CN101762709B

CN101762709B - 一种胆固醇水质定标液及其制备方法

Info

Publication number: CN101762709B
Application number: CN 200810241825
Authority: CN
Inventors: 李希文
Original assignee: Shenzhen Mindray Bio Medical Electronics Co Ltd
Current assignee: Shenzhen Mindray Bio Medical Electronics Co Ltd
Priority date: 2008-12-19
Filing date: 2008-12-19
Publication date: 2013-06-12
Anticipated expiration: 2028-12-19
Also published as: CN101762709A

Abstract

本发明公开了一种胆固醇水质定标液及其制备方法，所述定标液包括溶解的胆固醇，还包括胆酸、脱氧胆酸、胆酸盐、脱氧胆酸盐中的至少一种以及异丙醇。本发明简化了生产工艺，降低了生产成本，提高了生产重复性，所制备出的胆固醇水质定标液储存稳定性高，测试重复性好。

Description

一种胆固醇水质定标液及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种临床生化诊断试剂，特别是涉及一种胆固醇的水质定标液以及该定标液的制备方法。

背景技术

胆固醇来源于体细胞合成和饮食，是细胞膜的组分和类固醇激素、胆汁酸的前体。血液中的脂蛋白是脂肪和载脂蛋白的复合物，由它转运胆固醇，脂蛋白有四种形式：高密度脂蛋白(HDL)，低密度脂蛋白(LDL)，极低密度脂蛋白(VLDL)和乳糜微粒，四种形式的脂蛋白与冠状动脉粥样硬化有着明确的关系。进行个体总胆固醇(TC)的检测只是用于动脉粥样硬化危险的过筛，如果要对危险作较好的评估，必须另外进行高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)检测。LDL-C作用于动脉内膜形成动脉粥样硬化斑块，与冠心病及相关的死亡率有着非常密切的关系。即使总胆固醇在正常范围内，LDL-C浓度升高也预示了高度危险。HDL负责从细胞中吸收胆固醇，HDL-C具有抵御斑块形成的作用，与冠心病发生呈负相关，其含量下降是虚血性心疾的因素。因此，准确的监控并检测血液中的胆固醇水平对疾病的诊断和治疗都有很大帮助。

临床实验室常用的检测体液中的胆固醇含量的方法有很多，包括化学法检测和酶法检测。无论采用何种检测方法都必须引进一种具体的有明确含量的胆固醇作为标准品来评估被测样品的胆固醇含量，基于这种检测需要，一种具有固定胆固醇含量的胆固醇溶液，既胆固醇标准品诞生了。

胆固醇标准品为测定血液中胆固醇的含量提供了定量的标准，已有的无水标准品是将胆固醇溶解在氯仿或冰醋酸或醇溶液等制备得到的，这种标准品在测试时与Liebermann-Burchardt色原体产生更强于血清中胆固醇和色原体产生的颜色强度的变化，导致测定结果的不准确(L.Vass，Schweiz，med.Wschr.，102，914/1972)，因而与被检测生物液体具有较差的一致性。

水质胆固醇定标液的发明虽然克服了无水标准品在上述使用中的缺陷，但对于胆固醇标准品来说，除了具有与被检测生物液体的充分的一致性之外，长时间的稳定性及胆固醇含量能长久保持不变也是十分必要的。一项德国专利(专利号：28 39 433)发明了一种较稳定的含有有离子和非离子型去污剂的水质脂质体定标液。这两种定标液虽然具有很好的稳定性，但是由于溶液组成不同于被检测的胆固醇样品，因此，它们不适合用于胆固醇的动力学测定。一篇美国专利(专利号：4868139)在定标液配方中加入一定比例的胆酸和脱氧胆酸或者二者的盐或这两种酸的衍生物，从而解决了以往定标液不适合胆固醇动力学方法测定的难题；但是该定标液配方要求用胆酸和脱氧胆酸或者二者的盐或这两种酸的衍生物，脱氧胆酸或盐或这种酸的衍生物相对胆酸或盐或这种酸的衍生物要昂贵很多，而且胆固醇在两者的混合溶液中特别难以溶解，生产的重复性难以控制。

到目前为止，胆固醇水质定标液各方面性能虽然已经得到了很大的改善，但在储存稳定性、测试重复性、生产成本、生产工艺等方面还存在诸多问题，有待进一步优化改进。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种生产工艺可靠简便、生产重复性好且稳定的胆固醇水质定标液。

本发明的另一目的在于提供一种上述胆固醇水质定标液的制备方法。

为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

本发明公开了一种胆固醇水质定标液，所述定标液包括溶解的胆固醇，所述定标液还包括胆酸、脱氧胆酸、胆酸盐、脱氧胆酸盐中的至少一种以及异丙醇。

优选的，异丙醇在所述定标液中所占的体积百分含量为1％～20％。

或者优选的，胆酸、脱氧胆酸、胆酸盐、脱氧胆酸盐中的至少一种在所述定标液中所占的质量/体积百分含量为5％～50％。

进一步优选的，所述定标液还包括0.5～20g/L的Tris。所述定标液还包括0.2～2.0g/L的叠氮钠。

本发明定标液的pH值为5～13，优选pH值为8.1。

本发明还公开了上述胆固醇水质定标液的制备方法，所述方法包括：将胆固醇溶解于异丙醇形成澄清溶液后，再将所得溶液与胆酸、脱氧胆酸、胆酸盐、脱氧胆酸盐中至少一种的水溶液混合搅拌至澄清。

其中，将胆固醇溶解于异丙醇是指将胆固醇溶解于20～50℃的异丙醇。

所述搅拌是指搅拌至少5分钟。

由于采用了以上技术方案，使本发明具备的有益效果在于：

本发明通过在胆固醇水质定标液的制备过程中，利用异丙醇先溶解胆固醇后再与胆酸或脱氧胆酸或它们的盐的水溶液混合，提高了胆固醇的溶解效率，搅拌时间仅需5～30分钟，简化了生产工艺，降低了生产成本，提高了生产重复性，所制备出的胆固醇水质定标液储存稳定性高，测试重复性好。此外，本发明的胆固醇水质定标液，昂贵的脱氧胆酸或盐并非必要成分，可以在价格相对低廉的胆酸、胆酸盐以及脱氧胆酸、脱氧胆酸盐中选择至少一种即可，因此很容易根据生产需要来控制成本。

具体实施方式

本发明提供了一种稳定的胆固醇水质定标液配方及其制备工艺。该配方包括胆酸、脱氧胆酸、胆酸盐、脱氧胆酸盐中的至少一种、异丙醇以及适量的胆固醇。

本发明的水质定标液是在检测胆固醇含量时作为定标使用，因此，本发明定标液中的胆固醇含量可不作限定，可以由本领域技术人员根据被检测物中胆固醇含量的具体情况来进行调整，以达到最合适的定标效果。但在通常情况下，定标液中，胆固醇含量以不超过10％(w/v)为宜。

由于胆固醇在通常情况下难以溶解，即使溶解后，溶液的稳定性往往也不够理想。本发明采用胆酸或脱氧胆酸或其盐与异丙醇配合使用，提高了胆固醇的溶解效率以及定标液的稳定性。其中，异丙醇与胆酸或脱氧胆酸或其盐的用量可在较大范围内调整。异丙醇及胆酸或脱氧胆酸或其盐的用量太低的话，溶解胆固醇的效果不好，它们的用量越大，胆固醇在其中的溶解性就越好。但胆酸或脱氧胆酸或其盐的用量过高的话，一方面会造成成本的增加，另一方面所能溶解的胆固醇量已经超过实际需要。异丙醇的用量太高则导致定标液的挥发性变大，影响其测试精密度。本发明的定标液中，异丙醇的优选用量为1％～20％(v/v)，胆酸或脱氧胆酸或其盐的优选用量为5％～50％(w/v)。

本发明的定标液中，还可以优选含有Tris与叠氮钠。其中，Tris作为缓冲剂，叠氮钠起防腐作用，其在本发明定标液中的浓度可根据惯常用量使用。通常，Tris的用量为0.5～20g/L，叠氮钠的用量为0.2～2.0g/L。由于本发明定标液中使用的胆酸或脱氧胆酸或其盐，该成分本身也能起到缓冲剂的作用，同时也具有一定的防腐作用，因此，在本发明的定标液中Tris与叠氮钠可作为优选成分而非必要成分使用。

本发明的定标液，其应当满足的pH值为5～13，在此范围内，pH值越低，胆酸或脱氧胆酸或其盐的溶解度越低。而本发明的定标液的pH值通常优选8.1。

本发明胆固醇水质定标液的制备工艺是先用适量20～50℃的异丙醇溶解胆固醇形成澄清溶液，再将此澄清溶液和含胆酸或脱氧胆酸或其盐中至少一种的溶液混合，搅拌直至溶液澄清透明。其中，使用20～50℃的异丙醇，能够很快捷地将胆固醇溶解形成澄清溶液，再将该澄清溶液与室温的含胆酸或脱氧胆酸或其盐中至少一种的溶液混合后，只需搅拌5～30分钟即可得到澄清溶液。

本发明制备的胆固醇水质定标液，稳定性、重复性均好，制备工艺简单、成本较低，可以作为胆固醇试剂盒配套用定标液，用于测试前的系统校准。

下面通过具体的实施例对本发明做进一步详细的描述。除非另有说明，否则以下实施例中的总胆固醇试剂盒及测定仪器均为深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司生产的总胆固醇测定试剂盒和BS系列生化分析仪，其余试剂为常规采购试剂。

实施例1

将2克胆固醇加入到50ml的约40℃的异丙醇溶液混匀形成澄清溶液，将上述溶液加入到0.9L含100g的胆酸钠、0.25g叠氮钠、3.6g的Tris缓冲液中，搅拌约15分钟直至溶液澄清透明，调pH8.1，最后定容到1L。

将制备的定标液放置在37度恒温箱进行加速稳定性实验，加速不同的时间后用总胆固醇试剂盒检测胆固醇的浓度，计算相对偏差，具体数据见表一。

表一胆固醇定标液37度加速后测定值的相对偏差

上述数据表明，本发明的定标液具有很好的稳定性。

实施例2

按表二15种配方制备胆固醇定标液各1L，制备工艺都是先将胆固醇加入到约40℃的异丙醇溶液混匀形成澄清溶液，再将上述溶液与含表中其它成分的溶液混匀搅拌至澄清透明，最后定容到1L。各配方胆固醇的回收率在97.5～102.3％之间，由此可见本发明的胆固醇单标与胆固醇测定试剂盒兼容性好，溶液体系能将胆固醇完全溶解，胆固醇单标的生产工艺可靠，生产重复性好。

表二各胆固醇定标液的胆固醇回收率

以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。

Claims

1.一种胆固醇水质定标液，所述定标液包括溶解的胆固醇，其特征在于：所述定标液还包括胆酸、脱氧胆酸、胆酸盐、脱氧胆酸盐中的至少一种以及异丙醇。

2.根据权利要求1所述的一种胆固醇水质定标液，其特征在于：异丙醇在所述定标液中所占的体积百分含量为1%～20%。

3.根据权利要求2所述的一种胆固醇水质定标液，其特征在于：异丙醇在所述定标液中所占的体积百分含量为3~10%。

4.根据权利要求1~3任意一项所述的一种胆固醇水质定标液，其特征在于：胆酸、脱氧胆酸、胆酸盐、脱氧胆酸盐中的至少一种在所述定标液中所占的质量/体积百分含量为5%～50%。

5.根据权利要求4所述的一种胆固醇水质定标液，其特征在于：胆酸、脱氧胆酸、胆酸盐、脱氧胆酸盐中的至少一种在所述定标液中所占的质量/体积含量为60g/L～200g/L。

6.根据权利要求4所述的一种胆固醇水质定标液，其特征在于：所述定标液还包括0.5～20g/L的Tris。

7.根据权利要求4所述的一种胆固醇水质定标液，其特征在于：所述定标液还包括0.2～2.0g/L的叠氮钠。

8.根据权利要求4所述的一种胆固醇水质定标液，其特征在于：所述定标液的pH值为5～13。

9.根据权利要求8所述的一种胆固醇水质定标液，其特征在于：所述定标液的pH值为8.1。

10.权利要求1～9任意一项所述的胆固醇水质定标液的制备方法，所述方法包括：将胆固醇溶解于异丙醇形成澄清溶液后，再将所得溶液与胆酸、脱氧胆酸、胆酸盐、脱氧胆酸盐中至少一种的水溶液混合搅拌至澄清。

11.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于：将胆固醇溶解于异丙醇是指将胆固醇溶解于20～50℃的异丙醇。

12.根据权利要求11所述的制备方法，其特征在于：将胆固醇溶解于异丙醇是指将胆固醇溶解于40℃的异丙醇。

13.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于：所述搅拌是指搅拌至少5分钟。

14.一种胆固醇水质定标液，所述定标液包括溶解的胆固醇，其特征在于：所述定标液还包括胆酸、胆酸盐中的至少一种以及异丙醇，且所述定标液不包括脱氧胆酸或脱氧胆酸盐。

15.根据权利要求14所述的一种胆固醇水质定标液，其特征在于：异丙醇在所述定标液中所占的体积百分含量为1%～20%。

16.根据权利要求15所述的一种胆固醇水质定标液，其特征在于：异丙醇在所述定标液中所占的体积百分含量为3~10%。

17.根据权利要求14~16任意一项所述的一种胆固醇水质定标液，其特征在于：胆酸、胆酸盐中的至少一种在所述定标液中所占的质量/体积百分含量为5%～50%。

18.根据权利要求17所述的一种胆固醇水质定标液，其特征在于：胆酸、胆酸盐中的至少一种在所述定标液中所占的质量/体积含量为60g/L～200g/L。

19.根据权利要求17所述的一种胆固醇水质定标液，其特征在于：所述定标液还包括0.5～20g/L的Tris。

20.根据权利要求17所述的一种胆固醇水质定标液，其特征在于：所述定标液还包括0.2～2.0g/L的叠氮钠。

21.根据权利要求17所述的一种胆固醇水质定标液，其特征在于：所述定标液的pH值为5～13。

22.根据权利要求21所述的一种胆固醇水质定标液，其特征在于：所述定标液的pH值为8.1。

23.权利要求14～22任意一项所述的胆固醇水质定标液的制备方法，所述方法包括：将胆固醇溶解于异丙醇形成澄清溶液后，再将所得溶液与胆酸、胆酸盐中至少一种的水溶液混合搅拌至澄清。

24.根据权利要求23所述的制备方法，其特征在于：将胆固醇溶解于异丙醇是指将胆固醇溶解于20～50℃的异丙醇。

25.根据权利要求24所述的制备方法，其特征在于：将胆固醇溶解于异丙醇是指将胆固醇溶解于40℃的异丙醇。