CN101696201B - 儿茶素类物质的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种儿茶素类物质的制备方法，包括以下步骤：1)制备茶叶提取物水溶液；2)制备层析柱，其由吸附剂和流速加速助剂按1～3∶1的重量比例混合后采用湿法灌柱灌制而成；3)上样：将茶叶提取物水溶液匀速注入层析柱；4)洗脱包含咖啡因的杂质，流出液为包含咖啡因杂质的淋洗液；5)洗脱儿茶素类物质：以体积浓度≥60％的二甲基亚砜的乙醇溶液或二甲基亚砜为洗脱液再次淋洗层析柱床；收集含儿茶素类物质的淋洗液；6)儿茶素类固体的获得。采用本发明的方法能有效脱除咖啡因杂质，从而获得高纯度的儿茶素类物质。

Description

儿茶素类物质的制备方法

技术领域

本发明涉及一种以不溶性聚乙烯吡咯烷酮为吸附剂，并采用柱层析手段从茶叶提取物中去除杂质并高效回收高纯度儿茶素类物质的绿色制备方法。

背景技术

儿茶素类物质是茶叶提取物的重要功能成分，其具有淬灭自由基、抗氧化、抗过敏、抗衰老、抗辐射、抗癌防癌、抗菌消炎等生理功能，在医药和食品领域有广阔的应用前景。但是普通的茶叶提取物中，均含有一定数量的咖啡因等杂质，而咖啡因具有成瘾性、引起失眠和诱发流产等不良作用，限制了茶叶提取物在医药和食品领域的推广应用。因此，从茶叶提取物中有效脱除咖啡因并获得高纯度儿茶素类物质的绿色制备方法一直受到科研工作者的关注。

从茶叶提取物中脱除咖啡因并制备高纯度儿茶素类物质的常用方法包括有机溶剂脱除法、离子沉淀法、超临界流体萃取法、吸附分离法等。其中，有机溶剂萃取法主要利用咖啡因和儿茶素类物质极性差异，通过二氯甲烷或氯仿等有机溶剂萃取处理脱除咖啡因，虽然该方法效果较好，但是氯仿等有机溶剂毒性大，产品的安全性得不到保证，限制了该方法的推广应用。离子沉淀法主要利用儿茶素类物质在一定条件下可以与某些金属离子形成络合物而沉淀的性质，将茶叶提取物中的咖啡因和多糖等杂质分离，并通过离心和转溶等手段获得较高纯度的儿茶素类物质，虽然该法脱咖啡因效果也较好，但是产品色泽较深、且其中金属离子残留高，同时生产过程环境污染较严重。超临界流体萃取法主要利用咖啡因与儿茶素类物质在超临界流体中的溶解度的差异达到脱除咖啡因的效果，该法脱咖啡因效果好、无溶剂残留，但是该技术设备和运行成本非常高，很难在生产上大范围应用。吸附分离法是目前茶叶提取物脱咖啡因、纯化儿茶素类物质的重要方法，该法主要利用吸附剂对咖啡因和儿茶素类物质的选择性吸附能力的差异，并通过吸附和解吸作用来脱除咖啡因和富集儿茶素类物质。用于吸附分离的吸附剂主要有大孔树脂、聚酰胺树脂、葡聚糖凝胶和木质纤维素等，但是这些吸附剂或者存在吸附量小、或者存在吸附选择性不佳等问题，限制了这些方法的推广应用。

不溶性聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)是以N-乙烯基-吡咯烷酮为单体聚合而成的高聚物，具有生理惰性、优良的生物相容性以及性质稳定和无毒等特点。已广泛应用于食品、医药、洗涤和印染等领域。有研究显示，PVPP能与多酚类化合物(如儿茶素类物质)通过疏水交互作用、氢键和范德华力形成络合物，可以作为啤酒、果汁、葡萄酒等食品澄清剂和稳定剂。因此，PVPP可用作分离多酚类物质的吸附剂。但是以PVPP为吸附剂进行茶叶提取物脱除咖啡因等杂质时存在两个重要技术障碍，其一为PVPP对儿茶素类物质的吸附力很强，乙醇、乙醇水溶液、丙酮、丙酮水溶液或者乙酸乙酯等普通的洗脱剂均不能有效地将吸附在PVPP上的儿茶素类物质洗脱下来，从而导致洗脱过程过于缓慢和复杂、产品得率低、PVPP再生困难；其二为PVPP溶胀性能强，普通的以PVPP为吸附剂的层析柱流速非常慢，无法达到生产应用要求。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种绿色环保的儿茶素类物质的制备方法，该方法能有效脱除咖啡因杂质，且能高通量快速回收高纯度的儿茶素类物质。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种儿茶素类物质的制备方法，包括以下步骤：

1)、制备茶叶提取物水溶液；

2)、制备层析柱：

由吸附剂和流速加速助剂按1～3∶1的重量比例混合后采用湿法灌柱灌制而成，吸附剂为不溶性聚乙烯吡咯烷酮，流速加速助剂为层析硅胶、石英砂和微晶纤维素中的至少一种；

3)、上样：将茶叶提取物水溶液匀速注入层析柱，使茶叶提取物水溶液的注入速度＝层析柱床流出液的流速，每小时流出液的体积为层析柱床体积的1.5～2.5倍；当流出液呈现淡黄色时，停止茶叶提取物水溶液的注入和流出液的流出，并静止10～30分钟；

4)、洗脱包含咖啡因的杂质：以蒸馏水、乙醇水溶液或乙醇为洗脱液淋洗层析柱，所述洗脱液的用量是层析柱床体积的1～3倍；流出液为包含咖啡因等杂质的淋洗液；

上述乙醇水溶液可由乙醇和水按照任意体积比混合而得；

5)、洗脱儿茶素类物质：以体积浓度≥60％的二甲基亚砜的乙醇溶液或二甲基亚砜为洗脱液再次淋洗层析柱床；收集含儿茶素类物质的淋洗液；

6)、儿茶素类固体的获得：

将含有儿茶素类物质的淋洗液采用减压蒸馏法蒸去液体，获得儿茶素类物质。

作为本发明的儿茶素类物质的制备方法的改进：当步骤5)以体积浓度≥60％的二甲基亚砜的乙醇溶液为洗脱液时，步骤6)为先减压蒸馏去除乙醇，然后再减压蒸馏去除二甲基亚砜；例如先采用0.1兆帕、50℃减压蒸馏法回收乙醇，然后再于650Pa、50℃条件下蒸出二甲基亚砜，得儿茶素类固体；

作为本发明的儿茶素类物质的制备方法的另一种改进：当步骤5)以二甲基亚砜为洗脱液时，步骤6)为减压蒸馏去除二甲基亚砜；例如直接于650Pa、50℃条件下蒸出二甲基亚砜，得儿茶素类固体。

作为本发明的儿茶素类物质的制备方法的进一步改进：步骤2)中层析柱的高度为该层析柱直径的7.5～15倍。

作为本发明的儿茶素类物质的制备方法的进一步改进：步骤2)的制备层析柱包括吸附剂前处理和流速加速助剂前处理；

吸附剂前处理包括将不溶性聚乙烯吡咯烷酮置于二甲基亚砜中浸泡，然后将上述浸泡后的不溶性聚乙烯吡咯烷酮用蒸馏水反复清洗至无二甲基亚砜为止，接着将上述清洗后的不溶性聚乙烯吡咯烷酮放入蒸馏水中溶胀；

流速加速助剂前处理包括将流速加速助剂置于二甲基亚砜中浸泡，然后将上述浸泡后的流速加速助剂用蒸馏水反复清洗至无二甲基亚砜为止，接着将上述清洗后的流速加速助剂放入蒸馏水中溶胀。

作为本发明的儿茶素类物质的制备方法的进一步改进：步骤1)的制备茶叶提取物水溶液可选用以下任意一种方法：

将茶叶提取物按1g/25～10ml的料液比与蒸馏水在85～95℃混合，或者将茶叶提取物按1g/25～10ml的料液比与体积浓度为0.01％～30％的乙醇水溶液在室温下混合，得茶水溶液；然后去除茶水溶液中的不溶物，得茶叶提取物水溶液；

将茶叶按料液比1g/50～20ml用蒸馏水于85～95℃浸提30～45分钟，过滤，得初级茶水和茶渣；将茶渣按1g茶叶/50～20ml蒸馏水的料液比于85～95℃再次浸提30～45分钟，过滤，得二级茶水；合并初级茶水和二级茶水，得浸提茶水；采用反渗透法将浸提茶水浓缩至浓度为40～100克/升，得茶叶提取物水溶液。

在本发明的制备方法中，步骤4)中洗脱液的流速为每小时1.5～2.5倍层析柱床体积，步骤5)中洗脱液的流速为每小时1.5～2.5倍层析柱床体积。

本发明的高纯度儿茶素类物质的制备方法，

在步骤1)中，可通过离心或过滤等方式去除茶水溶液中的不溶物，从而得茶叶提取物水溶液；茶叶提取物可通过市购的方式获得。

在步骤2)中的吸附剂前处理中，将不溶性聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)置于2-4倍倍重量的二甲基亚砜(DMSO)中浸泡12小时，倾去飘浮的细小颗粒后，过滤回收DMSO，将PVPP用蒸馏水反复清洗至无DMSO后，再将PVPP在蒸馏水中浸泡溶胀过夜。

流速加速助剂前处理中：采用与上述吸附剂前处理相同的方法对层析硅胶、石英砂或微晶纤维素进行处理。

对于步骤4)所得的包含咖啡因等杂质的淋洗液(即流出液)，若该淋洗液中不含乙醇，可直接经反渗透浓缩后进行喷雾干燥，得咖啡因粗品；若该淋洗液中含乙醇，先经0.1兆帕、50℃减压蒸馏回收乙醇，得含咖啡因的水溶液，再经反渗透浓缩后喷雾干燥，得咖啡因粗品。

在步骤5)中，待流出液开始呈淡黄色或与酒石酸铁溶液颜色反应呈淡紫色时，开始收集流出液；直至流出液无颜色或与酒石酸铁溶液的无淡紫色颜色反应时，停止洗脱，关闭流出阀门。收集的这部分流出液即为含高纯度儿茶素类物质的淋洗液。

在步骤6)中，当步骤5)以体积浓度≥60％的二甲基亚砜的乙醇溶液为洗脱液时，采用减压蒸馏法将含有儿茶素类物质的淋洗液在0.1兆帕、50℃条件下将乙醇蒸出回收，获得含高纯度儿茶素类物质的DMSO溶液。由于DMSO是良好的医药原料(二甲基亚砜本身具有消炎止痛、利尿、镇静等作用)及高效载体(溶解性能好、渗透性强)，因此含儿茶素类物质的DMSO溶液可直接用于药物配方。为了获得高纯儿茶素类固体，可将含高纯度儿茶素类物质的DMSO溶液在50℃、小于700帕条件下继续减压蒸馏，回收DMSO，从而获得高纯度儿茶素类固体，该儿茶素类固体中咖啡因含量低于0.4％，儿茶素类总量高于90％。

本发明的经过洗脱儿茶素类物质后的层析柱可以再生，具体步骤如下：以2-3倍层析柱床体积的蒸馏水淋洗平衡后，可用于下一轮次的上样和洗脱操作。经过10-15个轮次的上样-洗脱循环后的层析柱，用2-4倍层析柱床体积的0.1摩尔/升的氢氧化钠溶液淋洗，再以同样体积的0.1摩尔/升的盐酸溶液淋洗，之后以蒸馏水充分淋洗，直至流出液酸度为中性。

本发明的高纯度儿茶素类物质的制备方法与现有技术相比，具有以下优点：

①PVPP对儿茶素类吸附量高，选择性好，在20-60℃范围内，PVPP对儿茶素类物质的单分子层最大吸附量约为510-670毫克/克，是普通吸附剂的2-3倍；同时PVPP对咖啡因的吸附量小，约为14-44毫克/克，儿茶素类物质对咖啡因的选择吸附系数达到4.1-10.6，是普通吸附剂的2-6倍。

②在柱床中添加流速加速助剂后，柱床的通透性得到显著改善，液体在柱床中的流速较未添加流速加速助剂的普通PVPP柱床快4-11倍；而且，由于流速加速助剂基本不吸附茶叶提取物中的物质，因此对后续的洗脱效果几乎没有影响。

③由于PVPP对儿茶素类物质具有很强的吸附能力，采用普通的乙醇、乙醇水溶液、丙酮、丙酮水溶液以及乙酸乙酯等溶剂很难快速、高效地将儿茶素类物质从吸附剂上洗脱来下。本发明在大量研究的基础上，筛选获得了可快速高效将儿茶素类物质从PVPP吸附剂上洗脱下来的溶剂，即体积比浓度不低于60％的DMSO乙醇溶液或者DMSO；采用1-3倍柱床体积的该洗脱剂就可将95％以上的吸附在PVPP上的儿茶素类物质洗脱下来。

④本发明所使用的PVPP和DMSO均具有较高的生物安全性，从而使儿茶素类物质产品的安全性有保障。

⑤本发明还可获得咖啡因粗品副产品，可以解决含咖啡因溶液排放引起的环境污染问题，同时分离过程中对乙醇等溶剂均采用回收方法，整个技术对环境友好。

具体实施方式

实施例1、一种儿茶素类物质的制备方法，依次进行以下步骤：

1)从杭州塞纳茶叶有限公司购买的茶叶提取物，该提取物中儿茶素类总量为61.2％，咖啡因含量为10.3％。将此茶叶提取物按1g/25ml的料液比用体积浓度为20％的乙醇水溶液进行溶解，于4℃、6000转/分钟的条件下离心20分钟，收集上清液；得茶叶提取物水溶液。

2)将市售吸附剂PVPP、流速加速助剂层析硅胶分别在2倍重量的DMSO中浸泡12小时，倾去漂浮的细小粒子，纱网过滤回收DMSO，将处理后的PVPP和层析硅胶以大量蒸馏水反复洗涤以除去剩余的DMSO，之后将上述洗涤后的PVPP、硅胶分别在蒸馏水中溶胀过夜。将溶胀后的吸附剂PVPP与流速加速助剂层析硅胶按1∶1的比例(干重，即PVPP与层析硅胶的重量比为1∶1)充分混合。采用湿法装柱，层析柱内经6厘米，柱床高70厘米，柱床体积约2升。

3)用蠕动泵将上述茶叶提取物水溶液泵入层析柱，控制流速，使泵入速度＝流出速度，每小时流出液的体积约为层析柱床体积的2倍；待流出液呈现淡黄色或与酒石酸铁溶液颜色反应呈淡紫色时(与酒石酸铁颜色反应的具体做法是，取3-5滴流出液滴至盛有1毫升、酸度为pH 7.5的3.6毫摩尔/升酒石酸铁溶液试管中，裸眼观察颜色变化)，即停止上样，关闭流出液阀门，静置20分钟。

4)以乙醇淋洗柱床以除去咖啡因等杂质，流速控制为每小时2.5倍柱床体积，淋洗时间为0.4小时。收集流出液并转入旋转蒸发器中，在0.1兆帕、50℃条件下减压蒸馏回收乙醇，将回收乙醇后的水溶液进行反渗透浓缩和喷雾干燥，获得咖啡因粗品。

5)将80份体积分数的DMSO与20份体积分数的乙醇混合配制成体积浓度为80％的DMSO乙醇溶液，用蠕动泵将其泵入柱床洗脱儿茶素类物质，控制流速，使泵入速度和流出速度均约为每小时2倍柱床体积，待流出液开始呈淡黄色或与酒石酸铁溶液颜色反应呈淡紫色时(与酒石酸铁颜色反应的具体做法是，取3-5滴流出液滴至盛有1毫升、酸度为pH 7.5的3.6毫摩尔/升酒石酸铁溶液试管中，裸眼观察颜色变化)，开始收集流出液；直至流出液体无颜色或与酒石酸铁溶液的无淡紫色颜色反应时，停止洗脱，关闭流出阀门。

6)将步骤5)所得的含有儿茶素类物质的洗脱液转移至旋转蒸发器中，于0.1兆帕、50℃条件下减压蒸馏回收乙醇。将所得的含儿茶素类物质的DMSO溶液在650Pa、50℃条件下减压蒸馏，回收DMSO，并获得高纯度儿茶素类物质。经HPLC检测，儿茶素类含量为94.4％，咖啡因含量为0.08％。

实施例2、一种儿茶素类物质的制备方法，依次进行以下步骤：

1)从杭州塞纳茶叶有限公司购买的茶叶提取物，该提取物中儿茶素类总量为46.3％，咖啡因含量为6.7％。将此茶叶提取物按料液比1g/10ml用体积比为10％的乙醇水溶液进行溶解，减压过滤并收集上清液，得茶叶提取物水溶液。

2)将市售吸附剂PVPP、流速加速助剂微晶纤维素分别在2倍重量的DMSO中浸泡12小时，倾去漂浮的细小粒子，纱网过滤回收DMSO；将处理后的PVPP和微晶纤维素以大量蒸馏水反复洗涤以除去剩余的DMSO，之后将上述洗涤后的PVPP、微晶纤维素分别在蒸馏水中溶胀过夜。将溶胀后的吸附剂PVPP与流速加速助剂微晶纤维素按2∶1的比例(干重)充分混合。采用湿法装柱，层析柱内经6厘米，柱床高45厘米，柱床体积约1.3升。

3)用蠕动泵将茶叶提取物水溶液泵入层析柱，控制流速，使泵入速度和流出速度均约为每小时2.5倍柱床体积，待流出液呈现淡黄色或与酒石酸铁溶液颜色反应呈淡紫色时，即停止上样，关闭流出液阀门并静置30分钟。

4)以体积浓度为50％的乙醇水溶液淋洗柱床除去咖啡因等杂质，流速控制为每小时2倍柱床体积，淋洗时间为0.8小时。收集淋洗液并转入旋转蒸发器中，经0.1兆帕、50℃减压蒸馏回收乙醇后，再进行反渗透浓缩并喷雾干燥，获得咖啡因粗品。

5)配制体积浓度为60％的DMSO乙醇溶液，用蠕动泵将其泵入柱床洗脱儿茶素类物质，控制流速，使泵入速度和流出速度均约为每小时1.5倍柱床体积，待流出液开始呈淡黄色或与酒石酸铁溶液颜色反应呈淡紫色时(与酒石酸铁颜色反应的具体做法是，取3-5滴流出液滴至盛有1毫升、酸度为pH 7.5的3.6毫摩尔/升酒石酸铁溶液试管中，裸眼观察颜色变化)，开始收集流出液；直至流出液体无颜色或与酒石酸铁溶液的无淡紫色颜色反应时，停止洗脱，关闭流出阀门。

6)将步骤5)所得的含有儿茶素类物质的洗脱液转移至旋转蒸发器中，于0.1兆帕、50℃条件下减压蒸馏回收乙醇。然后将含儿茶素类物质的DMSO溶液在650Pa、50℃条件下减压蒸馏，回收DMSO，并获得高纯度儿茶素类物质。经HPLC检测，儿茶素类含量为93.5％，咖啡因含量为0.21％。

实施例3、一种儿茶素类物质的制备方法，依次进行以下步骤：

1)从杭州塞纳茶叶有限公司购买的茶叶提取物，该提取物中儿茶素类总量为46.3％，咖啡因含量为6.7％。将此茶叶提取物按料液比1g/20ml用90℃的蒸馏水进行溶解，减压过滤(0.1兆帕)并收集上清液，得茶叶提取物水溶液。

2)将市售吸附剂PVPP在2倍重量的DMSO中浸泡12小时，倾去漂浮的细小粒子，纱网过滤回收DMSO，然后将PVPP以大量蒸馏水反复洗涤以除去剩余的DMSO，之后再放入蒸馏水中溶胀过夜；采用相同的方法对由层析硅胶和微晶纤维素按重量比为1∶1混合而成的流速加速助剂进行处理；将溶胀后的吸附剂与流速加速助剂按1∶1的比例(干重)充分混合。采用湿法装柱，层析柱内经6厘米，柱床高90厘米，柱床体积约2.5升。

3)用蠕动泵将茶叶提取物水溶液泵入层析柱，控制流速，使泵入速度和流出速度均约为每小时2倍柱床体积，待流出液呈现淡黄色或与酒石酸铁溶液颜色反应呈淡紫色时(与酒石酸铁颜色反应的具体做法是，取3-5滴流出液滴至盛有1毫升、酸度为pH 7.5的3.6毫摩尔/升酒石酸铁溶液试管中，裸眼观察颜色变化)，即停止上样，关闭流出液阀门并静置30分钟。

4)以体积浓度为20％的乙醇水溶液淋洗柱床以除去咖啡因等杂质，流速控制为每小时2倍柱床体积，淋洗时间为1小时。收集淋洗液并转入旋转蒸发器中，经0.1兆帕、50℃减压蒸馏回收乙醇后，再进行反渗透浓缩和喷雾干燥，获得咖啡因粗品。

5)配制体积浓度为60％的DMSO乙醇溶液，用蠕动泵将其泵入柱床洗脱儿茶素类物质，控制流速，使泵入速度和流出速度均约为每小时1.5倍柱床体积，待流出液开始呈淡黄色或与酒石酸铁溶液颜色反应呈淡紫色时(与酒石酸铁颜色反应的具体做法是，取3-5滴流出液滴至盛有1毫升、酸度为pH 7.5的3.6毫摩尔/升酒石酸铁溶液试管中，裸眼观察颜色变化)，开始收集流出液；直至流出液体无颜色或与酒石酸铁溶液的无淡紫色颜色反应时，停止洗脱，关闭流出阀门。

6)将步骤5)所得的含有儿茶素类物质的洗脱液转移至旋转蒸发器中，于0.1兆帕、50℃条件下减压蒸馏回收乙醇。再将含儿茶素类物质的DMSO溶液在650帕、50℃条件下减压蒸馏，回收DMSO，并获得高纯度儿茶素类物质。经HPLC检测，儿茶素类含量为92.7％，咖啡因含量为0.13％。

实施例4、一种儿茶素类物质的制备方法，依次进行以下步骤：

1)从杭州塞纳茶叶有限公司购买的3级炒青绿茶，其内含成分为儿茶素类总量为16.5％，咖啡因含量为3.3％。将此茶叶按料液比1g/20ml用90℃蒸馏水浸提30分钟，减压(0.1兆帕)过滤得到茶水，将茶渣再次以同样体积的90℃蒸馏水浸提30分钟并减压过滤，合并两次滤液，得浸提茶水，采用反渗透法将浸提茶水浓度浓缩至80克/升，得茶叶提取物水溶液。

2)将市售吸附剂PVPP在2倍重量的DMSO中浸泡12小时，倾去漂浮的细小粒子，纱网过滤回收DMSO，将PVPP以大量蒸馏水反复洗涤以除去剩余的DMSO，之后蒸馏水中溶胀过夜；采用相同的方法对由层析硅胶、石英砂和微晶纤维素按重量比为1∶1∶1混合而成的流速加速助剂进行处理。将处理后的吸附剂PVPP与流速加速助剂按3∶1的比例(干重)充分混合。采用湿法装柱，层析柱内经8厘米，柱床高80厘米，柱床体积约4.0升。

3)用蠕动泵将茶叶提取物水溶液泵入层析柱，控制流速，使泵入速度和流出速度均约为每小时2倍柱床体积，待流出液呈现淡黄色或与酒石酸铁溶液颜色反应呈淡紫色时(与酒石酸铁颜色反应的具体做法是，取3-5滴流出液滴至盛有1毫升、酸度为pH 7.5的3.6毫摩尔/升酒石酸铁溶液试管中，裸眼观察颜色变化)，即停止上样，关闭流出液阀门并静置30分钟。

4)蒸馏水淋洗柱床以除去咖啡因等杂质，流速控制为每小时1.5倍柱床体积，淋洗时间为2小时。收集淋洗液，经反渗透浓缩，并进行喷雾干燥，获得咖啡因粗品。

5)用蠕动泵将DMSO泵入柱床洗脱儿茶素类物质，控制流速，使泵入速度和流出速度均约为每小时2.5倍柱床体积，待流出液开始呈现淡黄色或与酒石酸铁溶液颜色反应呈淡紫色时(与酒石酸铁颜色反应的具体做法是，取3-5滴流出液滴至盛有1毫升、酸度为pH 7.5的3.6毫摩尔/升酒石酸铁溶液试管中，裸眼观察颜色变化)，开始收集流出液；直至流出液体无颜色或与酒石酸铁溶液的无淡紫色颜色反应时，停止洗脱，关闭流出阀门。

6)将步骤5)所得的含儿茶素类物质的DMSO溶液转移至旋转蒸发器中，于650帕、50℃减压蒸馏回收DMSO，并获得高纯度儿茶素类物质。经检测，儿茶素类含量为90.4％，咖啡因含量为0.31％。

7)以0.1摩尔/升的氢氧化钠淋洗经过多次吸附-洗脱循环后的柱床，用量为2倍柱床体积，之后以2倍柱床体积的0.1摩尔/升的盐酸进行淋洗，并用大量蒸馏水反复淋洗柱床，直至流出液酸度近中性为止，完成层析柱的再生。

最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种茶叶提取物中儿茶素类物质的制备方法，其特征是包括以下步骤：

1)、制备茶叶提取物水溶液；

2)、制备层析柱：

由吸附剂和流速加速助剂按1～3∶1的重量比例混合后采用湿法灌柱灌制而成，所述吸附剂为不溶性聚乙烯吡咯烷酮，所述流速加速助剂为层析硅胶、石英砂和微晶纤维素中的至少一种；

3)、上样：将茶叶提取物水溶液匀速注入层析柱，使茶叶提取物水溶液的注入速度＝层析柱床流出液的流速，每小时流出液的体积为层析柱床体积的1.5～2.5倍；当流出液呈现淡黄色时，停止茶叶提取物水溶液的注入和流出液的流出，并静止10～30分钟；

4)、洗脱包含咖啡因的杂质：以蒸馏水、乙醇水溶液或乙醇为洗脱液淋洗层析柱，所述洗脱液的用量是层析柱床体积的1～3倍；流出液为包含咖啡因杂质的淋洗液；

5)、洗脱儿茶素类物质：以体积浓度≥60％的二甲基亚砜的乙醇溶液或二甲基亚砜为洗脱液再次淋洗层析柱床；收集含儿茶素类物质的淋洗液；

6)、儿茶素类固体的获得：

将含有儿茶素类物质的淋洗液采用减压蒸馏法蒸去液体，获得儿茶素类物质。

2.根据权利要求1所述的茶叶提取物中儿茶素类物质的制备方法，其特征是：所述步骤5)中以体积浓度≥60％的二甲基亚砜的乙醇溶液为洗脱液，所述步骤6)为先减压蒸馏去除乙醇，然后再减压蒸馏去除二甲基亚砜。

3.根据权利要求1所述的茶叶提取物中儿茶素类物质的制备方法，其特征是：所述步骤5)中以二甲基亚砜为洗脱液，所述步骤6)为减压蒸馏去除二甲基亚砜。

4.根据权利要求1、2或3所述的茶叶提取物中儿茶素类物质的制备方法，其特征是：所述步骤2)中层析柱的高度为该层析柱直径的7.5～15倍。

5.根据权利要求4所述的茶叶提取物中儿茶素类物质的制备方法，其特征是：所述步骤2)的制备层析柱包括吸附剂前处理和流速加速助剂前处理；

所述吸附剂前处理包括将不溶性聚乙烯吡咯烷酮置于二甲基亚砜中浸泡，然后将上述浸泡后的不溶性聚乙烯吡咯烷酮用蒸馏水反复清洗至无二甲基亚砜为止，接着将上述清洗后的不溶性聚乙烯吡咯烷酮放入蒸馏水中溶胀；

所述流速加速助剂前处理包括将流速加速助剂置于二甲基亚砜中浸泡，然后将上述浸泡后的流速加速助剂用蒸馏水反复清洗至无二甲基亚砜为止，接着将上述清洗后的流速加速助剂放入蒸馏水中溶胀。

6.根据权利要求5所述的茶叶提取物中儿茶素类物质的制备方法，其特征是：所述步骤1)的制备茶叶提取物水溶液为以下任意一种方法：

将茶叶提取物按1g/25～10ml的料液比与蒸馏水在85～95℃混合，或者将茶叶提取物按1g/25～10ml的料液比与体积浓度为0.01％～30％的乙醇水溶液在室温下混合，得茶水溶液；然后去除茶水溶液中的不溶物，得茶叶提取物水溶液；

将茶叶按料液比1g/50～20ml用蒸馏水于85～95℃浸提30～45分钟，过滤，得初级茶水和茶渣；将所述茶渣按1g茶叶/50～20ml蒸馏水的料液比于85～95℃再次浸提30～45分钟，过滤，得二级茶水；合并初级茶水和二级茶水，得浸提茶水；采用反渗透法将浸提茶水浓缩至浓度为40～100克/升，得茶叶提取物水溶液。