CN101797234A - 醋酸普兰林肽缓释微球制剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种醋酸普兰林肽的缓释微球制剂及其制备方法。该方法将醋酸普兰林肽溶解于PBS溶液中形成内水相；将聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)溶解于有机溶剂中形成有机相；再将内水相与有机相混合，超声或搅拌乳化成W/O初乳；然后将初乳在搅拌的条件下加到外水相PVA水溶液中，乳化成W/O/W复乳；再低速搅拌，使有机溶剂挥发完全；离心、洗涤、收集微球，低温真空干燥得到微球成品。采用该方法制备的微球形态圆整，表面光滑，流动性好，其体外释药性能符合长效制剂特征。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，是醋酸普兰林肽的一种新剂型——微球制剂及其制备方法。
背景技术
胰淀粉样多肽是一种由37个氨基酸残基构成的多肽激素，在餐后由胰腺β细胞释放，具有多种生理功能，如减慢食物(包括葡萄糖)在小肠的吸收速度，通过抑制高血糖素减少肝糖的产生，减少患者食欲，协助机体调节血糖水平等等(Yong AA，Gedulin BR，Rink TJ.Dose-response for the slowing of gastric emptying in a rodent model byglucagons-like peptide(7-36)NH2，amylin cholecystokinin，and otherpossible regulator of nutrient uptake.Metabolism，1996，45(1)：1-3)。不过，天然胰淀粉样多肽在溶液中并不稳定，易水解，具有粘稠性大、易凝集的特点，因而不适合用于治疗。醋酸普兰林肽是经筛选、合成出的一种稳定的胰淀粉样多肽类似物。醋酸普兰林肽与胰淀粉样多肽的氨基酸序列差异表现在前者第25、28和29位上由脯氨酸所替代，其氨基酸序列为Lys-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe-Leu-Val-His-Ser-Ser-Asn-Asn-phe-Gly-Pro-Ile-Leu-Pro-Pro-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Tyr-NH2。研究证实，醋酸普兰林肽可以延缓葡萄糖的吸收，抑制胰高血糖素的分泌，减少肝糖生成和释放，因而具有降低糖尿病患者体内血糖波动频率和波动幅度，改善总体血糖控制的作用(Ryan GL，Jobe LJ，martin R.Pramlintide in the treatment of type1 andtype2 diabetes mellitus.Clin Ther 2005，27：1500-1512)。2005年3月美国FDA批准醋酸普兰林肽(一种笔型注射剂)作为1型及2型糖尿病患者的辅助用药。然而，由于醋酸普兰林肽在体内的半衰期很短(约为29分钟)，需每天多次给药，连续给药数周，如此频繁地注射给药无疑给患者的身心带来巨大的痛苦，由于顺应性差，极容易导致中途治疗的失败。
发明内容
本发明目的在于采用PLGA为载体，将醋酸普兰林肽制备成微球制剂，达到增加药物稳定性，延长药物作用时间，减少注射次数和用量，提高药物疗效与经济效益的目的，并提供醋酸普兰林肽微球的制备方法。
本发明的醋酸普兰林肽微球的制备方法，是采用复乳——溶剂蒸发法。将醋酸普兰林肽溶解于PBS溶液中形成内水相；将PLGA溶解于有机溶剂中形成有机相；再将内水相与有机相混合，超声或搅拌乳化成W/O初乳；然后将初乳在搅拌的条件下加到外水相PVA水溶液中，乳化成W/O/W复乳；再低速搅拌，使有机溶剂挥发完全；离心、洗涤、收集微球，低温真空干燥得到微球成品。
醋酸普兰林肽微球的制备方法，其特征在于：制备方法包括以下步骤：
(1)醋酸普兰林肽PBS溶液的配制
在避光的条件下，将醋酸普兰林肽溶解于PBS溶液中，得到内水相，醋酸普兰林肽的浓度15～30％g/ml。
(2)PLGA的配制
将PLGA溶解于有机溶剂中形成有机相，PLGA的浓度20～50％g/ml。
(3)初乳的制备
在避光的条件下，控制温度在10℃左右，将内水相与有机相混合形成初乳，超声乳化的功率为20～90W，时间0.5～2分钟或搅拌乳化的速度为1000～30000rpm，时间0.5～2分钟，有机相与内水相的体积比为10∶1～10∶3。
(5)复乳的制备
在避光的条件下，控制温度在10℃左右，把初乳在搅拌的情况下加到一定浓度的PVA和NaCl的外相水溶液中，乳化成W/O/W复乳；复乳形成的搅拌速度为1000～30000rpm，PVA溶液的浓度为0.5～10％g/ml，NaCl溶液的浓度为0.5～10％g/ml，乳化时间为1～5分钟，初乳与外水相的体积比为1∶50～1∶150。
(5)微球的形成
在避光的条件下，控制温度在10℃左右，将复乳溶液移至低速搅拌直到有机溶剂挥发完全，离心、洗涤后收集微球；搅拌速度为300-500rpm，离心速度为4000～15000rpm，离心时间为5～10分钟，洗涤次数为3次，低温真空干燥。
本发明的积极效果是：本发明采用复乳——溶剂蒸发法制备出醋酸普兰林肽微球，微球制备工艺稳定、可行，其体外释药性能符合长效制剂特征，可延长药物作用时间，提高药物疗效与经济效益。
附图说明：
图1表示实施例1的醋酸普兰林肽微球的粒径分布
图2表示实施例2的醋酸普兰林肽微球的粒径分布
图3表示实施例3的醋酸普兰林肽微球的粒径分布
图4表示实施例2的醋酸普兰林肽微球的体外释放曲线
具体实施方式
以下实施例对本发明作进一步的描述，以便本领域内的技术人员进一步理解，但不以任何形式限制本发明。
实施例1
精密称取50mg醋酸普兰林肽溶于0.25ml PH7.4的PBS缓冲液中，形成内水相，将PLGA(Mw＝15000，75∶25)400mg溶解于2ml二氯甲烷中形成有机相，将上述内水相加至有机相中，10000rpm高速分散乳化，形成W/O初乳，将含2％PVA溶液120ml(含10％NaCl)置于搅拌容器中，将此初乳在高速搅拌(22000rpm)的情况下加到2％PVA溶液120ml(含10％NaCl)中充分匀化成W/O/W复乳，2分钟后，将转速下调至400rpm，低温下(4～10℃)搅拌4小时，微球硬化后离心分离并洗涤，低温(4～10℃)真空干燥即可。
实施例2
精密称取50mg醋酸普兰林肽溶于0.25ml PH7.4的PBS缓冲液中，形成内水相，将PLGA(Mw＝15000，75∶25)400mg溶解于1.5ml二氯甲烷中形成有机相，将上述内水相加至有机相中，10000rpm高速分散乳化，形成W/O初乳，将含2％PVA溶液120ml(含10％NaCl)置于搅拌容器中，将此初乳在高速搅拌(16000rpm)的情况下加到2％PVA溶液120ml(含10％NaCl)中充分匀化成W/O/W复乳，2分钟后，将转速下调至400rpm，低温下(4～10℃)搅拌4小时，微球硬化后离心分离并洗涤，低温(4～10℃)真空干燥即可。
实施例3
精密称取50mg醋酸普兰林肽溶于0.25ml PH7.4的PBS缓冲液中，形成内水相，将PLGA(Mw＝15000，75∶25)400mg溶解于1ml二氯甲烷中形成有机相，将上述内水相加至有机相中，10000rpm高速分散乳化，形成W/O初乳，将含2％PVA溶液120ml(含10％NaCl)置于搅拌容器中，将此初乳在高速搅拌(10000rpm)的情况下加到2％PVA溶液120ml(含10％NaCl)中充分匀化成W/O/W复乳，2分钟后，将转速下调至400rpm，低温下(4～10℃)搅拌4小时，微球硬化后离心分离并洗涤，低温(4～10℃)真空干燥即可。
实验例1醋酸普兰林肽微球的体外释放试验
实验样品：根据本发明实施例2所述的方法制备的微球。
实验试剂：pH7.4的磷酸盐缓冲液(PBS，含抑菌剂0.02％NaN3，润湿剂0.02％Tween-80和吸附抑制剂0.02％Tween-20)作为释放介质。
实验仪器：恒温振荡器、离心机。
实验条件：温度37±1℃，转速100转/分钟。
实验方法：精密称取实验样品约15mg，置于容积为15ml的具盖的离心管中，加入5ml释放介质(pH为7.4的磷酸盐缓冲液)，置于恒温振摇器中，在温度37±1℃，转速为100转/分的条件下进行考察，每隔三天吸取试管上部的释放介质，添加等量的新鲜介质。分别在第1天，7天，15天和30天取出试管，在4000rpm离心20分钟，吸去上清液，沉淀物进行低温真空干燥，沉淀物用乙睛破球，用HPLC检测微球内剩余药量。
实验结果：所得结果如图4所示，本发明醋酸普兰林肽的微球的释放可以长达30天，达到了大大减少给药次数，提高其生物利用度的目的。
Claims (4)
1.一种醋酸普兰林肽微球制剂的制备方法，在避光的条件下按以下步骤进行：
将醋酸普兰林肽溶解于PBS(磷酸盐缓冲液)溶液中形成内水相；将聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)溶解于有机溶剂中形成有机相；再将内水相与有机相混合，超声或搅拌乳化成W/O初乳；然后将初乳在搅拌的条件下加到外水相PVA水溶液中，乳化成W/O/W复乳；再低速搅拌，使有机溶剂挥发完全；离心、洗涤、收集微球，低温真空干燥得到微球成品。
2.如权利要求1所述的醋酸普兰林肽微球的制备方法，其特征在于：制备方法包括以下步骤：
(1)醋酸普兰林肽PBS溶液的配制
在避光的条件下，将醋酸普兰林肽溶解于PBS溶液中，得到内水相，醋酸普兰林肽的浓度15～30％g/ml。
(2)PLGA的配制
将PLGA溶解于有机溶剂中形成有机相，PLGA的浓度20～50％g/ml。
(3)初乳的制备
在避光的条件下，控制温度在10℃左右，将将内水相与有机相混合形成初乳，超声乳化的功率为20～90W，时间0.5～2分钟或搅拌乳化的速度为1000～30000rpm，时间0.5～2分钟，有机相与内水相的体积比为10∶1～10∶3。
(4)复乳的制备
在避光的条件下，控制温度在10℃左右，把初乳在搅拌的情况下加到一定浓度的PVA和NaCl的外相水溶液中，乳化成W/O/W复乳；复乳形成的搅拌速度为1000～30000rpm，PVA溶液的浓度为0.5～10％g/ml，NaCl溶液的浓度为0.5～10％g/ml，乳化时间为1～5分钟，初乳与外水相的体积比为1∶50～1∶150。
(5)微球的形成
在避光的条件下，控制温度在10℃左右，将复乳溶液移至低速搅拌直到有机溶剂挥发完全，离心、洗涤后收集微球；搅拌速度为300-500rpm，离心速度为4000～15000rpm，离心时间为5～10分钟，洗涤次数为3次，低温真空干燥。
3.如权利要求1或2所述的醋酸普兰林肽聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球的制备方法，其特征在于所述的有机溶剂包括二氯甲烷、氯仿、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、二氧六环、乙醚、丙酮和四氢呋喃以及由它们所组成的混合物，优选二氯甲烷。
4.如权利要求1或2所述的醋酸普兰林肽微球的制备方法，其特征在于所述的共聚物为乳酸和羟基乙酸共聚物(PLGA)，乳酸和羟基乙酸的分子量大小5000～150000，其单体组成比例乳酸∶羟基乙酸为99∶1～50∶50，其在有机溶剂中的浓度为20～50％g/ml。
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