CN101792394A - 一种萃取分离l-辛弗林的方法 - Google Patents

Abstract

一种萃取分离L-辛弗林的方法，涉及采用反胶束萃取技术萃取L-辛弗林的方法。本发明以市售枳实为原料，经溶解及抽滤、超滤分离、反胶束萃取、反萃取、真空浓缩及冻干而得成品。本发明在常温下生产出高纯度产品，能降低生产能耗；生产设备简单、操作简便；在生产过程中主要使用乙醇、蒸馏水等无毒物质，且使用后还能回收利用；脱除的杂质还能再利用，因而生产安全、充分利用物质资源，无“三废”排放，生产成本低，是节能减排的生产方法。采用本发明方法制备出的L-辛弗林产品，可广泛应用于医药、食品、饮料、保健品等行业中。

Description

一种萃取分离L-辛弗林的方法

一、技术领域

本发明属于L-辛弗林分离纯化的技术领域，具体涉及采用反胶束萃取技术萃取分离L-辛弗林的方法。

二、背景技术

L-辛弗林，又名对羟福林、脱氧肾上腺素等，存在于芸香科植物酸橙的干燥幼果，柑橘属植物橘的幼嫩落果，仙人掌科植物刺仙人球等植物中，属小分子生物碱。L-辛弗林具有收缩血管、升高血压和较强的扩张气管和支气管的作用，用于休克，心衰，治疗支气管哮喘；能够提高新陈代谢、增加能量水平，氧化脂肪，有减肥效果；是一种天然兴奋剂，无副作用。因此辛弗林广泛应用于医药、食品、饮料等保健行业。

L-辛弗林既可化学合成又可从植物中提取，化学合成法虽简化了从多种物质成分中分离的工序，但合成的辛弗林是DL-外消旋体，尚无高效的分离纯化方法，加之D-对映体可能存在明显的副作用，这严重制约了化学合成法在L-辛弗林生产方面的应用。因此，从植物中提取分离成为目前获得L-辛弗林的唯一方法。但是，L-辛弗林含量较低，即使是在含量较高的枳实、青皮等植物中，其含量较高也仅为0.2-0.4％。因此，高效分离天然L-辛弗林成为本领域的关键。

现有分离L-辛弗林的方法，如2009年4月8日公开的公开号为CN101402577的“从个青皮中提取分离左旋-辛弗林的方法”专利，公开的方法是：用15～45％乙醇于80℃条件下回流提取个青皮细粉中左旋-辛弗林两次，将提取液减压浓缩至含固形物80～85％后上D101大孔吸附树脂柱，用15％乙醇洗脱；将洗脱液减压浓缩，喷雾干燥，得左旋-辛弗林粗品；用纯乙醇溶解左旋-辛弗林粗品，加入与粗品等质量的硅胶，搅拌均匀，去除乙醇，制备硅胶吸附样品，干法上样，按体积比用二氯甲烷∶甲醇∶氨水＝6～9∶2∶0.1配制的洗脱液洗脱收集左旋-辛弗林组分；将硅胶柱分离洗脱的左旋-辛弗林组分进行减压浓缩，喷雾干燥，获左旋-辛弗林产品。该方法的主要缺点是：含固形物80～85％的提取液流动性差，不易上柱，传质阻力大，能耗大，效率较低；对其粗品用硅胶柱分离的能耗大，硅胶重复使用性差，资源消耗大；使用甲醇、二氯甲烷等有毒有机溶剂，污染严重，生产的安全性差，不利于规模化生产。

三、发明内容

本发明的目的是针对现有分离L-辛弗林方法的不足之处，提供一种萃取分离L-辛弗林的方法，具有在常温下即可实现对L-辛弗林的高效纯化，有机溶剂可反复使用，成本较低，操作简单，产品纯度高，无“三废”排放等特点。

本发明的机理：枳实中含有L-辛弗林、多糖、杂蛋白等物质。本发明利用L-辛弗林易溶于乙醇的特点，用一定浓度的乙醇-水溶液溶解枳实中的L-辛弗林，而多糖则不溶解，以沉淀形式析出，经过过滤，与L-辛弗林分离；又利用超滤使原料液中的溶剂及小分子溶质从高压进料液测透过膜进入低压侧，而大分子则被超滤膜所阻留进行分离，除去多糖后，L-辛弗林-乙醇溶液中还含有大分子的杂蛋白，其分子量3000Da以上，故选用合适的超滤膜除去L-辛弗林-乙醇溶液中大分子杂蛋白，获得除去杂蛋白的超滤液。超滤液中的L-辛弗林带正电荷，可与反胶束中的负电荷表面活性剂P204形成静电相互作用，从而实现反胶束萃取；荷载于反胶束中的L-辛弗林可与反萃取剂中的K⁺交换，进入反萃取相，从而实现反萃取，获得反萃取溶液；反萃取溶液中的盐类分子量低于100Da，因此通过选取合适的透析袋可除去分子量较小的盐类；再经过真空浓缩及冷冻干燥，即获得纯度较高的L-辛弗林冻干粉。

本发明的目的是这样实现的：一种萃取分离L-辛弗林的方法，以市售枳实为原料，经溶解及抽滤、超滤分离、反胶束萃取、反萃取，真空浓缩及冻干，制得L-辛弗林冻干粉。其具体的方法步骤如下：

(1)醇溶及抽滤

以市售枳实为原料，以60％的乙醇溶液为溶剂，按枳实的质量(g)∶60％的乙醇溶液体积(mL)之比为1∶9～10的比例，在枳实中加入体积分数为60％的乙醇溶液，搅拌溶解20～40分钟，然后抽滤，分别收集滤液和滤渣。收集的滤液，用于下一步进行超滤。对于滤渣，因含有大量的多糖，经干燥后用作食用菌的发酵添加剂。

(2)超滤分离

第(1)步完成之后，先将第(1)步收集的滤液泵入超滤器中，用截留分子量为3000Da的超滤膜，在0.1～0.3MPa下进行超滤分离，小分子量的L-辛弗林等透过超滤膜，大分子的杂蛋白不能透过超滤膜而留在截留液中，分别收集滤过液及截留液。对于截留液，主要含有杂蛋白，经干燥后用作食用菌的发酵添加剂；对于滤过液，即为L-辛弗林萃取原液，用于下步反胶束萃取L-辛弗林。

(3)反胶束萃取

①P204反胶束溶液的制备

在第(2)步完成之后，以P204为萃取剂，正辛醇为稀释剂，先在P204萃取剂中，加入正辛醇稀释剂，搅拌下混合溶解，待形成P204的摩尔浓度为0.08～0.12mol/L溶液后，再加入蒸馏水，进行搅拌溶解，而形成透明均匀的P204反胶束溶液。密封保存，备用。其蒸馏水∶P204的摩尔比为1∶0.05～0.2。

②反胶束萃取

第(3)-①步完成后，按第(3)-①步制备出的P204反胶束溶液∶第(2)步制备出的L-辛弗林萃取原液的体积比为1∶1～3的比例，在萃取器中，加入L-辛弗林萃取原液和P204反胶束溶液，控制水相的pH值为5.5～7.0，在搅拌下进行萃取，萃取时间为5～20分钟，再将萃取后的混合液置于分液器中进行分离，分别收集下层萃余液和上层萃取有L-辛弗林的P204反胶束溶液。然后在收集的下层萃余液中，再加入P204反胶束溶液，其P204反胶束溶液∶下层萃余液的体积比为1∶1～3，并控制水相的pH值为5.5～7.0，再次进行萃取分离，再分别收集下层萃余液和上层萃取有L-辛弗林的P204反胶束溶液，如此重复萃取2～3次。最后合并各次收集的上层萃取有L-辛弗林的P204反胶束溶液；弃最后收集的下层萃余液。

(4)反萃取L-辛弗林

第(3)步完成后，将第(3)-②步最后合并收集的上层萃取有L-辛弗林的P204反胶束溶液，转移至另一萃取器中，加入2～3倍体积的蒸馏水，其中氯化钾的摩尔浓度为0.5～0.7mol/L，控制水相的pH值为10.5～11.5，进行搅拌反萃取10～20分钟，再在分液器中进行分离，并分别收集下层反萃取溶液和上层P204反胶束溶液。对收集的上层P204反胶束溶液，再加入2～3倍体积的蒸馏水，其中氯化钾的摩尔浓度为0.5～0.7mol/L，并控制水相的pH值为10.5～11.5，再进行反萃取分离，再分别收集下层反萃取溶液和上层P204反胶束溶液。如此反复萃取2～3次。最后合并各次收集的下层反萃取溶液，在旋转蒸发仪中，在温度为60～80℃、真空度为0.06～0.08Mpa的条件下，进行真空浓缩，就制备出L-辛弗林浓缩液。对最后收集的上层P204反胶束溶液，可再生利用。

(5)制备L-辛弗林冻干粉

第(4)步完成后，先将第(4)步制备出的L-辛弗林浓缩液置入截留分子量为100Da的透析袋中，用蒸馏水透析24～36小时，收集透析袋内的L-辛弗林透析液。然后将收集的L-辛弗林透析液置于冷冻干燥机中，在25～45Pa真空度、-50～-60℃温度下，进行冷冻干燥24～36h，就制备出纯度为90.0～93.5％的L-辛弗林冻干粉。

(6)反胶束溶液的再生

第(5)步完成后，对第(4)步最后收集的上层P204反胶束溶液，因水量及杂质过多而浑浊，在其中加入干燥剂(如分子筛、氯化钙等干燥剂)，静置1～2天后收集上清液，即为反胶束再生液，可再次使用。

本发明采用上述技术方案后，主要有以下效果：

1、本发明方法在常温下能有效除去枳实中的多糖、杂蛋白等杂质，纯化效率高，L-辛弗林的纯度高，达93.5％，又能降低生产成本。

2、本发明在生产过程中，脱除的多糖、杂蛋白经干燥后用作食用菌的发酵添加剂，不排放。这不但有利于环境保护，还降低生产成本并充分利用资源。

3、本发明在生产过程中，主要使用抽滤、超滤及萃取器等简单设备，不涉及昂贵的设备及仪器，因而生产设备简单，操作简便且易于控制，并且生产安全又降低生产成本。

4、本发明在生产过程中，主要使用乙醇、蒸馏水等无毒物质。这不但在生产过程中安全、无污染，无“三废”排放，还进一步降低生产成本。

本发明方法是节能减排、安全生产且成本低，便于推广应用的理想的方法。采用本发明方法制备出的L-辛弗林产品，可广泛应用于医药、食品、饮料、保健品行业中。有加速新陈代谢、有效预防能量过剩而实现减肥，且无副作用；有逐风理气、温胃促进食欲、消除消化道系统不适；也有轻微兴奋、灭菌等功用。

四、具体实施方式

下面结合具体实施方式，进一步说明本发明。

实施例1

一种萃取分离L-辛弗林的方法，具体方法步骤如下：

(1)醇溶及抽滤

以市售枳实为原料，以60％的乙醇溶液为溶剂，按枳实的质量(g)∶60％的乙醇溶液体积(mL)之比为1∶9的比例，在枳实中加入体积分数为60％的乙醇溶液，搅拌溶解20分钟，然后抽滤，分别收集滤液和滤渣。收集的滤液，用于下一步进行超滤。对于滤渣，因含有大量的多糖，经干燥后用作食用菌的发酵添加剂。

(2)超滤分离

第(1)步完成之后，先将第(1)步收集的滤液泵入超滤器中，用截留分子量为3000Da的超滤膜，在0.1MPa下进行超滤分离，小分子量的L-辛弗林等透过超滤膜，大分子的杂蛋白不能透过超滤膜而留在截留液中，分别收集滤过液及截留液。对于截留液，主要含有杂蛋白，经干燥后用作食用菌的发酵添加剂；对于滤过液，即为L-辛弗林萃取原液，用于下步反胶束萃取L-辛弗林。

(3)反胶束萃取

①P204反胶束溶液的制备

第(2)步完成之后，以P204为萃取剂，正辛醇为稀释剂，先在P204萃取剂中，加入正辛醇稀释剂，搅拌下混合溶解，待形成P204的摩尔浓度为0.08mo1/L溶液后，再加入蒸馏水，进行搅拌溶解，而形成透明均匀的P204反胶束溶液。密封保存，备用。其蒸馏水∶P204的摩尔比为1∶0.2。

②反胶束萃取

第(3)-①步完成后，按第(3)-①步制备出的P204反胶束溶液∶第(2)步制备出的L-辛弗林萃取原液的体积比为1∶1的比例，在萃取器中，加入L-辛弗林萃取原液和P204反胶束溶液，控制水相的pH值为5.5，在搅拌下进行萃取，萃取时间为5分钟，再将萃取后的混合液置于分液器中进行分离，分别收集下层萃余液和上层萃取有L-辛弗林的P204反胶束溶液。然后在收集的下层萃余液中，再加入P204反胶束溶液，其P204反胶束溶液∶下层萃余液的体积比为1∶1，并控制水相的pH值为5.5，再次进行萃取分离，再分别收集下层萃余液和上层萃取有L-辛弗林的P204反胶束溶液，如此重复萃取2次。最后合并各次收集的上层萃取有L-辛弗林的P204反胶束溶液；弃最后收集的下层萃余液。

(4)反萃取L-辛弗林

第(3)步完成后，将第(3)-②步最后合并收集的上层萃取有L-辛弗林的P204反胶束溶液，转移至另一萃取器中，加入2倍体积的蒸馏水，其中氯化钾的摩尔浓度为0.5mol/L，控制水相的pH值为11.5，进行搅拌反萃取10分钟，再在分液器中进行分离，并分别收集下层反萃取溶液和上层P204反胶束溶液。对收集的上层P204反胶束溶液，再加入2倍体积的蒸馏水，其中氯化钾的摩尔浓度为0.5mol/L，并控制水相的pH值为11.5，再进行反萃取分离，再分别收集下层反萃取溶液和上层P204反胶束溶液。如此反复萃取2次。最后合并各次收集的下层反萃取溶液，在旋转蒸发仪中，在温度为60℃、真空度为0.06Mpa的条件下，进行真空浓缩，就制备出L-辛弗林浓缩液。对最后收集的上层P204反胶束溶液，用于第(6)步反胶束溶液的再生利用。

(5)制备L-辛弗林冻干粉

第(4)步完成后，先将第(4)步制备出的L-辛弗林浓缩液置入截留分子量为100Da的透析袋中，用蒸馏水透析24小时，收集透析袋内的L-辛弗林透析液。然后将收集的L-辛弗林透析液置于冷冻干燥机中，在25Pa真空度、-50℃温度下，进行冷冻干燥24h，就制备出纯度为90.0％的L-辛弗林冻干粉。

(6)反胶束溶液的再生

第(5)步完成后，对第(4)步最后所收集的上层P204反胶束溶液，因水量及杂质过多而浑浊，在其中加入干燥剂(如分子筛、氯化钙等干燥剂)，静置1天后收集上清液，即为反胶束再生液，可再次使用。

实施例2

一种萃取分离L-辛弗林的方法，具体方法步骤如下：

(1)醇溶及抽滤

同实施例1，其中：枳实的质量(g)∶60％的乙醇溶液体积(mL)之比为1∶9的比例，搅拌溶解30分钟。

(2)超滤分离

同实施例1，其中：对第(1)步收集的滤液，在0.2MPa下进行超滤分离。

(3)反胶束萃取

①P204反胶束溶液的制备

同实施例1，其中：P204的摩尔浓度为0.12mol/L。加入的蒸馏水∶P204的摩尔比为1∶0.05。

②反胶束萃取

同实施例1，其中：P204反胶束溶液∶第(2)步制备出的L-辛弗林萃取原液的体积比为1∶2，水相的pH值为7.0，萃取时间为20分钟。对收集的下层萃余液中，再加入的P204反胶束溶液∶下层萃余液的体积比为1∶2，水相的pH值为7.0。如此重复萃取2次。

(4)反萃取L-辛弗林

同实施例1，其中：加入2.5倍体积的蒸馏水，其中氯化钾的摩尔浓度为0.7mol/L，控制水相的pH值为10.5，进行搅拌反萃取15分钟。对收集的上层P204反胶束溶液，再加入2.5倍体积的蒸馏水，其中氯化钾的摩尔浓度为0.7mol/L，并控制水相的pH值为10.5，如此反复萃取2次。对置于旋转蒸发仪中的下层反萃取溶液，在温度为70℃、真空度为0.07Mpa的条件下，进行真空浓缩。

(5)制备L-辛弗林冻干粉

同实施例1，其中：用蒸馏水透析30小时。对置于冷冻干燥机中的L-辛弗林透析液，在35Pa真空度、-55℃温度下，进行冷冻干燥30h，就制备出纯度为91.2％的L-辛弗林冻干粉。

(6)反胶束溶液的再生

同实施例1，其中：静置2天后收集上清液。

实施例3

一种萃取分离L-辛弗林的方法，具体方法步骤如下：

(1)醇溶及抽滤

同实施例1，其中：枳实的质量(g)∶60％的乙醇溶液体积(mL)之比为1∶10的比例，搅拌溶解40分钟。

(2)超滤分离

同实施例1，其中：对第(1)步收集的滤液，在0.3MPa下进行超滤分离。

(3)反胶束萃取

①反胶束溶液的制备

同实施例1，其中：P204的摩尔浓度为0.10mol/L。加入的蒸馏水∶P204萃取剂的摩尔比为1∶0.07。

②反胶束萃取

同实施例1，其中：P204反胶束溶液∶第(2)步制备出的L-辛弗林萃取原液的体积比为1∶3，水相的pH值为6.5，萃取时间为10分钟。对收集的下层萃余液中，再加入的P204反胶束溶液∶下层萃余液的体积比为1∶3，水相的pH值为6.5。如此重复萃取3次。

(4)反萃取L-辛弗林

同实施例1，其中：加入3倍体积的蒸馏水，其中氯化钾的摩尔浓度为0.6mol/L，控制水相的pH值为11.0，进行搅拌反萃取20分钟。对收集的上层P204反胶束溶液，再加入3倍体积的蒸馏水，其中氯化钾的摩尔浓度为0.6mol/L，并控制水相的pH值为11.0，如此反复萃取3次。对置于旋转蒸发仪中的下层溶液，在温度为80℃、真空度为0.08Mpa的条件下，进行真空浓缩。

(5)制备L-辛弗林冻干粉

同实施例1，其中：用蒸馏水透析36小时。对置于冷冻干燥机中的L-辛弗林透析液，在45Pa真空度、-60℃温度下，进行冷冻干燥36h，就制备出纯度为93.5％的L-辛弗林冻干粉。

(6)反胶束溶液的再生

同实施例1，其中：静置2天后收集上清液。

Claims (4)

1.一种萃取分离L-辛弗林的方法，其特征在于具体方法步骤如下：

(1)醇溶及抽滤

以市售枳实为原料，以60％的乙醇溶液为溶剂，按枳实的质量∶60％的乙醇溶液体积之比为1∶9～10的比例，在枳实中加入体积分数为60％的乙醇溶液，搅拌溶解20～40分钟，然后抽滤，分别收集滤液和滤渣，对滤渣进行干燥；

(2)超滤分离

第(1)步完成之后，先将第(1)步收集的滤液泵入超滤器中，用截留分子量为3000Da的超滤膜，在0.1～0.3MPa下进行超滤分离，分别收集滤过液及截留液，对于截留液，进行干燥；

(3)反胶束萃取

①P204反胶束溶液的制备

第(2)步完成之后，以P204为萃取剂，正辛醇为稀释剂，先在P204萃取剂中，加入正辛醇稀释剂，搅拌下混合溶解，待形成P204的摩尔浓度为0.08～0.12mol/L溶液后，再加入蒸馏水，进行搅拌溶解，其蒸馏水∶P204的摩尔比为1∶0.05～0.2；

②反胶束萃取

第(3)-①步完成后，按第(3)-①步制备出的P204反胶束溶液∶第(2)步制备出的L-辛弗林萃取原液的体积比为1∶1～3的比例，在萃取器中，加入L-辛弗林萃取原液和P204反胶束溶液，控制水相的pH值为5.5～7.0，在搅拌下进行萃取，萃取时间为5～20分钟，再将萃取后的混合液置于分液器中进行分离，分别收集下层萃余液和上层萃取有L-辛弗林的P204反胶束溶液，然后在收集的下层萃余液中，再加入P204反胶束溶液，其P204反胶束溶液∶下层萃余液的体积比为1∶1～3，并控制水相的pH值为5.5～7.0，再次进行萃取分离，再分别收集下层萃余液和上层萃取有L-辛弗林的P204反胶束溶液，如此重复萃取2～3次，最后合并各次收集的上层萃取有L-辛弗林的P204反胶束溶液，弃最后收集的下层萃余液；

(4)反萃取L-辛弗林

第(3)步完成后，将第(3)-②步最后合并收集的上层萃取有L-辛弗林的P204反胶束溶液，转移至另一萃取器中，加入2～3倍体积的蒸馏水，其中氯化钾的摩尔浓度为0.5～0.7mol/L，控制水相的pH值为10.5～11.5，进行搅拌反萃取10～20分钟，再在分液器中进行分离，并分别收集下层溶液和上层P204反胶束溶液，对收集的上层P204反胶束溶液，再加入2～3倍体积的蒸馏水，其中氯化钾的摩尔浓度为0.5～0.7mol/L，并控制水相的pH值为10.5～11.5，再进行反萃取分离，再分别收集下层溶液和上层P204反胶束溶液，如此反复萃取2～3次，最后合并各次收集的下层溶液，在旋转蒸发仪中，在温度为60～80℃、真空度为0.06～0.08Mpa的条件下，进行真空浓缩；

(5)制备L-辛弗林冻干粉

第(4)步完成后，先将第(4)步制备出的L-辛弗林浓缩液置入截留分子量为100Da的透析袋中，用蒸馏水透析24～36小时，收集透析袋内的L-辛弗林透析液，然后将收集的L-辛弗林透析液置于冷冻干燥机中，在25～45Pa真空度、-50～-60℃温度下，进行冷冻干燥24～36h；

(6)反胶束溶液的再生

第(5)步完成后，对第(4)步最后所收集的上层P204反胶束溶液中加入干燥剂(如分子筛、氯化钙等干燥剂)，静置1～2天后收集上清液。

2.按照权利要求1所述的一种萃取分离L-辛弗林的方法，其特征在于具体步骤中：

第(1)步中，枳实的质量∶60％的乙醇溶液体积之比为1∶9，搅拌溶解20分钟；

第(2)步中，在0.1MPa下进行超滤分离；

第(3)-①步中，P204的摩尔浓度为0.08mol/L，加入的蒸馏水∶P204的摩尔比为1∶0.2；

第(3)-②步中，P204反胶束溶液∶第(2)步制备出的L-辛弗林萃取原液的体积比为1∶1，水相的pH值为5.5，萃取时间为5分钟，对收集的下层萃余液中，再加入的P204反胶束溶液∶下层萃余液的体积比为1∶1，水相的pH值为5.5，如此重复萃取2次；

第(4)步中，加入2倍体积的蒸馏水，其中氯化钾的摩尔浓度为0.5mol/L，控制水相的pH值为11.5，进行搅拌反萃取10分钟，对收集的上层P204反胶束溶液，再加入2倍体积的蒸馏水，其中氯化钾的摩尔浓度为0.5mol/L，并控制水相的pH值为11.5，如此反复萃取2次，对置于旋转蒸发仪中的下层溶液，在温度为60℃、真空度为0.06Mpa的条件下，进行真空浓缩；

第(5)步中，用蒸馏水透析24小时，对置于冷冻干燥机中的L-辛弗林透析液，在25Pa真空度、-50℃温度下，进行冷冻干燥24h；

第(6)步中，静置1天后收集上清液。

3.按照权利要求1所述的一种萃取分离L-辛弗林的方法，其特征在于具体步骤中：

第(1)步中，枳实的质量∶60％的乙醇溶液体积之比为1∶9，搅拌溶解30分钟；

第(2)步中，在0.2MPa下进行超滤分离；

第(3)-①步中，P204的摩尔浓度为0.12mol/L，加入的蒸馏水∶P204的摩尔比为1∶0.05；

第(3)-②步中，P204反胶束溶液∶第(2)步制备出的-辛弗林萃取原液的体积比为1∶2，水相的pH值为7.0，萃取时间为20分钟，对收集的下层萃余液中，再加入的P204反胶束溶液∶下层萃余液的体积比为1∶2，水相的pH值为7.0，如此重复萃取2次；

第(4)步中，加入2.5倍体积的蒸馏水，其中氯化钾的摩尔浓度为0.7mol/L，控制水相的pH值为10.5，进行搅拌反萃取15分钟，对收集的上层P204反胶束溶液，再加入2.5倍体积的蒸馏水，其中氯化钾的摩尔浓度为0.7mol/L，并控制水相的pH值为10.5，如此反复萃取2次，对置于旋转蒸发仪中的下层溶液，在温度为70℃、真空度为0.07Mpa的条件下，进行真空浓缩；

第(5)步中，用蒸馏水透析30小时，对置于冷冻干燥机中的L-辛弗林透析液，在35Pa真空度、-55℃温度下，进行冷冻干燥30h；

第(6)步中，静置2天后收集上清液。

4.按照权利要求1所述的一种富集银杏黄酮化合物的方法，其特征在于具体步骤如下：

第(1)步中，枳实的质量∶60％的乙醇溶液体积之比为1∶10，搅拌溶解40分钟；

第(2)步中，在0.3MPa下进行超滤分离；

第(3)-①步中，P204的摩尔浓度为0.10mol/L，加入的蒸馏水∶P204的摩尔比为1∶0.07；

第(3)-②步中，P204反胶束溶液∶第(2)步制备出的L-辛弗林萃取原液的体积比为1∶3，水相的pH值为6.5，萃取时间为10分钟，对收集的下层萃余液中，再加入的P204反胶束溶液∶下层萃余液的体积比为1∶3，水相的pH值为6.5，如此重复萃取3次；

第(4)步中，加入3倍体积的蒸馏水，其中氯化钾的摩尔浓度为0.6mol/L，控制水相的pH值为11.0，进行搅拌反萃取20分钟，对收集的上层P204反胶束溶液，再加入3倍体积的蒸馏水，其中氯化钾的摩尔浓度为0.6mol/L，并控制水相的pH值为11.0，如此反复萃取3次，对置于旋转蒸发仪中的下层溶液，在温度为80℃、真空度为0.08Mpa的条件下，进行真空浓缩；

第(5)步中，用蒸馏水透析36小时，对置于冷冻干燥机中的L-辛弗林透析液，在45Pa真空度、-60℃温度下，进行冷冻干燥36h；

第(6)步中，静置2天后收集上清液。