CN101701200A - 一株阴沟肠杆菌及其应用 - Google Patents
一株阴沟肠杆菌及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101701200A CN101701200A CN200910232710A CN200910232710A CN101701200A CN 101701200 A CN101701200 A CN 101701200A CN 200910232710 A CN200910232710 A CN 200910232710A CN 200910232710 A CN200910232710 A CN 200910232710A CN 101701200 A CN101701200 A CN 101701200A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- substratum
- enterobacter cloacae
- putrescine
- enterobacteria
- liquid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及保藏号为CGMCC No.3162的一株阴沟肠杆菌,菌落在VRBDA琼脂培养基上,30℃培养24h,红白色菌落,1.0-1.5×0.3-0.6μm,短杆,革兰氏阴性,发酵葡萄糖产酸,该菌株在普通显微镜下呈杆状。应用时,菌落接种于装有A培养基的试管中,37℃静置培养24小时,反复活化五次后,菌液接种到B培养基中37℃静止培养4天,将菌液10000转离心10分钟,取上清液,获得高浓度腐胺液,其中,A培养基为加入0.1%鸟氨酸的肠细菌增菌肉汤培养基;B液体培养基为加入0.005%磷酸吡哆醛+0.1%鸟氨酸的肠细菌增菌肉汤培养基。
Description
技术领域
本发明涉及一株微生物及其应用,属于生物技术领域。
背景技术
腐胺的化学名称为1,4-丁二胺,生物化学试剂和药物中间体。也是尼龙-46、尼龙-6及尼龙-66的原料,尤其是尼龙-46广泛用于汽车、摩托车的零部件材料,以代替金属;尼龙-66用于电子产品的材料;酸性气体吸收剂。目前,制备方法有四种:(1)丙烯腈与氰化氢反应,生成乙二氰,在催化剂作用下加氢而得;(2)以吡咯为原料,在碳酸钠存在下与盐酸羟胺反应,生成丁二肟,再在钠汞齐作用下,在无水乙醇中加热而得;(3)以2,5-二氨基戊酸为原料,加热催化脱羧而得。由此可见,目前腐胺的生产方式能源消耗量大,对环境也有污染。我国腐胺需求量大,但国内企业生产能力和产品质量有限,从国外进口价格很高。
通过微生物代谢产生腐胺(鸟氨酸在微生物产生的鸟氨酸脱羧酶的作用下,脱羧产生腐胺),获得高浓度腐胺液,然后分离腐胺,可降低腐胺的生产成本和能源消耗,也成为研究的主要课题。
发明内容
本发明的目的在于:针对目前腐胺生产存在的问题,提供一种微生物并通过该微生物代谢产生腐胺,获得高浓度腐胺液。
本发明的目的是这样实现的:一株阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)xlcad001,其特征在于:保藏号为CGMCC No.3162,菌落在VRBDA琼脂培养基上,30℃培养24h,红白色菌落,1.0-1.5×0.3-0.6μm,短杆,革兰氏阴性,发酵葡萄糖产酸,该菌株在普通显微镜下呈杆状,该菌株16SrDNA的Genbank登陆号为GQ890353。
在本发明中,VRBDA培养基为:酵母浸膏3g,蛋白胨7g,胆盐1.5g,氯化钠5g,乳糖10g,中性红0.03g,结晶紫0.002g,琼脂15g,蒸馏水1000ml,PH值7.3-7.5。
一株保藏号为CGMCC No.3162的阴沟肠杆菌的应用,其特征在于:从斜面挑取菌落接种于装有A培养基的试管中,37℃静置培养24小时,试管中的接种量为105cfu/ml。在相同培养基反复活化五次后;将最后活化后的菌液接种到B培养基中37℃静止培养4天,接种量为106cfu/ml;将培养后的菌液10000转离心10分钟,取上清液,获得高浓度腐胺液,高浓度腐胺液的腐胺含量为4452.74μg/ml;
所述的A培养基为加入0.1%L-鸟氨酸的肠细菌增菌肉汤培养基;所述的B液体培养基为加入0.005%磷酸吡哆醛和0.1%L-鸟氨酸的肠细菌增菌肉汤培养基。
在本发明中,肠细菌增菌肉汤培养基为:蛋白胨10g,葡萄糖5g,磷酸氢二钾2g,磷酸二氢钠8g,蒸馏水1000mL,在115℃灭菌15min,pH值7.2~7.4。
本发明的优点在于:由于阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)xlcad001产腐胺能力强,在上述方法制得的培养液中,腐胺含量可达到4452.74μg/ml,用此方法生产腐胺将极大降低生产成本和减少污染。
附图说明
图1是阴沟肠杆菌在普通显微镜下的照片;
图2是标样的高效液相色谱图;
图3是高效液相检测阴沟肠杆菌培养液的色谱图;
图4是高效液相检测腐胺的标准曲线图。
具体实施方式
实施例1
菌株的筛选和保藏
培养基
肠道菌增菌肉汤培养基:蛋白胨10g,葡萄糖5g,磷酸氢二钾2g,磷酸二氢钠8g,蒸馏水1000mL,在115℃灭菌15min,pH值7.2~7.4。
下层培养基:蛋白胨5g,酵母膏5g,牛肉膏5g,氯化钠2.5g,葡萄糖0.5g,吐温1g,硫酸镁0.4g,硫酸锰0.03g,磷酸氢二钾2g,柠檬酸三铵2g,碳酸钙0.1g,硫酸亚铁0.04g,维生素B10.01g,磷酸吡哆醛0.05g,琼脂18克,鸟氨酸(115℃灭菌15min);5克,1000ml蒸馏水,pH5.0,在115℃高压灭菌15分钟;
上层培养基:溴甲酚紫0.06g,琼脂20g,1000ml蒸馏水,pH5.0,在121℃灭菌10min;
VRBDA琼脂培养基为:酵母浸膏3g,蛋白胨7g,胆盐1.5g,氯化钠5g,乳糖10g,中性红0.03g,结晶紫0.002g,琼脂15g,蒸馏水1000ml,PH值7.3-7.5。
在无菌条件下取20克传统中式香肠,无菌条件下剪碎后置于装有180ml已灭菌生理盐水的三角瓶中,室温230转摇床摇10分钟,取1ml接种于肠道菌增菌肉汤培养基中,37℃培养24小时,取1ml培养液用9ml生理盐水逐级稀释到10-100cfu/ml浓度,涂布于产腐胺检测下层培养基上,37℃培养48小时。缓慢倾入一薄层上层培养基,10分钟内结果记录完毕,显紫色的菌落为阳性,显黄色为阴性,其中,阳性为能产生腐胺的菌株,阴性为不能产生腐胺的菌株。
挑取阳性菌株,在VRBDA固体培养基纯化三次以上,用肠细菌增生肉汤培养基37℃培养24小时,离心后获得阴沟肠杆菌(Enterobactercloacae)xlcad001菌株。
该菌株的菌落在VRBDA琼脂培养基上,30℃培养24h,红白色菌落,1.0-1.5×0.3-0.6μm,短杆,革兰氏阴性,发酵葡萄糖产酸,该菌株在普通显微镜下呈杆状。
该菌株根据Gen bank比对结果,命名阴沟肠杆菌(Enterobactercloacae)xlcad001,2009年7月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,菌种保藏号为CGMCC No.3162。该菌株16SrDNA的Genbank登陆号为GQ890353。
该菌株加入无菌甘油,在-80℃冰箱保存。
实施例2
高浓度腐胺培养液制备方法
培养基
肠道菌增菌肉汤培养基(同实施例1);
制备方法
从斜面挑取菌落接种于装有A培养基的试管中,37℃静置培养24小时,试管中的接种量为105cfu/ml。在相同培养基反复活化五次后;将最后活化后的菌液接种到B培养基中37℃静止培养4天,接种量为106cfu/ml;将培养后的菌液10000转离心10分钟,取上清液,获得高浓度腐胺液.
所述的A培养基为加入0.1%鸟氨酸的肠细菌增菌肉汤培养基;所述的B液体培养基为加入0.005%磷酸吡哆醛和0.1%鸟氨酸的肠细菌增菌肉汤培养基。
实施例3
腐胺含量检测方法(高效液相检测)
1、生物胺标准溶液的配制
准确称取色胺、苯乙胺、酪胺、尸胺、腐胺、亚精胺和精胺50mg,用0.4mol/L的高氯酸(HClO4)定容至50mL,制成1mg/ml储备液备用。分别取以上标准品储备液,用0.4mol/L HClO4配制成终浓度分别为5.0、10、20、30、40、50μg/ml的标准溶液,避光、4℃冰箱保存。
2、样品溶液的衍生化
取实施例2的样品1mL于5ml容量瓶中,加入200μL的2N NaOH使之呈碱性,然后加入300μL的饱和碳酸氢钠溶液进行缓冲,再加入2ml的丹磺酰氯(dansyl chloride)溶液(浓度为10mg/mL,溶剂为丙酮),然后放置于40℃水浴黑暗中反应处理40min。反应结束后加入100μL的氨水中止反应,去除残留的丹磺酰氯溶液。最后用乙腈定容到5mL。衍生处理后用0.22μm的有机滤膜过滤后,获得样品溶液的衍生物。
3、标准溶液标样的衍生化
分别取5.0、10、20、30、40、50μg/ml的标准溶液样品1mL于5ml容量瓶中,加入200μL的2N NaOH使之呈碱性,然后加入300μL的饱和碳酸氢钠溶液进行缓冲,再加入2ml的丹磺酰氯(dansyl chloride)溶液(浓度为10mg/mL,溶剂为丙酮),然后放置于40℃水浴黑暗中反应处理40min。反应结束后加入100μL的氨水中止反应,去除残留的丹磺酰氯溶液。最后用乙腈定容到5mL。衍生处理后用0.22μm的有机滤膜过滤后,获得六组样品溶液的衍生物。
4、检测方法为:
Agilent 1100检测系统,AgilentZORBAX XDB-C18(4.6×250mm,2,5μm),流速为1mL·min-1,紫外检测波长为254nm,进样量20μL,柱温30℃,流动相A为水,流动相B为乙腈,采用梯度洗脱,洗脱程序见表1。
表1梯度洗脱程序
在图2的生物胺标样的高效液相图中:1为色胺,2为苯乙胺,3为腐胺,4为尸胺,5为组胺,6为酪胺,7为亚精胺,8为精胺。本发明的样品溶液高效液相检测结果如图3所示。由图3可见,样品溶液中含有腐胺。
利用上述的检测方法检测,响应值为24296892.9(参见图4),根据标准曲线计算得到结果为445.274μg/mg,但由于在检测过程中把原样稀释了10倍,所以最终腐胺含量为4452.74ug/mg。
以上各实施例不是对本发明的具体限定。
Claims (4)
1.一株阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae),其特征在于:保藏号为CGMCC No.3162,菌落在VRBDA琼脂培养基上,30℃培养24h,红白色菌落,1.0-1.5×0.3-0.6μm,短杆,革兰氏阴性,发酵葡萄糖产酸,该菌株在普通显微镜下呈杆状,该菌株16S rDNA的Genbank登陆号为GQ890353。
2.根据权利要求1所述的一株阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae),其特征在于:VRBDA琼脂培养基为:酵母浸膏3g,蛋白胨7g,胆盐1.5g,氯化钠5g,乳糖10g,中性红0.03g,结晶紫0.002g,琼脂15g,蒸馏水1000ml,PH值7.3-7.5。
3.一株保藏号为CGMCC No.3162的阴沟肠杆菌的应用,其特征在于:从斜面挑取菌落接种于装有A培养基的试管中,37℃静置培养24小时,试管中的接种量为105cfu/ml。在相同培养基反复活化五次后;将最后活化后的菌液接种到B培养基中37℃静止培养4天,接种量为106cfu/ml;将培养后的菌液10000转离心10分钟,取上清液,获得高浓度腐胺液,高浓度腐胺液的腐胺含量为4452.74μg/ml;
所述的A培养基为加入0.1%L-鸟氨酸的肠细菌增菌肉汤培养基;所述的B液体培养基为加入0.005%磷酸吡哆醛和0.1%L-鸟氨酸的肠细菌增菌肉汤培养基。
4.根据权利要求3所述的一株保藏号为CGMCC No.3162的阴沟肠杆菌的应用,其特征在于:所述的肠细菌增菌肉汤培养基为:蛋白胨10g,葡萄糖5g,磷酸氢二钾2g,磷酸二氢钠8g,蒸馏水1000mL,pH值7.2~7.4,115℃灭菌15min。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2009102327106A CN101701200B (zh) | 2009-11-27 | 2009-11-27 | 一株阴沟肠杆菌及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2009102327106A CN101701200B (zh) | 2009-11-27 | 2009-11-27 | 一株阴沟肠杆菌及其应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN101701200A true CN101701200A (zh) | 2010-05-05 |
CN101701200B CN101701200B (zh) | 2011-11-09 |
Family
ID=42156127
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN2009102327106A Active CN101701200B (zh) | 2009-11-27 | 2009-11-27 | 一株阴沟肠杆菌及其应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN101701200B (zh) |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102286418A (zh) * | 2011-09-16 | 2011-12-21 | 湖南农业大学 | 一种利用木糖和/或葡萄糖发酵生产乙醇的菌 |
CN102787088A (zh) * | 2012-08-07 | 2012-11-21 | 哈尔滨师范大学 | 一株阴沟肠杆菌及其应用 |
CN105925503A (zh) * | 2016-05-17 | 2016-09-07 | 山东省林业科学研究院 | 一株耐盐根际促生阴沟肠杆菌及其应用 |
CN106497809A (zh) * | 2015-09-07 | 2017-03-15 | 粮华生物科技(北京)有限公司 | 一种阴沟肠杆菌、含有该菌的菌剂及其应用和钝化汞的方法 |
CN107118976A (zh) * | 2017-03-31 | 2017-09-01 | 浙江工业大学 | 阴沟肠杆菌及其应用 |
CN111808788A (zh) * | 2020-08-26 | 2020-10-23 | 福建傲农生物科技集团股份有限公司 | 一种屎肠球菌菌粉及其制备方法和应用 |
-
2009
- 2009-11-27 CN CN2009102327106A patent/CN101701200B/zh active Active
Cited By (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102286418A (zh) * | 2011-09-16 | 2011-12-21 | 湖南农业大学 | 一种利用木糖和/或葡萄糖发酵生产乙醇的菌 |
CN102787088A (zh) * | 2012-08-07 | 2012-11-21 | 哈尔滨师范大学 | 一株阴沟肠杆菌及其应用 |
CN102787088B (zh) * | 2012-08-07 | 2013-10-09 | 哈尔滨师范大学 | 一株阴沟肠杆菌及其应用 |
CN106497809A (zh) * | 2015-09-07 | 2017-03-15 | 粮华生物科技(北京)有限公司 | 一种阴沟肠杆菌、含有该菌的菌剂及其应用和钝化汞的方法 |
CN106497809B (zh) * | 2015-09-07 | 2019-05-10 | 粮华生物科技(北京)有限公司 | 一种阴沟肠杆菌、含有该菌的菌剂及其应用和钝化汞的方法 |
CN105925503A (zh) * | 2016-05-17 | 2016-09-07 | 山东省林业科学研究院 | 一株耐盐根际促生阴沟肠杆菌及其应用 |
CN105925503B (zh) * | 2016-05-17 | 2019-05-28 | 山东省林业科学研究院 | 一株耐盐根际促生阴沟肠杆菌及其应用 |
CN107118976A (zh) * | 2017-03-31 | 2017-09-01 | 浙江工业大学 | 阴沟肠杆菌及其应用 |
CN107118976B (zh) * | 2017-03-31 | 2020-04-21 | 浙江工业大学 | 阴沟肠杆菌及其应用 |
CN111808788A (zh) * | 2020-08-26 | 2020-10-23 | 福建傲农生物科技集团股份有限公司 | 一种屎肠球菌菌粉及其制备方法和应用 |
CN111808788B (zh) * | 2020-08-26 | 2022-03-18 | 福建傲农生物科技集团股份有限公司 | 一种屎肠球菌菌粉及其制备方法和应用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN101701200B (zh) | 2011-11-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101701200B (zh) | 一株阴沟肠杆菌及其应用 | |
CN103451133B (zh) | 一种环状芽孢杆菌及其在制备阿魏酸脱羧酶中的应用 | |
CN104762238B (zh) | 一种不产氨基酸脱羧酶高产脲酶的乳酸菌及其应用 | |
CN105838635B (zh) | 利用Pseudomonas fluorescens菌株LZ-4修复六价铬和萘复合污染环境的方法 | |
CN112239738B (zh) | 一株产琥珀酸的大肠杆菌及其应用 | |
CN117887640B (zh) | 一株n-甲基吡咯烷酮降解菌株、菌剂及其应用 | |
CN101701201B (zh) | 一株粪肠球菌及其应用 | |
CN101701202B (zh) | 一株屎肠球菌及其应用 | |
CN113444664A (zh) | 一株产γ-氨基丁酸短乳杆菌及其应用 | |
CN117887641B (zh) | 一株兼具苯胺降解及聚羟基丁酸酯合成能力的菌株及其应用 | |
CN103045499A (zh) | 产酸克雷伯氏菌mow-02-05及其筛选方法和应用 | |
CN115340967A (zh) | 一株耐酒精的鼠李糖乳杆菌及其应用 | |
CN102391970B (zh) | 一种生产2,3-丁二醇的方法及其专用地衣芽孢杆菌 | |
CN101701199B (zh) | 一株产气肠杆菌及其应用 | |
KR20120135450A (ko) | 세라믹 막 분리 배양기 | |
CN109609415B (zh) | 一种甲烷菌及其应用 | |
CN114032187B (zh) | 西藏酸奶来源的马克斯克鲁维酵母菌株及其应用 | |
CN113174342B (zh) | 高效降解氨基甲酸乙酯的菌株及其应用 | |
CN112553113B (zh) | 一株具有耐盐性的克拉夫新鞘氨醇杆菌gbw-hb1906及其应用 | |
CN103555632B (zh) | 一种蜡样芽孢杆菌及其生产组胺的方法 | |
CN115093988A (zh) | 一种复合菌豆瓣酱发酵剂及应用 | |
CN108384738A (zh) | 一株铜绿假单胞菌及其筛选方法与其在秸秆乳酸发酵中的应用 | |
CN108384730A (zh) | 一种副干酪乳杆菌及其在转化合成苯乳酸中的应用 | |
CN1948500A (zh) | 一种功能性甜味剂d-塔格糖的制备方法 | |
CN113830902A (zh) | 脱氮副球菌在去除高盐废水中硝态氮中的应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant |