CN101779791A - 一种具有保健功能的组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种具有保健功能的组合物，它是由下述重量配比的原料而备而成的制剂：海马1-5份、文昌鸡5-30份、枸杞1-10份。本发明还提供了该药物组合物的制备方法和用途。本发明将养殖海马与海南本地所产的文昌鸡结合，通过酶水解制得口服液，服用方便；两者都富含蛋白质类成分和多种营养成分不饱和脂肪酸，具有补肝益肾、壮阳安神、活血祛瘀、舒筋活络、止喘平喘、益精明目等功用，是良好的补益佳品。

Description

一种具有保健功能的组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种具有保健功能的组合物及其制备方法，属食品领域。

背景技术

海马是我国传统名贵海洋中药材，具有温肾壮阳，散结消肿的作用。现代研究海马具有较高的营养和药用价值以及多种化学活性成分，蛋白质含量高达70％以上，还有脂肪酸及酯类成分，甾体类化合物，磷脂类成分及多种无机元素等，认为海马具有抗衰老药理作用。鸡为传统的补品，鸡肉富含的蛋白质，比其他肉类要多，而脂肪的含量则比其他肉类要少，是心脑血管病人的理想食品，祖国医学认为，鸡肉有湿中益气补虚填精，益五脏、健脾胃，治血脉及强筋骨之功效。现代研究表明鸡精口服液中含有丰富的营养成分，含有多种氨基酸、蛋白质和维生素等，其作用广泛，研究发现鸡精有助于食物中铁质的吸收和利用、还具有抗压的效果、有助于控制糖尿病人的血糖含量、可提高新陈代谢以及具有补血作用。文昌鸡是一种优质育肥鸡，因产于海南省文昌县而得名。文昌鸡的特点是个体不大，重约1.5千克左右，毛色鲜艳，翅短脚矮，身圆股平，皮薄滑爽，肉质肥美，是海南传统四大名菜之一，素以皮薄而酥、肉嫩骨软，“色、味、形”俱佳而驰名中外。

目前尚没有将海马、文昌鸡配伍制备成保健品或药品的相关文献报道。

发明内容

本发明的技术方案是提供了一种具有保健功能的组合物，本发明的另一技术方案是提供了该药物组合物的制备方法。

本发明提供了一种具有保健功能的组合物，它是由下述重量配比的原料制备而成的制剂：

海马1-5份、文昌鸡5-30份、枸杞1-10份。

进一步优选地，原料的重量配比为：

海马1份、文昌鸡20份、枸杞1份。

其中，它是由以下步骤制备而成的制剂：

(1)取文昌鸡，去皮、头、肥肉、爪及内脏；称重，置高压锅内加6-10倍量蒸馏水和按鸡肉重量计5％的枸杞，加压煎煮，过滤，得鸡汁，置冰箱冷藏，去油，加热浓缩为约1∶4的浓缩液；处理滤渣，将鸡肉和骨头分离，鸡肉捣碎备用；

(2)取海马粉，加8-12倍量蒸馏水煎煮，过滤，获取海马汁和海马渣；

(3)取海马渣和b步骤的捣碎鸡肉按1∶(5-30)比例混合，加入2-6倍量蒸馏水，以物重计，加0.8％蛋白酶或脂肪酶(酶活力80万μ/g)搅匀，用5％的氢氧化钙试液调pH6.0-10.0，在40-60℃水浴锅内水解3-8小时，取出，于80-100℃水浴灭酶，用滤布过滤，弃去滤渣，得酶解液①；

(4)将b步骤的鸡汁浓缩液和c步骤的海马汁按重量配比为(5-30)∶1比例混合得混合液②；

(5)将①和②两种溶液混合，加入药学上或保健品上可接受的辅料制备成常用的制剂，其中，所述的制剂是口服液、片剂、胶囊剂、丸剂或颗粒剂。

其中，步骤(3)所述的蛋白酶为动物蛋白水解酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶或纤维复合酶。进一步优选地，步骤(3)所述的蛋白酶为动物蛋白水解酶。

本发明还提供了一种制备所述的组合物的方法，包括如下步骤：

a、称取重量配比的原料：

海马1-5份、文昌鸡5-30份、枸杞1-10份；

b、取文昌鸡，去皮、头、肥肉、爪及内脏；称重，置高压锅内加6-10倍量蒸馏水和按鸡肉重量计5％的枸杞，加压煎煮，过滤，得鸡汁，置冰箱冷藏，去油，加热浓缩为约1∶4的浓缩液；处理滤渣，将鸡肉和骨头分离，用将鸡肉捣碎备用；

c、取海马粉，加8-12倍量蒸馏水煎煮，过滤，获取海马汁和海马渣；

d、取海马渣和b步骤的捣碎鸡肉按1∶(5-30)比例混合，加入2-6倍量蒸馏水，以物重计，加0.8％蛋白酶(酶活力80万μ/g)搅匀，用5％的氢氧化钙试液调pH6.0-10.0，在40-60℃水浴锅内水解3-8小时，取出，于80-100℃水浴灭酶，用滤布过滤，弃去滤渣，得酶解液①；

e、将b步骤的鸡汁浓缩液和c步骤的海马汁按重量配比为(5-30)∶1比例混合得混合液②；

f、将①和②两种溶液混合，加入0.2％的山梨酸钾和1.5％蜂蜜搅匀，置冰箱冷藏，过滤，灌装，置高压消毒器内加压灭菌，即得成品。

进一步优选地，该工艺包括如下步骤：

a、称取重量配比的原料：

海马1份、文昌鸡20份、枸杞1份；

b、取文昌鸡解冻，去皮、头、肥肉、爪及内脏；称重，置高压锅内加8倍量蒸馏水和按鸡肉重量计5％的枸杞，加压30分钟，过滤，得鸡汁，置冰箱冷藏，去油，加热浓缩为约1∶4的浓缩液；处理滤渣，将鸡肉和骨头分离，将鸡肉捣碎备用；

c、取海马粉，称重，置直身锅内，加10倍量蒸馏水，煮1小时，用滤布过滤，获取海马汁和海马渣；

d、取海马渣和鸡肉按1∶20比例混合，加4倍量蒸馏水，以物重计，加0.8％的动物蛋白水解酶、木瓜蛋白酶、脂肪酶、菠萝蛋白酶或纤维复合酶中的一种搅匀，用5％的氢氧化钙试液调pH7.0，在50℃水浴锅内水解5小时，取出，于100℃沸水浴灭酶5分钟，过滤，弃去滤渣，得酶解液①；

e、将鸡汁浓缩液和海马汁按原料20∶1比例混合得混合液②；

f、将①和②两种溶液混合，加入0.2％的山梨酸钾和1.5％蜂蜜搅匀，置冰箱冷藏，过滤，灌装，置高压消毒器内加压灭菌，即得成品。

进一步优选地，d步骤所述的蛋白酶为动物蛋白水解酶。

本发明提供了所述的组合物在制备具有激素样作用的药物或保健品中的用途。

本发明提供了所述的药物或保健品是对雌激素、雄激素缺乏症具有预防或/和治疗作用的药物或保健品。

本发明提供了所述的组合物在制备具有抗氧化、保肝作用的药物或保健品中的用途。

本发明提供了所述的组合物在制备具有止咳作用的药物或保健品中的用途。

本发明将养殖海马与海南本地所产的文昌鸡结合，通过酶水解制得口服液，服用方便；两者都富含蛋白质类成分和多种营养成分不饱和脂肪酸，具有补肝益肾、壮阳安神、活血祛瘀、舒筋活络、止喘平喘、益精明目等功用，是良好的补益佳品。

具体实施方式

本发明使用的蛋白酶和脂肪酶分别购自以下厂家：动物蛋白水解酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶购自南宁庞博生物工程有限公司；脂肪酶购自南宁东恒华道生物科技有限责任公司；纤维复合酶购自上海戴迪实业发展有限公司。

实施例1本发明海马鸡精的中间体的制备

取原料海马10g、文昌鸡200g、枸杞10g；

a、原料鸡处理(解冻，去皮、头、肥肉、爪及内脏)，称重，置高压锅内加8倍量蒸馏水和鸡肉重量的5％枸杞，加压30分钟，过滤，将鸡肉和骨头分离，将鸡肉捣碎备用，鸡汁置冰箱冷藏24小时，去油，加热浓缩为约1∶4的浓缩液；

b、取海马粉，称重，置直身锅内，加10倍量蒸馏水，煮1小时，用尼绒滤布过滤，海马汁和海马渣；

c、取海马渣和鸡肉按1∶20比例混合，加4倍量蒸馏水，以物重计，加0.8％动物蛋白水解酶搅匀，用5％的氢氧化钙试液调pH7.0，在50℃水浴锅内水解5小时，取出，调节水浴锅温度100℃灭酶5分钟，用滤布过滤，得酶解液①和滤渣。

d、将鸡汁浓缩液和海马汁按20∶1比例混合得混合液②；

e、将①和②两种溶液混合，即得。

实施例2本发明海马鸡精的中间体的制备

取原料海马50g、文昌鸡300g、枸杞100g；

a、原料鸡处理(解冻，去皮、头、肥肉、爪及内脏)，称重，置高压锅内加6倍量蒸馏水和鸡肉重量的5％枸杞，加压30分钟，过滤，将鸡肉和骨头分离，用捣碎机将鸡肉捣碎，鸡汁置冰箱冷藏24小时，去油，加热浓缩为约1∶4的浓缩液；

b、取海马粉，称重，置直身锅内，加8倍量蒸馏水，煮1小时，用尼绒滤布过滤，海马汁和海马渣；

c、取海马渣和鸡肉按1∶30比例混合，加2倍量蒸馏水，以物重计，加0.8％木瓜蛋白酶搅匀，用5％的氢氧化钙试液调pH10.0，在60℃水浴锅内水解8小时，取出，调节水浴锅温度100℃灭酶5分钟，用滤布过滤，得酶解液①和滤渣。

d、将鸡汁浓缩液和海马汁按30∶1比例混合得混合液②；

e、将①和②两种溶液混合，即得。

实施例3本发明海马鸡精的中间体的制备

取原料海马10g、文昌鸡50g、枸杞10g；

a、原料鸡处理(解冻，去皮、头、肥肉、爪及内脏)，称重，置高压锅内加10倍量蒸馏水和鸡肉重量的5％枸杞，加压30分钟，过滤，将鸡肉和骨头分离，用捣碎机将鸡肉捣碎，鸡汁置冰箱冷藏24小时，去油，加热浓缩为约1∶4的浓缩液；

b、取海马粉，称重，置直身锅内，加12倍量蒸馏水，煮1小时，用尼绒滤布过滤，海马汁和海马渣；

c、取海马渣和鸡肉按1∶5比例混合，加6倍量蒸馏水，以物重计，加0.8％木瓜蛋白酶搅匀，用5％的氢氧化钙试液调pH6.0，在40℃水浴锅内水解3小时，取出，调节水浴锅温度80℃灭酶5分钟，用滤布过滤，得酶解液①和滤渣。

d、将鸡汁浓缩液和海马汁按5∶1比例混合得混合液②；

e、将①和②两种溶液混合，即得。

实施例4本发明口服液的制备

将实施例1所得的中间体1000ml，加入蔗糖20g，精滤，用蒸馏水补充至1000ml，灌装，灭菌，即得。

实施例5本发明片剂的制备

将实施例2所得的中间体1000ml，浓缩成稠膏(相对密度约1.10，60℃测)，加入淀粉20g，混匀，制粒，干燥，整粒，加入硬酯酸镁0.5g，压片，即得普通片剂。

实施例6本发明胶囊剂的制备

将实施例3所得的中间体1000ml，浓缩成稠膏(相对密度约1.10，60℃测)，加入淀粉20g，混匀，制粒，干燥，整粒，装入硬胶囊中，即得胶囊剂。

实施例7本发明胶囊剂的制备

将实施例1所得的中间体1000ml，喷雾干燥成粉末，加入微晶纤维素10g，混匀，制粒，干燥，整粒，装入硬胶囊中，即得胶囊剂。

实施例8本发明颗粒剂的制备

将实施例1所得的中间体1000ml，浓缩成稠膏(相对密度约1.10，60℃测)，加入淀粉20g，蛋白糖2g混匀，制粒，干燥，整粒，即得颗粒剂。

实施例9本发明颗粒剂的制备

将实施例1所得的中间体1000ml，喷雾干燥成粉末，加入微晶纤维素10g，蛋白糖2g混匀，制粒，干燥，整粒，即得颗粒剂。

实施例10本发明丸剂的制备

将实施例1所得的中间体1000ml，浓缩成稠膏(相对密度约1.10，60℃测)，加入微粉硅胶10g，混合均匀，采用塑制法搓条、轧丸、整粒、干燥，制备成丸剂。

实施例11本发明凝胶膏剂的制备

将实施例1所得的中间体1000ml，加入溶胀的龟苓膏粉基质40g，加入2％的蔗糖，0.2％的山梨酸钾，充分混匀，煮沸灭菌，与上述溶液合并混匀，加水至全量，趁热装入容器中，即得凝胶膏剂。

实施例12本发明乳剂的制备

将实施例1所得的中间体1000ml浓缩至约500ml，加入鲜牛奶500ml及混合糖浆(含蔗糖、蔗糖酯、单甘酯、EDTA-2Na、CMC、明胶)在容器中搅拌混合，加热至约60℃，用匀浆机匀浆。匀浆后于85℃保温5分钟，趁热灌装，封口，灭菌即可。

实施例13本发明海马鸡精制备过程中酶解工艺中酶的选择试验

选用动物蛋白水解酶、木瓜蛋白酶、脂肪酶、菠萝蛋白酶、纤维复合酶，用量均为0.8％，在其它条件不变的情况下，进行酶解。取酶解液进行检测，评价指标为蛋白水解度、总N的含量。

1、检测方法：

(1)蛋白水解度的评价：采用中性甲醛滴定法。

取饮品液或酶解液5ml于小烧杯中，加入60ml熬制去CO₂水，磁力搅拌并用精密pH指示其pH值。先用0.05mol/L标准NaOH滴定pH＝8.2时，加入已中和好的甲醛溶液(0.05mol/L NaOH溶液预先中和)20ml，记录将其pH值滴至9.2时所消耗的0.05mol/L NaOH溶液的体积。然后计算其-NH₂基的含量(μmol/mL)。所得-NH₂基的含量除以饮品液中总蛋白质含量，即为水解度。

(2)总N的含量测定：按照《中国药典2005年版(一部)》氮测定法(附录IX L)第二法(半微量法)测定。

取供试品适量(约相当于含氮量1.0～2.0mg)，精密称定，置干燥的30～50ml凯氏烧瓶中，加硫酸钾(或无水硫酸钠)0.3g与30％硫酸铜溶液5滴，再沿瓶壁滴加硫酸2.0ml；在凯氏烧瓶口放一小漏斗，并使烧瓶成45°斜置，用小火缓缓加热使溶液保持在沸点以下，等泡沸停止，逐步加大火力，沸腾至溶液成澄明的绿色后，除另有规定外，继续加热10分钟，放冷，加水2ml。

取2％硼酸溶液10ml，置100ml锥形瓶中，加甲基红—溴甲酚绿混合指示液5滴，将冷凝管尖端插入液面下。然后，将凯氏烧瓶中内容物经由D漏斗转入C蒸馏瓶中，用水少量淋洗凯氏烧瓶及漏斗数次，再加入40％氢氧化钠溶液10ml，用少量水再洗漏斗数次，关G夹，加热A瓶进行蒸气蒸馏，至硼酸液开始由酒红色变为蓝绿色时起，继续蒸馏约10分钟后，将冷凝管尖端提出液面，使蒸气继续冲洗约1分钟，用水淋洗尖端后停止蒸馏。

馏出液用硫酸滴定液(0.005mol/L)滴定至溶液由蓝绿色变为灰紫色，并将滴定的结果用空白试验(空白和供试品所得馏出液的容积应基本相同，约70～75ml)校正。每1ml硫酸滴定液(0.005mol/L)相当于0.1401mg的N。

取用的供试品如在0.1g以上时，应适当增加硫酸的用量，使消解作用完全，并相应地增加40％氢氧化钠溶液的用量。

2、检测结果：

表1几种酶对酶解结果的影响

结果表明，从表可知，动物蛋白水解酶的酶解效果较好，因此优选动物蛋白水解酶作为酶解用酶。

以下通过口感对比试验证明本发明的有益效果。

试验例1海马鸡精口服液口感实验

选取市售两种鸡精口服液，与海马鸡精口服液(由实施例4制备)进行口感比较。实验参与人员45人，采用双盲法。

表2海马鸡精口服液及市售两种鸡精的口感比较

注：“-”表示口感较差；“+”表示口感一般；“++”表示口感较好。

结果表明，海马鸡精口服液口感较好。

以下通过具体功效学试验证明本发明的有益效果。

试验例2海马鸡精口服液功能评价

实验材料及药品：

人参北芪片(哈药集团世一堂制药厂)；17β-雌二醇(上海亚培生物科技有限公司)；醋酸氢化可得松(浙江仙琚制药股份有限公司)，他莫昔芬(北京恒业中远化工有限公司)；己烯雌酚(合肥久联制药有限公司)，DMEM培养基(GIBCO Invitrogen Corporation)，小牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)，青链酶素(华北制药股份有限公司)，胰酶(华美生物工程公司)；MTT(美国Sigma公司)；刀豆蛋白(上海博升生物科技有限公司)；MCF-7细胞(中国典型培养物保藏中心)；急支糖浆(太极集团涪陵制药厂)；海马鸡精口服液(海南龙盛生物科技发展有限公司)，海马鸡精口服液经冷冻干燥，干燥粉供体外实验用。体内实验用海马鸡精口服液直接灌胃。

实验仪器

培养箱(宁波莱福科技有限公司)，CO₂培养箱(SHELVJB)；摇床(中国哈尔滨市东联电子技术开发有限公司)；离心机(上海安亭科学仪器厂)；冻干机(LABCONCO)；酶标仪(TYPE1500-458)

一、性激素样作用

1、雌激素作用

取对数生长期MCF-7细胞(人乳腺癌细胞，对雌激素敏感)，用DMEM培养基(含10％小牛血清，青莲酶素)培养，细胞用0.25％的胰酶消化，调整细胞浓度至1×10⁴个/ml，接种于96孔板，培养24小时让其贴壁。然后将培养基换成无酚红的培养基，然后加入样品溶液，海马鸡精口服液设3个浓度(50，20，10μg/ml)，每个浓度设六个复孔。阳性对照：E2(17β-雌二醇)设2个浓度(10^-9，10^-10M)，在培养箱中37℃、5％CO₂培养4天。用MTT法测定细胞增殖，吸出培养基，加入MTT培养4h，吸出MTT加入DMSO在4920nm测定OD值。

表3.海马鸡精对MCF-7细胞增殖作用的影响

与空白对照组相比^*P＜0.05。

结果显示，海马鸡精具有雌激素样作用，与空白对照组相比差异有显著性，20μg/ml海马鸡精的作用与10^-10M的17β-雌二醇作用相当。

2、抗雌激素作用

方法与雌激素作用相同，在加入药物的同时加入雌二醇共培养，用MTT法测定细胞增殖。

表4海马鸡精17β-雌二醇条件下对MCF-7细胞增殖作用的影响

与模型组相比^**P＜0.01

结果显示，海马鸡精高剂量时对雌激素有一定拮抗作用，低剂量时与雌激素有协同作用，能增强雌激素对乳腺细胞的增殖作用。

3、酵母双杂交

转基因酵母接种在培养皿上，放入培养箱30℃培养，无菌取10ml SD培养基加入L形试管，接种培养皿中生长良好的酵母进行前培养，放入摇床30℃过夜，转化生长。然后加药培养：于1.5mlEP管中加入200μl新SD培养基，再加入50μl前培养液，加入药物2.5μl(3个浓度)继续在培养在摇床上30℃培养4h。取150μl放入96孔板，于595nm(或600nm)测OD值作为细胞密度。EP管放入离心机，12000rpm，离心5min。小心吸去上清液，加入200μlZ缓冲液中，振匀，37℃温育15min使酵母破壁。取出，吸干外表水，然后加入40μl 4mg/ml浓度的2-硝基苯β-D-半乳糖苷开始酶促反应。30min后取出，吸干外表水，加入100μl1MNa₂CO₃停止反应。取150μl加入96孔板中测定酶活性。以酶活表示药物与雌激素受体α、β的结合能力。

表5酵母双杂交系统中海马鸡精对β-半乳糖苷酶的诱导作用的影响(α-受体)

与空白组相比^**P＜0.01。

结果显示，海马鸡精内在成分具有与雌激素α-受体结合的能力。表6酵母双杂交系统中海马鸡精对β-半乳糖苷酶的诱导作用的影响(β-受体)

与空白组相比^**P＜0.01。

结果显示，海马鸡精内在成分具有与雌激素β受体结合的能力。能通过与雌激素受体结合而产生雌激素作用。

4、对小鼠子宫系数及血清雌激素含量的影响

取昆明雌性幼鼠50只，分为五组，模型组给予己烯雌酚，空白对照给予生理盐水，适应性饲养两天后开始给药六天后处理，眼球取血，分离血清，测雌激素含量，剥离子宫并称重，计算子宫系数。

表7海马鸡精对小鼠子宫重量及血清中雌激素含量的影响

与空白组相比^*P＜0.05，^**P＜0.01。

结果显示，海马鸡精能增加小鼠子宫重量，减少血清中雌激素含量，具有雌激素作用。

5、对肾上腺皮质激素型阳虚模型的影响

取昆明种雄性小鼠，体质量25-35g，随机分为6组，每组20只，其中，正常组不作任何处理；其他4组，以醋酸氢化可得松25mg/kg，连续注射8天，造成阳虚模型，注射后0.5h，对照组灌胃给予饮用水0.4mL/只，小、中、大剂量组分别灌胃给予海马鸡精口服液、以人参片为阳性对照，连续8d，每天测定小鼠体重；第9天，取一半小鼠取血，测血常规(WBC、RBC)，断头处死小鼠，取胸腺、脾脏、肾上腺称重，计算脏器指数(脏器重量/体重*100)。取一半小鼠测游泳存活时间

表8海马鸡精对阳虚小鼠白细胞、红细胞和游泳存活时间的影响

与模型相比^*P＜0.05，^**P＜0.01。

表9.海马鸡精对阳虚小鼠胸腺、脾脏、肾上腺重量的影响

与模型组相比^*P＜0.05，^**P＜0.01。

结果显示，海马鸡精能增加阳虚小鼠白细胞、红细胞数量，延长游泳存活时间，增加胸腺、脾脏及肾上腺指数，具有治疗阳虚作用。

试验例3本发明海马鸡精的抗氧化活性

1、体外抗氧化活性

1.1、DPPH法检测样品对DPPH自由基的清除的能力

取DPPH母液稀释成1.0×10^-5mol/L、5.0×10^-5mol/L、1.0×10^-4mol/L、1.5×10^-4mol/L、2.0×10^-4mol/L不同浓度做标准曲线。用软件OriginPro 7.5分析作线性回归方程式：Y＝0.44727X-0.40211，R＝0.9992。

吸取2mLDPPH储备液，用无水乙醇定容于100mL容量瓶中摇匀待测。利用DPPH溶液的特征紫红色团的吸收，用紫外-可见分光光度法测定加抗氧剂提取液后在波长517nm处吸光值下降程度表示其对有机自由基消除能力，按表10加反应液。

表10实验操作加样表

                                        

A₀    1mLDPPH·溶液+1mL无水乙醇

                                        

A_i    1mLDPPH·溶液+1mL样品溶液

A_j    1mL样品溶液+1mL无水乙醇

                                        

用力摇匀，将Ai所表示的样品在室温下静置30min后，加入比色皿中进行吸光度的测定，测出A0、Ai、Aj所表示样品的吸光度值，清除率按公式(1)计算。SA(％)＝1-(Ai-Aj)/A0×100(1)

DPPH是一种稳定的自由基，其结构中含有3个苯环，1个N原子上有1个孤对电子，其乙醇溶液呈紫色，在517nm附近有强吸收，当DPPH溶液中加入自由基清除剂时，孤对电子被配对，颜色由紫色向黄色变化，在517nm处的吸光度变小，而吸光度变小的程度与自由基被清除的程度呈定量关系，因而可用分光光度法进行定量分析。

表11海马鸡精对DPPH自由基的清除作用(X±S，n＝5)

海马鸡精对DPPH自由基的清除作用见表11，海马鸡精对DPPH自由基具有很强的清除作用，且呈浓度依赖性。相对于维生素C(EC50为277.85μg/ml)海马鸡精EC50为330.86μg/ml，约是维生素的1.2倍。

2.2、二氧化钛光催化反应体系检测样品清除羟基自由基的能力

利用二氧化钛光催化反应体系检测样品抑制羟基自由基产生的能力。在70mL圆柱形硬质玻璃瓶中依次加入一定体积5.0×10-4mol/L SRB溶液，5mg TiO2，用HClO4调节pH为2.5，定容至50mL，置于暗室搅拌30min达到吸附平衡。在紫外光照射下计时并开始反应，于不同时间间隔取样，离心分离，紫外可见分光光度计扫描上清液吸收曲线，在λ565nm波长处测定吸光度值Ai。在相同条件下，测定空白试样A0(无TiO2)，计算ΔA＝A0-Ai。

在该体系中加入适量的1.0×10-3mol/L样品，其它条件相同，测定在12min的AS值，测定不加清除剂提取物时的AOS计算。ΔAS＝AOS-AS，清除率D(％)＝ΔAS/ΔA×100＝(AOS-AS)/(A0-Ai)×100。

表12海马鸡精对羟基自由基的清除作用(X±S，n＝5)

海马鸡精对羟基自由基的清除作用见表12，海马鸡精对DPPH自由基具有一定的清除作用，且呈浓度依赖性。相对于维生素C(EC50为226.25μg/ml)海马鸡精EC50为271.64μg/ml，约是维生素的1.2倍。

2、体内抗氧化实验

采用CCl4急性肝损伤模型测定样品的护肝抗氧化作用。选择雄性昆明种小鼠，体重为20±2，随机分组，每组10只。小鼠适应性喂养3d，采用灌胃给药，正常对照组和模型组灌胃等体积的生理盐水。灌胃按0.2ml/(20g/d)剂量进行，连续灌胃给药4d。于末次给药后1h，除正常对照组腹腔注射(ip)等量生理盐水外，其余各组均ip 0.1％CCl4花生油溶液0.1ml/10g。禁食不禁水，16h后取样。摘眼球取血，血清置4℃保存备用；同时立即剖腹取肝脏，用4℃预冷的生理盐水冲尽表面浮血，滤纸拭干、称重，计算肝脏指数(肝重/体重×100％)。测血清ALT、AST活力。肝组织匀浆，测肝组织中丙二醛(MDA)含量、总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性。

表13海马鸡精对CCL4致急性肝损伤小鼠血清中ALT、AST、TBILI活力的影响

与模型组相比^*P＜0.05，^**P＜0.01

表14海马鸡精对CCL4致急性肝损伤小鼠肝脏内MDA含量、T-AOC和GSH-PX活性的

                     影响

与模型组相比^*P＜0.05，^**P＜0.01

结果证明，海马鸡精能显著降低CCl4引起的急性肝损伤后血清中ALT、AST和TBILI的水平，同时还明显降低肝组织MDA的含量，并且有效提高了T-AOC和GSH-PX的活力。这些结果提示，海马鸡精对CCl4所致小鼠急性肝损伤的保护作用，可能与其提高肝细胞抗氧化能力，对抗CCl4引起的膜脂质过氧化，促进肝细胞的再生和修复有关。

试验例3本发明海马鸡精止咳作用

取小鼠60只，♀♂各半，体重18～22g，小鼠适应性喂养3d，采用灌胃给药，正常对照组灌胃等体积的生理盐水。连续灌胃给药4d。于末次给药后1h后，将小鼠置于倒置的500烧杯内，同时将含有0.3ml氨水的棉球放入烧杯中，立即观察并记录小鼠的咳嗽潜伏期和3分钟内咳嗽次数，统计各组小鼠咳嗽潜伏期和咳嗽次数。

表15海马鸡精对氨水致小鼠咳嗽的影响

与正常组相比*P＜0.05；与模型组相比**P＜0.01。

结果证明，海马鸡精能延长氨水致小鼠咳嗽潜伏期，减少咳嗽数次。

结论：1、海马鸡精口服液具有激素样作用，对雌激素、雄激素缺乏症具有治疗作用。

2、海马鸡精口服液具有抗氧化、保肝作用。

3、海马鸡精口服液具有止咳作用。

这些药理作用体现了其补肝益肾、壮阳安神、活血祛瘀、舒筋活络、止喘平喘、益精明目等功效。

Claims (10)

1.一种具有保健功能的组合物，其特征在于：它是由下述重量配比的原料制备而成的制剂：

海马1-5份、文昌鸡5-30份、枸杞1-10份。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：原料的重量配比为：

海马1份、文昌鸡20份、枸杞1份。

3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：它是由以下步骤制备而成的制剂：

(1)取文昌鸡，去皮、头、肥肉、爪及内脏；称重，置高压锅内加6-10倍量蒸馏水和按鸡肉重量计5％的枸杞，加压煎煮，过滤，得鸡汁，置冰箱冷藏，去油，加热浓缩为1∶4的浓缩液；处理滤渣，将鸡肉和骨头分离，鸡肉捣碎备用；

(2)取海马粉，加8-12倍量蒸馏水煎煮，过滤，获取海马汁和海马渣；

(3)取海马渣和b步骤的捣碎鸡肉按1∶(5-30)比例混合，加入2-6倍量蒸馏水，以物重计，加0.8％蛋白酶或脂肪酶(酶活力80万μ/g)搅匀，用5％的氢氧化钙试液调pH6.0-10.0，在40-60℃水浴锅内水解3-8小时，取出，于80-100℃水浴灭酶，用滤布过滤，弃去滤渣，得酶解液①；

(4)将b步骤的鸡汁浓缩液和c步骤的海马汁按重量配比为(5-30)∶1比例混合得混合液②；

(5)将①和②两种溶液混合，加入药学上或保健品上可接受的辅料制备成常用的制剂，其中，所述的制剂是口服液、片剂、胶囊剂、丸剂或颗粒剂。

4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于：步骤(3)所述的蛋白酶为动物蛋白水解酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶或纤维复合酶。

5.一种制备权利要求1-4任一项所述的组合物的方法，包括如下步骤：

a、称取重量配比的原料：

海马1-5份、文昌鸡5-30份、枸杞1-10份；

b、取文昌鸡，去皮、头、肥肉、爪及内脏；称重，置高压锅内加6-10倍量蒸馏水和按鸡肉重量计5％的枸杞，加压煎煮，过滤，得鸡汁，置冰箱冷藏，去油，加热浓缩为1∶4的浓缩液；处理滤渣，将鸡肉和骨头分离，鸡肉捣碎备用；

c、取海马粉，加8-12倍量蒸馏水煎煮，过滤，获取海马汁和海马渣；

d、取海马渣和b步骤的捣碎鸡肉按1∶(5-30)比例混合，加入2-6倍量蒸馏水，以物重计，加0.8％蛋白酶或脂肪酶(酶活力80万μ/g)搅匀，用5％的氢氧化钙试液调pH6.0-10.0，在40-60℃水浴锅内水解3-8小时，取出，于80-100℃水浴灭酶，用滤布过滤，弃去滤渣，得酶解液①；

e、将b步骤的鸡汁浓缩液和c步骤的海马汁按重量配比为(5-30)∶1比例混合得混合液②；

f、将①和②两种溶液混合，加入0.2％的山梨酸钾和1.5％蜂蜜搅匀，置冰箱冷藏，过滤，灌装，置高压消毒器内加压灭菌，即得成品。

6.根据权利要求5所述的组合物的方法，其特征在于：包括如下步骤：

a、称取重量配比的原料：

海马1份、文昌鸡20份、枸杞1份；

b、取文昌鸡解冻，去皮、头、肥肉、爪及内脏；称重，置高压锅内加8倍量蒸馏水和按鸡肉重量计5％的枸杞，加压30分钟，过滤，得鸡汁，置冰箱冷藏，去油，加热浓缩为1∶4的浓缩液；处理滤渣，将鸡肉和骨头分离，鸡肉捣碎备用；

c、取海马粉，称重，置直身锅内，加10倍量蒸馏水，煮1小时，用滤布过滤，获取海马汁和海马渣；

d、取海马渣和鸡肉按1∶20比例混合，加4倍量蒸馏水，以物重计，加0.8％的动物蛋白水解酶、木瓜蛋白酶、脂肪酶、菠萝蛋白酶或纤维复合酶中的一种搅匀，用5％的氢氧化钙试液调pH7.0，在50℃水浴锅内水解5小时，取出，于100℃沸水浴灭酶5分钟，过滤，弃去滤渣，得酶解液①；

e、将鸡汁浓缩液和海马汁按原料20∶1比例混合得混合液②；

f、将①和②两种溶液混合，加入0.2％的山梨酸钾和1.5％蜂蜜搅匀，置冰箱冷藏，过滤，灌装，置高压消毒器内加压灭菌，即得成品。

7.权利要求1-4任意一项所述的组合物在制备具有激素样作用的药物或保健品中的用途。

8.权利要求1-4任意一项所述的组合物在制备具有抗氧化的药物或保健品中的用途。

9.权利要求1-4任意一项所述的组合物在制备具有保肝作用的药物或保健品中的用途。

10.权利要求1-4任意一项所述的组合物在制备具有止咳作用的药物或保健品中的用途。