CN101747395B - 一种高纯度灯盏花素乙素的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明一种高纯度灯盏花素乙素的制备方法，解决已有制备方法污染高，收率低，成本高的问题。包括如下步骤：(1)溶解：取市售灯盏花素，灯盏花素乙素含量重百分比85％，用其重量5-10倍的PH7-9的碱水溶解，过滤。(2)分离：滤液用层析材料柱层析，上样量为1∶1～3，用水淋洗，淋洗水为8-10倍柱体积，分部收集，合并纯度大于重量百分比98％的洗脱液，调酸PH2析出，静置、滤取沉、淀用去离子水洗涤沉淀至中性，干燥，即得高纯度灯盏花素乙素。

Description

一种高纯度灯盏花素乙素的制备方法

技术领域：

本发明与高纯度植物原料药的制备有关。

背景技术

灯盏花是菊科植物短葶飞蓬Erigeron breviscapus(Vant)}land.Mazz的干燥全草，又名灯盏细辛，分布在云南、四川、贵州、广西、湖南等地。本品性寒，微苦，具有散寒解表，祛风除湿，活血化瘀，通经活络，消炎止痛的功效。灯盏花素是从灯盏花原草中提取的黄酮类有效成份，其中主要为灯盏花素乙素，又名野黄芩苷，化学命名为4’、5、6一三羟基黄酮一7-O一葡萄糖醛酸苷，目前从市场上购得的灯盏花素原料药经HPLC分析，灯盏花素乙素含量在80-90％之间，临床上广泛用于治疗心脑血管疾病，疗效确切。但其注射液稳定性差，其灯盏花素乙素以外的成分不明确，对灯盏花素注射液用药安全增加了不可控性。

多年来灯盏花素原料药精制方法一直未能很好解决，因此有必要研究新的精制方法解决高纯度灯盏花素的工艺问题。关于高纯度灯盏花素乙素的工艺问题，专利申请。200510010723。提出了制备高含量灯盏花素乙素工艺，将灯盏花素在碱液中溶解后，再加入大量相同碱液进行沉淀，将沉淀加入有机溶剂中溶解后加酸析出沉淀，沉淀滤过，干燥得灯盏花素乙素。纯度能够达98％以上，但是以上专利需要大量的酸碱才能实现，给环境带来很大的污染，并且收率较低，工业化推广有很多问题。

发明内容：

本发明的目的是提供一种生产成本低、工艺简单、无污染、收率高、纯度高、适合工业化生产的高纯度灯盏花素乙素的制备方法。

本发明一种高纯度灯盏花素乙素的制备方法，包括如下步骤：

(1)溶解：取市售灯盏花素，灯盏花素乙素含量为重量百分比85％，用其重量5-10倍的PH7-9的碱水溶解，过滤。

(2)分离：滤液用层析材料柱层析，上样量为1∶1～3，用水淋洗，淋洗水为8-10倍柱体积，分部收集洗脱液，合并纯度大于重量百分比98％的洗脱液，调酸PH2析出，静置、滤取沉淀，用去离子水洗涤沉淀至中性，干燥，即得高纯度灯盏花洗脱液乙素。

步骤(1)中所述碱水为氢氧化钠、氨水、氢氧化钾、碳酸钠中的一种。

步骤(2)中所述层析材料为改性聚酰胺，改性聚酰胺的制备方法如下：

将10重量份乙二胺、15-30重量份丙烯酸甲酯、8-15重量份聚酰胺树脂置反应罐中，搅拌速度50rpm，反应温度25℃，反应时间24h，过滤，乙醇洗涤，烘干得改性聚酰胺。

所述的收集水洗脱液为收集3-8倍柱体积的水洗脱液。

本发明将碱液溶解滤液，用层析材料柱层析而不是再加入过量碱液和有机溶剂析出沉淀，用层析去除杂质简化工艺、减少成本和污染。

100-200目的改性聚酰胺材料载量大，既具有聚酰胺树脂对黄酮类化合物的优良分离性能，又具有丙烯酸甲酯侧链的反相分离性能，可有效去除包括灯盏花素甲素等其它黄酮类杂质。

层析材料可再生重复利用，如用95％乙醇淋洗柱体即可使材料再生。

用HPLC测定上述所得产品的灯盏花素乙素的含量，可达98以上％。

本发明中灯盏花素乙素含量测定方法用HPLC测定(按外标法测定)。HPLC色谱条件为：流动相：甲醇∶0.1％磷酸＝40∶60；

色谱柱：依利特C18(4.6×250mm)；

柱温：30℃；

流速：1.0ml/min；

测定波长：335nm，10ul进样。

本发明与现有技术相比具有如下优点：

(1)本发明精制工艺简单，收率高。按灯盏花素乙素计，不同用途对纯度的要求，纯度可达95％～99％，收率可达70％以上。

(2)本发明使用溶剂安全无毒，价格低廉，可回收再用，对环境无污染；

(3)本发明使用分离精制层析材料便宜，且易于洗脱再生，可多次利用；

(4)层析材料为100-200目改性聚酰胺树脂，具有对黄酮类化合物的优良分离性能，又具有丙烯酸甲酯侧链的反相分离性能，提高灯盏花素乙素的纯度。

总之，本发明关于灯盏花素乙素的制备方法，不仅生产成本低、工艺简单、无污染，而且灯盏花素乙素的收率高、纯度高，适合工业化生产。

具体实施方式：

下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述：

实施例1：

称取乙二胺10Kg，、丙烯酸甲酯15Kg，聚酰胺树脂10Kg，置反应罐中，搅拌速度50rpm，反应温度25℃，反应时间24h后过滤，乙醇洗涤，烘干得到15Kg改性聚酰胺树脂，作为层析材料。

称取市售灯盏花素100g，其中灯盏花素乙素含量为重量百分比85％，加入500ml沸水搅拌均匀，用重量百分比20％碳酸钠溶液调PH值至7，使溶解，滤过，滤液加入到层析材料柱上，用去离子水作洗脱液，分部收集洗脱液，合并检测纯度大于重量百分比98％的洗脱液，加入浓度为重量百分比10％的盐酸溶液，调PH至2，静置2小时，滤取沉淀，水洗至中性，80℃烘干，得到灯盏花素乙素58.2g，含量为98.5％。含量低的洗脱液调酸析出过滤后，并入下次层析工序分离。

实施例2：

称取乙二胺10Kg，、丙烯酸甲酯20Kg，聚酰胺树脂10Kg，置反应罐中，搅拌速度50rpm，反应温度25℃，反应时间24h后过滤，乙醇洗涤，烘干得到17Kg改性聚酰胺树脂。

称取市售灯盏花素100g，其中灯盏花素乙素含量为重量百分比85％，加入500ml沸水搅拌均匀，用重量百分比10％氨水调PH值至7，使溶解，滤过，滤液加入到层析材料柱上，用去离子作洗脱液，分部收集，合并检测纯度大于98％的洗脱液，加入浓度为重量百分比10％的盐酸溶液，调PH至2，静置2小时，滤取沉淀，水洗至中性，80℃烘干，得到灯盏花素乙素56.5g，含量为重量百分比98.7％。含量低的洗脱液调酸析出过滤后，并入下次层析工序分离。

实施例3：

称取乙二胺10Kg，、丙烯酸甲酯30Kg，聚酰胺树脂15Kg，置反应罐中，搅拌速度50rpm，反应温度25℃，反应时间24h后过滤，乙醇洗涤，烘干得到20Kg改性聚酰胺树脂。

称取市售灯盏花素500g，其中灯盏花素乙素含量为重量百分比85％，加入2500ml沸水搅拌均匀，用重量百分浓度20％碳酸钠溶液调PH值至7，使灯盏花素溶解，滤过，滤液加入到层析材料柱上，用去离子作洗脱液，分部收集，合并检测纯度大于重量百分比98％的洗脱液，加入重量百分比浓度为10％的盐酸溶液，调PH至2，静置2小时，滤取沉淀，水洗至中性，80℃烘干，得到灯盏花素乙素重量百分比256.7g，含量为重量百分比98.4％。含量低的洗脱液调酸析出过滤后，并入下次层析工序分离。

实施例4：

称取乙二胺10Kg，丙烯酸甲酯15Kg，聚酰胺树脂8Kg，置反应罐中，搅拌速度50rpm，反应温度25℃，反应时间24h后过滤，乙醇洗涤，烘干得到12Kg改性聚酰胺树脂。

称取市售灯盏花素500g，其中灯盏花素乙素含量为重量百分比85％，加入2500ml沸水搅拌均匀，用重量百分比10％氨水调PH值至7，使溶解，滤过，滤液加入到新型层析材料柱上，用去离子作洗脱液，分部收集，合并检测纯度大于重量百分比98％的洗脱液，加入重量百分比浓度为10％的盐酸溶液，调PH至2，静置2小时，滤取沉淀，水洗至中性，80℃烘干，得到灯盏花素乙素246.5g，含量为重量百分比98.6％。含量低的洗脱液调酸析出过滤后，并入下次层析工序分离。

Claims (3)

1.一种高纯度灯盏花素乙素的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)溶解：取市售灯盏花素，灯盏花素乙素含量为重量百分比85％，用其重量5-10倍的PH7-9的碱水溶解，过滤，

(2)分离：滤液用层析材料柱层析，上样量为1∶1～3，用水淋洗，淋洗水为8-10倍柱体积，分部收集洗脱液，合并纯度大于重量百分比98％的洗脱液，调酸PH2析出，静置、滤取沉淀，用去离子水洗涤沉淀至中性，干燥，即得高纯度灯盏花素乙素，所述层析材料为改性聚酰胺，改性聚酰胺的制备方法如下：

将10重量份乙二胺、15-30重量份丙烯酸甲酯、8-15重量份聚酰胺树脂置反应罐中，搅拌速度50rpm，反应温度25℃，反应时间24h，过滤，乙醇洗涤，烘干得改性聚酰胺。

2.如权利要求1所述的高纯度灯盏花素乙素的制备方法，其特征在于步骤(1)中所述碱水为氢氧化钠、氨水、氢氧化钾、碳酸钠中的一种。

3.根据权利要求1所述的高纯度灯盏花素乙素的制备方法，其特征在于所述的收集水洗脱液为收集3-8倍柱体积的水洗脱液。