CN101822213A - 一种提高辣(甜)椒游离小孢子培养胚状体诱导率的方法 - Google Patents
一种提高辣(甜)椒游离小孢子培养胚状体诱导率的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101822213A CN101822213A CN200910175393A CN200910175393A CN101822213A CN 101822213 A CN101822213 A CN 101822213A CN 200910175393 A CN200910175393 A CN 200910175393A CN 200910175393 A CN200910175393 A CN 200910175393A CN 101822213 A CN101822213 A CN 101822213A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bud
- flower pesticide
- medium
- sterilization
- embryoids
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 title claims abstract description 19
- 230000006698 induction Effects 0.000 title abstract description 6
- 235000002566 Capsicum Nutrition 0.000 title abstract description 4
- 239000006002 Pepper Substances 0.000 title abstract 2
- 235000016761 Piper aduncum Nutrition 0.000 title abstract 2
- 235000017804 Piper guineense Nutrition 0.000 title abstract 2
- 244000203593 Piper nigrum Species 0.000 title abstract 2
- 235000008184 Piper nigrum Nutrition 0.000 title abstract 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims abstract description 24
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims abstract description 21
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 claims description 39
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 19
- 235000008534 Capsicum annuum var annuum Nutrition 0.000 claims description 18
- 240000008384 Capsicum annuum var. annuum Species 0.000 claims description 16
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 14
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 13
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 11
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 11
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 10
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 10
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 7
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 claims description 6
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 claims description 6
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 claims description 6
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 claims description 6
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 5
- 239000006160 differential media Substances 0.000 claims description 5
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 claims description 5
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 4
- 241001164374 Calyx Species 0.000 claims description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 238000005336 cracking Methods 0.000 claims description 3
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 claims description 3
- 230000023409 microsporogenesis Effects 0.000 claims description 3
- 230000000422 nocturnal effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000012856 packing Methods 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 claims description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 3
- 244000178870 Lavandula angustifolia Species 0.000 claims description 2
- 235000010663 Lavandula angustifolia Nutrition 0.000 claims description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 2
- 239000001102 lavandula vera Substances 0.000 claims description 2
- 235000018219 lavender Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 abstract description 12
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 abstract description 12
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract description 4
- 240000008574 Capsicum frutescens Species 0.000 abstract description 3
- 235000002568 Capsicum frutescens Nutrition 0.000 abstract description 2
- 230000002559 cytogenic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 abstract description 2
- 241000758706 Piperaceae Species 0.000 abstract 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 abstract 1
- 240000004160 Capsicum annuum Species 0.000 description 2
- 235000007516 Chrysanthemum Nutrition 0.000 description 1
- 244000189548 Chrysanthemum x morifolium Species 0.000 description 1
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 1
- 244000297179 Syringa vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000004338 Syringa vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 238000000429 assembly Methods 0.000 description 1
- 230000000712 assembly Effects 0.000 description 1
- 239000001390 capsicum minimum Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000012214 genetic breeding Methods 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明公开了一种提高辣(甜)椒游离小孢子培养胚状体诱导率的方法，属于利用细胞遗传学理论与育种技术领域。该发明在前人已发表的辣椒游离小孢子培养获得胚状体培养方法的基础上，通过提高培养用花蕾质量，采用从花蕾的取样、前期预处理、灭菌到花药剥取全程低温控制，并于7℃黑暗预培养一周后转到28℃黑暗培养的关键技术，使获得的胚状体最高达8.4个胚状体/花药，平均为1.3个胚状体/花药，高于公布的1个胚状体/花药的专利技术及国内目前报道的最高为1.83个胚状体/花药的研究。本发明的特点是：方法实用、步骤具体、适用的基因型广泛、重复性好，可实现辣(甜)椒游离小孢子培养在单倍体育种及创建遗传作图群体上的广泛应用。
Description
技术领域
本发明涉及一种提高辣(甜)椒游离小孢子培养胚状体诱导率的方法，属于利用细胞遗传学理论与育种技术领域。
背景技术
在辣(甜)椒育种工作中，自交系的选育是非常重要的工作，但常规选育方法存在周期长、费用高、占地多等问题。单倍体育种是解决这一问题的重要方法，它可以大大提高育种效率，缩小育种群体的规模，并缩短育种年限。游离小孢子培养是获得单倍体的主要途径。经小孢子培养得到的花粉株系间性状变异幅度大，超亲现象和出现特殊优良性状的频率要显著高于常规育种；株系内性状整齐，世代间稳定性强；通过小孢子培养获得的自交系具有高度的纯合性，杂交配组可获得更强的杂种优势；通过该法建立起来的DH群体是开展ALFP、RAPD、SSR等分子标记和基因图谱研究用的理想材料。因此，游离小孢子培养技术在遗传和育种研究中具有十分重要的应用价值。
辣(甜)椒游离小孢子培养获得胚状体技术在国内外已有成功的研究报道，张菊平等获得了专利(专利号：ZL 200610042616.0)，但目前国内报道显示，辣(甜)椒游离小孢子培养胚状体诱导率还比较低，最高为1.83个胚状体/花药(刘凡，赵泓，陈斌，张月云.辣椒游离小孢子细胞团培养的胚状体形成.分子细胞生物学报，2007，40(6)：371-379)，在实际应用中受到一定限制。因此，如何提高游离小孢子胚状体诱导率，是关系到辣(甜)椒游离小孢子培养技术能否广泛应用于遗传育种研究的关键技术之一。
发明内容
本发明旨在提供一种提高辣(甜)椒游离小孢子胚状体诱导率的方法，使得通过小孢子培养快速获得纯合自交系的技术应用于辣(甜)椒遗传和新品种选育。
本发明的基本原理是：在一定条件下，离体培养植物小孢子的发育可以脱离在体内时的正常的发育轨道，通过分裂增殖最终形成胚状体或愈伤组织。将形成的胚状体转接于适宜的培养基上时，可获得完整的再生植株。
本发明突出的创新点是：通过提高培养用花蕾质量，采用从花蕾的取样、前期预处理、花蕾消毒到花药剥取的全程低温控制，并于7℃黑暗预培养一周后转到28℃黑暗培养的关键技术，使得辣(甜)椒游离小孢子培养胚状体的诱导率最高达8.4个胚状体/花药，显著高于已公布的1个胚状体/花药的专利技术(专利号：ZL 200610042616.0)。
提高胚状体诱导率的方法(本发明的创新)：
(1)提高花蕾质量：培育壮苗、及时定植、合理肥水、及时摘取果实和已开放的花，保持植株旺盛的生长势；使适宜取蕾的初花期和盛花期处于白天温度25～30℃，夜间温度20℃左右的环境。
(2)花蕾的选取：晴天早晨8:00～10:00选取花瓣等于或略大于花萼且花药尖端10％～25％呈淡紫色的花蕾，用封口袋盛装于冰盒中暂存。
(3)花蕾的低温预处理：将选取的适宜花蕾在4℃低温条件下预处理1天。
(4)低温灭菌和花药的剥取：灭菌用的酒精(70％)、次氯酸钠(2％)和无菌水皆在4℃低温保存。灭菌的花蕾用无菌水洗涤后，浸泡于无菌水中并置于冰浴上备用，剥取花药在冰浴上进行。
(5)低温保存液体培养基：液体培养基在加入固体培养基之前置于4℃冰箱低温保存。
(6)适温培养：将接种的花药于7℃低温黑暗预培养一周后，转于28℃下继续黑暗培养直至形成子叶胚。
本发明通过以下步骤完成：
(1)试材的确定：选取具有综合优良性状的辣(甜)椒基因型作为试验材料。
(2)培养基的制备
基本培养基为Nitsch组分(Nitsch and Nitsch 1969)。
固体培养基-Nitsch组分+2％麦芽糖+1.0％活性炭+0.6％琼脂，pH为6.0，于121℃，1.1Mpa条件下灭菌18分钟。
液体培养基-Nitsch组分+2％麦芽糖+0.5mg/LZT+1.0mg/LIAA，pH为5.8，以0.45μm和0.22μm微孔滤膜抽滤灭菌。
(3)固体培养基的分装：于超净工作台上将已灭菌的固体培养基在未凝固之前分装至已灭菌的60×15mm培养皿中备用，每皿5mL。
(4)花蕾的选取：选取小孢子发育时期大多处于单核靠边期的花蕾。
(5)花蕾的预处理：将选取的适宜花蕾进行4℃低温预处理1天。
(6)花蕾的灭菌：于超净工作台上，用4℃预冷的70％酒精表面灭菌30秒钟，之后用4℃预冷的2％的次氯酸钠灭菌10～12分钟，然后用4℃预冷的无菌水冲洗3次，时间分别为1、4、10分钟。
(7)花药的剥取：于超净工作台上，将无菌培养皿置于冰浴上，并用镊子从花蕾中剥取花药，彻底去除花丝，操作中尽量避免损伤花药。
(8)花药接种：在装有固体培养基的培养皿中，加入4℃预冷的液体培养基每皿3mL，之后接种花药12枚/皿，用Parafilm膜封口。
(9)游离小孢子培养：将接种花药的培养皿置于7℃条件下暗培养一周后转于28℃下继续暗培养，经过12～18天花药自然开裂，释放出小孢子。
(10)胚状体的形成：暗培养期间陆续出现各种类型的胚状体，培养8周后将子叶胚接种于分化培养基上，形成再生植株。
本发明对辣(甜)椒小孢子培养采取的方法实用、步骤具体、适用的基因型广泛、重复性好，可实现辣(甜)椒游离小孢子培养获得单倍体技术在创建DH群体上的广泛应用。利用该方法获得的胚状体及再生植株，较已公布的专利技术有显著提高。9个性状优良且品种间差异较大的基因型用该方法培养均获得了胚状体，最高达8.4个胚状体/花药。本发明创建的DH群体可广泛应用于辣椒的分子标记、基因图谱构建和自交系的选育等遗传和育种工作中。
附图说明
图1单核靠边期的小孢子。
图2培养3周后的细胞团。
图3培养7周后的胚状体。
图4培养获得的胚状体。
图5胚状体的分化。
图6胚状体的再生植株。
以下结合附图发明人给出了具体实施例对本发明进一步详细阐述。
具体实施方式
按照本发明的技术方案，具体实施步骤为：
(1)试材的确定：选取综合性状优良的甜椒基因型08-488作为试验材料。
(2)试材的培养及花蕾质量的提高：培育壮苗、及时定植、合理肥水、及时摘取果实和已开放的花，保持植株旺盛的生长势；使适宜取蕾的初花期和盛花期处于白天温度25～30℃，夜间温度20℃左右的环境。
(3)培养基的制备
基本培养基为Nitsch and Nitsch(1969)组分(引自J.P.Nitsch，C.Nitsch.Haploid Plants fromPollen Grains.Science，1969，1(3)：85-87.具体成分详见列表)。
固体培养基-Nitsch组分+2％麦芽糖+1.0％活性炭+0.6％琼脂，pH为6.0，于121℃，1.1Mpa条件下灭菌18分钟。
液体培养基-Nitsch组分+2％麦芽糖+0.5mg/LZT+1.0mg/LIAA，pH为5.8，以0.45μm和0.22μm微孔滤膜抽滤灭菌。
分化培养基：Nitsch组分+2％蔗糖+0.9％琼脂，pH为6.0，于121℃，1.1Mpa条件下灭菌18分钟。
(4)培养基的分装：于超净工作台上将已灭菌的固体培养基在未凝固之前分装于已灭菌的60×15mm培养皿，每皿5mL；待固体培养基凝固后，接种花药前加入提前在4℃预冷的液体培养基，每皿3mL。
(5)花蕾的选择：在08-488的初花期和盛花期，通过铁钒-苏木精压片法镜检确定小孢子发育时期与外部形态的对应关系，准确找到发育时期为单核靠边期(图1)的花蕾。此时花蕾的外部形态特征表现为花瓣等于或略大于花萼，并且花药尖端有10～25％呈淡紫色。选择健壮植株上的花蕾，晴天早晨8:00～10:00摘取适宜的花蕾，用封口袋放于盛有冰的冰盒中暂存。
(6)花蕾预处理：将选取的适宜花蕾置于4℃条件下处理1天。
(7)花蕾消毒：于超净工作台上，将4℃低温处理的花蕾，用4℃预冷的70％的酒精表面消毒30秒钟，之后用4℃预冷的2％的次氯酸钠消毒10分钟，最后用4℃预冷的无菌水冲洗3次，时间分别为1、4、10分钟，后浸泡于无菌水中置于冰浴上备用。
(8)花药的剥取：在超净工作台上，将无菌培养皿置于冰浴上，并用镊子从花蕾中剥取花药，彻底去除花丝，操作中尽量避免损伤花药。
(9)花药接种：在装有固体培养基的培养皿中，加入4℃预冷的液体培养基每皿3mL，之后接种花药12枚/皿，用Parafilm膜封口。
(10)游离小孢子培养：将接种花药的培养皿置于7℃条件下暗培养一周后转于28℃下继续暗培养，经过12～18天后花药自然开裂，释放出小孢子。
(11)胚状体的形成：释放出的小孢子继续培养3周后，于倒置显微镜下镜检观察到细胞团(图2)；培养7周后，可见各种类型的胚状体(图3)，胚状体的诱导率最高达8.4个胚状体/花药，最低为7.3个胚状体/花药，平均达7.8个胚状体/花药；培养8周后出现明显子叶型胚(图4)；将子叶胚接种于分化培养基上可见子叶胚转绿，出现真叶，最终形成再生植株(图5，6)。
需要说明的是，上述实例选取甜椒基因型08-488作为实验材料，但并不局限于该材料，已开展的9个基因型差异较大的辣(甜)椒品种的小孢子培养胚状体研究，均获得较高的胚状体诱导率，此方法对于其他辣(甜)椒基因型均可达到本发明的目的。
附表 Nitsch and Nitsch培养基基本组成成分表(mg/L)
Claims (1)
1.一种提高辣(甜)椒游离小孢子培养胚状体诱导率的方法，包括以下步骤：
(1)试材的确定：选取具有综合性状优良的辣(甜)椒基因型作为试验材料；
(2)培养基的制备：基本培养基为Nitsch and Nitsch(1969)组分(引自J.P.Nitsch，C.Nitsch.Haploid Plants from Pollen Grains.Science，1969，1(3)：85-87具体成分详见列表)
固体培养基-Nitsch组分+2％麦芽糖+1.0％活性炭+0.6％琼脂，pH为6.0，于高温121℃高压1.1Mpa条件下灭菌18分钟；
液体培养基-Nitsch组分+2％麦芽糖+0.5ZTmg/L+1.0mg/LIAA，pH为5.8，以0.45μm和0.22μm微孔滤膜抽滤灭菌；
分化培养基：Nitsch组分+2％蔗糖+0.9％琼脂，pH为6.0，于121℃，1.1Mpa条件下灭菌18分钟；
(3)培养基的分装：于超净工作台上将已灭菌的固体培养基在凝固之前分装于已灭菌的60×15mm培养皿中，每皿5mL；待固体培养基凝固后，在接种花药前加入每皿3ml液体培养基备用；
(4)花蕾的选择：在初花期和盛花期，通过铁钒—苏木精压片法镜检确定小孢子发育时期与外部形态的对应关系，准确找到发育时期为单核靠边期的花蕾，此时花蕾的外部形态特征表现为花瓣等于或略大于花萼，并且花药尖端有10～25％呈淡紫色；
(5)花蕾预处理：将选取的适宜花蕾置于4℃条件下处理1天；
(6)花蕾消毒：在超净工作台上，用70％的酒精表面消毒30秒钟，之后用2％的次氯酸钠消毒10分钟，然后用无菌水冲洗3次，时间分别为1、4、10分钟；
(7)花药的剥取：于超净工作台上，在无菌培养皿中用镊子从花蕾中剥取花药，彻底去除花丝，操作中尽量避免损伤花药；
(8)花药接种：在装有固体培养基的培养皿中，加入液体培养基每皿3mL，之后接种花药12枚/皿，用Parafilm膜封口；
(9)游离小孢子培养：将接种的培养皿进行暗培养；
(10)胚状体的形成：培养期间各种类型的胚状体陆续出现，8周后将子叶胚接种于分化培养基上，形成再生植株；
其特征是：
(1)提高花蕾质量：培育壮苗、及时定植、合理肥水、及时摘取果实和已开放的花，保持植株旺盛的生长势；使适宜取蕾的初花期和盛花期处于白天温度25～30℃，夜间温度20℃左右的环境；
(2)采用从培养基、花蕾的选择、花蕾预处理、花蕾消毒到花药剥取全程低温控制：液体培养基加入之前于4℃低温预冷保存；选择健壮植株的花蕾，晴天早晨8:00～10:00摘取适宜的花蕾用封口袋放于盛有冰的冰盒暂存；花蕾消毒用的酒精(70％)、次氯酸钠(2％)和无菌水使用之前皆在4℃低温预冷保存，消毒后的花蕾浸泡于无菌水中置于冰浴上备用；在超净工作台上，将无菌培养皿置于冰浴上剥取花药；
(3)游离小孢子培养：将接种花药的培养皿置于7℃条件下暗培养一周后转于28℃下继续暗培养，经过12～18天后花药自然开裂，将小孢子释放于液体培养基中。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2009101753939A CN101822213B (zh) | 2009-12-21 | 2009-12-21 | 一种提高辣(甜)椒游离小孢子培养胚状体诱导率的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2009101753939A CN101822213B (zh) | 2009-12-21 | 2009-12-21 | 一种提高辣(甜)椒游离小孢子培养胚状体诱导率的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101822213A true CN101822213A (zh) | 2010-09-08 |
| CN101822213B CN101822213B (zh) | 2012-06-06 |
Family
ID=42686557
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2009101753939A Expired - Fee Related CN101822213B (zh) | 2009-12-21 | 2009-12-21 | 一种提高辣(甜)椒游离小孢子培养胚状体诱导率的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101822213B (zh) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102047843A (zh) * | 2010-10-15 | 2011-05-11 | 北京市农林科学院 | 一种获得甜辣椒双单倍体植株的方法 |
| CN103444542A (zh) * | 2013-09-13 | 2013-12-18 | 北京海花生物科技有限公司 | 一种辣椒花药直接获得植株的培养方法和培养基 |
| CN104663430A (zh) * | 2014-12-09 | 2015-06-03 | 云南农业大学 | 一种能生吃且花青素含量高的紫色辣椒的培育方法 |
| CN105638455A (zh) * | 2014-11-14 | 2016-06-08 | 石河子大学 | 一种通过花药培养获得制干辣椒单倍体植株的方法及培养基 |
| CN109089887A (zh) * | 2018-10-26 | 2018-12-28 | 湖南湘研种业有限公司 | 一种花药组织培养的方法 |
| CN112931215A (zh) * | 2021-03-31 | 2021-06-11 | 东北林业大学 | 一种提高红松胚性愈伤组织诱导率的方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100339476C (zh) * | 2004-10-28 | 2007-09-26 | 北京市农林科学院 | 一种辣椒游离小孢子细胞团培养方法 |
| CN100420370C (zh) * | 2006-04-03 | 2008-09-24 | 西北农林科技大学 | 一种辣椒小孢子诱导获得胚状体的培养方法 |
-
2009
- 2009-12-21 CN CN2009101753939A patent/CN101822213B/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102047843A (zh) * | 2010-10-15 | 2011-05-11 | 北京市农林科学院 | 一种获得甜辣椒双单倍体植株的方法 |
| CN103444542A (zh) * | 2013-09-13 | 2013-12-18 | 北京海花生物科技有限公司 | 一种辣椒花药直接获得植株的培养方法和培养基 |
| CN103444542B (zh) * | 2013-09-13 | 2015-08-12 | 北京海花生物科技有限公司 | 一种辣椒花药直接获得植株的培养方法和培养基 |
| CN105638455A (zh) * | 2014-11-14 | 2016-06-08 | 石河子大学 | 一种通过花药培养获得制干辣椒单倍体植株的方法及培养基 |
| CN105638455B (zh) * | 2014-11-14 | 2018-03-20 | 石河子大学 | 一种通过花药培养获得制干辣椒单倍体植株的方法及培养基 |
| CN104663430A (zh) * | 2014-12-09 | 2015-06-03 | 云南农业大学 | 一种能生吃且花青素含量高的紫色辣椒的培育方法 |
| CN109089887A (zh) * | 2018-10-26 | 2018-12-28 | 湖南湘研种业有限公司 | 一种花药组织培养的方法 |
| CN112931215A (zh) * | 2021-03-31 | 2021-06-11 | 东北林业大学 | 一种提高红松胚性愈伤组织诱导率的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101822213B (zh) | 2012-06-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101822213B (zh) | 一种提高辣(甜)椒游离小孢子培养胚状体诱导率的方法 | |
| CN111226792B (zh) | 一种斑兰叶种苗的高通量繁育方法 | |
| CN102405843B (zh) | 大果红花油茶组织培养快速繁殖的育苗方法 | |
| CN103931493B (zh) | 一种半夏一步成苗的组织培养方法以及新的半夏培养基 | |
| CN107155898B (zh) | 一种铁皮石斛利用茎段薄片进行扩繁的方法 | |
| Dhir et al. | Improved protocol for somatic embryogenesis and calcium alginate encapsulation in Anethum graveolens L.: a medicinal herb | |
| CN104041414B (zh) | 一种辣椒花药培养获得单倍体再生植株的方法 | |
| CN109022343A (zh) | 一种人参干细胞的制备方法 | |
| CN109757373A (zh) | 一种荆半夏组织培养快速繁殖方法 | |
| CN110352853A (zh) | 一种提高茅苍术试管苗品质和移栽成活率的方法 | |
| CN105010147A (zh) | 一种用于增加十二卷属多肉植物组培繁殖速度的专用培养基及组培方法 | |
| CN100420370C (zh) | 一种辣椒小孢子诱导获得胚状体的培养方法 | |
| CN110338059A (zh) | 一种提高国兰根状茎增殖和分化效率的方法 | |
| CN101836587B (zh) | 通过花药培养获得洋桔梗再生植株的方法 | |
| CN102228005A (zh) | 半夏组织培养一步成种法 | |
| CN103636492A (zh) | 一种高山杜鹃粉金蝶组培快速繁殖方法 | |
| CN104396742A (zh) | 用五步法诱导淡黄花百合珠芽愈伤组织再分化出无菌苗 | |
| WO2019062354A1 (zh) | 真菌诱导子、其制备方法及利用该真菌诱导子进行白芨种苗快繁的方法 | |
| CN109536391B (zh) | 一种用于促进蝴蝶兰原球茎生长的真菌及其应用 | |
| CN103947548A (zh) | 一种百子莲高频再生体系建立的方法 | |
| CN103798142A (zh) | 一种以雄蕊为外植体建立百合胚性愈伤再生体系的方法 | |
| CN101831396B (zh) | 土霉素单菌落冷冻菌的制备工艺 | |
| CN106106173B (zh) | 一种双相组织培养方法 | |
| CN101401550B (zh) | 诱导茄子小孢子形成胚状体的方法及其专用培养基 | |
| CN103168687A (zh) | 一种诱导烟草叶片丛生芽快速生根的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20120606 Termination date: 20121221 |