CN101736051A - 美洲帘蛤多糖的制备方法 - Google Patents

美洲帘蛤多糖的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN101736051A
CN101736051A CN200910249063A CN200910249063A CN101736051A CN 101736051 A CN101736051 A CN 101736051A CN 200910249063 A CN200910249063 A CN 200910249063A CN 200910249063 A CN200910249063 A CN 200910249063A CN 101736051 A CN101736051 A CN 101736051A
Authority
CN
China
Prior art keywords
mercenaria
enzymolysis
clam meat
polysaccharide
linnaeus
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN200910249063A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101736051B (zh
Inventor
赵前程
李智博
李伟
何云海
金桥
佟长青
汪秋宽
苏延明
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Liaoning Ande Food Co ltd
Dalian Ocean University
Original Assignee
Dalian Fisheries University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Dalian Fisheries University filed Critical Dalian Fisheries University
Priority to CN200910249063XA priority Critical patent/CN101736051B/zh
Publication of CN101736051A publication Critical patent/CN101736051A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101736051B publication Critical patent/CN101736051B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Abstract

本发明公开一种美洲帘蛤多糖的制备方法，依次按以下步骤进行：制美洲帘蛤肉糜制品；蛤肉糜制品与水匀浆，得到蛤肉糜浆；向蛤肉糜浆中加入木瓜蛋白酶或碱性蛋白酶或复合蛋白酶酶解；用风味酶进一步酶解；向蛤肉酶解液中加入盐酸或氢氧化钠溶液，得到蛤肉酶解中和液；将蛤肉酶解中和液浓缩，离心去沉淀后，添加食盐得到蛤肉酶解盐溶液；向得到的蛤肉酶解盐溶液中加入无水乙醇，得到上清液和沉淀两部分；将沉淀物用丙酮洗涤，用Sevag试剂脱蛋白后，装入截留分子量为6000Da的透析袋中透析24h，得到粗多糖；将所得的粗多糖过DEAE-52纤维素离子交换柱，收集单一糖峰组分并采用Sephadex-G100凝胶层析柱作进一步分离纯化，浓缩，冻干，即得到美洲帘蛤多糖。

Description

美洲帘蛤多糖的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种多糖的制备方法，尤其是一种操作简单、提取率高，可同时制备蛤类营养保健调味品的美洲帘蛤多糖的制备方法。
背景技术：
美洲帘蛤又称硬壳蛤，原产于美国及加拿大沿岸，是美国浅海和滩涂主要的经济双壳贝类之一，它与我国文蛤相似，同属帘蛤科，肉质细嫩，肉味鲜美，富含蛋白质，经济价值高，但与文蛤不同，它个体大，体内没有泥沙，可在多种底质的滩涂和浅海正常生长，适应力好、生长快、耐受性强，除此之外美洲帘蛤还富含抗肿瘤、抗衰老、降血压、降血脂、增强免疫力和抗氧化等活性成分，在国际市场上供不应求。目前，对于多糖的提取大多采用以下两种方法：单一的乙醇提取法，不仅得率低，而且因提取物混杂大量的蛋白质给后续纯化带来麻烦；化学试剂沉淀多糖方法(如CPC等)，提取多糖后所产生的副产物不能食用。
发明内容：
本发明是为了解决现有技术所存在的问题，提供一种操作简单、提取率高，可同时制备蛤类营养保健调味品的美洲帘蛤多糖的制备方法。
本发明的技术解决方案是：一种美洲帘蛤多糖的制备方法，其特征在于依次按以下步骤进行：
a.选取鲜活的美洲帘蛤，洗净后取肉，采用组织捣碎机捣碎，得到蛤肉糜制品；
b.蛤肉糜制品与水按质量比为1∶1～3匀浆，得到蛤肉糜浆；
c.向蛤肉糜浆中加入木瓜蛋白酶或碱性蛋白酶或复合蛋白酶，采用1～4N氢氧化钠或盐酸调节pH，酶解1～5小时，得到蛤肉酶解液A；
d.将得到蛤肉酶解液A采用1～4N氢氧化钠或盐酸调节pH，用风味酶进一步酶解1～3h，得蛤肉酶解液B；
e.向蛤肉酶解液B中加入与c和d步骤等体积等当量的盐酸或氢氧化钠溶液，得到蛤肉酶解中和液；
f.将蛤肉酶解中和液浓缩至蛋白含量为3～10％，离心去沉淀后，添加食盐至终浓度达到1～2％，得到蛤肉酶解盐溶液；
g.向得到的蛤肉酶解盐溶液中加入3～7倍体积的无水乙醇，摇匀后，在1～6℃下静置12～24小时，采用8000～12000转/分钟离心15～30分钟，得到上清液和沉淀两部分；将沉淀物用丙酮洗涤，用Sevag试剂脱蛋白后，装入截留分子量为6000Da的透析袋中透析24h，得到粗多糖；
h.将所得的粗多糖过DEAE-52纤维素离子交换柱，先用0.02mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液洗脱，再以0～2mol/L NaCl溶液进行梯度洗脱，流速为1～2mL/min，采用苯酚～硫酸法跟踪测定多糖，收集单一糖峰组分；
i.将得到的单一糖峰组分，采用Sephadex-G100凝胶层析柱作进一步分离纯化，用蒸馏水洗脱，流速为0.2mL/min，采用苯酚-硫酸法跟踪测定多糖，用自动收集器收集单一糖峰组分；
j.将收集的单一糖峰组分进行浓缩，冻干，即得到美洲帘蛤多糖。
所述c步骤是加入酶活力单位为100万u/g的木瓜蛋白酶，加酶量为蛤肉质量的4.0～8.0％，用1～4N氢氧化钠或盐酸调节pH6.0～7.0，在温度为55～60℃条件下酶解1～5h。
所述c步骤是是加入酶活力单位为2.4AU/克的碱性蛋白酶，加酶量为蛤肉质量的1.0～1.5％，用1～4N氢氧化钠或盐酸调节pH7.5～8.0，在温度为55～60℃条件下酶解1～2h。
所述c步骤是加入酶活力单位为1.5AU/克的复合蛋白酶，加酶量为蛤肉质量的1.0～1.5％，用1～4N盐酸调节pH6.0～6.5，在温度为55～60℃条件下酶解3～5h。
所述d步骤是采用1～4N氢氧化钠或盐酸调节蛤类酶解液A的pH至6.5～7.0，加入酶活力500LAPU/克的风味酶，加酶量为蛤肉质量的0.25～1.0％，在温度为45～50℃条件下，酶解1～3h。
所述g步骤是将离心后得到的上清液减压浓缩，回收乙醇，然后将浓缩液加热至90～98℃，保温10～15分钟后，再将浓缩液冷却至30℃以下或干燥得到蛤营养保健调味品。
本发明是以美洲帘蛤为原料，生产方法操作简单，所采用的复合酶解，有利于多糖的溶出，调节离子浓度和电荷(酸碱中和及添加氯化钠)，有利于多糖的沉淀，比单一乙醇沉淀提取的粗多糖得率及纯度高；复合酶解的同时还可以得到抗氧化的保健成分和调味成分，既提供了美洲帘蛤多糖产品，又综合利用了副产物，提高了美洲帘蛤的附加值。
具体实施方式：
实施例1：
a.选取新鲜或活的美洲帘蛤，洗净后取肉，采用组织捣碎机捣碎，得到蛤肉糜制品；
b.蛤肉糜制品与水按质量比为1∶1～3匀浆，得到蛤肉糜浆；
c.向蛤肉糜浆中加入木瓜蛋白酶，酶活力单位为100万u/g，加酶量为蛤肉质量的4.0～8.0％，用1～4N氢氧化钠或盐酸调节pH6.0～7.0，在温度为55～60℃条件下酶解1～5h，得到蛤肉酶解液A；
d.将得到蛤肉酶解液A采用风味酶进一步酶解，采用1～4N氢氧化钠或盐酸调节蛤类酶解初液的pH至6.5～7.0，加入酶活力500LAPU/克的风味酶，加酶量为蛤肉质量的0.25～1.0％，在温度为45～50℃条件下，酶解1～3h，得蛤肉酶解液B；
e.向蛤肉酶解液B中加入与c和d步骤等体积等当量的盐酸或氢氧化钠溶液，以中和整个酶解过程中音调节pH值时所添加的氢氧化钠或盐酸溶液，得到蛤肉酶解中和液；
f.将蛤肉酶解中和液浓缩至蛋白含量为3～10％，离心去沉淀后，添加食盐，使食盐的浓度达到1～2％，得到蛤肉酶解盐溶液；
g.向得到的蛤肉酶解盐溶液中加入3～7倍体积的无水乙醇，摇匀后，在1～6℃下静置12～24小时，采用8000～12000转/分钟离心15～30分钟，得到上清液和沉淀两部分，将沉淀物经过丙酮洗涤，用Sevag试剂脱蛋白后，装入截留分子量为6000Da的透析袋中透析24h，得到粗多糖；
h.将所得的粗多糖过DEAE～52纤维素离子交换柱，先用0.02mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液洗脱，再以0～2mol/L NaCl溶液进行梯度洗脱，流速为1～2mL/min，采用苯酚-硫酸法跟踪测定多糖，收集单一糖峰组分；
i.将得到的单一糖峰组分，采用Sephadex-G100凝胶层析柱作进一步分离纯化，用蒸馏水洗脱，流速为0.2mL/min，采用苯酚-硫酸法跟踪测定多糖，用自动收集器收集单一糖峰组分；
j.将收集的单一糖峰组分进行浓缩，冻干，即得到美洲帘蛤多糖。
提纯后的多糖得率为1.6％(干物质)，采用苯酚-硫酸法测定的多糖产品纯度为87％。
实施例2：
除c步骤，均同实施例1。实施例2的c步骤是加入酶活力单位为2.4AU/克的碱性蛋白酶，加酶量为蛤肉质量的1.0～1.5％，用1～4N氢氧化钠或盐酸调节pH7.5～8.0，在温度为55～60℃条件下酶解1～2h。
提纯后的多糖产品得率为2.7％(干物质)，采用苯酚-硫酸法测定的多糖产品纯度为84％。
实施例3：
除c步骤，均同实施例1或实施例2。实施例3的c步骤是酶活力单位为1.5AU/克的复合蛋白酶，加酶量为蛤肉质量的1.0～1.5％，用1～4N盐酸调节pH6.0～6.5，在温度为55～60℃条件下酶解3～5h。
提纯后的多糖产品得率为2.9％(干物质)，采用苯酚-硫酸法测定的多糖产品纯度为85％。
实施例4：
其余步骤均同实施例1或实施例2或实施例3，只是将g步骤离心后得到的上清液减压浓缩，回收乙醇，然后将浓缩液加热至90～98℃，保温10～15分钟后，迅速将浓缩液冷却至30℃以下，得到液体蛤营养保健调味品，或干燥后得到蛤固体营养保健调味品。
采用凯氏定氮法测定的液体蛤营养保健调味品中的蛋白质含量为3～9％，甲醛滴定法测定的氨基态氮含量为1.2～3.8g/100ml；采用凯氏定氮法测定的固体营养保健调味品中的蛋白质含量为68～73％，采用分光光度法测定的清除DPPH自由基的清除率为21～44％。

Claims (6)

1.一种美洲帘蛤多糖的制备方法，其特征在于依次按以下步骤进行：
a.选取鲜活的美洲帘蛤，洗净后取肉，采用组织捣碎机捣碎，得到蛤肉糜制品；
b.蛤肉糜制品与水按质量比为1∶1～3匀浆，得到蛤肉糜浆；
c.向蛤肉糜浆中加入木瓜蛋白酶或碱性蛋白酶或复合蛋白酶，采用1～4N氢氧化钠或盐酸调节pH，酶解1～5小时，得到蛤肉酶解液A；
d.将得到蛤肉酶解液A采用1～4N氢氧化钠或盐酸调节pH，用风味酶进一步酶解1～3h，得蛤肉酶解液B；
e.向蛤肉酶解液B中加入与c和d步骤等体积等当量的盐酸或氢氧化钠溶液，得到蛤肉酶解中和液；
f.将蛤肉酶解中和液浓缩至蛋白含量为3～10％，离心去沉淀后，添加食盐，使食盐终浓度达到1～2％，得到蛤肉酶解盐溶液；
g.向得到的蛤肉酶解盐溶液中加入3～7倍体积的无水乙醇，摇匀后，在1～6℃下静置12～24小时，采用8000～12000转/分钟离心15～30分钟，得到上清液和沉淀两部分；将沉淀物用丙酮洗涤，用Sevag试剂脱蛋白后，装入截留分子量为6000Da的透析袋中透析24h，得到粗多糖；
h.将所得的粗多糖过DEAE-52纤维素离子交换柱，先用0.02mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液洗脱，再以0～2mol/L NaCl溶液进行梯度洗脱，流速为1～2mL/min，采用苯酚～硫酸法跟踪测定多糖，收集单一糖峰组分；
i.将得到的单一糖峰组分，采用Sephadex-G100凝胶层析柱作进一步分离纯化，用蒸馏水洗脱，流速为0.2mL/min，采用苯酚-硫酸法跟踪测定多糖，用自动收集器收集单一糖峰组分；
j.将收集的单一糖峰组分进行浓缩，冻干，即得到美洲帘蛤多糖。
2.根据权利要求1所述的美洲帘蛤多糖的制备方法，其特征在于所述c步骤是加入酶活力单位为100万u/g的木瓜蛋白酶，加酶量为蛤肉质量的4.0～8.0％，用1～4N氢氧化钠或盐酸调节pH6.0～7.0，在温度为55～60℃条件下酶解1～5h。
3.根据权利要求1所述的美洲帘蛤多糖的制备方法，其特征在于所述c步骤是是加入酶活力单位为2.4AU/克的碱性蛋白酶，加酶量为蛤肉质量的1.0～1.5％，用1～4N氢氧化钠或盐酸调节pH7.5～8.0，在温度为55～60℃条件下酶解1～2h。
4.根据权利要求1所述的美洲帘蛤多糖的制备方法，其特征在于所述c步骤是加入酶活力单位为1.5AU/克的复合蛋白酶，加酶量为蛤肉质量的1.0～1.5％，用1～4N盐酸调节pH6.0～6.5，在温度为55～60℃条件下酶解3～5h。
5.根据权利要求1所述的美洲帘蛤多糖的制备方法，其特征在于所述d步骤是采用1～4N氢氧化钠或盐酸调节蛤类酶解液A的pH至6.5～7.0，加入酶活力500LAPU/克的风味酶，加酶量为蛤肉质量的0.25～1.0％，在温度为45～50℃条件下，酶解1～3h。
6.根据权利要求1所述的美洲帘蛤多糖的制备方法，其特征在于所述g步骤是将离心后得到的上清液减压浓缩，回收乙醇，然后将浓缩液加热至90～98℃，保温10～15分钟后，再将浓缩液冷却至30℃以下或干燥得到蛤营养保健调味品。
CN200910249063XA 2009-12-31 2009-12-31 美洲帘蛤多糖的制备方法 Active CN101736051B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN200910249063XA CN101736051B (zh) 2009-12-31 2009-12-31 美洲帘蛤多糖的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN200910249063XA CN101736051B (zh) 2009-12-31 2009-12-31 美洲帘蛤多糖的制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101736051A true CN101736051A (zh) 2010-06-16
CN101736051B CN101736051B (zh) 2013-04-17

Family

ID=42460081

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN200910249063XA Active CN101736051B (zh) 2009-12-31 2009-12-31 美洲帘蛤多糖的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN101736051B (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102090672A (zh) * 2010-09-06 2011-06-15 山东好当家海洋发展股份有限公司 一种花蛤营养液及其制备方法
CN102125199A (zh) * 2010-11-24 2011-07-20 广东海洋大学 一种具有辅助降血脂功能的蛤类多糖
CN103694367A (zh) * 2013-12-18 2014-04-02 江南大学 一种具有抗氧化活性文蛤多糖的提取及应用方法
CN109400747A (zh) * 2018-12-13 2019-03-01 辽宁阿里郎生物工程股份有限公司 一种黄蚬子护肝多糖提取方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1768765A (zh) * 2005-10-28 2006-05-10 大连水产学院 牡蛎抗氧化肽保健品的制备方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1768765A (zh) * 2005-10-28 2006-05-10 大连水产学院 牡蛎抗氧化肽保健品的制备方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
吴红棉等: "波纹巴非蛤氨基多糖的分离纯化及其理化性质的初步研究", 《食品与发酵工业》 *
尹华等: "文蛤多糖的提取及含量测定", 《中国海洋药物杂志》 *
李志: "牡蛎多糖的分离纯化及生物学活性研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102090672A (zh) * 2010-09-06 2011-06-15 山东好当家海洋发展股份有限公司 一种花蛤营养液及其制备方法
CN102090672B (zh) * 2010-09-06 2013-09-11 山东好当家海洋发展股份有限公司 一种花蛤营养液及其制备方法
CN102125199A (zh) * 2010-11-24 2011-07-20 广东海洋大学 一种具有辅助降血脂功能的蛤类多糖
CN103694367A (zh) * 2013-12-18 2014-04-02 江南大学 一种具有抗氧化活性文蛤多糖的提取及应用方法
CN109400747A (zh) * 2018-12-13 2019-03-01 辽宁阿里郎生物工程股份有限公司 一种黄蚬子护肝多糖提取方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN101736051B (zh) 2013-04-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103255186B (zh) 鲍鱼多糖、脂质和蛋白肽的联产制备方法
CN103992384B (zh) 一种大黄鱼鱼骨胶原肽及其制备方法和用途
CN104774886B (zh) 一种无过敏原燕麦β-葡聚糖的制备方法
CN100548150C (zh) 椰子提取物的制备方法
CN101348529B (zh) 一种枸杞多糖的提取分离方法
CN102994598B (zh) 丙氨酸和亮氨酸含量高的弱苦味玉米低聚肽及其制备方法
CN104031158A (zh) 一种从海带中提取硫酸酯多糖的工艺
CN101851300A (zh) 硫酸软骨素提取工艺
CN101736051B (zh) 美洲帘蛤多糖的制备方法
CN102911990A (zh) 一种利用鸭血生产小分子血肽的方法
CN110916198A (zh) 一种利用黄秋葵发酵酒酒渣同时制备果胶多糖和黏性糖蛋白的方法
CN111560412A (zh) 一种从燕窝中同时提取燕窝多肽和燕窝多糖的方法
CN104366640A (zh) 一种黑木耳多糖饮料的制备方法
CN109943612B (zh) 一种酶解鲢鱼鱼鳞生产高活性鱼糜及制品抗冻剂的方法
CN106349398A (zh) 一种菊苣菊粉的提取方法
CN103130904A (zh) 一种虾夷扇贝下脚料高值化利用的方法
CN103710415A (zh) 一种从玉米麸质水中制备玉米多肽的方法
CN102994584A (zh) 利用鸭血生产血红素铁的方法
CN107628944B (zh) 从百香果果壳中提取低酯果胶和柠檬酸钙的方法和系统
CN105483194A (zh) 一种利用罗非鱼鱼排碎肉制备高f值寡肽的方法
CN107164441A (zh) 一种提高干海参蛋白与多糖提取率的方法
CN104829501A (zh) 大黄蚬水煮液提取牛磺酸的方法
CN105566512A (zh) 一种柿果果胶的提取方法
CN103524636A (zh) 一种褐蘑菇多糖的制备方法
CN112210022B (zh) 一种低甲氧基山楂果胶的制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
C56 Change in the name or address of the patentee
CP01 Change in the name or title of a patent holder

Address after: Heishijiao street Shahekou Dalian District 116000 Liaoning province No. 52

Patentee after: DALIAN OCEAN University

Address before: Heishijiao street Shahekou Dalian District 116000 Liaoning province No. 52

Patentee before: Dalian Fisheries University

TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20161010

Address after: 118000, six small village, Xincheng District, Dandong, Liaoning, Donggang

Patentee after: LIAONING ANDE FOOD Co.,Ltd.

Address before: Heishijiao street Shahekou Dalian District 116000 Liaoning province No. 52

Patentee before: Dalian Ocean University