CN101835496A - 靶向羟基磷灰石的多臂聚合物以及由其制造的偶联物 - Google Patents

靶向羟基磷灰石的多臂聚合物以及由其制造的偶联物 Download PDF

Info

Publication number
CN101835496A
CN101835496A CN200880112961A CN200880112961A CN101835496A CN 101835496 A CN101835496 A CN 101835496A CN 200880112961 A CN200880112961 A CN 200880112961A CN 200880112961 A CN200880112961 A CN 200880112961A CN 101835496 A CN101835496 A CN 101835496A
Authority
CN
China
Prior art keywords
polymer
poly
group
attachment
peg
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN200880112961A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101835496B (zh
Inventor
S·P·麦克玛奴斯
A·柯泽罗斯克
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Nektar Therapeutics
Nektar Therapeutics AL Corp
Original Assignee
Nektar Therapeutics
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nektar Therapeutics filed Critical Nektar Therapeutics
Publication of CN101835496A publication Critical patent/CN101835496A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101835496B publication Critical patent/CN101835496B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G18/00—Polymeric products of isocyanates or isothiocyanates
    • C08G18/06—Polymeric products of isocyanates or isothiocyanates with compounds having active hydrogen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/548—Phosphates or phosphonates, e.g. bone-seeking
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/58—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. poly[meth]acrylate, polyacrylamide, polystyrene, polyvinylpyrrolidone, polyvinylalcohol or polystyrene sulfonic acid resin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/641—Branched, dendritic or hypercomb peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G79/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a linkage containing atoms other than silicon, sulfur, nitrogen, oxygen, and carbon with or without the latter elements in the main chain of the macromolecule
    • C08G79/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a linkage containing atoms other than silicon, sulfur, nitrogen, oxygen, and carbon with or without the latter elements in the main chain of the macromolecule a linkage containing phosphorus
    • C08G79/06—Phosphorus linked to carbon only

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Polyethers (AREA)
  • Polyesters Or Polycarbonates (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明除了其他之外，提供了适合于同生物活性剂进行反应以形成偶联物的聚合物试剂，这些聚合物试剂包括一个或多个聚合物链以及多个靶向羟基磷灰石的部分，并且可任选地这些试剂包括一个或多个可降解的连接物，这些可降解的连接物用来将这些聚合物链分成多个聚合物区段，这些聚合物区段具有适合于肾清除的分子量。

Description

靶向羟基磷灰石的多臂聚合物以及由其制造的偶联物
相关申请的交叉引用
本申请根据35U.S.C.§119(e)要求2007年10月23日提交的美国临时专利申请号60/982,012的优先权，其披露内容通过引用结合在此。
发明领域
除了其他事项之外，本发明涉及水溶性的、非肽聚合物以及由该聚合物制造的偶联物，其中该聚合物包括至少一个靶向羟基磷灰石的部分。
发明背景
亲水性聚合物对具有药物使用特性的分子的共价附连对于药物递送而言具有重要的效用。存在着一系列数量不断增加的聚合物，这些聚合物的偶联物已经进入临床试验。在它们之中有聚乙二醇的偶联物、缩写为“PEG”，[Greenwald et al.(2003)Effective drug delivery byPEGylated drug conjugates.Adv.Drug Delivery Rev.55：217-250；Harris et al.(2003)Effect of PEGylation on Pharmaceuticals.Nat.Rev.Drug Discovery 2：214-221)]；羟乙基纤维素、缩写为″HES″，(WO2006/050959)；聚(L-谷氨酸)[Li(2002)Poly(L-glutamicacid)-anticancer drug conjugates.Adv.Drug Delivery Rev.54：695-713]。PEG偶联物因为有几种成为上市药物(如
Figure GPA00001111815800011
Figure GPA00001111815800012
以及
Figure GPA00001111815800013
)而已经相当成功。PEG是具有多种有益特性的一种聚合物。例如，PEG是可溶于水以及多种有机溶剂中的、是无毒的、并且无免疫原性的，并且当附连在一种表面时PEG提供了一种生物相容的保护性涂层。PEG常见的应用或用途包括：(i)共价附连至蛋白质上以便(例如)延长血浆半衰期并且降低经肾的清除，(ii)附连至表面上，如在人工替代物、血液接触装置、以及生物传感器中，(iii)作为一种可溶性载体用于生物聚合物合成，以及(iv)作为一种试剂在水凝胶的制备中使用。其他经常使用的亲水性聚合物声称具有相似的特性和潜在的用途。
以上提及用途的很多种(若非全部的话)之中，必须首先通过将亲水性聚合物的活性末端(例如在一种PEG情况下的一个羟基基团)转化成一个官能团来激活该亲水性聚合物，该官能团能够与在一个所希望的靶分子或表面之内见到的一个官能团(如在一种蛋白的表面上见到的一个官能团)容易进行反应。对于蛋白质，典型的官能团包括与赖氨酸、半胱氨酸、组氨酸、精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、以及酪氨酸的侧链相关联的官能团，连同该N末端的氨基官能团和该C末端的羧酸官能团。其他无毒的生物相容的亲水性聚合物可以被取代并且是大体上可接受的替代物，具有基于特异性官能团的适度改变，这些特异性官能团是可以在聚合物改性以及最后的结合中使用的。
使用PEG作为该分类的代表，作为针对大多数PEG活化反应的一种起始材料的PEG典型地是一种封端的PEG。一种封端的PEG是以下物质，其中这些羟基基团中的一个或多个(典型地位于该聚合物的一个末端)被转化为一个无活性的基团，如一个甲氧基、乙氧基、或苄氧基基团。最常使用的是甲氧基PEG，缩写为mPEG。封端的PEG(如mPEG)大体上是优选的，因为此类封端的PEG典型地是对交叉联接和聚集更为耐受的。以下显示了两种经常使用的封端的PEG醇(mPEG以及单苄基PEG(或称为bPEG))的结构。
其中n典型地是从大约10至大约2,000的范围内。
在药物递送中使用的一种聚合物试剂的一个特异的实例中，美国专利号6,436,386说明了基于PEG的、靶向羟基磷灰石的聚合物，这些聚合物可用于在一位患者体内选择性地靶向骨表面用来将治疗剂递送至这个骨位置。以这种方式，该聚合物试剂提供了该分子的活性部分到感兴趣组织的靶向递送以及增加的循环时间。
尽管有许多成功，但是将一种聚合物与一种活化剂相结合经常面临着挑战。例如，已知的情况是：与将一个较短的聚(乙二醇)分子附连相比，将一个相对长的聚(乙二醇)分子附连至一种活化剂上典型地赋予了更大的水溶性。然而，一些带有聚合物部分的偶联物的缺点之一是此类偶联物在体内可以是基本上无活性的可能性。已经假设，由于该聚合物链的长度，这些偶联物基本上是无活性的，该聚合物链的长度有效地将它本身“包”围着该整个活化剂，由此限制了接近药理学活性所要求的配体。
结果，在该领域中对适合于结合至药物部分(该药物部分用于药物递送应用)的聚合物试剂存在着不断的需求，特别是具有提供一种偶联物所必需的分子量的聚合物试剂，该偶联物具有所希望的体内循环时间，但是它也显示了从身体的定时清除。将会特别有益的是使此类聚合物试剂还提供了对身体的一个特定位置(如羟基磷灰石表面)进行靶向的能力。本发明着手解决本领域中的这种及其他需求。
本发明的概述
本发明提供了靶向羟基磷灰石的、适合与生物活性剂进行反应以形成偶联物的多臂聚合物试剂，该聚合物试剂包括一个或多个聚合物链以及位于这些聚合物链中一个或多个链的末端的多个靶向羟基磷灰石的部分。这些多臂聚合物被一个或多个可降解的连接物(linkage)可任选地分开或分离成具有一种适合肾清除的分子量的聚合物区段。本发明的聚合物试剂可以具有一个基本上直链的结构，尽管也考虑了分支的或多臂结构。本发明适合于以下应用，其中使用一种高分子量的聚合物是所希望的，如对于直链聚合物而言至少大约30,000Da的总聚合物数均分子量、以及对于多臂聚合物而言20,000Da。每个结构均包括能够在体内降解的一个或多个连接物。多靶向羟基磷灰石的部分在每个聚合物分子上的使用提高了该聚合物试剂进行选择性靶向并且结合至羟基磷灰石表面的能力，这进而能够增加被递送至该骨位置的生物学活性部分的浓度。
在一个实施方案中，本发明提供了一种靶向羟基磷灰石的多臂聚合物，该聚合物具有下列结构：
Figure GPA00001111815800041
式(Ia)
在其中：
A是-(X3)d-(L3)e-(X4)f-POLY2-Z2或-(X3)d-(L3)e-(X4)f-Z2
POLY1和POLY2可以是相同的或不同的，各自均是一种水溶性的、非肽聚合物；
X1、X2、X3、以及X4可以是相同的或者不同的，各自均是一个间隔基部分；
L1、L2、以及L3可以是相同的或者不同的，各自均是连接物；
每个Z1可以是相同的或不同的，各自均是Z2、或一个靶向羟基磷灰石的部分、或一种多臂结构，该多臂结构包括2至大约10个靶向羟基磷灰石的部分，并且可任选地包括至少一种水溶性的、非肽聚合物，其条件为在b是0时，至少一个Z1具有一种多臂结构，该多臂结构包括一个或多个聚合物臂并且其条件为至少一个Z1是一个靶向羟基磷灰石的部分；
Z2是一个官能团，可任选地通过一个间隔基附连在POLY2上；
a、b、c、d、e、以及f可以是相同的或者不同的，各自或者是0或者是1；
R是一个单体的或低聚物的多臂核芯分子(multiarm coremolecule)，该多臂核芯分子衍生自包括至少p+1个可供附连的位点的一个分子；并且
p是在2至32范围内的一个整数。
在某些实施方案中，POLY1和POLY2各自均具有满足以下各项中一个或多个的数均分子量：小于大约22,000Da；小于大约15,000Da；以及小于大约8,000Da。对于POLY1和POLY2的示例性聚合物包括：聚(亚烷基二醇)、聚(烯醇)、聚(乙烯吡硌烷酮)、聚(羟烷基甲基丙烯酰胺)、聚(甲基丙烯酸羟烷酯)、聚(糖类)、聚(α-羟酸)、聚(丙烯酸)、聚(乙烯醇)、聚磷腈、聚噁唑啉、聚(N-丙烯酰吗啉)、以及它们的共聚物、三元共聚物、或者混合物。这种靶向羟基磷灰石的部分的实例包括四环素、钙黄绿素、二膦酸类物(bisphosphonates)、聚天冬氨酸、聚谷氨酸、以及氨基磷糖类。
本发明的聚合物试剂的某些实施方案包括至少一个可水解切割的或可酶促切割的连接物，如在L1、L2、或L3位置上的连接物。这些聚合物链(如POLY1和POLY2)可以具有一种分区段的结构，该结构包括通过连接物附连的两个至大约五个水溶性的、非肽聚合物区段。例如，POLY1和POLY2之一或者两者均可以具有根据式-POLY-L-POLY-的一种结构，其中每个POLY均是一种水溶性的、非肽聚合物，并且L是一个连接物，该连接物可任选地是可降解的。
末端Z1部分可以具有一种多臂结构，例如以下结构中的任何一种：
Figure GPA00001111815800051
其中每个m是1至350，Me是甲基，并且每个Z均是一个靶向羟基磷灰石的部分。
核芯部分R可以衍生自具有结构R1(OH)p的一个多元醇，其中R是一种分支的烃，可任选地包括一个或多个醚连接物，并且p是至少3。示例性的多元醇包括甘油、季戊四醇、糖衍生的醇类、以及低聚物类或者它们的聚合物。可替代地，R可以衍生自二硫化物类、肽类、低聚物类或它们的聚合物、以及它们的组合。在某些实施方案中，R衍生自包括至少一个赖氨酸残基的一个二肽或三肽。
本发明的示例性聚合物试剂包括以下聚合物结构：
Figure GPA00001111815800061
以及
Figure GPA00001111815800062
其中n是1至350。
在另一个方面中，本发明提供一种靶向羟基磷灰石的、多臂聚合物偶联物，该偶联物包括本发明的聚合物试剂与一种生物活性剂的反应产物，并且具有以下结构：
Figure GPA00001111815800063
式(Ib)
其中将具有式(Ia)的所有之前的变体应用于式(Ib)，并且进一步其中B是-(X3)d-(L3)e-(X4)f-POLY2-L4-药物或-(X3)d-(L3)e-(X4)f-L4-药物，该药物是一个生物学活性部分的一个残基，L4是一个连接物，该连接物产生于Z2与在该生物学活性部分上的一个官能团的反应，并且Z3是L5-药物或一个靶向羟基磷灰石的部分，其中L5是一个连接物，该连接物产生于Z1与在该生物学活性部分上的一个官能团的反应，其中Z1是一个官能团，其条件为至少一个Z3是一个靶向羟基磷灰石的部分。
该药物是一个生物学活性部分的一个残基，它可以是例如生长因子类、抗生素类、化学治疗剂类、以及镇痛药类。示例性的生长因子包括：成纤维细胞生长因子、血小板衍生生长因子、骨形态发生蛋白、成骨蛋白、转化生长因子、LIM矿化蛋白、骨样诱导因子、血管生成素、内皮素；生长分化因子、ADMP-1、内皮素、肝细胞生长因子、以及角质形成细胞生长因子、肝素结合性生长因子、刺猬蛋白(hedgehog protein)、白细胞介素、集落刺激因子、上皮生长因子、胰岛素样生长因子、细胞因子、骨桥蛋白、以及骨粘连蛋白。
虽然多臂结构是最优选的，在另一个方面中，本发明提供了一种杂合的双功能的、基本上直链的、靶向羟基磷灰石的聚合物，该聚合物具有以下结构：
Z-(X1)a-L1-(X2)b-[POLY1-(X3)c-L2-(X4)d]m-POLY2-(X5)e-Y
其中：
POLY1和POLY2可以是相同的或者不同的，各自均是一种水溶性的、非肽聚合物；
X1、X2、X3、X4、以及X5可以是相同的或不同的，各自均是一个间隔基部分；
L1是一个连接物；
每个L2均是选自下组的一个可水解切割的或可酶促切割的连接物，该组的构成为氨基甲酸酯以及酰胺；
Z是一个靶向羟基磷灰石的部分；
Y是一个官能团；
a、b、c、d、以及e可以是相同的或者不同的，各自或者是0或者是1；并且
m是在1至10范围内的一个整数。
除了聚合物试剂以及由该聚合物制造的偶联物之外，本发明包括制造此类试剂以及偶联物的方法，连同使用本发明的聚合物试剂的生物学活性偶联物的治疗性方法。
本发明的详细说明
在详细地说明本发明之前，应当理解的是这项发明不限于这些特定的聚合物、合成技术、活化剂、以及类似物，因为这些可能发生变化。还应当理解的是在本文中使用的术语仅仅是用于说明具体的实施方案的，而且不旨在是限制性的。
必须指出的是，如在本说明书中所使用的，单一形式“一个”、“一种”、以及“该”包括所提及的复数对象，除非上下文清楚地另有指示。因此，例如提及一种“聚合物”包括一种单一的聚合物同样包括两种或多种相同或不同的聚合物，提及一种“偶联物”是指一种单一的偶联物同样包括两种或多种相同或不同的偶联物，提及一种“赋形剂”包括一种单一的赋形剂同样包括两个或多种相同或不同的赋形剂，诸如此类。
I.定义
在本发明的说明书和权利要求书中，根据以下说明的定义使用了以下术语。
如在本文中所使用的，“PEG”、“聚乙二醇”以及“聚(乙二醇)”是指任何水溶性的聚(氧化乙烯)。典型地，在本发明中使用的PEG将包括以下两种结构之一：“-O(CH2CH2O)n-”或“-CH2CH2O(CH2CH2O)n-CH2CH2-”，其中n是3至3000，并且所有这些PEG的末端基团和结构都可能发生变化。“PEG”是指一种聚合物，该聚合物包含一个占多数的、也就是说大于50％的亚单位-CH2CH2O-。
一种经常使用的PEG是封端的PEG。当PEG被定义为“-O(CH2CH2O)n-”时，该封端基团大体上是典型地由1至20个碳组成的一个含碳基团，并且优选地是烷基(例如甲基、乙基、或丙基)，尽管也考虑了它们的饱和形式以及不饱和形式连同芳基、杂芳基、环、杂环、以及以上任何一项的取代形式。当PEG被定义为“-CH2CH2O(CH2CH2O)n-CH2CH2-”时，该封端基团大体上是典型地由1至20个碳原子以及一个氧原子组成的一个含碳基团，该氧原子共价地键合至该基团上并且可供用于共价地键合至该PEG的一个末端。在这种情况下，该基团典型地是烷氧基(例如甲氧基、乙氧基或苄氧基)，并且就这种含碳基团而言，该基团可以可任选地是饱和的以及未饱和的、连同芳基、杂芳基、环、杂环、以及以上任何一项的取代形式。当PEG被定义为“-CH2CH2O(CH2CH2O)n-CH2CH2-”时，其他(“未封端的”)末端典型地是一个羟基、胺、或者一个活化基团，该活化基团可以经受进一步化学修饰。此外，该封端基团还可以是一种硅烷。
在本发明中使用的特异的PEG形式包括具有多种的分子量、结构或几何形状(例如分支的、直链的、多臂、等等)的PEG，这些PEG将在以下更详细地进行说明。
该封端基团还可以有利地包括一种可检测的标记。当该聚合物具有一个封端基团(包括一种可检测的标记)时，通过使用一个适当的检测器可以确定该聚合物和/或该聚合物所偶联的感兴趣的部分(例如活化剂)的量或位置。此类标记包括(没有限制)：荧光增光剂、化学发光剂、用于酶标记的部分、比色剂类(例如染料)、金属离子、放射性部分、以及类似物。
在本文中所说明的方法中使用的聚合物典型地是多分散的(即这些聚合物的数均分子量和重量平均分子量是不相等的)。然而，根据本文中所说明的方法所制备的聚合物具有低的多分散性值，表示成重量平均分子量(Mw)与数均分子量(Mn)的比值(Mw/Mn)，大体上小于约1.3、优选地小于约1.2、更优选地小于约1.15、又更优选地小于约1.05、仍又最优选地小于约1.04、并且最优选地小于约1.03。应当指出，一种多臂PEG的多分散性可以是大大高于用来产生该多臂PEG的聚合物臂的多分散性。
如在本文中所使用，术语“可电离的官能团”以及它们的变体是一种官能团，该官能团可以通过与另一种可电离的官能团在水性或其他极性的介质中相互作用而获得或失去一个质子。可电离的官能团包括但不限于：胺、羧酸类、醛水合物类、酮水合物类、酰胺类、肼类、硫醇类、酚类、肟类、二硫吡啶类、以及乙烯吡啶类。
如在本文中所使用，术语“羧酸”是具有一个
Figure GPA00001111815800101
官能团的部分[还表示成一个“-COOH”或-C(O)OH]、连同一个羧酸衍生物的部分，此类衍生物包括例如受保护的羧酸类。因此，除非上下文清楚地另有指示，术语羧酸不仅包括这种酸形式，还包括对应的酯类和受保护的形式。参见Greene  et al.，“PROTECTIVE GROUPS IN ORGANICSYNTHESIS”3rd Edition，John Wiley and Sons，Inc.，New York，1999。
“活化的羧酸”是指一种羧酸的一个功能性衍生物，该衍生物比这种亲本羧酸更具有反应性的，特别是相对于亲核的酰基取代而言。活化的羧酸类包括但不局于酰基卤(如酰基氯)、酸酐类、酰胺类以及酯类。
术语“反应性的”或“活化的”当与一个具体的官能团结合使用时，是指一个反应性的官能团，该官能团容易在另一个分子上与一个亲电体或一个亲核体进行反应。这与那些要求强催化剂或高度地不切实际的反应条件来进行反应的基团(即，一个“非反应性的”或“惰性”基团)形成了对比。
术语“受保护的”或“进行保护的基团”或“保护性基团”是指存在着一个部分(即，这种进行保护的基团)，该部分防止或阻止在一个分子中的一个特定的化学反应官能团在某些反应条件下的反应。这种进行保护的基团将取决于以下各项而变化：受到保护的化学反应基团的类型、连同所采用的反应条件、以及在该分子中额外的反应基团或进行保护的基团的存在(若存在的话)。在本领域中已知的进行保护的基团可以在Greene等人，上述中见到。
如在本文中所使用，术语“官能团”或者它的任何同义词意味着涵盖了它的受保护的形式。
在本文中使用的术语“间隔基”或者“间隔基部分”是指可任选地用于连接多个互连部分(如一种水可溶性聚合物的一个末端以及一个官能团)的一个原子或多个原子的一个集合。本发明的间隔基部分可以是水解稳定的或者可能包括一个可生理学水解的或可酶促降解的连接物。
“烷基”是指一个烃链，长度典型地在从大约1至20个原子的范围内。此类烃链优选地是(但不必须是)饱和的，并且可以是分支的或直链，尽管典型地直链是优选的。示例性的烷基基团包括乙基、丙基、丁基、戊基、2-甲基丁基、2-乙基丙基、等等。如在本文中所使用，当烷基可以包括三个或多个碳原子时“烷基”包括环烷基。
“低级烷基”是指一个烷基基团，该烷基包含从1至6个碳原子，并且可以是直链或分支的，如通过甲基、乙基、正丁基、异丁基、叔丁基作为例证。
“环烷基”是指一个饱和的或未饱和的环烃链，包括桥接、稠合、或者螺环的化合物，优选地由3至大约12个碳原子组成，更多优选地3至大约8个。
“非干扰性取代基”是以下基团，这些基团当存在于一个分子之中时典型地是与包含在该分子之内的其他官能团不反应的。
术语“取代的”当在例如“取代的烷基”中时是指一个部分(例如，一个烷基基团)，该部分用一个或多个非干扰性取代基取代，这些取代基例例如但不限于：C3-C8环烷基，例如环丙基、环丁基、以及类似基团；卤素，例如氟、氯、溴、以及碘；氰基；烷氧基、低级苯基(例如，0至2个取代的苯基)；取代的苯基；以及类似取代基。
“取代的芳基”是具有一个或多个非干扰性基团的、作为一个取代基的芳基。对于在一个苯环上的取代，这些取代基可以是位于任何方向上的(即，邻位、间位、或对位)。
“烷氧基”是指一个-O-R基团，其中R是烷基或取代的烷基，优选是C1-C20烷基(例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、苄氧基、等等)，更优选是C1-C8烷基。
“芳基”是指一个或多个芳环，各自均具有5或6个核芯碳原子。芳基包括多个芳环，这些芳环可以是融合的(如在萘基中)或是未稠合的(如在联苯基中)。芳环还可以与一个或多个环烃、杂芳基、或杂环融合或未稠合。如在本文中所使用，“芳基”包括杂芳基。
“杂芳基”是一种芳基基团，该基团包含从一个至四个杂原子，优选地N、O、或S、或它们的一个组合。杂芳基环还可以与一个或多个环烃、杂环、芳基、或者杂芳基的环进行稠合。
“亲电体”是指一种离子或原子或者多个原子的集合，它可以是离子性的、具有一个亲电中心(即寻找电子或能够与一个亲核体进行反应的中心)。
“亲核体”是指一种离子或原子或者多个原子的集合，它可以是离子性的、具有一个亲核中心(即寻找一个电子或能够与一个亲电体进行反应的中心)。
一个“可以在体内切割的”的连接物是指当在体内循环时能够通过一个水解过程、一个酶促过程、一个化学过程、或者此类过程的一个组合而被切割的连接物。换言之，可以在体内切割的连接物是以下连接物，这些连接物可以在生理条件下(即，在大约pH 7至7.5、并且大约37℃的温度、在血清或其他体液的存在下)断开。这种连接物的降解半衰期可以变化，但是在生理条件下典型地在大约0.1天至大约10天的范围内。
一个“可水解地切割的”或“可水解的”或“可水解地降解的”键是在生理条件下与水进行反应(即，被水解)的一个相对弱的键。一个键在水中进行水解的倾向将不仅取决于连接两个中心原子的连接物的通常类型，而且还取决于附连在这些中心原子上的取代基。适当的水解不稳定的或弱连接物包括但不限于：羧酸酯、磷酸酯、酸酐类、缩醛类、缩酮类、酰氧基烷基醚、亚胺类、原酸酯类、以及寡核苷酸类。
一个“可酶促降解的连接物”是指一种连接物，该连接物在生理条件下通过一种或多种酶经受降解。这种酶降解过程还可包括一种水解反应。可酶促降解的连接物可以包括某些酰胺(-C(O)-NH-)和尿烷(-O-C(O)-NH-)连接物，尤其是当与其他基团的原子处于一种邻近的排列时，这些原子可以提供用于降解的激活或吸引一种酶所需的额外的位置。例如，与某些酰胺处于邻近位置的一种尿烷(例如-O-C(O)-NH-CHY-C(O)-NH-Y’)是可酶促降解的，其中Y是H、烷基、取代的烷基(例如，芳烷基、羟基烷基、硫代烷基、等等)、或芳基，并且Y′是烷基或取代的烷基。如在本文中所定义的，“尿烷”连接物是包括在具有以上结构的连接物。
如在本文中所使用，一个“可化学降解的”连接物是一种连接物，该连接物在生理条件下在体内通过化学反应进行降解。例如，二硫化物(S-S-)键可以在体内通过与谷胱甘肽的化学反应而被降解。
一个“水解稳定的”或“不可降解的”连接物或键是指一种化学键，典型地是一种共价键，它在水中是基本上稳定的，这意味着它在生理条件下在延长的时间内不经历水解切割或酶促切割达到任何的相当可观的程度。水解稳定的连接物的实例包括但不限于以下各项：碳-碳键(例如，在脂肪链中)、醚类、以及类似连接物。大体上，一种水解稳定的连接物是在生理条件下显示出每天小于大约1％至2％的水解率的一种连接物。代表性的化学键的水解率可以在大多数标准的化学教科书中见到。
在一种聚合物或多元醇的背景中“多官能的”或“多取代的”是指具有包含在其中的两个或多个官能团的一种聚合物或多元醇，其中这些官能团可以是相同的或不同的。本发明的多官能的聚合物或多元醇将典型地包含满足以下范围中的一个或多个的多个官能团：从大约2至100个官能团、从2至50个官能团、从2至25个官能团、从2至15个官能团、从2至10个官能团。因此，在该聚合物骨架或多元醇中官能团的数目可以是2、3、4、5、6、7、8、9或10个官能团中的任何一个。
一种“双官能的”或“双取代的”聚合物或多元醇是指具有包含在其中的两个官能团的一种聚合物或多元醇，该聚合物或多元醇是相同的(即，同源双官能的)或不同的(即，杂合双官能的)。
一种“单官能团的”或“单取代的”聚合物是指其中具有所包含的一个单一官能团的一种聚合物(例如，一种基于mPEG的聚合物)。
在本文中所说明的一种碱性的或酸性的反应物包括中性、带电的、以及它们的任何对应的盐形式。
术语“患者”是指一种活的生物，该生物患有或易于患有一种病况，该病况可以通过给予一种偶联物来防止或治疗，并且“患者”包括人和动物。
“可任选的”或“可任选地”是指随后说明的状况可能发生或不发生，这样使得本说明包括该状况发生的情况以及该状况不发生的情况。
除非另有注明，在本文中分子量被表示成数均分子量(Mn)，Mn被定义为
Figure GPA00001111815800141
其中Ni是具有分子量Mi的多聚物分子的数目(或那些分子的摩尔数)。
术语“药物”、“生物学活性分子”、“生物学活性部分”、“活化剂”和“生物活性剂”中的每一个，当在本文中使用时，是指可以影响一种生物学有机体的任何物理特性或生物化学特性的任何物质，包括但不限于病毒、细菌、真菌、植物、动物、以及人。特别是如在本文中所使用，生物学活性分子包括以下任何物质，该物质旨在用于诊断、治愈、缓解、治疗、或防止人体或其他动物体内的疾病、或者通过其他途径增强人或动物的身体或精神的良好状态。生物学活性分子的实例包括但不限于：肽类、蛋白质类、酶类、小分子药物类、染料类、脂类、核苷类、寡核苷酸类、多核苷酸类、核酸类、细胞、病毒、脂质体、微颗粒以及微胶粒。适合与本发明一起使用的生物活性剂的类别包括但不限于：抗生素类、杀真菌剂类、抗病毒剂类、抗炎剂类、抗肿瘤剂类、心血管药、抗焦虑药、激素、生长因子类、类固醇药剂类、以及类似物。
如在本文中所使用，“非肽的”是指基本上不含肽连接物的一种聚合物骨架。然而，该聚合物骨架可能包括沿着该骨架的长度、间隔的少数肽连接物，像例如每大约50单体单位不超过大约1个肽连接物。
术语“偶联物”旨在是指由于一个分子的共价附连所形成的实体，例如附连至一种反应性聚合物分子的一种生物学活性分子，优选地是带有一个或多个反应基团的一种聚(乙二醇)。
II.靶向羟基磷灰石的聚合物以及由该聚合物制造的偶联物
在一个方面，本发明提供了聚合物试剂、以及具有使用这些聚合物试剂所制造的生物活性剂的偶联物，其特征在于存在着多个靶向羟基磷灰石部分。在一个单一聚合物结构中使用多个靶向羟基磷灰石的部分可以增强该聚合物与一个骨表面的结合，这可以潜在地增加一种药物分子附连至该骨位置上的聚合物结构的停留时间。
以下显示了本发明的一种多臂聚合物结构的一种概括性的结构，它包括多个靶向骨的部分以及可用于偶联一种治疗剂的一个反应性把手(reactive handle)。靶向骨的部分(BTM)的数目可能从两个至超过二十个发生很大变化，这取决于这种具体BTM的结合效率。该聚合物分子量可以如所希望的进行调整以便在该聚合物所发挥的不同作用(例如，循环时间、溶解性、该药物的保护、这些BTM的载体)中提供最大效率。
Figure GPA00001111815800151
其中每个POLY和这种任选的POLY2是一种水溶性的、非-肽聚合物，BTM是一个靶向骨的部分(在本文中可与靶向羟基磷灰石的部分互换地使用)，并且L1、L2、以及L3是连接物。这种“反应性把手”与一种治疗剂(如可能靶向骨癌细胞的一种药物)的偶联使这种结合聚合物的药物将药物靶向骨细胞。在应用中，该药物可以被直接注入该骨的癌性的部分来发挥作用。
该反应性把手优选地是可以在该分子的操作和纯化中使用的一种可电离的官能团。示例性的可电离的官能团包括胺和羧酸基团，如具有碳长度(包括羰基碳)为1至大约25个碳原子的链烷酸(例如羧甲基、丙酸、以及丁酸)。其他适当的官能团的实例包括：醛水合物、酮水合物、酰胺、肼、酰肼、硫醇、磺酸、酰胺化物、羟胺、酚、肟、二硫吡啶、乙烯吡啶、2-取代的-1，3-噁唑啉、2-取代的1，3-(4H)-二氢噁嗪、2取代的-1，3-噻唑啉、以及2-取代的1，3-(4H)-二氢噻嗪。
本发明的一种多臂聚合物的一种可替代的概括性结构显示如下，它包括一个单一的靶向骨的部分以及几个包含治疗剂的位置。同样，这些BTM的数目可能从一个至几个发生很大变化，这取决于这种具体的BTM的结合效率，但是优选的BTM单位数目是低的。该聚合物分子量可以如所希望的进行调整以便在该聚合物所发挥的不同作用(例如，循环时间、溶解性、以及这些BTM的载体)中提供最大效率。在本申请中这些药物部分应当是低分子量单位，这些低分子量单位可以可替代地通过一种可降解的连接物而附连至该聚合物上，该连接物应当允许该药物在这个靶向位置上的递送。
Figure GPA00001111815800161
这些聚合物试剂还可包括一个或多个在体内降解的可切割或可降解的连接物。这种或这些可降解的连接物沿着该聚合物链或者在一个中心核芯分子中被间隔开，这样使得当该连接物在体内降解时释放的聚合物试剂的每一个区段具有一个分子量，该分子量不妨碍该区段的肾清除。本发明的这些聚合物试剂是特别有利的，因为它们可用于制备偶联物，其中一个相对高的聚合物分子量连同该聚合物从体内基本上完全消除这两者都是所希望的。例如，该聚合物试剂(以及由此制备的偶联物)的总聚合物数均分子量典型地是至少约30,000Da，如分子量是大约30,000至大约150,000Da(例如，总分子量是大约30,000Da、35,000Da、40,000Da、45,000D a、50,000Da、55,000D a、60,000Da、65,000Da、70,000Da、以及类似值)。当这些可降解的连接物降解时释放的每一个聚合物区段的数均分子量优选地是小于或等于大约22,000Da，更优选地是小于或等于大约20,000Da，甚至更优选地小于或等于大约15,000Da，并且最优选地小于或等于大约8,000Da。在一些实施方案中，这些聚合物区段具有不超过大约5,000Da、或不超过大约2,500Da的分子量。从这些可降解的连接物的切割中产生的聚合物区段的数目可以从2至大约40发生变化，但是大体上是在2至大约10的范围内(例如，2、3、4、5、6、7、8、9或10个聚合物区段)。
本发明的这些聚合物试剂(以及由此制备的这些偶联物)的结构构型可以发生变化。尽管不是优选的，这些聚合物试剂可以具有一种基本上直链的形式。这些聚合物试剂的优选的实施方案具有一种“多臂”构型，该多臂构型包括两个或多个(优选地是三个或多个)聚合物臂，这些聚合物臂从一个共有的多官能核芯分子(如一种多元醇或肽)延伸。本发明的这些聚合物的优选实施方案不处于一种水凝胶的形式，这意味着这些聚合物试剂(以及由此制备的这些偶联物)在一种水可膨胀的基质中不与其他聚合物进行相当大程度的交联。
在这些聚合物试剂(以及由此制备的这些偶联物)中的可降解的连接物可以发生变化。优选使用可以在体内切割的可降解的连接物，并且这些连接物在生理条件下(即，在7至7.5的pH以及大约37℃的温度下)具有在大约0.1和大约10天之间的半衰期。一种连接物的降解速率可以通过使用凝胶渗透色谱法(“GPC”)分析确定所释放的聚合物区段来测量。虽然本发明的这些聚合物试剂可以包含作为一种可降解的连接物的一个或多个碳酸酯基团，对于这些聚合物试剂优选包括不包含一个碳酸酯基团的、至少一个可降解的连接物，并且考虑了没有任何碳酸酯基团的聚合物试剂。
示例性的可降解的连接物包括但不限于：酯连接物；碳酸酯连接物；氨基甲酸酯；酰亚胺；二硫化物；二肽、三肽、或者四肽；由例如一种胺与一种醛的反应所生成的亚胺连接物(参见例如Ouchi et al.(1997)Polymer Preprints 38(1)：582-3，该文章通过引用结合在此)；通过例如一种醇与一种磷酸盐/酯基团进行反应而形成的磷酸酯连接物；典型地通过一种酰肼与一种醛的反应而形成的腙连接物；典型地由在一种醛与一种醇之间的反应而形成的乙缩醛连接物；例如通过在一种甲酸盐/酯与一种醇之间的反应而形成的邻酯连接物；以及通过例如一种亚磷酰胺基团(例如在一种聚合物的末端)以及一个寡核苷酸的一个5′羟基而形成的寡核苷酸连接物。
酰胺和尿烷键大体上被认为是用于将PEG结合至蛋白(如干扰素)上的稳定基团，例如K.R.Reddy，M.W.Modi and S.Pedder(2002)Adv.Drug Delivery Rev.54：571-586。然而，在体内可以发生这些稳定基团的一些切割。例如，在一种PEG干扰素中(以
Figure GPA00001111815800181
Figure GPA00001111815800182
品牌市售)，高达30％的与该偶联物相关联的PEG是通过切割一种尿烷键而被清除的(见M.W.Modi，J.S.Fulton，D.K.Buckmann，T.L.Wright，D.J.Moore(2000)″Clearance of Pegylated(40kDa)interferon alpha-2ais Primarily Hepatic，Hepatology 32：371A)。该偶联物的全部清除的作用过程是相当慢的并且花费几天。
就酰胺类连接而言，存在着多个特例，其中酰胺键(如在肽连接物中见到的那些)是易于进行酶促切割的。Suzawa et al.(2000)Bioorg.Med.Chem.8(8)：2175-84)发现一个聚(乙二醇)结合的L-丙氨酸-缬氨酸二肽连接物在模型酶嗜热菌蛋白酶的存在下被切割。可以在本发明中使用的肽连接物的额外实例(例如，二肽连接物或三肽连接物)可以在美国专利号5,286,637和6,103,236；Goff and Carroll(1990)Bioconjugate Chem.1：381-386)；以及Huang et al.(1998)BioconjugateChem.9：612-617)中见到。因此，在某些实施方案中，包含在这些聚合物试剂(以及由此形成的这些偶联物)之中的这种或这些可降解的连接物可以包括酰胺或尿烷连接物。
酯类尽管比酰胺类和尿烷类更易进行水解切割，还容易通过酶促过程而被切割，因此使得酯类在体内成为尤其不稳定的连接物。如果酯类在空间阻挡接近一种酶的官能团的附近具有多个基团，则酯类对酶促切割是更加耐受的。因此，包括这类空间位阻的酯官能团可导致一种酯基团成为对于多项应用而言具有吸引力的一种连接体(linker)，在这些应用中希望该聚合物在数小时至几天中水解地或酶促地断开。
通过空间位阻最促进稳定性的基团是对于该酯的羰基碳而言位于α位置的多个基团(例如，烷基基团)，如同以下具有两个含酯的聚合物的情况(其中“POLY”是一个水溶性的、非肽聚合物)。在选择一种结构来提出酶促切割的一种空间位阻中，优选地是不包括对该羰基基团具有一种吸电子效应的一个基团。当不希望被理论束缚时，此类吸电子基团应当趋向于加速酸或碱催化的水解。
在该酯的烷基部分中的空间位阻(例如，接近氧原子的部分或原子，该氧原子进而被附连在羰基碳上)还可能减慢酯类的酶促切割。因此，当希望空间位阻来影响酶促切割的速率时，考虑了在相对于该羰基碳和/或该氧原子的α和/或β位置上增加空间位阻，该氧原子进而被附连至该酯基团的羰基碳上。然而，重要的是增加空间拥挤与电子供体的一种组合，以便促进该酯通过一个SN1路径进行亲电子的切割。此外，重要的是通过吸电子基团的取代，不使该烷基部分成为这种良好的使得碱催化的水解是有利的离去基团。可以通过在该氧原子的α和β位置上引入弱空间阻滞来达到一种平衡，该氧原子进而被附连至该酯基团的羰基碳上，如在以下结构中所示。
Figure GPA00001111815800201
其中L是来自POLY与一种含酯部分的反应的一种间隔基部分或一种连接物，并且POLY是一种水溶性的、非肽聚合物。
因此，优选的空间位阻基团包括位于邻近该羰基碳的和/或邻近附连至该酯的羰基基团上(即，在这些α或β位置上)的氧原子的烷基基团(例如，C1-C10烷基基团)或芳基基团(例如，C6-C10芳基基团)，并且最优选邻近该羰基碳。
可能的是确定任何给定的推荐基团是否适合通过用该推荐基团制备该聚合物试剂来提供所希望的空间位阻。在从该推荐的聚合物试剂中形成该偶联物之后，该偶联物随后被给予一位患者或被加到一个适当的模型中。在给予该患者(或加到适当的模型中)之后，在该偶联物中每一种可降解的连接物的降解率可以通过例如采集一个血样(或来自该适当的模型的液体的等分部分)来进行确定，并且通过色谱技术来鉴定该偶联物的降解组分。如果在相同的条件下所测试的总降解率落在一个所希望的范围内和/或被改进超过一种对照聚合物试剂，则该推荐基团适合于提供所希望的空间位阻。
组成本发明的聚合物试剂的一部分的水溶性的、非肽聚合物(例如，POLY1、POLY2、等等)应当是无毒的且生物相容的，这意味着该聚合物能够与活组织或有机体共存而不引起损害。应当理解该聚合物可以是多种水溶性的、非肽聚合物中的任何一个。优选地，聚(乙二醇)(即PEG)是用于形成在本文中所说明的聚合物试剂的聚合物。其他适当的聚合物的实例包括但不限于：其他的聚(亚烷基二醇)、乙二醇与丙二醇的共聚物、聚(烯醇)、聚(乙烯吡硌烷酮)、聚(羟烷基甲基丙烯酰胺)、聚(甲基丙烯酸羟烷酯)、聚(糖类)、聚(α-羟酸)、聚(丙烯酸)、聚(乙烯醇)、聚磷腈、聚噁唑啉、聚(N-丙烯酰吗啉)，如在美国专利号5,629,384中所说明(其全文通过引用结合在此)，以及共聚物、三元共聚物、以及它们的混合物。可以将不同的聚合物结合至相同的聚合物骨架中。水溶性的且非肽的聚合物的任何组合涵盖于在本发明之内。每个聚合物区段(例如，每个POLY1或POLY2)还可以包括通过可切割的或稳定的连接物所连接的两个或多个聚合物区段。
该聚合物可以基本上处于直链形式或者一个多臂或分支的形式，如在美国专利号5,932,462中所列出的分支的PEG分子，该专利期全文通过引用结合在此。一般而言，一个多臂的或分支的聚合物具有两个或多个聚合物“臂”，这些臂从一个中心分支点延伸。例如，一种示例性的分支的PEG聚合物具有以下结构：
Figure GPA00001111815800211
式IV
其中PEG1和PEG2是处于在本文中所说明的形式或几何形状中任何一种的PEG聚合物，并且它们可以是相同的或不同的，并且L′是一种水解稳定的连接物。具有式I的一个示例性的分支PEG具有以下结构：
Figure GPA00001111815800212
式IVa
其中：polya和polyb是PEG骨架，如羟基聚(乙二醇)；R″是一个不反应的部分，如H、甲基或一个PEG骨架；并且P和Q是不反应的连接物。在一个优选的方案中，该分支的PEG聚合物是羟基聚(乙二醇)双取代的赖氨酸。
具有式IV的分支PEG结构可以被附连至一个第三低聚物或如以下所示的聚合物链：
Figure GPA00001111815800213
式V
其中PEG3是一个第三PEG低聚物或聚合物链，它们可以是相同的或者与PEG1和PEG2.不同。
在另一个实施方案中，在本发明中使用的分支PEG具有以下结构：
Figure GPA00001111815800221
其中每个POLY均是一个水溶性的、非-肽聚合物的或低聚物的区段(例如，一个PEG区段)，并且每个Z是一个加帽基团、一个官能团、或一个靶向骨的基团。
如在以下示例性的聚合物的结构中所证明，本发明的聚合物试剂将典型地包括一个或多个官能团，这个或这些官能团适合与在一个生物活性剂上的一个互补的官能团发生反应以便在该聚合物试剂与该活化剂之间形成一个共价连接物(它能够可任选地是可以在体内切割的)。适当的官能团的实例包括：羟基、活性酯(例如，N-羟基琥珀酰亚胺基酯和1-苯并三唑基酯)、活性碳酸酯(例如，N-羟基琥珀酰亚胺碳酸酯、1-苯并三唑基碳酸酯、以及对硝基苯基碳酸酯)、乙缩醛、具有碳长度为1至25个碳的醛(例如，乙醛、丙醛、以及丁醛)、醛水合物、链烯基、丙烯酸盐/酯、甲基丙烯酸酯、丙烯酰胺、活性的砜、胺、酰肼、硫醇、具有碳长度(包括羰基碳)为1至大约25个碳原子的链烷酸类(例如，羧酸、羧甲基、丙酸、以及丁酸)、酰基卤、异氰酸酯、异硫氰酸酯、马来酰亚胺、乙烯砜、二硫吡啶、乙烯吡啶、碘乙酰胺、环氧化物、乙二醛、二酮、甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、以及三氟乙基磺酸酯(tresylate)。在以下参考文献中讨论了示例性的官能团：N-琥珀酰亚胺碳酸酯参见例如美国专利号5,281,698、5,468,478)、胺(Buckmann et al.Makromol.Chem.182：1379(1981)，Zalipsky et al.Eur.Polym.J.19：1177(1983))、酰肼(参见例如Andresz et al.Makromol.Chem.179：301(1978))、琥珀酰亚胺基丙酸酯和琥珀酰亚胺基丁酸酯(参见例如Olson et al.in Poly(ethyleneglycol)Chemistry & Biological Applications，pp 170-181，Harris &Zalipsky Eds.，ACS，Washington，DC，1997；还见美国专利号5,672,662)、琥珀酰亚胺琥珀酸酯(参见例如Abuchowski et al.CancerBiochem.Biophys.7：175(1984)and Joppich et al.，Makromol.Chem.180：1381(1979)，琥珀酰亚胺基酯(参见例如美国专利号4,670,417)、苯并三唑碳酸酯(参见例如美国专利号5,650,234)、缩水甘油醚(参见例如Pitha et al.Eur.J.Biochem.94：11(1979)，Elling et al.，Biotech.Appl.Biochem.13：354(1991)，氧基羰基咪唑(参见例如Beauchamp，et al.，Anal.Biochem.131：25(1983)，Tondelli et al.J.ControlledRelease 1：251(1985))，对硝基苯基碳酸酯(参见例如Veronese，et al.，Appl.Biochem.Biotech.，11：141(1985)；and Sartore et al.，Appl.Biochem.Biotech.，27：45(1991))，醛(参见例如Harris et al.J.Polym.Sci.Chem.Ed.22：341(1984)，美国专利号5,824,784，美国专利5,252,714)，马来酰亚胺(参见例如Goodson et al.Bio/Technology8：343(1990)，Romani et al.in Chemistry of Peptides and Proteins2：29(1984))，以及Kogan，Synthetic Comm.22：2417(1992))，邻二硫吡啶(orthopyridyl-disulfide)(参见例如Woghiren，et al.Bioconj.Chem.4：314(1993))，丙烯酰(参见例如Sawhney et al.，Macromolecules，26：581(1993))，乙烯砜(参见例如美国专利号5,900,461)。以上所述全部参考文献都通过引用结合在此。
在某些实施方案中，这些聚合物试剂(以及由此形成的偶联物)的加帽基团、官能团、或者靶向羟基磷灰石的基团(一个“Z”部分，如Z1、Z2、Z3、等等)将具有一个多臂结构。例如，该“Z”部分可以是一个多臂反应性结构，该结构包括2至大约10个官能团(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、或10个官能团)。示例性的多臂基团包括具有以下结构的那些
Figure GPA00001111815800241
其中每个Z(它可以是相同的或者不同的)是一个官能团、一个加帽基团、或者一个靶向羟基磷灰石的基团，可任选地包括一个间隔基部分，并且m是在1至大约350范围内的一个整数，优选地为1至大约10、更优选地为1至大约4。
这些聚合物试剂(以及由此形成的偶联物)可以包括一个或多个间隔基部分(一个“X”部分，如X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、等等)，特别是位于从两个聚合物物种或一种聚合物与一种生物活性剂的反应而产成的可降解的或稳定的连接物的任何一侧。示例性的间隔基部分包括：-C(O)O-、-OC(O)-、-CH2-C(O)O-、-CH2-OC(O)-、-C(O)O-CH2-、-OC(O)-CH2-、-C(O)-、-C(O)-NH-、-NH-C(O)-NH-、-O-C(O)-NH-、-C(S)-、-CH2-、-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-CH2-、-O-CH2-、-CH2-O-、-O-CH2-CH2-、-CH2-O-CH2-、-CH2-CH2-O-、-O-CH2-CH2-CH2-、-CH2-O-CH2-CH2-、-CH2-CH2-O-CH2-、-CH2-CH2-CH2-O-、-O-CH2-CH2-CH2-CH2-、-CH2-O-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CH2-O-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-O-CH2-、-CH2-CH2-CH2-CH2-O-、-C(O)-NH-CH2-、-C(O)-NH-CH2-CH2-、-CH2-C(O)-NH-CH2-、-CH2-CH2-C(O)-NH-、-C(O)-NH-CH2-CH2-CH2-、-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-、-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-、-CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-、-C(O)-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-、-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-、-CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-、-C(O)-O-CH2-、-CH2-C(O)-O-CH2-、-CH2-CH2-C(O)-O-CH2-、-C(O)-O-CH2-CH2-、-NH-C(O)-CH2-、-CH2-NH-C(O)-CH2-、-CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-、-NH-C(O)-CH2-CH2-、-CH2-NH-C(O)-CH2-CH2-、-CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-CH2-、-C(O)-NH-CH2-、-C(O)-NH-CH2-CH2-、-O-C(O)-NH-CH2-、-O-C(O)-NH-CH2-CH2-、-NH-CH2-、-NH-CH2-CH2-、-CH2-NH-CH2-、-CH2-CH2-NH-CH2-、-C(O)-CH2-、-C(O)-CH2-CH2-、-CH2-C(O)-CH2-、-CH2-CH2-C(O)-CH2-、-CH2-CH2-C(O)-CH2-CH2-、-CH2-CH2-C(O)-、-CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-NH-、-CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-NH-C(O)-、-CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-、-CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-CH2-、-O-C(O)-NH-[CH2]h-(OCH2CH2)j-、-NH-C(O)-O-[CH2]h-(OCH2CH2)j-、二价的环烷基基团、-O-、-S-、一个氨基酸、一个二肽或三肽、-N(R6)-、以及以上中任何的两个或多个的组合，其中R6是H或选自下组的一个有机的原子团，该组的构成为：烷基、取代的烷基、链烯基、取代的链烯基、炔基、取代的炔基、芳基以及取代的芳基、(h)是0至6、并且(j)是0至20。其他特异的间隔基部分具有以下结构：-C(O)-NH-(CH2)1-6-NH-C(O)-、-NH-C(O)-NH-(CH2)1-6-NH-C(O)-、以及-O-C(O)-NH-(CH2)1-6-NH-C(O)-，其中在每个亚甲基之后的下标值表明在该结构中所包含的亚甲基的数目，例如(CH2)1-6是指该结构可以包含1、2、3、4、5或6个亚甲基。该间隔基部分还可以包括一个氧化乙烯低聚物/聚合物链，该氧化乙烯低聚物/聚合物链包括1至25个氧化乙烯单体单位[即，(CH2CH2O)1-25]、或者除了以上所说明的间隔基部分之外或者作为它们的替代。在用于加到另一个间隔基部分时，该氧化乙烯低聚物链可以出现在该间隔基部分之前或之后，并且可任选地在由两个或多个原子所组成的一个间隔区部分的任何两个原子之间。
在本发明的偶联物中使用的优选的生物活性剂包括具有相对低的水溶性的活化剂，如某些蛋白质、肽类、以及小分子药物。特别优选的生物活性剂包括旨在对患者体内的骨组织具有一种生物效应的那些，如生长因子类、抗生素类、化学治疗剂类、以及镇痛药类。示例性的生长因子包括：成纤维细胞生长因子、血小板衍生生长因子、骨形态发生蛋白、成骨蛋白、转化生长因子、LIM矿化蛋白、骨样诱导因子、血管生成素、内皮素；生长分化因子、ADMP-1、内皮素、肝细胞生长因子、以及角质形成细胞生长因子、肝素结合性生长因子、刺猬蛋白、白细胞介素、集落刺激因子、上皮生长因子、胰岛素样生长因子、细胞因子、骨桥蛋白、以及骨粘连蛋白。
可以被共价附连至本发明的聚合物试剂上的相对疏水的活化剂的其他实例包括但不限于：松香酸、醋葡醛内酯、苊、醋硝香豆素(acenocournarol)、醋酸己脲、醋辛酚汞、甘草次酸醋酸酯、醋洋地黄毒苷、二溴乙烯、二氯乙烯、乙酰水杨酸、土木香内酯、艾氏剂、铝糖醇钠、烯丙菊酯、烯丙雌醇、烯丙基硫醚、阿普唑仑、阿司匹林铝、氨布醋胺、氨氯苯噁嗪(aminochlothenoxazin)、氨鲁米特、戊基氯、雄烯二醇、茴三硫(anethole trithone)、敌菌灵、地蒽酚、抗霉素A、除疟霉素、偶胂基乙酸、亚细亚皂苷、阿司咪唑(asternizole)、奥迪霉素、金硫醋苯胺、8-氮鸟嘌呤、偶氮苯、黄芩素、秘鲁香脂(BalsamPeru)、妥鲁香香脂(Balsam Tolu)、燕麦灵、百多邦(baxtrobin)、苄达酸、地巴唑、苄氟噻嗪、苯菌灵、苄星青霉素(benzathine)、苯雌酚、苯佐替派、苯醌(benzoxiquinone)、苄非他明、苄噻嗪、苯甲酸苄酯、肉桂酸苄酯、铋溴酚、甲羧除草醚、乐杀螨、除虫菊酯、没药醇、比沙可啶、二(氯苯氧基)甲烷、、碱式碘代没食子酸铋(bismuthiodosubgallate)、碱式没食子酸铋、鞣酸铋、双酚A、硫氯酚、冰片基、溴代异戊酸酯、冰片基氯、异戊酸冰片酯、水杨酸冰片酯、溴鼠隆、溴鼠胺、溴羟喹啉、丁苯羟酸、布他米酯、丁巴比妥、丁硫啶、丁羟茴醚、丁羟甲苯、碘硬脂酸钙、糖二酸钙、硬脂酸钙、卡泊酸、克菌丹、卡马西平、卡波氯醛、卡波硫磷(carbophenothin)、卡波醌、胡萝卜素、香芹酚、吐根酚碱、脑磷脂、大风子油酸、鹅去氧胆酸、甲壳质、氯丹、伐草克、敌螨、百菌清、氯烯雌醚、氯普噻吨、氯喹那多、卡波罗孟、西洛他唑、辛可尼丁、柠檬醛、克利贝特、氯法齐明(clofaziminc)、氯贝特、卤卡班、氯硝甘油、氯吡多、氯茚二酮、氯噁唑仑、香豆磷、皮质酮、氯灭鼠灵(cournachlor)、库马磷、环毒硫磷乙酸甲酚酯(coumithoate cresyl acetate)、杀鼠嘧啶、克芦磷酯、福美氯铜、氰美马嗪、环扁桃酯、环拉氨酯加拿大麻苷(cyclarbamate cymarin)、环孢素A、氯氰菊酯(cypermethril)、氨苯砜、地磷酰胺、溴氰菊酯、醋酸脱氧皮质酮(deoxycorticocosteroneacetate)、去羟米松、右吗拉胺、双醋佐托、氯亚磷、地百里砜、decapthon、苯氟磺胺、双氯酚、双氯非那胺、开乐散、地快乐、双香豆素(dicumarol)、已二烯雌酚、己烯雌酚、二苯米唑、双氢可待因酮烯醇乙酸酯、氢化麦角胺、双氢吗啡、双氢速甾醇、二甲乙烯雌酚、地美炔酮、敌噁磷、地芬南(diphenane)、N-(1，2-二苯基乙基)烟酰胺、3，4-二-[1-甲基6-硝基-3-吲哚基]-1H-吡咯-2，5-二酮(MNIPD)、地匹乙酯、二磺法胺、二噻农、去氧苯妥英、腙菌酮、羟磷灰石、克瘟散、大黄素、恩芬那酸、抑草蓬、麦角异柯宁碱、丁四硝酯、硬脂酸红霉素、雌三醇、依沙维林、炔孕酮、双香豆乙酯(ethylbiscournacetate)、乙氢去甲奎宁、乙基薄荷烷甲酰胺、丁香酚、尤普罗辛、依沙酰胺、非巴氨酯、非那拉胺、芬苯达唑、非尼戊醇、杀螟硫磷、非诺贝特、芬喹唑、倍硫磷、非普拉宗、非律平(flilpin)、绵马根酸、夫洛非宁、氟阿尼酮、氟甲喹、氟可丁酯、氟甲睾酮、氟替尔、氟他唑仑、夫马洁林、5-糠醇(furftiryl)-5-异丙基巴比妥酸、夫沙芬净(fusaftmgine)；格拉非宁、高血糖素、格鲁米特、格列噻唑、灰黄霉素、愈创木酚碳酸酯、愈创木酚磷酸酯；哈西奈德、血卟啉、六氯酚、己烷雌酚、海克替啶、海索比妥、氢氯噻嗪、氢可酮、异丁普生、艾地苯醌、吲哚美辛、烟酸肌醇酯、碘苯扎酸、碘西他酸、胆影酸、碘美拉酸、碘泊酸盐、异美汀、异尼辛(isonoxin)、2-异戊酰茚满-1，3-二酮、交沙霉素、11-酮孕酮、月桂氮
Figure GPA00001111815800281
酮、3-O-双醋月桂酰吡哆醇、利多卡因、林旦、亚麻酸、碘塞罗宁、鲁斯霉素、代森锰锌、扁桃酸、异戊基酯、马吲哚、甲苯达唑、美海屈林(mebhydroline)、甲铋喹、美拉胂醇、美法仑、甲萘醌、戊酸薄荷酯、美芬诺酮、美芬丁胺、美芬妥英、美普卡因、美雄诺龙、美雌醇、甲硫芬、麦角苄酯、美沙拉妥、美雄醇、甲喹酮、甲基胆蒽、哌甲酯、17-甲睾酮、美替洛尔、米那普林、金硫乙酸钙(myoral)、萘酞磷、萘哌地尔、萘、2-乳酸萘酯、2-(2-萘氧基)乙醇、水杨酸萘酯、萘普生、尼阿比妥、奈马克丁、氯硝柳胺、尼可氯酯、尼可吗啡、硝呋罗喹、硝呋齐特、尼曲吖啶、硝甲酚汞、诺拉霉素、去甲西泮、诺乙雄龙、诺孕烯酮、奥他维林、夹竹桃苷、油酸、奥沙西泮(oxazeparn)、奥沙唑仑、奥昔拉定、奥昔卡因(oxwthazaine)、羟考酮、羟甲睾酮、双醋酚丁、紫杉醇、副梅花状青霉酰胺(paraherquamide)、对硫磷、匹莫林、戊四硝酯、戊基苯酚、奋乃静、芬卡米特(phencarbamide)、非尼拉敏、2-苯基-6-氯酚、苯乙基巴比妥酸(phenthnethylbarbituric acid)、苯妥英、伏杀硫磷、O-酞磺胺噻唑、叶绿醌、哌嗪羧二硫代酸(picadex)、哌法宁、吡酮洛芬(piketopfen)、哌普唑林、吡扎地尔、丁酸新戊酰氧甲酯(pivaloyloxymethyl butyrate)、普拉贝脲、普劳诺托、聚普瑞锌、泊利噻嗪、丙磺舒、黄体酮、普美孕酮、丙泮尼地、克螨特、苯胺灵、普罗喹宗、丙硫异烟胺、乙胺嘧啶、嘧硫磷、扑蛲灵、槲皮素、奎勃龙、喹禾灵乙酯、雷复尼特、瑞西那明、罗西维林、芬氯磷、沙仑(salen)、猩红(scarlet red)、西卡宁、西玛津、西美曲特、辛伐他汀、索布佐生、蔬草灭(solan)、螺内酯、角鲨烯、雄诺龙、硫糖铝、磺胺苯、磺胺胍诺、柳氮磺吡啶、亚砜、舒必利、琥布宗、他布比妥、特麦角脲(terguide)、睾酮、四溴甲酚(tetrabromocresol)、粉防乙碱、氨硫脲、硫代秋水仙碱、硫辛酸、克杀螨、甲硫达嗪、塞仑、麝香草酚异戊胺甲酸酯、噻昔达唑、噻克索酮、生育酚、托西拉酯、托萘酯、三氯生、三氟柳、曲帕拉醇、熊果酸、缬氨霉素、维拉帕米、长春碱、维生素A、维生素D、维生素E、联苯丁酸、甲苯噻嗪、扎托洛芬、以及玉米赤霉烯酮。
在一个实施方案中，本发明提供了一种靶向羟基磷灰石的多臂聚合物，该多臂聚合物具有以下结构：
Figure GPA00001111815800291
式(Ia)
其中：
A是-(X3)d-(L3)e-(X4)f-POLY2-Z2或-(X3)d-(L3)e-(X4)f-Z2
POLY1和POLY2可以是相同的或不同的，各自均是一种水溶性的、非肽聚合物；
X1、X2、X3、以及X4可以是相同的或不同的，各自均是一个间隔基部分；
L1、L2、以及L3可以是相同的或不同的，各自均是连接物；
每个Z1可以是相同的或不同的，各自均是Z2、或一个靶向羟基磷灰石的部分、或一个多臂结构，该多臂结构包括2至大约10个靶向羟基磷灰石的部分，并且可任选地包括至少一种水溶性的、非肽聚合物，其条件为当b是0时，至少一个Z1具有一个多臂结构，该多臂结构包括一个或多个聚合物臂，并且其条件为至少一个Z1是一个靶向羟基磷灰石的部分；
Z2是一个官能团(例如，一个可电离的官能团)，可任选地通过一个间隔基附连在POLY2上；
a、b、c、d、e、以及f可以是相同的或不同的，各自或者是0或者是1；
R是一个单体的或低聚物的多臂核芯分子，该多臂核芯分子衍生自包括至少p+1个可供附连的位点的一个分子；并且
p是在2至32范围内的一个整数。
在某些实施方案中，POLY1和POLY2各自具有的数均分子量小于约22,000Da，小于约15,000Da，或小于约8,000Da。POLY1和POLY2的示例性聚合物包括聚(亚烷基二醇)、聚(烯醇)、聚(乙烯吡硌烷酮)、聚(羟烷基甲基丙烯酰胺)、聚(甲基丙烯酸羟烷酯)、聚(糖类)、聚(α-羟酸)、聚(丙烯酸)、聚(乙烯醇)、聚磷腈、聚噁唑啉、聚(N-丙烯酰吗啉)、以及共聚物、三元共聚物、或者它们的混合物。这些靶向羟基磷灰石的部分的实例包括四环素、钙黄绿素、二膦酸类物、聚天冬氨酸、聚谷氨酸、以及氨基磷糖类。
本发明的这些聚合物试剂的某些实施方案包括至少一个如上所述的可水解切割的或可酶促切割的连接物，如在L1、L2、或L3位置上。这些聚合体链(如POLY1和POLY2)可以具有一个分区段的结构，该结构包括通过连接物附连的两个至大约五个水溶性的、非-肽聚合体区段。例如，POLY1和POLY2之一或者两者均可以具有根据式-POLY-L-POLY-的一种结构，其中每个POLY是一种水溶性的、非肽聚合体，并且L是一个连接物，该连接物是可酶促切割的或可水解切割的。
在另一个方面中，本发明提供一个靶向羟基磷灰石的、多臂聚合体偶联物，该偶联物包括本发明的聚合体试剂与一个生物活性剂的反应产物，并且具有以下结构：
Figure GPA00001111815800301
式(Ib)
其中B是-(X3)d-(L3)e-(X4)f-POLY2-L4-药物或-(X3)d-(L3)e-(X4)f-L4-药物。该药物是一个生物学活性部分的一个残基，L4是从Z2与在该生物学活性部分上的一个官能团的反应所生成的连接物，并且Z3是L5-药物或一个靶向羟基磷灰石的部分，其中L5是从Z1与在该生物学活性部分上的一个官能团的反应所生成的一个连接物，其中Z1是一个官能团，其条件为至少一个Z3是一个靶向羟基磷灰石的部分。
核芯分子R可以是任何单体的或低聚物的分子，它提供了三个或多个用于附连聚合物区段的反应位点，并且将典型地包括在3个与大约32个之间的反应位点，更优选地在3个与大约25个之间的反应位点，并且最优选地在3个与大约10个之间的反应位点(例如3、4、5、6、7、8、9或10个反应位点)。注意在该核芯分子上的反应位点的数目可以大于实际用来附连聚合物区段的位点的数目(即，反应位点的数目可以大于p)。这些反应位点包括可供与功能化的聚合物区段进行反应的末端官能团，并且可以包括超过一种类型的官能团。例如，某些二肽或三肽的核芯分子将包括一个或多个羧酸基团以及一个或多个胺基团。如以上所提及，该R核芯分子可以是一种多肽(例如，二肽或三肽)或二硫化物与一种多元醇的组合以形成一个多臂核芯分子，多个聚合物臂可以在该多元醇的羟基位点上和/或在该多肽或二硫化物上的任何游离反应基团的位点上被附连在该多臂核芯分子上。注意该R核芯分子不必在附连这些聚合物臂之前被预先形成。相反，该核芯分子可以在这些聚合物臂已附连至那些将要形成最终核芯分子的组分之一上之后产生。例如，聚合物臂可以在两个聚合物修饰的多元醇分子通过一种二硫化物或二肽连接体附连在一起之前被附连至一个多元醇分子上。
用作该核芯分子的一种多元醇包括多个可供使用的羟基基团。取决于所希望的聚合物臂的数目，该多元醇将典型地包括3个至大约25个羟基基团，优选大约3个至大约22个羟基基团，最优选地大约5个至大约12个羟基基团。虽然在多个羟基基团之间的间隔会随着一个又一个多元醇而发生变化，但在每个羟基基团之间典型地存在着1个至大约20个原子，如碳原子，优选地1个至大约5个。所选择的具体的多元醇将取决于作为这些聚合物臂的附着位点所需要的希望的羟基基团数目。该多元醇起始材料的数均分子量典型地是在大约100至大约2,000Da之间。该多元醇典型地具有一个分支的结构，这意味指在该多元醇的烃核芯结构中一个或多个碳原子被共价附连到三个或四个原子上，这三个或四个原子选自碳原子和醚连接的氧原子(即，附连至两个碳原子上的氧原子)。
用作该核芯分子的优选的多元醇包括甘油低聚物或聚合物(如六甘油)、季戊四醇以及它们的低聚物或聚合物(例如，二季戊四醇、三季戊四醇、以及四季戊四醇)，以及糖衍生的醇类(如山梨醇、阿拉伯糖醇(arabanitol)、以及甘露醇。此外，多种可商购的多元醇是适当的起始材料，这些多元醇包含可电离的基团，如2-氨基-2-(羟甲基)-1，3-丙二醇(TRIS)、2-[二(2-羟乙基)氨基]-2-(羟甲基)-1，3-丙二醇、{[2-羟基-1，1-二(羟甲基)乙基]氨基}乙酸(Tricine)、2-[(3-{[2-羟基-1，1-二(羟甲基)乙基]氨基}丙基)氨基]-2-(羟甲基)-1，3-丙二醇、2-{[2-羟基-1，1-二(羟甲基)乙基]氨基}乙磺酸(TES)、4-{[2-羟基-1，1-二(羟甲基)乙基]氨基}-1-丁基磺酸、以及2-[二(2-羟乙基)氨基的]-2-(羟甲基)-1，3-丙二醇盐酸盐。典型地，在本发明中使用的多元醇聚合物将包括不超过大约25个单体单位。以下提供了二季戊四醇和三季戊四醇的结构连同可能用于六甘油的多个结构之一。
羟丙基-β-环糊精是另一个示例性的多元醇，它具有21个可供使用的羟基基团。又另一个示例性的多元醇是一种超支化的聚甘油，可以从德国的Hyperpolymers GmbH of Freiburg获得，它显示如下。
Figure GPA00001111815800331
该多元醇可包括PEG低聚物或附连在该多元醇核芯上的聚合物区段。该多元醇起始材料典型地是处于多种产物的一种混合物形式，如具有不同分子量的多元醇低聚物或聚合物的混合物或者具有不同分子量的乙氧基化多元醇结构的混合物，可能进一步包括该原始多元醇单体单元的一个剩余量，如甘油。然而，至少在该起始混合物中的这些多元醇之一典型地是一种分支的多元醇，该分支的多元醇具有至少三个根据式R(OH)p的可供使用的羟基基团，其中R是一种分支的烃(可任选地包括一个或多个醚连接物)，并且p是至少3、典型地是3至大约25、并且优选地是3至大约10。
在本发明的某些实施方案中，具有闭合空间的羟基基团的多元醇是特别优选的，它们促进了环状乙缩醛或缩酮基团用作保护羟基的基团。在该多元醇结构中在多个羟基之间的两个或三个碳原子的间隔使某些优选的杂环的保护性基团能够形成。例如，在季戊四醇低聚物或聚合物的多个羟基之间的闭合间隔利用在本领域中已知的技术使环状乙缩醛或缩酮基团能够形成。这些环状乙缩醛或缩酮基团可以通过将该多元醇与一种醛试剂(如具有式R′-CHO的一种试剂，其中R′是烷基、取代的烷基、芳基、或者取代的芳基)或一种酮试剂(例如环己酮)进行反应而形成。一种示例性的醛试剂是苯甲醛。
通过将该多元醇的大多数羟基基团安置成一种受保护的形式，该多元醇核芯可以与包括该可电离的官能团的一种试剂发生反应，以产生多种产物，这些产物差别在于其中存在的可电离官能团的数目。典型地，该反应将产生一种单官能化的产物、一种双官能化的产物、以及剩余未反应的多元醇。一种离子交换色谱系统可用于基于电荷差异来分离每种产物部分，由此允许所希望的单官能产物的纯化。用于基于电荷差异来纯化PEG聚合物物种的一种过程在美国专利申请公开文件号2005/0054816中列出，其全文通过引用结合在此。
在该纯化过程中使用的这种或这些离子交换柱可以是常规用来基于电荷而分离一种混合物的任何离子交换柱(Ion ExchangeChromatography.Principles and Method.Pharmacia Biotech 1994；″Chromatography：a laboratory handbook of chromatographic andelectrophoretic techniques.″Heftman，E(Ed.)，Van NostrandRheinhold Co.，New York，1975)。每个柱包括一种离子交换介质以及一种流动相或洗脱液，该流动相或洗脱液穿过该离子交换介质。适合于在本发明中使用的离子交换柱包括由Applied Biosystems制造的
Figure GPA00001111815800341
离子交换介质以及由Pharmacia制造的
Figure GPA00001111815800342
离子交换介质。
在某些实施方案中，每个POLY1是一种聚(乙二醇)聚合物，并且R是一种二硫化物连接体、一种二肽、一种三肽、或一种四肽，这意味着该R部分将包括至少一个二硫键(来自该二硫化物连接)或酰胺键(例如，在多个肽残基之间的连接物)。优选的R基团包括那些包括至少一个赖氨酸残基的基团。适当的二硫化物连接体包括不同的连接体，这些连接体包括一个-S-S-键以及4至25个原子的链总长，并且优选的二硫化物分子具有可供用来附连聚合物区段的4至8个官能团。在某些实施方案中，POLY1和POLY2各自均是一种分支的聚(乙二醇)聚合物。
聚合物试剂可以包括衍生自一种二硫化物分子的R部分，该二硫化物分子具有以下结构：
Figure GPA00001111815800343
在其他实施方案中，每个POLY1包括一种聚(乙二醇)聚合物，并且R是包括至少一个肽残基。该R部分可进一步包括一个二硫键。在某些实施方案中，R包括至少两个赖氨酸残基，它们通过多个酰胺连接物(linkage)连接至一个连接体(linker)上，该连接体选自下组，其构成为：一个脂肪族的碳链、包括一个二硫键的一种脂肪族的碳链、以及一种聚(乙二醇)低聚物(例如，具有从1至25个单体单位的一种低聚物)。
在又其他实施方案中，每个POLY1包括一种聚(乙二醇)聚合物，并且R包括一个非肽部分，该非肽部分包括至少一个二硫化物腱以及至少两个酰胺键。提及“非肽”是指该R分子不包括一种肽残基(即，该酰胺和二硫键不是一个肽分子的部分)。按照这种方式，可以使用由于包含了酰胺连接物而在结构中模拟肽分子的R核芯分子，但是这些R核芯分子本质上在技术方面不是肽性的(peptidic)。
虽然多臂结构是最优选的，在另一个方面中，本发明提供了一个杂合的双功能的、基本上直链的、靶向羟基磷灰石的聚合物，该聚合体具有以下结构：
Z-(X1)a-L1-(X2)b-[POLY1-(X3)c-L2-(X4)d]m-POLY2-(X5)e-Y
其中：
POLY1和POLY2可以是相同的或不同的，各自均是一种水溶性的、非肽聚合物；
X1、X2、X3、X4、以及X5可以是相同的或不同的，各自均是一个间隔基部分；
L1是一种连接物；
每个L2均是选自下组的一种可水解切割的或可酶促切割的连接物，该组的构成为氨基甲酸酯以及酰胺；
Z是一个靶向羟基磷灰石的部分；
Y是一个官能团；
a、b、c、d、以及e可以是相同的或不同的，各自或者是0或者是1；并且
m是在1至10范围内的一个整数。
本发明的示例性的聚合物试剂包括以下聚合物结构：
Figure GPA00001111815800361
AHPDP-PEG(5K)-丁醛
Figure GPA00001111815800362
AHPDP-反向尿烷-PEG2(10K)-丁醛
Figure GPA00001111815800363
AHPDP-基于三赖氨酸-PEG4(20K)-丁醛
Figure GPA00001111815800364
AHPDP-PEG(5K)-丁醛(第二结构)
实例1提供了针对以上提及的第一结构的一种示例性合成路线。以上这种第二结构是基于具有一个甘油核芯的一个“PEG 2”分子、在该PEG链末端的两个远的二膦酸类基团(bisphosphonate group)、以及通过该丁酸官能团用于药物附连的一个位点。为了构建这种分子，可以使用一个苄基封端的PEG(b-PEG)而不是一个典型的甲氧基封端的PEG(m-PEG)。然后，在一个适当的处理步骤中，这些苄基基团可以通过氢解作用而被除去，并且这些二膦酸物的官能团可以通过一系列步骤进行添加。实例2展示了这种类型的分子的一种可能的合成路线。实例3提供了针对以上提及的基于三赖氨酸的聚合物试剂的一种示例性合成。
这种形成本发明的一种靶向羟基磷灰石的多臂聚合物的方法可以变化。以下反应方案1展示了构建一种六臂多元醇的方法，该六臂多元醇基于季戊四醇、具有作为可电离的反应性臂(受保护的羧酸)的一种酯。在这个实例中，连接体L3是一种多官能的连接体，如赖氨酸。
Figure GPA00001111815800371
反应方案1
以下反应方案2显示如何将以上反应方案1的概括性结构脱保护(通过该苄基酯的氢解作用)并接着活化用于与一个胺末端治疗剂的随后反应。
反应方案2
以下反应方案3显示将一个靶向骨的部分附连至一种聚合物的末端的方法，该聚合物具有一个赖氨酸核芯以及作为这种可电离的反应性臂(reactive arm)的一种羧酸基团。如所显示，这些三苯甲基基团经受氢解作用、之后跟随该酸基团的酯化作用以形成一种受保护的酸，并接着该末端与一种靶向骨的试剂的反应，在这种情况下该靶向骨的试剂是AHPDP(3-氨基-1-羟基丙烷-1，1-二膦酸的一种衍生物)。在以下反应方案3中得到的聚合物种类可以经受氢解作用以除去这个苄基酯基团。然后，与DCC/NHS的反应(遵循类似于在美国6,436,386B1(通过引用进行结合)中所使用的那些条件)可以将这种靶向骨的的聚合物转变成一个活性的酯试剂(NHS酯)，该酯试剂可用于通过在治疗剂上的一种可供使用的胺基团(例如，一个N末端的赖氨酸)来偶联这些治疗剂。
反应方案3
如以上所指示，具有一种游离的羧基基团的氨基酸的某些同低聚物(如聚天冬氨酸或者聚谷氨酸)对羟基磷灰石具有一种良好的结合能力。因此，针对一种靶向骨的聚合物的一种可替代的结构可以使用这类多肽基团作为一种侧基来进行制备。在以下方案中示出的(反应方案4)是一种可商购的、杂合双功能的PEG衍生物可以与本领域内已知的一种聚天冬氨酸进行反应的方法。这种产物仍具有受封闭的胺以及末端羧酸，可以将该产物进一步操作以便该胺基团去封闭。这种中间物可以在形成一种多臂试剂中直接使用(例如，见反应方案5)或者可以对其进行进一步操作以形成一种活性的酯，这种酯可以被转化成一种不同的多臂试剂(该多臂试剂未显示)。
Figure GPA00001111815800401
反应方案4
以下反应方案5展示了在制备一种包含多肽的靶向骨的多臂聚合物试剂中所使用的胺受保护的以及酸受保护的中间物的形成。
反应方案5
在以下反应方案6中，来自反应方案5的甲酯中间物是通过碱性水解脱保护的，这不会影响这些丁基酯。然后，使用二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺将得到的羧酸酯化成一种活性的酯。与用来形成一种马来酰亚胺的一种带有胺的试剂的反应给出了这种聚合物试剂，该聚合物试剂带有一种马来酰亚胺基团并且在这些多肽部分上仍具有这些羧酸酯。弱酸水解将除去这些保护基团，给出了一种试剂，该试剂对含有硫醇的治疗剂是反应性的。
Figure GPA00001111815800421
反应方案6
在以下反应方案7中，与以上试剂的偶联是用一种治疗剂来展示的，该治疗剂恰好是带有一个硫醇基团的多肽。
Figure GPA00001111815800431
反应方案7
本发明包括聚合体试剂以及由该聚合物制造的偶联物，它们被设计成充当一种药物前体并且在骨位置上释放生物学活性部分。在这种情况下，将一种可降解的官能团加到发生偶联至该药物的位置上。这种酚盐或FMOC类型的可降解的官能团可以容易地被结合至这类分子中，并且因此由此作为这种类别的试剂的一种特征而被包括。
如在以下反应方案8中显示了包含一个三肽连接物的一种聚合物试剂的实例，该聚合物试剂可以在体内被酶促切割以允许该聚合物作为小的片段清除。使用可商购的三赖氨酸作为一种核芯三肽，这些游离的胺基团与一种苄基受保护的活性碳酸盐PEG(b-PEG-BTC)进行反应。这导致形成了一种四臂聚合物，该聚合物具有用一种可移除的苄基基团所保护的远末端。注意该聚合物具有一种羧酸基团，该基团可用于纯化该聚合物并且还可激活对一种药物分子的连接。
Figure GPA00001111815800441
反应方案8
针对反应方案8的产物的一系列处理步骤的完成允许增加该靶向骨的官能度以及导致以下列出的四臂二膦酸物(bisphosphonate)的药物。
Figure GPA00001111815800442
在一种可替代的过程中，一种四臂结构可以衍生自该单封闭的(酯)二硫化物连接的二肽Lys-Cys(即如下所示)的使用。
Figure GPA00001111815800451
这种小分子可以被精心制作成以下展示的四臂二膦酸物聚合物药物递送偶联物中。使用这些分区段的聚合物种类的优点在于这些聚合物通过酶或细胞内的化学作用断成更小的、直链片段的能力，这些片段与像基于某些多元醇的那些的稳定的多臂分子相比将更快地从体内被清除。
Figure GPA00001111815800452
遵循在本领域中已知的路径，以上分子可以在由这些虚线所设计的键合位点上切割。这些单虚线是酶促切割或细胞内的化学切割很可能发生的位点，并且这些双虚线表示通过一个化学过程来发生去PEG化作用(depegylation)的位点，该化学方法涉及一个相邻的酰胺基团(Guiotto et al，Biorg.Med.Chem.2004，12，5031-5037)。已知在水溶性的结合聚合物的药物分子中的二硫键在血清中或在细胞中通过像谷胱甘肽的试剂经历切割(Zalipsky et al Bioconj.Chem.1999，10，703-707；美国专利6,342,244B1；美国专利申请2005/0170508A1；Huang et al，Bioconj Chem.1998，9，612-617)。还已经报道了使用水溶性聚合物的肽键的酶切割(Ulbrich et al Makromol.Chem.1986，187，1131-1144；Suzawa et al，J.Controlled Rel.2000，69，27-41；Suzawa等人的美国专利6,103,236)。
具有二膦酸物靶向骨的基团的分区段的聚合物的用途在希望一种高分子聚合物来增强该偶联物的递送和保留直到已经达到骨靶向时可能是重要的。然后，区段切割应当允许清除这些聚合物片段，因为它们应当全部是较低分子量的并且大体上是具有连接体的线型聚合物。
除了这些聚合物试剂、由该聚合物制造的偶联物、以及如以上所说明的合成方法之外，本发明进一步包括治疗性地使用这些聚合物偶联物来治疗不同的病况和疾病情况的方法，这些病况和疾病情况应当受益于将一种生物活性剂对骨表面的靶向递送。有待治疗的示例性病况包括骨癌、骨组织的感染、衰老引起的骨组织降解、由外伤引起的骨缺损、以及类似病况。给药途径的选择、生物学活性部分、以及剂量范围可以由临床医生容易地决定，并且将基于多个因素发生变化，这些因素包括：有待治疗的病况、患者的状况、损伤或疾病的严重程度、以及类似因素。
在本文中所提及的所有论文、书籍、专利、专利公布、及其他出版物其全文都通过引用结合在此。
实例
应当理解的是尽管已经对本发明连同它的某些优选的具体实施方案，上文说明连同以下实例旨在展示而非限制本发明的范围。其他方面，在本发明范围之内的优点和改进对本发明所涉及领域的普通技术人员而言将是清楚的。例如，在某些应用中，可能希望利用根据以上所述这些式中任何一种的聚合物试剂，其中在该聚合物中所有连接物是稳定的而非可降解的。
除非另有指明，在所附的实例中所提及的所有PEG试剂是可商购的，例如来自Nektar Therapeutics，Huntsville，AL。所有1HNMR数据是通过由Bruker制造的一种300或400MHz核磁共振波谱仪产生的。高效液相色谱法(HPLC)使用Agilent 1100HPLC系统(Agilent)、凝胶渗透或离子交换柱、水性磷酸盐缓冲液(作为一种流动相)、以及折光指数(RI)检测器来进行。
实例1
I.PEG(5,000Da)-α-羟基-ω-丁酸，甲酯
将浓硫酸(8.0ml)加到在无水甲醇(400ml)中的PEG(5,000)-α-羟基-ω-丁酸(70g，0.0140摩尔)(Nektar Therapeutics)的一种溶液中，之后跟随在室温下搅拌该混合物达3小时。加入NaHCO3(8％的水性溶液)以便将该混合物的pH调整至7.0。在减压下将甲醇蒸馏出，并且用CH2Cl2(2x350ml)萃取该产物。在减压下将萃取物干燥(MgSO4)并且将溶剂蒸馏出。产量60g。
NMR(d6-DMSO)：1.72ppm(m，-CH 2 CH2COO-，2H)，2.34ppm(t，-CH2COO-，2H)，3.51ppm(s，PEG骨架)，4.57ppm(t，-OH，1H)，3.58ppm(s，CH3O-，3H)。
II.PEG(5,000Da)-α-琥珀酰亚胺碳酸酯-ω-丁酸，甲酯
将吡啶(1.60ml)和二琥珀酰亚胺碳酸酯(3.92g)加到在乙腈(300ml)中的PEG(5,000Da)-α-羟基-ω-丁酸，甲酯(60g，0.0120摩尔)的一种溶液中，并且在室温下在氩气气氛下将该反应混合物搅拌过夜。接下来，将该混合物过滤并且将溶剂蒸干。将粗制产物溶解在二氯甲烷中，并且用异丙醇将该产物进行沉淀。在减压下将这种湿产物干燥。产量57g。
NMR(d6-DMSO)：1.72ppm(m，-CH 2 CH2COO-，2H)，2.34ppm(t，-CH2COO-，2H)，2.81ppm(s，-CH2CH2-(琥珀酰亚胺)，4H)，3.51ppm(s，PEG backbone)，3.58ppm(s，-CH3O-，3H)，4.45ppm(m，-CH2-O(C＝O)-，2H)。
III.PEG(5,000Da)-α-AHPDP-ω-丁酸
将3-氨基-1-羟基丙烷-1，1-二膦酸、双四丁铵盐(AHPDP-2Bu4N)(6.2g)、以及三乙胺(2.4ml)加到在乙腈(400ml)中的PEG(5,000Da)-α-琥珀酰亚胺碳酸酯-ω-丁酸，甲酯(40g，0.0080摩尔)的一种溶液中，并且在室温下在氩气气氛下将该反应混合物搅拌过夜。接下来将溶剂蒸干。将粗制产物溶解在DI水中(400ml)并且用1M氢氧化钠将该溶液的pH调整至12.0。将该溶液搅拌2小时，通过周期性加入1M氢氧化钠使pH保持在12，然后将它通过Amberlite IR120(plus)柱(200ml)过滤。在减压下水将从滤液中蒸馏出。将这种湿产物溶解在二氯甲烷中(600ml)，然后将溶剂蒸馏出。最后，在减压下将产物干燥。产量35g。
NMR(d6-DMSO)：1.72ppm(m，-CH 2 CH2COO-，2H)，2.02ppm(m，-CH2-(AHPDP)，2H)，2.34ppm(t，-CH2COO-，2H)，3.51ppm(s，PEG  骨架)，4.03ppm(m，-CH2-O(C＝O)-，2H)，7.11ppm(t，-(C＝O)NH-，1H)。
IV.PEG(5,000Da)-α-AHPDP-ω-丁酸，N-羟基琥珀酰亚胺酯
将N-羟基琥珀酰亚胺(0.83g，0.0072摩尔)加到在无水二氯甲烷(300ml)中的PEG(5,000Da)-α-AHPDP-ω-丁酸(30g，0.0060当量)的一种溶液中，之后跟随1，3-二环己基碳二亚胺(在二氯甲烷中的1.0M溶液，7.2ml、0.0072摩尔)。在室温下在氩气气氛下将该反应混合物搅拌过夜。接下来，将该混合物过滤并且将溶剂蒸干。将粗制产物溶解在二氯甲烷中，并且用异丙醇将该产物沉淀。最后，在减压下将产物干燥。产量27g。
NMR(d6-DMSO)：1.84ppm(m，-CH 2 CH2COO-，2H)，2.02ppm(m，-CH2-(AHPDP)，2H)，2.71ppm(t，-CH2COO-，2H)，2.81ppm(s，-CH2CH2-(琥珀酰亚胺)，4H)，3.51ppm(s，PEG骨架)，4.03ppm(m，-CH2-O(C＝O)-，2H)，7.11ppm(t，-(C＝O)-NH-，1H)。
V.PEG(5,000)-α-AHPDP-ω-丁醛缩二乙醇
将四(乙二醇)-α-氨基-ω-丁醛，缩二乙醇(Nektar Therapeutics；2.0g，0.0059摩尔)加到在一种含水的二氯甲烷(250ml)中的PEG(5,000Da)-α-AHPDP-ω-丁酸，N-羟基琥珀酰亚胺酯(25g，0.0050当量)的一种溶液中，之后跟随三乙胺(1.70ml)。在室温下在氩气气氛下将该反应混合物搅拌过夜。接下来，将该混合物过滤并且将溶剂蒸干。将粗制产物溶解在二氯甲烷中，并且用异丙醇将该产物进行沉淀。最后，在减压下使该产物干燥。产量22g。
NMR(d6-DMSO)：1.10ppm(t，CH3-C，6H)，1.51ppm(m，C-CH2-CH2-，丁醛，4H)，1.72ppm(m，-CH 2 CH2COO-，2H)，2.02ppm(m，-CH2-(AHPDP)，2H)，2.10ppm(t，-CH2COO-，2H)，3.51ppm(s，PEG骨架)，4.03ppm(m，-CH2-O(C＝O)-，2H)，4.46ppm(t，-CH-，乙缩醛，1H)，7.11ppm(t，-(C＝O)-NH-，1H)。
VI.PEG(5,000)-α-AHPDP-ω-丁醛_
将PEG(5,000)-α-AHPDP-ω-丁醛缩二乙醇(20g)溶解在300ml水中，并且用稀磷酸将该溶液的pH调整至2.5。在室温下将该溶液搅拌3小时。接下来，使用0.5M氢氧化钠将该溶液的pH调整至7。用二氯甲烷萃取产物，并且用乙醚将产物沉淀。最后，在减压下将产物干燥。产量17.5g。
NMR  (d6-DMSO)：1.75ppm  (m，-CH 2 CH2CHO，2H  和-CH 2 CH2COO-，2H)，2.02ppm(m，-CH2-(AHPDP)，2H)，2.10ppm(t，-CH2COO-，2H)，2.44ppm(dt，-CH 2 CHO，2H)，3.51ppm(s，PEG骨架)，4.03ppm(m，-CH2O(C＝O)-，2H)，7.11ppm(t，-(C＝O)-NH-，1H)，9.66ppm(t，-CHO，1H)。
实例2
I.一种基于甘油的前体分子的制备
一种基于甘油的前体分子(化合物1)
在甲苯中(100ml)的顺式-1，3-O-亚苄基甘油(7.2g，0.040摩尔)(Sigma-Aldrich Corporation，St.Louis St.Louis，MO)的一种溶液通过蒸馏出甲苯进行共沸地(azetropically)干燥。将经干燥的化合物溶解在无水甲苯(100ml)，并且加入在叔丁醇中(60ml，0.060摩尔)的叔丁醇钾的1.0M溶液以及1-(3-溴丙基)-4-甲基-2，6，7-三噁二环[2，2，2]辛烷(14.0g，0.0558摩尔)，并且在100℃下在氩气气氛下将该混合物搅拌过夜。将混合物过滤并且在减压下将溶剂蒸馏出，以给出15.7g固态产物(化合物2)。NMR(d6-DMSO)：0.74ppm(s，3H)，1.61ppm(m，4H)，1.88ppm(m，2H)，3.44ppm(t，2H)，3.81ppm(s，6H)，4.05ppm(m，4H)，5.55ppm(s，1H)，7.37ppm(m，5H)。
该反应示意性地表示如下：
Figure GPA00001111815800501
顺式-1，3-O-亚苄基甘油1-(3-溴丙基)-4-甲基-2，6，7-三噁化合物2二环[2，2，2]辛烷
化合物2的水解。将化合物2(15.0g)溶解在乙腈(150ml)与蒸馏水(35ml)的一种混合物中。接下来，加入10％的H3PO4溶液以便将pH调整至4.5。在pH＝4.5下将该混合物搅拌1小时。加入NaCl(2g)并且将pH调整至7.5。用CH2Cl2(600和150ml)萃取该产物。
将萃取物干燥(MgSO4)，并且在减压下将溶剂蒸馏出以给出一种固态产物(化合物3)。该产量被测定为14.2g。
NMR(d6-DMSO)：0.78ppm(s，3H)，1.79ppm(m，2H)，2.41ppm(t，2H)，3.25ppm(m，6H)，3.49ppm(t，2H)，4.05ppm(m，4H)，4.48ppm(t，3H)，5.56ppm(s，1H)，7.37ppm(m，5H)。
该反应示意性地表示如下：
Figure GPA00001111815800511
化合物2                 化合物3
将化合物3(14.2g)溶解在乙腈(80ml)与蒸馏水(80ml)的一种混合物中。接下来，加入6％的NaOH溶液以便将pH调整至12.5。在从12.3至12.8范围内的pH下将该溶液搅拌5.5小时，该PH是通过周期性地加入6％的NaOH溶液来维持的。加入NaCl(5g)，并且用5％H3PO4将pH调整至7.5。用CH2Cl2(两步处理，第一步使用300ml而第二步使用200ml)萃取这些非酸性的杂质。用H3PO4将该溶液的pH调整至3.0，并且用CH2Cl2(两步处理，第一步使用200ml而第二步使用100ml)萃取产物。
将萃取物干燥(MgSO4)，并且在减压下将溶剂蒸馏出。得到的产物(化合物4)具有8.7g的产量。
NMR(d6-DMSO)：1.76ppm(m，2H)，2.31ppm(t，2H)，3.46ppm(t，2H)，4.05ppm(m，4H)，5.56ppm(s，1H)，7.37ppm(m，5H)。
该反应示意性地表示如下：
Figure GPA00001111815800512
化合物3                         化合物4
将化合物4(8g)溶解在无水甲醇(120ml)中，并且在溶解时加入浓H2SO4(1.6ml)。在室温下将该溶液搅拌4小时。加入NaHCO3(8％的溶液)以便将混合物的pH调整至7.5。用CH2Cl2(两步处理，每步均使用100ml)萃取产物。
将萃取物干燥(MgSO4)，并且在减压下(0.05mm Hg)在60℃下将挥发的化合物蒸馏出。得到的产物(化合物1)具有4.8g的产量。
NMR(d6-DMSO)：1.72ppm(m，2H)，2.37ppm(t，2H)，3.20ppm(m，1H)，3.42ppm(bm，4H)，3.49ppm(t，2H)，3.59ppm(s，3H)，4.46ppm(t，2H)。
该反应示意性地表示如下：
Figure GPA00001111815800521
化合物4                      化合物1
II.“HO-PEG2 (20K) -丁酸，N-羟基琥珀酰亚胺酯”的制备
Figure GPA00001111815800522
(其中HO-PEG10K表示具有10,000道尔顿分子量的一种PEG)
“HO-PEG2(20K)-丁酸，N-羟基琥珀酰亚胺酯”
在这种前体分子中羟基基团的活化
将化合物1(2.0g，0.0208当量)溶解在无水乙睛(50ml)中，并且加入无水吡啶(2.2ml，0.272摩尔)以及N，N-二琥珀酰亚胺碳酸酯(5.86g，0.0229摩尔，DSC)。在室温下在氩气气氛下将该溶液搅拌过夜。接下来，将混合物过滤并且将溶剂蒸馏出。将这种粗制产物溶解在CH2Cl2(50ml)中，并且用5％的H3PO4溶液进行洗涤。接下来，将溶液干燥(MgSO4)，并且将溶剂蒸馏出。得到的产物(化合物5)具有2.8g的产量。
NMR(d6-DMSO)：1.76ppm(m，2H)，2.35ppm(t，2H)，2.82ppm(s，8H)，3.56ppm(t，2H)，3.58ppm(s，3H)，3.96ppm(m，1H)，4.37ppm(m，2H)，4.52ppm(m，2H)。
该反应示意性地表示如下：
Figure GPA00001111815800523
化合物1                  化合物5
用一种含有胺的水溶性聚合物将这种活化的前体偶合
将化合物5(0.901g，0.0038当量)加到苄氧基-PEG(5K)-胺(BzO-PEG(5K)-胺)(20g，0.0040摩尔)(NektarTherapeutics，Huntsville，AL)、二氯甲烷(200ml)、以及三乙胺(1.4ml)的一种混合物中。在室温下在氩气气氛下将该混合物搅拌过夜。接下来，在减压下将溶剂蒸馏出。
该反应示意性地表示如下：
化合物6
BzO-PEG2 (20K) -丁酸的脱保护步骤和色谱纯化
将获得的化合物6(在本文中称为BzO-PEG2(20K)-丁酸，甲酯)溶解在400ml的蒸馏水中，并且用0.5M NaOH溶液将该溶液的pH调整至12.2。在12.0至12.2范围内的pH下将该溶液搅拌3小时。接下来，加入NaCl(20g)并且用5％的H3PO4溶液将pH调整至3.0。用CH2Cl2(150mlx2)萃取产物。将该萃取物干燥(MgSO4)，并且在减压下将溶剂蒸馏出，给出了19g的固体产物。该产物如在美国专利号5,932,462中所说明通过离子交换色谱法进行纯化，给出了14.5g的100％纯产物。
NMR(d6-DMSO)：1.72ppm(q，-CH 2 CH2COO-，2H)2.24ppm(t，-CH2COO-，2H)，3.12ppm(q，-CH 2 NH-，4H)，3.51ppm(s，PEG骨架)，3.99ppm(m，-CH 2 O(C＝O)NH-，4H)，4.49ppm(s，-CH2-(苄基)，4H)，7.19ppm(t，-(C＝O)NH-，2H)，7.33ppm(m，C6H5-，10H)。
该反应示意性地表示如下：
Figure GPA00001111815800541
BzO-PEG2(10K)-丁酸，甲酯   BzO-PEG2(10K)--丁酸
BzO-PEG2 (10K) -丁酸，N-羟基琥珀酰亚胺酯的制备
Figure GPA00001111815800542
将BzO-PEG2(10K)-丁酸(14.5g，0.00145摩尔)(如以上所说明进行制备)溶解在无水二氯甲烷中(150ml)，并且加入N-羟基琥珀酰亚胺(0.179g，0.00156摩尔)和1，3-二环碳二亚胺(1，3-dicyclocarbodiimide)(0.336g，0.00163摩尔)。在室温下在氩气气氛下将该混合物搅拌过夜。接下来，在减压下将该溶剂的一部分蒸馏出，并且在室温下用异丙醇将该产物沉淀，并且在真空下将该产物干燥，给出了14.0g白色粉末。
NMR(d6-DMSO)：1.81ppm(q，-CH 2 CH2COO-，2H)，2.70ppm(t，-CH2COO-，2H)，2.81ppm(s，-CH2CH2-(琥珀酰亚胺)，4H)，3.12ppm(q，-CH 2 NH-，4H)，3.51ppm(s，PEG骨架)，3.99ppm(m，-CH 2 O(C＝O)NH-，4H)，4.49ppm(t，-CH2-(苄基)，4H)，7.22ppm(t，-(C＝O)NH-，2H)，7.33ppm(m，C6H5-，10H)。
“HO-PEG2 (10K) -丁酸，N-羟基琥珀酰亚胺酯”的制备
Figure GPA00001111815800543
将BzO-PEG2(10K)-丁酸，N-羟基琥珀酰亚胺酯(12.3g，0.00123摩尔)(如以上所说明进行制备)溶解在无水乙醇中(240ml)，并且加入载有氢氧化钯的活性炭(20重量％的Pd，含水量50％；0.7g)，并且在40psi的氢气下将该反应混合物氢化过夜。接下来，将该混合物过滤并且在减压下将溶剂蒸馏出。在室温下用异丙醇将该产物沉淀并且在真空下将其干燥，给出了11.5g白色粉末。
NMR(d6-DMSO)：1.81ppm(q，-CH 2 CH2COO-，2H)，2.70ppm(t，-CH2COO-，2H)，2.81ppm(s，-CH2CH2-，琥珀酰亚胺，4H)，3.12ppm(q，-CH 2 NH-，4H)，3.51ppm(s，PEG骨架)，3.99ppm(m，-CH 2 ONH(C＝O)，4H)，4.57ppm(t，-OH，2H)，7.22ppm(t，-(C＝O)-NH-，2H)。
HO-PEG2 (20K) -丁醛，缩二乙醇的制备
HO-(CH2CH2O)4CH2(CH2)2-CH(OCH2CH2)2
在减压下(旋转蒸发器)通过将甲苯蒸馏出将四(乙二醇)(97.1g，0.500摩尔)与甲苯(200ml)的一种混合物共沸地干燥。将经干燥的四(乙二醇)溶解在无水甲苯中(180ml)，并且加入在叔丁醇(120.0ml，0.120摩尔)中的叔丁醇钾盐的1.0M溶液以及4-氯丁醛缩二乙醇(18.1g，0.100摩尔)(Alfa Aesar，Ward Hill，MA)。在95℃至100℃下在氩气气氛下将该混合物搅拌过夜。在冷却至室温之后，将混合物过滤并且在减压下将溶剂蒸馏出。将该粗制产物溶解在1000ml去离子水中，并且将得到的溶液经活性炭过滤。加入氯化钠(100g)，并且用二氯甲烷(250、200、以及150ml)萃取产物。将萃取物干燥(经MgSO4)，并且在减压下将溶剂蒸馏出(通过旋转蒸发作用)。
将该粗制产物溶解在300ml10％磷酸盐缓冲液(pH＝7.5)中，并且用乙酸乙酯(2x50ml)萃取杂质。用CH2Cl2(200、150、以及100ml)萃取得到的产物。将萃取物干燥(经MgSO4)，并且在减压下将溶剂蒸馏出(通过旋转蒸发作用)。产量：20.3g。
NMR(d6-DMSO)：1.10ppm(t，CH3-C-)1.51ppm(m，C-CH2-CH2-)，3.49ppm(bm，-OCH2CH2O-)，4.46ppm(t，-CH，乙缩醛)，4.58ppm(t，-OH)。纯度：大概100％(没有未反应的起始材料的信号)。
四(乙二醇)-α-甲磺酸酯-ω-丁醛，缩二乙醇的制备
CH3-S(O)2-O-(CH2CH2O)4CH2(CH2)2-CH(OCH2CH2)2
在减压下(旋转蒸发器)通过蒸馏出甲苯将四(乙二醇)单丁醛，缩二乙醇(12.5g，0.037摩尔)与甲苯(120ml)的一种混合物共沸地干燥。将经干燥的四(乙二醇)单丁醛，缩二乙醇溶解在无水甲苯中(100ml)。向该溶液加入20ml无水二氯甲烷以及5.7ml三乙胺(0.041摩尔)。然后，逐滴加入4.5g甲磺酰氯(0.039摩尔)。在室温下在氮气下将该溶液搅拌过夜。接下来，加入碳酸钠(5g)，将该混合物搅拌1小时。然后，将该溶液过滤，并且在减压下(旋转蒸发器)将该溶剂蒸馏出。
NMR(d6-DMSO)：1.10ppm(t，CH3-C-)1.51ppm(m，C-CH2-CH2-)，3.17ppm(s，CH3-甲磺酸盐/酯)，3.49ppm(bm，-OCH2CH2O-)，4.30ppm(m，-CH2-甲磺酸盐/酯)，4.46ppm(t，-CH，乙缩醛)。纯度：大概100％。
四(乙二醇)-α-氨基-ω-丁醛，缩二乙醇
H2N-(CH2CH2O)4CH2(CH2)2-CH(OCH2CH2)2
在室温下将四(乙二醇)-α-甲磺酸酯-ω-丁醛，缩二乙醇(14.0g)、浓氢氧化铵(650ml)、以及乙醇(60ml)的一种混合物搅拌42小时。接下来，在减压下将所有挥发的材料蒸馏出。将这种粗制产物溶解在150ml的去离子水中，并且用1.0M NaOH将溶液的pH调整至12。用二氯甲烷(3x100ml)萃取产物。将萃取物干燥(MgSO4)，并且在减压下(旋转蒸发器)将溶剂蒸馏出。产量10.6g。
NMR(D2O)：1.09ppm(t，CH3-C-)1.56ppm(m，C-CH2-CH2-)，2.69ppm(t，CH2-N)，3.56ppm(bm，-OCH2CH2O-)，4.56ppm(t，-CH，乙缩醛)。纯度：大概100％。
HO-PEG2(10KDa)-丁醛，缩二乙醇
Figure GPA00001111815800571
将四(乙二醇)-α-氨基-ω-丁醛，缩二乙醇(0.40g，0.00118摩尔)以及三乙胺(0.037ml)加入在二氯甲烷(100ml)中的HO-PEG2(10K)-丁酸，N-羟基琥珀酰亚胺酯(10.6g，0.00106摩尔)的一种溶液中，并且在室温下在氩气气氛下将该混合物搅拌过夜。使用一个旋转蒸发器将溶剂蒸干。将这种粗制产物溶解在二氯甲烷中，并且用异丙醇进行沉淀。在减压下将这种湿产物干燥。产量10.5g。
NMR(d6-DMSO)：1.10ppm(t，CH 3 CH2-，6H)，1.51ppm(m，-CH2CH2-(丁醛)，4H)，1.67ppm(m，-CH 2 CH2COO-，2H)，2.12ppm(t，-CH2COO-，2H)，3.12ppm(q，-CH 2 NH-，4H)，3.51ppm(s，PEG骨架)，3.99ppm(m，-CH2-O(C＝O)-，4H)，4.46ppm(t，1H，乙缩醛).4.57ppm(t，-OH，2H)，7.22ppm(t，-(C＝O)NH-，2H)，7.82ppm(t，-(C＝O)NH-，1H).。取代：大概100％。
BTC-PEG2(10KDa)-丁醛，缩二乙醇
Figure GPA00001111815800572
将吡啶(0.68ml)和二苯并三唑基碳酸酯(0.89g的70％混合物，0.00210摩尔)加到在无水乙腈(140ml)中的HO-PEG2(10K)-丁醛，缩二乙醇(10.5g，0.00105摩尔)的一种溶液中，并且在室温下在氩气气氛下将该混合物搅拌过夜。使用旋转蒸发器将溶剂蒸干。将这种粗制产物溶解在二氯甲烷中。并且用异丙醇进行沉淀。在减压下将这种湿产物干燥。产量10.0g。
NMR(d6-DMSO)：1.10ppm(t，CH 3 CH2-，6H)，1.51ppm(m，-CH2CH2-(丁醛)，4H)，1.67ppm(m，-CH 2 CH2COO-，2H)，2.12ppm(t，-CH2COO-，2H)，3.12ppm(q，-CH 2 NH-，4H)，3.51ppm(s，PEG骨架)，3.99ppm(m，-CH2-O(C＝O)-，4H)，4.46ppm(t，1H，乙缩醛)，4.62ppm(m，PEG-O-CH2-O(C＝O)O-，4H)，7.19ppm(t，-(C＝O)NH-，2H)，7.41-8.21ppm(多络合物(complex mult)，苯并三唑质子，4H)，7.80ppm(t，-(C＝O)NH-，1H)。取代：大概100％。
AHPDP-PEG2(10KDa)-丁醛
Figure GPA00001111815800581
将3-氨基-1-羟基丙烷-1，1-二膦酸、双四丁铵盐(AHPDP-2Bu4N)(1.7g)、以及三乙胺(3.0ml)加到在无水二氯甲烷(100ml)中的BTC-PEG2(10KDa)-丁醛，缩二乙醇(10g，0.0010摩尔)的一种溶液中，并且在室温下在氩气气氛下将该反应混合物搅拌过夜。接下来，将溶剂蒸干。将这种粗制产物溶解在DI水中(200ml)，并且将溶液经Amberlite IR 120(plus)柱(100ml)过滤。接下来，用5％的H3PO4将该溶液的pH调整至2.5。将该溶液搅拌3小时，然后用1M氢氧化钠将pH再调整至6.6。通过超滤作用从该溶液中除去低分子量的化合物。接下来，在减压下将水蒸馏出，给出了6.2g的白色固态产物。
NMR(d6-DMSO)：1.75ppm  (m，-CH 2 -CH2-CHO，2H和-CH 2 CH2COO-，2H)，2.02ppm(m，-CH2-(AHPDP)，4H)，2.10ppm(t，-CH2COO-，2H)，2.44ppm(dt，-CH 2 -CHO，2H)，3.12ppm(q，-CH 2 NH-，4H)，3.51ppm(s，PEG骨架)，4.03ppm(m，-CH2-O(C＝O)-，4H)，7.19ppm(t，-(C＝O)-NH-，2H)，7.80ppm(t，-(C＝O)-NH-，1H)，9.66ppm(t，-CHO，1H)。
实例3
1.基于三赖氨酸的BzO-PEG4 (20K) -酸的制备
Figure GPA00001111815800591
一种基于三赖氨酸的BzO-PEG4(20K)-酸
将三赖氨酸(1.0g，0.00666当量)(Sigma-Aldrich Corporation，St.Louis，MO)溶解在0.1M硼酸溶液中(200ml)，并且用0.1M NaOH将该溶液的pH调整至8.5。接下来，在45分钟内在搅拌过程中加入苄氧基-PEG(5K)-苯并三唑基碳酸盐(BzO-PEG(5K)BTC)(40.0g，0.00800摩尔)(Nektar Therapeutics，Huntsville，AL)。在加入BzO-PEG(5K)BTC的过程中，通过周期性加入0.1M NaOH将pH保持在8.5至9.0。然后，在室温下将该反应混合物搅拌过夜。加入氯化钠(10g)，并且用10％的H3PO4溶液将该混合物的pH调整至2.0。用CH2Cl2萃取这种粗制产物。将萃取物干燥(MgSO4)，并且在减压下将溶剂蒸馏出。
该粗制产物如在美国专利号5,932,462中所说明通过离子交换色谱法进行纯化，给出了22.8g的100％纯产物。
NMR(d6-DMSO)：1.10-175ppm(多络合物，-CH-(CH 2 )3-(赖氨酸)，18H)，3.12ppm(q，-CH 2 -NH(C＝O)-，6H)，3.51ppm(s，PEG骨架)，3.92ppm(m，-CH-COOH，1H)，4.03ppm(m，-CH2O(C＝O)NH-，8H)，4.49ppm(s，-CH2-(苄基)，8H)，7.14ppm(t，-CH2 NH(C＝O)-，3H)，7.32ppm(m，-C6H5，20H和-CHNH(C＝O)-，1H)。
2.基于三赖氨酸的HO-PEG4 (20K) -酸
Figure GPA00001111815800601
将基于三赖氨酸的BzO-PEG2(20K)-酸(22.0g，0.00110摩尔)(如以上所说明进行制备)溶解在乙醇中(96％，200ml)，并且加入载有氢氧化钯的活性炭(20重量％的Pd，含水量50％；1.5g)，并且在40psi的氢气下将该反应混合物氢化过夜。接下来，将该混合物过滤并且在减压下将溶剂蒸馏出。将这种粗制产物溶解于CH2Cl2(300ml)。将溶液干燥(MgSO4)并且在减压下将溶剂蒸馏出。在真空下将这种湿产物干燥，给出了19.5g的白色固体。
NMR(d6-DMSO)：1.10-175ppm(多络合物，-CH-(CH 2 )3-(赖氨酸)，18H)，3.12ppm(q，-CH 2 -NH(C＝O)-，6H)，3.51ppm(s，PEG骨架)，3.92ppm(m，-CH-COOH，1H)，4.03ppm(m，-CH2O(C＝O)NH-，8H)，4.56ppm(t，-OH，4H)，7.14ppm(t，-CH2 NH(C＝O)-，3H)，7.31ppm(d，-CHNH(C＝O)-，1H)。
3.基于三赖氨酸的HO-PEG2 (20K) -丁醛，缩二乙醇
Figure GPA00001111815800611
将基于三赖氨酸的HO-PEG4(20K)-酸(20.0g，0.00100摩尔)(作为如上说明的制备)溶解在无水二氯甲烷中(200ml)，并且加入四(乙二醇)-α-氨基-ω-丁醛，缩二乙醇(3.70g，0.00110摩尔)和1-羟基苯并三唑(0.140g，0.00105摩尔)、以及N，N-二环己基碳二亚胺(2.30g，0.00111摩尔)。在室温下在氩气气氛下将该混合物搅拌过夜。接下来，在减压下使该溶剂的一部分蒸馏出，并且在室温下用异丙醇使该产物沉淀，以及在真空下将产物干燥，给出19.5g白色粉末。
NMR(d6-DMSO)：1.10ppm(t，CH 3 CH2-，6H)，1.10-175ppm(多络合物，-CH-(CH 2 )3-(赖氨酸)，18H和-CH2CH2-(丁醛)，4H)，3.12ppm(q，-CH 2 -NH(C＝O)-，6H)，3.51ppm(s，PEG骨架)，3.92ppm(m，-CH-COO-，1H)，4.03ppm(m，-CH2O(C＝O)NH-，8H)，4.46ppm(t，-CH(乙缩醛)，1H)，4.56ppm(t，-OH，4H)，7.14ppm(t，-CH2 NH(C＝O)-，3H)，7.31ppm(d，-CHNH(C＝O)-，1H)。取代：大概100％。
4.基于三赖氨酸的BTC-PEG4 (20K) -丁醛，缩二乙醇的制备
将吡啶(1.25ml)以及二苯并三唑基碳酸盐(3.30g 70％混合物，0.007800摩尔)加到在无水乙腈(200ml)中的基于三赖氨酸的HO-PEG2(20K)-丁醛，缩二乙醇(19.5g，0.00390-OH当量)的一种溶液中，并且在室温下在氩气气氛下将该混合物搅拌过夜。将该混合物过滤，并且使用旋转蒸发器将溶剂蒸干。将这种粗制产物溶解在二氯甲烷中并且用异丙醇进行沉淀。在减压下将这种湿产物干燥。产量19.0g。
NMR(d6-DMSO)：1.10ppm(t，CH 3 CH2-，6H)，1.10-1.75ppm(多络合物，-CH-(CH 2 )3-(赖氨酸)，18H和-CH2CH2-(丁醛)，4H)，3.12ppm(q，-CH 2 -NH(C＝O)-，6H)，3.51ppm(s，PEG骨架)，3.92ppm(m，-CH-COO-，1H)，4.03ppm(m，-CH2-O(C＝O)-，8H)，4.45ppm(t，1H，乙缩醛)，4.62ppm(m，mPEG-O-CH2-O(C＝O)O-，8H)，7.14ppm(t，-CH2 NH(C＝O)-，3H)，7.31ppm(d，-CHNH(C＝O)-，1H)，7.41-8.21ppm(多络合物，苯并三唑质子，16H)。取代：大概100％。
5.基于三赖氨酸的AHPDP-PEG2 (20K) -丁醛的制备
将3-氨基-1-羟基丙烷-1，1-二膦酸、双四丁铵盐(AHPDP-2Bu4N)(6.4g)、以及三乙胺(5.8ml)加到在无水二氯甲烷(300ml)中的基于三赖氨酸的BTC-PEG4(20K)-丁醛，缩二乙醇(19g，0.0380-BTC当量)的一种溶液中，并且在室温下在氩气气氛下将该反应混合物搅拌过夜。接下来，将溶剂蒸干。将这种粗制产物溶解在DI水中(400ml)，并且将该溶液通过Amberlite IR 120(plus)柱(100ml)过滤。接下来，用5％的H3PO4将pH调整至2.5。将溶液搅拌3小时，然后用1M氢氧化钠将pH再调整至6.6。通过超滤作用从该溶液中除去低分子量的化合物。接下来，在减压下将水蒸馏出，给出了17.4g白色固态产物。
NMR(d6-DMSO)：1.10-1.75ppm(多络合物，-CH-(CH 2 )3-(赖氨酸)，18H)，2.02ppm(m，-CH2-(AHPDP)，8H)，2.44ppm(dt，-CH 2 CHO，2H)，3.12ppm(q，-CH 2 NH(C＝O)-，4H)，3.51ppm(s，PEG骨架)，3.92ppm(m，-CH-COO-，1H)，4.03ppm(m，-CH2-O(C＝O)-，8H)，7.14ppm(t，2H)，7.31ppm(d，1H)，9.66ppm(t，-CHO，1H)。

Claims (28)

1.一种聚合物，该聚合物具有以下结构：
Figure FPA00001111815700011
式(Ia)
其中：
A是-(X3)d-(L3)e-(X4)f-POLY2-Z2或-(X3)d-(L3)e-(X4)f-Z2
POLY1和POLY2可以是相同的或不同的，各自均是一种水溶性的、非肽聚合物；
X1、X2、X3、以及X4可以是相同的或不同的，各自均是一个间隔基部分；
L1、L2、以及L3可以是相同的或者不同的，各自均是连接物；
每个Z1可以是相同的或者不同的，各自均是选自下组的基团，该组的构成为：Z2、一种靶向羟基磷灰石的部分、以及一种多臂结构，该多臂结构包括2至大约10个靶向羟基磷灰石的部分，并且可任选地包括至少一种水溶性的、非肽聚合物，其条件为在b为0时，至少一个Z1具有一种多臂结构，该多臂结构包括一个或多个聚合物臂并且其条件为至少一个Z1是一个靶向羟基磷灰石的部分；
Z2是一个官能团，可任选地通过一个间隔基部分附连在POLY2上；
a、b、c、d、e、以及f可以是相同的或者不同的，各自或者是0或者是1；
R是一个单体的或低聚物的多臂核芯分子，该多臂核芯分子衍生自包括至少p+1个可供附连的位点的一个分子；并且
p是在2至32范围内的一个整数。
2.如权利要求1所述的聚合物，其中每个POLY1和POLY2，当存在时，具有小于大约22,000Da的数均分子量。
3.如权利要求2所述的聚合物，其中每个POLY1和POLY2，当存在时，具有小于大约15,000Da的数均分子量。
4.如权利要求3所述的聚合物，其中每个POLY1和POLY2，当存在时，具有小于大约8,000Da的数均分子量。
5.如权利要求1所述的聚合物，其中每个Z1是独立地选自下组，其构成为：四环素、钙黄绿素、二膦酸类物、聚天冬氨酸、聚谷氨酸、以及氨基磷糖类。
6.如权利要求1所述的聚合物，其中L1、L2、以及L3中的至少一个是可水解切割的或可酶促切割的。
7.如权利要求1所述的聚合物，其中POLY1和POLY2之一或者两者，当存在时，具有一种分区段的结构，该分区段的结构包括通过多个连接物附连的两个至大约五个水溶性的、非肽聚合物区段。
8.如权利要求7所述的聚合物，其中POLY1和POLY2之一或者两者，当存在时，具有根据式-POLY-L-POLY-的一种结构，其中每个POLY是一种水溶性的、非肽聚合物，并且L是一个连接物。
9.如权利要求1所述的聚合物，其中每个POLY1和POLY2，当存在时，是独立地选自下组的聚合物，该组的构成为：聚(亚烷基二醇)、聚(烯醇)、聚(乙烯吡硌烷酮)、聚(羟烷基甲基丙烯酰胺)、聚(甲基丙烯酸羟烷酯)、聚(糖类)、聚(α-羟酸)、聚(丙烯酸)、聚(乙烯醇)、聚磷腈、聚噁唑啉、聚(N-丙烯酰吗啉)、以及它们的共聚物、三元共聚物、或者混合物。
10.如权利要求1所述的聚合物，其中每个POLY1和POLY2，当存在时，是聚(乙二醇)。
11.如权利要求1所述的聚合物，其中每个POLY1和POLY2，当存在时，具有结构-CH2CH2O(CH2CH2O)n-CH2CH2-，其中n是1至350。
12.如权利要求1所述的聚合物，其中每个Z1具有选自下组的一种多臂结构，该组的构成为：
以及
Figure FPA00001111815700032
其中每个m是1至350，Me是甲基，并且每个Z是一个靶向羟基磷灰石的部分。
13.如权利要求1所述的聚合物，其中p是3至大约10。
14.如权利要求1所述的聚合物，其中R是衍生自具有结构R1(OH)p的一种多元醇，其中R是一种分支的烃，可任选地包括一个或多个醚连接物，并且p是至少3。
15.如权利要求14所述的聚合物，其中该多元醇是选自下组，其构成为：甘油、季戊四醇、以及糖衍生的醇类、以及前述各项的低聚物类或聚合物类。
16.如权利要求1所述的聚合物，其中p是2至大约10，并且R是衍生自一种分子，该分子选自下组，其构成为：多元醇类、二硫化物类、以及肽类、以及前述各项的低聚物类或聚合物类、以及它们的组合。
17.如权利要求1所述的聚合物，其中R是衍生自包括至少一个赖氨酸残基的一种二肽或三肽。
18.如权利要求1所述的聚合物，其中该聚合物具有以下结构：
Figure FPA00001111815700041
其中n是1至350。
19.如权利要求1所述的聚合物，其中该聚合物具有以下结构：
其中n是1至350。
20.一种聚合物偶联物，包括如权利要求1所述的聚合物与一种生物活性剂的反应产物，并且该聚合物偶联物具有以下结构：
Figure FPA00001111815700052
式(Ib)
其中：
B是-(X3)d-(L3)e-(X4)f-POLY2-L4-药物或-(X3)d-(L3)e-(X4)f-L4-药物；
该药物是一个生物学活性部分的一个残基；
L4是一个连接物，该连接物产生于Z2与在该生物学活性部分上的一个官能团的反应；
Z3是L5-药物或一个靶向羟基磷灰石的部分，其中L5是一个连接物，该连接物产生于Z1与在该生物学活性部分上的一个官能团的反应，其中Z1是一个官能团，其条件为至少一个Z3是一个靶向羟基磷灰石的部分；
并且所有其他变量都如权利要求1中所提供进行定义。
21.如权利要求20所述的聚合物偶联物，其中该药物是选自下组，其构成为：生长因子类、抗生素类、化学治疗剂类、以及镇痛药类。
22.如权利要求21所述的聚合物偶联物，其中该药物是选自下组的一种生长因子，该组的构成为：成纤维细胞生长因子、血小板衍生的生长因子、骨形态发生蛋白、成骨蛋白、转化生长因子、LIM矿化蛋白、骨样诱导因子、血管生成素、内皮素；生长分化因子、ADMP-1、内皮素、肝细胞生长因子、以及角质形成细胞生长因子、肝素结合性生长因子、刺猬蛋白、白细胞介素、集落刺激因子、上皮生长因子、胰岛素样生长因子、细胞因子、骨桥蛋白、以及骨粘连蛋白。
23.一种杂合的双功能的、基本上直链的、靶向羟基磷灰石的聚合物，该聚合物具有以下结构：
Z-(X1)a-L1-(X2)b-[POLY1-(X3)c-L2-(X4)d]m-POLY2-(X5)e-Y
其中：
POLY1和POLY2可以是相同的或者不同的，各自均是一种水溶性的、非肽聚合物；
X1、X2、X3、X4、以及X5可以是相同的或者不同的，各自均是一个间隔基部分；
L1是一个连接物；
每个L2均是选自下组的一个可水解切割的或可酶促切割的的连接物，该组的构成为氨基甲酸酯以及酰胺；
Z是一个靶向羟基磷灰石的部分；
Y是一个官能团；
a、b、c、d、以及e可以是相同的或者不同的，各自或者是0或者是1；并且
m是在1至10范围内的一个整数。
24.如权利要求23所述的聚合物，其中每个POLY1和POLY2，当存在时，具有小于大约22,000Da的数均分子量。
25.如权利要求24所述的聚合物，其中每个POLY1和POLY2，当存在时，具有小于大约15,000Da的数均分子量。
26.如权利要求25所述的聚合物，其中每个POLY1和POLY2，当存在时，具有小于大约8,000Da的数均分子量。
27.如权利要求23所述的聚合物，其中Z是选自下组，其构成为：四环素、钙黄绿素、二膦酸类物、聚天冬氨酸、聚谷氨酸、以及氨基磷糖类。
28.如权利要求1或23所述的聚合物，其中每个X1、X2、X3、X4、以及X5，当存在时，是选自下组，其构成为：-C(O)O-、-OC(O)-、-CH2-C(O)O-、-CH2-OC(O)-、-C(O)O-CH2-、-OC(O)-CH2-、-C(O)-、-C(O)-NH-、-NH-C(O)-NH-、-O-C(O)-NH-、-C(S)-、-CH2-、-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-CH2-、-O-CH2-、-CH2-O-、-O-CH2-CH2-、-CH2-O-CH2-、-CH2-CH2-O-、-O-CH2-CH2-CH2-、-CH2-O-CH2-CH2-、-CH2-CH2-O-CH2-、-CH2-CH2-CH2-O-、-O-CH2-CH2-CH2-CH2-、-CH2-O-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CH2-O-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-O-CH2-、-CH2-CH2-CH2-CH2-O-、-C(O)-NH-CH2-、-C(O)-NH-CH2-CH2-、-CH2-C(O)-NH-CH2-、-CH2-CH2-C(O)-NH-、-C(O)-NH-CH2-CH2-CH2-、-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-、-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-、-CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-、-C(O)-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-、-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-、-CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-、-C(O)-O-CH2-、-CH2-C(O)-O-CH2-、-CH2-CH2-C(O)-O-CH2-、-C(O)-O-CH2-CH2-、-NH-C(O)-CH2-、-CH2-NH-C(O)-CH2-、-CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-、-NH-C(O)-CH2-CH2-、-CH2-NH-C(O)-CH2-CH2-、-CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-CH2-、-C(O)-NH-CH2-、-C(O)-NH-CH2-CH2-、-O-C(O)-NH-CH2-、-O-C(O)-NH-CH2-CH2-、-NH-CH2-、-NH-CH2-CH2-、-CH2-NH-CH2-、-CH2-CH2-NH-CH2-、-C(O)-CH2-、-C(O)-CH2-CH2-、-CH2-C(O)-CH2-、-CH2-CH2-C(O)-CH2-、-CH2-CH2-C(O)-CH2-CH2-、-CH2-CH2-C(O)-、-CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-NH-、-CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-NH-C(O)-、-CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-、-CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-CH2-、-C(O)-NH-(CH2)1-6-NH-C(O)-、-NH-C(O)-NH-(CH2)1-6-NH-C(O)-、以及-O-C(O)-NH-(CH2)1-6-NH-C(O)-、-O-C(O)-NH-[CH2]h-(OCH2CH2)j-、-NH-C(O)-O-[CH2]h-(OCH2CH2)j-、双价的环烷基基团、-O-、-S-、-N(R6)-、以及它们的组合，其中R6是H或选自下组的一个有机的原子团，该组的构成为：烷基、取代的烷基、链烯基、取代的链烯基、炔基、取代的炔基、芳基以及取代的芳基，(h)是0至6、并且(j)是0至20。
CN200880112961.4A 2007-10-23 2008-10-23 靶向羟基磷灰石的多臂聚合物以及由其制造的偶联物 Active CN101835496B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US98201207P 2007-10-23 2007-10-23
US60/982,012 2007-10-23
PCT/US2008/012091 WO2009055014A2 (en) 2007-10-23 2008-10-23 Hydroxyapatite-targeting multiarm polymers and conjugates made therefrom

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101835496A true CN101835496A (zh) 2010-09-15
CN101835496B CN101835496B (zh) 2015-11-25

Family

ID=40524887

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN200880112961.4A Active CN101835496B (zh) 2007-10-23 2008-10-23 靶向羟基磷灰石的多臂聚合物以及由其制造的偶联物

Country Status (10)

Country Link
US (3) US8440787B2 (zh)
EP (1) EP2214716B1 (zh)
JP (1) JP5823125B2 (zh)
KR (1) KR101644658B1 (zh)
CN (1) CN101835496B (zh)
AU (1) AU2008317383B2 (zh)
CA (1) CA2702945C (zh)
IL (1) IL205215A (zh)
MX (1) MX2010004400A (zh)
WO (1) WO2009055014A2 (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103687624A (zh) * 2011-05-11 2014-03-26 雷蒙特亚特特拉维夫大学有限公司 靶向的聚合缀合物和其用途
CN114436231A (zh) * 2022-01-29 2022-05-06 中科南京绿色制造产业创新研究院 一种羟基磷灰石及其制备方法和应用

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2214716B1 (en) 2007-10-23 2021-11-17 Nektar Therapeutics Hydroxyapatite-targeting multiarm polymers and conjugates made therefrom
CA2805739A1 (en) * 2010-07-28 2012-02-02 Smartcells, Inc. Drug-ligand conjugates, synthesis thereof, and intermediates thereto
AU2011282983A1 (en) * 2010-07-28 2013-02-21 Smartcells, Inc. Drug-ligand conjugates, synthesis thereof, and intermediates thereto
KR102076069B1 (ko) 2011-08-24 2020-02-11 캘리포니아 인스티튜트 오브 테크놀로지 타기팅 미세버블
EP2861065B1 (en) 2012-06-18 2017-03-15 Basf Se Agroformulations containing a lactone based alkoxylate
US11299528B2 (en) 2014-03-11 2022-04-12 D&D Pharmatech Inc. Long acting TRAIL receptor agonists for treatment of autoimmune diseases
EP3310794A4 (en) 2015-06-18 2019-03-06 California Institute of Technology SYNTHESIS AND APPLICATION OF MICROBULLET FORMATION COMPOUNDS
CA3008392C (en) 2015-12-17 2021-11-09 The Johns Hopkins University Ameliorating systemic sclerosis with death receptor agonists
DE212017000044U1 (de) * 2016-04-06 2018-09-17 Murata Manufacturing Co., Ltd. Filmkondensator sowie Film für Kondensator
JP7281795B2 (ja) 2016-04-07 2023-05-26 ザ・ジョンズ・ホプキンス・ユニバーシティー 膵炎および疼痛をデス受容体アゴニストで処置するための組成物および方法
US11220576B2 (en) 2017-03-30 2022-01-11 Nof Corporation Degradable polyethylene glycol derivative having disulfide linker
JP7205827B2 (ja) * 2018-03-29 2023-01-17 日油株式会社 分解性ポリエチレングリコール誘導体
EP3796941A4 (en) * 2018-05-30 2022-12-28 Purdue Research Foundation TARGETING ANABOLIC DRUGS FOR ACCELERATED FRACTURE REPAIR
CN109078194B (zh) * 2018-07-04 2021-08-17 华北理工大学 一种片状羟基磷灰石/甲氨蝶呤复合物及其原位复合工艺
US10953023B1 (en) 2020-01-28 2021-03-23 Applaud Medical, Inc. Phospholipid compounds and formulations
US11767353B2 (en) 2020-06-05 2023-09-26 Theraly Fibrosis, Inc. Trail compositions with reduced immunogenicity

Family Cites Families (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4440738A (en) 1982-06-10 1984-04-03 Mallinckrodt, Inc. Stable radiographic imaging agents
GB8310438D0 (en) 1983-04-18 1983-05-25 Amersham Int Plc Bone-seeking complexes of technetium-99m
US4760057A (en) 1983-06-23 1988-07-26 Merck & Co., Inc. (Acyloxyalkoxy)carbonyl derivatives as bioreversible prodrug moieties for primary and secondary amine functions in drugs
GB8430252D0 (en) 1984-11-30 1985-01-09 Beecham Group Plc Compounds
DE3675588D1 (de) 1985-06-19 1990-12-20 Ajinomoto Kk Haemoglobin, das an ein poly(alkenylenoxid) gebunden ist.
US5080891A (en) 1987-08-03 1992-01-14 Ddi Pharmaceuticals, Inc. Conjugates of superoxide dismutase coupled to high molecular weight polyalkylene glycols
JPH02268190A (ja) 1989-04-07 1990-11-01 Fujisawa Pharmaceut Co Ltd 医薬化合物とジホスホン酸誘導体の結合体
JP2517760B2 (ja) 1989-05-11 1996-07-24 新技術事業団 水溶性高分子化医薬製剤
US5286637A (en) 1989-08-07 1994-02-15 Debiopharm, S.A. Biologically active drug polymer derivatives and method for preparing same
US5252714A (en) 1990-11-28 1993-10-12 The University Of Alabama In Huntsville Preparation and use of polyethylene glycol propionaldehyde
FR2676058B1 (fr) 1991-04-30 1994-02-25 Hoechst Lab Prodrogues glycosylees, leur procede de preparation et leur utilisation dans le traitement des cancers.
AU662155B2 (en) 1991-05-10 1995-08-24 Celtrix Pharmaceuticals, Inc. Targeted delivery of bone growth factors
US5281698A (en) 1991-07-23 1994-01-25 Cetus Oncology Corporation Preparation of an activated polymer ester for protein conjugation
US5413992A (en) 1992-07-31 1995-05-09 The Scripps Research Institute Daunomycin derivative with reduced cytotoxicity toward normal cells
DE4236237A1 (de) 1992-10-27 1994-04-28 Behringwerke Ag Prodrugs, ihre Herstellung und Verwendung als Arzneimittel
US5840900A (en) 1993-10-20 1998-11-24 Enzon, Inc. High molecular weight polymer-based prodrugs
US5880131A (en) 1993-10-20 1999-03-09 Enzon, Inc. High molecular weight polymer-based prodrugs
US5446090A (en) 1993-11-12 1995-08-29 Shearwater Polymers, Inc. Isolatable, water soluble, and hydrolytically stable active sulfones of poly(ethylene glycol) and related polymers for modification of surfaces and molecules
US5626861A (en) 1994-04-01 1997-05-06 Massachusetts Institute Of Technology Polymeric-hydroxyapatite bone composite
US5629384A (en) 1994-05-17 1997-05-13 Consiglio Nazionale Delle Ricerche Polymers of N-acryloylmorpholine activated at one end and conjugates with bioactive materials and surfaces
US5650234A (en) 1994-09-09 1997-07-22 Surface Engineering Technologies, Division Of Innerdyne, Inc. Electrophilic polyethylene oxides for the modification of polysaccharides, polypeptides (proteins) and surfaces
US5824784A (en) 1994-10-12 1998-10-20 Amgen Inc. N-terminally chemically modified protein compositions and methods
US5932462A (en) 1995-01-10 1999-08-03 Shearwater Polymers, Inc. Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces
US6103236A (en) 1995-05-10 2000-08-15 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Toxin conjugates
US5672662A (en) 1995-07-07 1997-09-30 Shearwater Polymers, Inc. Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications
GB9613722D0 (en) 1996-06-28 1996-08-28 Univ Liverpool Chemical compounds
US6750340B2 (en) 1998-04-02 2004-06-15 Mbc Research, Inc. Bisphosphonate conjugates and methods of making and using the same
AU769425B2 (en) 1999-04-23 2004-01-29 Alza Corporation Conjugate having a cleavable linkage for use in a liposome
US6677320B2 (en) 2000-01-20 2004-01-13 Hoffmann-La Roches Inc. Parenteral bisphosphonate composition with improved local tolerance
US6436386B1 (en) * 2000-11-14 2002-08-20 Shearwater Corporation Hydroxyapatite-targeting poly (ethylene glycol) and related polymers
US7829074B2 (en) * 2001-10-18 2010-11-09 Nektar Therapeutics Hydroxypatite-targeting poly(ethylene glycol) and related polymers
EP1340749A4 (en) * 2000-11-17 2007-09-05 Takeda Pharmaceutical isoxazole
TWI246524B (en) * 2001-01-19 2006-01-01 Shearwater Corp Multi-arm block copolymers as drug delivery vehicles
WO2004062588A2 (en) 2003-01-06 2004-07-29 University Of Utah Water-soluble polymeric bone-targeting drug delivery system
WO2004089345A1 (en) * 2003-04-03 2004-10-21 Semafore Pharmaceuticals Inc. Bone targeting of biodegradable drug-containing nanoparticles
EA011351B1 (ru) * 2003-05-23 2009-02-27 Нектар Терапеутикс Ал, Корпорейшн Полимерные реагенты, способы их получения, а также содержащие их конъюгаты и фармацевтические препараты
KR101131411B1 (ko) 2003-07-22 2012-07-05 넥타르 테라퓨틱스 중합체 알코올로부터 관능화된 중합체의 제조 방법
KR20060130057A (ko) 2003-11-21 2006-12-18 알자 코포레이션 절단가능한 ｐｅｇ 표면 변형을 갖는 리포좀-ｄｎａ복합체에 의해 매개되는 유전자 송달
CA2586915A1 (en) 2004-11-10 2006-05-18 Aplagen Gmbh Molecules which promote hematopoiesis
EP2214716B1 (en) 2007-10-23 2021-11-17 Nektar Therapeutics Hydroxyapatite-targeting multiarm polymers and conjugates made therefrom

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103687624A (zh) * 2011-05-11 2014-03-26 雷蒙特亚特特拉维夫大学有限公司 靶向的聚合缀合物和其用途
US9283279B2 (en) 2011-05-11 2016-03-15 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Targeted polymeric conjugates and uses thereof
CN103687624B (zh) * 2011-05-11 2018-02-02 雷蒙特亚特特拉维夫大学有限公司 靶向的聚合缀合物和其用途
CN114436231A (zh) * 2022-01-29 2022-05-06 中科南京绿色制造产业创新研究院 一种羟基磷灰石及其制备方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
IL205215A0 (en) 2010-12-30
JP2011500939A (ja) 2011-01-06
AU2008317383B2 (en) 2013-11-14
US8815227B2 (en) 2014-08-26
KR20100087116A (ko) 2010-08-03
JP5823125B2 (ja) 2015-11-25
EP2214716A2 (en) 2010-08-11
IL205215A (en) 2015-06-30
CA2702945C (en) 2016-08-23
AU2008317383A1 (en) 2009-04-30
WO2009055014A2 (en) 2009-04-30
CA2702945A1 (en) 2009-04-30
US20140329990A1 (en) 2014-11-06
WO2009055014A3 (en) 2009-11-19
US8440787B2 (en) 2013-05-14
EP2214716B1 (en) 2021-11-17
CN101835496B (zh) 2015-11-25
KR101644658B1 (ko) 2016-08-01
US9173947B2 (en) 2015-11-03
MX2010004400A (es) 2010-05-20
US20100286355A1 (en) 2010-11-11
US20130331549A1 (en) 2013-12-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101835496B (zh) 靶向羟基磷灰石的多臂聚合物以及由其制造的偶联物
CN101420984B (zh) 嵌段可降解聚合物及由其制备的轭合物
US6838528B2 (en) Multi-arm block copolymers as drug delivery vehicles
EP1581583B1 (en) Multi-arm polypeptide-poly(ethylene glycol) block copolymers as drug delivery vehicles
Li et al. Synthesis of linear polyether polyol derivatives as new materials for bioconjugation

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant