CN101721515B - 一种中药组合物在制备治疗手口足病药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种中药药物制剂的用途,具体涉及一种由青蒿、栀子、金银花组成的中药组合物在制备治疗手口足病药物中的应用。
Description
技术领域:
本发明涉及一种中药药物制剂的用途,具体涉及一种中药组合物在制备治疗手口足病药物中的应用。
技术背景:
手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)是由肠道病毒引起的传染病,多发生于婴幼儿,可引起手、足、口腔等部位的疱疹,个别患者可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑炎等并发症。引发手足口病的肠道病毒有20多种(型),柯萨奇病毒A组的16、4、5、9、10型,B组的2、5型,以及肠道病毒71型均为手足口病较常见的病原体,其中以柯萨奇病毒A16型(Cox A16)和肠道病毒71型(EV71)最为常见。
传染源:人是本病的传染源,患者、隐性感染者和无症状带毒者为该病流行的主要传染源。流行期间,患者是主要传染源。在急性期,病人粪便排毒3~5周,咽部排毒1~2周。健康带毒者和轻型散发病例是流行间歇和流行期的主要传染源。人和动物或宠物之间不会互相传播。
传播途径:手足口病主要是通过人群间的密切接触进行传播的。患者咽喉分泌物及唾液中的病毒,可通过空气飞沫传播。唾液、疱疹液、粪便污染的手、毛巾、手绢、牙杯、玩具、食具、奶具以及床上用品、内衣等,通过日常接触传播,亦可经口传播。与患者同一室最易感染。接触被病毒污染的水源,也可经口感染,并常造成流行。门诊交叉感染和口腔器械消毒不严也可造成传播。
流行方式:手足口病常呈暴发流行后散在发生,该病流行期间,幼儿园和托儿所易发生集体感染。家庭也有此类发病集聚现象。医院门诊的交叉感染和口腔器械消毒不严格,也可造成传播。此病传染性强,传播途径复杂,流行强度大,传播快,在短时间内即可造成大流行。
临床表现:手足口病是一种肠道病毒病,具有肠道病毒感染的共同特征。从最常见的无症状或仅有轻度不适,至严重的并发症甚至死亡均可发生。潜伏期一般2~7d,没有明显的前驱症状;多数病人突然起病。约半数病人于发病前1~2d或发病的同时有发热,多在38℃左右。主要侵犯手、足、口、臀四个部位;因为疹子不像蚊虫咬、不像药物疹、不像口唇牙龈疱疹、不像水痘所以又称四不像;而临床上更有不痛、不痒、不结痂、不结疤的四不特征。部分患者初期有轻度上感症状,如咳嗽、流涕、恶心、呕吐等。由于口腔溃疡疼痛,患儿流涎拒食。口腔粘膜疹出现比较早,起初为粟米样斑丘疹或水疱,周围有红晕,主要位于舌及两颊部,唇齿侧也常发生。手、足等远端部位出现或平或凸的班丘疹或疱疹,皮疹不痒,斑丘疹在5d左右由红变暗,然后消退;疱疹呈圆形或椭圆形扁平凸起,内有混浊液体,长径与皮纹走向一致,如黄豆大小不等,一般无疼痛及痒感,愈合后不留痕迹。
本发明涉及的中药组合物的原药材组成为:青蒿6~25重量份、金银花3~15重量份、栀子3~12重量份。本中药组合物功能主治为清热,疏风,解毒,用于上呼吸道感染(外感风热证)所致的高热、微恶风寒、头身痛、咳嗽、痰黄等症。涉及本中药组合物的组成、制备方法与剂型以及质量控制方法等内容在中国发明专利02114995.X,200410000134.X,200510134299.0中有较为详细的描述。
手足口病在中医里属于“温病、疫病”范畴,其病为外感时邪,内蕴湿热所致。中医对清热解毒、化湿效用原理的有效利用及辨证论治,使中成药在手足口病的早期防治中具独特疗效,相较于尚无特效药的西医具有明显的优势,还能有效弥补目前西药领域尚无疫苗的缺陷。市面上普遍使用的治疗手足口病的中成药主要有板蓝根、银翘散等。
发明人在临床实践中意外地发现,本中药组合物对手足口病具有非常好的治疗效果,对该药进行了药理和临床研究,证明疗效确切。
发明内容:
本发明提供了一种由青蒿、栀子、金银花组成的中药组合物在制备用于治疗手口足病药物中的应用。
手足口病主要流行于5月~8月份,此时春夏时节,风热当令,小儿肺常不足,脾常不足,皮毛失固,热毒从口鼻而入,温热脾湿结合,诱发于外则发热;风热上扰则咽颊红肿;肺气失宣则咳嗽;热毒与脾湿结合湿热蒸盛,邪犯肺脾,脾主四肢,故见四肢手足疱疹。
中医治疗原则,疏风散热,利湿解毒。本中药组合物主要由青蒿、金银花、栀子组成,青蒿苦寒清热,为治暑温外感发热之要药;金银花辛凉清透退热,为风热外感温病之圣药;栀子苦寒清热利湿,善治郁热及湿热内蕴之证,三药合用,解表化湿,清热解毒,表里双解,故取得良好的疗效。实验研究表明,本中药组合物具有明显的抗病毒和抗菌作用,对多种呼吸道病毒株和肠道病毒株致培养细胞病变有明显的抑制作用,对多种细菌菌株的生长亦有一定的抑制作用,有较好的抗炎、解热作用,能有效地增加机体的免疫功能,提高抗病能力。
具体实施方式:
为了更好地理解本发明,发明人提供以下研究资料,说明本发明的技术效果,但下述实验和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
实施例1:
本中药组合物注射液在体外对EV71病毒的抑制和灭活效果的观察
研究样品:本中药组合物注射液
研究目的:本研究通过体外实验,观察本中药组合物注射液对EV71病毒感染横纹肌肉瘤传代细胞(RD-A细胞)的作用。
1.材料和方法
1.1材料:
EV71病毒、RD-A细胞、胰酶(DT)2.5mg/mL、DMEM培养基、青链双抗(P,104IU/ml;S,104ug/ml)、NaHCO3(7.5%)、谷氨酰胺(Glu,0.03%)、胎牛血清(购自GIBCO公司)。
1.2方法:
(1)细胞培养传代:
RD-A以DMEM培养液(10%胎牛血清,1%PS,1%Glu,1%NaHCO3),37℃,5%CO2培养,5天传代。细胞接入96孔培养板,37℃,5%CO2培养48小时,至细胞铺满75%单层时换2%维持液待用。
(2)药液准备:
本中药组合物注射液原液使用前摇匀,调整PH值至7.0,置4℃冰箱储存备用。实验分两组:
A组:本中药组合物注射液使用前用无血清维持液(DMEM培养液、1%PS,1%Glu,1%NaHCO3),从1:100开始以2X倍比稀释(即1:100,1:200,1:400,1:800,1:1600,1:3200,1:6400,共7个稀释度)进行细胞实验。
B组:本中药组合物注射液使用前用无血清维持液(DMEM培养液、1%PS,1%Glu,1%NaHCO3),从1:10开始以2X倍比稀释(即1:10,1:20,1:40,1:80,1:160,1:320,1:640,共7个稀释度)进行细胞实验。
(3)病毒培养及悬液制备
将含EV71病毒的细胞培养物反复冻融3次,取0.2ml加至上述已经换好2%维持液的RD-A细胞,37℃,5%CO2培养。当细胞出现病变(CPE)达(+++)后,冻融3次,—70℃冻存备用。
(4)组织培养半数感染量(TCID50)测定
取EV71病毒培养液,用维持液以10X倍比稀释成10-1,10-2,10-3,10-4,10-5,10-6个不同稀释度。96孔培养板中单层RD-A细胞换2%维持液,然后接入不同稀释度的病毒液,每孔接种50μl,每个稀释度接种8孔,37℃,5%CO2培养7d,每日观察细胞病变,7d后判定结果。取100TCID50的病毒液用于试验。
(5)药液毒性试验
取96孔培养板中RD-A单层细胞,吸去培养液,经Hank’s液洗2次。分别加入不同稀释度的本中药组合物注射液100μl,,37℃,5%CO2培养,观察药液对细胞的影响。
(6)药物作用试验
A组:本中药组合物注射液在细胞中抑制EV71病毒复制的药效测定
RD以20万/ml浓度接种96孔培养板,37℃培养48小时培养至细胞单层,弃掉培养液,加入100TCID50的EV71病毒稀释液,同时设正常细胞对照和病毒对照,37℃,5%CO2吸附1小时,弃掉病毒液,加入不同浓度的验证药物,药物以对细胞的最大无毒浓度2倍稀释,1:100~1:6400共7个稀释度,每浓度8孔,每孔100μl,同时病毒对照和正常细胞对照孔换维持液,37℃,5%CO2培养,每24小时在倒置显微镜下观察细胞CPE变化并进行记录(以25%以下细胞CPE变化为“+”,26%~50%以下细胞CPE变化为“++”,51%~75%以下细胞CPE变化为“+++”,76%~100%以下细胞CPE变化为“++++”),每天更换新鲜的不同浓度的验证药物,持续7天。
B组:本中药组合物注射液体外对EV71病毒的灭活作用的药效测定
以100TCID50EV71病毒与不同浓度验证药物(1:10~1:640,2倍稀释,共7个稀释度)混合,同时设立病毒对照组,即以100TCID50EV71病毒与维持液混合,上述混合液于37℃作用1h。
将上述混合液加至96孔板中已培养成单层的RD-A细胞,37℃,5%CO2吸附1h。随后弃液,更换维持液(包括病毒对照和细胞对照组),于37℃,5%CO2培养7天。每24小时在倒置显微镜下观察细胞CPE变化并进行记录(方法同A组)。
2.结果
2.1药液对传代细胞的影响
本中药组合物稀释至320倍后对传代细胞生长没有影响,细胞形态不发生改变,本研究将此稀释度定为无毒性稀释度。
表1药液对细胞的作用
2.2A组:本中药组合物注射液在细胞中抑制EV71病毒复制的药效测定
细胞接种EV71病毒株,吸附1h后,加不同稀释度药物维持液,观察病变7天,本中药组合物注射液1:200较病毒对照组延迟病变出现一天,但同时细胞生长受到抑制,相对细胞对照稀少;1:400抑制病变发展。
表2药物在细胞中抑制EV71病毒复制的作用
2.3B组:本中药组合物注射液体外对EV71病毒的灭活作用的药效测定
不同稀释度的本中药组合物注射液药液(1:10,1:20,1:40,1:80,1:160,1:320,1:640),与EV71毒株1:1混合作用1h后,接种细胞,1:10~1:160较病毒对照组延迟病变出现一天。1:10~1:80组细胞生长受到抑制,细胞相对细胞对照稀少1:160组相对细胞对照无明显变化。
表3药物体外对EV71病毒的灭活作用
3.结论
1、本中药组合物注射液在细胞实验中,1:200~1:400稀释度有抑制EV71病毒复制的效果;
2、本中药组合物注射液在体外1:10~1:160稀释度与100TCID50EV71病毒作用1小时,有部分灭活病毒的作用。
实施例2:
本中药组合物注射液治疗儿童手足口病41例临床疗效观察
为了观察本中药组合物注射液在治疗儿童手足口病的临床疗效和不良反应,以评价本中药组合物注射液在儿童手足口病中使用的利益和风险,为改进给药方法和扩大适应症提供临床依据。
1.资料和方法:
1.1临床资料41例儿童手足口病来源于2008年5月18日至5月30日期间,医院门诊就诊的患儿。
1.241例患儿中,男25例、女16例。年龄9.5岁1例,6.5岁1例,其余的均为1岁~4.5岁患儿。发热26例,其中高热3例(体温≥39℃)。无发热患儿15例。
2.疗程、给药途径及方法:
疗程:4~7天。
给药途径:静脉给药。
给药方法:本中药组合物注射液(规格为每支装10ml)+皮疹局部处理+维生素。
本中药组合物注射给药,1~2岁,一日本中药组合物注射液0.5~0.8mL/kgd-1,以5%葡萄糖注射液100mL稀释后静脉滴注,1次/日。3~10岁,一日本中药组合物注射液10mL以5%葡萄糖注射液150mL稀释后静脉滴注1次/日。
有明显口腔疼痛不能进食的患儿,必要时补充液体和电解质。
3.有效性与安全性的评价:
3.1疗效判断标准:
痊愈:用药三天后,丘疹、疱疹和溃疡基本消失,体温恢复正常,卡他症状(包括咳嗽、流涕、打喷嚏、鼻塞等上呼吸道症状)基本消失。
显效:用药三天后,丘疹、疱疹和溃疡好转,体温下降大于等于1℃,卡他症状大部分消失。
有效:用药三天后,丘疹、疱疹和溃疡好转,体温下降大于等于0.5℃,卡他症状部分消失。
无效:未达到以上标准者。
3.2安全性评价:
1级:安全,无任何不良反应。
2级:比较安全,如有不良反应,不需做任何处理可继续给药。
3级:有安全性问题,有中等程度的不良反应,做处理后可继续给药。
4级:因不良反应中止用药。
4.结果:
41例儿童手足口病患儿经采用本中药组合物注射液静脉滴注治疗,发热多在1~2天明显缓解,疱疹及卡他症状多在2~3天明显减轻,4~5天症状消失,无发展为重症合并心脑肾等受损病例。治愈27例,占65.9%,显效14例,占34.1%。总有效率100%。治疗时间最短4天,最长7天,平均5天。
5.结论:
通过上述41例临床观察分析,本中药组合物注射液在治疗儿童手足口病时,退热明显,用药2~3天后疱疹及卡他症状明显缓解,说明本中药组合物具有明显的抗肠道病毒感染,防止临床并发症的作用,安全性好,是儿童手足口病治疗的首选药物,可广泛用于儿童感染性疾病治疗。
实施例3:
本中药组合物注射液治疗手足口病33例临床观察
1.一般资料
1.1性别
观察组33例:男18例女15例;
1.2年龄
观察组33例:最大7岁,最小10个月,其中3岁以下14例,3岁以上19例;
2.临床资料
2.1体温
观察组:最高体温39.2℃,平均37.6℃;
2.2疱疹
观察组:手、足部疱疹33例,都具备典型的手足口病临床特征;
2.3咽颊红肿
观察组33例:咽颊红肿者33例;
2.4咳嗽
观察组33例:咳嗽者11例;
2.5鼻塞
观察组33例:有鼻塞者5例;
2.6流涕
观察组33例:流涕者9例;
2.7并发症
观察组33例:无;
3.诊断标准
按手足口病西医诊断标准:
(1)全年均可发病,好发于夏秋季节,当地托幼机构及周围人群有手足口病流行,发病前患者有直接或间接的接触史。
(2)多为5岁以下婴幼儿。
(3)潜伏期一般2~7天。
(4)手、足、口皮肤、黏膜出现典型斑丘疹及疱疹样损害,并伴有卡他性症状。
(5)合并症:心肌炎、脑炎、脑膜炎、驰张性麻痹、肺水肿等。
4.治疗方案
一般治疗:休息,多饮水,清淡饮食,室内空气消毒;
药物治疗:观察组33例:本中药组合物注射液(规格为每支装10ml)0.5mL/kg加入0.9%氯化钠中稀释静滴,每日一次,疗程5天;
5.结果
5.1疱疹消退时间及退烧时间
疱疹消退时间(日)X±S 退烧时间(小时)
观察组(33例)3.06±1.94 观察组(8例)2.90±0.75
5.2咽颊红肿消退时间
咽颊红肿消退时间(日) X±S
观察组(33例) 3.85±1.15
5.3止咳时间
止咳时间(日) X±S
观察组(11例) 2.55±2.45
5.5并发症
无
6.结论
临床观察表明,本中药组合物在退烧、疱疹消退方面疗效显著,在消除咽部疱疹、红肿方面均取得很好的疗效,这与中医治疗原则相吻合,说明本中药组合物具有退烧,抑制病毒复制,防止临床并发症的作用,治疗手足口病具有良好的临床应用前景。
实施例4:
本中药组合物注射液治疗儿童手足口病30例临床疗效观察
为了观察本中药组合物注射液在治疗儿童手足口病的临床疗效和不良反应,以评价本中药组合物注射液在儿童手足口病中使用的利益和风险,改进给药方法和扩大适应症提供临床依据。
1.资料和方法:
1.1临床资料:30例儿童手足口病来源于2008年5月26日至6月8日期间,门诊及住院部就诊的患儿。
1.230例患儿中,男16例、女14例。最大年龄7岁,最小年龄1岁,平均年龄为3.5岁,发热12例,临床表现中21例患儿均有咽部充血和手足皮疹;另外9例有咽部溃疡的患儿仅仅有手部皮疹,双足无皮疹。
2.疗程、给药途径及方法:
2.1疗程:4~7天。
2.2给药途径:静脉给药。
2.3给药方法:本中药组合物注射液+皮疹局部处理+维生素。
本中药组合物注射液注射给药,1~2岁,一日本中药组合物注射液0.5~0.8mL/kgd-1,以5%葡萄糖注射液100mL稀释后静脉滴注,1次/日。3~10岁,一日本中药组合物注射液10mL以5%葡萄糖注射液150mL稀释后静脉滴注1次/日。
有明显口腔疼痛不能进食的患儿,必要时补充液体和电解质。
3.有效性与安全性的评价:
3.1疗效判断标准:
痊愈:用药三天后,丘疹、疱疹和溃疡基本消失,体温恢复正常,卡他症状基本消失。
显效:用药三天后,丘疹、疱疹和溃疡好转,体温下降大于等于1℃,卡他症状大部分消失。
有效:用药三天后,丘疹、疱疹和溃疡好转,体温下降大于等于0.5℃,卡他症状部分消失。
无效:未达到以上标准者。
3.2安全性评价:
1级:安全,无任何不良反应。
2级:比较安全,如有不良反应,不需做任何处理可继续给药。
3级:有安全性问题,有中等程度的不良反应,做处理后可继续给药。
4级:因不良反应中止用药。
4.结果:
30例儿童手足口病患儿经采用本中药组合物注射液静脉滴注治疗,治疗后第一天12例发热患儿体温均有明显下降,降至正常体温的有7例,另外5例体温高峰值也下降。治疗后第三天又有4例患儿体温降至正常。治疗后第四天体温都降至正常。发热多在1~2天明显缓解,疱疹及卡他症状多在2~3天明显减轻,4~5天症状消失,无发展为重症合并心脑肾等受损病例。治愈20例,占66.67%,显效10例,占33.33%。总有效率100%。治疗时间最短3天,最长7天,平均5天。
5.结论:
通过上述30例临床观察分析,本中药组合物注射液在治疗儿童手足口病时,退热明显,用药2~3天后疱疹及卡他症状明显缓解,同时,在治疗期间30例患儿都没有出现头昏、寒颤、皮疹增多等不良反应。经过30例的临床治疗观察更进一步证实了本中药组合物在手足口病的治疗上是安全有效的。
Claims (1)
1.一种由青蒿、栀子、金银花组成的中药组合物在制备用于治疗手口足病药物中的应用,其特征在于该中药组合物中各原料药的比例为:青蒿6~25重量份、金银花3~15重量份、栀子3~12重量份。
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Amma | Calcarea Carbonicum |
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