CN101766619B - 一种治疗恶性肿瘤的药物组合物及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗恶性肿瘤的药物组合物及应用，药物组合物由姜黄素和汉防己甲素按一定比例配制，本发明制备的药物包括制剂允许的药物赋形或载体。其重要之处在于发现了姜黄素和汉防己甲素在恶性肿瘤治疗中的协同作用。该药物组合物尤其适用于抗神经胶质瘤、肺癌、肝癌、胃癌、肠癌、乳腺癌、子宫颈癌、胰腺癌和白血病。该药物配方合理、有效成分明确，具有显著的抗癌作用，降低了现有抗癌药物的临床用量，提高了抗癌效率，降低了毒副作用，具有制备抗肿瘤药物的应用前景。

Description

一种治疗恶性肿瘤的药物组合物及应用

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，更具体涉及一种用于治疗恶性肿瘤的药物组合物，同时还涉及该药物的用途，该药物组合物尤其适用于抗神经胶质瘤、肺癌、肝癌、胃癌、肠癌、乳腺癌、子宫颈癌、胰腺癌、白血病等。

背景技术

恶性肿瘤一直是严重威胁人类生存和健康的杀手之一，它和心血管疾病居疾病导致死亡原因的头两位，已成为医学上的两大难关。我国常见的恶性肿瘤有：肺癌、胃癌、食管癌、肠癌、肝癌、宫颈癌、乳腺癌、白血病、恶性淋巴瘤、鼻咽癌等十大肿瘤。其中以肺癌、胃癌、食管癌、肝癌、乳腺癌、宫颈癌最为多见，约占全部恶性肿瘤的70％-80％。

传统的癌症治疗模式包括手术、放疗、化疗，但这种“寻找和消灭”的策略在杀伤肿瘤细胞的同时，对人体正常细胞也有损伤，因此副作用大，患者生活质量差，且生存率低。一种好的抗肿瘤药物最好能选择性杀死癌细胞，而对正常细胞毒性小，且在长期用药条件下仍能保留其疗效，但不幸的是，目前并没有这样理想的药物。癌细胞暴露于亚致死浓度的化疗药物往往会产生耐药性，并常常交叉耐受其他一些抗肿瘤药物。因此，在治疗效应得到保证的前提下如何降低癌症治疗药物的使用浓度和毒副作用，是肿瘤防治的另一个棘手问题。

近年来分子生物学的进展使“靶点与控制”的肿瘤靶向治疗方式成为可能。肿瘤细胞最明显的特征就是增殖失控，而在肿瘤细胞内与生长分化有关的信号传导障碍则是增殖失控的重要因素，因此，从某种意义上说，肿瘤的发生是细胞信号传导异常的一种表现，也就是一些与细胞生长、分裂、增殖有关的信号传递通路处于异常活化或失活状态。那么设计药物选择性作用于信号转导途径某些环节就将影响细胞的增殖或分化，从而达到抑制肿瘤生长的目的，信号传导药物在肿瘤治疗研究中是一个非常值得开发的领域。细胞凋亡(apoptosis)是机体细胞在正常生理或病理状态下发生的一种自发的程序化死亡过程。肿瘤的发生和发展与细胞凋亡密切相关，肿瘤细胞不仅可以看作是一种较其来源组织生长更快的细胞，也可看作是一种凋亡率相对较少的细胞，所以有目的地诱导肿瘤细胞的凋亡已成为一种治疗肿瘤的有效手段。

多药耐药性(MDR)是肿瘤化疗的一大障碍，其机制较为复杂，目前认为主要与耐药细胞内多药耐药基因(mdr)扩增，过度表达P2糖蛋白(P2gp)有关。P2gp为能量依赖性药泵，能将多种抗肿瘤药泵出细胞外，使细胞内药物积累减少，不能有效杀伤肿瘤细胞，从而产生MDR。采用适当的方法促进或诱导耐药细胞凋亡，或抑制凋亡调控基因的异常表达，也是克服肿瘤细胞耐药的一个重要策略。靶向作用药物的研制成功突破了传统治疗模式的局限，为临床提供了联合采用多种治疗手段、并从多个信号传导途径对肿瘤的生长进行干预的可能，成为了肿瘤治疗的未来趋势。

目前对恶性肿瘤的药物治疗以化学药品为主，但因为开发费用昂贵，毒副作用大，多有不同程度的致突变毒性，病人常难以承受。中药治疗肿瘤已有两千年历史，某些药物抗肿瘤作用并不逊于西药化疗。因此，人们把目光转向中药，试图从天然植物成分中寻找毒副作用小、作用独特的抗肿瘤药物。我国的中医药资源是宝贵的文化遗产，为抗肿瘤药物的筛选工作提供了丰富的物质基础，但中药组份复杂，如何有效利用其中抗癌组份，并提供科学研究数据，从中筛选高效低毒、作用靶点广、逆转作用显著的单体化合物用于抗肿瘤治疗已成为当前肿瘤研究的重点。

姜黄素(Curcumin，分子式C₂₁H₂₀O₆，分子量368.38，CAS号458-37-7)，是一种天然酚类色素，广泛存在于姜黄属植物姜黄、莪术、郁金等的根茎中。近年的研究表明，姜黄素在抗炎、抗氧化、降血脂、抗抑郁、抗动脉粥样硬化、抗肿瘤、抗HIV病毒等方面有很好的药理作用，而且姜黄素的毒性很低，具有良好的临床应用潜力，受到国内外的广泛关注。国内外学者多年来的研究发现姜黄素及衍生物抗癌谱较广，可以抑制多种肿瘤细胞的生长，且对多种耐药和转移肿瘤细胞有杀伤作用。姜黄素抗肿瘤可能涉及的机制主要包括：诱发肿瘤细胞凋亡、阻断肿瘤细胞的生长信号传导通路、抗氧化和抑制肿瘤血管生成4个方面。姜黄素能对肝癌细胞株产生生长抑制作用，并且有剂量依赖性；姜黄素类药物可抑制多发性骨髓瘤细胞增殖、阻滞细胞处在细胞周期的G1/S期；核因子NFκB在许多癌细胞中起到操控细胞反凋亡生长的作用，最近研究人员发现，姜黄素及其类似物可以靶向性地抑制NFκB的诱导活化作用，减少白细胞介素6分泌，通过降低P2糖蛋白及多药耐药基因的表达阻碍细胞株抗凋亡机制的运行，促使癌细胞凋亡而增加化疗药物的敏感性。多项研究报道姜黄素的酚性羟基可以捕获或清除自由基，从而抑制自由基对机体多种组织、细胞的损伤，从而减低肿瘤的发生。Rajasingh等发现，姜黄素可以阻断T淋巴癌细胞株中对转录起调控作用的JAK-STAT细胞信号传导通路，使癌细胞转录被阻，抑制其增殖和扩散。表皮生长因子受体(EGFR)被发现在多种肿瘤细胞中都有高度表达，抑制EGFR的表达成为一个治疗癌症的合理靶点。姜黄素可以通过抑制转录因子Egr-1与DNA的结合活性，减低其对转录的诱导效应，而抑制大鼠结肠癌细胞中EGFR基因的表达。姜黄素能通过与蛋白激酶C(PKC)的特定结构域反应，抑制PKC的活性，进而影响细胞信号传导通路，干扰肿瘤细胞的增殖。原发肿瘤的生长和转移依赖于血管生成，实验证明，姜黄素可令荷瘤大鼠体内血管内皮细胞生长因子(VEGF)的水平明显下降，明显抑制肿瘤血管新生，姜黄素对多种人肿瘤细胞株亦存在同样作用。(参见文献Vajragupt a O，Bioorganic&Medicinal Chemistry Letter，2005，15：3364.Weber W.M，Bioorganic&Medicinal Chemistry，2006，14：2450.Rajasingh J.Bi ochemical&Biophysical Research Communications，2006，340：359.Chen A，Oncogene，2006，25：278.Tuns t al l R.G，European Journal of Cancer，2006，42：415.LevAri S，Biomedicine&Pharmacotherapy，2005，59：276.)

汉防己甲素(Tetrandrine，分子式C₃₆H₄₂N₂O₆，分子量622.75，CAS号518-34-3)，又称粉防己碱，是从中草药粉防己的根块中提取的双苄基异喹啉类生物碱。早期研究表明Tet具有消炎、镇痛、降压、抗纤维化等广泛的药理作用。临床用于治疗高血压、矽肺、肝纤维化等疾病，已取得了较好疗效。研究证实Tet是天然的非选择性的钙通道阻滞剂，又是钙调蛋白的拮抗剂，它可以调节多种P2gp介导的多药耐药细胞株的耐药性，有着良好的应用前景。近年研究还证实，TET对多种肿瘤细胞如人白血病细胞株HL-60、人白血病U937细胞、人肝癌细胞Mahlavu、人恶性淋巴瘤BM13674细胞、人神经胶质瘤细胞U138MG、鼠神经母细胞瘤Neuro 2a有抑制肿瘤细胞增生和诱导凋亡的作用；研究结果还表明，汉防己甲素可以通过提高细胞内活性氧水平抑制鼠神经母细胞瘤株生长，诱导其凋亡；在HT-29细胞中汉防己甲素通过PI3K/AKT/GSK3beta途径诱导细胞周期阻滞和凋亡。Tet不仅能直接抑制肿瘤生长，并且具有放疗增敏、逆转耐药、减轻放化疗毒副反应的作用，表明Tet在抗肿瘤治疗中有着良好的临床应用前景。(参见文献Chen YJ.Acta Pharmacol in，2002，23(12)：1102-1106.戈升荣，中草药，2000，8(31)：附4-5.Jin QLife Sci，2002，71：2053-2066.Dong Y，LifeSci，1997，60(8)：135-140.Lai YL，.Antica Drugs，1998，9(1)：77-81.荆绪斌世界华人消化杂志，2003，11(8)：1223-1226.Po-Lin Kuo，Life Sciences2003，73：243-252.Chen XL，Biochemical Pharmacology，2004，67：1819-1829)

针对肿瘤形成机制和特定靶点，协同药物组合式即“鸡尾酒药物疗法”已成为抗肿瘤研究的发展趋势，合理使用不同作用机制、不良反应无叠加的两种或多种药物不但可起到协同增敏作用，而且可降低单一药物剂量，减少不良反应，提高耐受性。

发明内容

本发明的目的是在于提供了一种治疗恶性肿瘤的药物组合物，该抗癌药物组合，配方合理、有效成分明确，所取得的抗肿瘤作用显著优于单一用药，具有显著的协同和增效作用，从而降低了现有抗癌药物的临床用量，提高了抗癌效率，降低了毒副作用，是一种高效低毒的肿瘤药物。

本发明的另一个目的是在于提供了一种药物组合物在制备治疗或预防恶性肿瘤的药物中的应用。所述的恶性肿瘤为：神经胶质瘤、肺癌、肝癌、胃癌、肠癌、乳腺癌、子宫颈癌、胰腺癌、白血病等。本发明的实验证实，含姜黄素和汉防己甲素药物组合所取得的抗肿瘤作用显著优于单一的姜黄素或汉防己甲素，分析结果显示两药联合作用效果增强，并具有明显协同和增效作用。

为了实现上述目的，本发明采取以下技术措施：

本发明制成该药物组合物的原料由下述组份按重量份组成：

姜黄素1-95份    汉防己甲素1-95份

本发明药物由下列原料按重量份制成：

姜黄素1-80份    汉防己甲素1-85份

本发明药物由下列原料按重量份制成：

姜黄素1-70份    汉防己甲素1-75份

本发明药物由下列原料按重量份制成：

姜黄素1-64份    汉防己甲素1-63份

本发明药物由下列原料按重量份制成：

姜黄素1-50份    汉防己甲素1-50份

本发明药物由下列原料按重量份制成：

姜黄素1-42份    汉防己甲素1-46份

本发明药物由下列原料按重量份制成：

姜黄素1-35份    汉防己甲素1-36份

本发明药物由下列原料按重量份制成：

姜黄素1-22份    汉防己甲素1-25份

本发明药物由下列原料按重量份制成：

姜黄素1-15份    汉防己甲素1-14份

本发明组合物的配方较好的重量份比是：

姜黄素1-9份    汉防己甲素1-9份

本发明药物的配方优选重量份比是：

姜黄素1份       汉防己甲素1份

根据临床需要，将有效成分组合与药物赋形剂或载体制成药物，主要包括液体制剂、颗粒剂、片剂、冲剂、胶丸、胶囊、缓释剂、滴丸剂、口崩制剂或注射剂。

一种制备药物组合物的基本过程是：

药物制备：将姜黄素和汉防己甲素分别用溶剂如二甲亚砜(dimethylsulfoxide，DMSO)配制成10^-2M储备液，小量分装，-20℃贮存备用，临用时用相应细胞培养液(DMEM培养基或RPMI 1640培养基)稀释到所需终浓度(终浓度范围为2.5-15μM)。所述的姜黄素中的任何一个重量份与另一种汉防己甲素中的任何一个重量份相混合，均能得到一种该药物的组合物。

一种药物组合物的基本应用过程是：

1.肿瘤细胞培养：选用对数生长期的肿瘤细胞，胰酶消化后，用含10％小牛血清的RPMI 1640培养基配成1-5×10⁴个/ml的细胞悬液，接种在24孔培养板中，37℃，5％CO₂培养箱中培养24h。

2.将培养的肿瘤细胞分为对照组(control)、姜黄素组(Circumin)、汉防己甲素组(Tetrandrine)、汉防己甲素和姜黄素组(Cur/Tet)四个组，每组设5平行孔。

3.实验组换新的含不同浓度被测药品的培养基，对照组则换含等体积溶剂的培养基，每孔中药物溶剂(DMSO或水)的体积不超过1％总体积。每个药物浓度设5个复孔，5％CO₂37℃，培养3～5天。

4.台盼蓝排染法检测药物抗癌活性：药物作用后，0.025％胰蛋白酶与0.5mMEDTA(1∶1)消化细胞，1000rpm离心10min，弃上清，收集细胞，每孔加入500μL 2％台盼蓝染液，普通光学显微镜下血球计数板计数，着色细胞为死亡细胞。选取任意视野中的500个细胞分别计数死亡细胞数和存活细胞数。

5.按下式计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率：

肿瘤细胞生长抑制率％＝死亡细胞数/总细胞数×100％

信号通路是细胞应答内外环境信息的重要途径，细胞中存在的多条信号传导通路构成了错综复杂的信号网络，它们通过整合作用调控细胞内正、负信号的平衡，从而控制细胞的生长、增殖、分化和死亡。肿瘤的发生是一个多因素、多途径、多步骤的过程，肿瘤细胞的生长、转移和凋亡同样是细胞内一系列信号传导通路调控的结果，一旦某一通路受阻就可能通过其它通路达到补偿的目的。通过″协同药物组合″的方式，可使抗肿瘤药物作用于多个信号传导途径，通过阻断肿瘤细胞生长和诱导细胞凋亡，达到抗肿瘤的目的。如背景技术中所介绍的，姜黄素和汉防己甲素通过不同方式抑制肿瘤细胞生长和诱导凋亡，且都是沿用已久的药物，不仅价格低廉，而且副作用极小，病人耐受性好，协同组合用药是完全可行的。本发明通过姜黄素和汉防己甲素混合使用与单药使用的比较实验，研究了姜黄素和汉防己甲素联合使用对多种人肿瘤细胞如神经胶质瘤D37、肺癌H520、乳腺癌MDA-MB-468、肠癌HCT-116、胰腺癌Panc1、宫颈癌HeLa、白血病K562、胃癌HS746T和肝癌HepG2等细胞株生长的影响，首次证明了姜黄素和汉防己甲素对多个肿瘤细胞，尤其是对神经胶质瘤D37、肺癌H520细胞具有剂量依赖抑制作用，且姜黄素和汉防己甲素具有明显的协同效应，为临床联合应用汉防己甲素和姜黄素组合抗肿瘤提供了依据。姜黄素和汉防己甲素药物组合在体外对肿瘤细胞株的抑制作用目前国内外均没有文献报道。

实验结果：

采用不同浓度汉防己甲素和姜黄素单独或混合作用于不同的人肿瘤细胞株，通过台盼蓝排染法检测了抗肿瘤药物的细胞毒作用。结果表明，不同浓度的Cur和Tet单药均有一定程度的抑制肿瘤细胞生长作用，且呈浓度依赖效应，2.5-15μMCur对肿瘤细胞的细胞生长抑制率范围为2-25％，2.5-15μM Tet对肿瘤细胞的细胞生长抑制率范围为3-30％。Cur和Tet联合作用时，细胞生长抑制率较之单药使用时有明显升高，如2.5-5μM的Cur和Tet联用可使10-50％的细胞生长受到抑制，当10-15μM Cir和Tet联用时肿瘤细胞生长抑制率达到了60-99％(结果见表1-9)。本发明的实验证实，含姜黄素和汉防己甲素药物组合所取得的抗肿瘤作用显著优于单一的姜黄素或汉防己甲素，分析结果显示两药联合作用效果增强，并具有明显协同和增效作用。

本发明涉及姜黄素和汉防己甲素联合用于治疗恶性肿瘤的药物组合以及制备方法和应用。所述的恶性肿瘤为：神经胶质瘤、肺癌、肝癌、胃癌、肠癌、乳腺癌、子宫颈癌、胰腺癌、白血病等。其特征在于其有效成分为姜黄素和汉防己甲素，且不限于该药本身，还可以是其类似物或衍生物；姜黄素与汉防己甲素组合物协同作用于肿瘤细胞，包括有效成分同时给药和先后给药；本发明可用于多种肿瘤治疗，不仅限于实例中所列举的肿瘤类型。

本发明所述的有效成分与允许的药物赋形剂或载体(包括助溶剂、缓冲剂和稳定剂)组合制备药物制剂，其制剂形式主要包括液体制剂、颗粒剂、片剂、冲剂、胶丸、胶囊、缓释剂、滴丸剂、口崩制剂或注射剂。

本发明的有益效果有：1.提出了姜黄素和汉防己甲素药物组合及用途；2.提出了姜黄素和汉防己甲素混合使用能协同抑制多种肿瘤的生长 3.该药物组合对人体安全、低毒；4.该组合配方合理，使用方便，安全有效，是一种潜在的高效低毒的肿瘤药物。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明。所有实施例所用细胞的培养、药品的添加以及生长抑制率的测定均按以下方法进行。

一、材料：

1.细胞株：人肺癌H520、乳腺癌MDA-MB-468、肠癌HCT-116、胰腺癌Panc1、神经胶质瘤D37等细胞株均购自美国菌种细胞保藏数据库(American TypeCulture Collection，ATCC)；人白血病K562、子宫颈癌HeLa、胃癌HS746T和肝癌HepG2均购自中国科学院细胞生物研究所。

2.试剂：DMEM培养基、RPMI 1640培养基、胎牛血清和胰酶、乙二胺四乙酸等药品来自GIBCO公司；姜黄素、汉防己甲素、青霉素、链霉素、DMSO、台盼蓝等为Sigma公司产品。其余试剂均为国产分析纯。

3.仪器：5％CO2细胞培养箱(ThermoForma，美国)，细胞培养超净工作台(苏净集团安泰公司)，低温超速离心机(Haraeus公司，德国)，倒置显微镜(Olympus，日本)

二、药物制备：将姜黄素和汉防己甲素分别用二甲亚砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)配制成10^-2M储备液，小量分装，-20℃贮存备用，临用时用相应细胞培养液稀释到所需终浓度。所述的姜黄素中的任何一个重量份与另一种汉防己甲素中的任何一个重量份相混合，均能得到一种该药物的组合物。混配过程是：

三、药物处理

1.细胞培养：细胞按常规培养于含10％小牛血清的RPMI-1640或DEME培养基(青霉素100u/ml，链霉素100u/ml)中，置CO₂培养箱(37℃，5％CO2)中培养。

2.选用对数生长期的肿瘤细胞，用胰酶消化后，用含10％小牛血清的RPMI 1640培养基配成1-5×10⁴个/ml的细胞悬液，接种在24孔培养板中，每孔接种1ml，37℃，5％CO₂培养箱中培养24h。

3.实验组换新的含不同浓度被测药品的培养基，对照组则换含等体积溶剂的培养基，每组设5平行孔，每孔中药物溶剂(DMSO或水)的体积不超过1％总体积。每个浓度设5个复孔，37℃，5％CO₂培养3～5天。

四、台盼蓝排染法检测药物抗癌活性：药物作用后，0.025％胰蛋白酶与0.5mMEDTA(1∶1)消化细胞，1000rpm离心10min，弃上清，收集细胞，每孔加入500μL2％台盼蓝染液，普通光学显微镜下血球计数板计数，着色细胞为死亡细胞。选取任意视野中的500个细胞分别计数死亡细胞数和存活细胞数。按下式计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率：

肿瘤细胞生长抑制率％＝死亡细胞数/总细胞数×100％

五、实验结果：

实验分对照组(control)、姜黄素组(Circumin)、汉防己甲素组(Tetrandrine)、汉防己甲素和姜黄素组(Cur/Tet)，采用不同浓度汉防己甲素和姜黄素单独或混合作用于不同的人肿瘤细胞株，通过台盼蓝排染法检测抗肿瘤药物的细胞毒作用。

实验例1：姜黄素和汉防己甲素单独使用和联合使用对神经胶质瘤细胞D37的影响

采用台盼蓝排染法检测了Cur和Tet对神经胶质瘤细胞D37的生长抑制作用，实验分对照组(control)、姜黄素组(Circumin)、汉防己甲素组(Tetrandrine)、汉防己甲素和姜黄素组(Cur/Tet)，采用不同浓度汉防己甲素和姜黄素单独或混合作用于人神经胶质瘤细胞D37肿瘤细胞，药品处理5天后，通过台盼蓝排染法检测抗肿瘤药物的细胞毒作用。结果表明，不同浓度的Cur和Tet单药使用均有一定程度的抑制肿瘤细胞生长作用，且呈浓度依赖效应。如表1中所示，2.5μM、5μM和15μM Cur对神经胶质瘤细胞D37的细胞生长抑制率分别为3.4％和8.4％和21.5％，2.5μM和5μM和15μM Tet对神经胶质瘤细胞D37的细胞生长抑制率分别为2.6％和4.7％和17.8％。Cur和Tet联合作用于神经胶质瘤细胞D37时，细胞生长抑制率较之单药使用时有明显升高，如2.5μM的Cur和Tet可使16.8％的细胞生长受到抑制，5μM的Cur和Tet则可使34.5％的细胞生长受到抑制，当15μMCir和10μM Tet联用时肿瘤细胞生长抑制率达到了99％。可见汉防己甲素和姜黄素混合处理可明显抑制肿瘤细胞的生长，与单用药物相比，有显著性差异，P＜0.05，同时两药具有明显的协同效应。

表1姜黄素和汉防己甲素单独使用和联合使用对神经胶质瘤细胞D37增殖的影响D37

	control	Curcumin	Tetrandrine	Cur/Tet
					药物浓度	0	2.5uM	2.5uM
生长抑制率(％)	2.3±1.2	3.4±1.6	2.6±1.9	16.8±2.2
					药物浓度	0	5.0uM	5.0uM
生长抑制率(％)	2.3±1.2	8.4±2.9	4.7±1.3	34.5±3.2
					药物浓度	0	15uM	10uM
生长抑制率(％)	2.3±1.2	21.5±3.4	17.8±3.2	99

实验例2：姜黄素和汉防己甲素单独使用和联合使用对人胃癌细胞HS746T的影响

采用台盼蓝排染法检测了Cur和Tet对胃癌细胞HS746T的生长抑制作用，实验分对照组(control)、姜黄素组(Circumin)、汉防己甲素组(Tetrandrine)、汉防己甲素和姜黄素组(Cur/Tet)，采用不同浓度汉防己甲素和姜黄素单独或混合作用于人胃癌细胞HS746T肿瘤细胞，药品处理5天后，通过台盼蓝排染法检测抗肿瘤药物的细胞毒作用。结果表明，不同浓度的Cur和Tet单药使用均有一定程度的抑制肿瘤细胞生长作用，且呈浓度依赖效应。如表2中所示，3μM、5μM和15μM Cur对人胃癌细胞HS746T的细胞生长抑制率分别为5.3％和7.8％和18.8％，3μM和5μM和15μM Tet对胃癌细胞HS746T的细胞生长抑制率分别为5.9％和8.9％和22.8％。Cur和Tet联合作用时，细胞生长抑制率较之单药使用时有明显升高，如2.5μM的Cur和Tet可使12.3％的细胞生长受到抑制，5μM的Cur和Tet则可使37.2％的细胞生长受到抑制，当15μMCir和10μM Tet联用时肿瘤细胞生长抑制率达到了78.6％。可见汉防己甲素和姜黄素混合处理可明显抑制肿瘤细胞的生长，与单用药物相比，有显著性差异，P＜0.05，同时两药具有明显的协同效应。

表2姜黄素和汉防己甲素单独使用和联合使用对胃癌细胞HS746T增殖的影响

	control	Curcumin	Tetrandrine	Cur/Tet
					药物浓度	0	3.0υM	3.0υM
生长抑制率(％)	3.4±1.2	5.3±1.9	5.9±2.1	12.3±2.6
					药物浓度	0	5.0υM	5.0υM
生长抑制率(％)	3.4±1.2	7.8±2.5	8.9±3.1	37.2±3.8
					药物浓度	0	15υM	15υM
生长抑制率(％)	3.4±1.2	18.8±3.5	22.8±4.2	78.6±4.5

实验例3：姜黄素和汉防己甲素单独使用和联合使用对人肝癌细胞HepG2的影响

采用台盼蓝排染法检测了Cur和Tet对人肝癌细胞HepG2的生长抑制作用，实验分对照组(control)、姜黄素组(Circumin)、汉防己甲素组(Tetrandrine)、汉防己甲素和姜黄素组(Cur/Tet)，采用不同浓度汉防己甲素和姜黄素单独或混合作用于人肝癌细胞HepG2肿瘤细胞，药品处理5天后，通过台盼蓝排染法检测抗肿瘤药物的细胞毒作用。结果表明，不同浓度的Cur和Tet单药使用均有一定程度的抑制肿瘤细胞生长作用，且呈浓度依赖效应。如表3中所示，3μM、5μM和15μM Cur对人肝癌细胞HepG2的细胞生长抑制率分别为2.5％和4.9％和12.7％，3μM和5μM和15μM Tet对肝癌细胞HepG2的细胞生长抑制率分别为2.9％和4.1％和27.8％。Cur和Tet联合作用时，细胞生长抑制率较之单药使用时有明显升高，如3μM的Cur和Tet可使12.7％的细胞生长受到抑制，5μM的Cur和Tet则可使32.4％的细胞生长受到抑制，当15μMCir和10μM Tet联用时肿瘤细胞生长抑制率达到了71.5％。可见汉防己甲素和姜黄素混合处理可明显抑制肿瘤细胞的生长，与单用药物相比，有显著性差异，P＜0.05，同时两药具有明显的协同效应。

表3姜黄素和汉防己甲素单独使用和联合使用对肝癌细胞HepG2增殖的影响

	control	Curcumin	Tetrandrine	Cur/Tet
					药物浓度	0	3.0υM	3.0υM
生长抑制率(％)	1.3±0.9	2.5±1.2	2.9±1.3	12.7±2.6

药物浓度	0	5.0υM	5.0υM
					生长抑制率(％)	1.3±0.9	4.9±1.8	4.1±1.7	32.4±2.3
药物浓度	0	15υM	15υM
					生长抑制率(％)	1.3±0.9	12.3±3.2	27.8±3.2	71.5±4.6

实验例4：姜黄素和汉防己甲素单独使用和联合使用对人肠癌细胞HCT-116的影响

采用台盼蓝排染法检测了Cur和Tet对人肠癌细胞HCT-116的生长抑制作用，实验分对照组(control)、姜黄素组(Circumin)、汉防己甲素组(Tetrandrine)、汉防己甲素和姜黄素组(Cur/Tet)，采用不同浓度汉防己甲素和姜黄素单独或混合作用于人肠癌细胞HCT-116肿瘤细胞，药品处理5天后，通过台盼蓝排染法检测抗肿瘤药物的细胞毒作用。结果表明，不同浓度的Cur和Tet单药使用均有一定程度的抑制肿瘤细胞生长作用，且呈浓度依赖效应。如表4中所示，3μM、5μM和15μM Cur对人肠癌细胞HCT-116的细胞生长抑制率分别为2.3％和3.2％和18.9％，3μM和5μM和15μM Tet对人肠癌细胞HCT-116的细胞生长抑制率分别为2.7％和4.5％和22.9％。Cur和Tet联合作用时，细胞生长抑制率较之单药使用时有明显升高，如3μM的Cur和Tet可使12.3％的细胞生长受到抑制，5μM的Cur和Tet则可使28.9％的细胞生长受到抑制，当15μMCir和10μM Tet联用时肿瘤细胞生长抑制率达到了68.7％。可见汉防己甲素和姜黄素混合处理可明显抑制肿瘤细胞的生长，与单用药物相比，有显著性差异，P＜0.05，同时两药具有明显的协同效应。

表4姜黄素和汉防己甲素单独使用和联合使用对人肠癌细胞HCT-116增殖的影响

	control	Curcumin	Tetrandrine	Cur/Tet
					药物浓度	0	3.0υM	3.0υM
生长抑制率(％)	1.9±1.1	2.3±1.3	2.7±1.5	12.3±2.6
					药物浓度	0	5.0υM	5.0υM
生长抑制率(％)	1.9±1.1	3.2±1.7	4.5±1.8	28.9±3.4
					药物浓度	0	10υM	15υM
生长抑制率(％)	1.9±1.1	18.9±3.4	22.9±4.1	68.7±3.2

实验例5：姜黄素和汉防己甲素单独使用和联合使用对人胰腺癌细胞Panc1的影响

采用台盼蓝排染法检测了Cur和Tet对人胰腺癌细胞Panc1的生长抑制作用，实验分对照组(control)、姜黄素组(Circumin)、汉防己甲素组(Tetrandrine)、汉防己甲素和姜黄素组(Cur/Tet)，采用不同浓度汉防己甲素和姜黄素单独或混合作用于人胰腺癌细胞Panc1肿瘤细胞，药品处理5天后，通过台盼蓝排染法检测抗肿瘤药物的细胞毒作用。结果表明，不同浓度的Cur和Tet单药使用均有一定程度的抑制肿瘤细胞生长作用，且呈浓度依赖效应。如表5中所示，3μM、5μM和15μM Cur对人胰腺癌细胞Panc1的细胞生长抑制率分别为11.6％和17.8％和22.3％，3μM和5μM和15μM Tet对人胰腺癌细胞Panc1的细胞生长抑制率分别为12.4％和18.9％和29.6％。Cur和Tet联合作用时，细胞生长抑制率较之单药使用时有明显升高，如3μM的Cur和Tet可使18.6％的细胞生长受到抑制，5μM的Cur和Tet则可使29.3％的细胞生长受到抑制，当15μMCir和10μM Tet联用时肿瘤细胞生长抑制率达到了84.3％。可见汉防己甲素和姜黄素混合处理可明显抑制肿瘤细胞的生长，与单用药物相比，有显著性差异，P＜0.05，同时两药具有明显的协同效应。

表5姜黄素和汉防己甲素单独使用和联合使用对人胰腺癌细胞Panc1增殖的影响

	control	Curcumin	Tetrandrine	Cur/Tet
					药物浓度	0	3.0υM	3.0υM
生长抑制率(％)	8.5±2.2	11.6±2.9	12.4±2.3	18.6±3.1
					药物浓度	0	5.0υM	5.0υM
生长抑制率(％)	8.5±2.2	17.8±3.2	18.9±2.9	29.3±2.4
					药物浓度	0	15υM	15υM
生长抑制率(％)	8.5±2.2	22.3±3.9	29.6±4.0	84.3±4.6

实验例6：姜黄素和汉防己甲素单独使用和联合使用对人子宫颈癌细胞HeLa的影响

采用台盼蓝排染法检测了Cur和Tet对人子宫颈癌细胞HeLa的生长抑制作用，实验分对照组(control)、姜黄素组(Circumin)、汉防己甲素组(Tetrandrine)、汉防己甲素和姜黄素组(Cur/Tet)，采用不同浓度汉防己甲素和姜黄素单独或混合作用于人子宫颈癌细胞HeLa肿瘤细胞，药品处理5天后，通过台盼蓝排染法检测抗肿瘤药物的细胞毒作用。结果表明，不同浓度的Cur和Tet单药使用均有一定程度的抑制肿瘤细胞生长作用，且呈浓度依赖效应。如表6中所示，3μM、5μM和15μM Cur对人子宫颈癌细胞HeLa的细胞生长抑制率分别为2.5％和12.3％和18.9％，3μM和5μM和15μM Tet对子宫颈癌细胞HeLa的细胞生长抑制率分别为2.8％和13.3％和22.4％。Cur和Tet联合作用时，细胞生长抑制率较之单药使用时有明显升高，如3μM的Cur和Tet可使11.3％的细胞生长受到抑制，5μM的Cur和Tet则可使22.3％的细胞生长受到抑制，当15μMCir和10μM Tet联用时肿瘤细胞生长抑制率达到了88.6％。可见汉防己甲素和姜黄素混合处理可明显抑制肿瘤细胞的生长，与单用药物相比，有显著性差异，P＜0.05，同时两药具有明显的协同效应。

表6姜黄素和汉防己甲素单独使用和联合使用对子宫颈癌细胞HeLa细胞增殖的影响

	control	Curcumin	Tetrandrine	Cur/Tet
					药物浓度	0	3.0υM	3.0υM
生长抑制率(％)	2.9±1.1	2.5±1.1	2.8±1.2	11.3±2.4
					药物浓度	0	5.0υM	5.0υM
生长抑制率(％)	2.9±1.1	12.3±2.5	13.3±2.6	22.3±3.6
					药物浓度	0	10υM	10υM
生长抑制率(％)	2.9±1.1	18.9±4.1	22.4±4.7	88.6±3.9

实验例7：姜黄素和汉防己甲素单独使用和联合使用对人乳腺癌细胞MDA-MB-468的影响

采用台盼蓝排染法检测了Cur和Tet对人乳腺癌细胞MDA-MB-468的生长抑制作用，实验分对照组(control)、姜黄素组(Circumin)、汉防己甲素组(Tetrandrine)、汉防己甲素和姜黄素组(Cur/Tet)，采用不同浓度汉防己甲素和姜黄素单独或混合作用于人乳腺癌细胞MDA-MB-468肿瘤细胞，药品处理5天后，通过台盼蓝排染法检测抗肿瘤药物的细胞毒作用。结果表明，不同浓度的Cur和Tet单药使用均有一定程度的抑制肿瘤细胞生长作用，且呈浓度依赖效应。如表7中所示，3μM、5μM和15μM Cur对人乳腺癌细胞MDA-MB-468的细胞生长抑制率分别为3.7％和14.3％和19.1％，3μM和5μM和10μM Tet对人乳腺癌细胞MDA-MB-468的细胞生长抑制率分别为3.8％和14.7％和20.7％。Cur和Tet联合作用时，细胞生长抑制率较之单药使用时有明显升高，如3μM的Cur和Tet可使14.7％的细胞生长受到抑制，5μM的Cur和Tet则可使24.5％的细胞生长受到抑制，当15μMCir和10μM Tet联用时肿瘤细胞生长抑制率达到了66.2％。可见汉防己甲素和姜黄素混合处理可明显抑制肿瘤细胞的生长，与单用药物相比，有显著性差异，P＜0.05，同时两药具有明显的协同效应。

表7姜黄素和汉防己甲素单独使用和联合使用对人乳腺癌细胞MDA-MB-468增殖的影响

	control	Curcumin	Tetrandrine	Cur/Tet
					药物浓度	0	3.0υM	3.0υM
生长抑制率(％)	2.3±1.1	3.7±1.4	3.8±1.7	14.7±2.8
					药物浓度	0	5.0υM	5.0υM

生长抑制率(％)	2.3±1.1	14.3±2.9	14.7±3.1	24.5±3.9
					药物浓度	0	15υM	10υM
生长抑制率(％)	2.3±1.1	19.1±3.2	20.7±4.1	66.2±3.5

实验例8：姜黄素和汉防己甲素单独使用和联合使用对白血病细胞K562的影响

采用台盼蓝排染法检测了Cur和Tet对人白血病细胞K562的生长抑制作用，实验分对照组(control)、姜黄素组(Circumin)、汉防己甲素组(Tetrandrine)、汉防己甲素和姜黄素组(Cur/Tet)，采用不同浓度汉防己甲素和姜黄素单独或混合作用于人白血病细胞K562肿瘤细胞，药品处理1天后，通过台盼蓝排染法检测抗肿瘤药物的细胞毒作用。结果表明，不同浓度的Cur和Tet单药使用均有一定程度的抑制肿瘤细胞生长作用，且呈浓度依赖效应。如表8中所示，3μM、5μM和15μM Cur对人白血病细胞K562的细胞生长抑制率分别为2.5％和7.2％和18.9％，3μM和5μM和15μM Tet对人白血病细胞K562的细胞生长抑制率分别为2.2％和6.3％和21.3％。Cur和Tet联合作用时，细胞生长抑制率较之单药使用时有明显升高，如3μM的Cur和Tet可使14.1％的细胞生长受到抑制，5μM的Cur和Tet则可使19.8％的细胞生长受到抑制，当15μMCir和10μM Tet联用时肿瘤细胞生长抑制率达到了78.9％。可见汉防己甲素和姜黄素混合处理可明显抑制肿瘤细胞的生长，与单用药物相比，有显著性差异，P＜0.05，同时两药具有明显的协同效应。

表8姜黄素和汉防己甲素单独使用和联合使用对人白血病细胞K562增殖的影响

	control	Curcumin	Tetrandrine	Cur/Tet
					药物浓度	0	3.0υM	3.0υM
生长抑制率(％)	1.1±0.6	2.5±1.2	2.2±1.3	14.1±2.8
					药物浓度	0	5.0υM	5.0υM
生长抑制率(％)	1.1±0.6	7.2±2.3	6.3±2.1	19.8±2.8
					药物浓度	0	15υM	10υM
生长抑制率(％)	1.1±0.6	18.9±3.4	21.3±3.7	78.9±3.8

实验例9：姜黄素和汉防己甲素单独使用和联合使用对人肺癌细胞H520的影响

采用台盼蓝排染法检测了Cur和Tet对人肺癌细胞H520的生长抑制作用，实验分对照组(control)、姜黄素组(Circumin)、汉防己甲素组(Tetrandrine)、汉防己甲素和姜黄素组(Cur/Tet)，采用不同浓度汉防己甲素和姜黄素单独或混合作用于人肺癌细胞H520肿瘤细胞，药品处理5天后，通过台盼蓝排染法检测抗肿瘤药物的细胞毒作用。结果表明，不同浓度的Cur和Tet单药使用均有一定程度的抑制肿瘤细胞生长作用，且呈浓度依赖效应。如表9中所示，5μM、7.5μM和12μM Cur对人肺癌细胞H520的细胞生长抑制率分别为16.2％和14.7％和17.5％，2.5μM和5μM和10μM Tet对人肺癌细胞H520的细胞生长抑制率分别为15.8％和18.9％和26.4％。Cur和Tet联合作用时，细胞生长抑制率较之单药使用时有明显升高，分别可使16.8％、51.3％的细胞生长受到抑制，当12μMCir和10μM Tet联用时肿瘤细胞生长抑制率达到了99％。可见汉防己甲素和姜黄素混合处理可明显抑制肿瘤细胞的生长，与单用药物相比，有显著性差异，P＜0.05，同时两药具有明显的协同效应。

表9姜黄素和汉防己甲素单独使用和联合使用对肺癌细胞H520增殖的影响

	control	Curcumin	Tetrandrine	Cur/Tet
					药物浓度	0	5.0υM	2.5υM
生长抑制率(％)	11.2±2.7	16.2±2.1	15.8±2.0	16.8±2.2
					药物浓度	0	7.5υM	5.0υM
生长抑制率(％)	11.2±2.7	14.7±3.4	18.9±3.7	51.3±3.8
					药物浓度	0	12υM	10υM
生长抑制率(％)	11.2±2.7	17.5±3.2	26.4±3.9	99

Claims (12)

1.一种治疗恶性肿瘤的药物组合物，其特征在于制成该药物组合物的原料由下述组份按重量份组成：

姜黄素1-95份    汉防己甲素1-95份。

2.根据权利要求1所述的一种治疗恶性肿瘤的药物组合物，其特征在于制成该药物组合物的原料由下述组份按重量份组成：

姜黄素1-70份    汉防己甲素1-75份。

3.根据权利要求1所述的一种治疗恶性肿瘤的药物组合物，其特征在于制成该药物组合物的原料由下述组份按重量份组成：

姜黄素1-50份    汉防己甲素1-50份。

4.根据权利要求1所述的一种治疗恶性肿瘤的药物组合物，其特征在于制成该药物组合物的原料由下述组份按重量份组成：

姜黄素1-35份    汉防己甲素1-36份。

5.根据权利要求1所述的一种治疗恶性肿瘤的药物组合物，其特征在于制成该药物组合物的原料由下述组份按重量份组成：

姜黄素1-22份    汉防己甲素1-25份。

6.根据权利要求1所述的一种治疗恶性肿瘤的药物组合物，其特征在于制成该药物组合物的原料由下述组份按重量份组成：

姜黄素1-9份    汉防己甲素1-9份

7.根据权利要求1所述的一种治疗恶性肿瘤的药物组合物，其特征在于制成该药物组合物的原料由下述组份按重量份组成：

姜黄素1份    汉防己甲素1份。

8.权利要求1所述的一种药物组合物在制备治疗或预防恶性肿瘤的药物中的应用；

所述的恶性肿瘤为：神经胶质瘤、肺癌、肝癌、胃癌、肠癌、乳腺癌、子宫颈癌、胰腺癌或白血病其中的一种。

9.根据权利要求1所述的一种治疗恶性肿瘤的药物组合物，其特征在于：所述的药物组合物为原料制成以下剂型：

a、液体制剂；b、颗粒剂；c、片剂；d、冲剂；e、胶丸；f、胶囊；h、滴丸剂。

10.根据权利要求1所述的一种治疗恶性肿瘤的药物组合物，其特征在于：所述的药物组合物为原料制成缓释剂。

11.根据权利要求1所述的一种治疗恶性肿瘤的药物组合物，其特征在于：所述的药物组合物为原料制成口崩制剂。

12.根据权利要求1所述的一种治疗恶性肿瘤的药物组合物，其特征在于：所述的药物组合物为原料制成注射剂。