CN105353142B

CN105353142B - 一种稳定性强的血清总胆固醇检测单试剂

Info

Publication number: CN105353142B
Application number: CN201510901315.8A
Authority: CN
Inventors: 王玉金; 张娟丽; 王玉珠; 边倩茹; 李瑾; 王志安
Original assignee: ZHENGZHOU LABSCIENCE CO Ltd
Current assignee: Zhengzhou Lanyue Biotechnology Co ltd
Priority date: 2015-12-07
Filing date: 2015-12-07
Publication date: 2017-05-10
Anticipated expiration: 2035-12-07
Also published as: CN105353142A

Abstract

本发明涉及稳定性强的血清总胆固醇检测单试剂，可有效解决其稳定性较差、线性范围窄、试剂错加漏加，使反应能迅速达到终点且测定的准确度和精密度高并能实际应用无污染环境的问题，其解决的技术方案是，该试剂是由以下原料制成：三羟甲基氨基甲烷2.42～7.26g、4‑氨基安替比林0.1～0.61g、对‑羟基苯甲酸钠0.8～2.4g、去垢剂聚乙二醇辛基苯基醚1.0～5.0ml、脂蛋白脂肪酶1.00～5.00KU、胆固醇氧化酶1.00～5.00KU、过氧化物酶5.00～10.00KU、牛血清白蛋白0.1～0.5g，加蒸馏水至1000ml混匀，用盐酸调pH值至7.1‑7.3即成，本发明组份科学，新颖独特，易生产，成本低，性能稳定，保质期长，测试准确，无环境污染，有良好的经济和社会效益。

Description

一种稳定性强的血清总胆固醇检测单试剂

技术领域

本发明涉及医药，特别是一种稳定性强的血清总胆固醇检测单试剂。

背景技术

胆固醇是体内最丰富的固醇类化合物，它既作为细胞生物膜的构成成分，又是类固醇类激素、胆汁酸及维生素D的前体物质。因此对于大多数组织来说，保证胆固醇的供给，维持其代谢平衡是十分重要的。胆固醇广泛存在于全身各组织中，其中约1/4分布在脑及神经组织中，占脑组织总重量的2％左右。肝、肾及肠等内脏以及皮肤、脂肪组织亦含较多的胆固醇，每100g组织中约含200至500mg，以肝为最多，而肌肉较少，肾上腺、卵巢等组织胆固醇含量可高达1％-5％，但总量很少。

在动脉粥样硬化的发生与发展过程中，胆固醇起着重要作用。冠心病的三个主要危险因素(高胆固醇血症、高血压和吸烟)中，只有高胆固醇血症才是唯一必要的先决条件。凡能增加动脉壁胆固醇内流和沉积的脂蛋白(如低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白及氧化型低密度脂蛋白等)都可导致动脉粥样硬化；能促使胆固醇外运的脂蛋白(如高密度脂蛋白、氧化型高密度脂蛋白等)则具有抗动脉粥样硬化发生的作用。正常情况下，二者的作用处于动态平衡状态中，在某些遗传性疾病或高脂膳食条件下，由于致动脉粥样硬化性脂蛋白的作用明显增加，胆固醇的内流和沉积明显的超过外运，从而造成了动脉粥样硬化的发生和发展。当体内的胆固醇多于身体需要的时候，它就会积聚在血管壁上，导致血管渐渐硬化和变窄，但身体在很长一段时间都不会有任何症状。经过漫长的岁月，淤积在血管壁上的胆固醇逐渐阻塞血管，使流到得要脏器的血液慢慢减少，当脏器从血液中得不到足够的氧和养料的时候，就很容易发生坏死。如果供给心脏血液的血管(冠状动脉)发生阻塞，就会引起冠状动脉粥样硬化性心脏病发作，出现心绞痛或心肌梗死；如果供给脑部血液的血管发生阻塞，便会发生脑梗死。

血清总胆固醇测定常规方法包括化学法与酶法。过去用化学法大都用有机溶剂提取胆固醇，然后用特殊试剂显色，比色测定。显色剂主要是两类：①乙酸-乙酸酐-硫酸反应(简称L-B反应)；②高铁硫酸反应。这些须用腐蚀性的强酸试剂，特异性差，干扰因素多，准确测定有赖于从标本中提取、皂化及纯化过程，因此操作步骤多，不适于分析大批标本。在常规测定中，现在已广泛应用酶法，这类方法特异性高、精密、灵敏，既便于手工操作，也适用于自动分析仪测大批标本。

国内几乎所有的临床检测主要采用酶法检测血清中总胆固醇(CHO)含量，其主要工作原理如下：血清中的胆固醇酯被胆固醇酯酶水解成游离胆固醇，后者被胆固醇氧化酶氧化成Δ⁴-胆甾烯酮并产生过氧化氢，再经过氧化物酶催化4-氨基安替比林与酚生成红色醌亚胺色素。醌亚胺的最大吸收在500nm左右，吸光度与标本中总胆固醇含量成正比。此法具有简便快速、微量、精密度高的优点，且特异性强，易于达到终点，线性范围宽，有利于临床推广。但市面上一般比较多的是双试剂的CHO检测试剂，而单试剂的CHO检测试剂由于其稳定性较差，并且试剂极其容易受到环境的污染而不为市场所接受。

发明内容

针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的在于提供一种稳定性强的血清总胆固醇检测单试剂，可有效解决其稳定性较差、线性范围窄、试剂错加漏加，使反应能迅速达到终点且测定的准确度和精密度高并能实际应用无污染环境的问题。

本发明解决的技术方案是，该试剂是由以下原料制成：三羟甲基氨基甲烷(Tris)2.42～7.26g、4-氨基安替比林0.1～0.61g、对-羟基苯甲酸钠0.8～2.4g、去垢剂聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)1.0～5.0ml、脂蛋白脂肪酶1.00～5.00KU、胆固醇氧化酶1.00～5.00KU、过氧化物酶5.00～10.00KU、牛血清白蛋白(BSA)0.1～0.5g，加蒸馏水至1000ml混匀，用盐酸调pH值至7.1-7.3即成。

本发明组份科学，新颖独特，易生产，成本低，性能稳定，保质期长，测试准确，无环境污染，有良好的经济和社会效益。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明的具体实施方式作详细说明。

实施例1

本发明在具体实施中，是由以下原料制成：三羟甲基氨基甲烷(Tris)6.05g、4-氨基安替比林0.20g、对-羟基苯甲酸钠1.60g、去垢剂聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)1.6ml、脂蛋白脂肪酶1.00KU、胆固醇氧化酶1.00KU、过氧化物酶5.00KU、牛血清白蛋白(BSA)0.2g，加蒸馏水至1000ml混匀，用盐酸调pH值为7.2。

实施例2

本发明在具体实施中，还可由以下原料制成：三羟甲基氨基甲烷(Tris)2.42g、4-氨基安替比林0.1g、对-羟基苯甲酸钠0.8g、去垢剂聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)1.0ml、脂蛋白脂肪酶1.00KU、胆固醇氧化酶1.00KU、过氧化物酶5.00KU、牛血清白蛋白(BSA)0.1g，加蒸馏水至1000ml混匀，用盐酸调pH值为7.1。

实施例3

本发明在具体实施中，也可由以下原料制成：三羟甲基氨基甲烷(Tris)7.26g、4-氨基安替比林0.61g、对-羟基苯甲酸钠2.4g、去垢剂聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)5.0ml、脂蛋白脂肪酶5.00KU、胆固醇氧化酶5.00KU、过氧化物酶10.00KU、牛血清白蛋白(BSA)0.5g，加蒸馏水至1000ml混匀，用盐酸调pH值为7.3。

实施例4

本发明在具体实施中，还可由以下原料制成：三羟甲基氨基甲烷(Tris)4.84g、4-氨基安替比林0.36g、对-羟基苯甲酸钠1.8g、去垢剂聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)3ml、脂蛋白脂肪酶3KU、胆固醇氧化酶3KU、过氧化物酶7.5KU、牛血清白蛋白(BSA)0.3g，加蒸馏水至1000ml混匀，用盐酸调pH值至7.1-7.3即成。

由上述可知：

1)本发明选择三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液，使整个配方处于一种极其稳定的状态，提高了试剂的稳定性。

2)本发明中选取Triton X-100作为去垢剂，也是反应的促进剂、润滑剂，它提高检测的灵敏度，促进样本中各种物质溶解，减少样本脂浊等对测定的影响。

3)本发明中选取稳定性较强，不易分解的4-氨基安替比林作为色原，有效的减缓试剂空白升高的弊病，从而保证了试剂的稳定性。

4)本发明中选取牛血清白蛋白(BSA)作为稳定剂，从而保证CHO单一试剂的稳定性。

用本发明的血清总胆固醇检测单试剂测定血清总胆固醇基于下列原理测定总胆红醇：脂蛋白脂肪酶先催化胆固醇酯的水解产生胆固醇和脂肪酸，随后，胆固醇氧化酶催化胆固醇的氧化形成胆甾-4-烯-3-酮和过氧化氢，后者与4-氨基安替比林和对羟基苯甲酸经过氧化物酶的作用形成红色的醌亚胺化合物，从而引起505nm处吸光度的上升，此种变化与样本中的胆固醇浓度成正比。本发明组份科学，新颖独特，易生产，成本低，性能稳定，保质期长达12个月，测试准确，准确率99％以上，且无环境污染。并经试验取得了非常满意的有益技术效果，本发明试剂进行了性能检测，并与现有的德国罗氏诊断有限公司原装CHO双试剂进行临床样品对比试验，结果如下：

试验校准品：朗道多项复合校准品，批号828UN,值为4.12mmol/L

试验质控品：朗道多项复合二水平质控品：朗道复合二水平质控品1，靶值：4.11mmol/L，允许范围：3.58～4.64mmol/L；朗道复合二水平质控品2，靶值：7.44mmol/L，允许范围：6.47～8.41mmol/L。

仪器：HITICH7060全自动生化分析仪

准确度试验

用朗道复合二水平质控品进行测试，重复检测3次，取测试结果均值(M)，按下列公式计算相对偏差(B)。

式中：

M—测试结果均值；

T—有证参考物质标志值，或各浓度人源样品定值。

测定准确度结果如下表：

朗道复合二水平质控品1测定结果：靶值：4.11mmol/L，允许范围：3.58～4.64mmol/L

朗道复合二水平质控品2测定结果：靶值：7.44mmol/L，允许范围：6.47～8.41mmol/L

精密度(变异系数CV)试验

取本发明三个批号的试剂，每个批号对朗道复合二水平质控品1CHO值4.11mmol/L进行10次重复测定，然后计算测定值的均数X、测定值的标准差S与测定值的变异系数CV值，其公式如下：

式中：

—为测定值的平均数；

S—为测定值的标准差；

CV—为测定值的变异系数。

三个批号试剂分别测定结果如下表：

朗道复合二水平质控品1：靶值：4.11mmol/L，允许范围：3.58～4.64mmol/L

批号	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	X	S	CV
														20141123	4.15	4.16	4.16	4.14	4.14	4.16	4.13	4.15	4.15	4.17	4.15	0.012	0.29％
20141130	4.15	4.15	4.13	4.13	4.14	4.15	4.18	4.18	4.18	4.18	4.16	0.021	0.50％
														20141207	4.14	4.16	4.17	4.15	4.15	4.16	4.17	4.15	4.17	4.17	4.16	0.011	0.26％

线性试验

取CHO浓度为22mmol/L左右的临床标本，用生理盐水作梯度稀释，稀释比例为80％、60％、40％、20％、10％。将系列稀释质控血清或样品和生理盐水进行测定，每点测定3次，取平均值，对系列7点的实测平均值与相应理论值作回归分析，结果见下表

线性试验

以上结果表明CHO单试剂在22mmol/L范围内线性关系良好。

临床对比试验

同时用本发明试剂与现有的德国罗氏诊断有限公司原装CHO双试剂检测临床病人血清标本140例，数据和统计结果如下：

临床试验数据记录表(CRF)

本发明试剂测定结果与现有的德国罗氏诊断有限公司原装CHO双试剂对照结果的相关系数r＝0.9988。

综上所述，本发明血清总胆固醇检测单试剂与现有技术的双试剂相比，本发明的试剂既保留了现有试剂的优点，又克服了现有技术的技术缺陷，试剂质量稳定可靠，保存期长达12个月，又大大降低了生产成本，成本降低50％以上，而且操作简单，只加一种试剂，不会出现现有双试剂错加漏加现象，有效保证了测试效率和准确性，效率提高2倍以上，准确率高达99％以上；且对环境无污染，是测定血清总胆固醇试剂上的创新，经济和社会效益巨大。

Claims

1.一种稳定性强的血清总胆固醇检测单试剂，其特征在于，由以下原料制成：三羟甲基氨基甲烷2.42～7.26g、4-氨基安替比林0.1～0.61g、对-羟基苯甲酸钠0.8～2.4g、去垢剂聚乙二醇辛基苯基醚1.0～5.0ml、脂蛋白脂肪酶1.00～5.00KU、胆固醇氧化酶1.00～5.00KU、过氧化物酶5.00～10.00KU、牛血清白蛋白0.1～0.5g，加蒸馏水至1000ml混匀，用盐酸调pH值至7.1-7.3即成。

2.根据权利要求1所述的稳定性强的血清总胆固醇检测单试剂，其特征在于，由以下原料制成：三羟甲基氨基甲烷6.05g、4-氨基安替比林0.20g、对-羟基苯甲酸钠1.60g、去垢剂聚乙二醇辛基苯基醚1.6ml、脂蛋白脂肪酶1.00KU、胆固醇氧化酶1.00KU、过氧化物酶5.00KU、牛血清白蛋白0.2g，加蒸馏水至1000ml混匀，用盐酸调pH值为7.2。

3.根据权利要求1所述的稳定性强的血清总胆固醇检测单试剂，其特征在于，由以下原料制成：三羟甲基氨基甲烷2.42g、4-氨基安替比林0.1g、对-羟基苯甲酸钠0.8g、去垢剂聚乙二醇辛基苯基醚1.0ml、脂蛋白脂肪酶1.00KU、胆固醇氧化酶1.00KU、过氧化物酶5.00KU、牛血清白蛋白0.1g，加蒸馏水至1000ml混匀，用盐酸调pH值为7.1。

4.根据权利要求1所述的稳定性强的血清总胆固醇检测单试剂，其特征在于，由以下原料制成：三羟甲基氨基甲烷7.26g、4-氨基安替比林0.61g、对-羟基苯甲酸钠2.4g、去垢剂聚乙二醇辛基苯基醚5.0ml、脂蛋白脂肪酶5.00KU、胆固醇氧化酶5.00KU、过氧化物酶10.00KU、牛血清白蛋白0.5g，加蒸馏水至1000ml混匀，用盐酸调pH值为7.3。

5.根据权利要求1所述的稳定性强的血清总胆固醇检测单试剂，其特征在于，由以下原料制成：三羟甲基氨基甲烷4.84g、4-氨基安替比林0.36g、对-羟基苯甲酸钠1.8g、去垢剂聚乙二醇辛基苯基醚3ml、脂蛋白脂肪酶3KU、胆固醇氧化酶3KU、过氧化物酶7.5KU、牛血清白蛋白0.3g，加蒸馏水至1000ml混匀，用盐酸调pH值至7.1-7.3即成。