CN101678040B - 卡拉胶用于处理鼻病毒感染的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了ι-卡拉胶、κ-卡拉胶或λ-卡拉胶或其混合物在制造用于预防或治疗鼻病毒感染的抗病毒药物组合物中的应用。

Description

卡拉胶用于处理鼻病毒感染的应用

技术领域

本发明属于免疫和抗病毒剂的领域，并且涉及包含卡拉胶作为活性抗病毒成分的药物组合物及其在鼻病毒感染的预防或治疗处理中的应用。

背景技术

小核糖核酸病毒代表了小型含核糖核酸的病毒的一个非常巨大的病毒家族，是造成多种严重的人类和动物疾病的原因。小核糖核酸病毒包括四种主要类群：肠道病毒、鼻病毒、心病毒和口疮病毒。

人鼻病毒由至少100个血清型组成，是普通感冒的主要致病媒介。由于血清型的数量较大，疫苗的开发成为难题；因而抗病毒剂可能是最好的治疗手段。鼻病毒由外部的衣壳构成，所述外部的衣壳包含四种病毒蛋白VP1、VP2、VP3和VP4。蛋白VP1、VP2和VP3被组织成60个重复性的前旋转异构性二十面体单元(protameric icosahedral units)。这些被认为是与所述病毒相关的抗原多样性的原因。

鼻病毒(HRV)感染导致普通感冒，症状例如有发热、咳嗽和鼻塞。HRV感染是与婴儿和幼童的肺炎和细支气管炎有关的第二最常见的媒介，并且通常导致患有哮喘病、慢性阻塞性肺疾病或囊性纤维化的人的已经存在的呼吸道疾病的恶化。HRV感染根据年龄与三分之一至二分之一的哮喘病恶化有关，并且在成人和儿童中均与因哮喘病住院有关。

现有的治疗手段包括如DE 19825395中公开的应用鼻病毒特异性RNA，该鼻病毒特异性RNA可结合到衣壳的峡谷区(canyon region)，所述峡谷区为宿主受体(例如ICAM-1，细胞间粘附分子-1)结合和细胞感染所必需的。

另一种方法包括如US 6,326,004和US 6,096,862中公开的施用可溶性ICAM-1蛋白或ICAM-1的衍生物(tlCAM-1，截短的ICAM-1)以中和病毒颗粒(病毒粒体)。

EP 0523803公开了对鼻病毒具有抗病毒活性的化合物。

鼻病毒的症状由免疫系统的过度或非特异性反应引起。因而鼻病毒感染的普通治疗形式包括施用诸如阿司匹林或对乙酰氨基酚(acetaminophen)/扑热息痛(paracetamol)等镇痛药及针对咽喉的局部化形式(通常以锭剂形式递送)、通过使局部血管收缩来减轻鼻通道炎症的鼻部减充血剂、止咳剂(其用于抑制脑的咳嗽反射或通过稀释肺内粘液来发挥作用)以及第一代抗组胺剂，例如溴苯那敏、氯曲米通和克力马丁(其可减少粘液腺分泌，从而对抗阻塞/流涕的鼻子，但也可以令使用者昏昏欲睡)。

包括卡拉胶在内的硫酸化多糖因其抗病毒效能而在本领域中为人所知。在最引人关注的一篇综述中，Gonzalez M.E.等(1987，Antimicrob.Agents Chemother.31，1388-1393)报道了包括ι-卡拉胶在内的不同硫酸化多糖对抗数种动物病毒的抗病毒效能。ι-卡拉胶显示了对抗包膜病毒HSV-1、HSV-2、塞姆利基森林病毒(Semliki Forest virus)(SFV)、牛痘病毒和非洲猪瘟病毒(African swine fever virus)(ASF)以及对抗裸露脑心肌炎(EMC)病毒的抗病毒活性。ι-卡拉胶对包膜病毒水泡性口炎病毒(VSV)和麻疹病毒以及对裸露病毒1型脊髓灰质炎病毒和5型腺病毒无效。

US 2003/181415 A公开了诸如纤维素硫酸酯等硫酸化多糖对抗各种包膜病毒、尤其是单纯疱疹病毒(HSV)、乳头瘤病毒和HIV的抗病毒活性。

WO 2005/004882A公开了以硫酸化多糖如卡拉胶对除鼻病毒感染之外的病毒感染的治疗处理。

US 2005/171053A1公开了使用λ-卡拉胶来抑制包括HIV-1感染在内的性传播感染的扩散。

Yamada等(1997，Carbohydrate Polymers，Appl.Scien.Publishers 32，51-55)公开了λ-卡拉胶、κ-卡拉胶和ι-卡拉胶以及它们的硫酸化衍生物的抗HIV-1活性。

S.F.Tischer等(2006，Carbohydrate Polymers，Appl.Scien.Publishers 63，459-465)公开了分离自石花菜(Meristiella gelidium)的卡拉胶对抗单纯疱疹病毒和登革热病毒的活性。

Carlucci等(2004，Antiviral Research，Elsevier Science BV.64，137-141)公开了λ-卡拉胶对小鼠体内生殖器单纯疱疹病毒感染的保护效果。

Pujol等(2006，Planta Medica 72，121-125)公开了分离自杉藻(Gigartina skottsbergii)的卡拉胶对抗腹膜内鼠单纯疱疹病毒感染的抗病毒活性。

术语“卡拉胶”是提取自海藻(红藻)的直链硫酸化半乳糖类的多糖的常用的集合性术语。其通常被用作药品和食品中的增稠剂、胶凝剂、稳定剂或乳化剂。取决于提取卡拉胶的海藻种属，有10种以上不同的卡拉胶。三种主要类型是ι-卡拉胶、κ-卡拉胶和λ-卡拉胶，它们在结构和硫酸化程度上稍有不同。ι-卡拉胶是主要提取自红色海藻星芒杉藻(Gigartinastellata)和皱波角叉菜(Chondrus crispus)的形成软凝胶的硫酸化半乳聚糖。κ-卡拉胶生成坚挺、硬实的凝胶，并主要产自耳突卡帕藻(Kappaphycuscottonii)。作为最常见形式的λ-卡拉胶通常被用于使乳制品增稠。

虽然人们很早就知道一些卡拉胶对抗如HIV或HSV等病毒的抗病毒活性，但卡拉胶如何发挥抗病毒活性的机制还需要澄清。

基于上文，本发明现在提供了适合于鼻病毒感染(鼻炎)的预防或治疗处理的卡拉胶类抗病毒组合物。

促生本发明的实验已经惊人地证明了尽管现有技术中可能有所保留，但所选的卡拉胶发挥了对抗鼻病毒感染(鼻炎)的抗病毒活性，其中ι-卡拉胶产生了最佳结果。

发明内容

因而，本发明在第一个实施方式中涉及了卡拉胶作为活性抗病毒成分在用于鼻病毒感染的预防或治疗处理的药物组合物的制造中的应用。

这里所用的术语“活性抗病毒成分”是指在以有效剂量或有效量应用时可以直接和/或间接干扰真核细胞的鼻病毒感染周期，更具体而言干扰选自下述组中的鼻病毒感染周期的至少一个部分的卡拉胶化合物，所述组由病毒侵入真核细胞、病毒在真核细胞中复制、病毒装配和病毒从被感染的真核细胞中释放组成。它还包括了在真核或哺乳动物宿主系统中非特异性抑制病毒滴度增长或非特异性降低病毒滴度水平的任何效果。该术语还指具有预防效能从而可至少在一定程度上免于或降低因病毒感染而病倒的可能性的化合物。

本药物组合物因而可以在病毒感染发作之前或之后施用。此处所用的术语“预防”或“预防处理”涉及施用本药物组合物从而至少在一定程度上免于或降低因病毒感染而病倒的风险。

此处所用的术语“治疗”或“治疗处理”涉及对已感染病毒的个体施用本药物组合物从而减轻所述感染的病理影响，包括减少所出现症状的严重性和/或频率，或者消除所述症状、治疗由所述病毒感染引起的或与之相关的可能损伤，并且包括抑制或防止继发的病毒、细菌、真菌或其他任何类型的微生物感染。

下文所用的集合性术语“卡拉胶”是指ι-卡拉胶、κ-卡拉胶和λ-卡拉胶均聚物或杂聚物中至少两种的混合物，即指ι-卡拉胶和λ-卡拉胶的混合物、ι-卡拉胶和κ-卡拉胶的混合物、κ-卡拉胶和λ-卡拉胶的混合物、或ι-卡拉胶、κ-卡拉胶和λ-卡拉胶均聚物或杂聚物的混合物，除非另外明确声明或者除非可由相关公开内容的实质推导出不同的含义。

卡拉胶均聚物是ι-卡拉胶、κ-卡拉胶或λ-卡拉胶中任意一种的分子纯卡拉胶化合物。卡拉胶杂聚物包含至少两种不同类型的卡拉胶的亚单元，所述卡拉胶的亚单元优先选自由ι-卡拉胶、κ-卡拉胶和λ-卡拉胶亚单元组成的组。

下文中如果提及时，术语卡拉胶的“混合物”还可以指包含至少一种卡拉胶杂聚物作为活性抗病毒成分的物质的组合物，因而“混合物”主要是作为该组合物中存在的所述至少一种杂聚性卡拉胶的部分的不同卡拉胶亚单元的混合物。

在另一个实施方式中本发明涉及这样一种用于预防性或治疗性应用的抗鼻病毒组合物，其中，所述鼻病毒感染是急性或慢性鼻病毒感染。

本卡拉胶类组合物适合于局部应用以处理皮肤或粘膜炎症。但是也可以全身性应用如胃肠外或口服应用，尤其在经改造而主要含有低分子量卡拉胶部分时。可用于本发明的卡拉胶具有的平均分子量约为15000Da～5000000Da。低分子量部分包含的卡拉胶的平均分子量为约15000Da～约50000Da，中分子量部分包含的卡拉胶的平均分子量为约50000Da～约500000Da，高分子量部分包含的卡拉胶的平均分子量为约500000Da～约5000000Da。

在一个优选的实施方式中，所述药物组合物适于局部应用或粘膜应用。适合的即用型制剂的盖伦形式(galenic form)有乳膏剂、凝胶剂、软膏剂、散剂(包括吸入用散剂)、喷雾剂、泡沫剂或者例如皮肤洗剂、漱口液或滴鼻剂等液体溶液。其他适合形式的盖伦制剂对于本领域的普通技术人员将是显而易见的，包括例如US 6,391,452所公开的鼻用药物递送体系。

除了活性抗病毒成分，本组合物通常还包含至少一种药用载体，必要时还可包含其他添加剂或成分。

适合的载体可以是如水或盐水等稀释剂、赋形剂或适用于施用所述活性成分的另外的载质。任选的添加剂可以选自由以下物质组成的组：SiO₂，TiO₂，粘合剂，如微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶、明胶、淀粉、乳糖、乳糖一水合物、藻酸或玉米；润滑剂或表面活性剂，例如硬脂酸镁或十二烷基硫酸钠；助流剂，例如胶体二氧化硅；甜味剂，例如蔗糖或糖精。所述制剂中的其他添加剂可以是但不限于缓冲剂或pH调节剂，例如选自柠檬酸、乙酸、富马酸、盐酸、苹果酸、硝酸、磷酸、丙酸、硫酸、酒石酸或它们的组合。

还可以存在其他成分，包括非卡拉胶的药物或药物活性物质。

可以将卡拉胶以任何药用盐的形式使用，例如可以使用卡拉胶的钠盐。除此之外，其他药用盐包括卡拉胶的钾盐、锂盐和铵盐。

在另一实施方式中本发明的组合物可局部应用，并且卡拉胶的含量为所述制剂的0.01重量％～20重量％，优选为0.1重量％～10重量％，最优选为0.5重量％～5重量％。

通常，可以将所述组合物提供为不致热的(non-pyrogenous)灭菌制剂。对于液体制剂，例如经合适的膜滤器过滤从而可以实现无菌度。灭菌或无菌的药物组合物的制造方法是本领域中公知的，不是本发明的一部分。

然而，还可以将本发明的药物组合物涂覆在卫生物品或清洁物品的固体表面上，所述卫生物品或清洁物品例如有通常用于口部和/或鼻部区域的面部卫生用品或清洁用品，如鼻用棉纸(tissue)或纸和手帕。更具体而言，可以将所述药物组合物应用(例如喷射，非常类似于消毒剂)到手套、包括鼻用棉纸在内的卫生棉纸或纸上，从而至少在一定程度上发挥杀病毒剂的效果，进而有助于减少个体通过受污染的指尖的重复自我感染，并且还有助于减少相互之间密切(如手与手)接触的不同个体之间的病毒传播。取决于所述卫生物品或清洁物品的性质，可以以所述药物组合物来包覆、润湿或浸渍所述物品。

所述经卡拉胶处理的物品还可以包括但不限于棉签、防尘口罩或面罩。甚至可以配制含抗病毒有效量的卡拉胶的唇膏。这些卫生用品或清洁用品可以预防性地使用或者与治疗处理一起使用来对抗病毒感染，并且可以辅助避免或降低感染风险。

因此，在一个实施方式中，本发明涉及这样一种应用，其中通过涂覆或浸渍将所述抗病毒组合物施加于卫生用品或清洁用品的固体表面，特别是卫生或清洁手套、棉纸或纸、尤其是鼻用棉纸或纸的固体表面。

可用于本发明中的ι-卡拉胶、κ-卡拉胶和λ-卡拉胶可以商购，也可以按照本领域中已知的提取程序从海藻植物中提取来制备。

在本发明的优选实施方式中，本发明涉及选自由ι-卡拉胶、κ-卡拉胶和λ-卡拉胶的均聚物和杂聚物组成的组中的至少一种物质的应用。

在一个具体的实施方式中，本发明的抗病毒药物组合物基本上不含除ι-卡拉胶、κ-卡拉胶和λ-卡拉胶之外的卡拉胶形式，不过可能存在痕量的所述其他卡拉胶。对于各种应用，ι-卡拉胶实质上可能是所述组合物中存在的唯一一种的卡拉胶。

在另一个实施方式中，本发明涉及卡拉胶在制造抗病毒组合物中的应用，其中所述组合物包含ι-卡拉胶、κ-卡拉胶或λ-卡拉胶，或者至少两种所述卡拉胶的混合物，其含量为组合物中存在的所有卡拉胶的大于或等于80重量％、大于或等于90重量％、大于或等于95重量％、或者甚至大于或等于99重量％。所给出的百分比为相对于所指的卡拉胶的干重的重量百分数(％w/w)。

在另一个实施方式中，本发明涉及这样一种应用，其中相对于该组合物中存在的所有卡拉胶的总干重，所述组合物包含以干重计大于或等于50重量％、大于或等于70重量％、大于或等于80重量％，并且优选大于或等于95重量％的ι-卡拉胶。

上述的卡拉胶浓度值同样可以适用于均聚和杂聚卡拉胶。

在口服施用或皮肤施用、或者吸入时，即使以极高剂量应用时也未发现卡拉胶有毒性，因而食品和药物管理局(FDA)将其分类为“公认为安全”(GRAS)。

在另一个实施方式中，本发明涉及卡拉胶在抗病毒组合物的制造中的应用，所述组合物进一步包含至少一种其他的药物活性的抗病毒化合物，优选为纤维素硫酸酯。

在另一实施方式中，本发明涉及卡拉胶、优选ι-卡拉胶在药物组合物的制造中的应用，所述药物组合物用于选自下述组中的身体病况的预防或治疗处理，所述组由微生物感染、炎性疾病、过敏症和免疫系统受损或免疫系统受抑制组成，其中所述卡拉胶以与至少一种其他药物活性化合物或药物相组合的方式存在。在这样的组合物中，所述卡拉胶可以发挥抗鼻病毒佐剂的功能。所述至少一种其他药物活性化合物或药物可以选自由甾族化合物(如可的松)和抗组胺剂组成的组。

在另一实施方式中，所述抗病毒药物制剂用于特别易受鼻病毒感染或鼻病毒感染的危险增加的个体的治疗或预防，所述个体有例如选自由哮喘患者、患有过敏症的人和患有炎性疾病的人组成的组中的高危患者。

附图说明

图1显示了HRV诱导的细胞死亡抑制测试(XTT测试)的结果。

纵坐标＝在492nm测定的OD(光密度)；横坐标＝不同的测试样品；1＝未受感染的细胞；2＝未经处理的受感染细胞；3＝以ι-卡拉胶处理的受感染细胞；4＝以κ-卡拉胶处理的受感染细胞；5＝以λ-卡拉胶处理的受感染细胞；图1A＝受HRV-2感染的细胞；图1B＝受HRV-14感染的细胞。

图2显示了通过TCID₅₀测试进行的对受感染的HeLa细胞的上清液的峰滴度的测定。

纵坐标＝TCID₅₀滴度；横坐标＝以μg/ml表示的ι-卡拉胶的浓度；U＝未经处理的细胞；T(治疗)＝将细胞感染1小时并且在处理后1小时加入所示浓度的ι-卡拉胶；P(预防)＝在感染前将病毒悬浮液与所示浓度的ι-卡拉胶预温育1小时。其他处理与T相同：以0.01的感染复数来感染细胞。第3天观察HRV-2的峰滴度(图2A)，第4天观察HRV-14的峰滴度(图2B)。

图3显示了通过TCID₅₀测试而测定的ι-卡拉胶对受感染的人鼻上皮细胞上的鼻病毒复制的抑制的效能。

纵坐标＝以对数(log)表示的TCID₅₀滴度；横坐标＝以μg/ml表示的ι-卡拉胶的浓度；MOCK＝未经处理的对照细胞；图3A＝受HRV-1A感染的细胞；图3B＝受HRV-2感染的细胞；图3C＝受HRV-8感染的细胞；图3D＝受HRV-16感染的细胞；图3E＝受HRV-39感染的细胞；图3F＝受HRV-83感染的细胞。

图4显示了通过CPE抑制测试而测定的反复处理后ι-卡拉胶的抗鼻病毒的效能。

纵坐标＝以％表示的CPE抑制；横坐标＝以μg/ml表示的ι-卡拉胶的浓度；HRV2P0株＝原始鼻病毒株(无复制周期)；HRV2P10株＝在HeLa细胞上经10个选择性复制周期后的鼻病毒HRV2P0株。

具体实施方式

为了可以更加充分地理解本文所描述的本发明，对下述实施例进行了阐述。所述实施例仅用于阐释的目的，而不应被理解为在任何方面限制本发明。还应该理解本发明应当还包含所明确公开的实施方式至本领域的普通技术人员能预见的程度的各种变化方式。

实施例1：不同种类卡拉胶的抗2型人鼻病毒(HRV-2)和14型人鼻病毒(HRV-14)的效果

将病毒悬浮液用125μg/ml的图1中所示聚合物预温育5分钟，再用该病毒悬浮液温育近汇合的HeLa细胞。48小时后通过TOX2 XTT测试(Sigma)来确定细胞的生存力。

如图1所示，发现最有效的聚合物是ι-卡拉胶(第3列)，其可有效对抗2种类型的鼻病毒，而λ-卡拉胶(第5列)和κ-卡拉胶(第4列)显示了对抗HRV-2的效能，但未显示对抗HRV-14的效能。误差棒表示6个独立孔之间的标准偏差。

实施例2

在HRV-2和HRV-14诱导的细胞死亡抑制测试(XTT-测试)中以100μg/ml的浓度测试了表1中所示的聚合物。

如表1所示，ι-卡拉胶产生了对抗两种类型鼻病毒的保护能力(“+”表示与未受感染的对照细胞相比至少95％的保护)。κ-卡拉胶和λ-卡拉胶有对抗HRV-2的活性而没有对抗HRV-14的活性。聚合物几丁质、羧甲基纤维素和羧甲基几丁质根本不显示抑制效果。

表1：所测试的数种聚合物的抗病毒活性

聚合物	HRV-2	HRV-14
			ι-卡拉胶	+	+
κ-卡拉胶	+	-
			λ-卡拉胶	+	-
几丁质	-	-
			羧甲基纤维素	-	-
羧甲基几丁质	-	-

实施例3

在治疗和预防病毒复制的模型中ι-卡拉胶有效对抗HRV-2和HRV-14。在大于和等于6.25μg/ml的浓度观察到了峰病毒滴度的显著降低。然而，ι-卡拉胶在预防模型中对抗HRV-2最有效，其中观察到了峰病毒滴度降低超过99.9％。

实施例4：ι-卡拉胶的抗选择的人鼻病毒亚型的效果

将96孔板中近汇合的HeLa细胞用MOI(感染复数)为0.5的病毒悬浮液温育。

以病毒悬浮液感染后20分钟，加入含有3倍稀释的聚合物的营养培养基。48小时～72小时后通过TOX2 XTT测试(Sigma)来确定细胞的生存力。以软件Excel-Fit计算EC₅₀值。

表2

病毒

HRV-1

HRV-2

HRV-8

HRV-14

HRV-16

HRV-39

EC50

0.7μg/ml

21μg/ml

＜0.5μg/ml

400μg/ml

381μg/ml

117μg/ml

ι-卡拉胶具有对抗预先感染的HeLa细胞上的所有被测试人鼻病毒的活性。抑制50％的细胞病变效果所需的卡拉胶浓度在较宽范围内变化，对于HRV-8为＜0.5μg/ml，而对于HRV-14为400μg/ml。该结果表明ι-卡拉胶可抑制受感染的HeLa细胞上的广谱的鼻病毒亚型的复制。

实施例5：ι-卡拉胶对人鼻上皮细胞上的鼻病毒复制的抑制

将原代人鼻上皮细胞(Promocell)接种于24孔板中(2.9×10⁴细胞/孔)并在37℃、5％CO₂和95％的湿度培养3天。在汇合度约为60％时用鼻病毒株HRV-1A、HRV-2、HRV-8、HRV-14、HRV-16、HRV-39、HRV-83和HRV-84感染细胞。鼻病毒HRV-1A、HRV-2、HRV-8、HRV-16、HRV-39和HRV-83在人鼻上皮细胞上进行裂解性复制。HRV-14和HRV-84不裂解细胞，因而未接受进一步测试。将病毒用浓度为4μg/ml、40μg/ml和400μg/ml的ι-卡拉胶以及MOCK对照预温育。MOI为0.34。感染后48小时～72小时收获上清液并用于TCID₅₀滴度测定。如图3所示，与MOCK处理的对照细胞相比，利用ι-卡拉胶的处理在浓度为40μg/ml时使上清液中所有病毒的病毒滴度降低了至少2个对数级(＞99％)(Y轴显示了以对数(log)表示的病毒滴度)。这些数据清楚地表明ι-卡拉胶抑制原代人上皮细胞上的病毒复制。由于看来当前还没有可用于人鼻病毒体内测试的动物模型，所以本发明所用的人鼻上皮细胞代表了目前可用的最重要的体外模型。误差棒表示3个独立测试样品之间的标准偏差。

实施例6：反复治疗后ι-卡拉胶抗鼻病毒感染的效能的测定(检查发生病毒抗药性的可能性)

对原始病毒HRV2P0和在HeLa细胞上10个选择性复制周期后获得的病毒HRV2P10，以CPE(细胞病变效果)抑制测试进行检测。将HeLa细胞(8×10⁴个细胞/孔)接种于6孔板中。将细胞用合适的营养培养基感染，所述营养培养基补充有卡拉胶聚合物并且卡拉胶的终浓度为1.6μg/ml、5.3μg/ml、17μg/ml、50μg/ml、150μg/ml和450μg/ml，并进一步含有MOI为0.1的病毒。

作为对照，一个孔是以无病毒且补充有卡拉胶的营养培养基感染的MOCK，另一孔感染有经病毒悬浮液处理的MOCK，即含营养培养基但不含卡拉胶的病毒悬浮液。感染后经20分钟的温育时间之后，将板洗涤两次，并向除经MOCK处理的阴性对照(即未受抑制的完全的感染)外的所有孔中加入对照培养基(无病毒且补充有所选浓度的卡拉胶)。一旦在未保护的阴性对照孔中可见到明显的细胞病变效果就从各个实验孔中取样。对于后续的选择周期，从那些与未受感染的对照相比显示出可明确检测到的CPE的经卡拉胶处理的孔中取出含病毒上清液样品，将其用于感染HeLa细胞。通常，只在两个最低卡拉胶浓度(即每ml 1.6μg和5.3μg卡拉胶)的实验样品中可检测到CPE响应。

此程序重复10次，在CPE抑制测试中将所获的病毒样品与原始病毒株进行比较。简单来说，感染后48小时加入TOX2试剂(Sigma)，测定OD_450nm值并测定以未受感染的对照％表示的CPE抑制。

为了检查对于卡拉胶处理发生病毒抗药性的可能性，对于第一次接种所用的病毒(图4中的病毒2_001)和10个选择性复制周期后获得的病毒(图4中的病毒20_001)，按照与上述方案稍有不同的实验方案，使用HeLa细胞在CPE抑制测试中进行检测。简单来说，以MOI为0.1的各病毒感染HeLa细胞，感染后20分钟去除接种物，并加入含有终浓度为1.6μg/ml、5.3μg/ml、17μg/ml、50μg/ml、150μg/ml和450μg/ml的卡拉胶聚合物的营养培养基(见图4的横坐标)。感染后48小时加入TOX2试剂(Sigma)，测定OD_450nm值并测定以未受感染的对照％表示的CPE抑制(图4，纵坐标)。误差棒表示6个独立孔之间的标准偏差。

如图4中所图示，在从第1个感染周期和第10个感染周期的上清液获得的样品中未检测到病毒对卡拉胶处理的敏感性的显著差异。这表明在选择程序中未出现逃逸突变(escape mutant)。因此这些数据表明即使在长时间的持续治疗或反复治疗的情况下，在以ι-卡拉胶进行体内治疗时也不可能有鼻病毒的逃逸。

Claims (21)

1.抗病毒有效量的ι-卡拉胶作为活性抗病毒成分在用于鼻病毒感染的预防或治疗处理的药物组合物的制造中的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其中，所述鼻病毒感染是急性或慢性鼻病毒感染。

3.如权利要求1或2所述的应用，其中，所述组合物适合于局部应用或粘膜应用。

4.如权利要求3所述的应用，其中，所述组合物适用于作为鼻喷雾剂、散剂、凝胶剂、软膏剂、泡沫剂、或者液体溶液。

5.如权利要求3所述的应用，其中，所述组合物适用于作为吸入用散剂、洗剂、漱口液或滴剂。

6.如权利要求1或2所述的应用，其中，所述组合物进一步包含至少一种药用载体或添加剂。

7.如权利要求1或2所述的应用，其中，所述组合物适合于局部应用并且所包含的ι-卡拉胶的量为制剂的0.01%～20%(w/v)。

8.如权利要求7所述的应用，其中，所述组合物包含的ι-卡拉胶的量为制剂的0.1%～10%(w/v)。

9.如权利要求7所述的应用，其中，所述组合物包含的ι-卡拉胶的量为制剂的0.5%～5%(w/v)。

10.如权利要求1或2所述的应用，其中，所述组合物还包含至少一种其他卡拉胶，所述至少一种其他卡拉胶选自κ-卡拉胶和λ-卡拉胶。

11.如权利要求1或2所述的应用，其中，所述组合物包含相对于该组合物中存在的所有卡拉胶的总和以重量计为大于或等于50重量%的ι-卡拉胶。

12.如权利要求11所述的应用，其中，所述组合物包含相对于该组合物中存在的所有卡拉胶的总和以重量计为大于或等于80重量%的ι-卡拉胶。

13.如权利要求11所述的应用，其中，所述组合物包含相对于该组合物中存在的所有卡拉胶的总和以重量计为大于或等于95重量%的ι-卡拉胶。

14.如权利要求1或2所述的应用，其中，所述组合物进一步包含至少一种其他药物活性的抗病毒成分。

15.如权利要求1或2所述的应用，其中，所述组合物被涂覆在卫生用品或清洁用品的固体表面上。

16.如权利要求15所述的应用，其中，所述组合物被涂覆在鼻用棉纸的固体表面上。

17.如权利要求1或2所述的应用，其中，所述组合物进一步包含至少一种其他药物活性化合物，所述化合物选自甾族化合物和抗组胺剂。

18.如权利要求1或2所述的应用，其中，所述鼻病毒感染存在于作为高危患者的个体中，所述高危患者选自由哮喘患者、患有过敏症的人和患有炎性疾病的人组成的组。

19.固体卫生物品或清洁物品，所述固体卫生物品或清洁物品涂覆有或浸渍有权利要求1～18中任一项所述的抗病毒组合物。

20.如权利要求19所述的固体卫生物品或清洁物品，所述物品选自由手套、卫生棉纸、用于口部和/或鼻部区域的面部卫生物品和面部清洁物品组成的组。

21.如权利要求20所述的固体卫生物品或清洁物品，所述物品为鼻用棉纸。

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