CN101687798B - 制备用于调节激酶级联的组合物的过程及其使用方法 - Google Patents

制备用于调节激酶级联的组合物的过程及其使用方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及包括2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-V-苯甲基乙酰胺及其甲磺酸盐和二盐酸化物的组合物。更具体的说，本发明提供了一种有效的合成2-(5-＜4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-苯甲基乙酰胺及其甲磺酸盐和二盐酸化物的过程以及使用本发明所述的组合物调节激酶级联中一种或一种以上组分的方法。

Description

制备用于调节激酶级联的组合物的过程及其使用方法
相关申请
本申请要求2007年5月17日递交的美国临时专利申请序列号60/930,758的优先权，并且是2007年12月28日递交的美国申请序列号12/005,792的部分延续申请。上述每个申请的全部内容在此通过引证全部并入本文。
发明领域
本发明涉及组合物和合成基本上纯的2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺(KX2-391)及其甲磺酸盐和二盐酸化物的过程。本发明还涉及使用这种组合物的方法。
信号转导是一种特定的过程，通过这一过程，细胞能够将一种信号或者刺激转换成另外一种信号或者刺激。被认为是信号转导的过程常常包括细胞内部的一系列生化反应，这些生化反应通过酶进行并通过第二信使相互连接。在许多转导过程中，越来越多的酶和其他分子加入到从最初的刺激产生的事件中。在此情况下，一系列步骤被认为是一种″信号级联″或者一种″第二信使通道″，且这一系列步骤通常导致小刺激引出大反应。涉及到信号转导的一类分子是酶的激酶族。许多激酶是蛋白质激酶，这些蛋白质激酶作用并修饰特定蛋白质的活性，从而被广泛的用于细胞内信号传递和控制细胞内复杂的过程。
蛋白质激酶是指一大类酶，这类酶能够催化γ-磷酸盐从腺苷三磷酸传递到蛋白质和肽的丝氨酸/苏氨酸侧链或者酪氨酸侧链的羟基上，而且，这类酶密切涉及到多种重要的细胞功能控制，或许其中最显著的是：信号转导、辨别和扩增。据估计人体中存在大约2000种不同的蛋白质激酶，尽管每一种激酶只能够使具体的蛋白质、肽底物磷酸化，但是都以高度保守的袋装结构结合相同的第二底物，这种第二底物就是腺苷三磷酸。蛋白质磷酸酶以相反方向催化磷酸盐的传递。
酪氨酸激酶是一种可以将磷酸基从腺苷三磷酸传递到蛋白质的酪氨酸残基上的酶。通过激酶进行的蛋白质的磷酸化作用是酶活性调整信号转导方面的一种重要机制。这里的酪氨酸激酶被分成两个部分，即细胞质蛋白激酶和横跨膜受体连接的激酶。在人体内，共有32种细胞质蛋白酪氨酸激酶和58种受体连接的蛋白质-酪氨酸激酶。作用于细胞表面酪氨酸激酶连接的受体的激素和生长因子通常能够促进生长并对刺激细胞分裂起作用(例如，胰岛素、胰岛素样生长因子1、表皮生长因子)。
各种已知的蛋白质激酶或蛋白质磷酸酶的抑制剂具有多种治疗应用。蛋白激酶或蛋白质磷酸酶抑制剂的一种可以预见的潜在治疗作用是用作抗癌制剂。大约50％的已知致癌基因产物是蛋白质酪氨酸激酶(PTK)并且，已经显示，激酶活性会导致细胞转化。
所述蛋白质酪氨酸激酶(PTK)可以被分为两类，膜受体蛋白质酪氨酸激酶(例如生长因子受体蛋白质酪氨酸激酶)和非受体蛋白质酪氨酸激酶(例如Src族原致癌基因产物)。至少9个Src族非受体蛋白质酪氨酸激酶的成员具有pp60c″src(此后简单的称作″Src″)这是此组的原型蛋白质酪氨酸激酶，其中，大约300个氨基酸催化的结构域具有高度的保守性。在许多人类的癌症中已经报道存在Src的过度活化作用，所述癌症包括结肠癌、乳癌、肺癌、膀胱癌和皮肤癌，以及胃癌、毛细胞白血病和成神经细胞瘤。从横跨膜受体(例如EGFR和ρ185HER2/Neu)到细胞内部的过度刺激的细胞增殖信号从横跨膜受体(例如EGFR和ρ185HER2/Neu)到细胞内部的过度刺激的细胞增殖信号似乎可以穿过Src。因此，最近认为Src是用于癌症治疗的通用靶点，因此，在许多重要的人类肿瘤类型中，在肿瘤开始形成、增长和转移的过程中都包含过度活化(不发生突变)。
由于激酶包含于各式各样的正常细胞信号转导途径(例如，细胞生长、辨别、存活、粘附、转移等等)的调节过程中，激酶被认为能够在多种疾病和紊乱中起作用。因此，激酶信号级联的调节是治疗或者防止这些疾病和紊乱的重要方法。
最近公开了一种小规模的合成KX2-391的方法(US20060160800A1)。这种合成方法不适用于生产大量的化合物，所得产品会受到氯乙烷的污染，氯乙烷是一种已知的弱烷化剂。因此，氯乙烷以足够高的水平存在会限制KX2-391组合物的药物功效。
因此，对改善KX2-391的合成路线从而满足大规模生产存在需要，所述KX2-391的大规模生产是安全、简单的，并且能够大规模高产量的生产KX2-391及其盐，并且产物基本上是纯的。
发明内容
本发明化合物在调节激酶信号级联组分中时有效的。一些化合物可以有效调节一个以上的激酶信号级联组分。本发明化合物可以有效用作药物试剂。本发明化合物可以有效的用于调节正常细胞信号传导途径(例如，细胞生长、辨别、存活、粘附、转移等等)可能涉及到的激酶或者涉及疾病或者紊乱的激酶的调节作用。
在本发明的一个方面，本发明涉及制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺的过程，该过程包括以下步骤：(1)将4-(2-氯乙烷)吗啉与4-溴代苯酚进行反应产生4-(2-(4-溴代苯氧基)乙基)吗啉；(2)将4-(2-(4-溴代苯氧基)乙基)吗啉与6-氟代吡啶-3-基-3-硼酸耦合，产生4-(2-(4-(6-氟代吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉；(3)将4-(2-(4-(6-氟代吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉与氰化甲烷发生反应，产生2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)氰化甲烷；(4)将2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)氰化甲烷转化为甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐；并且(5)将甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐与苯甲基胺发生能够反应，生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺。
在本发明的另一个方面，本发明涉及制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺甲磺酸盐的过程，该过程包括以下步骤：(1)将4-(2-氯乙烷)吗啉与4-溴代苯酚进行反应产生4-(2-(4-溴代苯氧基)乙基)吗啉；(2)将4-(2-(4-溴代苯氧基)乙基)吗啉与6-氟代吡啶-3-基-3-硼酸耦合，产生4-(2-(4-(6-氟代吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉；(3)将4-(2-(4-(6-氟代吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉与氰化甲烷发生反应，产生2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)氰化甲烷；(4)将2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)氰化甲烷转化为甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐；(5)将甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐与苯甲基胺发生能够反应，生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺；并且(6)将2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺与甲烷磺酸向接触产生2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺甲磺酸盐。
在本发明的另一个方面，本发明涉及制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺甲磺酰基盐的过程，该过程包括以下步骤：将2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺与甲烷磺酸相接触从而产生2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺甲磺酰基盐。
在本发明的另一个方面，本发明涉及制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺的过程，该过程包括以下步骤：使甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐与苯甲胺发生反应，生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺。
在本发明的另一个方面，本发明涉及制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺的过程，该过程包括以下步骤：将2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)氰化甲烷转化为甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐，并将甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐与苯甲胺发生反应，生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺。
在本发明的另一个方面，本发明涉及制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺的过程，该过程包括以下步骤：将4-(2-(4-(6-氟代吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉与氰化甲烷发生反应，生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)氰化甲烷；将2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)氰化甲烷转化为甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐；并且，将甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐与苯甲胺发生反应产生2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺。
在本发明的另一个方面，本发明涉及制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺的过程，该过程包括以下步骤：将4-(2-(4-溴代苯氧基)乙基)吗啉与6-氟代吡啶-3-基-3-硼酸相耦合，生成4-(2-(4-(6-氟代吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉；将4-(2-(4-(6-氟代吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉与氰化甲烷发生反应，生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)氰化甲烷；将2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)氰化甲烷转化为甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐；并且将甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐与苯甲胺发生反应，生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺。
在本发明的另一个方面，本发明涉及制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺的过程，该过程包括以下步骤：将4-(2-氯代乙基)吗啉与4-溴代苯酚发生反应，生成4-(2-(4-溴代苯氧基)乙基)吗啉。
在本发明的另一个方面，本发明涉及制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺的过程，该过程包括以下步骤：将4-(2-(4-(6-氟代吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉与氰化甲烷发生反应，生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)氰化甲烷。
在本发明的另一个方面，本发明涉及制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺的过程，该过程包括以下步骤：将4-(2-(4-(6-氟代吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉与氰化甲烷发生反应，生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)氰化甲烷。
在本发明的另一个方面，本发明涉及制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺的过程，该过程包括以下步骤：将2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)氰化甲烷转化为甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐。
在发明的另一个方面，本发明涉及使用如上所述任意一种制备KX2-391的方法制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺甲磺酰基盐的过程，该过程包括将2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺与甲烷磺酸相接触，产生2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺甲磺酰基盐。
在本发明另一个方面，本发明涉及一种组合物，该组合物包括KX2-391甲磺酰盐。在另一个方面，本发明涉及一种组合物，该组合物中KX2-391甲磺酰盐的纯度经过高效液体色谱法测定大于98.0％。在另一个方面，在所述组合物种，KX2-391甲磺酰盐的纯度为99.0％。在另一个方面，在所述组合物中，KX2-391甲磺酰盐的纯度为99.5％。在另一个方面，在所述组合物中，KX2-391甲磺酰盐的纯度为99.6％。在另一个方面，在所述组合物中，KX2-391甲磺酰盐的纯度为99.7％。在另一个方面，所述组合物包括小于2％的杂质，所述杂质选自乙基氯化物、乙醇、乙酸乙酯、庚烷、甲氧基苯、钯及其结合。在另一个实施方案中，所述组合物进一步包括一种药学上可接受的载体或者赋形剂。
在本发明另一个方面，本发明涉及组合物在制备用于调整蛋白激酶信号级联中一种或一种以上组分的药物中的应用。在另外一个方面，本发明涉及组合物在制备药物中的应用，其中，所述药物抑制一种激酶，所述激酶选自由Src族蛋白激酶、黏着斑激酶、和酪氨酸激酶所组成的组中。在本发明的另一个方面，酪氨酸激酶是一种Src族蛋白激酶。在本发明的另一个方面，所述药物可以被口服给药。在另一个方面，所述药物可以被局部给药。在另一个方面，本发明涉及组合物在制备用于调节蛋白激酶信号级联的一种或一种以上组分的药物中的应用，其中，所述激酶级联的组分导致疾病或紊乱现象，所述疾病和紊乱选自由过度增殖性紊乱、癌症、前期癌症、骨质疏松症、心血管疾病、免疫系统功能紊乱、II型糖尿病、肥胖症、听觉失灵和移植排异反应所组成的组中。
上面的描述相当广泛的阐述了本发明较为重要的技术方案，目的在于详细的描述本发明从而使随后的描述变得容易理解，并且使本发明对现有技术的贡献变得容易理解。通过下面具体实施方式的描述，结合实施例，本发明其他的方面和特点将会变得显而易见。
附图说明
图1是一种图表，表示了KX2-391二盐酸盐编号02BP111F的差示热扫描(DSC)图。
图2是一种图表，表示了KX2-391二盐酸盐编号02BP111E的差示热扫描(DSC)图。
图3是一种图表，表示了KX2-391二盐酸盐编号02BP111E的X射线粉末衍射法(XRPD)数据。
图4是一种图表，表示了KX2-391二盐酸盐编号02BP111F的X射线粉末衍射法(XRPD)数据。
图5是KX2-391(编号02BP096K)的1H核磁共振光谱图。
图6是KX2-391MSA的1H核磁共振光谱图。
具体实施方式
在下面的描述中会阐明本发明一种或一种以上实施方案的细节。下面描述的本发明优选的方法和材料，其他任何与这里描述的相似或者等效的方法和材料也可以用来实施或者检查本发明。本发明其他的特点、对象和优势将会通过下面的描述体现出来。在说明书中，除非上下文另有明确说明，单数形式也包括复数的意思。除非另有定义，在这里使用的所有科技名词与本发明所述领域普通技术人员通常的理解具有相同的意思。如果出现矛盾，以本说明书的介绍为准。这提到的所有的出版物、专利申请、专利和其他参考文献通过引证在此全部并入本文。KX2-391及其盐的制备
4-(2-(4-(6-氟代吡啶-3-基)苯氧基)乙基)的合成方法如下方案所示：
Figure G2008800244013D00101
在3个步骤可以合成4-(2-(4-(6-氟代吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉(5)。使用醚偶联反应合成中间体2，例如，使用Williamson醚合成法。在有碳酸钾和二甲基甲酰胺参与的情况下进行4-(2-氯代乙基)吗啉(1)和4-溴代苯酚之间的醚合成会产生4-(2-(4-溴代苯氧基)乙基)吗啉(2)。这种反应不是必须严格的干燥环境，然后使用含有氢氧化钠的碱性洗涤剂去掉剩余的4-溴代苯酚。在本发明的另一个方面，使用任意醚合成反应合成中间体2。从包含任意离去基团的化合物1开始合成中间体2。例如，化学领域普通技术人员可以从通式化合物：
Figure G2008800244013D00111
开始，其中离去基团“LG”包括但是不局限于卤素(如化合物1所述)、甲苯磺酸盐、甲磺酰基盐、三氟甲磺酸盐等等。
使用Suzuki反应形成化合物5。通过使用n-BuLi形成芳基阴离子制备芳基硼酸盐、6-氟代吡啶-3-基-3-硼酸(4)，随后用三异丙基硼酸盐进行原地淬火(参见Li，et al.，J.Org.Chem(有机化学杂志).2002，67，5394-5397)。利用四三苯基瞵钯将所得的6-氟代吡啶-3-基-3-硼酸(4)与4-(2-(4-溴代苯氧基)乙基)吗啉(2)在DME和水相碳酸钠溶液中耦合，生成4-(2-(4-(6-氟代吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉(5)，使用硅胶色谱分析法纯化4-(2-(4-(6-氟代吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉(5)。本领域普通技术人员应该理解其他的过度金属偶联反应也可以用于制备化合物5。
2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺二盐酸化物的合成方法如下所示：
Figure G2008800244013D00121
在四个线性步骤中可以合成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺二盐酸化物(KX2-391 HCl)。通过使用可商业购得的NaHMDS生成的氰化甲烷阴离子替换4-(2-(4-(6-氟代吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉(5)的氟化物。缓慢的向冷却后的化合物5和碱的混合物中加入氰化甲烷，形成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)氰化甲烷(6)。在本发明的另外一个方面，中间体5可以具有一种除了氟以外的离去基团。因此，可以获得通式化合物：
Figure G2008800244013D00122
，其中LG包括本领域技术人员已知的离去基团。
使用浓缩的硫磺酸和发烟硫酸混合物进行2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)氰化甲烷(6)的酸催化的甲醇溶解。通过使用发烟硫酸从反应混合物中去掉残余的水并减少形成的羧酸副产品的量。通过将反应混合物加入到饱和碳酸氢钠和二氯甲烷溶液中进对反应混合物进行淬火，同时维持温度低于20℃。使用水检测法可以容易的除去任意的羧酸污染物。在本发明的另一个方面，本领域普通技术人员可以使用其他的酸催化条件进行腈类化合物6的醇解，从而产生化合物7。
所得甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐(7)和苯甲胺在高温下被耦合入甲氧基苯中，产生2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺(KX2-391)。通过向纯的乙醇中加入乙酰氯得到HCl溶液，将该HCl溶液加入到KX2-391中，形成双盐酸盐，2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺二盐酸化物，(KX2-二-HCl)。
下面的方案中描述了KX2-391甲磺酰基盐(KX2-391-MSA)的合成法：
Figure G2008800244013D00131
在四个线性步骤中，以化合物5为起始化合物可以合成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺甲磺酰基盐(KX2-391 MSA)。头三个步骤按照如上所述的关于KX2-3912HCl的方法进行，从而生成甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐(KX2-391)。50度下，通过用甲磺酸(MSA)在丙酮中将KX2-391转变为甲烷基硫磺酸盐，生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺甲磺酰基盐(KX2-391 MSA)。
在本发明的另一个方面，可以合成具有除了C(O)OMe之外的基团的中间体7.本领域普通技术人员可以获得通式中间体化合物：
Figure G2008800244013D00141
，其中，基团“R”包括但不局限于氢和烷基。
在一个方面，本发明涉及制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺的过程，该过程包括：
将4-(2-氯代乙基)吗啉与4-溴代苯酚发生反应，从而生成4-(2-(4-溴代苯氧基)乙基)吗啉；(2)将4-(2-(4-溴代苯氧基)乙基)吗啉与6-氟代吡啶-3-基-3-硼酸相耦合，从而产生4-(2-(4-(6-氟代吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉；
将4-(2-(4-(6-氟代吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉与氰化甲烷发生反应，从而产生2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)氰化甲烷；(4)将2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)氰化甲烷转化为甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐；并且(5)将甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐与苯甲胺发生反应，产生2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺。
在本发明的另一个方面，本发明涉及制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺甲磺酰基盐的过程，该过程包括以下步骤：(1)将4-(2-氯代乙基)吗啉与4-溴代苯酚发生反应，从而产生4-(2-(4-溴代苯氧基)乙基)吗啉；(2)将4-(2-(4-溴代苯氧基)乙基)吗啉与6-氟代吡啶-3-基-3-硼酸相耦合，从而产生4-(2-(4-(6-氟代吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉；(3)将4-(2-(4-(6-氟代吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉与氰化甲烷发生反应，生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)氰化甲烷；(4)将2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)氰化甲烷转化为甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐；(5)将甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐与苯甲胺发生反应，生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺；并且(6)将2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺与甲烷硫磺酸相接触，生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺甲磺酰基盐。
在另一个方面，本发明涉及用于制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺甲磺酰基盐的过程，该过程包括以下步骤：将2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺与甲烷磺酸相接触，生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺甲磺酰基盐。
在另一个方面，本发明涉及用于制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺二盐酸盐的过程，该过程包括以下步骤：
(1)将4-(2-氯化乙基)吗啉与4-溴代苯酚发生反应，从而生成4-(2-(4-溴代苯氧基)乙基)吗啉；
(2)将4-(2-(4-溴代苯氧基)乙基)吗啉与6-氟代吡啶-3-基-3-硼酸相耦合，从而生成4-(2-(4-(6-氟代吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉；
(3)将4-(2-(4-(6-氟代吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉与氰化甲烷发生反应，从而生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)氰化甲烷；
(4)将2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)氰化甲烷转化为甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐；
(5)将甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐与苯甲胺发生反应，从而生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺；并且
(6)将2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺与盐酸相接触，从而生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺二盐酸盐。
在另一个方面，本发明涉及制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺二盐酸盐的过程，该过程包括将2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺与盐酸相接触，生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺二盐酸盐。
在另一个方面，本发明涉及制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺的过程，该过程包括将甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐与苯甲胺发生反应，从而生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺.
在另一个方面，本发明涉及制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺的过程，该过程包括以下步骤：将2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)氰化甲烷转化为甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐；并且将甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐与苯甲胺发生反应，从而生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺。
在另一个方面，本发明涉及制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺的过程，该过程包括以下步骤：将4-(2-(4-(6-氟代吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉与氰化甲烷发生反应，从而生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)氰化甲烷；将2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)氰化甲烷转化为甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐；并且，将甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐与苯甲胺发生反应，从而生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺。
在另一个方面，本发明涉及制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺的过程，该过程包括以下步骤：将4-(2-(4-溴代苯氧基)乙基)吗啉与6-氟代吡啶-3-基-3-硼酸发生耦合，从而产生4-(2-(4-(6-氟代吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉；将4-(2-(4-(6-氟代吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉与氰化甲烷发生反应，从而生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)氰化甲烷；将2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)氰化甲烷转化为甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐；并且将甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐与苯甲胺发生反应，从而生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺。
在另一个方面，本发明涉及制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺的过程，该过程包括以下步骤：将4-(2-氯代乙基)吗啉与4-溴代苯酚发生反应，从而生成4-(2-(4-溴代苯氧基)乙基)吗啉。
在另一个方面，本发明涉及制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺的过程，该过程包括以下步骤：将4-(2-(4-溴代苯氧基)乙基)吗啉与6-氟代吡啶-3-基-3-硼酸发生耦合，从而生成4-(2-(4-(6-氟代吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉。
在另一个方面，本发明涉及制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺的过程，该过程包括以下步骤：将4-(2-(4-(6-氟代吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉与氰化甲烷发生反应，从而生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)氰化甲烷。
在另一个方面，本发明涉及制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺的过程，该过程包括以下步骤，将2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)氰化甲烷转化为甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐。
在另一个方面，本发明涉及使用如上所述的制备KX2-391的过程制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺甲磺酰基盐的过程，该过程包括如下步骤：将2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺与甲烷硫磺酸相接触，从而生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺甲磺酰基盐。
在另一个方面，本发明涉及使用如上所述的制备KX2-391的过程制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺二盐酸盐的过程，该过程包括如下步骤：将2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺与盐酸相接触，从而生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺二盐酸盐。组合物本发明涉及基本上纯的2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺(KX2-391)及其盐、溶剂化物、水合物或者前体药物：说明书第13页图(KX2-391)。化合物KX2-391的其他名称包括2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺和KX2-391游离碱。
本发明涉及组合物和合成高度纯化的KX2-391(通过高效液相色谱测定＞98.0％)的方法，该方法是安全简便的，并能够大规模的生产KX2-391(＞100克)。优选的，所述合成法以较高的产量生产所述化合物并且其中含有有限的杂质。
在优选的实施方案中，本发明组合物中的KX2-391的纯度大于98％。例如，在本发明组合物中KX2-391的纯度为98.5％、99.0％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或者99.9％。
在优选的实施方案中，本发明的组合物和制剂包括小于2％的杂质。例如，本发明的组合物和制剂包括小于2％的杂质，所述杂质选自下列中任意一种杂质或其结合物：乙基氯化物、乙醇、乙酸乙酯、正庚烷、甲氧基苯和钯。
一些杂质以百万分之一的单位被测量，即其相对重量测定值等于溶解物重量/溶液重量X 1,000,000，例如乙基氯化物的重量/KX2-391二盐酸盐样品的重量X 1,000,000；例如，乙基氯化物的重量/KX2-391甲磺酰基盐样品的重量X1,000,000。
在其他优选的实施方案中，通过液面上气相色谱法剩余溶剂分析可以确定出所述组合物包括小于250百万分之一的乙基氯化物。在一种实施方案中，本发明的化合物和制剂包括乙基氯化物的范围在大约0百万分之一到大约250百万分之一范围内(或此范围内的任何值)。例如，所述组合物包括小于200百万分之一、小于200百万分之一、小于150百万分之一、小于100百万分之一、或者小于50百万分之一的乙基氯化物。
本发明所述的化合物和制剂包括小于大约100百万分之一的钯。在一种实施方案中，本发明的化合物和制剂包括大约0百万分之一到大约100百万分之一的钯(或此范围内的任意值)。例如，所述组合物包括75百万分之一的钯、小于50百万分之一的钯、小于30百万分之一的钯、小于20百万分之一的钯、小于10百万分之一的钯或者小于5百万分之一的钯。
在一种实施方案中，本发明的化合物和制剂包括大约0百万分之一到大约5000百万分之一(或此范围内的任意值)的乙醇。例如，所述组合物包括小于4500百万分之一的乙醇、小于4000百万分之一的乙醇、小于3500百万分之一的乙醇、小于3000百万分之一的乙醇、小于2500百万分之一的乙醇、或者小于2000百万分之一的乙醇。
在一种实施方案中，本发明的化合物和制剂包括大约0百万分之一到大约50,000百万分之一(或此范围内的任意值)的乙酸乙酯。例如，本发明组合物包括小于48,000百万分之一的乙酸乙酯、小于45,000百万分之一的乙酸乙酯、小于40,000百万分之一的乙酸乙酯、小于35,000百万分之一的乙酸乙酯、小于30,000百万分之一的乙酸乙酯或者小于25,000百万分之一的乙酸乙酯。
在一种实施方案中，本发明的化合物和制剂包括大约0百万分之一到大约7,500百万分之一(或此范围内的任意值)的正庚烷。例如，本发明组合物包括小于7,000百万分之一的正庚烷、小于6,500百万分之一的正庚烷、小于6,000百万分之一的正庚烷、小于5,000百万分之一的正庚烷、小于3,000百万分之一的正庚烷或者小于1,000百万分之一的正庚烷。
在一种实施方案中，本发明的化合物和制剂包括大约0百万分之一到大约100百万分之一(或此范围内的任意值)的甲氧基苯。例如，本发明组合物包括小于80百万分之一的甲氧基苯、小于75百万分之一的甲氧基苯、小于50百万分之一的甲氧基苯、小于25百万分之一的甲氧基苯、小于10百万分之一的甲氧基苯或者小于5百万分之一的甲氧基苯。
本发明涉及一种组合物，该组合物包括基本上纯的KX2-391溶剂化物。
本发明涉及一种组合物，该组合物包括基本上纯的KX2-391水合物。
本发明涉及一种组合物，该组合物包括基本上纯的KX2-391酸加成盐。例如，一种盐酸盐。所述酸加成盐可以是，例如，一种二盐酸盐。例如，所述酸加成盐可以是一种甲磺酰基盐。
本发明涉及一种组合物，该组合物包括一种基本上纯的KX2-391酸加成盐。
本发明涉及一种组合物，该组合物包括一种基本上纯的KX2-391盐酸盐。本发明涉及一种组合物，该组合物包括一种基本上纯的KX2-391二盐酸盐。
本发明涉及一种组合物，该组合物包括一种基本上纯的KX2-391甲磺酰基盐。
本发明还包括KX2-391的前体药物。
本发明还包括一种基本上纯的、药学上可接受的KX2-391盐。
本发明涉及一种组合物和至少一种药学上可接受的赋形剂，该组合物包括一种基本上纯的KX2-391或者它的溶剂化物、水合物或者盐。
本发明涉及基本上纯的2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺二盐酸盐：
Figure G2008800244013D00231
本发明涉及组合物和用于合成高纯度的KX2-391二盐酸盐或者KX2-391 MSA(通过高效液相色谱法测定＞98.0％)的过程，所述过程是安全并且简单的，可以大规模(＞100克)高产率(＞80％)的生产KX2-391二盐酸盐或者KX2-391 MSA，并且具有有限的乙基氯化物(通过液面上气相色谱法剩余溶剂分析确定乙基氯化物的含量＜250百万分之一)。
在优选的实施方案中，本发明组合物中的KX2-391二盐酸盐的纯度大于98％。例如，在本发明组合物中KX2-391二盐酸盐的纯度为98.5％、99.0％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或者99.9％。
在优选的实施方案中，本发明的组合物和制剂包括小于2％的杂质。例如，本发明的组合物和制剂包括小于2％的杂质，所述杂质选自下列中任意一种杂质或其结合物：乙基氯化物、乙醇、乙酸乙酯、正庚烷、甲氧基苯和钯。
在其他的优选的实施方案中，通过液面上气相色谱法剩余溶剂分析确定，组合物包括小于250百万分之一的乙基氯化物。在一种实施方案中，本发明的所述化合物和制剂包括范围在大约0百万分之一到大约250百万分之一(或此范围内任意值)的乙基氯化物。例如，所述组合物包括小于200百万分之一的乙基氯化物、小于200百万分之一的乙基氯化物、小于150百万分之一的乙基氯化物、小于100百万分之一的乙基氯化物、或者小于50百万分之一的乙基氯化物。
本发明所述的化合物和制剂包括小于大约100百万分之一的钯。在一种实施方案中，本发明的化合物和制剂包括大约0百万分之一到大约100百万分之一的钯(或此范围内的任意值)。例如，所述组合物包括75百万分之一的钯、小于50百万分之一的钯、小于30百万分之一的钯、小于20百万分之一的钯、小于10百万分之一的钯或者小于5百万分之一的钯。
本发明还涉及一种组合物，该组合物包括基本上纯的KX2-391二盐酸盐和至少一种药学上可接受的赋形剂。
本发明还涉及一种基本上纯的2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶e-2-基)-N-苯甲基乙酰胺甲磺酰基盐(KX2-391 MSA)：
Figure G2008800244013D00241
本发明涉及组合物和用于合成高纯度的KX2-391MSA(通过高效液相色谱法测定＞98.0％)的过程，所述过程是安全并且简单的，可以大规模(＞100克)高产率(＞80％)的生产KX2-391 MSA，并且具有有限的乙基氯化物(通过液面上气相色谱法剩余溶剂分析确定乙基氯化物的含量＜250百万分之一)。
在优选的实施方案中，本发明组合物中的KX2-391MSA的纯度大于98％。例如，在本发明组合物中KX2-391 MSA的纯度为98.5％、99.0％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或者99.9％。
在优选的实施方案中，本发明的组合物和制剂包括小于2％的杂质。例如，本发明的组合物和制剂包括小于2％的杂质，所述杂质选自下列中任意一种杂质或其结合物：乙基氯化物、乙醇、乙酸乙酯、正庚烷、甲氧基苯和钯。
在其他的优选的实施方案中，通过液面上气相色谱法剩余溶剂分析确定，组合物包括小于250百万分之一的乙基氯化物。在一种实施方案中，本发明的所述化合物和制剂包括范围在大约0百万分之一到大约250百万分之一(或此范围内任意值)的乙基氯化物。例如，所述组合物包括小于200百万分之一的乙基氯化物、小于200百万分之一的乙基氯化物、小于150百万分之一的乙基氯化物、小于100百万分之一的乙基氯化物、或者小于50百万分之一的乙基氯化物。
本发明所述的化合物和制剂包括小于大约100百万分之一的钯。在一种实施方案中，本发明的化合物和制剂包括大约0百万分之一到大约100百万分之一的钯(或此范围内的任意值)。例如，所述组合物包括75百万分之一的钯、小于50百万分之一的钯、小于30百万分之一的钯、小于20百万分之一的钯、小于10百万分之一的钯或者小于5百万分之一的钯。
本发明还涉及一种组合物，该组合物包括基本上纯的KX2-391 MSA和至少一种药学上可接受的赋形剂。
本发明的某些化合物是非三磷酸腺苷竞争性激酶抑制剂。
例如，本发明化合物可以有效用于治疗和预防微生物感染，例如，细菌感染、真菌感染、寄生虫感染或者病毒性传染病。
本发明的某些药物组合物包括基本上纯的KX2-391二盐酸盐。
本发明的化合物可以被用作一种药物制剂。例如，本发明化合物可以碑用作一种抗增生试剂，用于治疗人类和/或动物，例如，用于治疗人类和/或其他的哺乳动物。本发明化合物可以被用作，例如但不限于，抗癌剂、抗血管新生剂、抗微生物剂、抗细菌剂、抗真菌剂、抗寄生菌剂和/或抗病毒制剂。另外，所述化合物还可以被用于治疗其他的与细胞增殖有关的紊乱，例如，糖尿病性视网膜病、黄斑退化和银屑病。抗癌症剂包括抗转移剂。
可以用作药物试剂的本发明化合物可以是，例如，基本上纯的KX2-391、KX2-391二盐酸盐或者KX2-391 MSA。
本发明提供了包含有限杂质的组合物和制剂。使用本领域已知的方法，例如高效液相色谱法测定的本发明的组合物和制剂的纯度大于大约98％。在一种实施方案中，本发明的化合物和制剂具有的纯度范围在大约99.0％到大约100％之间(或此范围内的任意值)。例如，这种化合物、组合物或者制剂的纯度可以是98.1％、98.2％、98.3％、98.4％、98.5％、98.6％、98.7％、98.8％、98.9％、99.0％、99.1％、99.2％、99.3、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或者99.9％。
为了发挥本发明组合物和制剂的最大药效和治疗剂作用，限制杂质水平是有好处的，所述杂质例如乙基氯化物和钯。这些杂质会导致不希望的毒性。
在优选的实施方案中，本发明的组合物和制剂包括小于2％的杂质。例如，本发明的组合物和制剂包括小于2％的杂质，所述杂质选自下列中任意一种杂质或其结合物：乙基氯化物、乙醇、乙酸乙酯、正庚烷、甲氧基苯和钯。
在其他的优选的实施方案中，通过液面上气相色谱法剩余溶剂分析确定，组合物包括小于250百万分之一的乙基氯化物。在一种实施方案中，本发明的所述化合物和制剂包括范围在大约0百万分之一到大约250百万分之一(或此范围内任意值)的乙基氯化物。例如，所述组合物包括小于200百万分之一的乙基氯化物、小于200百万分之一的乙基氯化物、小于150百万分之一的乙基氯化物、小于100百万分之一的乙基氯化物、或者小于50百万分之一的乙基氯化物。
本发明所述的化合物和制剂包括小于大约100百万分之一的钯。在一种实施方案中，本发明的化合物和制剂包括大约0百万分之一到大约100百万分之一的钯(或此范围内的任意值)。例如，所述组合物包括75百万分之一的钯、小于50百万分之一的钯、小于30百万分之一的钯、小于20百万分之一的钯、小于10百万分之一的钯或者小于5百万分之一的钯。使用方法
由于激酶被包括在各种各样的正常的细胞信号转导途径(例如，细胞生长、细胞辨别、细胞生存、粘附、迁徙等等)中，激酶被认为在多种疾病和紊乱中发挥重要作用。因此，对激酶信号级联的调节会被认为是治疗或者预防这些疾病和紊乱中的一种重要方法。所述疾病和紊乱包括但不仅限于，癌症、骨质疏松症、心血管紊乱、免疫系统功能紊乱、II型糖尿病、肥胖和移植排异反应。
本发明化合物可以有效用于调控激酶信号级联的一种组分。某些化合物可以用于调控激酶信号级联的一种以上组分。这里的术语“调控蛋白激酶信号级联中一种或一种以上组分”是指所述激酶信号级联中的一种或一种以上组分能够受到影响从而改变细胞的功能。蛋白激酶信号级联的组分包括直接或者间接包括在激酶信号途径中的任何蛋白质，包括第二信使和上游靶子以及下游靶子。
许多蛋白质激酶和磷酸酶都是已知的，且是治疗剂研发的靶点。参见，例如Hidaka and Kobayashi，Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol，1992，32：377-397；Davies et al.，Biochem.J.，2000，351：95-105。这些文献的全部内容在此通过引证全部并入本文。
蛋白质酪氨酸激酶作为激酶中的一族，可以被分为两种：受体酪氨酸激酶或者RTKs(例如，胰岛素受体激酶(IRK)、表皮生长因子受体(EGFR)、碱性的成纤维细胞生长因子受体(FGFR)、血小板衍生生长因子受体(PDGFR)、血管内皮生长因子受体(VEGFR-2或者Flkl/KDR)、和神经生长因子受体(NGFR))和非受体酪氨酸激酶或者NRTKs(例如，Src族(Src、Fyn、Yes、BIk、Yrk、Fgr、Hck、Lck和Lyn、黏着斑激酶、Jak、AbI和Zap70)。参见，例如，Parang and Sun，Expert Opin.Ther.Patents，2005，15：1183-1207，该文献通过引证在此全部并入本文。
由于Src激酶在多种癌症中的作用，在很多关于使用Src抑制剂作为癌症治疗剂的发展研究中，都将所述激酶作为研究课题，所述癌症尤其包括高转移性的癌细胞生长。Src抑制剂可以被用作多种癌症的治疗剂，所述癌症包括例如，结肠癌、癌症前期结肠病变、卵巢癌、乳癌、上皮癌、食道癌、非小细胞肺癌、胰腺癌等等。参见，例如，Frame，Biochim.Biophys.Acta，2002，1602：114-130和Parang and Sun，Expert Opin.Ther.Patents，2005，15：1183-1207的描述。
其他激酶的抑制作用在治疗和调控其他类型的疾病和紊乱时是有效的。例如，通过给药VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂可以预防或者抑制各种眼部疾病。酪氨酸磷酸酶PTP-IB和/或糖原磷酸化酶的抑制剂可以用于治疗II型糖尿病或者肥胖症。p56lck的抑制剂可以用于治疗免疫系统紊乱。其他的靶点包括艾滋病病毒反转录酶、凝血恶烷合成酶、EGFRTK、p55 fyn、等等。
本发明的化合物可以是结合于Src肽底物地点的Src信号抑制剂。在c-Src(特定活性和变形的527F)转化的NIH3T3细胞和人类结肠癌细胞(HT29)中研究了本发明各种不同的化合物的活性。例如，在这些细胞系中，KX2-391表现出能够以剂量依赖的方式减少已知Src蛋白质底物的磷酸化作用水平，且能够与生长抑制作用很好的结合在一起。因此，在某些实施方案中，本发明化合物可以直接抑制Src，而且可以通过结合到肽结合部位(与结合到一种变构位点相反)来完成这一过程。
进行分子模型实验，表现出本发明化合物能够与模型Src底物地点相吻合(参见，例如，美国专利第7,005,445号和第7,070,936号)。为了靶向其他的激酶，也可以使用模型重组Src激酶抑制剂骨架，重组过程可以简单的通过将不同的侧链类型呈递到分子上和/或修饰骨架本身来完成。
不希望被任何理论所束缚，但是普遍认为某些胞外激酶(例如，Src)的构造与胞内激酶的构造有显著的不同。这是由于在细胞内部，许多激酶被嵌合在多蛋白信号复合物中。由于肽底物结合位点并没有很好的嵌合在分离的激酶(如Src X射线结构所示)中，因此，普遍认为肽底物结合抑制剂抵抗分离激酶的活性将被减弱。在分离激酶试验中，为了结合在这个位点上，要求所述抑制剂结合很小百分比的蛋白质，所述蛋白质是在分离的酶活性试验中与细胞内部存在的酶构造相同的蛋白质。这一过程需要大量过剩的抑制剂来消耗本试验催化性循环过程中大量的酶，从而能够被检测到。
然而，对于基于细胞的试验，由于肽结合部位是定型的，因此不需要大量过量的抑制剂。在基于细胞的Src试验中，SH2和SH3区域结合蛋白已经改变了Src构造从而使肽底物结合部位完全形成。因此，由于所有的酶都处于紧密结合构造，低浓度的抑制剂可以从催化性循环中将酶除去。
大多数已知的激酶抑制剂是腺苷三磷酸竞争性的激酶抑制剂，并且在许多分离的激酶试验中显示较差的选择性。然而，本发明许多化合物都可以被认为是肽底物结合抑制剂。因此，传统的高流通量筛选抗分离酶的化合物，例如Src，不会发现本发明化合物。
本发明的化合物可以是一种激酶抑制剂。本发明化合物可以是一种非三磷酸腺苷竞争性激酶抑制剂。本发明化合物可以直接抑制激酶，或者可以影响激酶途径。在一个实施方案中，本发明化合物抑制蛋白激酶信号级联的一种或一种以上组分。在另一个实施方案中，本发明化合物是一种变构抑制剂。在另一个实施方案中，本发明化合物是一种肽底物抑制剂。在另一个实施方案中，本发明化合物不抑制与蛋白激酶结合的三磷酸腺苷。在一个实施方案中，本发明化合物抑制Src族蛋白激酶。在另一个实施方案中，所述Src族蛋白激酶是pp60c-src酪氨酸激酶。
本发明的化合物可以用作药物试剂，例如，用作治疗剂治疗人和动物。本发明化合物可以用作，例如但不局限于，抗癌剂、抗血管生成剂、抗转移性剂、抗微生物剂、抗细菌剂、抗真菌剂、抗寄生物剂和/或抗病毒剂。
在一个实施方案中，本发明化合物可以被口服给药、肠胃外给药、皮下给药、静脉内给药、肌内注射给药、腹膜内给药、经过产期内滴注法、腔内或者膀胱内滴注法进行给药，局部给药，例如，通过限量泵滴入耳朵、滴入动脉内、滴入病变内给药，或者通过应用到粘膜上给药。在另一个实施方案中，本发明化合物与一种药学上可接受的载体一起给药。癌症
目前有大量的文献可以证明靶向pp60c-src(Src)可以作为一种有效的治疗癌症的疗法，且不会产生严重的毒性。例如，展示提高的表皮生长因子受体PTK信号的肿瘤或者过度表达与Her-2/neu受体有关的肿瘤能够特定的活化Src并提高肿瘤侵入力。在这些细胞中对Src的抑制作用能够导致生长停滞，导致负生长，并颠倒转化的表现型(参见Kami et al.(1999)Oncogene 18(33)：4654-4662)。普遍已知的是，Src活性的异常提升能够允许转化的细胞以一种固定-独立的方式生长。这一现象很明显是由于细胞外基质信号能够与促有丝分裂信号相协调，提高黏着斑激酶/Src途径中Src的活性，并因此阻断在正常状态下应该被活化的凋亡机制。由于诱发了凋亡机制，因此在肿瘤细胞中的黏着斑激酶/Src抑制作用能够导致凋亡。所述凋亡机制在从细胞外基质中脱离时便应该被正常的活化(Hisano，et al.，Proc.Annu.Meet.Am.Assoc.Cancer Res.38：A1925(1997))。另外，Src抑制作用导致减少的VEGF mRNA表达来源于这些Src抑制的细胞系的肿瘤显示了减少的血管生成(Ellis et al.，Journalof Biological Chemistry 273(2)：1052-1057(1998))。
由于在越来越多的人类肿瘤研究中被发现过表达(Levitzki，Current Opinion in Cell Biology，8，239-244(1996)；Levitzki，Anti-Cancer Drug Design，11，175-182(1996))，Src被认为是一种治疗癌症的″通用的″靶子。Src抑制作用在治疗癌症方面的潜在优势是对不受控制的细胞生长的四倍抑制作用，所述不受控制的细胞生长由自分泌生长因子环圈效应引起的，Src抑制作用在治疗癌症方面的潜在优势还在于通过在从细胞基质脱离时引发对转移的抑制作用、通过减少VEGF水平抑制肿瘤血管生成、和较低的毒性。
已有报道证明前列腺癌细胞具有过度表达的桩蛋白(paxillin)和p130cas，且是过度磷酸化的(Tremblay et al.，Int.J.Cancer，68，164-171，1996)，因此是Src抑制剂的一种主要目标。
本发明包括通过对需要的主体给药一种药物组合物来预防或治疗细胞增殖性紊乱的方法，所述药物组合物包括一种基本上纯的KX2-391或其盐、溶剂化物、水合物或者前体药物，和至少一种药学上可接受的赋形剂。本发明包括基本上纯的KX2-391二盐酸盐。本发明包括基本上纯的KX2-391甲磺酰基盐。
例如，细胞增殖紊乱是一种前期癌症或者癌症。能够使用本发明化合物治疗或者预防的细胞增殖紊乱可以是一种癌症，例如，直肠癌或者肺癌。能够使用本发明化合物治疗或者预防的细胞增殖紊乱可以是一种过度增生紊乱。能够使用本发明化合物治疗或者预防的细胞增殖紊乱可以是银屑病(psoriases)。
增殖紊乱的治疗或者预防可以通过酪氨酸激酶的抑制作用进行。例如，所述酪氨酸激酶可以是一种Src激酶或者黏着斑激酶(FAK)。
本发明还提供了一种治疗或预防主体内癌症或者增殖紊乱的方法，包括给药一种组合物，所述组合物包括一种治疗有效剂量的基本上纯的KX2-391、或者其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物，例如，基本上纯的KX2-391、KX2-391二盐酸盐或者KX2-391 MSA。听力损失
如这里所述，本发明化合物可能用来防止或者预防患者听力丧失。为了防止听力丧失或者减少听力损失的程度，所述化合物可以在噪声接触之前给药或者在接触到导致听力丧失的药物之前给药。这种会导致听力损失的药物包括化学治疗药物(例如，靶向毛细胞的以铂为基础的药物)和氨基糖苷类抗生素。本发明化合物可以与某些抗癌药物一起提供一种增效效应。例如，可以通过主要人类肿瘤组织试验可以筛选到促进抑制剂，尤其可以寻找到与其他已知的抗癌药物具有的协同作用。另外，所述蛋白激酶抑制剂还可以减少某些抗癌药物的毒性(例如，对耳蜗和肾脏有毒的以铂为基础的药物)，从而允许剂量增加。
做为选择，本发明的化合物可能用来治疗患者的听力损失。在这个实施方案中，在患者开始出现听力损失之后对患者给药本发明化合物，从而减少听力损失水平。本发明的化合物还可能涉及激酶级联的调控，例如一种激酶抑制剂、一种非腺苷三磷酸竞争性抑制剂、一种酪氨酸激酶抑制剂、一种Src抑制剂或者一种黏着斑激酶(FAK)调节剂。虽然不希望局限于任何理论，但是本领域普通技术人员普遍相信，给药激酶抑制剂能够预防耳蜗毛细胞的细胞凋亡，从而预防听力丧失。在一个实施方案中，对患有听力丧失的患者给药本发明化合物从而预防进一步的听力丧失。在另一个实施方案中，对患有听力丧失的患者给药本发明化合物从而恢复损失的听力。尤其是，在噪声接触之后，耳蜗毛细胞之间紧密的细胞结合点以及细胞-细胞外基质的相互作用被破坏并处于紧张状态。这些紧密的细胞接合点的紧张状态通过一种复杂的信号导致细胞中的细胞凋亡，在所述复杂的信号途径中，酪氨酸激酶作为分子开关，对黏着斑激酶有影响，从而将细胞基质分裂信号传递到细胞核。本领域普通技术人员普遍相信，给药激酶抑制剂能够预防在这些级联中发生的细胞凋亡。
在暴露于噪音中的耳蜗中对细胞凋亡的识别能够产生许多新的可能性，从而预防噪音导致的听力丧失(NIHL)(Hu，et al.，2000，Acta.Otolaryngol.，120，19-24)。例如，通过对耳朵的圆窗部位给药抗氧化剂药物可以防止耳朵产生噪音导致的听力丧失(Hight，et al.，2003，Hear.Res.(听觉研究)，179，21-32；Hu，et al.，Hear.Res.(听觉研究)113，198-206)。具体地说，通过对灰鼠给药FDA(美国食品与药物管理局)批准的抗氧化剂化合物(N-L-乙酰半胱氨酸(L-NAC)和水杨酸)可以减少噪音导致的听力丧失(NIHL)(Kopke，et aL；2000，Hear.Res.(听觉研究)，149，138-146)。此外，Harris等人最近描述了使用Src-PTK抑制剂预防噪音导致的听力丧失(Harris，et aL；2005，Hear.Res.(听觉研究)，208，14-25)。因此，可以推定给药能够调控激酶活性的本发明化合物可以用于治疗听力丧失。
通过活化整合素和通过蛋白质酪氨酸激酶的磷酸化作用，能够使细胞附着或者细胞压力的变化活化多种信号，所述蛋白质酪氨酸激酶包括Src族酪氨酸激酶。Src的相互作用与修饰细胞骨架的信号途径有关，且能够活化多种调节细胞存活率和基因转录的蛋白激酶级联(参见文献
Figure G2008800244013D00351
and Ruoslahti；1999，Science，285，1028-1032中的评论)。事实上，近来的研究结果已经证明在强烈的噪声接触之后分布在细胞基质中的外毛细胞(OHC)被认为包含于耳蜗感觉细胞中由新陈代谢导致的细胞凋亡开始过程中和用机械方法导致的细胞凋亡过程中。具体而言，普遍认为在代谢导致的耳蜗感觉细胞细胞凋亡和机械导致的耳蜗感觉细胞细胞凋亡开始的过程中都涉及Src蛋白质酪氨酸激酶(PTK)信号级联。在最近的研究中，Src抑制剂在106分贝4千赫兹倍频程带噪音条件下提供了4小时的保护作用，这一结果表明在噪声接触之后，外毛细胞中的Src-蛋白质酪氨酸激酶可以被活化(Harris，et aL；2005，Hear.Res.，208，14-25)。因此，能够调控Src活性的本发明化合物可以用于治疗听力丧失。
在本发明的另一个方面，本发明包括预防或者治疗患者听力损失的方法，该方法包括给药一种组合物，所述组合物包括一种治疗有效剂量的基本上纯的KX2-391、或者其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物，例如，基本上纯的KX2-391、KX2-391二盐酸盐或者KX2-391 MSA。
在一个实施方案中，本发明化合物在听力损失发生之前给药。在另一个实施方案中，本发明化合物在听力损失发生之后给药。
在一个实施方案中，本发明化合物与能够导致听力损失的药物一起联合给药，所述能够导致听力损失的药物包括顺铂或者氨基糖苷抗菌素，在另一个实施方案中，本发明化合物与靶向毛细胞的药物一起联合给药。骨质疏松症
本发明涉及预防或者治疗患者骨质疏松症的方法。所述方法包括向患者给药有效量的本发明化合物，从而预防或者治疗骨质疏松症。为了预防骨质疏松症，本发明化合物在发展为骨质疏松症之前给药。做为选择，所述化合物可能用来治疗患者的骨质疏松症。在这个实施方案中，本发明化合物在骨质疏松症开始之后被给药给患者，从而减少骨质疏松程度。
本发明化合物可以是，例如一种非腺苷三磷酸竞争性抑制剂。根据特定的侧链和选择的骨架修饰，本发明化合物可以调控激酶信号级联。本发明化合物可以是一种激酶抑制剂。例如，所述化合物可以是蛋白质酪氨酸激酶(PTK)抑制剂。富含脯氨酸的酪氨酸激酶(PYK2；也叫做细胞粘着激酶β，与粘附斑酪氨酸激酶有关，或者也叫做钙依赖型酪氨酸激酶)和黏着斑激酶(FAK)是非受体蛋白酪氨酸激酶不同族的成员，所述非受体蛋白酪氨酸激酶可以通过多种细胞外的激发剂调节(Avraham，et al.；2000，Cell Signal，12，123-133；Schlaepfer，et al.；1999，Prog.Biophys.MoI.Biol.，71，435-478)。本发明化合物可以是一种Src抑制剂。已经表明，由于破骨细胞功能的损失，Src缺陷与老鼠体内的骨质疏松症有关(Soriano，et al.；1991，Cell，64，693-702)。做为选择，本发明化合物可以调控白细胞间介素-1受体相关的激酶M(IRAK-M)的表达。缺乏白细胞间介素-1受体相关的激酶M(IRAK-M)的老鼠会产生严重的骨质疏松症，所述骨质疏松症与加速的破骨细胞分化、破骨细胞半衰期的延长和他们的活化有关(Hongmei，et al.；2005，7.Exp.Med.，201，1169-1177)。
多核破骨细胞来源于单核吞噬细胞的融合，并在骨质发展和通过骨质再吸收作用重新塑造过程中起到十分重要的作用。破骨细胞是复核的末端分化细胞，该细胞能够降解矿物化的基质。在正常的骨组织中，在通过成骨细胞完成的骨形成和通过破骨细胞完成的骨吸收之间存在一种平衡。当这种动力平衡和高度调节的过程被打破时，骨吸收可以超过骨形成，从而导致骨质损失。由于破骨细胞对骨质的发育和重新塑造是必不可少的，破骨细胞号和/或活性的增加会导致与骨质损失有关的疾病(例如，骨质疏松症)以及与定位骨质损失有关的疾病(例如，类风湿性关节炎、牙周病)。
破骨细胞和成骨细胞都控制着大量的涉及到蛋白质激酶的细胞信号途径。破骨细胞活化是由于骨质粘附作用、细胞骨架重排、连接区域的形成和极化的的形成引起的。本领域普通技术人员普遍相信蛋白质酪氨酸激酶2(PYK2)参与了从细胞表面到细胞骨架中的信号传递，这是由于蛋白质酪氨酸激酶2通过在破骨细胞中的粘附起始信号被酪氨酸磷酸化和活化(Duong，et al.；1998，J.Clin.Invest.，102，881-892)。近来的证据表明，蛋白质酪氨酸激酶2(PYK2)蛋白水平的降低会导致破骨细胞形成和体外骨吸收的抑制作用(Duong，et al.；2001，J.Bio.Chem.，276，7484-7492)。所以，蛋白质酪氨酸激酶2(PYK2)或者其他蛋白质酪氨酸激酶的抑制作用可以通过减少破骨细胞形成和骨吸收减少骨质疏松症的水平。因此，不希望局限于任何理论，假设给药本发明化合物能够调控激酶(例如PTK)活性，就可以对破骨细胞形成和/或骨吸收产生抑制作用，从而治疗骨质疏松症。
通过Src敲除鼠研究和体外细胞实验证明，Src酪氨酸激酶是一种潜在的骨病治疗位点，研究证明，Src酪氨酸激酶能够在破骨细胞(阳性)和成骨细胞(阴性)中起到调整作用。在破骨细胞中，Src通过调节各种信号转导途径，特别是细胞活素和整合素信号，在运动性、极化作用、存活率、活化(波纹边缘形成)和粘附过程中起到至关重要的作用(Parang and Sun；2005，Expert Opin.Ther.Patents，15，1183-1207)。此外，在老鼠体内，src基因的靶向分裂会导致骨硬化病，这是一种以骨吸收减少为特征的疾病，但是在其他组织或者细胞中不会表现出任何明显的形态学或者功能失常(Soriano，et al.1991，Cell，64，693-702)。src1鼠的骨硬化表现型是细胞自发性的，且是由于成熟破骨细胞的缺陷而产生的，所述成熟破骨细胞能够正常表达高水平的Src蛋白质(Home，et al.，1991，Cell，119，1003-1013)。Src酪氨酸激酶能够触发破骨细胞活性并且抑制成骨细胞，通过限制Src酪氨酸激酶的效力，Src抑制剂被认为能够减轻骨质破裂并促进骨形成。由于破骨细胞能够正常地表达高水平的Src，Src激酶活性的抑制作用可能在治疗骨质疏松症中非常有效(Missbach，et al；1999，Bone，24，437-449)。因此，能够调控Src活性的本发明PTK抑制剂可以有效用于治疗骨质疏松症。
例如，在小鼠体内敲出Src基因只会导致一个缺陷，即，不能形成波纹边缘的破骨细胞，因此，不会再吸收骨骼。然而，通过插入激酶缺陷型Src基因，可以恢复小鼠体内的破骨细胞骨骼再吸收功能(Schwartzberg et al.，(1997)Genes &Development 11：2835-2844)。这一结果表明，由于Src蛋白以明显的足够量存在，足以补充并活化破骨细胞基本信号复合物中其他的蛋白质酪氨酸激酶(PTK)(这些PTK对维持破骨细胞功能是必不可少的)，因此可以抑制体内Src激酶活性并不引起已知的毒性。
在本发明的另一个方面，本发明包括预防或者治疗患者骨质疏松症的方法，该方法包括给药一种组合物，所述组合物包括一种治疗有效剂量的基本上纯的KX2-391、或者其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物，例如，基本上纯的KX2-391、KX2-391二盐酸盐或者KX2-391 MSA。
在一个实施方案中，本发明化合物在骨质疏松症发生之前给药。在另一个实施方案中，本发明化合物在骨质疏松症发生之后给药。肥胖症
如这里所述，本发明化合物可能用来预防或者防止患者患上肥胖症。为了预防肥胖症，所述化合物可以在患者发展成肥胖症开始之前给药。例如，给药本发明化合物可以预防或者降低体重增加。做为选择，所述化合物可以用来治疗患者体内的肥胖症。本发明化合物涉及激酶信号级联的调控，例如，一种激酶抑制剂、一种非腺苷三磷酸竞争性抑制剂、一种酪氨酸激酶抑制剂、一种蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制剂或者一种蛋白质-酪氨酸磷酸酶IB抑制剂。
肥胖症与糖尿病和有关且与胰岛素应答组织中增加的胰岛素抵抗力有关，所述胰岛素应答组织例如骨骼肌、肝和白色脂肪组织(Klaman，et al.，2000，MoI.Cell.Biol，20，5479-5489)。胰岛素在调节葡萄糖体内平衡、脂类代谢、和能量平衡过程中起到了至关重要的作用。通过将胰岛素结合到胰岛素受体(IR)上产生胰岛素信号，其中所述胰岛素受体(IR)是一种受体酪氨酸激酶。胰岛素的结合引起一系列磷酸化作用级联，从多倍酪氨酰残基上胰岛素受体的自动磷酸化作用开始。自动磷酸化作用能够提高胰岛素受体激酶活性并且引发下流信号。蛋白质酪氨酸激酶的刺激效应和蛋白质酪氨酸磷酸酶的抑制效果基本上定义了胰岛素的作用。适当的胰岛素信号使血液中葡萄糖浓度的波动减少，并且能够保证将足够的葡萄糖传递到细胞中。由于胰岛素刺激会导致多倍酪氨酰磷酸化作用，一种或一种以上蛋白质-酪氨酸磷酸酶(PTPs)将会对胰岛素产生抵抗力，从而导致肥胖症。甚至，在不同的胰岛素耐受状态中，例如肥胖症，已经报道了多起增加的蛋白质-酪氨酸磷酸酶活性(Ahmad，et al；1997，Metabolism，46，1140-1145)。因此，不希望限制于任何理论，本发明化合物的给药能够调节激酶(例如、蛋白质-酪氨酸磷酸酶)活性、从而治疗患者所患有的肥胖症。
胰岛素信号开始于胰岛素受体通过酪氨酸磷酸化作用的活化，并在葡萄糖通过葡萄糖转运装置GLUT4进入细胞中时达到顶点(Saltiel and Kahn；2001，Nature，414，799-806)。然后，活化的胰岛素受体失活并恢复到原始状态，这一过程被认为包括蛋白质酪氨酸磷酸酶-lB(PTP-IB)(Ahmad，et al；1997，J.Biol.Chem.，270，20503-20508)。在老鼠体内编码蛋白质-酪氨酸磷酸酶-IB基因的破裂会导致胰岛素的感受性和增加的对饮食导致的肥胖症的抵制(Elchebly，et al；1999，Science，283，1544-1548；Klaman，et al；2000，MoI.Cell.Biol，20，5479-5489)。在蛋白质-酪氨酸磷酸酶-IB缺乏型老鼠体内减少的肥胖症是由于脂肪细胞质量的显著减少，但是脂肪细胞的数量并没有减少(Klaman，et al；2000，MoI Cell.Biol，20，5479-5489)。此外，蛋白质-酪氨酸磷酸酶-lB-缺乏型老鼠的缺乏伴随着增加的基础代谢率和总能量消耗，但是没有显著的改变未耦合的蛋白质mRNA的表达。蛋白质-酪氨酸磷酸酶-IB基因的分裂表示改变蛋白质-酪氨酸磷酸酶-IB的活性可以调控胰岛素信号和体内饮食导致的肥胖症。因此，虽然不希望被一定的理论所限制，给药本发明能够调控胰岛素信号(例如，蛋白质-酪氨酸磷酸酶-IB活性)的化合物能够用于治疗患者体内的肥胖症。
在本发明的另一个方面，本发明包括预防或者治疗患者肥胖症的方法，该方法包括给药一种组合物，所述组合物包括一种治疗有效剂量的基本上纯的KX2-391、或者其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物，例如，基本上纯的KX2-391、KX2-391二盐酸盐或者KX2-391 MSA。
在一个实施方案中，本发明化合物在肥胖症发生之前给药。在另一个实施方案中，本发明化合物在肥胖症发生之后给药。糖尿病
如这里所述，本发明化合物可以用来预防或者防止患者患上糖尿病。为了预防糖尿病，所述化合物可以在患者发展成糖尿病之前给药。做为选择，所述化合物可以用来治疗患者体内的糖尿病。本发明化合物涉及调控一种激酶信号级联，例如一种激酶抑制剂、一种非腺苷三磷酸竞争性抑制剂、一种酪氨酸激酶抑制剂、磷酸酶和染色体10(PTEN)抑制剂的张力同族体、或者与2-包含环己六醇5′-磷酸酶2(SHIP2)抑制剂的序列。
2型糖尿病(T2DM)是一种错调的能量代谢紊乱。能量代谢主要通过胰岛素和一种有效的合成代谢试剂控制，所述合成代谢剂能够有效的促进蛋白质、碳水化合物和脂质的合成和贮存，并抑制他们的分解和重新释放进入代谢循环。胰岛素的作用通过结合其酪氨酸激酶受体而引发，并导致激酶的自动磷酸化作用和增加的催化活性(Patti，et al；1998，J.Basic CHn.Physiol.Pharmacol.9，89-109)。酪氨酸磷酸化作用导致胰岛素受体底物(IRS)蛋白质对磷脂酰肌醇3-激酶(PBK)的p85调节亚单位有影响，从而依靠细胞类型，导致所述酶的活化并使其靶向一种特殊的亚细胞位置。所述酶会产生一种脂类产物磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸盐(PtdIns(3，4，5)P3)，这种脂类产物能够调节许多蛋白质的定位和活性(Kido，et al；2001，J.Clin.Endocrinol.Metab.，86，972-979)。磷脂酰肌醇3-激酶(PBK)在胰岛素刺激的葡萄糖吸收和贮存、脂解的抑制作用和肝脏基因表达的调节中起到重要作用(Saltiel，et al；2001，Nature，414，799-806)。PI3K显性基因干扰形式的过表达可以阻碍葡萄糖吸收和谷氨酸转运蛋白4(GLUT4)向质膜的转移(Quon，et al.′，1995，MoI.Cell.Biol，15，5403-5411)。因此，给药本发明能够调控激酶(例如磷脂酰肌醇3-激酶(PBK))活性的化合物会导致增加的葡萄糖吸收，从而可以有效的治疗糖尿病。
PTEN是可能的细胞型中磷脂酰肌醇3-激酶(PBK)信号的主要调节器，由于能够抵抗磷脂酰肌醇3-激酶(PBK)途径的抗凋亡、增生和过度生长活性，因此能够起到肿瘤抑制剂的作用(Goberdhan，et ah；2003，Hum.MoI.Genet.，Yl，R239-R248；Leslie，et al；2004，J.Biochem.，382，1-11)。虽然不希望被任何理论所限制，人们普遍相信PTEN能够通过PtdIns(3，4，5)P3分子的脱磷酸作用减少PI3K途径，从而将这种重要的脂质第二信使降解为Ptdlns(4，5)p2。在最近的研究中，利用小干扰的RNA(siRNA)降低50％的内生PTEN蛋白质能够提高PtdIns(3，4，5)P3水平中胰岛素依赖型的增加，和葡萄糖的吸收(Tang，et al；2005，J.Biol.Chem.，280，22523-22529)。因此，不希望被任何理论所限制，假设给药本发明的可以调控PTEN活性的化合物能够增加葡萄糖吸收，因此，可以用于治疗糖尿病。
PtdIns(3，4，5)P3的浓度还可以通过包含SRC同系物2(SH2)的环己六醇5′-磷酸酶(SHIP)蛋白质族、SHIP1和SHIP2来控制(Lazar and Saltiel；2006，Nature Reviews，5，333-342)。在骨骼肌和其他胰岛素敏感组织中表达的SHIP2催化PtdIns(3，4，5)P3转化变成PtdIns(3，4)P2(Pesesse，et al；1997；Biochem Biophys.Res.Commun.，239，697-700；Backers，et al；2003，Adv.Enzyme Regul，43，15-28；Chi，et al；2004，J.Biol Chem.，279，44987-44995；Sleeman，et al；2005，Nature Med.，11，199-205)。SHIP2的过表达显著的减少了胰岛素刺激的PtdIns(3，4，5)P3水平，使其与建议的SHIP2容量相一致，从而减少PI3K下流效应因子的活化作用(Ishihara，et al；1999，Biochem.Biophys.Res.Commun.，260，265-272)。因此，不希望被任何理论所限制，给药本发明调控SKQP2活性的化合物能够增加葡萄糖吸收，因此能够有效的治疗糖尿病。
在本发明的另一个方面，本发明包括预防或者治疗患者糖尿病的方法，该方法包括给药一种组合物，所述组合物包括一种治疗有效剂量的基本上纯的KX2-391、或者其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物，例如，基本上纯的KX2-391、KX2-391二盐酸盐或者KX2-391 MSA。
在一个实施方案中，本发明化合物在糖尿病发生之前给药。在另一个实施方案中，本发明化合物在糖尿病发生之后给药。眼部疾病
如这里所描述的，本发明化合物可能用来预防或者防止患者发生眼部(眼睛)疾病。为了预防眼部疾病，所述化合物可能在患者患上眼部疾病之前给药。做为选择，所述化合物可能用来治疗患者的眼部疾病，例如黄斑变性、视网膜病和黄斑水肿。本发明化合物可能涉及激酶级联的调控，例如一种激酶抑制剂、一种非腺苷三磷酸竞争性抑制剂、一种酪氨酸激酶抑制剂，例如一种血管内皮的生长因子(VEGF)受体酪氨酸激酶抑制剂。
生理上无血管生成的角膜上可以发生威胁视力的新血管生成。增生性的视网膜病、主要与糖尿病性视网膜病和年龄有关的黄斑变性具有增加的血管通透性的特点，这回导致视网膜网膜水肿和视网膜下液体蓄积作用，和有出血倾向的新血管增生。血管生成、从先前存在的毛细血管中形成的新血管是正常发育和许多病理过程不可分割的部分。VEGF是血管生成复杂级联的一种主要介质和一种有效的渗透因子，也是一种新疗法的最具引力的靶点。VEGF是两膜结合酪氨酸激酶受体、VEGFR-I和VEGFR-2的配位体。配体结合引起VEGFR二聚作用和随后活化的胞内酪氨酸激酶区域的转磷酸作用。得到的胞内信号轴导致血管内皮细胞增殖、迁徙和残存。因此，不希望被任何理论所限制，给药本发明调控激酶活性的化合物，例如，给药本发明中能够调控酪氨酸激酶活性的化合物能够导致血管生成和/或新血管生成的抑制作用，因此可以有效的治疗一种眼部疾病，例如黄斑变性、视网膜病和/或黄斑水肿。
黄斑变性的特点在于VEGF-调节的视网膜渗漏(一种增加的血管通透性)和眼后部小血管的异常生长(血管生成)。在糖尿病性视网膜病和与年龄有关的黄斑变性的新生视网膜膜中已经识别出VEGF，并且，该因子的眼内浓度与糖尿病性视网膜病中的新血管生成的严重程度有关(Kvanta，et al.，1996，Invest.Ophthal.Vis.ScL，37，1929-1934.；Aiello，et al；1994，N.Engl.J.Med.，331，1480-1487)。VEGF在这些模型中的治疗拮抗作用对视网膜新血管生成和脉络膜新血管生成产生重要的抑制作用，并且，导致血管通透性减少(Aiello，et al.；1995，Proc.Natl.Acad.ScL USA.，92，10457-10461；Krzystolik，et al.；2002，Arch.Ophthal，120，338-346；Qaum，et al；200\，Invest.Ophthal.Vis.ScL，42，2408-2413)。因此，不希望被任何理论所限制，本领域技术人员假设给药本发明中能够调控VEGF活性的化合物能够导致血管生成和/或新血管生成的抑制作用，因此可以有效用于治疗一种眼部疾病，例如黄斑变性、视网膜病和/或黄斑水肿。
在本发明的另一个方面，本发明包括预防或者治疗患者眼部疾病的方法，所述眼部疾病例如黄斑变性、视网膜病和黄斑水肿，等等，该方法包括给药一种组合物，所述组合物包括一种治疗有效剂量的基本上纯的KX2-391、或者其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物，例如，基本上纯的KX2-391、KX2-391二盐酸盐或者KX2-391 MSA。
在一个实施方案中，本发明化合物在眼部疾病发生之前给药。在另一个实施方案中，本发明化合物在眼部疾病发生之后给药。中风
本发明化合物可以被用于治疗、预防或者缓解患者中风的方法中，所述患者是指有风险发生中风的患者、患有中风的患者或者患过中风的患者。本发明化合物还可以有效用于治疗经历中风后复原的病人的治疗方法中。
中风也称作脑血管意外(CVA)，是一种急性神经学伤害，是由于动脉堵塞或者血管破裂产生的一部分脑部血液供给的间断。血液供给间断的脑部部分不再收到血液运输的氧气和/或营养素，从而使脑细胞受到伤害或者坏死，从而损害该部分大脑的功能或者由于此部分大脑而产生的功能。如果在60到90秒以上的时间内没有氧气供给，脑组织将停止起作用，且在随后的几分钟仍然没有氧气供给的话，脑组织会遭受不可逆的伤害或者导致脑组织的死亡，那就是说梗塞死。
中风分为两种主要的类别：缺血性中风和出血性中风，其中，缺血性中风是指堵塞供给脑部的血管，出血性中风是指血液泄漏进入脑中或者分布在大脑周围。大多数中风是缺血性中风。缺血性中风通常分成血栓形成的中风、脑栓塞、全身性灌注不足(脑分水岭梗死)、或者静脉血栓形成。在血栓形成的中风中，在受到影响的动脉中形成血栓，形成的血栓，即血块会逐渐的使动脉管腔变窄，从而阻止血液流到末梢组织中。这些血块通常围绕动脉粥样硬化斑块形成。根据形成血栓的血管种类不同，血栓形成的中风可以被分为两种。大血管的血栓形成性中风包括公有的和内部颈动脉、椎动脉和Willis循环动脉血管中风。小血管形成的中风包括脑内动脉中风、Willis循环分支血管中风、大脑中动脉血管中风和从脊椎末梢上升的动脉中风和基底动脉中风。
即使是非闭合型血栓也会导致脑栓塞，如果血栓脱落，在脱落位点会形成一种栓子。一种栓子是指一种来源于其他部分但可以在动脉血液中移动的颗粒或者碎片。脑栓塞是指通过一种栓子堵塞通向脑部的动脉。这里的栓子通常是指一种血块，但还可以是指一种从动脉粥样硬化患者血管中脱离的动脉粥样斑或者许多其他的物质，包括脂肪、空气、甚至癌细胞。由于栓子出现在别处，局部治疗只不过解决了暂时的问题。因此，必须识别出栓子的来源。一共存在四类脑血栓：已知的来源于心脏的血栓、具有潜在的心脏或者动脉来源的血栓(来自穿胸超声心动图或者穿食道超声心动图)、来自动脉的血栓和未知来源的血栓。
全身性灌注不足是指降低流到身体各个部分的血流量。这通常是由于心跳骤停或者心律不齐而产生的心脏输血故障，或者是由于心肌梗死、肺栓塞、心包积液或者流血造成的心搏排血量减少而产生的。低血氧症(即，低血氧含量)可能导致灌注不足。由于血流的减少是全身性的，整个大脑都有可能受到影响。尤其是由主要脑动脉供给的边界区域，脑分水岭部分。流到这些区域的血流量被不必须的停止了，但同时也减轻了脑损伤发生的程度。
脑部静脉起到将血液排出流回身体的功能，当静脉由于血栓形成而被堵塞时，血液回流被阻断且血液倒退造成大脑水肿。脑水肿可以导致缺血性和出血性中风，这通常发生在少数凹处静脉血栓形成疾病中。
利用一种或一种以上本领域已知的技术可以诊断患者或病人所患的中风，例如，神经病学试验、血液试验、CT扫描(无反向增强)、核磁共振成像扫描、多普勒超声、和动脉造影术(即，向血液中注射放射材料之后对动脉进行伦琴射线照相术)。如果中风是通过图像确认的，进行各种其他的研究从而确定是否存在外周的动脉栓子。这些研究包括，例如，一种颈动脉超声/多普勒效应研究(检测颈动脉狭窄症)；心电图(ECG)和超声心动图(识别心律不齐和在心脏部分形成并有可能通过血液转移到脑部血管的血块)；Holter监视器研究，从而识别间歇性的心律不齐和大脑脉管系统的血管造影照片(如果流血现象被认为是由于动脉瘤或者动静脉畸形造成的话)。
本发明化合物可以用于治疗、预防或者缓解中风或者与中风有关的症状，所述化合物可以在中风发生之前、期间或者之后调控激酶信号级联。在某些实施方案中，所述化合物是一种激酶抑制剂。例如，所述化合物是一种酪氨酸激酶抑制剂。在一种实施方案中，所述酪氨酸激酶抑制剂是一种Src抑制剂。例如，这里描述的化合物，即本发明治疗、预防或者缓解中风或者与中风有关的症状的方法中使用的化合物是一种激酶信号级联的变构象抑制剂，可以在中风发生之前、期间或者之后起作用。优选的，这里描述的化合物，即本发明治疗、预防或者缓解中风或者与中风有关的症状的方法中使用的化合物是一种激酶信号级联的非腺苷三磷酸竞争性抑制剂，可以在中风发生之前、期间或者之后起作用。
Src活性的抑制作用能够在中风期间对大脑起到保护作用(参见文献Paul et al.，Nature Medicine，vol.7(2)：222-227(2001)该文献通过引证再起全部并入本文)。缺血性伤害会产生一种血管内皮生长因子(VEGF)，这种血管内皮生长因子(VEGF)能够促进血管通透性。研究表明，中风之后，Src激酶能够调节血管内皮生长因子-调节的脑部的VP，且在中风之前或之后给药一种Src抑制剂能够减少水肿、改善大脑灌注并减少伤害发生之后的梗塞体积(Paul et al.，2001)。因此，Src抑制作用可以有效的用于预防、治疗或者改善中风之后的连环破坏作用。
本发明化合物能够预防、治疗或者缓解中风或者与中风有关的症状。中风的症状包括突然麻木或者虚弱，特别是身体单侧的突然麻木或者虚弱；突然意识模糊或者发音困难或者无法理解谈话内容；双眼或者单眼突然无法视物；突然难以走路、头昏眼花或者失去平衡能力或协调能力；或者突然的没有原因的剧烈头痛。
通常中风分为三个治疗阶段：预防、中风之后立即治疗和中风后康复治疗。预防首次中风或者反复中风的治疗剂是根据下列中风风险系数的，例如，高血压、高胆固醇、心房颤动和糖尿病。急性中风的治疗方法试图在发生时通过快速溶解缺血性中风造成的血块或者通过停止出血性中风的出血来治疗中风。中风后复原治疗能够帮助患者克服由于中风伤害造成的无法自理的问题。药物处理或者药物疗法是中风常见的治疗方法。用于预防或者治疗中风的最流行的药物是抗血栓形成剂(例如，抗血小板剂和抗凝剂)和溶解血栓剂。对有危险患上中风、正在患有中风或者已经患有中风的病人，在中风之前、期间或者之后，或者中风过程的任意时间内给药本发明化合物。本发明化合物可以单独给药、可以在药物组合物中给药，或者与任何一种已知的治疗剂一起给药，所述已知的治疗剂例如，抗血小板药物(例如，乙酰水杨酸、氯吡格雷、双嘧哌胺醇)、一种阻凝剂(例如丙酮苄羟香豆素)、或者一种溶解血栓剂药物(例如，组织纤溶酶原激活物(t-PA)、瑞替普酶(reteplase)、尿激酶、链激酶、肝素(tenectaplase)、兰替普酶(lanoteplase)或者阿尼普酶(anistreplase)。
在本发明的另一个方面，本发明包括预防或者治疗患者中风的方法，所述眼部疾病例如黄斑变性、视网膜病和黄斑水肿，等等，该方法包括给药一种组合物，所述组合物包括一种治疗有效剂量的基本上纯的KX2-391、或者其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物，例如，基本上纯的KX2-391、KX2-391二盐酸盐或者KX2-391 MSA。
在一个实施方案中，本发明化合物在中风发生之前给药。在另一个实施方案中，本发明化合物在中风发生之后给药。动脉硬化症
本发明化合物可以用于治疗、预防、缓解患者动脉粥样硬化症或者其症状的方法中，所述患者是指有风险患有或者已经患有动脉粥样硬化症的患者。
动脉粥样硬化症是一种影响动脉血管的疾病，且通常被认为是动脉″变硬″。这是由于动脉内部多发性动脉粥样斑的形成造成的。动脉粥样硬化患者的动脉粥样斑尽管能够弥补动脉的扩大，但最终会导致动脉粥样斑破裂和动脉狭窄症(即，动脉变窄)，并因此导致对需要的器官的血液供给不足。做为选择，如果动脉扩大过程被过度补偿的话，会导致一种网状动脉瘤。这是一种慢性的并发症，是慢慢的发展并积累的结果。通常，软动脉粥样斑的突然破裂会导致血块形成(即，血栓)，血块能够快速的减缓或者阻止血流通，并因此，导致由动脉供给的组织死亡。这种灾变性事件被称作梗塞死。例如，冠状动脉的冠状动脉血栓形成会导致心肌梗死，即通常人们所说的心脏病发作。当动脉粥样硬化患者的动脉粥样斑渐渐堵塞冠状动脉的内壁并随后突然破裂，完全阻塞动脉并且阻止血流下流，就会发生心肌梗死。
使用任何一种临床试验和/或实验室试验，例如，物理学检查、放射性试验或者超声试验和血液分析就可以诊断病人是否患有动脉粥样硬化症和急性心肌梗塞。例如，医生或者临床上可以通过听取患者动脉的声音来检测异常的流动声音，也叫做杂音。使用听诊器放置在收到影响的动脉上可以听到杂音。做为选择，或者另外，临床医师或者内科医师也可以检查脉冲，例如，检查腿上或者脚上的脉冲，来确诊一些异常情况，例如，虚弱或者失神。内科医师或者临床上可以进行血液研究来检查胆固醇含量或者检查心脏酵素水平，从而检测异常情况，所述心脏酵素例如肌酸激酶、肌钙蛋白和乳酸脱氢酶。例如，肌钙蛋白亚单位I或者T对心肌具有非常特殊的作用，能够在造成永久性损伤之前浓度大量上升。在胸痛时表现肌钙蛋白阳性的现象可以准确地预告在不久的将来发生心肌梗死的高可能性。其他诊断动脉粥样硬化症和/或心肌梗死到检验法包括，例如，用于测定患者心跳速率和规律性的EKG(心电图)；用于测定脚关节/臂指数的胸部X射线，并将脚关节处的血压与臂处的血压相比较；动脉的超声分析；重要部分的CT扫描；血管造影术；运动应力试验，核心脏扫描；和心脏的核磁共振成像(MRI)和电子发射断层扫描(PET)扫描。
本发明化合物可以用于治疗、预防或者缓解动脉粥样硬化症或者其症状的方法中，所述化合物是一种能够调节有风险患有或者已经患有动脉粥样硬化症的病人体内激酶信号级联的化合物。在某些实施方案中，所述化合物是一种激酶抑制剂。例如，所述化合物是一种酪氨酸激酶抑制剂。在一种实施方案中，酪氨酸激酶抑制剂是一种Src抑制剂。优选的，在这里描述的，在治疗、预防或者缓解动脉粥样硬化症或者其症状的方法中使用的化合物是涉及动脉粥样硬化症的激酶信号级联的变构象抑制剂。优选的，在这里描述的，在治疗、预防或者缓解动脉粥样硬化症或者其症状的方法中使用的化合物是涉及动脉粥样硬化症的激酶信号级联的非腺苷三磷酸竞争性抑制剂。
Src完成的细胞信号转导被认为在增加血管的通透性，也叫做血管通透性(VP)方面起到了至关重要的作用。作为缺血性伤害的应答机制，会产生血管内皮生长因子(VEGF)，血管内皮生长因子能够促进血管通透性，其中所述缺血性伤害包括，例如，心肌梗死。研究已经证明，Src激酶的抑制作用能够降低血管内皮生长因子-调节的血管通透性(参见Parang and Sun，Expert Opin.Ther.Patents，vol.15(9)：1183-1206(2005)，所述文献通过引证在此全部并入本文)。用Src抑制剂处理后的老鼠与没有被处理过的老鼠相比，在心肌梗死之后显示减少的与血管外伤或者伤害有关的组织损伤(参见例如，Cheresh等人所著的美国专利公开第20040214836号和第20030130209号，所述专利的内容通过引证在此全部并入本文)。因此，Src抑制作用可以有效的用于预防、治疗或者改善由动脉粥样硬化症，例如心肌梗死伤害所造成的连带损坏。
动脉粥样硬化症通常不显示任何症状，除非他已经严重的使动脉变窄或者限制血液流通，或者除非造成了突然的栓塞。动脉粥样斑和狭窄血管发生的症状可以出现在任何位置例如，心、脑、其他的最重要的器官和腿部或者几乎在身体内的任何地方。动脉粥样硬化症最初的症状可能是疼痛或者在运动期间由于身体需要更多的氧气时引起的痛性痉挛，当缺少氧气传递到心脏时，人会感觉胸痛(绞痛)，当缺少氧气传递到腿部时，人会感觉腿部痛性痉挛。动脉供给脑部血液量的减少会导致眩晕或者短暂性缺血性发作(TIA′s)，这时，中风的症状会持续少于24小时。一般地，这些症状会逐渐产生。
心肌梗死症状的特点在于不同程度的胸痛、不适、出汗、虚弱、恶心、呕吐和心律不齐，有时还能造成失去知觉。胸痛是急性心肌梗塞最普遍的症状，且通常被描述为一种紧密的、压迫性的或者挤压的感觉。这种疼痛会辐射到下巴、颈部、臂部、背部和上腹部，最通常是辐射到左臂或者颈部。胸痛最有可能是由于心肌梗塞引起的，当心肌梗塞持续30分钟以上时，就会造成胸痛。患有心肌梗塞的病人会表现出呼吸急促(呼吸困难)，特别是，如果由于梗塞造成的心肌收缩性下降已经足够造成左心室衰竭并造成肺充血或者肺水肿的时候。
本发明化合物可以单独被给药，也可以处于药物组合物中给药，或者与任何一种已知的动脉粥样硬化症治疗方法结合给药，例如，胆固醇下降药物(例如，他汀类)、抗血小板药物、或者抗凝血剂。
在本发明的另一个方面，本发明包括预防或者治疗患者动脉硬化症的方法，该方法包括给药一种组合物，所述组合物包括一种治疗有效剂量的基本上纯的KX2-391、或者其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物，例如，基本上纯的KX2-391、KX2-391二盐酸盐或者KX2-391 MSA。在一个实施方案中，本发明化合物在动脉硬化症发生之前给药。在另一个实施方案中，本发明化合物在动脉硬化症发生之后给药。神经性疼痛
本发明化合物可以用于治疗、预防、缓解患者神经性疼痛，例如慢性神经性疼痛，或者其症状的方法中，所述患者是指有风险患有、正在患有或者已经患有神经性疼痛的患者。
神经性疼痛也叫做神经痛，在疼痛程度上不同于普通受到伤寒之后的疼痛。神经性疼痛通常表现为一种持续的烧灼痛和/或“如针扎″或者“遭电击”之类的感觉。受伤寒的疼痛和神经性疼痛之间的区别是由于″普通″程度不同而产生的。受伤寒的疼痛只不过刺激到疼痛神经，而神经性疼痛通常对同一面积内的疼痛感觉神经和非疼痛感觉神经都有刺激作用(例如，响应接触、温暧、冰冷的神经)，从而生产一种正常状态下脊髓和大脑不会收到的信号。
神经性疼痛是一种复杂的慢性疼痛状态，并且通常伴随有组织损害。在神经性疼痛过程中，神经纤维本身可能被损害、患有功能障碍或者被伤害。这些受到损害的神经纤维向其他的疼痛中心发出非完备信号。神经纤维伤害的影响包括神经功能在伤害地点和伤害面积方面的变化。
使用本领域已知的一种或一种以上实验室方法和/或临床方法可以诊断患者或者病人所患有的神经性疼痛，所述方法例如，物理学检查。
本发明化合物可以有效用于治疗、预防或者缓解神经性疼痛，例如慢性神经性疼痛或者与神经性疼痛有关的症状的方法中，所述化合物是一种能够调控涉及神经性疼痛的激酶信号级联的化合物。
c-Src已经表现出具有调节N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体活性的能力(参见Yu et al，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，vol.96：7697-7704(1999)，所述文献通过引证在此全部并入本文)。已经有研究证明，PP2作为一种低分子量的Src激酶抑制剂能够降低N-甲基-D-天冬氨酸受体NM2亚基的磷酸化作用(参见Guo et al，J.Neuro.，vol.22：6208-6217(2002)，所述文献通过引证在此全部并入本文)。因此，Src抑制作用能够抑制N-甲基-D-天冬氨酸受体活性，从而能够有效地预防、治疗或者改善神经性疼痛，例如慢性神经性疼痛。
本发明化合物能够预防、治疗或者缓解神经性疼痛，例如慢性神经性或者与神经性疼痛有关的症状。神经性疼痛的症状包括射伤疼痛和烧灼疼痛，刺痛和失去知觉。
本发明化合物可以单独被给药，也可以处于药物组合物中给药，或者与任何一种已知的治疗方法结合给药，例如，止痛药、鸦片样物质、三环抗忧郁药、抗惊厥药和5-羟色胺降肾上腺素再吸收抑制剂。
在一个实施方案中，本发明化合物在慢性神经性疼痛发生之前给药。在另一个实施方案中，本发明化合物在慢性神经性疼痛发生之后给药。乙型肝炎
本发明化合物可以用于治疗、预防、缓解患者乙型肝炎或者其症状的方法中，所述患者是指有患上乙型肝炎风险的患者。
所述乙型肝炎病毒是嗜肝DNA病毒族的一员，乙型肝炎病毒由蛋白质核心颗粒和一种包覆所述蛋白质的外部脂质包膜组成，其中所述蛋白质核心颗粒包含双链DNA形式的病毒基因组，该双链DNA形式包含一部分单链区域。蛋白质包膜被包括在病毒结合中，并被释放入易感细胞中。内衣壳将DNA基因组重新安置在细胞核中，在此细胞核中，转录成病毒mRNA。三个编码包膜蛋白质的亚基因转录产物被转录，此转录与编码X蛋白的转录一起进行。转录第四预基因组RNA，该预基因组RNA被包裹在集合的核心颗粒中，并在此通过聚合酶蛋白质进行预基因组RNA向基因组DNA的反转录作用。然后成熟核心颗粒通过正常的分泌途径排出细胞，并在此过程中获得包膜。
乙型肝炎是几种已知的非逆转录病毒之一，这些病毒使用反转录作为复制作用的一部分。其他的使用反转录作用的病毒包括，例如，HTLV或者HIV。
在HBV传染期间，宿主的免疫应答导致肝细胞损害和病毒清除。当先天的免疫反应在这些过程中不再起到重要作用时，自调的免疫反应，特别是病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)是造成与HBV传染有关的肝脏伤害的主要原因。通过杀死受感染细胞和通过产生抗病毒细胞因子能够将HBV从存活的肝细胞中清楚，细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)同时会除去所述病毒。虽然细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)会导致并调节肝损害，抗原-非特异性炎性细胞能够恶化细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)导致的免疫病理学，且血小板能够促进细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)对肝脏的累积过程。
使用任何一种临床试验和/或实验室内试验都可以诊断病人所患有的乙型肝炎，所述临床试验和/或实验室内试验例如，物理学检查和血液或者血清分析。例如，测定血液或者血清中是否存在病毒抗原和/或由宿主生产的抗体。在常见的乙型肝炎检验中，通常使用乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的检测来筛选是否存在传染。这是被乙型肝炎病毒传染之后出现的第一个可检测的病毒抗原；然而，在感染初期，这种抗原并不存在且在之后也不能被检测到，这是由于宿主已经将其清除。在“观察窗”期间，即宿主已经感染但是正在成功的清除病毒时，免疫球蛋白M(IgM)对乙型肝炎核心抗原(抗HBc免疫球蛋白M)抗体是该疾病仅有的血清学证据。
在出现乙型肝炎表面抗原(HBsAg)之后不久，另一个名为乙型肝炎e抗原(HBeAg)的抗原也会出现。通常，乙型肝炎e抗原(HBeAg)在宿主血清中的存在与病毒复制的极高速率有关；然而，乙型肝炎病毒的某些变体并不会产生所述″e″抗原。在传染的正常过程中，乙型肝炎抗原(HBeAg)可能被清除，然后立即出现″e″抗原(抗HBe)的抗体。这一转化通常与病毒复制的明显下降有关。如果宿主能够清除传染，随后，乙型肝炎表面抗原(HBsAg)将会不可检测，并且会出现针对乙型肝炎表面抗原(抗HBs)的抗体。如果患者对乙型肝炎表面抗原显示阴性但是对乙型肝炎表面抗原显示阳性的话，就说明该患者已经清除了感染但是曾经被感染过。许多乙型肝炎表面抗原表现阳性的人也可能会有很轻微的病毒复制，因此，可能会出现长期的并发症或者传染给别人。
本发明化合物可以用于治疗、预防或者缓解乙型肝炎或者其症状的方法中，所述化合物是一种能够调控有风险患有或正在患有乙型肝炎的患者体内激酶信号级联的化合物。在某些实施方案中，所述化合物是一种激酶抑制剂，例如，所述化合物是一种酪氨酸激酶抑制剂。在一种实施方案中，所述酪氨酸激酶抑制剂是一种Src抑制剂。优选的，在这里描述的，在治疗、预防或者缓解乙型肝炎或者其症状的方法中使用的化合物是涉及乙型肝炎的激酶信号级联的变构象抑制剂。优选的，在这里描述的，在治疗、预防或者缓解乙型肝炎或者其症状的方法中使用的化合物是涉及乙型肝炎的激酶信号级联的非腺苷三磷酸竞争性抑制剂。
Src在乙型肝炎病毒复制过程中起着非常重要的作用。在一个增殖HBV病毒所需要的步骤中，所述病毒编码的转录因子HBx活化Src(参见，例如，Klein et al.，EMBO J.，vol.18：5019-5027(1999)；Klein et al.，MoI.Cell.Biol.，vol.17：6427-6436(1997)，这些文献的内容通过引证在此全部并入本文)。因此，Src抑制作用能够抑制Src-调节的HBV病毒增殖，并因此可以有效的用于预防、治疗或者改善乙型肝炎或者其症状。
本发明化合物能够预防、治疗或者缓解乙型肝炎或者与乙型肝炎有关的症状。一般在接触到病毒之后30-180天内，就会发展出现乙型肝炎的症状。然而，大约有一半感染乙型肝炎症状的病人没有出现任何症状。所述乙型肝炎的症状通常好比是流感、并且包括，例如，食欲下降；疲劳；恶心和呕吐、全身瘙痒；肝脏疼痛(例如，右腹部、下部肋骨架之下)、黄疸症和排泄功能方面的变化。
本发明化合物可以单独被给药，也可以处于药物组合物中给药，或者与任何一种已知的乙型肝炎治疗方法结合给药，例如，α干扰素、拉米夫定(lamivudine)(Epivir-HBV)和博路定(baraclude)(恩替卡韦(entecavir))。
在本发明的另一个方面，本发明包括预防或者治疗患者乙型肝炎的方法，该方法包括给药一种组合物，所述组合物包括一种治疗有效剂量的基本上纯的KX2-391、或者其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物，例如，基本上纯的KX2-391、KX2-391二盐酸盐或者KX2-391MSA。
在一个实施方案中，本发明化合物在感染乙型肝炎之前给药。在另一个实施方案中，本发明化合物在感染乙型肝炎之后给药。调节免疫系统活性
如这里所述的，本发明化合物可能用来调节患者体内的免疫系统活性，从而预防或者防止自身免疫性疾病，例如，类风湿性关节炎、多发性硬化、脓毒病和狼疮以及移植排异反应和过敏性疾病。做为选择，所述化合物可能用来治疗患者的自家免疫性疾病。例如，所述化合物可以减少症状的严重程度或者阻挡自身免疫性疾病的逐渐恶化。本发明化合物可能涉及一种激酶信号级联的调控，例如一种激酶抑制剂、一种非腺苷三磷酸竞争性抑制剂、一种酪氨酸激酶抑制剂，例如，一种Src抑制剂、一种p59fyn(Fyn)抑制剂或者一种p56lck(Lck)抑制剂。
自身免疫疾病是由于自体耐受性衰变使自调免疫系统响应自体抗原并且调节细胞和组织损伤造成的。自身免疫疾病可以是器官特异性的(例如，甲状腺炎或者糖尿病)也可以是全身性的(例如，全身性红斑狼疮)。在自调免疫系统中，由T细胞调控细胞介导的免疫反应。在正常情况下，T细胞能够表达识别与主要组织相容性复合体分子结合的异种蛋白肽片段的抗原受体(T细胞受体)。在T细胞受体(TCR)刺激作用之后最初可识别的事件是Lck和Fyn的活化作用，这会导致免疫受体酪氨酸基活化作用基团内部的T细胞受体(TCR)在酪氨酸残基上进行磷酸化作用(Zamoyska，et al.\2003，Immunol.Rev.，191，107-118)。酪氨酸激酶，例如Lck(是蛋白质酪氨酸激酶Src族的成员)在调节细胞信号和通过磷酸化肽和蛋白质的酪氨酸残基调节细胞增殖方面起了至关重要的作用(Levitzki；2001，Top.Curr.Chem.，2，1-15；Longati，et al；2001，Curr.Drug Targets，2，41-55；Qian，和Weiss；1997，Curr.Opin.Cell Biol.，9，205-211)。因此，虽然不希望被任何理论所限制，本领域技术人员可以预料出，给药本发明能够调控酪氨酸激酶(例如Src)活性的化合物能够有效的用于治疗自身免疫性疾病。
酪氨酸激酶lck和fyn都能在T细胞受体途径中被活化，因此，lck和/或fyn的抑制剂能够被用作自身免疫剂(Palaciosand Weiss；2004，Oncogene，23，7990-8000)。Lck和Fyn在其大部分存活期内主要由T细胞表达。Lck和Fyn在T细胞发育、体内平衡和活化作用中的作用已经通过动物和细胞株研究进行了验证(Parang and Sun；2005，Expert Opin.The.Patents，15，1183-1207)。Lck活化作用被包括在自身免疫疾病和移植排异反应中(Kamens，et al；2001，Curr.Opin.Investig.Drugs，2，1213-1219)。结果显示，lck(-)Jurkat细胞系(lck缺陷型细胞系)不能增殖产生细胞因子并且作为T细胞受体刺激的应答，使胞内钙、肌醇磷酸盐和酪氨酸磷酸化作用增加(Straus and Weiss；1992，Cell.，70，585-593；Yamasaki，et al；1996，MoI.Cell.Biol，16，7151-7160)。所以，抑制lck的试剂能够有效的阻断T细胞功能，起到免疫抑制剂的作用，并在自身免疫疾病的治疗方面具有潜在的应用前景，所述自身免疫疾病例如类风湿性关节炎、多发性硬化和狼疮以及在移植区域内的排异反应和过敏性疾病(Hanke and Pollok；1995，Inflammation Res.，44，357-371)。因此，虽然不希望限制与任何理论，给药本发明能够调控一种或一种以上蛋白质酪氨酸激酶Src族成员(例如，lck和/或fyn)的化合物能够有效的用于治疗自身免疫性疾病。
在本发明的另一个方面，本发明包括调节免疫系统活性的方法，该方法包括给药一种组合物，所述组合物包括一种治疗有效剂量的基本上纯的KX2-391、或者其盐、溶剂化物、水合物、或者前体药物，例如，基本上纯的KX2-391、KX2-391二盐酸盐或者KX2-391MSA。定义
为了方便，这里收集了本发明说明书、实施例和所附权利要求书中使用的某些术语。
蛋白质激酶是指一大类酶，这类酶能够催化γ-磷酸盐从腺苷三磷酸传递到蛋白质和肽的丝氨酸/苏氨酸侧链或者酪氨酸侧链的羟基上，而且，这类酶密切涉及到多种重要的细胞功能，或许其中最显著的是：信号转导、辨别和扩增。据估计人体中存在大约2000种不同的蛋白质激酶，尽管每一种激酶只能够使具体的蛋白质、肽底物磷酸化，但是都以高度保守的袋装结构结合相同的第二底物，这种第二底物就是腺苷三磷酸。大约50％的已知致癌基因产物是蛋白质酪氨酸激酶(PTKs)，并且其激酶活性已经表现出能够导致细胞变化。
所述蛋白质酪氨酸激酶可以被分为两类，膜受体蛋白质酪氨酸激酶(例如生长因子受体蛋白质酪氨酸激酶)和非受体蛋白质酪氨酸激酶(例如Src族原致癌基因产物和黏着斑激酶(FAK))。据报道，在大量人类癌症中都发现了Src的过度活化作用，所述癌症包括结肠癌、乳癌、肺癌、膀胱癌和皮肤癌，以及胃癌、毛细胞白血病和成神经细胞瘤。
“抑制蛋白激酶信号级联一种或一种以上组分”是指激酶信号级联中一种或一种以上的组分受到影响，从而改变细胞功能。蛋白激酶信号级联的组分包括任何直接或间接涉及在激酶信号途径中的蛋白质，包括第二信使和上游靶分子和下游靶分子。
″治疗″，包括任何能够改善所述病况、疾病、紊乱等等的作用，例如，减轻、减少、调节或者消除。疾病状态的“治疗″或者“治疗方法”包括：抑制疾病状态，即，抑制疾病状态或其临床症状的发展；减轻所述疾病状态，即，造成疾病状态或其临床症状暂时性的或永久的退行。
“预防”疾病状态包括使疾病状态的临床症状不再在主体内发展，所述主体是指可能暴露于疾病状态中或者易感染所述疾病状态，但是还没有经历或显示所述疾病状态的症状。
“疾病状态”是指任意疾病、紊乱、病况、症状或者适应症。
如这里所使用的术语“细胞增殖性紊乱”是指一种病况，在这种病况中，细胞未经调节的生长和/或异常生长会导致不希望的病况或者疾病的发展，所述病况或者疾病可以是癌症或者非癌症，例如，牛皮癣病。如这里所使用的术语“牛皮癣病”或者“银屑病”是指包括角化细胞过度增殖、炎性细胞浸润和细胞因子变种的疾病。
在一个实施方案中，所述增殖性紊乱是癌症。如这里所使用的术语“癌症”包括实体肿瘤，例如肺癌、乳癌、结肠癌、卵巢癌、脑癌、肝癌、胰腺癌、前列腺癌、恶性黑色素瘤、非黑素瘤皮肤癌以及血液肿瘤和/或恶性肿瘤，例如儿童期白血病和恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤、何杰金病(恶性淋巴肉芽肿)、淋巴细胞的恶性淋巴瘤和皮肤的恶性淋巴瘤、急性和慢性白血病，例如急性成淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、慢性粒细胞性白血病、浆细胞赘生物、淋巴系统赘生物和与艾滋病有关的癌。
除了牛皮癣病之外，可以使用本发明组合物治疗的增殖性疾病的种类是表皮囊肿、皮样囊肿、脂肪瘤、腺瘤、毛细管瘤、皮肤血管瘤、淋巴管瘤、痣病变、畸胎瘤、肾肿瘤、纤维肌瘤、成骨肿瘤，及其他发育异常聚集等等。所述增殖性疾病可以包括发育异常和类似的紊乱。
“治疗有效剂量”是指在治疗某种疾病时对哺乳动物给药的化合物的量足够发挥治疗这种疾病的作用。在一个实施方案中，对哺乳动物给药治疗有效剂量，从而减少疾病的程度，例如，减少听力损失的程度。在一个实施方案中，给药治疗有效剂量的化合物。在另一个实施方案中，给药治疗有效剂量的本发明化合物。所述“治疗有效剂量”根据使用的化合物、被治疗的疾病及其严重程度，以及被治疗的哺乳动物的年龄、体重等等发生变化。
为了对人或动物给药，治疗有效剂量的一种或一种以上化合物可以与药学上可接受的载体一起配制成制剂。因此，化合物或制剂可以通过例如口服，肠胃外或局部给药，来提供治疗有效剂量的化合物。在可选择的实施方案中，根据本发明制备的化合物可以被涂层或注入一种医疗仪器，例如，一种移植片固定模(stent)。
术语“预防性有效剂量”是指本发明的化合物或混合物，当被给药时，能够起到预防疾病作用的有效剂量。在一个实施方案中，预防性有效剂量的本发明化合物被给药。在另一个实施方案中，预防性有效剂量的本发明组合物被给药。
在这里使用的“药理学的作用”是指在患者中产生的作用，这种作用取得了治疗的预期效果。在一种具体实施方案中，药理学的作用是指被治疗病人的主要病理迹象得到阻止，减轻或减少。例如，药理学作用可以带来治疗中的病人主要病理迹象的预防，减轻或减少。在另外具体实施方案中，药理学的作用是指被治疗病人的主要病理迹象的紊乱或症状得到阻止，减轻或减少。例如，病理学作用可以导致在被治疗的病人中，主要病理迹象的阻止，减轻或减少。
包含氮的本发明化合物可以通过氧化剂(例如，3-氯过苯甲酸(m-CPBA)和/或过氧化氢)的处理转变成N-氧化物。这种处理可以得到本发明的其他化合物。因此，当在化合价和结构允许的情况下，全部显示的和要求保护的含氮化合物被认为包含所示的化合物和它的N-氧化物衍生物(所述衍生物可被指定为N→O或N+-O-)。此外，在其他的情况下，在本发明化合物里的氮可以转变成氮羟基或氮烷氧基化合物。例如，氮羟基化合物可以通过一种氧化剂，如3-氯过苯甲酸(m-CPBA)，氧化母体胺得到。当在化合价和结构允许的情况下，全部显示的和权利要求的含氮化合物也被认为包含所示的化合物和它的N-羟基衍生物(即，N-OH)和N-烷氧基(即，N-OR，其中，R是被取代的或未取代的C1-6烷基，C1-6链烯基，C1-6炔基，C3-14碳环或3-14-元杂环)衍生物。
″抗衡离子″用来代表一种小的，带负电的化合物，例如氯化物，溴化物，氢氧化物，醋酸盐，和硫酸盐。
在这里使用的″阴离子基团″是指在生理pH值的环境下，带负电的基团。阴离子基团包括羧酸盐，硫酸盐，磺酸盐，亚磺酸盐，氨基磺酸盐，四唑基，磷酸盐，膦酸酯，亚膦酸盐，或硫逐磷酸酯或它们的功能等效物。阴离子基团的″功能等效物″预计包括生物电子等排体，例如，一种羧酸盐基团的生物电子等排体。生物电子等排体包括经典的生物电子等排体的同等物和非经典的生物电子等排体的同等物。经典的和非经典的生物电子等排体在现有技术中已有介绍(参见，例如，Silverman，R.B.TheOrganic Chemistry of Drag Design and Drag Action，AcademicPress，Inc.：San Diego，Calif.，1992，Pp.19-23)。在一种实施方案中，阴离子基团是一种羧酸盐。
本发明包括存在于目前化合物中的原子的全部同位素。同位素包含那些有相同原子序数但是不同质量数的原子。作为一般的例子并不起到任何限制作用，氢的同位素包含氚和氘，碳的同位素就包含C-13和C-14。
在这里描述的化合物可能含有不对称中心。包含一种不对称替代原子的本发明化合物可以以旋光活性或外消旋形式被分离。在领域中，众所周知在该技术中如何制备旋光体，比如通过外消旋性的溶解度或通过光学上的活性起始材料合成。许多烯烃的几何学异构体，C＝N双链和相似物也可以存在于在此描述的化合物中，所有这类稳定的异构体也包含在本发明中。本发明的化合物的顺式和反式几何学异构体也被描述，化合物的顺式和反式几何学的异构体可能作为异构体的混合物或者作为单独的同分异构体形式被分离。除非特定的立体化学或同分异构体被明确地指出，否则一种结构的全部手性的、非对映的、外消旋的和几何学的同分异构体都包括在本发明的范围内。显示或描述化合物的全部互变异构体也被认为属于本发明的一部分。
在本发明说明书中，有时为了方便，化合物的结构式只代表一种确定的异构体，但本发明包括所有的异构体，比如几何异构体，基于不对称碳的旋光异构体，立体异构体，互变异构体和其他结构异构体和一种异构体混合物，这并不受化学式的限制，可以是一种任意异构体或异构体的混合物。因此，一种不对称碳原子可以存在于分子中，且具有光学活性的化合物和外消旋化合物也存在于本发明化合物中，但是本发明包括其中任意一种化合物，但并不仅限于这些化合物并且还包括其他的任意化合物。此外，可以存在结晶的多形性，但并不作为限制，任一晶形可能是单一的或是一种晶形混合物或一种酐或水合物。此外，本化合物在体内降解所产生的所谓的代谢产物也包括在本发明的范围内。
“异构”意指化合物具有相同的分子式，但在性质或连接序列或者原子的空间结构上不同。原子空间结构不同的异构体定义为″立体异构体″。彼此之间非镜象独的立体异构体为″非对映异构体″，具有不能重叠的镜像的立体异构体为″对映异构体″或者有时为“旋光异构体”。与四个不同的取代基相连的碳原子为一种“手性中心”。
″手性异构体″是指含有至少一个手性中心的化合物。手性异构体包含具有相反手性的两个对映异构体，它可以作为单一的对映异构体或者作为对映异构体的混合物存在。含有相反手性的等量的单一对映异构体的混合物定义为″外消旋混合物″。含有超过一个手性中心的化合物具有2n-1个对映体对，其中n是手性中心的数目。含有超过一个手性中心的化合物可以作为单一非对映体或作为非对映体的混合物存在，此定义为″非对映的混合物″。当一个手性中心存在时，一种立体异构体可能是以那些手性中心的绝对构型(R或者S)为特征的。绝对构型是指连接到手性中心的取代基的空间结构。在研究中，连接于手性中心的取代基根据Cahn，Ingold和Prelog的顺序法则排列。(Cahn etal，Angew.Chem.Inter.Edit.1966，5，385；正误表511；Cahnet al.，Angew.Chem.1966，78，413；Cahn and Ingold，J Chem.Soc.1951(London)，612；Cahn et al，Experientia 1956，12，81；Cahn，J.，Chem.Educ.1964，41，116)。
“几何异构体”意思指其存在能够位阻双键旋转的非对映异构体。这些构型通过在它们名称词头前标有的顺式和反式，或者Z和E，加以区别。根据Cahn-Ingold-Prelog法则，顺式和反式分别是指基团位于分子中双键的相同面或者相反面。
此外，在本申请中讨论的结构和其他化合物，也包括它的全部的阿托异构体。″阿托异构体″是一种立体异构体，其中二种异构体的原子在空间中的排列是不同的。阿托异构体把它们的存在归功于一种限制性旋转，它们通过阻碍大基团围绕中心键的转动而起作用的。这样的阿托异构体代表性地以一种混合物存在，然而作为色谱法技术新发展的成果，在一种选择的情况下，将两种阿托异构体的混合物分离开来成为可能。
术语″结晶多形体″或″多形体″或″晶形″是指晶体结构，其中，化合物(或盐或它的溶剂化物)可以以不同的结晶存储排列方式结晶，所有结晶体都具有相同的元素组成。不同的晶形通常有不同的X射线衍射图，红外线光谱的，熔点，密度硬度，晶形，光学的和电性质，稳定性和可溶性。其中一种晶形可能在重结晶溶剂，结晶速率，贮存温度及其他因素上占优势。化合物的结晶多形体可以通过在不同条件下结晶而获得。
另外，本发明的化合物，例如，化合物的盐可以作为水合的或未水合的(无水的)形式或者作为同其他的溶剂分子组成的溶剂化物的形式而存在。水合物非限制性的实施例包括一水化物，二水合物，等等。溶剂化物的非限制性的实施例包括乙醇溶剂化物，丙酮溶剂化物，等等。
″溶剂化物″意思指溶剂添加形式，这种溶剂添加形式包括化学计量的或非化学计量数量的溶剂。一些化合物在它们结晶固体状态，倾向于捕获一定摩尔比率的溶剂分子，因此形成一种溶剂化物。如果该溶剂是水，则溶剂化物形式是一种水合物。当溶剂是乙醇时，该溶剂化物形式是一种乙醇化物。水合物是由一个或更多的水分子同底物之一相结合而形成的，其中水保持它的分子状态H2O，这样的结合能形成一个或一个以上的水合物。
″互变异构体″是指它的结构在原子排列上显著不同的化合物，但是互变异构体处于容易的和迅速的平衡之中。需要理解的是结构式为I的化合物可以被描述成不同的互变异构体。当化合物存在互变异构体形式时，全部的互变异构体都包含在本发明的范围之内，化合物的名称不排除任何一种互变异构体形式。
本发明的一些化合物可能存在一种互变异构体，这些互变异构体形式也包括在本发明的范畴之内。
本发明的化合物，盐和前体药物可能以几种互变异构形式存在，其中包括烯醇和亚胺形式，酮和烯胺形式及几何异构体和它的混合物。所有这类的互变异构形式都包含在本发明的范畴之内。互变异构体以一种互变异构的嵌入液剂的混合物存在。在固体形式中，通常一种互变异构体占主导地位。即使可能只描述一种互变异构体，但本发明包括所提供化合物的全部互变异构体。
一种互变异构体是两个或更多结构异构体中的一种，互变异构体处于平衡状态中，它们能容易地从一种同分异构的形式转变成另一形式。该反应导致氢原子伴随邻近的共轭双键的开关而产生形式的偏移。在溶解状态中可能发生互变现象，将会达到互变异构体的化学平衡状态。互变异构体的准确比例依赖如下几个因素，包括温度，溶剂，和pH值。互变异构体的概念就是通过互变而产生的相互间转换，这也称之为互变现象。
在可能发生的多种互变现象的类型中，二种形式是普通观察到的。在酮-烯醇互变异构中，将发生电子和氢原子的同时转换。通过葡萄糖，可以显示环-链的互变现象。葡萄糖的形成是由糖链分子中的醛基(-CHO)与在相同分子上的其中一种羟基(-OH)相反应，而形成一种环状(环形)形式的结果。
互变异构现象被如下所催化：碱：1、去质子化；2、形成一种使离域化的阴离子(例如烯醇化物)；3、在阴离子不同位置的质子化；酸：1、质子化；2、离域化的阳离子的形成；3、在接近阳离子不同位置的去质子化。
常见的互变异构对是：酮-烯醇，氨化物-腈，内酰胺-内酰亚胺，在杂环(例如在核酸碱基鸟嘌呤，胸腺嘧啶和胞嘧啶)中氨化物-亚胺酸互变现象，胺-烯胺和烯胺-烯胺。
本领域普通技术人员应该理解，由不对称碳原子(例如，所有的对映异构体和非对映体)产生的异构体也包括在本发明要求保护的范围内，除非另有指明。可以通过经典的分离方法和立体化学的控制合成法，获得基本上纯的这种异构体。此外，在本申请中讨论的结构及其他化合物和基团，也包括它的全部互变异构体。在适当的位置，链烯可能包括E-或Z-几何结构。本发明的化合物可以以立体异构化形式存在，因此本发明的化合物可能作为个体立体异构体或作为混合物被生成。
″药物组合物″是包含本发明公开的化合物的、适合对病人给药的制剂。在一种具体实施方案中，药物组合物是体积形式或单位剂型形式。将组合物配制成这里所述的单位剂量形式是有优势的，可以方便给药并统一剂量。这里使用的单位剂量形式是指适合于作为单位剂量对被治疗的患者给药的物理离散形式；每个单位包含预先确定质量的活性试剂和需要的药物载体，所述预先确定的质量是指预先计算确定能够产生理想治疗作用的质量。对本发明所述药物单位剂量形式的说明依赖于并且直接取决于使用的活性试剂的独特性质以及希望实现的具体治疗效果，和这种用于治疗个体的活性试剂组合的内在限制。
单位剂型形式是多种形式，包括，例如，胶囊剂，吊针袋，药片，烟雾剂吸入器上的单泵或管状瓶中的任何一种。在单位剂量组成中，活性成分的质量(例如，公开化合物的药剂或盐，水合物，溶剂化物，或者它的异构体)是一种治疗有效量，而且这个数量将根据特殊治疗情况变化。本领域普通技术人员可以理解，有时还根据病人的年龄和其他的情况对治疗剂量做一些必要的改变。此外，剂量也依赖于给药途径。各种给药途经被考虑，包括口头的，肺的，直肠的，肠胃外的，透过皮肤起作用的，皮下的，静脉内的，肌肉的，腹膜内的，吸入的，颊的，舌下的，胸膜内的，鞘内的，鼻内的以及同类的途径。局部的或通过皮肤给药本发明化合物的剂型包括：粉末，喷雾，软膏，糊剂，乳膏剂，洗剂，凝胶剂，液剂，片剂和吸入剂。在优选的实施方案中，活性化合物在无菌的条件下，与药学上可接受的载体，以及所需的任一防腐剂，缓冲剂或推进剂相混合。
术语″瞬时剂量″是指快速分散剂量形式的化合物制剂。
术语″即时释放″定义为在相对短的时间内，通常为大约60分钟，化合物从一种剂量形式中的释放。术语″缓和释放″定义为包括延迟释放，延长释放和脉冲释放。术语″脉冲释放″被称为药物从一种剂量形式的一系列释放。术语″持续释放″或″延长释放″被定义为化合物超过持续期的从一种剂量形式的连续释放。
″患者″包括哺乳动物，例如，人，同伴动物(例如，狗，猫，鸟和类似物)，家畜(例如，牛，羊，猪，马，家禽和类似物)和实验动物(例如，兔，老鼠，豚鼠，鸟和类似物)。在一个实施方案中，受试者是人。
作为在这里使用的惯用语″药学上可接受的″是指在完善的医学评价的范畴内，适合用于与人类和动物组织相接触并不会产生过度毒性，发炎，过敏反应，或其他问题和并发症，并伴有合适得益/危险比率的化合物，材料，组合物，载体和/或剂量形式。
″药学上可接受的赋形剂″意思指可有效用于制备药物组合物的一种赋形剂，赋形剂通常是安全，无毒的以及既不在生物学上也不在其他方面不符合要求的。″药学上可接受的赋形剂″包括适用于医牲畜以及人药用的赋形剂。在说明书和权利要求中使用的″药学上可接受的赋形剂″包括一种和一种以上这样的赋形剂。
本发明的化合物能够进一步地形成盐。所有这些形式也都包括在权利要求的发明范围之内。
一种化合物的″药学上可接受的盐″意思是指药学上可接受的而且具有母体化合物理想的药理学活性的盐。
作为在这里使用的″药学上可接受的盐″是指这里所公开的化合物的衍生物，其中母体化合物通过产生它的酸的或碱的盐而被改变。药学上可接受的盐的例子包括，但是不被局限在碱性的残基的矿物盐或者有机酸盐，所述碱性残基例如胺；或者酸性的残基的检验或者有机盐，所述酸性残基例如羧酸类，和它的类似物。药学上可接受的盐包括本发明化合物形成的传统的无毒的盐或季铵盐，例如，从无毒的无机或有机酸中形成的母体化合物的传统的无毒的盐或季铵盐。例如，这种传统无毒的盐包括，但是不局限于，从无机酸或者有机酸中衍生的盐，所述无机酸或有机酸例如2-乙酰氧基苯甲酸，2-羟基亚乙基磺酸基酸，醋酸，维生素C酸，苯磺酸基酸，安息香酸，重碳酸盐，碳酸，柠檬酸，乙二胺四乙酸，乙烷二磺酸，乙烷磺酸基，反丁烯二酸，葡庚糖酸，葡萄糖酸，谷氨酸，乙二醇酸，乙二醇基氨苯胂，己基间苯二酚，hydrabamic，氢溴酸，盐酸，乙酸，羟基马来酸，羟基萘酸，羟乙基磺酸，乳酸，乳糖酸，月桂基磺酸，马林酸，苹果酸，扁桃酸，甲烷磺酸基，napsylic，硝酸，草酸，亚甲基双羟萘酸(pamoic)，泛酸，苯基乙酸，磷酸，多聚半乳糖醛酸，丙酸，水杨酸，硬脂酸，subacetic，琥珀酸，胺磺酰基酸，磺氨酸，硫磺酸，丹宁酸，酒石酸，甲苯磺酸和普遍存在的氨基酸，例如，甘氨酸，丙氨酸，苯基丙氨酸，精氨酸，等等。
其他的实施例包括己酸，环戊烷丙酸，丙酮酸，丙二酸，3-(4-羟基苯甲酰基)安息香酸，肉桂酸，4-氯苯磺酸，2-萘磺酸，4-甲苯磺酸，樟脑磺酸，4甲基二环-2.2.2-辛-2-烯1-羧酸，3-苯基丙酸，叔戊酸，三级己酸，粘康酸和相似物。当存在于母体化合物的酸性的质子被金属离子，例如碱金属离子，碱土离子，或者铝离子所取代，或者与有机碱，比如乙醇胺，二乙醇胺，三乙醇胺，氨基丁三醇，N-甲基葡萄糖胺和类似物配位时，便形成盐。此种盐也包含在本发明中。
本领域普通技术人员可以理解的是，所有涉及到药学上可接受的盐都包括在这里定义的该盐的溶剂添加形式(溶剂化物)或晶体形式(多晶型物)。
本发明药学上可接受的盐可以通过传统的化学法，从包含碱性或酸性基团的母体化合物中合成。通常，这样的盐可以通过这些化合物的游离酸或碱同在水中或有机溶剂中或这两者的混合物中化学计量的适当的碱或酸反应制备得到。通常，可以使用非水介质，例如醚，乙酸乙酯，乙醇，异丙醇或氰化甲烷。合适的盐的目录可参见第十八版本的《Remington′sPharmaceutical Sciences》(Mack出版社，1990)。例如，盐包括，但是不局限于含脂肪胺的氢氯化物和醋酸盐，本发明的含羟基胺的和含亚胺的化合物。
本发明的化合物还可以被作为前体药物制备，例如药学上可接受的前体药物。在这里使用的术语″前药(pro-drug)″和“前体药物(prodrug)”在这里是可以互换使用的，是指能在体内释放一种活性母体药物的任一化合物。因为为人所知的前体药物可以提高许多药物所需的性质(例如，可溶性，生物有效度，工业制造等等.)，本发明的化合物可以以前体药物的形式给药。因此，本发明包括目前要求保护的化合物的前体药物，给药要求保护的化合物及包含要求保护化合物的组合物的方法。″前体药物″包括任一共价结合的载体。当对患者给药这样的前体药物时，此载体能够在体内释放本发明的一种活性的母体药物。本发明的前体药物通过改变存在于化合物中的官能团而被制备。在这种方式中，官能团的改变是指在常规操作中或在体内切割成母体化合物。前体药物包括本发明的化合物，其中连到任一基团的羟基，氨基的，巯基，羧基或羰基，可能在体内被切割而分别形成游离羟基，游离氨基，游离巯基，游离羧基或游离羰基。
前体药物的例子包括，但是不局限于酯(例如，醋酸酯，二烷基氨基乙酸，甲酸盐，磷酸盐，硫酸盐和安息香酸盐衍生物)和羟基官能团的氨基甲酸盐(例如，N，N-二甲氨基甲酰基)，羧基官能团的酯基(例如乙酯，吗啉乙醇酯)，N-酰基衍生物(例如N-乙酰基)N-曼尼期碱，席夫碱和氨基官能团的烯胺酮，肟，乙缩醛，缩酮和酮的烯醇酯和醛官能团在分子式为I的化合物中的醛官能团和类似物，参见Bundegaard，H.″Designof Prodrugs″(前体药物设计)p1-92，Elesevier，New York-Oxford(1985)。
″保护基团″是指一组原子，当它们在分子中结合于反应基团时，能够掩蔽，减少或防止那些反应性。保护基团的例子，在Green和Wuts的《在有机化学中的保护基团团》中有描述(Wiley，第二版本，1991)；Harrison和Harrison等，(《合成的有机体方法的概要》，VoIs 1-8。John Wiley和Sons，1971-1996)；和kocienski《保护基团》(verlag，第三版本，2003)中有描述。
″稳定化合物″和″稳定的结构″是指当化合物从反应混合物中分离出有用的纯度及配成有效的治疗剂时，仍然具有充分稳固的结构。
除非上下文清楚地规定有不同，否则，在说明书中，单一形式也包括复数形式。除非另有定义，否则，所有在这里使用的技术和科学术语都具有与本发明所述领域普通技术人员的普遍理解相同的含义。如果发生矛盾的话，以本说明书为准。
在这里使用的全部的百分比和比率，除非另有说明，都是质量百分比和比率。
″结合治疗″(或″共同治疗″)包括给药本发明的一种化合物和至少一种第二试剂。这种第二试剂作为特效疗法的一部分，目的是从这些药物的相互作用中，提供有益的效用。结合的有益作用包括，但是不局限于，由治疗剂结合引起的药物动力学或药效的相互作用。以结合的形式给药这些治疗剂，一般在限定时期内进行(根据选择的结合，限定时期通常为分，小时，天或周)。″结合治疗″可能，但是通常不包括，作为独立的单一治疗方案的一部分，给药两种或两种以上这些治疗剂，这种治疗方案能偶然或不定地产生本发明所述的结合效果。
″结合治疗″包括以一种连续的方式给药这些治疗剂。即指，每种药物在不同时间给药，以及同时给药这些治疗剂或给药至少两种治疗剂。大体上同时给药可以通过，例如，对患者给药含有固定比率的各治疗剂的单一胶囊剂或以多倍的形式给药含有每种治疗剂的单一胶囊剂完成。各种治疗剂连续的或大体上同时的给药可受任一适当给药途径的影响，这些途径包括但不限于口服，静脉注射，肌内注射或通过粘膜组织直接的吸收。治疗剂可通过相同的或不同的途径给药。例如，选择结合的第一种治疗剂可通过静脉注射给药，而另一个结合的治疗剂可通过口服给药。换句话说，例如，全部治疗剂可能通过口服给药或者全部治疗剂可能通过静脉注射给药。治疗剂给药的顺序不是严格决定性的。
″结合治疗″也包括如上所述的治疗剂给药与其他的生物学上活性成分和非药物治疗(例如外科手术或辐射处理)进一步相结合的疗法。其中，结合治疗进一步地包括非药物治疗。只要从药物和非药物治疗结合的相互作用中得到有益的效果，非药物治疗可以在任何适当的时候进行。例如，在适当的情况下，当非药物治疗从治疗剂给药中暂时除去几天或者甚至几周时，仍能获得有益的效果。
在整个说明书中，其中，组合物被描述为含有，包括或包含特定的组分，此外组合物实质上含有或由已描述的组分组成。同样地，其中处理过程被称作含有，包括或包含特定的加工步骤在内，此外加工程序实质上包含或者由已描述的加工步骤组成。此外，本领域普通技术人员应当清楚的是，只要本发明保持可操作性，步骤的顺序或执行某些作用的命令是不重要的。此外，两个或更多步骤或者作用可能是同时实施的。
化合物或者它的药学上可接受的盐可通过口服，通过鼻给药，透过皮肤给药，肺部给药，吸入给药，向颊给药，舌下给药，腹膜内(intraperintoneally)给药，皮下给药，肌内注射给药，静脉注射给药，直肠给药，胸膜内给药，鞘内给药和肠道外给药。在一种实施方案中，化合物是通过口服给药的。本领域普通技术人员可以识别某些给药途径的优势。
需根据多种因素选择本发明化合物的给药方案，这些因素包括病人的类型，种类，年龄，重量、性别和体检情况，治疗病人的严重程度；给药途径；病人的肾和肝功能；和被使用的特殊的化合物或它的盐。通常有经验的内科医师或兽医能容易地决定和规定所需药物的有效量，这种有效量能防止，逆反或阻止病情发展。
配制和给药本发明公开化合物的技术，可以参见Remington：《药剂学的科学和实践》，第19版本，Mack出版公司，Easton，PA(1995)。在一种具体实施方案中，在这里描述的化合物和它的药学上可接受的盐，与药学上可接受的载体或稀释剂相结合用于药物制备上。适当的药学上可接受的载体包括惰性固体填充剂或稀释药和无菌水或有机溶液。存在于这样的药物配方中的化合物，总计应提供足够的在所描述范围之内的所需剂量。
在一种具体实施方案中，化合物为口服给药而制备，其中，这里公开的化合物或它的盐与适当的固体载体或液体载体或稀释剂结合形成胶囊剂，药片，药丸，粉剂，糖浆剂，溶液，混悬液和类似物。
药片，药丸，胶囊剂和类似物包含大约1％到大约99％重量百分比的活性成分以及一种粘合剂，例如黄蓍树胶，阿拉伯树胶，玉米淀粉或白明胶；一种赋形剂比如磷酸二钙；一种分裂剂比如玉米淀粉，马铃薯淀粉或藻酸；一种润滑剂比如硬脂酸镁；和/或一种甜味剂比如蔗糖，乳糖，糖精，木糖醇和类似物。当一种剂量单位形式是胶囊剂时，除上述材料之外，它往往包含一种液体载体比如脂肪油。
在一些具体实施方案中，许多其他材料作为包覆材料或为了改变剂量单位的外观而存在。例如，在一些具体实施方案中，药片表面包覆有片胶，糖或片胶和糖。在一些具体实施方案中，除活性成分之外，糖浆或炼金药还包含作为一种甜味剂的蔗糖，作为防腐剂的甲基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丙酯，以及染料和调味剂例如樱桃或橙调味剂和类似物。
对于一些有关肠胃外(parental)方式给药的具体实施方案，公开的化合物或盐，溶剂化物，互变异构体或它的多晶型物，可与无菌水或有机介质结合而形成可注射的药水或混悬液。在一个实施方案中，可注射的组合物优选水的等渗溶液或混悬液。该组合物是无菌的和/或包含辅助药，例如起防腐剂，稳定剂，湿润剂或乳化剂，助溶剂，为调节该渗透压力的盐和/或缓冲剂。此外，它们也包含其他的治疗上有价值的物质。该配方分别按照传统的混合，粒化或涂敷法制备。该配方包含大约0.1到75％，优选的为大约1到50％的活性成分。
例如，可注射的溶液可利用溶剂生成，这些溶剂包括，例如，芝麻或花生油或液状丙二醇，以及化合物的水溶性的药学上可接受的盐的水溶液。在一些具体实施方案中，分散相是甘油，液体聚乙二醇和它们在油中的混合物。在普通的储存和使用条件下，这些制剂包含一种防腐剂以防止微生物的生长。作为在这里使用的术语″肠胃外投药″和″肠道外给药″意思是非肠的和局部的给药方式。这种给药方式通常通过注射方式给药。给药方式包括而不受限于静脉注射，肌内注射，动脉内注射，鞘内注射，囊内注射，眶内注射，心内注射，皮内注射，腹膜内注射，经气管注射，皮下注射，表皮下注射，关节内注射，包囊下注射，蛛网膜下注射，脊柱内注射和胸骨内注射和输液。
对于直肠给药，适宜的药物组合物是，例如，局部制剂，栓剂或灌肠剂。栓剂可方便的从多脂的乳剂或混悬液中制备。该组合物是灭菌的和/或包含辅助药，例如起防腐剂，稳定剂，湿润剂或乳化剂，助溶剂，为调节该渗透压力的盐和/或缓冲剂。此外，它们也包含其他的治疗上有价值的物质。该组合物分别按照传统的混合，造粒或包衣方法制备。该组合物包含大约0.1到75％的活性成分，在另一个实施方案中，该组合物包含大约1到50％的活性成分。
在一些具体实施方案中，化合物为了通过肺部给药以提供活性剂而被配制，例如，通过一种手动泵喷雾，喷雾器或密封定量吸入器给药一种包含活化剂的烟雾剂成分。在一些具体实施方案中，这种类型的合适的制剂也包括其他的试剂，比如抗静电剂。抗静电剂可维持公开化合物作为有效的烟雾剂。
给药烟雾剂的药物传送装置包含一种适宜的带有计量阀的烟雾剂筒，其中烟雾剂筒包含药物烟雾剂成分和一种致动器室，可以握住烟雾剂筒进行给药。在药物传送装置中的烟雾剂筒具有顶部空间，此顶部空间占约大于筒的总体积的15％。往往，为肺部给药设计的聚合体在溶剂，表面活性剂和推进剂的混合物中是溶解的，悬浮的或乳化的。该混合物在筒内要维持在一定压力下，该筒需要用一种计量阀密封。
对于鼻内给药，可以使用固体或液体载体。固体载体包含一种颗粒尺寸在例如大约20到500微米范围之内的粗粉，这种剂型可以通过鼻部通道的迅速吸入给药。在一些具体实施方案中，使用液体载体。该剂型以鼻喷入法或滴的方式给药。其中，该剂型包括含有活性成分的油或水溶液。
活性试剂可以与载体一起制备，所述载体能够防止试剂从体内快速消除。例如，可以使用一种控制释放制剂，包括移植物和微囊传递系统。还可以使用生物可降解聚合物和生物相容性聚合物，例如乙烯醋酸盐、聚酐、聚乙二酸、胶原蛋白、聚原酸酯和聚乳酸。用于制备这些制剂的方法对本领域技术人员来讲是显而易见的。这些材料还可以从Alza公司和诺华制药股份有限公司商业上购得。脂质体悬浮液(包括靶向受感染细胞的脂质体和针对病毒抗原的单克隆抗体)也可以用作药学上可接受的载体。根据本领域技术人员已知的方法可以制备这些制剂，例如美国专利第4,522,811号的描述。
本发明组合物和制剂还可以包括一种或一种以上干燥剂。可以用于本发明的适当的干燥剂是药学上安全的，并且包括，例如，药用级硅胶、结晶性铝硅酸钠、铝硅酸钾或者铝硅酸钙、胶态氧化硅、无水碳酸钙等等。所述干燥剂的含量在大约1.0％到20.0％，或者大约2％到15％重量/重量(获此范围内的任意值)。
此外，快速分散剂型也包含在本发明的制剂中。这种快速分散剂型也叫做″瞬时给药″方式。特别地，本发明的一些具体实施方案是以组合物能在短期内释放它们的活性成分而设计的，例如，典型地小于约五分钟，在其他的实施方案中，小于约九十秒，在其他的实施方案中在小于三十秒和在其他的实施方案中在小于约十或十五秒内释放。这种剂型适合于通过各种途径对患者给药，例如通过插入体腔或外敷到湿润的体表或开放性创伤处。
典型地，″瞬时给药型″是一种固体剂型，它通过口服给药。药物在口中能够迅速消散，因此它不需要费力的吞咽而且药物能够通过口粘膜薄膜被快速地摄取或吸收。在一些具体实施方案中，适宜的快速地分散剂型也被用于其他的应用，包括对伤口的治疗及其他身体的损伤和患病的状态的治疗，其中外表水分不能使药剂释放。
在本领域中，″瞬时给药″方式是已知的，可以参见例如，在美国专利第5,578,322号和第5,607,697号中的起泡剂型和不溶微粒的快速释放包衣；在美国专利第4,642,903号和第5,631,023号中的冻干泡沫体和液体；在美国专利第4,855,326号，第5,380,473号和第5,518,730号中的熔融纺丝剂型；在美国专利第6,471,992号中的固态形状不规则产品；在美国专利第5,587,172号，第5,616,344号，第6,277,406号和第5,622,719号中的含糖类的载体介质和液体粘合剂，以及本领域的其他已知形式。
本发明的化合物也包含″脉冲释放″制剂，其中，该化合物以一连串的释放方式(即，脉冲)从药物组合物中释放。该化合物也作为″持续释放″剂型被配制，其中，化合物在持续期内连续地从药物组合物中释放。
其他制剂，例如液体制剂也包含在考虑范围之内。液体制剂包括环状的或脂肪族的装入胶囊的或溶剂化物的药剂，例如，环糊精，聚醚，多糖(例如，甲基纤维素)或者更优选的为带有钠磺酸盐基团的聚阴离子β-环糊精衍生物，钠磺酸盐基团通过烷基醚隔离物基团或多糖从亲脂性的腔内分离出来。在一种实施方案中，药剂是甲基纤维素。在另外的具体实施方案中，药剂是带有钠磺酸盐基团的聚阴离子β-环糊精衍生物，其中，钠磺酸盐通过丁基醚空间群，从亲脂性的区域中分离出来，例如，
Figure G2008800244013D00801
(CyDex，Overland，KS)。在技术上精通的人可以通过制备药剂的水溶液，例如，重量百分比为40％的溶液；制备连续稀释液，例如，制备20％，10，5％，2.5％，0％(空白)的溶液和类似物；添加过量的(相对于药剂能溶解的量)本发明公开的化合物；在适当的条件下混合，例如，加热，搅动，超声处理和类似方法；离心或过滤目的混合物以获得上清液，并分析溶液中含有的本发明公开化合物的浓度。
在这里引用的所有出版物和专利文件在参考文献通过引证全部并入本文，就象每个这样的出版物或文件明确地和分别地通过参考文献指出一样。引用刊物和专利文件并不表明承认其是现有技术文献，也不表明对其内容或日期的认可。本发明现在通过书面描写已被描述，本发明所属领域普通技术人员应该理解，本发明可以在多种具体实施方案中被实施，前面的描述和下面的实施例只起到解释说明的作用，并不作为对所附权利要求书的限制。实施例实施例1：KX2-391的小规模合成
Figure G2008800244013D00811
US20060160800A1描述了如下所述的初步合成。这一过程对小规模反应是十分有效的，所述小规模反应例如产生的产物质量高达50克的反应。
对于下列合成方法，除非另作说明，试剂和溶剂都按照商业供应者的说明使用。质子和碳核磁共振波谱源于BrukerAC 300或Bruker AV 300分光光度计，在300MHz下检测质子，在75MHz下检测碳。光谱给出ppm值(δ)和耦合常数，J，以赫兹为单位。四甲基硅烷被用作质子光谱的内标，对于碳光谱，溶剂峰作为参考峰。质谱和高效液相色谱质谱联用(LC-MS)数据来源于Perkin Elmer Sciex 100气压流电离(APCI)质谱仪。高效液相色谱质谱联用(LC MS)分析是通过利用连有254nm紫外检测器的Luna C8(2)柱(100x4.6mm)而获得，其中，使用一种标准溶剂梯度洗脱(方法B)。薄层色谱法(TLC)的运行是利用Analtech硅胶板，并通过紫外灯(UV)，碘或20wt％磷钼酸乙醇溶液观测。高效液相层析法分析是利用带有254nm紫外检测的流行的C18柱(53x7mm，Alltech)获得的，其中，使用一种标准溶剂梯度程序(方法A或方法B)。方法A：A＝含0.1v/v三氟乙酸的水溶液B＝含0.1v/v三氟乙酸的乙腈溶液
  时间(分钟)   流量(毫升/分钟)   ％A   ％B
  0.0   3.0   95.0   5.0
  10.0   3.0   0.0   100.0
11.0 3.0 0.0 100.0
方法B：A＝含0.2v/v三氟乙酸的水溶液B＝含0.2v/v三氟乙酸的乙腈溶液
  时间(分钟)   流量(毫升/分钟)   ％A   ％B
  0.0   2.0   95.0   5.0
  4.0   2.0   5.0   95.0
N-苯甲基-2-(5-溴吡啶-2-基)乙酰胺的合成
Figure G2008800244013D00831
将5-(5-溴吡啶-2(1H)-基亚基)-2，2-二甲基-1，3-二氧六环-4，6-二酮(1.039克，3.46毫摩尔)、苯甲基胺(0.50毫升，4.58毫摩尔)和甲苯(20毫升)装入烧瓶中。在氮气存在的条件下，回流反应18小时，冷却后，放入冰箱冷冻。通过过滤收集产物，用己烷清洗得到大量的明亮的白色晶体(1.018克，96％)。4-(2-(4-(4，4，5，5-四甲基[1，3，2]二杂氧戊硼烷-2基)-苯氧基)乙基)吗啉的合成：
Figure G2008800244013D00832
在0℃中，在不断搅拌的条件下，向4-(4，4，5，5-四甲基[1，3，2]二杂氧戊硼烷-2-基)-石炭酸(2.55克，11.58毫摩尔)，2-吗啉基-4-基乙醇(1.60毫升，1.73克，13.2毫摩尔)和三苯膦(3.64克，13.9毫摩尔)溶于二氯甲烷(60毫升)的溶液中逐滴加入偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)(2.82g，13.9mmol)。将反应加热到室温，搅拌过夜。反应18小时后，再加入三苯基膦(1.51克，5.8毫摩尔)、2-吗啉基-4-基乙醇(0.70毫升，5.8毫摩尔和偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)(1.17克，5.8毫摩尔)。在室温下，继续搅拌反应2小时，浓缩反应产物，剩余物通过瞬时色谱法(在CHCl3中的含量为5％到25％的乙酸乙酯)而得到白色固体产物(2.855克，74％)。2-(5-(4-(2-吗啉基乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺KX2-391的合成
将N-苯甲基-2-(5-溴代吡啶-2-基)乙酰胺(123毫克，0.403毫摩尔)、4-(2-(4-(4，4，5，5-四甲基[1，3，2]二杂氧戊硼烷-2-基)-苯氧基)乙基)吗啡(171毫克，0.513毫摩尔)和FibreCat 10071(30毫克，0.015毫摩尔)装于带有隔膜密封和搅拌棒的10毫升反应管中。然后加入乙醇(3毫升)，随后再加入含水碳酸钾溶液(0.60毫升，1.0M，0.60毫摩尔)。密封反应管并微波加热到150℃，反应10分钟。接着冷却反应物，浓缩除去大部分乙醇，随后溶于10mL乙酸乙酯，连续的用水和饱和氯化钠溶液清洗。有机层用MgSO4干燥，过滤，浓缩得到白色固体。该白色固体同乙醚研磨而得到KX2-391的白色粉末状固体(137毫克，79％)：mp 135-137℃；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.70(d，IH，J＝2.0Hz)，7.81(dd，IH，J＝2.4Hz，J＝8.0Hz)，7.65(br s，IH)，7.49(d，2H，J＝8.8Hz)，7.37-7.20(m，6H)，7.01(d，2H，J＝8.8Hz)，4.49(d，2H，.7＝5.8Hz)，4.16(t，2H，J＝5.7Hz，3.82(s，2H)，3.78-3.72(m，4H)，2.84(t，2H，J＝5.7Hz)，2.62-2.58(m，4H)；HPLC(方法B)98.0％(AUC)，tR＝1.834min.；APCI MS m/z 432[M+H]+.                           1聚合物结合的二(醋酸)二环己基苯基膦钯(II)，由Johnson Matthey，Inc公司生产，从Aldrich公司购得(编录号#590231)实施例2：中等规模的KX2-391二盐酸盐合成
本实施例概括的合成途径可以用于中等规模的反应中。方案1表示了至少50克KX2-391二盐酸盐的批量生产方法。由六个步骤组成线性合成，第7步是制备一种试剂的步骤，该试剂是6-氟代吡啶-3-基硼酸(该试剂也可以商业购得)。顺序总产率为35％，其中平均产率为83％，最低产率步骤的产率为68％。在这7个步骤中只有一个步骤需要用到色谱技术。下面列出的过程在70克的规模下进行。
Figure G2008800244013D00851
第一步是威廉森醚合成法，该方法使用K2CO3粉末(3到3.5当量)作为碱基，使用氰化甲烷作为溶剂，在4-溴代苯酚(131克)和N-氯代乙基吗啉(1，作为盐酸盐；141克)之间进行合成。将各种成分混合并搅拌，回流整夜，得到较高的转化率(96.3-99.1％)。然后用二氯甲烷和正庚烷稀释，过滤反应混合物并蒸发，从而以基本上稳定的产率产生需要的产物2(216克)。注意，当含有相似的底物(即，4-溴代-3-氟代苯酚)时，转化率(即使在具有多次加热的情况下)通常是不高的(例如，59.9-98.3％)。烷基氯和所述K2CO3优选从Aldrich公司购买获得。如果持续的加热不能使反应完成，通过将粗品反应混合物溶解在4部分的甲烷中，并用4部分的15％的氢氧化钠水溶液冲洗除去苯酚，来方便的除去未反应的溴代苯酚。
第二步骤(Suzuki偶联反应)中需要的一种试剂是6-氟代吡啶-3-基硼酸(4)。这种试剂既可以通过商业途径购得，也可以通过在低温条件下(＜-60℃)在甲基叔丁基醚(TBME)中用n-丁基锂(1.2eq)进行5-溴代-2-氟代吡啶(3,102克)的锂-溴化物交换，随后加入三异丙基硼酸盐(1.65eq)而方便的制得。这个反应的两个阶段都是短暂的，总共的反应时间(包括添加时间)在大约3小时左右。使用24％的氢氧化钠水溶液对反应淬火，同时在有机层将产物与杂质相分离。一旦去掉水相层，就用盐酸中和并用乙酸乙酯提取。干燥有机层之后，用一些正庚烷稀释，浓缩使产物沉淀/结晶。过滤，从而以较高的纯度(96.4％AUC)和很好的产率(69克，79-90％；参见试验部分关于产率测定的记录)产生硼酸盐4，该产物不需要进一步纯化就可以被使用。
在线性顺序(Suzuki偶联反应)中的第二个反应步骤是一种简单的反应，将所有的试剂[化合物2(111克)、碳酸钠水溶液、二甲醚(DME)和Pd(PPh3)4(0.04eq)]装入反应烧瓶中，将反应物加热回流；将反应混合物脱气除去氧气。一旦反应完成(在7小时内)，下一步的工作包括在烧瓶的一侧(此处无明显的水相层)将反应溶液从有机盐中轻轻倒出(或者虹吸出)，冲洗烧瓶并干燥，从结合的有机物中除去溶剂。粗品化合物5从异丙醇/正庚烷中结晶出来，从而使该材料与粗品相比具有改善的纯度，但是仍然需要进行色谱分析法(硅胶与粗品的比例大约是8.5∶1)来获得足够纯净(＞98％)的材料；产率是68％(79.5克)。使用干净的化合物5事下面的步骤中不在需要进行色谱分析法，下一步骤是氟原子的氰化甲烷取代。
用氰化甲烷取代氟化物也是一种简单的反应，简单的室温条件下的结晶作用就可以以较高的产量和纯度提供干净的化合物6的粗产品。该反应包括，使用六甲基乙硅烷钾KHMDS(8eq)/四氢呋喃在-10℃下使氰化甲烷(6.5eq)形成“烯醇化物”，随后立即加入化合物5的氟化物(79克)。该反应是快速的，在用饱和盐水进行一小时淬火之后完成。干燥并蒸发有机溶剂，之后，所得粗品混合物只由两种组分组成，即需要的产品和一种更少的极性产物，这种极性产物是由氰化甲烷的表面自缩合作用形成的。将粗品混合物在异丙醇/正庚烷中搅拌，并静置过夜，从而导致产物完全结晶，将结晶过滤出来并洗涤，以很好的产率(64克，76％)产生高纯度(99.3％AUC)的化合物6。
在40％的硫酸(在甲醇中)中加热直到反应完全(25小时)可以完成化合物6(64克)的甲醇分解作用。随后冷却反应，用硫酸镁搅拌，将微量痕量的水解产品(ArCH2-CO2Me)转入产物中，然后加入到冷却的K2CO3水溶液中，同时用二氯甲烷提取。干燥并蒸发大部分的二氯甲烷，随后加入5％的乙酸乙酯(在庚烷中)，然后进一步浓缩至产生产物结晶。过滤固体产物并洗涤，得到高纯度(98.9％AUC)高产率(82％)的化合物7，其他的高纯度产物(4克)可以从母液中获得，总产率是61.7克(87％)。
该反应也包括酰胺化步骤，用各种组分(化合物7(61克)、苄胺(3eq)、和高沸点的苯甲醚)装入反应容器中，然后加热回流直到反应完全。冷却反应混合物以高纯度(98.9％)高产率(81％)得到目标化合物的完整的结晶。
最后一步是目标化合物二盐酸盐的形成。为了保证两个碱基位点的完全质子化，在完全的乙醇中进行反应，乙醇可以自如的溶解二盐酸盐。然后蒸发直至全干，用乙醇“驱逐”反应混合物两次从而去掉过量的氯化氢。将所得粘性油溶解于乙醇(2份)中，然后加入大体积(20份)的乙酸乙酯，同时快速搅拌。过滤，用乙酸乙酯(不含正庚烷)洗涤，并真空干燥，从而提供奶油色-白色粉末状的KX2-391二盐酸盐。最后总共获得68克(产率97％)的高纯度(99.6％AUC)盐，该盐包括痕量的乙酸乙酯(4.8％重量/重量)、乙醇(0.3％重量/重量)、和正庚烷(0.6％重量/重量；在真空干燥之前用正庚烷进行最后的洗涤)。这些盐可以从热的乙醇/乙酸乙酯中结晶(与上面描述的沉淀法不同)，从而产生结晶珠，该结晶珠具有很低的俘获溶剂水平(只有0.26％重量/重量的乙酸乙酯和0.45％重量/重量的乙醇)并且可以自由流动。
Figure G2008800244013D00881
4-(2-(4-溴代苯氧基)乙基)吗啉(化合物2)的制备
将化合物1(140.7克，0.756摩尔)、4-溴代苯酚(130.6克，0.755摩尔)、元水K2CO3粉末(367.6克，2.66摩尔，3.5eq)、和氰化甲烷(1.3升)装入5升的三颈圆底烧瓶中，该三颈圆底烧瓶装有机械搅拌器、带有转换接头的温度计、冷凝器和氮气入口管(在冷凝器的顶部)。在80℃下剧烈搅拌所述混合物(桨叶触到烧瓶的低端)过夜，随后用二氯甲烷(DCM)(500毫升)和正庚烷(200毫升)稀释并用硅藻土过滤。蒸发(旋转蒸发，然后真空蒸发)至干燥，产生淡黄色油状的化合物2(216.00克，产率100％，96.3％AUC，包括3.7％未反应的溴代苯酚)。这些材料不经过进一步纯化就可以使用。
1H NMR(CDCl3)δ2.57(t，4H)，2.79(t，2H)，3.73(t，4H)，4.08(t，2H)，6.78(d，2H)，7.37(d，2H).MS(来自LC/MS)：m/z 287.1[M+I].
通过2克的样品进行的试验证明溴代苯酚可以被方便的被去除，方法是首先将样品溶解于甲苯(8克)中并用8克的15％氢氧化钠水溶液洗涤；液相色谱显示回收所得的产品(1.97克；98.5％回收率)中没有未反应的溴代苯酚的痕迹。6-氟代吡啶-3-基硼酸(化合物4)的制备：
搅拌并冷却(干冰-丙酮浴)无水甲基叔丁基醚(TBME)(620毫升；在装备有机械搅拌器、带有转换接头的温度计、冷凝器和氮气入口管的3升三颈圆底烧瓶中)，将其加入(通过注射器加入)到2M的BuLi(352毫升，0.704摩尔，1.2eq)中。在13分钟内，向这种快速搅拌的、冷却的(＜-75℃)混合物中加入化合物3(102.2克，0.581摩尔)在无水甲基叔丁基醚(TBME)(100毫升)中的溶液，在此期间，内部温度上升到-62℃。继续搅拌反应物45分钟(将温度维持在-62℃到-80℃之间)，随后快速、连续的添加4份三异丙基硼酸盐(总量180克，0.957摩尔，1.65eq)。在添加将近完成的时候，内部温度达到-33℃。随后在冷水浴中再进行45分钟的搅拌(内部温度下降至-33℃到-65℃)，去掉冷水浴使搅拌混合物在50分钟内自己升温到-22℃。之后在15分钟内加热(通过水浴加热)到6℃，将所述搅拌的反应混合物放置到冰水浴中，在氮气条件下用冷却的氢氧化钠(160克)在水中(500毫升)的溶液淬火。一旦添加完成，内部温度是20℃。在室温条件下搅拌混合物1.5小时。倒掉水层，用350毫升浓缩的盐酸中和到pH值大约为7，然后用乙酸乙酯(3x1升)提取。这是pH值大约为8-9，因此，使用大约15毫升浓缩的HCl将水层的PH值调节到大约为7，并进一步用乙酸乙酯(2x1升)提取。干燥(Na2SO4)结合了乙酸乙酯的萃取物，过滤并浓缩到体积大约为150毫升。搅拌浓缩物，分部分加入正庚烷(总体积大约为300毫升)，使产物沉淀/结晶。过滤，用正庚烷(100毫升、300毫升，之后在用300毫升)洗涤固体并风干，从而产生灰白色固体状的标题产物(68.6克，产率是79-90％；液相色谱纯度为96.4％，核磁共振展示大约5.5％w/w的正庚烷)，该产物不经过进一步纯化就可以成功的被使用。质谱联用(LC/MS)显示这是如下两种物质的混合物，较高分子量物质的密度起主要作用(注意如果假定成分中只有硼酸盐时，反应产率是79％，如果假定成分中之后环硼酸盐的话，反应产率为90％)：
Figure G2008800244013D00911
1H NMR(CDCl3)δ7.14(dd，1H)，8.27(ddd，1H)，8.39(br s，2H，2OH)，8.54(fine d，1H)。MS(来自LC/MS)：m/z 143.0[M+1；对于硼酸盐]且370.0[M+1；对于上述环硼酸盐].
Figure G2008800244013D00912
4-(2-(4-(6-氟代吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉(化合物5)的制备：
将化合物2(110.7克，0.387摩尔)、化合物4(71.05克，0.477摩尔，1.23eq)和二甲醚(DME)(700毫升)装入2升的三颈圆底烧瓶中，该三颈圆底烧瓶装有机械搅拌器、带有转换接头的温度计、冷凝器和氮气入口管(在冷凝器的顶部)。通过向搅拌后的溶液中快速通入氮气5分钟对所得的搅拌溶液脱气，随后，加入脱气后的碳酸钠(121.06克，1.142摩尔，3eq)在水(250毫升)中的溶液和固体pd(pph3)4(19.8克，0.044eq)。在末次添加完成之后，用氮气纯化容器中位于反应混合物上部的空间，然后在80℃-85℃(内部温度)条件下搅拌混合物7小时，随后冷却到室温由于缺少水相层，轻轻倒出上清液，留下无机盐(还有吸附的水)。用50％的二氯甲烷/乙酸乙酯(2x250毫升)洗涤含有无机盐的反应烧瓶，相倒出的上清液中加入洗涤物。干燥结合的有机物(Na2SO4)，过滤并蒸发直至干燥，产生暗褐色的油状物(148克)。向这种油状物中加入150克50％的正庚烷/异丙醇(IPA)，随后搅拌、冷却(通过冰水浴冷却)，再次结晶。加入额外的正庚烷(50克)过滤所得固体、洗涤并风干，产生48克的淡褐色固体。之后，蒸发滤液直至干燥，在100毫升50％的正庚烷/异丙醇(IPA)中搅拌反应混合物，随后加入更多的正庚烷(大约100毫升)，停止反应并放入冰箱中结晶。过滤所得固体、用正庚烷洗涤并风干，得到61克的胶状固体。蒸发所得滤液产生一种油状物(34克)，这种油状物中含有非常少的极性杂质，所述极性杂质包括Ph3P＝O，因此，将其分别放入2N的盐酸(240毫升)和乙酸乙酯(220毫升)中。去掉底部水相层，然后与乙酸乙酯一起搅拌，用碳酸钠将pH值中和到大约为7-8。干燥乙酸乙酯层，过滤并蒸发至干燥(22克)。将48克、61克和22克部分在DCM包裹的硅胶(1.1千克)中进行色谱分离。用二氯甲烷(DCM)(400毫升)、50％二氯甲烷(DCM)/乙酸乙酯(5升)洗提，然后用包含增加量的甲醇/Et3N(最开始含有1.5％甲醇/1％Et3N，最后含有5％甲醇/3％Et3N)的50％的二氯甲烷(DCM)/乙酸乙酯(8升)洗提，产生77.68克的粘性油状物(纯度98.0％)，随后立刻在搅拌的正庚烷(300毫升)中结晶。过滤、用正庚烷洗涤并风干，产生75.55克的固体化合物5(98.7％AUC)。按照对上述24克样品所进行的一样，通过从包括Ph3P＝O的较早的色谱馏分中除去杂质Ph3P＝O，获得其他纯的化合物5(总量为3.9克，98.6-99.3％AUC)，随后蒸发结晶。化合物5的总产率为79.5克(68％)。
1H NMR(CDCl3)δ2.59(t，4H)，2.84(t，2H)，3.75(t，4H)，4.16(t，2H)，6.97(dd，1H)，7.01(d，2H)，7.46(d，2H)，7.92(ddd，1H)，8.37(fine d，1H).MS(来自LC/MS)：m/z 303.2[M+I].2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)氰化甲烷(6)的制备：
在3升三颈圆底烧瓶上装有机械搅拌器、带有转换接头的温度计、另外的漏斗和氮气入口管(在漏斗的顶部，通过鼓泡器提供正压)。通过快速的氮气流通过鼓泡器，除去阻聚剂并用KHMDS(415.8克，2.08摩尔)和无水四氢呋喃(1升)装入所述烧瓶中。搅拌并冷却(冰/甲醇浴冷却，溶液的内部温度为-8℃)KHMDS/四氢呋喃溶液，然后在22分钟内将其逐滴加入到乙腈(MeCN)(70克)在四氢呋喃(110毫升)中的溶液中，随后立即以相对快的速度(4分钟)加入化合物5(79.06克，0.262摩尔)在四氢呋喃(400毫升)中的溶液，此时，反应混合物的内部温度达到10℃。持续冷却(1小时)使温度下降到-6℃，然后通过薄层色谱法显示反应完全。随后，用饱和盐水(1升)淬火反应混合物30分钟(内部温度为-3℃)，并用乙酸乙酯(500毫升)稀释。之后，除去水相层，干燥有机溶液(无水硫酸钠)并过滤，蒸发至干燥(成一种油)，随后完全溶解于异丙醇(IPA)(150毫升)中，用正庚烷(300毫升)稀释，加入晶种(通过将大约100毫克的粗品油状物溶解于异丙醇(IPA，大约150毫克)中，并用正庚烷(大约2.5毫升)稀释获得)，然后静置整夜。在搅拌打碎结晶固体之后，过滤固体，用250毫升2∶1正庚烷/异丙醇(IPA)洗涤，然后用正庚烷洗涤多次，风干，产生64.38克结晶的黄褐色固体状标题产物6(产率为76％)。从滤液中获得另外的5.88克较少的纯物质。
1H NMR(CDCl3)δ2.59(t，4H)，2.84(t，2H)，3.74(t，4H)，3.97(s，2H)，4.17(t，2H)，7.02(d，2H)，7.46(d，1H)，7.51(d，2H)，7.87(dd，1H)，8.77(fined，1H).MS(来自LC/MS)：m/z 324.4[M+I].
Figure G2008800244013D00941
甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐(7)的制备：
向2升的单颈圆底烧瓶中装入化合物6(64.00克，0.198摩尔)和甲醇(360克)，随后缓慢、小心的逐滴加入硫酸(240克)，回流搅拌(115℃油浴)所得均匀溶液直到反应完全(25小时，还有0.8％的未反应的起始材料)和3.5％的ArCH2CO2H。冷却一段时间之后，加入硫酸镁(75克)，搅拌混合物并静置45分钟(组合物中含有96.3％的产物、0.8％未反应的起始材料和2.5％ArCH2CO2H)。然后缓慢的将该反应混合物加入到快速搅拌的冷却的混合物中，该混合物是二氯甲烷(DCM)(2升)和碳酸钾(450克)水(600毫升)溶液的混合物。将所得乳状剂静置整夜。虹吸抽出有机溶液中清澈的部分，用水和二氯甲烷(DCM)反复处理剩余的部分，将清澈的有机物与虹吸出来的原始部分相结合。结合的有机物被干燥(元水硫酸钠)、过滤并浓缩到体积为大约1.2升，随后，加入300毫升的5％的乙酸乙酯(在正庚烷中)和正庚烷，再次浓缩混合物(加热旋转蒸发)，从而除去二氯甲烷(DCM)。此时，加入15毫升乙酸乙酯，搅拌加热的材料直到开始出现结晶，搅拌直到结晶过程几乎完全，然后静置并冷却到室温完成结晶作用。随后过滤固体，用300毫升5％的乙酸乙酯(在正庚烷中)和正庚烷(100毫升)洗涤，然后彻底风干，产生57.74克(产率为82％)淡黄色固体状的化合物7(98.9％AUC)。从滤液中获得另外的3.94克较少的纯净的产物(97.9％AUC)(总产率为87％)。
1H NMR(CDCl3)δ2.60(t，4H)，2.84(t，2H)，3.74(重叠并且s，6H)，3.89(s，2H)，4.17(t，2H)，7.01(d，2H)，7.34(d，1H)，7.49(d，2H)，7.80(dd，1H)，8.74(fine d，1H).MS(来自LC/MS)：m/z 357.4[M+I].
Figure G2008800244013D00951
2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺：
向1升的单颈圆底烧瓶中装入化合物7(61.4克，0.172摩尔)、苄胺(55.6克，0.519摩尔，3eq)和无水甲氧基苯(300克)，然后回流搅拌直到反应基本完全(23小时，165℃油浴温度；内部温度147℃)，然后冷却直至接近室温。用甲苯(1毫升)稀释一部分的反应混合物(1毫升)从而得到这部分的完全结晶。然后将这些晶种加入到反应混合物中，静置，直到全部的反应混合物生成结晶成为单一单元。向其中加入甲苯(150毫升)，搅拌混合物从而打碎固体。向其中加入正庚烷/甲苯(1∶1，100毫升)，进一步粉碎固体混合物。最后，加入正庚烷(50毫升，然后25毫升)再次进一步的粉碎混合物，在过滤固体之前静置反应混合物30分钟。过滤固体，先后用2∶1的甲苯/正庚烷(300毫升)，1∶2的甲苯/正庚烷(300毫升)，和正庚烷(2x300毫升)洗涤过滤所得固体，然后干燥(先是空气干燥，然后高真空干燥)产生60.16克(产率是81％)白色固体状的标题产物(＞98.9％AUC)。从原始液体中获得另外的2.5克较少的纯净的产物(97.4％AUC)。
1H NMR(CDCl3)δ2.60(t，4H)，2.83(t，2H)，3.74(t，4H)，3.82(s，2H)，4.18(t，2H)，4.49(d，2H)，7.01(d，2H)，7.2-7.35(m，6H)，7.49(d，2H)，7.64(brt，1H)，7.81(dd，1H)，8.69(fine d，1H).MS(来自LC/MS)：m/z 432.5[M+I].
Figure G2008800244013D00961
4-(2-(4-(6-(2-(苯甲基胺)-2-氧基乙基)吡啶-3-基)苯氧基)乙基)-吗啉-4-氯化苯镁(KX2-391，二盐酸盐)。
向搅拌的KX2-391(自由基，60.00克)在完全乙醇(600毫升)的悬浮液中加入170毫升2.5M的盐酸(在乙醇中)，加入25毫升的乙醇从而冲洗烧瓶的几个侧壁。在室温条件下搅拌所得的均匀溶液(20分钟)，然后蒸发至接近干燥(从而起泡)。在加入乙醇(2x150毫升)洗涤之后，将残余物溶解在乙醇(150毫升)中，然后缓慢的加入正庚烷直到所得混合物呈现饱和状态(从出现浑浊到出现剩余物共需要33毫升)。然后静置整夜，形成两层。之后加入额外的正庚烷(250毫升)，这时仍不能诱导产生结晶，因此将反应混合物浓缩直到体积大约为200毫升，此时，反应混合物仍然是均质的。将这种浓稠的均质溶液逐滴加入到快速(机械)搅拌的乙酸乙酯(2升)中，在加入完成之后，用25毫升的乙醇洗涤原始烧瓶，然后向快速搅拌的混合物中加入一个漏斗。继续持续快速搅拌反应混合物大约一小时，然后过滤混合物并且将所得固体(部分成胶的)用乙酸乙酯(300毫升)洗涤，之后，用正庚烷洗涤。一旦开始使用正庚烷洗涤，所得固体会产生更多的胶体。将玻璃状陶瓷质的布氏漏斗和他的内含物一起包裹(用毛巾纸包裹/橡胶带包裹)，然后立刻放入真空干燥炉中。在-45℃下真空干燥整夜，在氮气条件下打开真空，包含产物(起泡沫的固体)的布氏漏斗立刻被放入拉链封闭的背袋中，然后，在氮气条件下(手套带)转移到瓶中，并将起泡沫的固体粉碎成粉末。第二天晚上在高度真空(-45℃)条件下干燥，只产生1.3克的额外重量损失。经过第三天晚上的高真空(-45℃)干燥可以获得基本上稳定的重量，此时的重量损失只有0.2克。最后得到的材料重量为68.05克(产率97％)，包括0.29eq((4.8％重量/重量)的乙酸乙酯、0.035eq(0.3％重量/重量)的乙醇和0.03eq(0.6％重量/重量)的正庚烷。纯度是99.6％。
1H NMR(二甲基亚砜-(I6)δ3.1-3.3(m，2H)，3.45-3.65(m，4H)，3.8-4.0(m，4H)，4.11(s，2H)，4.32(d，2H)，4.57(t，2H)，7.19(d，2H)，7.2-7.4(m，5H)，7.88(d，2H)，7.93(d，1H)，8.68(dd，1H)，8.99(br t，1H)，9.10(fine d，1H)，11.8(br s，1H).MS(来自LC/MS)：m/z 432.5[M+1自由基]。
元素分析(对于C26H29N3O3·2HCl·0.035乙醇·0.29乙酸乙酯·0.03正庚烷·0.8H2O)：a.计算百分比(％)：C，60.03；H，6.54；N，7.65；Cl，12.91b.观测百分比(％)：C，59.85/59.97；H，6.54/6.47；N，7.67/7.67；Cl，13.10/13.24
计算的FW：534.63(由于1H NMR对H2O不敏感，因此这里并没有考虑0.8H2O的值，这个值在处理这种极易吸湿的粉末过程中可能是上升的)。
测定这些材料中乙基氯化物水平，测定结果是98ppm。同时分析样品，测定结果发现包含5,800ppm的正庚烷。
分析这些样品的另一部分，得到下列结果：99.6％AUC、1640ppm乙醇、41,480ppm乙酸乙酯，5600ppm正庚烷、未检测到甲氧基苯和120ppm的乙基氯化物。
使用上述干燥的盐也可以发展盐的重结晶过程。这种过程只有在处理高度纯净的粗品盐(包含剩余的乙醇)时才能很好的发挥作用，所述高度纯净的粗品盐是通过浓缩盐酸盐形成反应混合物而产生的。
将盐(575毫克)溶解于两倍重量的纯乙醇(1.157克)中，然后在氮气条件下加热。向这种加热后的溶液(搅拌的)中加入1.6克25％的乙醇(在乙酸乙酯中)，随后加入乙酸乙酯得到一种混浊的溶液。将这种混浊的加热后的溶液冷却到室温，在冷却过程中发生结晶作用。在结晶作用完成之后(2小时)，过滤收集结晶的固体，用无水乙酸乙酯(大约40毫升)洗涤，并真空干燥，从而产生424毫克可随意流动的固体状的KX2-391的二盐酸盐(细小的珠粒，99.8％AUC)，其中只包含0.05eq(0.45％重量/重量)的乙醇和0.015eq(0.26％重量/重量)的乙酸乙酯。使用异丙醇/乙酸乙酯能够获得稍微好一些的回收率(从586毫克中获得460毫克)，但同时，溶剂捕获水平也更好[0.085eq(1.0％重量/重量)的异丙醇和0.023eq(0.4％重量/重量)的乙酸乙酯]。实施例3：KX2-391二盐酸盐的大规模合成
这里使用的试剂或者溶剂是从供货商处购买得到的。通过高压液相色谱、气相色谱/质谱联用、或者1H NMR监控反应过程。使用Analtech硅胶板进行薄层色谱(TLC)分析并且通过紫外(UV)灯(254run)观测。在Agilentl100系列仪器上进行高压液相色谱(HPLC)。使用Bruker AV 300可以获得质子核磁共振谱图和碳原子的核磁共振谱图，其中在300MHz下获得质子的核磁共振谱图，在75MHz下获得碳原子的核磁共振谱图。使用溶剂的峰作为质子谱图和碳原子谱图的参照峰。4-(2-(4-溴代苯氧基)乙基)吗啉的制备(2)
向装配有回流冷凝器和测温传感器的50升夹套反应器中装入4-(3-氯代丙基)吗啉(2.44千克，0.54摩尔)、4-溴代苯酚(2.27千克，0.54摩尔，1.0当量)，制成粉末状的碳酸钾(6.331千克，1.88摩尔，3.50当量)和二甲基甲酰胺(DMF，12.2升)并搅拌。随后，江反应混合物加热到60-65℃然后搅拌过夜。在17.5小时之后，将反应混合物冷却到20-25℃。将反应混合物倒入不同的反应器中，这里的反应器装配有底部阀门。当温度维持在20-30℃时，向反应器中加入水(48.7升)。分离各个相。用甲基三丁基乙醚(MTBE)(2x24.4升)提取水相层。向结合的有机相中加入Dl水(18.3升)，然后加入6M的氢氧化钠(18.2升)。将混合物搅拌2-5分钟，然后分离各相。用水(24.4升)和盐水(24.4)洗涤有机相，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩，从而产生3370克黄色油状物(89％，粗产品，通过高压液相色谱测定AUC为99.4％)。6-氟代吡啶-3-基硼酸(4)的制备
一种72升的反应器上装配有回流冷凝器和测温传感器。向这种反应器中加入5-溴代-2-氟代吡啶(1.17升，0.568摩尔)、甲苯(18.2升)和三异丙基硼酸盐(3.13升，0.68摩尔，1.2当量)并搅拌。向反应器中加入四氢呋喃(4.4升)然后将反应混合物冷却到-35℃到-50℃之间。当温度维持在-35℃到-45℃之间时，小心的向反应器中加入正丁基锂(2.5M的正庚烷溶液，5.44升，0.68摩尔，1.2当量)。5小时后，认为反应完全，将反应混合物加热到温度大约为-15℃到-20℃之间。向反应中加入2M盐酸(11.80升)同时将反应温度维持在大约-15℃到0℃之间。在18℃到23℃条件下搅拌反应混合物(16小时)，分离各相。用6M氢氧化钠(6.0升)提取有机相。在反应器中混合酸性和碱性的水相，加入6M的盐酸(2.5升)直到pH值达到7.5。然后向水相中加入氯化纳(6.0千克)。用THF(3x20升)提取水相。用硫酸镁干燥结合的有机相并浓缩产生1300克黄褐色固体(81％粗产率)。4-(2-(4-(6-氟代吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉(5)的制备
向72升装配有回流冷凝器、喷射管、鼓泡器和测温传感器的反应器中装入6-氟代吡啶-3-基硼酸(2.84千克、1.24当量)、4-(2-(4-溴代苯氧基)乙基)吗啉(4.27千克，1.0当量)和二甲醚(DME)(27升)。开始搅拌并且向反应混合物中加入碳酸钠(4.74千克，3.0当量)在去离子水(17.1升)中的溶液。向反应混合物中通入氩气鼓泡50分钟。在氩气环境下，向反应混合物中加入四(三苯基膦)合钯(750克，0.04当量)在二甲醚(DME)(1.0升)中的料浆。将反应混合物加热到75℃-85℃并且搅拌过夜(17小时)。冷却反应混合物使温度在18℃-22℃之间。向反应器中加入去离子水(26.681千克)和甲基叔丁基醚(26.681升)病搅拌5分钟。分离各个相，并且用甲基叔丁基醚(2x26.7升)提取水相。用2M盐酸(1x15.0升，3x21.8升)提取结合的有机相。然后将水相倒回反应器中并加入乙酸乙酯(26.7升)。使用6M的氢氧化钠(26.7升)将pH值调节到6.2，同时将温度维持在15-25℃之间。分离各个相，用乙酸乙酯(2x26.7升)提取水相。用硫酸镁干燥结合的有机相并且浓缩产生4555克残余物(101％粗产率，通过高效液相色谱测定AUC为67.1％)。4-(2-(4-(6-氟代吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉(5)的制备
使用硅胶色谱分析法纯化粗产品(575克)，使用甲醇/乙酸乙酯/正庚烷(先后使用30％乙酸乙酯/正庚烷，50％乙酸乙酯/正庚烷、75％乙酸乙酯/正庚烷、100％乙酸乙酯和5％甲醇/乙酸乙酯)洗提。通过薄层色谱法(TLC，10％甲醇/二氯甲烷，Rf＝0.3)得到的纯馏分进行浓缩，得到420克淡褐色的固体(73％回收率，通过高效液相色谱测定AUC＞99.9％)。2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)氰化甲烷(6)的制备
向5升的烧瓶中加入1M六甲基二硅基胺基钠(NaHMDS)(2.0升，5.0当量)在四氢呋喃中的溶液，并将温度冷却到-20℃到-15℃之间。当温度维持在-10℃范围内时，在20分钟的时间内向烧瓶中装入氟化物(119.7g，1.0当量)在四氢呋喃(500毫升)中的溶液。在20分钟内向烧瓶中加入氰化甲烷(82.5毫升，4.0当量)在四氢呋喃(170毫升)中的溶液，同时维持温度低于-10℃。随后搅拌反应混合物一小时。向反应中按照一定速率加入盐水(1.5升，12.6vol.)，同时维持温度低于10℃。然后加热溶液至室温，分离各个相。使用硅藻土过滤混合物并用四氢呋喃(先后用1x200毫升，1x100毫升)洗涤。用甲苯(750毫升)提取水相。用硫酸镁干燥结合的有机相，过滤并用甲苯(2x250毫升)洗涤，并浓缩至干燥。向反应物中加入甲苯(1升)并将反应物浓缩至再次干燥，产生169.8克的油状物。在50℃下向油状物中加入甲基叔丁基醚(1190毫升，7vol.)，搅拌15分钟。在50℃条件下，10分钟内加入正庚烷(850毫升，5vol.)。然后在1.5小时内将反应混合物冷却至室温并搅拌2小时。过滤所得料浆，用1∶4的MBTE/正庚烷(2x100毫升)洗涤，在烘箱中45℃条件下干燥过夜，从而产生102.3克的灰白色固体(80％粗产率，通过高效液相色谱测定AUC为98.8％)。甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐(7)的制备
将腈类6(101克)和甲醇(1.01升，10vol.)装入3升的烧瓶中，该烧瓶装备有搅拌棒和温差电偶式测温仪。在15分钟内，向溶液中逐滴加入浓缩的硫酸(175毫升，10.0当量)，同时维持温度低于60℃。随后向溶液中逐滴加入30％的发烟硫酸(124毫升)同时维持溶液温度低于60℃。然后使用加热罩加热回流所述溶液并搅拌过夜。当认为反应完全时，将温度冷却到20℃。向另一个烧瓶(22升)中加入饱和碳酸氢钠(10.7升)和二氯甲烷(1.1升)，将温度冷却到15℃。同时维持温度小于20℃，将反应混合物添加到所述碳酸氢钠/二氯甲烷混合物中，搅拌15分钟淬火并分离各个相。用二氯甲烷(1x550毫升，1x300毫升)提取水相。用硫酸镁干燥结合的有机相并浓缩至干燥，产生105克橙黄色固体(94％粗产率，通过高效液相色谱测定为AUC为97.7％)。2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺(KX2-391)的制备
将酯类7(103克)、甲氧基苯(513毫升，5vol.)和苯甲胺(94毫升，3.0当量)装入3升的烧瓶中，该烧瓶装备有温差电偶式测温仪和高架搅拌棒。将反应混合物加热到142℃并搅拌2天。将反应混合物冷却到45-50℃并继续搅拌两个小时。在一个小时内，向反应混合物中逐滴加入正庚烷(1.5升)，然后在三个小时内将反应混合物溶液冷却到室温，在搅拌过夜。过滤所得浆液，先后用4∶1的甲氧基苯/正庚烷(200毫升)和正庚烷(3x1OO毫升)洗涤。在烘箱内干燥整夜，得到112.1克黄褐色固体状的产物(90％产率，通过高效液相色谱法测定AUC为99.6％)。单一正庚烷异构体的使用对充分测定残余溶剂是必不可少的。参加图5所述的KX2-391的1H NMR。2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺二盐酸盐(KX2-391 2HCl)的制备
向2升烧瓶中加入乙醇(1.0升)，并向该烧瓶中缓慢的加入乙酰氯(62.5毫升，3.0当量)并搅拌40分钟。在30分钟内向所得溶液中加入KX2-391(100克)，同时维持温度为30℃。将所得溶液的质量浓缩到270克。向浓缩后的溶液中在20分钟内加入乙酸乙酯(2升)同时进行剧烈的搅拌。将反应混合物搅拌过夜然后在氮气条件下过滤从而产生2种不同的固体产物，分别是黄褐色的固体(73.5克)和黑色的固体克)。混合干燥的固体，产生的结合产率为99.9％。通过高效液体色谱分析表明纯度(AUC)为99.0％。分析表明乙醇以2530ppm的浓度存在、乙酸乙酯以48,110ppm的浓度存在、乙基氯以170ppm的浓度存在、并且没有检测到正庚烷和甲氧基苯的存在。检测钯含量三次，测定值分别为29ppm、2ppm和小于1ppm。KX2-391二盐酸盐的结晶作用研究
表1中显示的试验旨在研究KX2-391二盐酸盐不同的结晶作用和沉淀状况。表1：KX2-391二盐酸盐的结晶作用研究
通过向大量的快速搅拌的乙酸乙酯中反向加入KX2-391二盐酸盐在乙醇中的浓缩溶液，可以实现沉淀作用。对示范批次进行沉淀过程，产生两种不同的固体类型。使用物理方法分离这两种不同的固体类型并分别过滤。首先过滤出一种低密度的黄褐色固体(编号02BP11IE，74克，通过高效液相色谱法测定AUC为99.1％)，随后过滤出一种深黑色的固体(编号02BP11IF，43克，通过高效液相色谱法测定AUC为99.1％99.1％)。在真空烘箱中进行再次干燥，干燥之后，在混合之前，将两种固体中的每一种都取出一些样品用于分析。所关心的数据是差示扫描量热法(DSC，图1和图2)和X射线粉末衍射法(XRPD，图3和图4)。当差示扫描量热法(DSC)和X射线粉末衍射法(XRPD)的数据不同时，比较这两种样品的高效液体色谱数据。
使用高效液体色谱制备纯度大于99.0％(面积％)的产品。编号02BP11IE样品在大约198℃下显示单一的吸热反应，而编号02BP11IF样品在117℃和189℃条件下显示两个吸热反应。两个样品的X射线粉末衍射法(XRPD)数据也是不同的，编号02BP11IE样品观察到结晶，而编号02BP11IF样品好像是无固定形态的。从高效液体色谱数据、X射线粉末衍射法(XRPD)数据和差示扫描量热法(DSC)数据都可以证明这两种样品是相同材料的不同形式。
干燥两个编号的KX2-391二盐酸盐(编号02BP11IE和编号02BP11IF)，并混合，从而得到一种新的KX2-391二盐酸盐编号(编号02BP11IG)。KX2-391二盐酸盐编号(编号02BP11IG)包括170ppm的乙基氯。实施例4：2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基) -N-苯甲基乙酰胺甲磺酰基盐(KX2-391 MSA)2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)氰化甲烷(6)的制备
在52分钟内向圆底反应器1中加入六甲基二硅基胺基钠(NaHMDS)(1.0M在四氢呋喃中的溶液，23.2升)并将温度冷却到-10℃以下。在氮气条件下，向箱护玻璃瓶中加入化合物5(1400克，1个重量)和四氢呋喃(7.0升，无水，5体积)。在氮气条件下，用气动搅拌棒搅拌该批次的反应。该批次不是完全可溶的，形成一种浑浊溶液。在41分钟内，通过一种5升添加漏斗向反应器1中加入化合物5的溶液。制备氰化甲烷(965毫升，无水的，0.69体积)在四氢呋喃(2.0升，无水的，1.43体积)中的溶液，并且在10℃以下在48分钟内使用同一个添加漏斗将此溶液添加到反应器1中(在反应器壁还有少量的黄色固体)。在-10℃以下老化混合物45分钟，将该批次作为样品进行分析，化合物5转化了0.03％(转化规格小于1.5％)。在制成样品1小时24分钟之后，在52分钟的时间内向反应器1中加入盐水(17.6升，12.6vol)，从而产生一种缓慢搅拌的批次(类似一种乳状液)。在一种24-英寸的聚丙烯漏斗上制备硅藻土滤垫(1026克硅藻土545在3.3升水中制浆，丢弃滤液)。使用抽水泵使用滤垫对该批次混合物过滤，用四氢呋喃(1.75升，1.25vol)洗涤反应器并，将洗涤液加入到滤饼中。将滤饼用另外一份四氢呋喃(1.75升，1.25vol)洗涤，总过滤时间为1小时17分钟。将滤液转移到反应器2中，并分离各个相，静置整夜(在氮气条件下，将批次反应物存储在反应器中)。排干有机相(大约34.5升)并用甲苯(8.1升，5.8vol)提取水相，搅拌16分钟并沉淀12分钟。也可以省略甲苯提取步骤，只是简单的在分离之后直接将甲苯加入到有机相中。去掉所得水相(大约19升)，然后结合有机相并用硫酸镁(1400克，1个重量，无水的)在反应器2中干燥有机相55分钟。使用24英寸的聚丙烯漏斗过滤批次混合物，将混合物过滤到箱护玻璃瓶中，所述24英寸的聚丙烯漏斗装备有一种串联过滤器，将批次混合物中冲入氩气并将其保存在低温空间(2-8℃)中，浓度待定。在随后的几天中，浓缩反应批次，得到一种残余物，并用甲苯(11.8升，8.4vol)，随后继续浓缩(水浴50±5℃)。在接近添加甲苯的时候，批次混合物是一种橙黄色浆状物，并在之后的浓缩过程中一直保持这种状态。总浓缩时间是5小时3分钟。
向反应器3中装入甲基叔丁基醚(13.9升，9.9体积，ACS)，然后加热到45±5℃。排干所述甲基叔丁基醚并使用大约2升的甲基叔丁基醚制浆，将批次反应物从烧瓶中导入反应器3中。向反应器3中加入剩余的甲基叔丁基醚，并将批次温度维持在45±5℃范围内，然后在此温度范围内静置反应批次混合物33分钟。然后在39分钟内向反应器3中加入正庚烷(10升，7.1体积，99％)，并维持批次温度在45±5℃范围内。切断热源，并且在4小时5分钟内将批次反应物冷却到25±5℃，并在此温度范围内静置批次混合物27小时4分钟。然后，使用抽水泵通过24-英寸聚丙烯漏斗(聚四氟乙烯(PTFE)包衣)过滤批次反应物，在氮气条件下掩护并吸干。总过滤时间是20分钟。在真空烘箱中，设定45±5℃，干燥橙黄色批次(净湿重1322克)48小时3分钟至恒重。将批次混合物转移到2个80盎司的褐色玻璃振击器(聚四氟乙烯线密封)并通入氩气(1217克的化合物6，理论值81％)。甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐(7)的制备
向22升的反应器中装入化合物6(900克，2.78摩尔)和甲醇(9.0升，10体积，无水的)。在2小时11分钟内向悬浮液中加入硫酸(1115毫升，发烟的)，从而产生一种黑色的溶液。最高温度是65.5℃(目标是大约65℃)。在1小时49分钟内加入硫酸(1565毫升，1.74体积，浓缩的)，然后加热批次混合物直到出现明显的回流(74℃)，加热持续18分钟，将反应批次维持在这种温度在16小时57分钟。记录明显的适度回流直到回流停止，然后再次加热批次混合物在79-80℃条件下回流2小时15分钟。将批次混合物维持在该温度(80±5℃)条件下10小时57分钟然后终端热源；在26小时4分钟之后再次进行甲醇的加入(0.75升，0.8体积，无水的)，从而补充损失的溶剂体积。据估计，在蒸发过程中大约损失了2.5升-3.3升的溶剂。在42小时31分钟回流反应之后，进行高效液相色谱分析，分析结果表明化合物6的转化水平是0.6％(规格小于1.0％)。向反应器1和反应器2中分别加入亚甲基氯(4.8升，5.3vol)和碳酸氢钠溶液(48升，53.3vol，饱和的)。在2-8℃条件下储存碳酸氢钠溶液整夜，然后在第二天早上去掉碳酸氢钠溶液。在47分钟内分部分向反应器1中加入22升反应器中批次混合物中的一半(批次温度分别是12-13℃)，在44分钟内分部分向反应器2中加入22升反应器中批次混合物中的另一半(批次温度分别是14-15℃)。在伴随有二氧化碳(漩涡式强力通入)的情况下进行淬火。从每个反应器中将批次混合物转移到200升的反应器中，搅拌批次混合物16分钟，然后沉降25分钟，分离有机相。连续使用两部分甲基氯化物(5升，5.6体积和2.7升，3体积)提取水相，每个提取过程在15分钟内发生，同时搅拌，分别沉降6分钟和9分钟。将结合的有机相转移到反应器3中，用硫酸镁(900克，1wt，无水的)干燥35分钟。使用抽水泵通过装备有雪克斯金细呢并装备有串联过滤器(10微米，Pall p/N 12077)的24英寸聚丙烯漏斗过滤所述批次反应物。在旋转蒸发器上，2小时18分钟的时间内，在40±5℃(水浴温度)条件下浓缩滤液。在54分钟之后，固化批次混合物并形成小球。将这些溶解并继续浓缩。所述批次反应物(细微固体物和脆块状物的混合物)进行进一步的研磨，将其放回烧瓶中继续浓缩。将批次混合物转移到一种80盎司的褐色玻璃振击器中并通入氩气从而产生一种化合物7(871克，理论值88％)，所述80盎司的褐色玻璃振击器带有聚四氟乙烯线密封。2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺(KX2-391)的制备
向22升反应器中加入化合物7(650克，1.82摩尔)、甲氧基苯(3.25升，5体积，无水的)和苯甲胺(600毫升，0.92体积，3equiv)。在1小时44分钟的时间内，将该批次(大约18℃)加热到142±5℃，在30℃时出现溶解现象。将该批次维持在142±5℃条件下69小时30分钟，此时，进行高效液相色谱分析显示化合物7转化了0.9％(转化规格＜1.7％)。在5小时12分钟的时间内将该批次冷却到45-50℃(为了实现冷却的目的，一旦批次温度达到大约72℃，就向该批次中通入氮气流)。在此温度范围内，缓慢的搅拌批次混合物进行混合，在混合同时缓慢的增加批次反应物温度至52℃。在小于15分钟的时间内就可以使温度升高到50℃以上。将批次反应物老化2小时2分钟，一旦温度低于50℃，就在1小时56分钟的时间内向批次反应物中加入正庚烷(9.75升，15体积，99％)，维持批次温度在45-50℃范围内。然后停止加热，在10小时32分钟的时间内将批次反应物冷却到25℃，在大约20分钟的时间内将温度冷却到大约20℃。该批次反应温度维持在25℃以下的总时间大约是4小时50分(其中右2小时47分钟该批次反应的温度维大约20℃)。使用抽水泵通过24英寸聚丙烯过滤漏斗(装有聚四氟乙烯(PTFE)包衣)过滤批次混合物，用甲氧基苯/正庚烷(1.3升，4∶1)洗涤反应器然后将洗涤液倒入滤饼中。然后，连续用两部分正庚烷(分别是1.3升，0.65升)洗涤滤饼。总过滤时间是39分钟。将批次反应物(净湿重为1004克的KX2-391)转入三个玻璃托盘中，然后放置于真空烘箱内，设置温度50℃进行干燥，直至在96小时26分钟之后干燥至恒重。2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺甲磺酰基盐(KX2-391-MSA)的制备
将KX2-391(520克，1.21摩尔)转移到反应器1中，使用丙酮(41.6vol，80vol，ACS)加速转移。在33分钟内将该批次加热到50±5℃，在温度达到30℃时出现溶解。使用安装有串联过滤器(Pall P/N12077，10微米)的转移泵将该批次反应物转移到另一个反应器中，然后重新加热，使温度从46℃升高到50±5℃。在12分钟内，将甲基硫酸(121.4克，1.05当量，99％，超纯)加入到淡黄色的批次反应物中，并停止加热。在经过十四分钟之后，可以观测到白色的固体，白色固体的数量逐渐增加，在59分钟之后会产生一种白色的悬浮物。经过7小时51分之之后，该批次反应物的温度在25±5℃范围内，将其进一步老化19小时21分钟(其中有10小时30分钟的时间内温度小于27℃)。使用抽水泵通过24英寸聚丙烯过滤漏斗(装有聚四氟乙烯(PTFE)包衣)过滤批次混合物，用丙酮(2.0升，澄清的，ACS)洗涤反应器然后将洗涤液倒入滤饼中。用不锈钢盖将滤饼盖住并通过氮气流将滤饼吸干。总过滤时间为21分钟。将批次反应物(净湿重为7644克)转入三个玻璃干燥托盘中，然后放置于真空烘箱内，设置温度25±5℃进行干燥，干燥时间为21小时54分钟。然后将批次混合物转移到两个80oz的棕色玻璃瓶中(用聚四氟乙烯连接的聚丙烯密封)，通入氩气并在-10℃到-20℃条件下储藏。其他实施方案
尽管已经结合其具体的说明对本发明进行了详细的描述，但是之前的描述只起到说明作用，并不作为对本发明范围的限制，本发明的范围由所附权利要求书定义。其他的方面、有点和修饰也应包括在所附权利要求书定义的范围内。本发明所属领域普通技术人员应该理解，在不脱离所附权利要求书定义的本发明范围的情况下，可以在形式和细节上进行各种各样的变化。

Claims (17)

1.一种制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺甲磺酰基盐的过程，该过程包括以下步骤：(1)将4-(2-氯代乙基)吗啉与4-溴代苯酚发生反应，从而产生4-(2-(4-溴代苯氧基)乙基)吗啉；(2)将4-(2-(4-溴代苯氧基)乙基)吗啉与6-氟代吡啶-3-基-3-硼酸相耦合从而产生4-(2-(4-(6-氟代吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉；(3)使4-(2-(4-(6-氟代吡啶-3-基)苯氧基)乙基)吗啉与氰化甲烷发生反应，从而生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)氰化甲烷；(4)将2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)氰化甲烷转化为甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐；(5)使甲基2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)醋酸盐与苯甲胺发生反应，从而生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺；并且(6)使2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺与甲烷磺酸相接触，从而生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺甲磺酰基盐。
2.一种制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺甲磺酰基盐的过程，该过程包括以下步骤：将2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺与甲烷磺酸相接触从而生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺甲磺酰基盐。
3.根据权利要求1或2所述的制备2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺甲磺酰基盐的过程，该过程包括以下步骤：使2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺与甲烷磺酸相接触从而生成2-(5-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-苯甲基乙酰胺甲磺酰基盐。
4.一种组合物，该组合物包括KX2-391甲磺酰基盐。
5.根据权利要求4所述的组合物，其中通过高效液体色谱法测定所述KX2-391甲磺酰基盐的纯度大于98.0％。
6.根据权利要求4所述的组合物，其中所述KX2-391甲磺酰基盐的纯度为99.0％。
7.根据权利要求4所述的组合物，其中所述KX2-391甲磺酰基盐的纯度为99.5％。
8.根据权利要求4所述的组合物，其中所述KX2-391甲磺酰基盐的纯度为99.6％。
9.根据权利要求4所述的组合物，其中所述KX2-391甲磺酰基盐的纯度为99.7％。
10.根据权利要求4所述的组合物，其中所述组合物包含小于2％的杂质，所述杂质选自乙基氯化物、乙醇、乙酸乙酯、正庚烷、甲氧基苯、钯及其结合。
11.根据权利要求4-10中任意一项所述的组合物，进一步包括一种药学上可接受的载体或者赋形剂。
12.根据权利要求4-11中任意一项所述的组合物在制备用于调节蛋白激酶信号级联中一种或者一种以上组分的药物中的应用。
13.根据权利要求12所述的应用，其中，所述药物抑制一种激酶，该激酶选自一种Src族蛋白激酶、黏着斑激酶(FAK)和一种酪氨酸激酶。
14.根据权利要求13所述的应用，其中所述酪氨酸激酶是一种Src族蛋白激酶。
15.根据权利要求12-14中任意一项所述的应用，其中所述药物被口服给药。
16.根据权利要求12-14中任意一项所述的应用，其中所述药物被局部给哟。
17.根据权利要求12所述的应用，其中所述激酶级联的组分会导致一种疾病或者紊乱的现象，所述疾病或者紊乱选自过度增殖性紊乱、癌症、前期癌症、骨质疏松症、心血管疾病、免疫系统功能失调、II型糖尿病、肥胖症、听力损失和移植排异。
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