CN101815524A - 基于海巴戟天叶汁和叶提取物的制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种用于抑制某些酶的方法和组合物,其中这类抑制产生各种健康益处。更具体地说,本发明提供一种使用诺丽(Noni)叶提取物、诺丽叶汁和/或烘培叶(Roast Leaf)中的一种或多种的方法和组合物来抑制:HMG-CoA还原酶、磷酸二酯酶(3和4)PDE3和PDE4、5-脂氧合酶(LOX)和15-LOX、黄嘌呤氧化酶(XO)、γ-氨基丁酸(GABA)、和第二大常见的人皮肤癌细胞系的生长。此外,上述酶抑制会使得:减轻疼痛和炎症、治疗前列腺癌、降低胆固醇水平、对抗II型糖尿病、维持脑中细胞相互作用的最可能的完整性以获得稳定的神经功能(即神经保护作用)、改善哮喘和变态反应的效应、提高能量、提高胰岛素分泌、减少肾结石累积、减轻痛风的效应、使与癫痫和其他癫痫发作病症相关的惊厥减到最少,以及对药物成瘾者提供治标作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种用于抑制某些酶的方法和组合物,其中这类抑制会产生各种健康益处。更具体地说,本发明涉及使用了诺丽(Noni)叶提取物、诺丽叶汁和/或烘培叶(Roast Leaf)中的一种或多种来抑制下述物质:HMG-CoA还原酶、磷酸二酯酶(3和4)PDE3和PDE4、5-脂氧合酶(LOX)和15-LOX、黄嘌呤氧化酶(XO)、γ-氨基丁酸(GABA),和抑制第二大常见的人皮肤癌细胞系的生长。
此外,上述酶抑制会导致:减轻疼痛和炎症、治疗前列腺癌、降低胆固醇水平、对抗II型糖尿病、维持脑中细胞相互作用的最可能的完整性以获得稳定的神经功能(即神经保护作用)、改善哮喘和变态反应的效应、提高能量、提高胰岛素分泌、减少肾结石累积、减轻痛风的效应、使与癫痫和其他癫痫发作病症相关的惊厥减到最少,以及对药物成瘾者提供治标作用。
背景技术
人们正在越来越关心他们的健康。随着每年许多致死性疾病和病症正在威胁着公共健康,人们正在努力寻找治疗和预防疾病的疗法和药剂。此外,研究表明新的综合性早期预防和检测方案增加了健康生活的潜力,使得:癌症更容易预防和治疗;肥胖及其后遗症(例如糖尿病和心血管病)都明显减少;并且可以更好地了解和控制精神疾病、神经疾病和行为疾病的病因。
这些早期预防和检测方案包括使用具有抑制某些酶生长作用的物质,其中这种抑制会改善健康。事实上,卫生和人类服务部(Departmentof Health and Human Services)报道称正在快速地批准新药和创新,并且这类科学进步明显减少了所有慢性疾病的费用负担。
5-LOX和15-LOX
这两种酶(特别是当其被抑制时)可降低某些疾病的发病率和潜在可能。具体地说,酶5-和15-脂氧合酶(aka 5-和15-LOX)可减轻与疼痛和炎症有关的病症,并且减轻某些前列腺癌的发病率并对其进行治疗。
首先,理解LOX抑制后的机理可以大体上理解疼痛和炎症减轻的机理。并且,理解如何抑制某些身体部位中的疼痛和炎症可以理解如何治疗和预防各种与疼痛和炎症有关的病症,特别是那些与前列腺癌和神经障碍相关的疾病(即神经保护作用)。因此,提供下述讨论以增加这些理解。
作为背景知识,5-和15-LOX由花生四烯酸产生导致炎症的活性代谢产物。更具体地说,类花生酸在膜中被连续地合成,所述类花生酸为含至少3个双键的20碳脂肪酸链。存在4类主要的类花生酸-前列腺素、前列环素、血栓烷和白三烯,这些类花生酸都主要由花生四烯酸形成。除白三烯外的类花生酸的合成均涉及环氧合酶(COX);白三烯的合成则涉及脂氧合酶(LOX)。这些合成途径是许多治疗药物的靶标,因为类花生酸与下文讨论的其他物质一起在疼痛、发烧和炎症中扮演重要角色。
作为目前工业中可获得的用于治疗疼痛和炎症相关的病症的药物的一个实例,皮质类固醇激素(例如可的松)可抑制所述类花生酸合成途径第一步骤中的磷脂酶的活性,并且在临床上被广泛地用于治疗非感染性炎性疾病,例如某些形式的关节炎。此外,相比之下,非类固醇抗炎性药物(例如阿斯匹林和布洛芬)可阻断被环氧合酶所催化的第一氧化步骤。某些在分娩时在子宫中大量产生以刺激子宫平滑肌细胞收缩的前列腺素被广泛地用作药物试剂,从而导致诱发流产。尽管,目前存在许多药物可减轻疼痛和炎症,但是它们也具有不希望的副作用。
更具体地,5-LOX和15-LOX酶途径由花生四烯酸产生导致炎症的活性代谢产物。通过当将白三烯加入到组织培养物中时会存在炎症的初期标志和在急性和慢性炎性损伤中鉴定出较高水平的白三烯已经证明了上述事实。白三烯是指急性和慢性炎症和变态反应疾病所涉及的脂质介导体家族。它们都是花生四烯酸的生物活性代谢产物,并且涉及炎性疾病的病理表现,包括哮喘、关节炎、银屑病和炎性肠病。白三烯(一种或多种白三烯)的生物合成开始于利用5-脂氧合酶(5-LOX)将花生四烯酸氧合为一种被称为LTA4的不稳定的环氧化物(白三烯的形成中重要的中间体)。LTA4可通过LTA4水解酶被进一步转化成为有效的化学引诱剂LTB4,或者LTA4可通过被称为LTC4合酶(LTC4S)的特异性微粒体GSH S-转移酶(MGST)与谷胱甘肽(GSH)共轭以产生LTC4。LTC4是半胱氨酰-白三烯(cys-LT)的母体化合物,所述半胱氨酰-白三烯包括LTC4、LTD4和LTE4。这三种半胱氨酰-白三烯是有效的平滑肌收缩剂,特别是在呼吸和循环系统中。这些均通过至少两种细胞受体-CysLT1和CysLT2来介导。所述CysLT1受体为具有7个跨膜区域的G-蛋白偶联受体。已经收集了大量数据,这些数据明确地证明了CysLT在炎性和变态反应疾病,特别是哮喘中起关键作用。
已经确认这些脂质介导体均具有重要的血流动力学作用,收缩冠状血管、导致心输出量效率下降。此外,已经表明CysLT在所培养的HUVEC中会诱导von Willebrand因子分泌和P-选择素的表面表达。VonWillebrand是一种遗传病症。血友病是最常见的类型并且是人们所最熟悉的。
此外,所述半胱氨酰LT主要是由嗜曙红细胞、肥大细胞和巨噬细胞所分泌,半胱氨酰LT会导致血管舒张、增加毛细血管后微静脉通透性并且刺激支气管收缩和粘液分泌。此外,已经观察到来自患有慢性髓细胞样白血病(CML)患者外周血粒细胞悬液和人骨髓来源的骨髓祖细胞中,白三烯LTC4合酶活性升高。在哮喘中,半胱氨酰白三烯存在于患者的肺泡灌洗液中。
因此,5-LOX和白三烯合酶的存在对于在临床上诊断患有支气管哮喘的患者以及患有先前讨论的那些病症的患者很重要。因此,5-LOX抑制会为这些患者提供减轻或治疗其病症或疾病的方法。
此外,类花生酸(所述类花生酸也是通过LOX途径由花生四烯酸代谢而产生的)也涉及前列腺癌的发病。LOX表达会促进肿瘤启动、发展和转移。并且,已经报道了在人肿瘤细胞系中,肿瘤生长和转移中涉及到LOX的表达和功能。检查了前列腺癌患者和正常前列腺组织中的5-LOX的表达,以及它们的抑制剂在两种前列腺癌细胞系(PC3、DU-145)中对细胞增殖的作用1。5-LOX蛋白的表达通过免疫组织化学来检测。LOX抑制剂对前列腺癌细胞生长的作用以浓度和时间依赖性方式导致前列腺癌细胞明显减少2。事实上,LOX抑制剂通过细胞凋亡导致PC细胞的明显抑制。因此,由于LOX在前列腺癌中被诱导,所以LOX抑制剂可介导对前列腺癌细胞的有效抗增殖作用。换句话说,LOX是前列腺癌治疗中一种相对新的靶标,且5-LOX的抑制可提供一种可行的疗法。
此外,5-LOX在脑中(包括CNS神经元中)表达。所述生理作用可能是与脑中肿瘤生长相关的炎症。事实上,高5-LOX表达可在增殖中的脑细胞中被检测到,因此可使用5-LOX抑制剂实现肿瘤细胞增殖的减少和/或肿瘤细胞的破坏3。
因此,有利的是提供抑制5-LOX和15-LOX酶的物质和组合物,并因此明显减轻上述疾病和病症的费用负担。此外,另外有利的是提供抑制5-和15-LOX的物质和组合物,并且使得预防和治疗如下疾病成为可能,例如:各种癌症、神经系统障碍和其他疾病的混合体。
HMG-CoA还原酶
为理解HMG-CoA的抑制如何降低胆固醇,需要提供下述背景知识。胆固醇是脊椎动物的身体组织和血浆中的一种脂质油脂。发现胆固醇可以较大浓度存在于脑、脊髓和肝脏中。虽然肝脏是最重要的胆固醇生物合成部位,但是其他部位包括肾上腺和生殖器官。胆固醇的水不溶性是动脉粥样硬化发展、主要血管内侧的胆固醇斑块和其他脂质斑块的病理沉积、冠状动脉相关病症的一个因素。
最近的研究表明附着有胆固醇的相对丰富的脂蛋白可能是血管中胆固醇积累的真正诱因。高密度脂蛋白(HDL)将胆固醇运载出血流以进行排泄,而低密度脂蛋白(LDL)将胆固醇运载入血液系统以被各种体细胞利用。研究人员相信,血流中的HDL和LDL水平至少与胆固醇水平一样重要,并且目前同时测量血流中的HDL和LDL水平以及胆固醇水平来确定心脏病风险。
维持健康的血液胆固醇水平对于许多活体(包括人类)的健康是决定性的。胆固醇合成可被一类被称为抑制素的化合物有效地阻断。抑制素是HMG-CoA还原酶的有效的竞争性抑制剂(Ki<1nM),生物合成途径中的必要控制点。HMG-CoA还原酶具体负责胆固醇的合成。HMG-CoA还原酶的抑制会减少过量胆固醇的产生。在许多同时给用至抑制素和胆汁盐重吸收抑制剂的患者体内,血浆胆固醇水平降低50%。HMG-CoA还原酶抑制剂被广泛地用于降低动脉粥样硬化患者体内的血浆胆固醇水平,所述动脉粥样硬化是工业化社会中死亡的最主要原因。
1998年的一篇研究报道称HMG-CoA还原酶抑制剂可通过内皮一氧化氮合酶来抵御中风。缺血性中风的治疗仅限于预防药剂,所述预防药剂阻断凝血级联以使得在不会在动脉内侧形成斑块。动脉内侧形成的斑块会减小动脉容积和限制血流,从而将血压增加至不正常水平。该研究首次证明HMG-CoA还原酶抑制剂为胆固醇降低剂,所述HMG-CoA还原酶抑制剂可通过涉及选择性上调内皮NO合酶(eNOS)的未确认机制来抵御脑损伤。使用HMG-CoA还原酶抑制剂的预防疗法可增加脑血流量,从而降低脑梗塞面积并且最终改善正常胆固醇血的小鼠体内的神经功能。该研究推断HMG-CoA还原酶抑制剂提供了一种在脑缺血(由于动脉血流入被阻断导致的局部组织缺血)过程中增加血流量并减轻脑损伤的预防性治疗方案。
2003年的另一篇研究报道了HMG-CoA还原酶抑制剂对心血管疾病的作用。该研究发现HMG-CoA还原酶抑制剂通过阻断HMG-CoA还原酶的作用从而降低了循环的LDL胆固醇的水平。在几次临床试验中,除所述胆固醇降低的益处外,还发现了下述额外的益处:改善了血管反应性、体内平衡、斑块稳定性,减少了促炎性事件、例如减少了单核细胞粘附和浸润。这些益处说明了抑制素为什么会有助于治疗或预防心血管疾病。
市售的许多种抑制素被用于抑制HMG-CoA还原酶。这些药物中的一些是合成的,一些来源于天然来源,例如真菌。所述抑制素或HMG-CoA还原酶抑制剂的一些实例包括:商标名称为MEVACOR TM的洛伐他汀、商标名称为ZOCORTM的辛伐他汀、商标名称为PRAVACHOLTM的普伐他汀、商标名称为LESCOLTM的氟伐他汀以及商标名称为LIPITORTM的阿托伐他汀。
如上所述,抑制素对人体有许多有益作用。然而,与许多药物一样,抑制素还具有各种已知的不希望的副作用。例如,已知抑制素的一些常见的副作用包括:肌肉压痛或肌肉酸痛、不明原因的肌肉疼痛、全身不适、疲劳和衰弱、发烧、衰弱和流感样疾病。此外,对于患有肝脏疾病、妊娠或计划妊娠、母乳喂养中或每天引用超过1-2种酒类的患者通常不推荐抑制素。
2002年,有报道称高半胱氨酸可诱导HMG-CoA还原酶的无节制表达,这会增加体内的胆固醇产生。因此,高半胱氨酸会抑制一氧化氮产生。给用至抑制素和抑制素样药物会降低胆固醇合成并且改善内皮功能,从而恢复心血管健康。
血胆固醇升高是冠心病(CHD)的一种主要的可调整风险因子,在美国冠心病是死亡的主要诱因。CHD每年导致约490,000例死亡,且心绞痛和非致命性心肌梗死(MI)是实际发病的根源。1995年,在美国CHD导致了超过600亿美元的医疗花费和生产力损失。临床事件是症状发生之前多因素过程的结果。尸检研究在许多青少年和青年人体内检测到了动脉粥样硬化的早期病变。动脉粥样硬化和症状性CHD的发作在患有遗传性脂质障碍(例如家族性高胆固醇血症(FH)和家族性复合高脂血症(FCH))的患者中发作较早。
流行病学的、病理学、动物的、遗传的和临床的研究证实了血脂(通常被测定为血清水平)和冠状动脉粥样硬化之间的因果关系。高胆固醇为CHD的风险因子。因为CHD为一种多因素过程,然而,对于可以充分区分出将患有CHD或不会患有CHD的个体的高胆固醇还没有定义。高总胆固醇相关的风险主要是由于高水平的低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)导致的,但是在高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平和CHD风险间存在强的、非依赖性的逆相关。
因此,有利的是提供了一种抑制HMG-CoA还原酶的物质,从而抑制过多的胆固醇且不存在产生许多不健康副作用的风险。
PDE3和PDE4
磷酸二酯酶-也被称为PDE-是存在于人体中的一组酶。在体内PDE与化学物cAMP反应,且cAMP是进行正常细胞功能所需的。
抑制PDE是有益处的,其原因例如包括:减轻哮喘和变态反应患者的痛苦并且增强身体能量。具体地说,变态反应是身体的一个或多个部分对于变应原的过度应答。类似地,哮喘-一种气道疾病-是由于气道中的过度应答导致的。当抗原进入机体组织中、这些细胞接触到抗原并释放IgE抗体时,变态反应开始。所述IgE抗体与组织中的屏蔽细胞(mask cell)结合。这种结合与组胺分泌一起导致了变态反应。因此,控制IgE的释放会停止变态反应。
研究表明cAMP控制IgE的释放。通过抑制PDE会增加体内的cAMP水平。因此,PDE抑制剂将会帮助变态反应和哮喘患者。
PDE抑制剂也可帮助处于发作过程中的哮喘患者。哮喘发作过程中,气道附近的肌肉会收缩并发炎,而cAMP会使气道附近的肌肉松弛。因此,抑制PDE会增加cAMP水平、帮助气道附近的肌肉松弛并且帮助对抗和治疗哮喘发作。
PDE抑制剂还可增加身体能量。机体通过使用葡萄糖来产生能量。需要能量的机体会通过转化胰高血糖素来产生葡萄糖。这种转化过程涉及含有cAMP的肝脏细胞和脂肪细胞。PDE抑制剂通过增加cAMP水平来增加身体能量。
类似地,PDE抑制剂可以增加胰岛素分泌,因此可以减轻并且治疗与II型糖尿病相关的症状。美国糖尿病协会估计91%的糖尿病患者患有II型糖尿病。I型糖尿病-一种自身免疫疾病-是由胰岛β细胞破坏导致的,其中胰岛素分泌近乎不存在;相反,II型糖尿病是由于不同严重度的受损的胰岛素分泌以及不能适当地利用胰岛素(胰岛素抗性)导致的。胰岛素颗粒是由胰岛β细胞分泌的。有两种离子通道涉及控制胰岛素分泌,钾通道和钙通道。当血糖水平升高时,钾通道关闭且钙通道开放,导致钙离子流入到所述β细胞中。β细胞中钙离子的增加会触发胰岛素的释放。当血糖水平下降时,钾通道再次开放且胰岛素的释放下降。由于PDE抑制剂增加胰岛素分泌,所以它们还可以用于治疗和减轻II型糖尿病相关病症。
因此,本领域技术人员将认识到由于上文所解释的原因,所以PDE抑制剂是有益的。
黄嘌呤氧化酶
许多疾病或疾病症状来源于体内特定代谢产物的缺乏或过量。黄嘌呤氧化酶(XO)为黄素蛋白酶,存在于大多数物种中(从细菌到人类)。通常,XO催化嘌呤底物的氧化羟基化,然后还原所述黄素中心的O2,并且产生活性氧(ROS),其为超氧阴离子自由基或过氧化氢(氧化半反应)。XO所参与的一种特定反应为次黄嘌呤的氧化和黄嘌呤的氧化。XO催化将次黄嘌呤氧化为黄嘌呤,然后氧化为尿酸。尿酸在痛风中起到重要作用。抑制XO会降低尿酸水平,并且产生抗血内尿酸过多作用。别嘌醇在痛风和痛风样疾病的治疗中被用作处方类的黄嘌呤氧化酶抑制剂。XO血清水平在各种病理状态(例如肝炎、炎症、缺血再灌注、致癌作用和老化)中显著增加,并且所述酶过程中产生的ROS还牵涉到氧化性损伤。此外,XO抑制还可降低肾结石的积累并且改善哺乳动物的心血管健康。
因此,该酶途径的抑制将会有治疗益处。
GABA4
GABA是一种代表γ-氨基丁酸的化学物。GABA的水平不正常会导致癫痫发作,因此许多健康专家寻找抑制这种酶的物质以降低癫痫和惊厥的发病率。即,需要促进所述信息递送系统和谐并且有效避免癫痫发作的新疗法。
具体地说,癫痫是患者经历反复癫痫发作的疾病。专家认为这种病是一种最流行的神经障碍,折磨着约1%的美国人-约250万人。癫痫发作可以发生在健康儿童、成人以及年长者中,以及患有其他病症(例如脑损伤)的人。
传统的药剂并不能成功地用于所有的患者并且具有很多副作用。因此,需要提供能抑制GABA并且没有或几乎没有副作用的物质。
GABA还会涉及中枢神经系统。换句话说,GABA是一种CNS抑制剂。而且,当GABA被释放到突触中时,GABA会与受体结合并且减慢大脑活动。所以当GABA被抑制时,它会对药物成瘾者提供治标作用。
因此,提供抑制GABA的物质和化合物将是有利的。
第二大常见的人皮肤癌细胞系的生长的抑制
5
人表皮样癌A431细胞是第二大常见的人皮肤癌细胞。A-431细胞系是致瘤性的,并且会在免疫抑制小鼠体内迅速形成皮下肿瘤并在软琼脂中形成菌落。A431也被称为皮肤鳞状细胞癌(即皮肤的表皮样癌),是一种恶性的表皮角质形成细胞癌,一种发病频率比上个世纪显著增加的病征。有些人称这种情况部分是由于防护性臭氧层正在消失导致的。
因此,提供抑制这种癌症生长的物质或组合物将是有利的。
附图说明
为了获得本发明的上述和其他优势和特征的方式,参考本发明的具体实施方案对上文简述的本发明进行更具体的描述,所述实施方案在附图中加以说明。应该理解的是这些附图仅描述了本发明的典型实施方案,因此不应被认为是限制本发明的范围,通过使用附图可以对本发明进行更加特异和具体地描述和解释,其中:
图1示出了在存在叶提取物的情况下,肿瘤细胞的生长百分数。
图2示出了在存在叶提取物的情况下,肿瘤细胞的生长百分数;和
图3示出了在存在丝裂霉素的情况下,肿瘤皮肤细胞的生长。
发明内容
本发明的一些实施方案提供了用于抑制HMG-CoA还原酶、PDE3和PDE4酶、5-和15-LOX酶、XO酶、GABA酶和用于抑制第二大常见的人皮肤癌细胞系的生长的方法和组合物。
一些实施方案可产生:减轻疼痛和炎症、治疗前列腺癌、降低胆固醇水平、对抗II型糖尿病、维持脑中细胞相互作用的最可能的完整性以获得稳定的神经功能(即神经保护作用)、改善哮喘和变态反应的效应、提高能量和胰岛素分泌、减少肾结石累积、减轻痛风的效应、使与癫痫和其他癫痫发作病症相关的惊厥减到最少,以及对药物成瘾者提供治标作用。
本发明的一些实施方案提供了一种治疗各种疾病和病症的方法,包括对所述哺乳动物给用至含有有效量的诺丽叶汁、诺丽叶提取物或烘培叶的化合物,其中所述化合物抑制5-Lox和15-Lox、HMG-CoA还原酶、PDE3和PDE4、5-和15-LOX、XO和GABA。
5-和15-LOX
在一个优选的实施方案中,本发明包括各种使用经特别加工的印度桑椹或海巴戟天(Morinda citrifolia L.)植株组分以便通过抑制5-脂氧合酶(5-LOX)、15-脂氧合酶(15-LOX)和被称为白三烯的脂质介导体来抑制花生四烯酸氧合和代谢成其白三烯合成中间成分的方法,所述方法有助于炎症疾病的病理表现、治疗和预防前列腺癌并且维持脑中细胞相互作用的最可能的完整性以获得稳定的神经功能(即神经保护作用),以及治疗和预防其他疾病。
在所述优选的实施方案中,本发明包括利用含有一种或多种经加工的海巴戟天组分的组合物的各种方法,所述海巴戟天组分例如:叶提取物、叶汁以及脱脂和未处理的种子提取物。这些方法中的一些包括将海巴戟天组合物给用至哺乳动物以抑制、预防或治疗炎症疾病、神经疾病或前列腺癌的步骤。
在一些实施方案中,本发明的组合物包括海巴戟天叶汁或叶提取物,根据需要使用或不使用其他成分(天然的或人工的)进行配制。
HMG-CoA还原酶
在一个优选的实施方案中,本发明包括利用诺丽叶汁、诺丽叶提取物或其他来源于海巴戟天的诺丽叶产物改善脂蛋白谱(profile)、降低VLDL和LDL脂蛋白水平、升高HDL脂蛋白水平、减少肠道上皮对脂肪酸的吸收、抑制HMG-CoA还原酶和降低活体中总血胆固醇的方法和组合物。本发明包括用于选择性降低LDL的方法和组合物。
本发明的实施方案包括用于抑制HMG-CoA还原酶,同时不会导致与目前市售的抑制素相关的消极副作用的方法和组合物。
具体地说,本发明的制剂包括经加工的海巴戟天产物。在一个实施方案中,所述制剂包括含有一种或多种经加工的海巴戟天组分的组合物,所述海巴戟天组分例如:叶提取物、叶汁以及脱脂和未处理的种子提取物。这些方法中的一些包括将海巴戟天组合物给用至哺乳动物以抑制HMG-CoA还原酶,并且由此降低胆固醇的步骤。
在一些实施方案中,本发明的组合物包括海巴戟天叶汁或叶提取物,根据需要使用或不使用其他成分(天然的或人工的)进行配制。
本发明的一些实施方案提供了抑制HMG-CoA还原酶活性,同时不会导致由已知抑制素导致的消极副作用的方法。
本发明的一些实施方案提供一种能够在妊娠期间使用的经口给用的HMG-CoA还原酶抑制剂。
本发明的一些实施方案提供一种在不会对已知抑制素产生应答的患者体内能够抑制HMG-CoA还原酶活性的经口给用组合物。
本发明的一些实施方案提供了一种用于抑制哺乳动物体内HMG-CoA还原酶活性而不需要开处方的非处方组合物。
PDE3和PDE4
在一个优选的实施方案中,本发明涉及使用诺丽叶提取物和诺丽叶汁用于抑制天然存在的磷酸二酯酶(PDE)的方法和制剂。换句话说,本发明涉及使用诺丽叶提取物和诺丽叶汁作为PDE抑制剂。
本发明包括诺丽叶汁和诺丽叶提取物组合物,每种均包括一种或多种海巴戟天植物提取物,当将所述组合物给用至哺乳动物时所述海巴戟天提取物的含量能够使对PDE酶的抑制作用最强,同时不会导致消极副作用。
在一些实施方案中,本发明的组合物包括海巴戟天叶汁或叶提取物,根据需要使用或不使用其他成分(天然的或人工的)进行配制。
XO
在一个优选的实施方案中,提供了一种利用诺丽叶汁和诺丽叶提取物的方法和组合物,所述方法和组合物抑制黄嘌呤氧化酶以改善痛风和痛风样疾病、减少肾结石累积并且改善哺乳动物的整体健康。
当以足够量给用至哺乳动物时,诺丽叶汁和诺丽叶提取物起到有用的黄嘌呤氧化酶抑制剂的作用。所述酶功能的抑制导致尿酸水平的降低,产生抗血内尿酸过多的作用。这可用于治疗尿酸过多导致的疾病,例如痛风。
这些方法中的一些包括将海巴戟天组合物给用至哺乳动物以抑制、预防或治疗痛风样疾病、减少肾结石累积并且改善心血管健康的步骤。
在一些实施方案中,本发明的组合物包括海巴戟天叶汁或叶提取物,根据需要使用或不使用其他成分(天然的或人工的)进行配制。
GABA
在一个优选的实施方案中,本发明包括通过抑制哺乳动物中表达的GABA量从而使GABA水平正常,从而预防癫痫发作以及治疗和减轻癫痫作用的方法和组合物。具体地说,在优选的实施方案中,提供了一种利用诺丽叶汁、诺丽叶提取物或来自海巴戟天的其他诺丽叶产物的组合物,所述组合物抑制GABA表达以使GABA水平正常,由此这可以降低惊厥活性并治疗癫痫发作。
本发明的实施方案包括用于抑制GABA的方法和组合物,所述方法和组合物不会导致与目前可用于癫痫发作患者或患有癫痫类疾病的哺乳动物的药剂相关的消极副作用。
具体地说,本发明的制剂包括经加工的海巴戟天产物。在一个实施方案中,所述制剂包括含有一种或多种经加工的海巴戟天组分的组合物,所述海巴戟天组分例如:叶提取物、叶汁以及脱脂和未处理的种子提取物。这些方法中的一些包括将海巴戟天组合物给用至哺乳动物以抑制GABA,从而降低癫痫和癫痫发作的发病率和影响。
在一些实施方案中,本发明的组合物包括海巴戟天叶汁或叶提取物,根据需要使用或不使用其他成分(天然的或人工的)进行配制。
本发明的一些实施方案提供了抑制GABA活性,同时不会导致消极副作用的方法。
本发明的一些实施方案提供了一种在妊娠期间能够使用的经口给用的GABA抑制剂。
本发明的一些实施方案提供了一种在不会对已知抑制素产生应答的患者体内能够抑制GABA活性的经口给用组合物。
本发明的一些实施方案提供了一种用于抑制哺乳动物体内GABA活性而不需要开处方的非处方组合物。
本发明的一些实施方案通过使用GABA抑制剂来对药物成瘾者产生治标治疗。
皮肤癌生长抑制
在本发明的一个优选的实施方案中,诺丽叶汁和诺丽叶提取物导致对第二大常见的人皮肤癌细胞系生长的明显抑制。
在所述优选的实施方案中,本发明包括利用含有一种或多种经加工的海巴戟天组分的组合物的各种方法,所述海巴戟天组分例如:叶提取物、叶汁、烘焙叶、以及脱脂和未处理的种子提取物。这些方法中的一些包括将海巴戟天组合物给用至哺乳动物以抑制所述A431人皮肤癌细胞系生长的步骤。
在一些实施方案中,本发明的组合物包括海巴戟天叶汁或叶提取物,根据需要使用或不使用其他成分(天然的或人工的)进行配制。
此外,本发明的一个优选实施方案证明了干诺丽叶中存在异黄酮。具体地说,发现每100g含2.51mg黄豆苷;发现每100g含1.85mg黄豆黄苷;并且发现每100g含3.13mg染料木苷6。此外,发现塔希提(Tahitian)中存在固醇。也发现在诺丽果汁浓缩物中:发现每100g含12mg菜油固醇;发现每100g含8.4mg豆固醇;发现每100g含21.5mgβ-谷固醇。
异黄酮似乎可以抵御激素相关的病症,例如乳癌和前列腺癌。在几个卫生保健领域中进行的研究表明消费异黄酮可以在降低疾病风险中起作用。异黄酮可以抵御几种前沿疾病。
所述特征和优势可以利用所附权利要求中具体指出的工具和组合来实现并获得。此外,本发明的特征和优势可以通过实施本发明来学习或者根据下文所阐述的描述将变得显而易见。
具体实施方式
应该容易理解的是,如本文所描述的,可按一系列不同的配置对本发明的组分进行布置和设计。因此,如所要求保护的,下文对本发明的组合物和方法的实施方案的更加详细的描述并非意在限制本发明的范围,而是仅仅意在代表本发明的优选的实施方案。因此,本发明的范围由所述权利要求而非前述描述来说明。属于与所述权利要求等同的含义与范围内的所有变化均被包含在其范围之内。
本领域普通技术人员应该理解的是,使用熟知的本文所述方法和技术的变化、修饰或等价物、不需过多的实验就可以实现本发明的目标。技术人员还应该理解的是,可通过本文具体描述之外的、本领域中可实现的替代方法,来实现本文所述分子的功能特征。本发明意在包括技术人员可以理解并且包括在本发明公开内容的精神和范围内的那些变化、修饰、替代和等价方法。
本发明实施方案的特征在于用于抑制各种酶(例如HMG-CoA还原酶、PDE3和PDE4、5-和15-LOX、XO和GABA)的方法和组合物,所述方法或组合物用于:治疗和预防哺乳动物炎性疾病、治疗前列腺癌、降低胆固醇水平、对抗II型糖尿病、维持脑中细胞相互作用的最可能的完整性以获得稳定的神经功能(即神经保护作用)、改善哮喘和变态反应的效应、提高能量和胰岛素分泌、减少肾结石累积、减轻痛风的效应、使与癫痫和其他癫痫发作病症相关的惊厥减到最少,以及对药物成瘾者提供治标作用。此外,本发明的实施方案特征在于用于抑制第二大常见的人皮肤癌细胞系生长的方法和组合物。通过给用含有诺丽叶汁、诺丽叶提取物和来自印度桑椹或海巴戟天植物的其他组分的组合物,可以减轻上述病症和疾病并促进酶抑制作用。
海巴戟天植物的一般性描述
印度桑椹或海巴戟天植物,科学界称为海巴戟天(“Morindacitrifolia”)是一种高达10m的灌木或小树。叶对生,椭圆至卵圆形。肉质球形头状花序中包含白色小花。果实为大的、肉质的并且卵球形。成熟时,它们为乳白色可食用的,但是具有令人厌恶的味道和气味。所述植物原产地在东南亚,并且在早年被传播到印度至东玻里尼西亚的广大区域。它在野外随机生长,并且已经在种植园和小的个体种植区被培植。海巴戟天的花为小的白色的、3-5瓣的、管状的、芳香的,且大约1.25cm长。花发育成由许多小核果组成的、具有蜡状白色或白绿色或黄色半透明果皮的复合果,所述核果融合成卵球形、椭球形或圆形、多瘤体(lumpy body)。所述果实表面含有“眼”,类似于马铃薯。所述果实为多汁苦味的、暗黄色或黄白色的,并且含有许多红褐色、坚硬的、长方形-三角形、带翼的2室核,每个核均含有4个种子。当完全成熟时,所述果实具有类似于腐败奶酪的明显气味。尽管所述果实已经被几个民族当成食物,但海巴戟天植物的最常见用途是作为红色和黄色染料的来源。
海巴戟天植物富含天然成分。已经发现的成分包括来自叶的:丙氨酸、蒽醌、精氨酸、抗坏血酸、天门冬氨酸、钙、β胡萝卜素、半胱氨酸、胱氨酸、甘氨酸、谷氨酸、糖苷、组氨酸、铁、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、烟酸、苯丙氨酸、磷、脯氨酸、树脂、核黄素、丝氨酸、β谷固醇、硫胺、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、乌索酸和缬氨酸;来自花的:金合欢素7-o-β-d(+)吡喃葡萄糖苷、5,7-二甲基芹菜苷配基4′o-β-d(+)吡喃半乳糖苷和6,8二甲氧基-3-甲基蒽醌-1-o-β鼠李基吡喃葡萄糖苷;来自果实的:乙酸、车叶草苷、丁酸、苯甲酸、苯甲醇、1-丁醇、辛酸、癸酸、(E)十二碳烯γ内酯、(Z,Z,Z)8,11,14-二十碳三烯酸、反油酸、葵酸乙酯、已酸乙酯、辛酸乙酯、棕榈酸乙酯、(Z)6(乙硫基甲基)苯、丁香酚、葡萄糖、庚酸、2-庚酮、己醛、已酰铵、已二酸、已酸、1-已醇、3-羟基-2-丁酮、月桂酸、柠檬烯、亚油酸、2-甲基丁酸、3-甲基-2-丁烯-1-醇、3-甲基-3-丁烯-1-醇、癸酸甲酯、反油酸甲酯、己酸甲酯、甲基-3-甲硫基丙酸酯、辛酸甲酯、油酸甲酯、棕榈酸甲酯、2-甲基丙酸、3-甲硫基丙酸、肉豆蔻酸、壬酸、辛酸、油酸、棕榈酸、钾、东莨菪碱、十一碳酸、(Z,Z)2,5-十一碳二烯-1-醇和吐叶素(vomifol);来自根的:蒽醌、车叶草苷、丹拿堪索(damnacanthal)、糖苷、morindadiol、檄树苷、檄树素、普林藜芦粘液物质、正一丹拿堪索、茜根定、茜根定单甲基醚、树脂、类固双醇、固醇和三羟基甲基蒽醌单甲基醚;来自根皮的:茜素、氯甲蒽醌、糖苷(戊糖、己糖)、morindadiol、檄树生物碱、檄树苷、檄树素、树脂物质、茜根定单甲基醚和类固双醇;来自木材的:三羟氧基蒽醌-2,3-双甲基醚;来自组织培养物的:丹拿堪索、光泽汀、光泽汀-3-樱草糖和桑色素町-6-β樱草糖;来自植株的:茜素、茜素-α-甲基醚、蒽醌、车叶草苷、已酸、morindadiol、桑色素町、morindogenin、辛酸和乌索酸。
加工海巴戟天叶
海巴戟天植株中的海巴戟天叶是可以存在于本发明一些组合物中的可能组分。例如,一些组合物包含本文所进一步描述的叶提取物和/或叶汁。一些组合物包括叶清(leaf serum),所述叶清由获自海巴戟天植物的叶提取物和叶汁两者组成。本发明的一些组合物包括叶清和/或各种叶提取物,这些被掺入到营养医学制品中(本文中“营养医学制品”是指用于改善活体(例如人类或哺乳动物)健康的任何药物或产品)。
本发明的一些实施方案中,使用下述工艺获得海巴戟天叶提取物。首先,由海巴戟天植物收集相对干燥的海巴戟天叶,切成小片,并且置于破碎设备中,优选水压机,此时所述叶片被压碎。在一些实施方案中,用醇(例如乙醇、甲醇、乙酸乙酯或其他醇基衍生物)利用本领域已知的方法渗滤所述压碎的叶片。接下来,在一些实施方案中,从压碎的叶片中提取醇和全部其他醇溶性成分,随后对留下的叶提取物通过加热进行还原,以移除其中所有的液体。所得的干燥叶提取物在本文中被称为“主要叶提取物”。
在本发明的一些实施方案中,用巴氏法对所述主要叶提取物进行消毒直至对所述提取物至少部分地灭菌,并且破坏不期望的生物体。优选地,在70-80℃下用巴氏法对所述主要叶提取物进行消毒,持续的时间足以破坏任何不期望的生物体,同时不会导致所述提取物发生明显的化学变化。巴氏消毒法还可以利用各种辐照技术或方法来实现。
在本发明的一些实施方案中,所述消毒后的主要叶提取物被放置在离心沉降机中,此时将其离心以将其中余下的叶汁从其他物质中移除或分离,包括叶绿素。一旦完成所述离心循环,所述叶提取物处于相对纯化的状态。然后,以与上文所述类似的方式对该纯化的叶提取物再次进行巴氏消毒以获得纯化的主要叶提取物。
优选地,将所述主要叶提取物(无论是否是经消毒和/或纯化的)进一步分级成两种单独的级分:干燥的己烷级分和水性甲醇级分。优选地,使用本领域公知的方法通过含有二氧化硅和CH2Cl2-MeOH成分的气相色谱来实现该分级。在本发明的一些实施方案中,对所述甲醇级分进行进一步分级以获得第二甲醇级分。在一些实施方案中,对所述己烷级分进行进一步份额分级以获得第二己烷级分。
可以将一种或多种叶提取物(包括所述主要的叶提取物、己烷级分、甲醇级分,或者任一种第二己烷级分或甲醇级分)与海巴戟天果实的果汁合并以获得叶清(获得所述果汁的工艺在下文中有进一步地描述)。在一些实施方案中,将所述叶清包装并且冷冻以备运输;在另一些实施方案中,所述叶清被进一步掺入到本文所述的营养医学制品中。
加工海巴戟天果实
本发明的一些实施方案包括含有海巴戟天果汁的组合物。因为海巴戟天果实是用于所有非食用的实际用途中,所以必须对果实进行加工以使其美味可口,适用于人类消费并且被包括在本发明的组合物中。加工的海巴戟天果汁可通过如下制备:从成熟的海巴戟天果实的汁液和果肉中分离种子和果皮;从果汁中过滤果肉;并且包装所述果汁。或者,不对果汁进行包装,而是将经冷冻或巴氏消毒的果汁作为一种成分立即加入到另一种产品中。在本发明的一些实施方案中,可以将所述果汁和果肉混合成匀浆混合物以便于其他成分混合。其他工艺包括冷冻干燥果实和果汁。在生产最终的果汁产品的过程中,可以将果实和果汁重组。其他工艺可包括在粉碎前将果实和果汁风干。
在一个目前优选的生产海巴戟天果汁的工艺中,果实是手摘的或者是利用机械设备采摘的。当果实直径至少为1英寸(2-3cm)直至12英寸(24-36cm)时,可以收获果实。优选地,果实的颜色为深绿色至黄绿色,直至白色,以及这中间的过渡颜色。在收获之后进行任何加工之前,对果实进行彻底清洁。
允许果实成熟或老化0-14天,优选2-3天。通过将果实放置于设备上使其不接触地面来使果实成熟或老化。优选地,在老化过程中,用布或网材将所述果实覆盖起来,但是果实老化时也可以是未被覆盖的。当准备好进行进一步加工时,果实的颜色很浅,例如浅绿、浅黄、白色或透明色。对果实进行检查,寻找变质的或过绿或过硬的果实。将变质的和坚硬的绿色果实同可接受的果实分开。
优选地,将经成熟或老化的果实置于塑料衬里的容器中以便进一步加工和运输。装有老化的果实的容器可放置0-30天,但是优选地,在加工前将所述果实容器放置7-14天。所述容器在进一步加工前可被任选地贮藏在冷冻的条件下。将果实从贮藏容器中取出并且利用手动或机械分离器进行加工。将种子和果皮从果汁和果肉中分离。
果汁和果肉可包装进容器中以便贮藏和运输。或者,果汁和果肉可被立即加工成最终的果汁产品。可将容器贮藏在冷藏、冷冻或室温条件下。优选地,将海巴戟天果汁和果肉混合成均一的混合物,之后它们可以与其他成分混合,例如芳香剂、甜味剂、营养成分、植物成分和着色剂。优选地,将最终的果汁产品在181℉(83℃)或更高达212℉(100℃)的温度下加热并巴氏消毒。所制成的另一种产品是浓缩或稀释形式的海巴戟天果泥和果泥汁。果泥主要是从种子中分离的果肉,并且与本文所述的果汁产品不同。
将产品填充并密封到塑料、玻璃或另一种适合材料的终容器中,所述容器可以抵抗所述加工温度。将所述容器维持在填充温度下或可快速冷却并置于运输容器中。优选地,所述运输容器是由某种材料以可以维持或控制所诉终容器中产品的温度的方式包装起来的。
可通过过滤设备将果肉和果汁分离,从而对所述果汁和果肉进行进一步加工。优选地,所述过滤设备由(但不限于)离心沉降机、筛滤机、压滤机、逆渗透滤器和其他任何标准的商业过滤装置构成,所述筛滤机的尺寸为1微米至高达2000微米,优选低于500微米。所述操作中的过滤器压力范围优选地为0.1psig至高达约1000psig。流速优选地为0.1g.p.m至高达1000g.p.m,且更优选5-50g.p.m。将湿果肉清洗并过滤至少一次,至多10次以便从果肉中移除果汁。所得果肉提取物的纤维含量通常为10-40重量%。优选地,在最低181℉(83℃)的温度下对所得果肉提取物进行巴氏消毒,然后将所述果肉提取物包装进圆筒(drum)以便进一步加工或制成高纤维产品。
加工海巴戟天种子
本发明的一些海巴戟天组合物包括海巴戟天植物的种子。在本发明的一些实施方案中,通过用实验室的研磨机将海巴戟天种子粉碎成种子粉末,从而对海巴戟天种子进行加工。在一些实施方案中,所述种子粉末未经过处理。在一些实施方案中,通过在室温下,在己烷中浸泡并且搅拌所述粉末1小时来对所述种子粉末进行进一步的脱脂(药物∶己烷-比例1∶10)。在一些实施方案中,将所述残渣在真空下过滤,并且再次脱脂(优选在相同条件下,持续30分钟),并且在真空下再次过滤。可将粉末在通风橱中放置过夜以便移除残余的己烷。
此外,在本发明的一些实施方案中,提取所述脱脂和/或未处理的粉末,优选地在室温下用50%(m/m)的乙醇提取24小时(药物溶剂比为1∶2)。
加工海巴戟天油
本发明的一些实施方案可包括从海巴戟天植物中提取的油。用于提取并加工所述油的方法在1999年8月27日提交的美国专利申请09/384,785中有所描述,所述申请于2001年4月10日被授权为美国专利6,214,351,其通过引用的方式被纳入本文。海巴戟天油通常包括几种不同的脂肪酸的混合物,例如甘油三酸酯、棕榈酸、硬脂酸、油酸和亚油酸,以及其他以较少量存在的脂肪酸。此外,所述油优选包括抗氧化剂以抑制油的变质。优选地,使用常规的食品级抗氧化剂。
组合物及其用途
本发明的特征在于用于抑制HMG-CoA还原酶、PDE3和PDE4、5-和15-LOX、XO、GABA和皮肤癌的组合物和方法。本发明的特征还在于具有下列用途的组合物和方法:减轻疼痛和炎症、治疗前列腺癌、降低胆固醇水平、对抗II型糖尿病、维持脑中细胞相互作用的最可能的完整性以获得稳定的神经功能(即神经保护作用)、改善哮喘和变态反应的效应、提高能量、提高胰岛素分泌、减少肾结石累积、减轻痛风的效应、使与癫痫和其他癫痫发作病症相关的惊厥减到最少,以及对药物成瘾者提供治标作用。本发明的实施方案还包括用于将海巴戟天组合物引入哺乳动物体内的方法。海巴戟天组合物的几种实施方案包括各种不同的成分,各个实施方案均包括本文所教导和解释的一种或多种形式的经加工的海巴戟天组分。
本发明的组合物可包括许多海巴戟天组分的任一种,例如:叶提取物、叶汁、叶清、果汁、果肉、果肉提取物、果泥、种子(无论是否是脱脂或未处理的)和油。本发明的组合物还可包括各种其他成分。其他成分的实例可包括但不限于:人造芳香剂、其他天然果汁或果汁浓缩物(例如天然葡萄汁浓缩物或天然蓝莓汁浓缩物)、载体成分、和其他本文将进一步解释的成分。
含有海巴戟天叶提取物的任何组合物,可包括下列一种或多种成分:所述主要叶提取物、己烷级分、甲醇级分、第二己烷和甲醇级分、叶清或营养医学叶产品。
在本发明的一些实施方案中,可以使用各种本领域已知的方法和工艺提取出海巴戟天组分的活性成分或化合物。例如可以使用本领域已知的方法利用醇溶液或醇基溶液(例如甲醇、乙醇、乙酸乙酯和其他醇基衍生物)分离并提取出所述活性成分。这些活性成分或化合物可以被分离并且进一步被分级或者被分离成为它们的组成部分。优选地,所述化合物被分离或被分级,以便鉴别和分离出可有助于预防疾病、增强健康或者进行其他类似功能的任何活性成分。此外,所述化合物可以被分级或分离成它们的组成部分,以便鉴别并分离出任何关键的或相关的相互作用,所述相互作用可以提供与上文所述相同的健康效益作用。槲皮苷和芦丁是可被分离出的活性成分的非限制性实例。例如,活性成分(包括槲皮苷和芦丁)在总制剂或总组合物中含量可为0.01-10重量%。上述含量也可被浓缩至更有效的浓度,其中含量为10-100%。
海巴戟天的任何组分和组合物还可被引入到营养医学制品中(本文中“营养医学”也是指用于改善活体(例如人类或哺乳动物)健康的任何药物或产品)。营养医学制品的实例可包括但不限于:静脉用产品、局部皮肤用产品、创伤愈合用产品、皮肤护理用产品、头发护理用产品、美容和化妆用产品(例如化妆品、洗剂等)、烧伤愈合和治疗用产品、急救用产品、抗细菌产品、唇膏和软膏、骨愈合和治疗用产品、肉类嫩化产品、抗炎性产品、滴眼剂、除臭剂、抗真菌产品、关节炎治疗产品、肌肉松弛剂、牙膏、以及本文将进一步讨论的各种营养医学制品和其他产品。
本发明的组合物可以被配制成不同实施方案的任一种,包括经口给用化组合物、局部皮肤用溶液、静脉内溶液,以及其他产品或组合物。
经口给用组合物可以采取片剂、锭剂、水性或油性悬液、可分散粉末或颗粒、乳剂、糖浆或酏剂。用于经口给用的组合物可按照任何本领域已知的方法来制备,且这类组合物可包含一种或多种试剂,例如甜味剂、芳香剂、着色剂和防腐剂。它们还含有一种或多种其他成分,例如维生素和矿物质等。可制备片剂以包含一种或多种海巴戟天组分,并混合有适用于片剂制备的无毒、可药用赋形剂。这些赋形剂可以是,例如惰性稀释剂、粒化剂和崩解剂、粘合剂、以及润滑剂。所述片剂可以是未包衣的或者它们可以是利用已知技术包衣的,以延迟崩解和在胃肠道中的吸收,由此提供更长时间的持续作用。例如,可以使用延时材料,例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
可以制备水性悬液以包含海巴戟天组分,并混合有适用于水性悬液制备的赋形剂。这类赋形剂的实例可包括但不限于:悬浮剂例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯基吡咯烷酮、西黄蓍胶和阿拉伯胶;分散剂或湿润剂例如天然存在的磷脂如卵磷脂,或烯基氧化物与脂肪酸的缩合产物例如聚氧乙烯硬脂酸酯,或环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物例如十七氧化乙烯-十六醇,或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物例如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯,或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物例如聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯。
典型的甜味剂可以包括但不限于:来源于玉米、甜菜、甘蔗、马铃薯、木薯或其他含淀粉来源的天然糖,所述糖可被化学地或酶催化地转化为晶块、粉末和/或糖浆。此外,甜味剂可以包括人造的或高强度甜味剂,一些甜味剂可以包括阿司巴甜、三氯蔗糖、甜叶菊、糖精等。甜味剂的浓度占海巴戟天组合物的0-50重量%,且更优选约1-5重量%。
典型的芳香剂可包括但不限于有助于适口性的人造和/或天然芳香成分。芳香剂的浓度范围为,例如海巴戟天组合物的0-15重量%。着色剂可以包括食品级的人造或天然着色剂,其浓度为海巴戟天组合物的0-10重量%。
典型营养成分可以包括维生素、矿物质、微量元素、草药、植物提取物、生物活性化学物和化合物,其浓度为海巴戟天组合物的0-10重量%。维生素的实例包括但不限于维生素A、B1至B12、C、D、E,叶酸、泛酸、生物素等。矿物质和微量元素的实例包括但不限于钙、铬、铜、钴、硼、镁、铁、硒、锰、钼、钾、碘、锌、磷等。草药和植物提取物可包括但不限于紫花苜蓿草、蜂花粉、绿藻粉、当归粉、紫锥花根、银杏提取物、木贼草本、印度桑椹、香菇、螺旋藻、葡萄种子提取物等。典型的生物活性化学物可以包括但不限于咖啡因、麻黄素、L-肉碱、肌酸、番茄红素等。
所要用在局部皮肤产品中的成分可以包括任何可安全地用在哺乳动物体内并且以各种形式存在的试剂,例如凝胶、洗剂、乳剂、软膏等,每种均包括一种或多种载体试剂。用于引入到全身(例如静脉内)给药组合物中的成分或载体试剂还可包括任何本领域已知的试剂。在一个示例性的实施方案中,本发明的海巴戟天组合物包括一种或多种经加工的海巴戟天组分,其含量为约0.01-100重量%,并且优选0.01-95重量%。2001年4月10日授权专利6,214,351中包括几种制剂的实施方案。然而,这些组合物仅是示例性的,本领域的普通技术人员应能联想到含有经加工的海巴戟天产物的其他制剂或组合物。
在另一个示例性的实施方案中,所述内用组合物包括下列成分:经加工的海巴戟天果汁或果泥汁,含量约为0.1-80重量%;经加工的海巴戟天油,含量约为0.1-20重量%;以及载体介质,含量约为20-90重量%。还可以使用浓度类似的经加工的海巴戟天食用纤维产物来配制海巴戟天果泥汁或果汁。
实施例
下述实施例说明了通过给用含有印度桑椹或海巴戟天植物组分的组合物、具体地通过给用诺丽叶汁和诺丽叶提取物,本发明的一些海巴戟天组合物的如下预防和治疗作用:抑制HMG-CoA还原酶、抑制PDE3和PDE4、抑制5-和15-LOX、抑制XO、抑制GABA和抑制某种皮肤癌的生长。
这些实施例并非意在以任何方式进行限制,而仅是说明本发明的海巴戟天组合物的一些实施方案的益处、优势和治疗作用。
实施例1诺丽叶汁
在一个实施例中,研究了海巴戟天叶汁对5-LOX和15-LOX、HMG-CoA、PDE3和PDE4、XO和GABA的作用。下述表格总结了这些研究的结果。
表1实施例1
酶 | 测试动物 | 样本编号 | 抑制百分数 | 标准偏差 |
HMG-CoA还原酶 | 大鼠 | 2 | 10% | 29 |
2 | 5% | 5 | ||
2 | 1% | -3 | ||
脂氧合酶15-LOX | 兔 | 2 | 10% | 111 |
2 | 5% | 102 | ||
2 | 1% | 87 | ||
脂氧合酶5-LOX | 人 | 2 | 10% | 101 |
2 | 5% | 85 | ||
2 | 1% | 41 | ||
磷酸二酯酶PDE3 | 人 | 2 | 10% | 71 |
2 | 5% | 33 | ||
2 | 1% | 8 | ||
磷酸二酯酶PDE4 | 人 | 2 | 10% | 94 |
2 | 5% | 45 | ||
2 | 1% | 17 | ||
磷酸二酯酶PDE5 | 人 | 2 | 10% | 41 |
2 | 5% | 0 | ||
2 | 1% | 6 | ||
黄嘌呤氧化酶 | 牛 | 2 | 10% | 33 |
2 | 5% | 29 |
酶 | 测试动物 | 样本编号 | 抑制百分数 | 标准偏差 |
2 | 1% | 6 | ||
GABA2、激动剂位点 | 大鼠 | 2 | 10% | 105 |
2 | 5% | 104 | ||
2 | 1% | 103 |
实施例2诺丽叶提取物
在另一个实施例中,海巴戟天叶提取物被用在抑制分析测定中。结果在下表2中示出。
表2实施例2
HMG-CoA还原酶 | 测试动物 | 样本编号 | 溶液中的NLEX百分含量 | 抑制百分数 |
NLEX-P | 大鼠 | 2 | 0.1% | 54 |
2 | 0.05% | 40 | ||
0.025% | 7 | |||
磷酸二酯酶PDE3 | ||||
NLEX-P | 人 | 2 | 0.1% | 79 |
2 | 0.05% | 69 | ||
2 | 0.025% | 58 | ||
磷酸二酯酶PDE4 | ||||
NLEX-P | 人 | 2 | 0.1% | 82 |
2 | 0.05% | 69 | ||
2 | 0.025% | 54 | ||
磷酸二酯酶PDE5 | ||||
NLEX-P | 人 | 2 | 0.1% | 87 |
HMG-CoA还原酶 | 测试动物 | 样本编号 | 溶液中的NLEX百分含量 | 抑制百分数 |
2 | 0.05% | 84 | ||
2 | 0.025% | 77 |
实施例2(上文)是基于表3-6中所列出的T述参数:
表3
定量方法 | [14C]甲羟戊酸的定量 |
显著性标准 | ≥最大刺激或抑制的50% |
表4
表5
表6
磷酸二酯酶PDE5 | |
来源 | 人血小板 |
底物 | 1.01μM(PH)cGMP+cGMP) |
实施例3
在这个接下来的实施例中,示出了海巴戟天叶汁和叶提取物明显抑制第二大常见的人皮肤癌的生长。在这个实施例中,根据活细胞能够导致alamarBlue从无荧光的蓝色变为还原的红色荧光,进行了分析测定以检测细胞增殖的变化。根据alamarBlue反应的结果,可以对细胞增殖进行定量并且检测活细胞的代谢活性。通过一系列10倍稀释测试待测化合物(包括海巴戟天叶提取物、叶汁和烘培叶)对人表皮样癌细胞系-A431增殖的作用,分析测定浓度从0.01至100μg/ml或从0.0001%至1%。
总之,发现在肿瘤细胞系中,与载体处理的对照相比,浓度为10-100μg/ml的叶提取物以及浓度为0.1%-1%的叶汁导致明显的生长抑制(≤50%的生长),而烘培叶没有明显的作用(0.01-100μg/ml)。也观察到并行测试的标准参比试剂丝裂霉素(浓度<10μM)也具有明显的抑制活性。因此,计算了利用非线性回归分析半定量测定的LC50(50%抑制浓度)、TGI(总生长抑制)和LC50(50%致死浓度)。下文描述了所述分析测定中使用的材料、设备和方法,以及总结了所述结果的表格。
测试物质和浓度 由Tahitian Noni International,Inc.提供用于进行体外抗肿瘤研究的海巴戟天叶提取物、叶汁和烘培叶。将所述海巴戟天化合物溶于无菌蒸馏水中,然后使用无菌蒸馏水进行稀释以获得初始工作溶液:对于叶提取物和烘培叶为10000、1000、100、10和1μg/ml,对于叶汁为100、10、1、0.1和0.01%。在所述测试中,用培养基进行100倍稀释以分别获得100、10、1、0.1和0.01μg/ml,以及1、0.1、0.01、0.001和0.0001%的最终分析测定浓度。
细胞系和培养基在37℃下、含5%CO2的空气中孵育肿瘤细胞系A431(人表皮样癌),所述细胞获取自美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)(ATCC CRL-1555)。所用的培养基为90%的Dulbecco氏改良Eagle氏培养基、10%的胎牛血清并且补加1%的抗生素/抗真菌素。
化学试剂 在所述分析测定中使用下述化学试剂:AlamarBlue(Biosource,USA)、抗生素/抗真菌素(GIBCO BRL,USA)、Dulbecco氏改良Eagle氏培养基(GIBCO BRL,USA)、胎牛血清(HyClone,USA)和丝裂霉素(Kyowa,Japan)。
设备 在所述分析测定中使用下述设备:CO2培养箱(FormaScientific Inc.,USA)、离心机5810R(Eppendorf,Germany)、血细胞计数器(Hausser Scientific Horsham,USA)、倒置显微镜CK-40(Olympus,Japan)、系统显微镜E-400(Nikon,Japan)、Spectrafluor Plus(Tecan,Austria)和Vertical Laminar Flow(Tsao Hsin,R.O.C.)。
方法 评价了所述测试物质的抗增殖作用。在37℃下、含5%CO2的气氛中,将100μl细胞悬液的等分样品(约3×103/孔)加入96孔微量滴定板中。24小时后,分别在每孔中加入100μl生长培养基、2μl测试溶液、丝裂霉素或载体(蒸馏水)再孵育72小时,每个实验重复两次。在100、10、1、0.1和0.01μg/ml的浓度下,评价两种测试化合物,叶提取物和烘培叶。在1、0.1、0.01、0.001和0.0001%的浓度下,评价其他化合物、叶汁。孵育结束时,在每孔中加入20μl 90%的alamarBlue试剂,在利用荧光强度检测细胞活性之前再孵育6小时。使用Spectrafluor Plus板读数器测量荧光强度,在530nm处激发并且在590nm处发射(demission)。
然后确定IC50、TGI和LC50。IC50(50%抑制浓度)为从时间0开始经处理细胞的数量或质量的增加仅为实验结束时载体对照的相应增加的50%时的测试化合物浓度。TGI(总生长抑制)为实验结束时经处理细胞的数量或质量等于时间0时的细胞数量或质量时的测试化合物浓度。LC50(50%致死浓度)为实验结束时经处理细胞的数量或质量等于时间0时的细胞的数量或质量一半时的测试化合物浓度。利用下述公式计算所测得结果:
PG(%)=100×(平均F测试-平均F时间0)/(平均F对照-平均F时间0)
如果(平均F测试-平均F时间0)<0,则
PG(%)-100×(平均F测试-平均F时间0)/(平均F时间0-平均F空白)
其中:
PG=生长百分数
平均F时间0=使细胞暴露于所述测试物质之前,2次测量的还原的alamarBlue的荧光强度的平均值。
平均F测试=在使细胞暴露于所述测试物质72小时之后,2次测量的alamarBlue的荧光强度的平均值。
平均F对照=在不含所述测试物质的情况下培养72小时之后,2次测量的alamarBlue的荧光强度的平均值。
平均F空白=将无细胞培养基培养72小时之后,2次测量的alamarBlue的荧光强度的平均值。
与载体处理的对照相比,荧光强度降低50%或更多(≥50%)表明显著的细胞生长抑制、细胞生长抑制活性或细胞毒性,然后使用GraphPad Prism(GraphPad Software,USA)利用非线性回归半定量地确定IC50、TGI和LC50。
结果 下列表格和图1-3总结了所述测定的结果。
海巴戟天测试物质对A431皮肤癌细胞的生长的作用
1
表7
表8
表9
1A:与载体处理的对照相比,荧光强度降低50%或更多(≥50%)表明显著的生长抑制、细胞生长抑制活性或细胞毒性。
ABlank:与时间0相比,将无细胞培养基培养3天之后,2次测量的alamarBlue的荧光强度的平均值(转化和记录为-100%)。
B时间0:使细胞暴露于所述测试物质之前,2次测量的培养基中alamarBlue的荧光强度的平均值(转化和记录为0%)。
c载体:与时间0相比,培养3天之后,2次测量的含细胞培养基和加入载体的培养基中alamarBlue的荧光强度的平均值(转化和记录为100%)。
海巴戟天测试化合物的IC
50
、TGI和LC
50
值
2
表10
测试物质 | 分析测定名称 | aIC50 | bTGI | cLC50 |
叶提取物 | 肿瘤、皮肤 | 76μg/ml | >100μg/ml | >100μg/ml |
叶汁 | 肿瘤、皮肤 | 0.20% | 0.36% | 0.65% |
烘培叶 | 肿瘤、皮肤 | >100μg/ml | >100μg/ml | >100μg/ml |
丝裂霉素 | 肿瘤、皮肤 | 0.035μM | 0.19μM | 1.0μM |
2A使用GraphPad Prism(GraphPad Software,USA)利用非线性回归对IC50、TGI和LC50进行半定量的确定。
aID50(50%抑制浓度):为从时间0开始经处理细胞的数量或细胞质量的增加仅为实验结束时载体对照中相应增加的50%时的测试化合物浓度。
bTGI(总生长抑制):实验结束时经处理细胞的数量或质量等于时间0时的细胞数量或质量时的测试化合物浓度。
cLC50(50%致死浓度):实验结束时经处理细胞的数量或质量等于时间0时细胞数量或质量一半时的测试化合物浓度。
下述图为用叶提取物、叶汁和烘培叶处理的A431人肿瘤细胞系中生长抑制的浓度-响应曲线。
图1 图2
图3
总之,本发明的一些实施方案提供了使用诺丽叶汁和诺丽叶提取物来抑制:HMG-CoA还原酶、PDE3和PDE4、5-LOX和15-LOX、XO、GABA和第二大常见的人皮肤癌细胞系的生长,目的在于:减轻疼痛和炎症、治疗前列腺癌、降低胆固醇水平、对抗II型糖尿病、维持脑中细胞相互作用的最大可能完整性以获得稳定的神经功能(即神经保护作用)、改善哮喘和变态反应的效应、提高能量、提高胰岛素分泌、减少肾结石累积、减轻痛风的效应、使与癫痫和其他癫痫发作病症相关的惊厥减到最少,以及对药物成瘾者提供治标作用。
实施例4
在实施例4中,测定了诺丽叶汁的乙醇提取物和新鲜压榨的诺丽叶汁对人MMP的作用。下列表格总结了这些研究的结果,其中TNL-3为诺丽叶汁的乙醇提取物且TNLJ-1为新鲜压榨的诺丽叶汁。
表11描述了不同浓度的诺丽叶乙醇提取物和新鲜压榨诺丽叶汁的无效百分数。
表11
如上述表格11所述,诺丽叶的乙醇提取物表现出明显的MMP-9、MMP-1、MMP-3抑制作用。实施例4是基于表12-17中所列出的参数。
表12
表13
表14
表15
表16
表17
实施例5
实施例5中,研究了诺丽叶的乙醇提取物的作用。下列表格总结了这些研究的结果,其中TNL-3为诺丽叶的乙醇提取物。如下图所示,证明了诺丽叶的乙醇提取物可有效抑制导致人痤疮的细菌。
表18:结果
上述结果需要利用下述材料、方法和参考内容。
表19:方法和材料
表20
表21
本发明可以以其他特定形式的实施方案来说明,而不背离本发明精神的基本特征。应该认为所描述的实施方案在所有方面仅为说明性的而非限制性的。因此,本发明的范围可由所述权利要求而非由前述描述来说明。属于与所述权利要求相当的含义与范围内的所有变化均被包含在他们的范围内。
Claims (20)
1.一种治疗疾病的方法,包括如下步骤:
给用含有海巴戟天叶提取物的化合物;和
抑制选自如下的酶:5-脂氧合酶、15-脂氧合酶、HMG-CoA还原酶、PDE3、PDE4、XO和GABA。
2.权利要求1的方法,其中所述5-脂氧合酶和15-脂氧合酶的抑制产生选自如下的作用:治疗疼痛、治疗炎症、抑制5-脂氧合酶和15-脂氧合酶、及提供神经保护作用。
3.权利要求1的方法,其中所述抑制产生选自如下的生理作用:治疗前列腺癌、降低胆固醇、治疗II型糖尿病相关疾病、改善记忆、增加胰岛素、治疗哮喘、治疗变态反应、治疗痛风、减少肾结石累积、改善心血管健康、减少癫痫发作、使惊厥活性降到最低、对药物成瘾的哺乳动物提供疗效、以及减少皮肤癌。
4.权利要求1的方法,其中所述化合物含有异黄酮。
5.权利要求1的方法,其中所述化合物含有固醇。
6.一种组合物,其包含0.01-100重量%的经加工的海巴戟天组分,所述经加工的海巴戟天组分选自:海巴戟天叶汁、海巴戟天叶提取物、海巴戟天种子提取物、海巴戟天种子、和脱脂粉碎的海巴戟天种子粉末。
7.权利要求6的组合物,其中所述组合物抑制由花生四烯酸合成白三烯,涉及抑制选自5-脂氧合酶和15-脂氧合酶的一种或多种脂氧合酶。
8.权利要求6的组合物,其中所述组合物抑制花生四烯酸氧合成其中间成分。
9.权利要求6的组合物,还包括:
含量为约0.1-80重量%的经加工的海巴戟天果汁;
含量为约0.1-20重量%的经加工的海巴戟天油;和
含量为约20-90重量%的载体介质。
10.一种抑制脂氧合酶的方法,包括如下步骤:
将经加工的海巴戟天组分加入到醇基溶液中;
从所述溶液中分离并提取出所述经加工的海巴戟天组分的活性成分,从而获得级分;
将所述提取的活性成分引入到所述哺乳动物体内,其中所述提取的活性成分抑制花生四烯酸氧合成其中间成分。
11.权利要求10的方法,其中抑制花生四烯酸的氧合是通过抑制选自5-脂氧合酶和15-脂氧合酶的脂氧合酶而实现。
12.权利要求10的方法,其中环氧合酶-2也被选择性地抑制。
13.权利要求10的方法,其中抑制花生四烯酸氧合成其中间成分是在维持胃粘膜完整性的同时完成的。
14.权利要求10的方法,其中所述海巴戟天产物由如下一种或多种构成:海巴戟天果汁、海巴戟天油提取物、海巴戟天食用纤维、海巴戟天果泥汁、海巴戟天果泥、海巴戟天果汁浓缩物、海巴戟天果泥汁浓缩物。
15.权利要求10的方法,其中所述醇基溶液基本上选自甲醇、乙醇和乙酸乙酯、及其他醇基衍生物。
16.权利要求10的方法,其中所述活性成分为醇溶性的上清级分。
17.权利要求10的方法,其中所述活性成分为槲皮苷。
18.权利要求10的方法,其中所述槲皮苷的含量为0.01-10重量%。
19.权利要求10的方法,其中所述活性成分为芦丁。
20.权利要求10的方法,其中所述芦丁的含量为0.01-10重量%。
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