CN101819199B - 血细胞分析仪用试剂 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种血细胞分析仪用试剂，由稀释液、溶血剂、鞘液和清洗液组成。与现有技术相比，本发明的优点在于：改变国内血细胞分析仪用试剂长期依赖进口的现状，由国内生产、销售，大大降低了其生产成本；试剂中的溶血剂为无氰溶血剂，不仅大大降低了对生产单位人员和实验操作者身体健康的损害，同时也避免了使用氰化物对环境造成的污染；该试剂尤其适用于美国雅培公司的CD3700/3500、CD3000、CD3200五分类全自动血细胞分析仪溶血剂A750测试达到ICSH标准；白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板等与进口ABBOTT CELL-DYN3700/3500试剂相关系数均大于0.95。

Description

血细胞分析仪用试剂
技术领域
本发明涉及一种医疗诊断仪器用试剂，具体涉及一种血细胞分析仪用试剂。
背景技术
血细胞分析是临床检验最常用项目，能检测20多项血液项目的病理性变化，对于抗生素的合理应用、各种贫血检查、血液病筛查、过敏疾病筛查等都有很大帮助；采用血细胞分析技术，可及时监测人体的身体状况，减少发病机率或控制病情。
血细胞五分类技术是当前该领域最先进的分析技术，其分析系统由仪器和试剂组成。国外目前只有美国雅培、库尔特、法国ABX、日本西森美康等公司生产；国内厂商，仅见有深圳迈瑞公司报道有产品。如美国雅培公司推出的CELL-DYN3000、CELL-DYN3200、CELL-DYN 3500和CELL-DYN 3700血细胞分析仪在国内就存在较大的市场，但与该仪器配套使用的试剂国内则长期依赖进口，导致试剂价格偏高，不利于国内广大医院，特别是基层医院的推广和应用。为降低试剂的成本，国内已出现有自行研制出的该类试剂，如公开号为CN1424582的中国发明专利，公开了一种雅培3700全自动五分类血细胞分析仪试剂，它包括稀释液、清洗剂、溶血剂和鞘液四种配套试剂，其中稀释液的组成为：NaCl10～20g/L、Na2SO45～15g/L、EDTA-K20.1～0.5g/L、甲基脲0.5～1.5g/L，噻唑啉酮0.3～0.8g/L，哌嗪烷基磺酸1～4g/L；清洗剂的组成为：NaCl10～20g/L、Na2SO45～18g/L、聚氧乙烯烃基苯乙醚0.2～0.7g/L、磷酸钠0.7～1.4g/L、哌嗪烷基磺酸3～10g/L、噻唑啉酮0.2～0.8g/L，溶血剂的组成为：季胺盐30～70g/L、KCN0.1～0.5g/L、Triton X-1000.5～1.5ml/L、乙醇30～60ml/L；鞘液的组成为：氨基甲烷1.2g/L，聚氧乙烯醚96mg/L，甲基脲4.5g/L，苯醚6g/L，噻唑啉酮8.8g/L。该发明血细胞分析仪试剂较国外进口试剂成本低，具有较好的推广使用价值；但是该试剂中溶血剂中仍含有剧毒化合物氰化钾，不仅危害操作人员的身体健康，同时对环境造成污染。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种成本低廉、试剂性能优越且不含氰化物的适于五分类全自动血细胞分析仪用试剂。
为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：
血细胞分析仪用试剂，由稀释液、溶血剂、鞘液和清洗液组成，其中：
所述稀释液的组成及含量为：
硼酸2～12g/L、硼砂2～10g/L、氯化钠5～15g/L、硫酸钠8～20g/L、乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)0.1～0.5g/L、甲基脲0.5～2.0g/L、盐酸羟胺3～9g/L、氯化钾0.2～1.0g/L；
所述溶血剂的组成及含量为：
季铵盐10～25g/L、二乙醇胺1～5ml/L、聚乙二醇辛基苯基醚(Tri tonX-100)0.5～2ml/L、异丙醇0.3～1.5ml/L、氯化钠1～5g/L；
所述鞘液的组成及含量为：
氨基甲烷1～10g/L、甲基脲0.1～1g/L、芳香醇1～15ml/L、乙醇5～15ml/L、聚氧乙烯月桂醚0.1～0.5g/L；
所述清洗液的组成及含量为：
硼酸2～12g/L、硼砂2～15g/L、氯化钠2～10g/L、硫酸钠4～10g/L、聚氧乙烯烃基苯乙醚0.5～2g/L、次氯酸钠0.5～2g/L。
上述稀释液、溶血剂、鞘液和清洗液的组成优选如下：
稀释液的组成及含量为：
硼酸8.5～12g/L、硼砂3～6g/L、氯化钠5～10g/L、硫酸钠8～12g/L、乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)0.1～0.3g/L、甲基脲0.5～1.0g/L、盐酸羟胺3～6g/L、氯化钾0.2～0.8g/L；
溶血剂的组成及含量为：
季铵盐15～25g/L、二乙醇胺1～3ml/L、聚乙二醇辛基苯基醚(TritonX-100)0.5～1ml/L、异丙醇0.3～1ml/L、氯化钠3～5g/L；
鞘液的组成及含量为：
氨基甲烷1～5g/L、甲基脲0.1～0.5g/L、芳香醇1～10ml/L、乙醇5～10ml/L、聚氧乙烯月桂醚0.1～0.3g/L；
清洗液的组成及含量为：
硼酸7～12g/L、硼砂2～6g/L、氯化钠4～10g/L、硫酸钠4～8g/L、聚氧乙烯烃基苯乙醚0.5～1g/L、次氯酸钠0.5～1.5g/L。
以上配方中，
所述的鞘液中的芳香醇选自二苯醚、苯甲醇、苯乙醇和乙二醇苯醚中的一种或两种。
鞘液中的聚氧乙烯月桂醚为聚氧乙烯月桂醚35(Brij35)。
所述鞘液的渗透压为35～80mOsm/kg。
所述稀释液的渗透压为280～350mOsm/kg。
所述稀释液的pH值为6.5～8.0，具体可用盐酸来调。
所述溶血剂的pH值为PH7.5～9.5，具体可用盐酸来调。
所述鞘液的pH值为8.0～10.0，具体可用盐酸来调。
所述清洗液的pH值为6.5～8.5，具体可用盐酸来调。
与现有技术相比，本发明的优点在于：
1、改变国内五分类全自动血细胞分析仪用试剂长期依赖进口的现状，试剂由国内生产、销售，大大降低了其成本；
2、试剂中的溶血剂为无氰溶血剂，不仅大大降低了对生产单位人员和实验操作者身体健康的损害，同时也避免了使用氰化物对环境造成的污染；
3、该试剂适用于五分类全自动血细胞分析仪，尤其适用于美国雅培公司的Cell-Dyn3700/3500、Cell-Dyn3000、Cell-Dyn3200五分类全自动血细胞分析仪，本申请试剂的PH、电导率、渗透压等参数均符合进口Cell-Dyn3700/3500五分类全自动血细胞分析仪的测试要求；溶血剂A750测试达到ICSH标准；白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板等与进口ABBOTTCELL-DYN3700/3500试剂相关系数均大于0.95；白细胞五分类图谱与进口试剂一致；
4、该试剂在去除鞘液后也可适用于三分类血细胞分析仪；其中的溶血剂等也可用于其它系列的血液分析仪。
附图说明
图1为本发明实施例2制得的试剂与原装进口的ABBOTT CELL-DYN
Figure GSA00000094093500031
3000，3500and3700 Systems DILUENT、CELL-DYN3500and3700 Systems DETERGENT、CELL-DYN
Figure GSA00000094093500033
3500and3700 Systems WIC/Hgb LYSE REAGENT、CELL-DYN3000，3500and3700 Systems SHEATH试剂对来自桂林市第二人民医院和桂林市妇女儿童医院的100例临床样本上ABBOTT CELL-DYN3700进行测试，所测的WBC项目的测试结果对比相关线性图；
图2为本发明实施例2制得的试剂与原装进口的ABBOTT CELL-DYN
Figure GSA00000094093500035
3000，3500and3700 Systems DILUENT、CELL-DYN
Figure GSA00000094093500036
3500and3700 Systems DETERGENT、CELL-DYN
Figure GSA00000094093500037
3500and3700 Systems WIC/Hgb LYSE REAGENT、CELL-DYN
Figure GSA00000094093500038
3000，3500and3700 Systems SHEATH试剂对来自桂林市第二人民医院和桂林市妇女儿童医院的100例临床样本上ABBOTT CELL-DYN3700进行测试，所测的RBC项目的测试结果对比相关线性图；
图3为本发明实施例2制得的试剂与原装进口的ABBOTT CELL-DYN
Figure GSA00000094093500039
3000，3500and3700 Systems DILUENT、CELL-DYN
Figure GSA000000940935000310
3500and3700 Systems DETERGENT、CELL-DYN3500and3700 Systems WIC/Hgb LYSE REAGENT、CELL-DYN
Figure GSA000000940935000312
3000，3500and3700 Systems SHEATH试剂对来自桂林市第二人民医院和桂林市妇女儿童医院的100例临床样本上ABBOTT CELL-DYN3700进行测试，所测的HGB项目的测试结果对比相关线性图；
图4为本发明实施例2制得的试剂与原装进口的ABBOTT CELL-DYN
Figure GSA000000940935000313
3000，3500and3700 Systems DILUENT、CELL-DYN
Figure GSA000000940935000314
3500and3700 Systems DETERGENT、CELL-DYN
Figure GSA000000940935000315
3500and3700 Systems WIC/Hgb LYSE REAGENT、CELL-DYN
Figure GSA000000940935000316
3000，3500and3700 Systems SHEATH试剂对来自桂林市第二人民医院和桂林市妇女儿童医院的100例临床样本上ABBOTT CELL-DYN3700进行测试，所测的PLT项目的测试结果对比相关线性图。
具体实施方式
下面以实施例对本发明作进一步说明。
以下实施例中用到的试剂均为分析纯试剂。
实施例1
在常温和常压下，分别按以下表1中指定的各组分以常规方法配制稀释液、溶血剂、鞘液和清洗液粗品，其中鞘液中的芳香醇为苯甲醇；配制所得的粗品分别用0.2μm的纤维薄膜过滤，即得本发明所述的血细胞分析仪用试剂。
实施例2
分别按以下表1中指定的各组分重复实施例1的方法，但用苯乙醇代替苯甲醇。
实施例3
分别按以下表1中指定的各组分重复实施例1的方法，但用二苯醚代替苯甲醇。
实施例4
分别按以下表1中指定的各组分重复实施例3的方法，但用苯甲醇代替二苯醚。
实施例5
分别按以下表1中指定的各组分重复实施例3的方法，但用苯乙醇代替二苯醚。
实施例6
分别按以下表1中指定的各组分重复实施例3的方法，但用乙二醇苯醚代替二苯醚。
实施例7
分别按以下表1中指定的各组分重复实施例1的方法，但用二苯醚和乙二醇苯醚代替苯甲醇，其中二苯醚和乙二醇苯醚的体积比为1∶1。
表1：
Figure GSA00000094093500041
Figure GSA00000094093500051
对比实验例1
分别用上述实施例1制得的血细胞分析仪用试剂(简称试剂1)、实施例2制得的血细胞分析仪用试剂(简称试剂2)和原装进口的美国ABBOTTCELL-DYN
Figure GSA00000094093500052
3000，3500and3700 Systems DILUENT、CELL-DYN3500and3700Systems DETERGENT、CELL-DYN3500and3700 Systems WIC/Hgb LYSE REAGENT、CELL-DYN
Figure GSA00000094093500055
3000，3500and3700 Systems SHEATH试剂(简称试剂A)对从桂林市第二人民医院随机抽取的一个血样用ABBOTT CELL-DYN3700进行测试，每种试剂对该血样测试10次，所得结果如下表2所示，其中，
Figure GSA00000094093500061
为测试10次的平均值，CV(％)为变异系数。
表2：
Figure GSA00000094093500062
上述表2中的数据表明，实施例1、2所制得的血细胞分析仪用试剂的测试结果与原装进口的美国ABBOTT CELL-DYN3000，3500and3700 SystemsDILUENT、CELL-DYN
Figure GSA00000094093500064
3500and3700 Systems DETERGENT、CELL-DYN
Figure GSA00000094093500065
3500and3700Systems WIC/Hgb LYSE REAGENT、CELL-DYN3000，3500and3700 SystemsSHEATH试剂的测试结果一致。
对比实验例2
将本发明实施例2制得的血细胞分析仪用试剂(简称试剂2)与原装进口的ABBOTT CELL-DYN
Figure GSA00000094093500067
3000，3500and3700 Systems DILUENT、CELL-DYN
Figure GSA00000094093500068
3500and3700 Systems DETERGENT、CELL-DYN
Figure GSA00000094093500069
3500and3700 Systems WIC/HgbLYSE REAGENT、CELL-DYN
Figure GSA000000940935000610
3000，3500and3700 Systems SHEATH试剂(简称试剂A)对来自桂林市第二人民医院和桂林市妇女儿童医院的100例临床样本用ABBOTT CELL-DYN3700进行测试，测试结果如下表3所示，其中所测WBC、RBC、HGB和PLT项目的测试结果对比相关线性图分别如图1、2、3和4所示，其相关性R＞0.95。
表3：
Figure GSA000000940935000611
  4   4.07   3.94   4.65   4.64   134   133   143   133
  5   7.51   7.47   4.66   4.68   141   140   266   280
  6   5.24   5.35   6.26   6.19   127   127   207   211
  7   4.72   4.73   4.79   4.83   141   143   225   238
  8   5.19   5.13   4.98   5.13   160   162   219   235
  9   4.62   4.78   5.53   5.51   161   162   227   226
  10   3.78   4   4.56   4.53   143   142   211   207
  11   8.23   8.02   4.89   4.83   154   154   217   224
  12   8.36   8.38   5.4   5.45   170   173   237   225
  13   9.14   9.25   4.07   4.08   127   128   234   227
  14   7.67   7.6   4.61   4.57   136   136   172   177
  15   4.2   4.13   4.28   4.24   121   121   203   178
  16   6   6.11   4.66   4.67   145   145   250   250
  17   4.23   4.24   5.12   5.1   154   155   236   229
  18   5.31   5.44   2.64   2.64   84.7   84.5   201   180
  .19   5.45   5.91   4.89   4.89   144   144   221   209
  20   4.24   4.32   4.34   4.36   121   122   168   177
  21   5.23   5.5   4.5   4.52   141   140   202   186
  22   4.62   4.84   4.01   4.05   133   133   159   163
  23   7.67   7.58   4.84   4.7   139   135   415   462
  24   4.95   5   5.03   4.98   149   149   213   192
  25   8.72   8.89   4.71   4.68   126   126   327   3儿
  26   6.46   6.47   5.17   5.1   148   147   241   234
  27   8.34   8.38   3.71   3.71   114   113   204   184
  28   5.12   5.14   5.64   5.56   164   164   306   282
  29   4.01   4.2   4.4   4.3   137   137   294   296
  30   8.38   8.2   5.01   4.94   149   148   231   206
  31   5.62   5.9   4.65   4.71   138   138   237   220
  32   4.44   4.47   3.54   3.6   55.4   54.8   362   332
  33   4.92   5.17   4.09   4.14   121   122   238   228
  34   5.56   5.95   4.64   4.66   136   136   272   266
  35   10.2   11.8   4.8   5.07   145   153   208   199
  36   8.37   8.47   5.34   5.5   112   113   299   333
  37   5.22   5.49   4.06   4.03   125   125   399   284
  38   4.45   4.58   4.35   4.36   131   131   273   261
  39   8.07   8.11   4.71   4.73   135   136   373   391
  40   9.45   9.36   4.87   4.73   142   138   300   287
  41   6.51   6.88   5.01   5.02   142   141   295   276
  42   7.27   7.34   4.62   4.61   123   122   345   350
  43   4.72   4.79   3.92   3.83   116   113   197   185
  44   7.73   7.36   5.28   5.11   147   143   202   190
  45   1.58   1.31   4.93   4.95   150   150   191   188
  46   5.87   5.59   3.64   3.58   104   101   233   251
  47   13.5   14.8   5.24   5.14   105   104   341   348
  48   7.34   7.33   5.17   5.14   138   138   273   268
  49   5.14   4.96   3.92   3.89   120   120   203   197
  50   4.76   4.8   4.42   4.4   131   132   238   245
  51   6.37   6.46   4.1   4.15   119   121   231   244
  52   6.43   6.73   3.95   4.11   117   122   255   275
  53   4.79   4.66   4.98   4.9   150   147   188   194
  54   5.68   5.91   4.81   4.77   142   142   178   185
  55   5.99   6.32   4.83   4.88   153   155   213   245
  56   5.99   6.08   5.42   5.24   164   159   198   208
  57   5.38   5.27   5.17   5.17   155   154   225   218
  58   5.53   5.45   4.36   4.42   127   132   273   282
  59   7.5   7.06   5.34   5.16   149   145   185   179
  60   7.03   7.24   4.95   4.88   149   149   252   238
  61   12   12.2   4.54   4.49   115   115   223   216
  62   6.71   6.84   5.46   5.5   119   119   280   262
  63   8.4   8.48   4.58   4.57   133   134   285   297
  64   6.86   7.1   4.24   4.21   125   124   219   216
  65   4.92   5.06   4.29   4.18   123   120   186   182
  66   7.02   7.06   3.97   3.95   117   118   320   314
  67   10   9.55   4.9   4.87   140   140   177   170
  68   8.58   8.83   3.83   3.8   76.3   76.9   242   227
  69   5.98   5.99   4.33   4.33   120   119   220   222
  70   15   14.8   6.74   6.6   130   131   158   164
  71   4.84   5.13   4.42   4.54   136   139   313   326
  72   7.04   7   4.57   4.46   132   131   262   270
  73   15.5   15.2   4.3   4.27   137   137   182   180
  74   14.4   15   5.21   5.19   144   144   249   230
  75   7.29   7.46   5.75   5.68   170   172   241   258
  76   7.23   7.37   4.6   4.67   134   134   344   347
  77   6.71   6.74   5.36   5.28   123   122   256   236
  78   6.42   6.64   4.52   4.43   148   146   141   152
  79   4.64   4.49   4.76   4.84   121   120   254   257
  80   5.62   5.38   4.76   4.89   142   143   166   158
  81   5   5.07   4.17   4.13   141   140   197   191
  82   3.87   3.94   3.9   3.89   120   119   247   227
  83   4.92   4.86   4.74   4.73   148   147   159   160
  84   6.24   6.16   4.47   4.45   134   134   227   232
  85   5.86   5.9   5.12   5.11   150   149   197   210
  86   11.2   11.3   4.42   4.35   129   129   272   290
  87   6.2   6.34   4.65   4.74   139   139   280   272
  88   4.55   4.6   4.59   4.55   141   141   180   183
  89   4.36   4.52   4.48   4.48   142   142   182   169
  90   2.84   2.77   4.42   4.41   123   124   168   186
  91   7.37   7.41   6.97   6.94   139   140   451   444
  92   11.7   11.6   5.16   5.05   160   159   213   226
  93   9.37   9.08   4.47   4.42   127   127   292   316
  .94   4.49   4.91   4.83   5.02   120   125   242   260
  95   6.97   7.25   3.58   3.46   110   106   191   196
  96   15.6   15.7   3.73   3.71   121   121   190   206
  97   3.96   5.44   4.49   4.47   129   128   238   241
  98   4.74   6.94   4.27   4.34   111   112   212   218
  99   7.58   8.09   5.47   5.36   135   133   305   328
  100   4.89   5.18   5.07   5.13   103   104   282   285
对比实验例3
本发明实施例3制得的血细胞分析仪用试剂(简称试剂3)、实施例4制得的血细胞分析仪用试剂(简称试剂4)、实施例5制得的血细胞分析仪用试剂(简称试剂5)和实施例6制得的血细胞分析仪用试剂(简称试剂6)的差别仅在于芳香醇的种类不同，为测试本发明所选用的四种芳香醇类物质对测试结果的影响，申请人分别用上述试剂3、4、5和6对同一支标本进行平行测试，所得结果如下表4所示。
表4：
Figure GSA00000094093500091
上述测试结果表明，本发明试剂中鞘液所使用的四种芳香醇类物质对测试结果没有影响，都能够良好的反应出标本的实际情况。
当然，本发明并不局限于这些实施例，只要是不违背本发明的主题思想，均应属于本发明的保护范围，如可以在试剂中加入本领域技术人员很容易想到的一些不影响本发明所述试剂性能的其它非必要物质，例如在稀释液中加入少量的叠氮钠，在溶血剂中加入少量的氟化钠，在清洗液中加入少量的Triton X-100等，应该视为在本发明的保护范围内。

Claims (2)

1.血细胞分析仪用试剂，由稀释液、溶血剂、鞘液和清洗液组成，其特征在于：
所述稀释液的组成及含量为：
硼酸2～12g/L、硼砂2～10g/L、氯化钠5～15g/L、硫酸钠8～20g/L、乙二胺四乙酸二钾0.1～0.5g/L、甲基脲0.5～2.0g/L、盐酸羟胺3～9g/L、氯化钾0.2～1.0g/L；
所述稀释液的渗透压为280～350mOsm/kg；所述稀释液的pH值为6.5～8.0；
所述溶血剂的组成及含量为：
季铵盐10～25g/L、二乙醇胺1～5ml/L、聚乙二醇辛基苯基醚0.5～2ml/L、异丙醇0.3～1.5ml/L、氯化钠1～5g/L；
所述溶血剂的pH值为7.5～9.5；
所述鞘液的组成及含量为：
氨基甲烷1～10g/L、甲基脲0.1～1g/L、芳香醇1～15ml/L、乙醇5～15ml/L、聚氧乙烯月桂醚0.1～0.5g/L；
所述鞘液中的芳香醇选自二苯醚、苯甲醇、苯乙醇和乙二醇苯醚中的一种或两种；所述鞘液的渗透压为35～80mOsm/kg；所述鞘液的pH值为8.0～10.0；
所述清洗液的组成及含量为：
硼酸2～12g/L、硼砂2～15g/L、氯化钠2～10g/L、硫酸钠4～10g/L、聚氧乙烯烃基苯乙醚0.5～2g/L、次氯酸钠0.5～2g/L；
所述清洗液的pH值为6.5～8.5。
2.根据权利要求1所述的血细胞分析仪用试剂，其特征在于：
所述稀释液的组成及含量为：
硼酸8.5～12g/L、硼砂3～6g/L、氯化钠5～10g/L、硫酸钠8～12g/L、乙二胺四乙酸二钾0.1～0.3g/L、甲基脲0.5～1.0g/L、盐酸羟胺3～6g/L、氯化钾0.2～0.8g/L；
所述溶血剂的组成及含量为：
季铵盐15～25g/L、二乙醇胺1～3ml/L、聚乙二醇辛基苯基醚0.5～1ml/L、异丙醇0.3～1ml/L、氯化钠3～5g/L；
所述鞘液的组成及含量为：
氨基甲烷1～5g/L、甲基脲0.1～0.5g/L、芳香醇1～10ml/L、乙醇5～10ml/L、聚氧乙烯月桂醚0.1～0.3g/L；
所述清洗液的组成及含量为：
硼酸7～12g/L、硼砂2～6g/L、氯化钠4～10g/L、硫酸钠4～8g/L、聚氧乙烯烃基苯乙醚0.5～1g/L、次氯酸钠0.5～1.5g/L。
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