccgat tccggtcatt cattgggaag acggaacgtc aacagctgtc    1320

ccggaagagg agctgccgct gattttgcca aaaacggatg aaatcaaacc gagcggaacg    1380

ggcgaatcac cgcttgcgaa cattaaagag tgggtggaag tcacagaccc tgagacaggg    1440

aaaaaaggaa gaagagaaac gaatacaatg ccgcaatggg cgggaagctg ctggtatttc    1500

ttgcgctata ttgatccgca caatccggat cagctggcat caccagaaaa attggaaaaa    1560

tggcttccgg tcgatatgta tatcggcggt gcagaacatg ccgtgcttca ccttctgtat    1620

gcccgcttct ggcataagtt cctttatgat atcggcgtag tgccgacgaa agaaccgttc    1680

caaaagctgt acaaccaagg aatgattctc ggcgaaaaca acgaaaaaat gagtaaatct    1740

aaagggaacg ttgtcaatcc tgacgaaatc gtggcctctc acggtgctga tacgctgaga    1800

ttgtacgaaa tgttcatggg acctcttgat gcttcaatcg cctggtctga atcaggatta    1860

gacggtgcgc gccgtttcct tgaccgtgta tggcgcctat ttattgaaga cagcggtgag    1920

cttaatggaa aaatcgttga aggcgcgggt gaaacattgg agcgcgtcta tcatgaaacg    1980

gtcatgaaag tcacagacca ttatgaaggc cttcgtttca acacgggtat ttcccagctg    2040

atggtcttta ttaatgaagc ttataaagca acagaactgc cgaaagaata tatggaaggc    2100

ttcgtgaagc ttctttctcc tgtcgcgcca cacttagcgg aagagctatg ggagaagctt    2160

ggccattccg gcacaattgc ctacgaagct tggcctgtat atgatgaaac aaaacttgtg    2220

gatgatgaag ttgaaatcgt tgttcagctg aacggaaaag taaaagcgaa attacaggtt    2280

cctgccgatg caacgaaaga acagctggaa cagcttgctc aagcagatga aaaggtcaaa    2340

gagcagcttg aaggcaaaac gattcggaaa atcatcgcgg tgcctgggaa gcttgtcaat    2400

attgtggcaa ac                                                        2412

 

<210>37

<211>1497

<212>DNA

<213>枯草杆菌

 

<220>

<223>赖氨酸tRNA合成酶

 

<400>37

atgagtcaag aagagcataa ccatgaagaa ttgaatgatc agctgcaagt cagacgcgat    60

aaaatgaatc agctgagaga taacggcatc gatccattcg gcgcacgttt tgaaagaact    120

catcagtctc aagaagttat ttcggcatat caagatctaa ccaaagaaga gttagaagaa    180

aaagcgattg aagttacaat cgcaggccgc atgatgacaa aacgcggcaa aggaaaagcc    240

ggctttgccc atcttcagga tttagaaggc caaatccaaa tctacgtaag aaaagacagt    300

gtcggtgacg accaatatga aatcttcaag tcttctgacc tcggtgatct tatcggcgta    360

accggaaaag tcttcaaaac aaatgtaggc gaattgtctg ttaaagcaac ttcctttgaa    420

ttgctgacaa aagcgcttcg tccgcttcct gacaaatacc atggtttaaa agacgttgag    480

cagcgctacc gtcagcgcta tctggatctt atcgtaaacc cagacagcaa acatacgttc    540

attacacgaa gcaagatcat tcaagctatg agaaggtacc ttgatgatca tggatactta    600

gaagtagaaa cacctacaat gcacagcatt cctgggggag cttctgcacg tccgtttatc    660

actcaccaca acgcgttaga cattccactc tatatgcgta ttgctatcga actgcaccta    720

aaacgtctaa ttgtcggcgg tttagaaaaa gtatatgaaa tcggccgtgt tttccgtaac    780

gaaggtgtct ctacacgcca taaccctgaa tttacaatga ttgagttata tgaagcatat    840

gcggactata aagatatcat gagcttaact gaaaaccttg tcgctcatat cgcccaagaa    900

gtgcttggca caactacgat tcaatacggg gaagagcaaa tcgaccttaa accggagtgg    960

aaaagaatcc atatggttga cgcagtcaaa gaagcgaccg gcgttgattt ctgggaagag    1020

gttactgttg agcaggcgcg tgaatatgca aaagaacatg aagtagaaat taaagactct    1080

atgacagtag gccatatcat caacgaattc ttcgaacaaa aaattgaaga aacgcttatt    1140

cagccaacgt ttatttacgg gcatcctgta gaaatttctc ctcttgctaa gaaaaaccct    1200

gaggacccgc gttttacaga ccgttttgag ctgtttatcg ttggccgtga acatgccaac    1260

gcgtttacag agctgaatga tcctattgat caaagagaac gctttgaagc gcaattaaaa    1320

gagcgtgaag ccggtaatga tgaagctcat ttaatggatg aagactttgt tgaagctctg    1380

gaatacggta tgccgccaac aggaggttta ggcatcggta tcgaccgtct ggttatgctg    1440

ctgacgaatg ccccttctat tcgcgatgtg ctgttattcc cgcaaatgag acaacgc       1497

 

<210>38

<211>1176

<212>DNA

<213>枯草杆菌

 

<220>

<223>组氨酰-tRNA合成酶，hisZ

 

<400>38

atgtttatgt ttgaaaaacc gcacggcatg agagatacac tgcccggttt atacgaaacg    60

aaaaaaaagg tgagacgatc gttaaccgat ttgattgata aatggggata tcaatttatg    120

gaaacgccga cactggagtt ttacgatacc gttggcgtcc agtcagcaat tgaagagcag    180

cagctgttta agctacttga tcaggacggc aagacattgg tgcttcgccc ggatatgacg    240

gggccgattg caagggtggc ggcatcgaag cttctgaaac acggtcatcc gctaagagtc    300

ggctatgcgg caaatgtatt cagggctcag gagcgtgaag gcggacgtcc ggctgagttc    360

gagcaggtcg gagtggagtt aatcggtgac ggcacgacga gcgcggatgc ggaggtcatt    420

gctttagtcg tcggggcatt aaaaaacgct gggctggcat cctttaaaat tgcaattggc    480

catgccggca ttgcggatgc tttgtttgtt gaggtgctcg gaaacgttga acgagctgat    540

gtgctgcgga ggttcttata tgaaaagaac tacgtcggct acagagagca tgtcaagtct    600

ctcccgcttt cctccattga taaaagcagg ctgcttgagc tccttgaact gcggggcggt    660

atagaagtat gcggacgtgc cgaggaaatc gtcgattctg cgcaaggaaa aagcgtggtt    720

gatgagctga aggcgctgtg ggacattctt gaggattacg gatgtacgga aaatgtccgc    780

ctggatctga atatggtcag ccacatgagc tattacacag ggattttatt tgaagtgtac    840

gccgagaatg tcggttttgt cattggaagc ggcggccgtt acaacaagct gctgggccat    900

tttgattcac ctgcaccggc aacaggcttc gggcttcgga tcgaccggct gattgaagcc    960

cttcatatga aggacgaacc ttgtgaaata gacgctgtta ttttcagcaa agagcagcgg    1020

gcgcaagcca tcgcttatgc gaatgaagaa cgcatgaaag ggaacaaagt ggttcttcaa    1080

gatttatcgg gaatagaaaa tatcgaccag atgacaaaat cttttgcaaa cgtcacttat    1140

tttatcggtg ccagaaagga agagcaaaat gggtaa                              1176

 

<210>39

<211>1992

<212>DNA

<213>枯草杆菌

 

<220>

<223>甲硫氨酰-tRNA合成酶

 

<400>39

atgccgcaag aaaacaatac attttacatt acaacaccga tttattatcc gagcggaaaa    60

ttacatatcg gccatgcata tacgacagtc gcaggagatg caatggcacg ttacaaaaga    120

ttaaaagggt tcgatgttcg ctatttaacg ggaacggacg agcatggaca aaagatccag    180

caaaaagctg aacaggaaaa cattacacct caggagtatg tggatcgcgc agcggcagat    240

attcaaaaac tgtggaagca gcttgaaatc tcaaacgacg actttatccg cacgacagaa    300

aaacggcata aagttgtcat tgaaaaagtg tttcaaaagc ttcttgataa cggggacatc    360

tatcttgatg agtatgaagg ctggtacagc atccctgatg aaacgttcta cacggaaact    420

cagctcgttg atattgagcg gaatgaaaag ggagaggtca tcggcggaaa aagccctgac    480

agcggtcacc cagttgaatt gatcaaagag gaatcttatt tcttccgcat ggggaaatac    540

gcggatcgtc ttctgaaata ctatgaagaa aacccgacat tcattcagcc agaatcacgc    600

aaaaacgaaa tgattaataa ctttatcaaa cctggacttg aggatttggc agtatcacgt    660

accacttttg attggggcgt gaaggtgccg gaaaatccaa agcatgttgt atatgtttgg    720

attgacgcac tatttaacta tttaacggca ctcggttatg atacagaaaa tgatgagctt    780

tatcaaaaat attggcctgc cgatgttcat ttagtcggta aggagattgt acgattccat    840

actatttact ggccaattat gctgatggcg ctggatcttc cgctgccaaa gcaagtattc    900

gcgcatggct ggcttttgat gaaagacgga aaaatgtcga aatcaaaagg aaacgttgta    960

gatccggtta cattaattga acgctatggt ttagacgaac ttcgctatta cttgcttcgc    1020

gaagtgccgt tcggatcaga cggtgttttc acgccggaag gatttgttga gcgaatcaac    1080

tatgatttag cgaatgattt aggaaatcta ttgaatcgta ctgttgcgat gattaataag    1140

tattttgacg gacaaatcgg ttcttacaaa ggtgctgtta cggaatttga ccatacgctc    1200

acttctgttg ctgaagaaac agtgaaagct tatgagaaag caatggaaaa tatggagttc    1260

tcggtagcac tttcgacttt atggcagctc atcagccgca caaacaaata cattgatgag    1320

acagctccat gggtgcttgc gaaagatccg gcaaaagaag aagaattgcg atcagttatg    1380

tatcatctcg ctgaatcatt gcgtatttca gcggtactgc ttcagccatt cttaacaaaa    1440

acacctgaaa aaatgttcga gcagctgggc attactgatg aatctttaaa agcttgggac    1500

agcattacag ctttcggcca gctgaaagat acaaaagtac aaaaaggcga gccattgttc    1560

cctcgtttag aggcagaaga agaaattgct tacatcaaag ggaaaatgca aggttcagca    1620

ccagcgaaag aagaaacaaa agaagaagag cctcaagagg tcgatcgttt acctgaaatt    1680

acgattgatc aatttatgga tgtagagctt cgcgtagctg aggtcattga ggcagagcca    1740

gtgaaaaaag cagaccgttt attgaagctg cagcttgatc ttggttttga aaagcgccaa    1800

gtggtatccg gcattgcgaa gcattatacg cctgaagagc ttgttggaaa aaaactcgtt    1860

tgtgtaacaa atctaaaacc ggttaaactc agaggagagc tttctcaagg tatgatcctt    1920

gcaggagaag cagacggcgt tttaaaggtc gtatctatcg atcagtcgtt accaaaaggc    1980

acaagaatta aa                                                        1992

 

<210>40

<211>1032

<212>DNA

<213>枯草杆菌

<220>

<223>苯丙氨酰-tRNA合成酶α亚单位

 

<400>40

atggaagaaa agctaaaaca gctggaacaa gaagctttag aacaagtaga agcggcaagc    60

tcattgaagg ttgtcaatga tattcgggtg caatatctcg gaaaaaaagg gccgattaca    120

gaagtgctgc gcggaatggg caagctttct gctgaggaac gtccaaaaat gggggcgctc    180

gcgaacgaag taagggagcg tattgccaat gcgattgctg acaaaaacga gaagcttgaa    240

gaagaggaaa tgaaacagaa gcttgcagga cagacaattg acgtcacgct gccggggaac    300

cctgttgcag tcggcggccg ccatccgctc actgttgtca ttgaagaaat tgaagattta    360

tttatcggta tgggctacac agtcgaggaa gggccagagg ttgaaacgga ttactacaac    420

ttcgaatcgc tcaatcttcc gaaagaacac ccagcgcgcg atatgcagga cagcttttac    480

atcacagagg aaactttgat gagaacgcaa acttctcctg tccaaacacg tacgatggaa    540

aagcatgaag gcaaaggtcc cgttaaaatc atttgcccgg gtaaagtata tcgccgtgat    600

aacgatgatg cgacgcactc tcaccaattt atgcaaattg aagggcttgt cgttgacaaa    660

aacatcagca tgagtgattt aaaaggaacg cttgaacttg ttgcgaaaaa aatgttcggg    720

caagaccgtg aaatcagact ccgcccaagc ttcttcccgt ttactgagcc ttcagtagaa    780

gtggatgtga catgctttaa atgcggtggg aacggctgct cagtatgtaa aggaacaggc    840

tggattgaaa tcctcggtgc cggaatggtt cacccgaacg tgcttaaaat ggctggcttt    900

gatccgaagg aatatcaggg cttcgcattc ggaatgggtg ttgagcgcat cgcgatgctg    960

aaatatggca ttgatgatat ccgccacttc tatacaaacg atgtcagatt tatttcgcag    1020

tttaaacagg cg                                                        1032

 

<210>41

<211>2412

<212>DNA

<213>枯草杆菌

 

<220>

<223>苯丙氨酸tRNA合成酶，β亚单位

 

<400>41

atgtttgttt cttataaatg gttagaggat tatgttgatt taaaaggcat ggacccggct    60

gttcttgctg aaaaaattac aagagccggt attgaggttg aaggaattga atacaaagga    120

gaaggcatca aaggcgttgt catcggccat gtgctggagc gcgagcagca cccgaatgct    180

gataagctga ataagtgcct tgtggatatc ggagctgaag cccctgtaca aatcatttgc    240

ggcgcgccga atgtggataa gggacaaaaa gtcgcagttg caacagtcgg agcggtgctg    300

ccgggcaatt tcaaaatcaa aaaagccaag cttcgcggtg aagaatcaaa cggcatgatc    360

tgttccttac aggagcttgg tatcgaaagc aaacttgtgg cgaaggagta tgcagaaggc    420

attttcgtat tcccgaatga cgctgaaaca ggaagcgatg ccttagcggc tttacagctt    480

gacgatgcga ttcttgagct gggtttaacg ccaaaccgcg cggatgccat gaacatgctt    540

ggtgttgctt acgaggttgc ggcgatttta gacactgagg taaagcttcc ccaaacggat    600

tacccggctg cttcagaaca agcgtctgat tacatttcag tcaaaattga agatcaagaa    660

gcgaacccgc tgtacactgc aaaaatcatt aaaaatgtca cgattgctcc gtcaccgctt    720

tggatgcaga caaagctgat gaatgcaggc attcgtccgc acaacaacgt cgttgacatc    780

acaaattttg tcctgttgga atacggacag ccgcttcatg cgtttgatta tgacagattt    840

ggctctaagg aagtcgtagt aagaaaagca gctgagaatg aaatgatcgt aacacttgat    900

gatcaagaac gtaagctgtc tgccgatcac cttgtcatta caaacggaac gaaagcgcag    960

gccgttgccg gtgtcatggg aggagcagag tcagaggttc aggaagatac gaaaaccatt    1020

ttgcttgagg ctgcgtattt caacgggcag aaggttcgca aggcttccaa agaccttggt    1080

ttgagaagtg aatcaagcgt aagatttgaa aaaggaattg atccggcacg cgtacgtctt    1140

gcagcagaac gggctgcgca gctgatccat ctgtatgccg gcggtgaggt gcttgctgga    1200

acggttgagg aagatcacct gacaatcgaa gcaaataaca ttcacgtatc tgctgacaaa    1260

gtgagcagcg ttctaggcct gacgatcagt aaagaagaac tgatcagcat ttataaacgt    1320

ctcggtttta cggtcggtga agcggatgat cttctcgttg tgactgtccc atcacggcgc    1380

ggtgacatta caatagaaga ggatttaatc gaagaagcgg caagactgta cggctacgat    1440

aacattccgt ctacgcttcc tgagacagcg ggaactacag gcggattaac gccatatcag    1500

gcaaaacgcc gtaaagtcag acgcttcctt gaaggcgcag gcttatcaca agccatcact    1560

tactcactga caaacgagaa gaaagcgaca gcgtttgcga ttgaaaaatc actgaatact    1620

gtgcttgcgc ttccaatgag tgaagaaaga agcattctca gacacagtct tgttccaaat    1680

ctgcttgatt ctgtttctta caatcttgcg aggcagactg actcagttgc actgtacgaa    1740

gttggctccg ttttcctaac gaaggaagag gacacaaaac ctgttgaaac agaacgcgta    1800

gcaggagctg ttaccggatt atggcgcaag cagctatggc agggtgaaaa gaaaccagtt    1860

gatttctttg ttgtcaaagg aattgtggaa gggctgttag acaaactcaa cgtcctagac    1920

agcattgaat ttgtacagtc tgaacgcaaa cagctgcatc cgggcagaac agcgaacatt    1980

ttattgaatg gttctctgat cggcttcatc ggccaagtcc atccttcatt ggaaaaagaa    2040

ctggatataa aggaaacata cgtatttgag ctcgatcttc atgcgttgct cgcagcagaa    2100

acagcaccgc ttgtttacac ggcgattcca aaatatccgt ctgtgacacg tgatatcgct  2160

cttgtaacag ataaaaccgt cacaagcgga cagctcgaga gcgtcattaa agaggccggg  2220

ggcaagcttc tgaaagaggt aaccgtattt gacgtatacg aaggagagca tatggaggaa  2280

ggcaagaagt cagtcgcttt ctcactccag tatgtcaatc ctgaacaaac actgactgaa  2340

gaagaagtga caaaggcgca cagcaaagtg ctgaaagcgt tagaagacac atatcaagct  2400

gttttaagag gc                                                      2412

 

<210>42

<211>606

<212>DNA

<213>枯草杆菌

 

<220>

<223>相似于苯丙氨酰-tRNA合成酶，ytpR

 

<400>42

atgaacgctt tttataataa agaaggtgtg ggagacacgc tcctgatctc tcttcaagat    60

gtgacacgcg aacaattagg ctatgaaaaa cacggcgacg tcgtcaaaat tttcaataac    120

gaaacaaaag aaacaacggg cttcaacatt ttcaatgcgt cttcttactt gaccattgat    180

gaaaacggcc ctgttgcgct ctcagaaaca ttcgtgcaag atgtgaatga gattttaaac    240

agaaacggcg ttgaagaaac attagtcgtt gatttatctc cgaagtttgt tgtgggttat    300

gtagaatcaa aagaaaaaca tccgaatgcg gataaattaa gcgtatgtaa agtcaacgta    360

ggagaagaaa cgcttcagat cgtctgcggc gcgcctaacg ttgaccaagg ccaaaaagtt    420

gtcgttgcca aagtcggtgc tgtgatgcct agcggacttg tcattaagga tgcagagctt    480

cgtggcgttc cgtcaagcgg gatgatctgc tcagcgaaag agcttgattt gccggatgcc    540

cctgctgaaa aaggaatcct tgtgttagaa ggagactatg aggcgggaga cgcatttcag    600

ttttag                                                               606

 

<210>43

<211>1692

<212>DNA

<213>枯草杆菌

 

<220>

<223>脯氨酰-tRNA合成酶

<400>43

atgagacaaa gcttgacgct tattcctacg ctccgtgaag ttccagctga tgccgaagca    60

aaaagtcatc agcttcttct gagagcagga tttatcagac agaatacgag cggggtatac    120

agctatatgc ctcttgcgta taaggtgatt caaaacattc agcagattgt tcgagaggaa    180

atggagaaaa ttgatgccgt agaaatgctc atgcccgcat tgcagcaggc agagacatgg    240

caggaatcag gcagatggta tacgtatggt cccgaactga tgagactaaa agaccgtcat    300

ggccgtgaat ttgctttagg ggcaacgcat gaagaggtta tcacttcgct tgttcgcgat    360

gaggttaaat cttataagcg tctccctctg actctttatc aaattcagtc taagttcaga    420

gatgaaaaac gtcctcgctt cggtttgtta agaggccgcg aatttattat gaaggatgcg    480

tactctttcc atgcatctgc agagagcctg gatgaaacgt atcaaaaaat gtacgaggcc    540

tattctaata tttttgcccg ctgcggcatt aatgtaagac ctgttatcgc tgattcaggc    600

gcaatgggag gaaaggatac gcacgaattt atggcacttt ctgcgatcgg agaggatacg    660

attgcgtatt ctgatgaatc acagtacgcg gctaatatcg agatggctga agttcttcac    720

caggaagttc cttcagatga agagcctaaa gctctagaga aggttcatac gcctaacgtg    780

aaaacaatcg aagaactgac tgcgttctta caggtttcgg ctgaagcgtg cattaagtca    840

gtattgttta aagctgatga ccgttttgtc ttagtgcttg taagagggga tcatgaagtt    900

aacgatatta aagtgaaaaa cttgcttcat gcagaagttg tagagcttgc tacacatgaa    960

gaggtcattc agcagctcgg aacagagcca ggctttgtag gccctgtcgg tattcatcag    1020

gatgtggaag tatatgccga tcaagctgtg aaagcaatgg ttaatgctgt tgccggggca    1080

aatgaaggag atcatcatta taaaaatgtc aatgtgaatc gtgacgcgca aattaaagaa    1140

tttgctgatc ttcgttttat taaagaaggt gatccttcac cagacggcaa gggaacgatc    1200

cgttttgctg agggaatcga agtcggacaa gtctttaagc tcggaacacg ctattcagaa    1260

gcgatgaatg cgacatattt agatgaaaac ggacgcgcgc agccaatgct gatgggctgt    1320

tacggaatcg gtgtgtcaag aacgctttct gctattgctg aacagcatca cgacgaaaaa    1380

ggcttaatat ggccaaaaag cgttgcgccg tacgatcttc atattcttgc tttgaacatg    1440

aaaaacgatg ggcaaagaga gcttgctgaa aagctgtatg ccgatttaaa agcggaaggc    1500

tatgaagtgc tctatgatga ccgtgctgag cgtgccggcg taaaattcgc tgattcagat    1560

ttaatcggcc ttccaatccg catcactgtc ggaaaacgag ctgacgaagg aatcgtcgaa    1620

gtgaaaattc gtcaaactgg tgagtcaact gagatttcag tagacgaatt atctgcgttt    1680

atcagcaagc ag                                                        1692

 

<210>44

<211>1275

<212>DNA

<213>枯草杆菌

 

<220>

<223>丝氨酰-tRNA合成酶，

 

<400>44

atgcttgata cgaaaatgct gagagcaaat tttcaagaaa ttaaagcaaa gcttgtacac    60

aaaggcgaag acttaactga ttttgataag tttgaggcgc tggatgatag acgaagagag    120

cttatcggca aggttgaaga gttaaaagga aaacgaaatg aagtttctca gcaggttgct    180

gtgctgaagc gtgagaaaaa agacgcggat cacattatta aagaaatgcg tgaagtcggc    240

gaggaaatta aaaagctcga tgaagaatta cggacagtgg aagctgagct tgatacaatc    300

ctgctctcaa tcccgaatat tccgcatgag tctgtacctg tcggtgaaac agaagacgac    360

aacgtagaag tgcgtaaatg gggtgaaaag ccttcatttg cttatgagcc gaagccgcac    420

tgggatattg cggatgagct gggtattctg gattttgaac gtgctgccaa agtaacagga    480

agccgtttcg tgttctataa aggcttaggt gctcgtctgg agcgtgcgct ttataacttt    540

atgcttgatc tgcatgtgga tgagtataac tacactgaag tgatcccgcc atatatggta    600

aaccgcgcaa gcatgacggg aacggggcag cttcctaaat ttgaagagga tgcatttaaa    660

atcagagaag aagattattt cttaattcca acggcggaag tgccgattac aaacatgcat    720

cgcgatgaaa tcctttcagg tgacagcctg ccgatcaact atgcggcatt cagtgcttgc    780

ttccgttctg aagctggttc agcaggacgt gacacacgcg gattaattcg tcagcaccaa    840

tttaataaag ttgagcttgt aaagtttgtg aagcctgaag attcttatga agaattagag    900

aaacttacaa accaagcaga acgggttctt cagctgcttg agcttccata ccgtgtcatg    960

agcatgtgta cgggtgactt aggctttacg gctgcgaaaa aatacgatat cgaagtttgg    1020

attccaagcc aagacacata tcgagaaatc tcttcttgca gcaacttcga agcgttccag    1080

gcgagacgtg cgaatattcg tttcagacgt gaagcgaaag gcaagcctga gcatgtacac    1140

acactgaacg gctcaggact ggcggttgga agaacagttg ctgctatctt agaaaattat    1200

cagcaggaag acggaagcgt tgtgattccg aaagtgcttc gtccttatat ggggaataga    1260

gaagtaatga aaccg                                                     1275

 

<210>45

<211>1929

<212>DNA

<213>枯草杆菌

<220>

<223>苏氨酰-tRNA合成酶，主要

 

<400>45

atgtcagata tggtaaaaat cacatttcct gatggagcag tcaaggagtt tgcgaaagga    60

acaacaacag aagatatcgc ggcatccatc agtccgggat taaagaaaaa gtcattagcc    120

ggaaaactga acggaaaaga aatcgatttg agaacgccga tcaatgaaga cggtacagtg    180

gaaatcatta cagaaggctc agaagaaggt cttcaaatta tgcgccacag tgcggctcac    240

ctgctggctc aagcgattaa acgcatctac aaggatgtta aattcggcgt cggtccggtt    300

atcgaaaacg gtttttacta cgatgtagaa atggacgaag cgattacacc ggaggatctg    360

ccgaaaatcg agaaagaaat gaaaaaaatc gttaatgcga accttccgat cgttcgaaaa    420

gaagtcagcc gtgaagaagc gaaagcccgt tttgcggaaa tcggcgacga cctgaagctt    480

gaactattgg atgcgattcc tgaaggagaa accgtttcga tctatgagca aggcgaattc    540

tttgacctgt gccgcggcgt ccatgttcct tcaaccggaa aaatcaaaga atttaagctg    600

ttaagccttg caggcgcata ctggcgcggt gacagcaaaa accaaatgct tcagcgcgta    660

tatggtacag ctttcttcaa aaaagctgat cttgaagagc atcttcgtat gctagaagaa    720

gcgaaagaac gcgaccacag aaagcttggc aaagaattaa agctgttcgc gaactctcaa    780

aaagtcggac aaggcctgcc gctttggctg ccaaaaggcg caacaatccg ccgcgtcatc    840

gagcgctaca ttgtcgataa agaaatcagc ctcggctatg agcacgtata cacacctgtg    900

ctaggcagca aagagctgta tgaaacatca ggacactggg atcattatca ggaaggcatg    960

ttccctccga tggaaatgga caatgaaaca cttgtattgc gtccgatgaa ctgtccgcac    1020

catatgatga tttacaaaca agacattcac agttaccgcg agcttccgat tcgtattgca    1080

gagcttggaa cgatgcaccg ctatgaaatg tcaggtgcgc tgtcaggact tcaacgggta    1140

cgcggaatga cgttaaatga tgcacacatc tttgtgcgcc cggatcaaat taaggatgag    1200

tttatccgta cagtccgttt aatccaggat gtttatgaag acttcggttt aagtgattac    1260

acattccgtc tgtcttaccg cgatccggaa gatacagaga aatattttga tgacgatgaa    1320

atgtggaaca aagcgcaatc catgctgaaa gaggcaatgg atgaaatcgg ccacgactat    1380

tacgaagcag aaggtgaagc ggcattctac ggacctaaac ttgatgttca ggtgaaaact    1440

gcgatcggaa aagaagaaac actgtctacg gttcagcttg atttcttatt gccggaacgt    1500

ttcgacctga catacatcgg tgaggacggc aagcagcacc gtccggttgt cattcacaga    1560

ggtgtcgttt caacaatgga acgctttgtt gctttcttaa tcgaagaaca caaaggcgcg    1620

ctgccgacat ggcttgcacc ggttcagttc caagtcatcc cggtttctcc ggctgtgcat    1680

ttagactacg cgaaaaaagt gcaggaacgc ctgcaatgtg aaggcctgcg tgttgaagtc    1740

gacagccgcg atgaaaaaat cggctacaaa atccgtgaag cgcaaatgca aaaaatcccg    1800

tacatgctgg tggtcggtga ccaagaagca gaaaacggag cggtaaacgt gcgtaaatac    1860

ggagaacaga actctgaaac catttcactt gatgagtttg tgaaaaaggc agtagctgaa    1920

gcgaaaaaa                                                            1929

 

<210>46

<211>1914

<212>DNA

<213>枯草杆菌

 

<220>

<223>苏氨酰-tRNA合成酶，次要

 

<400>46

atgagcaaac atgtacacat tcagcttccg gacggacaga tccaggaata tccgaaaggc    60

atcacaatca aagaagcggc tggttcgatc agttccagtc tgcaaaagaa ggcggccgca    120

ggtcaggtca acggcaagct tgttgatctc agtttcaagc tggaggagga tgctgagctt    180

tcgattgtca cactcgattc acaagaaggc ttgcaggtcg ttcgccacac aacagcgcac    240

gtgctggccc aagcagtaaa acggctgtac ggcgaagtgt cattgggggt agggcctgtg    300

attttagacg gcttctacta tgacatgaag ctggggaaaa gcttggcatc aggagactta    360

gaggccatcg aaaaagaaat gaaaaacata ataaatgaga accttgaaat caaacgtata    420

gaggtttctt acgaagaagc tgaagagctg tttgcacaaa aagacgagcg gctcaagctt    480

gagattttaa aggatattcc gcgcggggag gatatcacac tgtaccagca aggggaattc    540

gttgacctgt gccgagggcc gcatcttcct tctacaggga tgatcaaggc gttcaaactg    600

acaagagtat caggcgctta ttggcgcgga gacagcaaaa atgaagtcct gcagcgggtg    660

tacggggttg cgtttcaaaa gaaaaaagat ttggatgcgc acctgcatat gctagaagaa    720

gcggcaaaac gagaccatcg caagctcggc aaacagttag ggctgtttat gttttctgaa    780

gaagcgccgg ggatgccgtt ttatttgccg aaagggcaga ttgtccgcaa tgagctggag    840

cgcttctcgc gtgagctgca aacaaatgcc ggctacgatg aggtgcgtac gccgtttatg    900

atgaatcagc ggttatggga gcagtcaggc cattgggacc attatcgcga caatatgtac    960

ttttcagaag tggatgatac aagattcgca atgaagccga tgaattgccc cggccacatg    1020

ctcatcttta aaaacagcct gtattcttat cgggatctgc cgattcgcat ggcggaattc    1080

ggacaggtgc accgccatga atacagcggc gctttaaacg gaatgcttcg cgttcggacg    1140

ttctgtcagg atgacgccca tattttcgtt cgggaggatc agattgagag tgagatcaaa    1200

gaagcgattc ggctgattga tgaggtatat cggacatttg gtttcgagta ttctgttgag    1260

ctttcgactc gcccggagga ttcattaggc gatgacagcc tttgggaagc gtcggaacgt    1320

gccttagcac gcgtccttga ggagcttggc ctctcttatg agatcaatga aggcgatggg    1380

gcgttttacg ggccgaaaat tgatttccat ataaaagatg ccctgaaacg gagccaccaa    1440

tgcgcgacaa ttcagcttga ttttcaaatg ccggaaaaat ttgatttaac atatatcaac    1500

gaactcaatg agaaggttcg tcccgttgtc atccacagag cggttttcgg ctcaatcgac    1560

cgtttcttcg gcattttgat cgagcattac ggtggggctt ttccagtctg gctcgcaccg    1620

atccaggttc aaatcatacc ggtttcgcac gttcacttag actattgcag aaaagtgcag    1680

gcggagctga agcaggcggg gataagagcc ggcattgatg agcgcaatga gaagctcggc    1740

tataaaatca gagaatcgca ggtgcaaaaa attccgtacg tgctggtgct tggagatcat    1800

gaggagcagg agaatgcggt aaacgtccgc cgattcggac atcagcagaa tgaacacgtt    1860

cctttccaaa cttttaaaga taaacttgtg aaacaggtgg aaaatcgagg catg          1914

 

<210>47

<211>990

<212>DNA

<213>枯草杆菌

 

<220>

<223>色氨酰-tRNA合成酶

 

<400>47

atgaaacaaa cgattttttc aggcattcag ccaagcggct cagtgacgct cggcaactat    60

atcggtgcaa tgaagcagtt tgtcgaactg cagcatgatt ataacagcta tttttgcatc    120

gtcgatcagc atgcgataac tgttcctcaa gaccggcttg agcttagaaa gaatatccgc    180

aatctcgcgg cgctttactt agctgtcgga cttgatccag aaaaagcaac attgtttatt    240

cagtcagagg tccccgcaca tgcgcaggcc ggatggatga tgcagtgtgt cgcctatatc    300

ggcgagcttg agcggatgac tcaatttaag gacaaatcca aaggcaatga agctgtcgtc    360

tccggcctgt taacatatcc gccgctgatg gccgctgata ttctgctgta cggaacggat    420

cttgtacctg tcggcgagga tcaaaagcag caccttgagc tgacgcggaa tcttgcagaa    480

cgcttcaaca aaaaatacaa cgacatcttt acgattccgg aagtgaaaat tccaaaagtc    540

ggtgcacgta tcatgtctct gaatgatccg ctgaagaaaa tgagcaaatc tgatccgaat    600

cagaaagctt atattacatt gctggatgag ccgaagcagc ttgaaaagaa aatcaaaagc    660

gcagtaacgg attctgaagg cattgtcaaa tttgataagg aaaacaaacc gggcgtttcc    720

aaccttctta caatttattc aatcctcggc aatacgacaa ttgaagagct tgaagcaaag    780

tacgaaggaa aaggctacgg cgagtttaaa ggtgatttgg cagaagtcgt agtgaacgca    840

ttaaaaccga tccaggaccg ctattacgag ctgatagaat ctgaagaatt agaccggatt    900

cttgatgaag gcgcggaacg agcgaatcgg acagcaaaca aaatgctgaa aaaaatggag    960

aatgccatgg gtcttggaag aaaaagacgc                                     990

 

<210>48

<211>1266

<212>DNA

<213>枯草杆菌

 

<220>

<223>酪氨酰-tRNA合成酶，主要

 

<400>48

atgactaact tacttgaaga cttatccttc cgcggattga ttcagcaaat gacagatgaa    60

gaagggttaa ataaacagct gaatgaagaa aaaatccgct tgtactcagg ctttgaccct    120

acagcagaca gcttgcatat cggacacctg ctgcctattt taacacttcg ccgttttcag    180

cttgcagggc atcatccgat tgcgcttgtg ggcggcgcga cgggcctcat cggtgatcca    240

agcggaaaaa aagcagagcg tacattaaac actgctgaca tcgtatccga atggtcccaa    300

aaaatcaaaa accagctgtc cagatttcta gattttgaag cagcagaaaa cccagctgtc    360

atcgcgaaca actttgactg gatcggcaaa atgaatgtga tcgatttcct tcgtgacgtt    420

ggtaaaaatt tcggcatcaa ttacatgctg gcaaaagata cggtcagctc aagaattgaa    480

tccggcatct cgtacacgga attcagctac atgattcttc aatcttatga tttcttaaat    540

ctttacagag acaaaaactg taaactgcaa atcggcggaa gcgatcagtg gggcaacatc    600

acagcgggtc ttgaactgat cagaaaatca gaagaagaag gagcaaaagc gtttggccta    660

acgattccgc ttgtcacaaa agcagacggc acgaagttcg gaaaaacgga aggcggcgcg    720

atctggcttg ataaagaaaa aacatcgcca tatgaattct atcaattctg gatcaacaca    780

gacgaccgtg acgttgtcaa atacttgaaa tacttcacgt tcctttcaaa agaggaaatt    840

gaagcatacg ctgaaaaaac agaaacggcg ccagaaaaac gtgaagcgca aaaacgcctg    900

gcagaagaag tgacatcact tgttcacgga cgcgaggcgc tggagcaagc catcaacatc    960

tcccaagcgc tgttcagcgg caatattaaa gagctttctg ctcaagacgt aaaagtaggc    1020

tttaaagatg ttccttctat ggaagttgac agcacccaag agctttcact tgtagatgtg    1080

ttggtgcaat ctaaattatc tccttctaaa cgccaagcgc gtgaagacat ccaaaacgga    1140

gctgtttaca ttaacggtga acgccagacg gaaataaatt ataccctatc aggtgaagac  1200

cgcatcgaaa accaatttac tgttctgcgc cgcgggaaga aaaaatactt ccttgtgacg  1260

tataaa                                                             1266

 

<210>49

<211>1239

<212>DNA

<213>枯草杆菌

 

<220>

<223>酪氨酰-tRNA合成酶，次要

 

<400>49

atgatgagaa catttgagca gctcacagcg tcacaacaaa aagaggtaga aagacagctt    60

cagctataca tgacaggcgc ccacgaagtc ataccgccgg aggaattaaa ggcaaagctc    120

gtgaaatcaa tttccacggg cacgccgctt aaaattaagc tcggattaga tccgtctgca    180

ccggatgtac atttgggcca tacggttgtg ttaaataagc ttcgccaatt tcaagaaaac    240

ggccacattg tccagctgtt aattggggat ttcacaggaa aaattggtga tccgaccgga    300

aaatcggcag ccagaaagca actgactgat gaagaagttc agcacaatgc caaaacctac    360

tttgagcaat tcggaaaagt gcttgatcca gaaaaagtcg agcttcacta taactcaaaa    420

tggctgaaaa cattgaatct agaagatgtc attgaattag cagggaaaat aacggtagcc    480

cgcctgatgg agcgcgacga ctttgaagaa cgcatcgcca tgcaaaaacc aatctcactg    540

catgaattct tttacccatt gatgcagggc tatgattctg tcgttctcga aagtgatatt    600

gaattaggcg gaacggatca gcatttcaat gtcctcatgg gacggcattt ccaagaacga    660

tacaacaaag aaaaacaagt cgtcatcctt atgccgctct tggaaggctt ggatggcgtc    720

gagaaaatgt cgaagtcgaa acacaactac attggcatta acgaacatcc aaacgacatg    780

tacggaaaaa cgatgtcact gcccgacagc ctgatgaaaa agtacatcca cttggcgaca    840

gacttagagc ttgaagagaa aaaacagctc gtaaaagact tagaaaccgg cgccgttcat    900

ccgcgtgatg ccaaaatgct tttagccaga acaatcgtcc gaatgtatca cggagagaaa    960

gcagcagaag ctgccgaaca ctcgtttaaa acagtctttc aggaaaacag cctgccggaa    1020

gatataccgg ccgtaaactg gaaaggcgaa aaaacgatag cgatgattga tctgctcgtc    1080

aagctaaagc tcctctcttc gaagagcgag gcgcgccgca tgattcaaaa cggaggtgta    1140

cgcatcgacg gagagaaagt aacagatgtt cacgccaaag cagagataag agagaatatg    1200

atcatccaag tcggcaaacg caagttttta aagctccaa                           1239

<210>50

<211>2640

<212>DNA

<213>枯草杆菌

 

<220>

<223>缬氨酰-tRNA合成酶

 

<400>50

atggaaacga atgaacaaac aatgccgacg aaatatgatc cggcagcggt tgaaaaagac    60

cgatatgatt tttggctaaa aggcaaattt tttgaagcgg gcagtgacca gacaaaagag    120

ccatactctg ttgtcatccc gccgccaaac gtaacaggga gacttcacct tggccacgca    180

tgggacacaa cgctgcaaga cattgtaaca agaatgaaac gcatgcaggg ctatgatgtg    240

ctgtggcttc ctggcatgga ccacgccggc atcgcgacac aggctaaagt ggaggcgaaa    300

cttcgtgaag aaggcaaatc ccgctacgat ttaggccgtg aaaaattcct cgaagaaacg    360

tggaagtgga aggaagaata tgctgacttt attcgcagcc agtgggcgaa attaggtctt    420

ggcctagatt attcccgtga acgttttacg ctggatgaag gcttgagcaa agcggtaagg    480

gaagtattcg ttaagcttta tgaaaaaggc ctgatctaca gaggcgaata tattattaac    540

tgggacccag cgacaaaaac agccctatcc gacattgagg tgatttacaa ggatgttcaa    600

ggcgcattct atcatatgag ctatccgctt gctgacggtt caggctcaat tgaaattgcg    660

acgacacgtc ctgaaacaat gctcggtgat acagctgttg ccgttcaccc tgaagacgag    720

cgctataaac accttatcgg aaaaacggtg atcctgccga ttgtaaatcg tgaaattccg    780

attgtcggtg atgactatgt tgatatggaa tttggttcag gtgccgtgaa aattacgcct    840

gctcatgatc cgaacgactt cgagcttggc aaccgccaca atttagaacg catccttgtc    900

atgaatgaag atggcacgat gaatgaaaat gcgctccaat atcaaggtat ggatcgtttt    960

gaatgccgca aaaagctcgt gaaagattta caggaggcgg gagttctctt caagatcgag    1020

gatcatatgc actctgtcgg ccatagtgaa cgaagcgggg ctgttgtgga gccttatctt    1080

tctacacaat ggtttgtgcg catgcagccg cttgctgatg cagcgattga gctcgaaaaa    1140

aaagaagaaa aggtcaactt tgtgcctgac cgtttcgaaa aaacgtattt acactggatg    1200

gaaaatatcc gcgactggtg tatctcccgt caattgtggt ggggccatcg tattcctgcc    1260

tggtatcata aagaaacagg cgagctatat gtcggacttg aagcgccgga agacagcgaa    1320

aattgggaac aggatacaga cgtactggat acatggttca gttctgcgct atggcctttc    1380

tccacaatgg gctggcctga tgtaacggct gaagacttta aacgctacta tccgacagat    1440

gttctcgtga cagggtacga tatcattttc ttctgggtat cacgcatgat tttccaaggc    1500

attgaattta caggcgagcg cccgttcaaa gatgttttaa tccacggctt aatccgtgac    1560

gagcaaggcc ggaaaatgag taaatctctt ggcaacggtg tcgacccgat ggatgtgatt    1620

gacaagtacg gagccgattc tctgcgttat ttccttgcga ctggaagctc tcctggccag    1680

gatctgcgct tcagctatga aaaagtggaa tcgacctgga attttgccaa taaaatttgg    1740

aacgcctccc gttttgcatt aatgaatatg gatggcatga cgtacgatga gcttgatctg    1800

tcaggtgaaa agtcagtcgc tgacaagtgg attttaacgc gattaaatga aacgatcgag    1860

cacgtgaccc agcttgctga ccgatatgaa tttggtgaag taggacgcca tttatataac    1920

tttatttggg atgatttctg tgattggtat attgaaatgg cgaagcttcc gctttatgga    1980

gaagacgaag cggctaagaa aactacccgt tccatccttg cttacgtact tgatcaaacg    2040

atgcgtctgc tccatccgtt tatgccattc ttaacggagg aaatttggca gcaccttcct    2100

caccaagggg aatcgattac agtaagtcaa tggcctgcag tagtgccgga gcataccgat    2160

actgaagcgg cagctgacat gaagcttctt gttgagctga tccgttctgt gcgcaatatc    2220

cgcagtgaag tcaatacgcc aatgagcaag caggttgaac tgtacattaa aacaagcaca    2280

gacgaaatag cgtcccgcct cgaagcgaac cgttcatatg ttgaacgctt tacgaatccg    2340

agcgtgctta aaatcggcac cgatattgag gctgttgata aggcgatgac ggccgttgtc    2400

tcaggagcag aggttattct tccgcttgaa ggcttaatca atattgatga agaaattgcc    2460

cgtctgcaaa aagaatttga taaactgaca aaagaagttg agcgtgtcca aaagaaactt    2520

ggaaatgaag gatttatgaa aaaagcgcct gcacacgtaa ttgatgaaga acgtgaaaaa    2580

gaaaaagatt atgtggcgaa gcgtgacgct gttcaaaaac gaatggctga gctgaagggt    2640

 

<210>51

<211>1431

<212>DNA

<213>枯草杆菌

 

<220>

<223>谷氨酰-tRNA酰胺转移酶，亚单位B

 

<400>51

ttgaactttg aaacggtaat cggacttgaa gtccacgttg agttaaaaac aaaatcaaaa    60

attttctcaa gctctccaac gccattcggc gcggaggcga atacgcagac aagcgttatt    120

gacctcggat atccgggcgt cctgcctgtt ctgaacaaag aagccgttga attcgcaatg    180

aaagccgcta tggcgctcaa ctgtgagatc gcaacggata cgaagtttga ccgcaaaaac    240

tatttctatc ctgacaaccc gaaagcgtat cagatttctc aatttgataa gccaatcggc    300

gaaaacggct ggatcgaaat tgaagtcggc ggcaaaacaa aacgcatcgg catcacgcgc    360

cttcatcttg aagaggatgc cggaaaactg acgcatacgg gcgacggcta ttctcttgtt    420

gacttcaacc gtcaaggaac gccgcttgtt gagatcgtat cagagccgga catccgcacg    480

ccggaagaag cgtacgcata tcttgaaaag ctgaaatcca tcatccaata tacaggcgtt    540

tctgactgta aaatggaaga aggctcactt cgctgtgacg ccaatatctc tcttcgtccg    600

atcggccaag aggaattcgg cacaaaaaca gaattgaaaa acttgaactc ctttgcgttt    660

gttcaaaaag gccttgagca tgaagaaaaa cgccaggagc aggttcttct ttccggcggc    720

gtcatccagc aagaaactcg ccgttatgat gaagcaacga agaaaaccat tcttatgcgt    780

gtcaaagagg gatctgacga ctaccgttac ttcccagagc cagatctagt cgagctctac    840

attgatgatg aatggaagga acgcgtaaaa gcaagcattc ctgagcttcc ggatgagcgc    900

cgcaagcgtt atatcgaaga gcttggcttg cctgcatatg acgcaatggt tctgacgctg    960

acaaaagaaa tggctgattt cttcgaagaa accgttcaaa aaggcgctga agctaaacaa    1020

gcgtctaact ggctgatggg tgaagtgtca gcttacctaa acgcagaaca aaaagagctt    1080

gccgatgttg ccctgacacc tgaaggcctt gccggcatga tcaaattgat tgaaaaagga    1140

accatttctt ctaagatcgc gaagaaagtg tttaaagaat tgattgaaaa aggcggcgac    1200

gctgagaaga ttgtgaaaga gaaaggcctt gttcagattt ctgacgaagg cgtgcttctg    1260

aagcttgtca ctgaggcgct tgacaacaat cctcaatcaa tcgaagactt taaaaacgga    1320

aaagaccgcg cgatcggctt cctagtcgga cagattatga aagcgtccaa aggacaagcc    1380

aacccgccga tggtcaacaa aattctgctt gaagaaatta aaaaacgcta a             1431

 

<210>52

<211>291

<212>DNA

<213>枯草杆菌

 

<220>

<223>谷氨酰-tRNA酰胺转移酶，亚单位C

 

<400>52

atgtcacgaa tttcaataga agaagtaaag cacgttgcgc accttgcaag acttgcgatt    60

actgaagaag aagcaaaaat gttcactgaa cagctcgaca gtatcatttc atttgccgag    120

gagcttaatg aggttaacac agacaatgtg gagcctacaa ctcacgtgct gaaaatgaaa    180

aatgtcatga gagaagatga agcgggtaaa ggtcttccgg ttgaggatgt catgaaaaat    240

gcgcctgacc ataaagacgg ctatattcgt gtgccatcaa ttctggacta a             291

 

<210>53

<211>31

<212>DNA

<213>人工序列

<400>53

gtgcctcgag gattaagcat tggtaactgt c    31

 

<210>54

<211>34

<212>DNA

<213>人工序列

<400>54

tattctcgag acattaacct agaaagcact aagg 34

 

<210>55

<211>30

<212>DNA

<213>人工序列

<400>55

ctgcctgtct cgaggctgat agcagttatc      30

 

<210>56

<211>30

<212>DNA

<213>人工序列

<400>56

caactcgagg ctggtcggac aaacacctag      30

 

<210>57

<211>30

<212>DNA

<213>人工序列

<400>57

tgcgaattcc ggatgtaagg agaacggctc      30

 

<210>58

<211>32

<212>DNA

<213>人工序列

<400>58

cttgtcgacg tacatcagaa atcgtacatt cg  32

 

<210>59

<211>30

<212>DNA

<213>人工序列

<400>59

ggtggatccc ctcgccggca atagttaccc     30

 

<210>60

<211>31

<212>DNA

<213>人工序列

<400>60

aatctagact ttcgttatac aaattttaac c   31

 

<210>61

<211>31

<212>DNA

<213>人工序列

<400>61

tgtaggatcc aatatgggca gaaaacacat g   31

 

<210>62

<211>31

<212>DNA

<213>人工序列

<400>62

atatctagat tccactctgt gtaccagtag c   31

 

<210>63

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<400>63

gttagctcct tcggtcctcc  20

 

<210>64

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<400>64

gtaactggct tcagcagagc  20

 

<210>65

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<400>65

ctgccacatc gtctaggctg c 21

 

<210>66

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<400>66

caggagtcca aataccagag   20

 

<210>67

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<400>67

cccttgcc tatactgtggac   20

 

<210>68

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<400>68

gttacaatag cgacggagag   20

<210>69

<211>27

<212>DNA

<213>人工序列

<400>69

gtctgaattc gaggaaggtt tacaccg  27

 

<210>70

<211>26

<212>DNA

<213>人工序列

<400>70

ctgcgaattc atcttcatgg tgaacc   26

 

<210>71

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<400>71

cattgtcatt agttggctgg          20

 

<210>72

<211>28

<212>DNA

<213>人工序列

<400>72

gcaagaattc aaaatccatc ttcatcgg 28

 

<210>73

<211>29

<212>DNA

<213>人工序列

<400>73

gtgactgagg atccgctagt tccagatcg 29

 

<210>74

<211>30

<212>DNA

<213>人工序列

<400>74

ctcttggatc ccttcatcat tctatcacac 30

 

<210>75

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<400>75

gcagattggg atggagttcc cgtac      25

 

<210>76

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<400>76

ttacagcttc acaaagcgga tttc       24

 

<210>77

<211>26

<212>DNA

<213>人工序列

<400>77

tgctgcaaga gctgtcggaa ataaag     26

 

<210>78

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<400>78

aagaagaaaa gaaagaagct aaag       24

 

<210>79

<211>31

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>79

gtgcctcgag gattaagcat tggtaactgt c      31

 

<210>80

<211>34

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>80

tattctcgag acattaacct agaaagcact aagg    34

 

<210>81

<211>32

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>81

ctgctatgaa ttcgagtagt acacgtttca cc      32

 

<210>82

<211>28

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>82

ctgaattctg gtcggacaaa cacctagc           28

 

<210>83

<211>29

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>83

cggagaattc tccgttacaa acgtcagag    29

 

<210>84

<211>29

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>84

actgaattct ggtcggacaa acacctagc    29

 

<210>85

<211>30

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>85

ctcgaggctg aattcagtta tcatttaagg    30

 

<210>86

<211>31

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>86

gggaattcgg acaaacacct agctttttgc g   31

 

<210>87

<211>1394

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>DNA序列

<400>87

gaattcgagt agtacacgtt tcacctgttt gaagagagtc tgcggtgctg ggagcagata  60

acgggcaatg tggaatggac ttcggagcag ctgaccgaac tggaaaaaag taggctcagc  120

cggagcagtc tccgttacaa acgtcagagt gattccattt taatggaata atcagggtgg  180

taccacggtt cattcgtccc ttttttacag gggaagaatg agcctttttt attatgtttt  240

aagaaatggg gttgatgttt tcttgaaaca aacgattttt tcaggcattc agccaagcgg  300

ctcagtgacg ctcggcaact atatcggtgc aatgaagcag tttgtcgaac tgcagcatga  360

ttataacagc tatttttgca tcgtcgatca gcatgcgata actgttcctc aagaccggct  420

tgagcttaga aagaatatcc gcaatctcgc ggcgctttac ttagctgtcg gacttgatcc  480

agaaaaagca acattgttta ttcagtcaga ggtccccgca catgcgcagg ccggatggat  540

gatgcagtgt gtcgcctata tcggcgagct tgagcggatg actcaattta aggacaaatc  600

caaaggcaat gaagctgtcg tctccggcct gttaacatat ccgccgctga tggccgctga  660

tattctgctg tacggaacgg atcttgtacc tgtcggcgag gatcaaaagc agcaccttga  720

gctgacgcgg aatcttgcag aacgcttcaa caaaaaatac aacgacatct ttacgattcc  780

ggaagtgaaa attccaaaag tcggtgcacg tatcatgtct ctgaatgatc cgctgaagaa  840

aatgagcaaa tctgatccga atcagaaagc ttatattaca ttgctggatg agccgaagca  900

gcttgaaaag aaaatcaaaa gcgcagtaac ggattctgaa ggcattgtca aatttgataa  960

ggaaaacaaa ccgggcgttt ccaaccttct tacaatttat tcaatcctcg gcaatacgac  1020

aattgaagag cttgaagcaa agtacgaagg aaaaggctac ggcgagttta aaggtgattt  1080

ggcagaagtc gtagtgaacg cattaaaacc gatccaggac cgctattacg agctgataga  1140

atctgaagaa ttagaccgga ttcttgatga aggcgcggaa cgagcgaatc ggacagcaaa  1200

caaaatgctg aaaaaaatgg agaatgccat gggtcttgga agaaaaagac gctaatcaaa  1260

aaaccgctct ttgcaaagag cggttttttt cagttgacct ttgattcgtt ttccatttcc  1320

caaagctttt cgaaaaaagg ctgtcctttt attaggtttt cgcaaaaagc taggtgtttg  1380

tccgaccaga attc                                                    1394

 

<210>88

<211>1270

<212>DNA    

<213>人工序列

<220>

<223>DNA序列

<400>88

gaattctccg ttacaaacgt cagagtgatt ccattttaat ggaataatca gggtggtacc  60

acggttcatt cgtccctttt ttacagggga agaatgagcc ttttttatta tgttttaaga  120

aatggggttg atgttttcgt gaaacaaacg attttttcag gcattcagcc aagcggctca  180

gtgacgctcg gcaactatat cggtgcaatg aagcagtttg tcgaactgca gcatgattat  240

aacagctatt tttgcatcgt cgatcagcat gcgataactg ttcctcaaga ccggcttgag  300

cttagaaaga atatccgcaa tctcgcggcg ctttacttag ctgtcggact tgatccagaa  360

aaagcaacat tgtttattca gtcagaggtc cccgcacatg cgcaggccgg atggatgatg  420

cagtgtgtcg cctatatcgg cgagcttgag cggatgactc aatttaagga caaatccaaa  480

ggcaatgaag ctgtcgtctc cggcctgtta acatatccgc cgctgatggc cgctgatatt  540

ctgctgtacg gaacggatct tgtacctgtc ggcgaggatc aaaagcagca ccttgagctg  600

acgcggaatc ttgcagaacg cttcaacaaa aaatacaacg acatctttac gattccggaa  660

gtgaaaattc caaaagtcgg tgcacgtatc atgtctctga atgatccgct gaagaaaatg  720

agcaaatctg atccgaatca gaaagcttat attacattgc tggatgagcc gaagcagctt  780

gaaaagaaaa tcaaaagcgc agtaacggat tctgaaggca ttgtcaaatt tgataaggaa  840

aacaaaccgg gcgtttccaa ccttcttaca atttattcaa tcctcggcaa tacgacaatt  900

gaagagcttg aagcaaagta cgaaggaaaa ggctacggcg agtttaaagg tgatttggca  960

gaagtcgtag tgaacgcatt aaaaccgatc caggaccgct attacgagct gatagaatct  1020

gaagaattag accggattct tgatgaaggc gcggaacgag cgaatcggac agcaaacaaa  1080

atgctgaaaa aaatggagaa tgccatgggt cttggaagaa aaagacgcta atcaaaaaac  1140

cgctctttgc aaagagcggt ttttttcagt tgacctttga ttcgttttcc atttcccaaa  1200

gcttttcgaa aaaaggctgt ccttttatta ggttttcgca aaaagctagg tgtttgtccg  1260

accagaattc                                                         1270

 

<210>89

<211>1531

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>DNA序列

<400>89

gaattcagtt atcatttaag gattttacag cactcgtgtt atttatatta ttacaatttt  60

actggaaaaa agaatgtttt ttcatgatga caattggtta taattgattt ataatggagc  120

aatcaaaaga aaagcttgct atgaaaaaga gtagtacacg tttcacctgt ttgaagagag  180

tctgcggtgc tgggagcaga taacgggcaa tgtggaatgg acttcggagc agccgaccga  240

actggaaaaa agtaggctca gccggagcgg tctccgttac aaacgtcaga gtgattccat  300

tttaatggaa taatcagggt ggtaccacgg ttcattcgtc ccttttttac aggggaagaa  360

tgagcctttt ttattatgtt ttaagaaatg gggttgatgt tttcatgaaa caaacgattt  420

tttcaggcat tcagccaagc ggctcagtga cgctcggcaa ctatatcggt gcaatgaagc  480

agtttgtcga actgcagcat gattataaca gctatttttg catcgtcgat cagcatgcga  540

caaccgttcc tcaagaccgg cttgagctta gaaagaatat ccgcaatctc gcggcgcttt  600

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Claims (16)

1.重组载体，该重组载体具有在可以表达的状态下能够插入编码氨酰tRNA合成酶的基因以外的任意外来基因的位点、且

在可以表达的状态下具有编码氨酰tRNA合成酶的基因，

上述重组载体在突变宿主中使用，所述突变宿主是使编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因缺失、或者使编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因的表达降低至宿主细胞无法生长的程度。

2.权利要求1所述的重组载体，其中氨酰tRNA合成酶为：色氨酰tRNA合成酶、丙氨酰tRNA合成酶、精氨酰tRNA合成酶、天冬酰胺酰tRNA合成酶、天冬氨酰tRNA合成酶、半胱氨酰tRNA合成酶、谷氨酰胺tRNA合成酶、谷氨酸tRNA合成酶、甘氨酸tRNA合成酶、组氨酰tRNA合成酶、异亮氨酰tRNA合成酶、亮氨酰tRNA合成酶、赖氨酸tRNA合成酶、甲硫氨酰tRNA合成酶、苯丙氨酸tRNA合成酶、脯氨酰tRNA合成酶、丝氨酰tRNA合成酶、苏氨酰tRNA合成酶、酪氨酰tRNA合成酶或缬氨酰tRNA合成酶。

3.权利要求1或2所述的重组载体，该重组载体具有质粒、噬菌体或逆转录转座子的形态。

4.突变宿主细胞，该突变宿主细胞是使编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因缺失、或者使编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因的表达降低至宿主细胞无法生长的程度，

上述突变宿主细胞经重组载体转化后使用，所述重组载体具有在可以表达的状态下能够插入编码氨酰tRNA合成酶的基因以外的任意外来基因的位点、且

在可以表达的状态下具有编码氨酰tRNA合成酶的基因。

5.权利要求4所述的突变宿主细胞，其中氨酰tRNA合成酶为：色氨酰tRNA合成酶、丙氨酰tRNA合成酶、精氨酰tRNA合成酶、天冬酰胺酰tRNA合成酶、天冬氨酰tRNA合成酶、半胱氨酰tRNA合成酶、谷氨酰胺tRNA合成酶、谷氨酸tRNA合成酶、甘氨酸tRNA合成酶、组氨酰tRNA合成酶、异亮氨酰tRNA合成酶、亮氨酰tRNA合成酶、赖氨酸tRNA合成酶、甲硫氨酰tRNA合成酶、苯丙氨酸tRNA合成酶、脯氨酰tRNA合成酶、丝氨酰tRNA合成酶、苏氨酰tRNA合成酶、酪氨酰tRNA合成酶或缬氨酰tRNA合成酶。

6.权利要求4或5所述的突变宿主细胞，其中带有突变的宿主细胞为细菌、酵母、动物细胞或植物细胞。

7.权利要求4或5所述的突变宿主细胞，其中带有突变的宿主细胞为细菌或酵母。

8.权利要求6或7所述的突变宿主细胞，其中细菌为芽孢杆菌属细菌。

9.使编码氨酰tRNA合成酶的基因以外的外来基因表达来制备上述外来基因所编码的蛋白或肽的方法，该方法包括下述步骤：

准备重组载体的步骤，所述重组载体具有在可以表达的状态下能够插入任意外来基因的位点、且在可以表达的状态下具有编码氨酰tRNA合成酶的基因，在上述重组载体的、在可以表达的状态下能够插入任意外来基因的位点插入有期望的外来基因；

准备突变宿主细胞的步骤，所述突变宿主细胞是使编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因缺失、或者使编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因的表达降低至宿主细胞无法生长的程度；

用上述重组载体转化上述突变宿主细胞得到转化体的步骤；

培养上述转化体来制备上述外来基因所编码的蛋白或肽的步骤。

10.在宿主细胞内稳定维持目标重组载体的方法，该方法包括：

使上述宿主细胞中所含的、编码氨酰tRNA合成酶的染色体基因缺失或者使其表达降低至宿主细胞无法生长的程度，之后以上述宿主细胞作为突变宿主细胞；

使上述目标重组载体在可以表达的状态下含有编码氨酰tRNA合成酶的基因；

用在可以表达的状态下含有上述编码氨酰tRNA合成酶的基因的目标重组载体转化上述突变宿主细胞。

11.权利要求10所述的方法，其中上述重组载体具有在可以表达的状态下能够插入编码氨酰tRNA合成酶的基因以外的任意外来基因的位点。

12.权利要求9～11中任一项所述的方法，其中氨酰tRNA合成酶为：色氨酰tRNA合成酶、丙氨酰tRNA合成酶、精氨酰tRNA合成酶、天冬酰胺酰tRNA合成酶、天冬氨酰tRNA合成酶、半胱氨酰tRNA合成酶、谷氨酰胺tRNA合成酶、谷氨酸tRNA合成酶、甘氨酸tRNA合成酶、组氨酰tRNA合成酶、异亮氨酰tRNA合成酶、亮氨酰tRNA合成酶、赖氨酸tRNA合成酶、甲硫氨酰tRNA合成酶、苯丙氨酸tRNA合成酶、脯氨酰tRNA合成酶、丝氨酰tRNA合成酶、苏氨酰tRNA合成酶、酪氨酰tRNA合成酶或缬氨酰tRNA合成酶。

13.权利要求9～12中任一项所述的方法，其中带有突变的宿主细胞为细菌、酵母、动物细胞或植物细胞。

14.权利要求9～12中任一项所述的方法，其中带有突变的宿主细胞为细菌或酵母。

15.权利要求13或14所述的方法，其中细菌为芽孢杆菌属细菌。

16.权利要求9～15中任一项所述的方法，其中外来基因所编码的蛋白为选自氧化还原酶、转移酶、水解酶、磷酸化酶、裂解酶、异构酶、合成酶或修饰酶的一种酶。