CN101671625B - 一种液态深层发酵制备木霉分生孢子的方法和装置 - Google Patents

Abstract

一种液态深层发酵制备木霉分生孢子的方法和装置。装置设有发酵罐、空压机、电磁阀和时间控制器，发酵罐设有清壁系统、搅拌器、出料管、无菌空气进气管、无菌空气排气管、无菌空气分布器、夹套和液位计。先制备种子，再采用发酵罐生产木霉分生孢子，采用发酵培养基，灭菌冷却后，用种子罐培养的种子接种，在发酵罐中发酵得木霉分生孢子。解决了丝状真菌液体深层发酵尚未根本解决的技术难题，不会发生丝状真菌附壁生长和发酵物料挂壁的严重情况；可形成对罐壁挂壁物的高速冲洗效果，可进行工艺过程的自动控制；可以避免一般安装在罐底放料时存在的灭菌死角；工艺简单可行，产孢率高，产孢时间短，成本低；发酵周期短，平均产孢量既高又稳定。

Description

一种液态深层发酵制备木霉分生孢子的方法和装置

技术领域

本发明涉及一种采用液态深层发酵制备木霉分生孢子的方法和装置。

背景技术

木霉是典型的丝状真菌，属于半知菌类丝孢纲，它的某些种和菌株已广泛地用于纤维素酶、抗生素和生物农药等的生产，其中液态深层发酵生产的分生孢子液，在纤维素酶、抗生素的固态发酵产业化扩大生产以及生物农药生产中均有非常重要的应用。在生物农药的生产中，直接用液态深层发酵生产的分生孢子液，如绿色木霉(trichoderma viride)和哈茨木霉(trichoderma harzianum)制备液体或固体孢子制剂，在纤维素酶和抗生素[绿色木霉素(viridin)、木霉素(gliotoxin)和木霉菌脂素(trichoderma taxi)]的固态发酵中，特别是在纤维素酶的浅盘固态发酵中，使用分生孢子液接种，可实现大批量接种的高速化和全自动化，为纤维素酶的纯培养及产业化生产解决了长期未解决的关键性技术问题。

木霉的菌丝生长很快，成棉絮状或致密状，菌落表面多为绿色，菌丝透明，有隔膜，厚垣孢子间生或顶生，无色，壁光滑，分生孢子梗是菌丝的短侧枝，侧枝又对生或互生分枝，分枝又继续分枝，分枝成鋭角或近直角，分枝的末端即为小梗，分生孢子由小梗相继生出，分生孢子近球状或椭圆形，壁光滑或粗糙，透明或壳黄色。在液体培养时，观察到里氏木霉的菌丝形成分生孢子的过程是属于菌丝型的内生孢子发育型。

将里氏木霉分别接种到土豆葡萄糖琼脂平板培养基和土豆葡萄糖三角瓶液体培养基上分别培养，在土豆葡萄糖琼脂平板培养基培养5～7天，在土豆葡萄糖三角瓶液体摇床培养3～4天，就可以看到平板培养基上和三角瓶内形成了绿色的分生孢子。如果将土豆葡萄糖三角瓶液体摇床培养换成发酵罐液体深层培养，结果正如高培基等所说：在液体深层培养时，丝状真菌通常都不发生分化和形成孢子(高培基等编著，微生物生长与发酵工程，1990，142)，在通常的发酵罐液体深层培养条件下，不具备如同三角瓶摇床培养一样的产孢条件，若要创造液体深层发酵培养条件下，丝状真菌形成分生孢子的条件，则必需解决液体深层发酵培养所带来的关键性的技术难题，如同时解决菌丝附壁生长和大通气量供氧、合适的培养基、生产工艺及发酵设备改进等，丝状真菌生长形式适于表面生长，发酵过程菌丝会不断附着在发酵罐内壁、搅拌器叶片、换热器等的表面上生长，通气量愈大，附壁物愈多，发酵液中的菌丝和养料愈来愈少，严重时将致使发酵不能正常进行，通气量过低，附壁物可减少，但不易形成孢子。

发明内容

本发明的目的在于提供一种液态深层发酵制备木霉分生孢子的方法。

本发明的另一目的在于提供一种液体深层发酵制备木霉分生孢子的装置。

本发明使用的菌种是里氏木霉(Trichoderma reesei)6LZ11A，已于2009年04月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，登记入册编号为CGMCC No.3007。

本发明所述液体深层发酵制备木霉分生孢子的装置设有发酵罐、空压机、电磁阀和时间控制器。

发酵罐设有清除附壁物功能的清壁系统、搅拌器、出料管、无菌空气进气管、无菌空气排气管、无菌空气分布器、夹套和液位计。

清壁系统设有循环泵、循环液管、法兰轴承和清壁器；清壁器设有液体分布室和至少2个液体喷射器，每个液体喷射器由喷液管和圆锥形的喷头组成；法兰轴承的内套套在循环液管出口的外部，液体分布室的上端口设有连接法兰，清壁器固定在法兰轴承上，循环泵用压缩空气管依次与电磁阀和空压机相连，电磁阀与时间控制器连接，出料管设于发酵罐的底部，无菌空气进气管穿过发酵罐并与无菌空气分布器连接，无菌空气排气管设于发酵罐的顶部，无菌空气分布器设于搅拌器的下部，夹套套在发酵罐外，液位计设在发酵罐上。

发酵罐内壁的表面粗糙度最好为Ra0.42～0.01μm，发酵罐的径高比最好为1∶(3～4)。所述搅拌器最好为底部磁力驱动搅拌器。所述出料管的出料口最好朝上。所述循环泵可为不锈钢隔膜泵和不锈钢磁力泵等，最好采用不锈钢聚四氟乙烯隔膜泵，可进行在线灭菌。所述液体喷射器最好沿水平方向均匀安装在液体分布室靠近底部的外侧。所述喷头最好向下倾斜，喷头与水平方向成45°～60°角，喷头与发酵罐的内壁成45°～60°的入射角，喷头与发酵罐的内壁相距1.5～10cm。所述液位计最好为视窗式玻璃液位计。

所述清壁器最好通过螺丝固定在法兰轴承上，所述液体分布室最好为圆桶形液体分布室。

当工作时，打开电磁阀，由压缩空气起动循环泵，将发酵罐内的液体吸出，经循环液管进入液体分布室，而后经喷液管、喷头高速喷出，以45°～60°的入射角喷射到发酵罐的内壁上，将附在发酵罐内壁上的附壁物冲洗到发酵液内，高速喷出液的反冲力作用在喷液管的力臂上，推动喷头沿水平方向作圆周运动，依次将罐壁上的附壁物全部冲洗下，冲洗的程度及需要连续冲洗的时间，通过视窗式玻璃液位计即时观察确定。

上述清壁器高速喷出液的反冲力作用在喷液管的力臂上，推动喷头沿水平方向作圆周运动。当喷头设置较多时，清壁器也可以是直接固定在循环液管出口上，采用固定式清壁器，可省去法兰轴承，在此种情况下，可以达到同样的清壁效果。

所述清壁器的喷头既可以是圆锥形喷头，也可以是扇形喷头等。通过清壁器冲洗罐壁上的附壁物的介质，既可以是循环泵推动的发酵液，也可以是无菌压缩空气直接引入清壁器，推动喷头沿水平方向作圆周运动，通过高速喷出的气流冲洗罐壁上的附壁物。

搅拌器为底部磁力驱动搅拌器，搅拌器的桨叶下部为环状的无菌空气分布器，无菌空气分布器的气孔朝下，为了避免灭菌的死角，出料管的出料口朝上，出料时向罐内充无菌空气将料液压出。发酵罐的径高比为1∶(3～4)，以适当增加气泡在发酵液中的路程和接触时间。

本发明所述一种液态深层发酵制备木霉分生孢子的方法，采用所述液体深层发酵制备木霉分生孢子的装置，包括以下步骤：

1)制备种子的步骤；

2)发酵罐生产木霉分生孢子的步骤：采用发酵培养基，发酵培养基装料为发酵罐容量的70％，灭菌冷却后，用种子罐培养的种子接种，在发酵罐中发酵5～7天，得木霉分生孢子。

在步骤1)中，所述制备种子可采用试管斜面接种培养、三角瓶种子培养或种子罐种子培养的方法制备种子。

所述试管斜面接种培养可采用PDA培养基，灭菌接种后，28℃培养7～8天，斜面上可长满绿色的木霉分生孢子；

所述三角瓶种子培养可采用发酵培养基，将配好的发酵培养基搅匀，分装入250ml的三角瓶中，每瓶装100ml，灭菌后，用无菌水洗下试管斜面孢子接种，培养温度为28～30℃，摇床转速120rpm，每隔8～12h，用人工方法将附在三角瓶瓶壁上的菌丝摇下，培养48～72h后，即生长成丰满绿色的木霉分生孢子；

所述种子罐种子培养，可采用发酵培养基，发酵培养基装料为种子罐容量的70％，灭菌冷却后，用三角瓶种子培养的种子接种，接种量为10％～15％，培养条件为28～30℃，搅拌速度为90～120rpm，通气量(V/V)(V/V表示每分钟的通气量对发酵液的体积比)0～12h时，为1∶(0.6～0.8)，12h后，为1∶1，培养时间为32～37h，菌丝体生长达到对数生长期，即得发酵罐用的种子。

所述发酵培养基，按质量百分比的组成为脱皮后的马铃薯8％～16％，葡萄糖0.7％～2％，余为水；

所述发酵培养基的配制方法为：

(1)马铃薯用清洗脱皮机清洗脱皮后，用打浆机打浆，过滤去渣，滤液一边搅拌一边蒸气加热，至淀粉呈分散于水中的溶胶态悬浮物；

(2)按比例加入葡萄糖，以消泡剂消泡，加水冲稀到100％，调培养基的pH为6～10，得种子培养基。

在步骤(1)中，所述过滤最好为60～120目过滤，所述加热的温度最好为80～90℃。

在步骤2)中，所述种子接种的接种量为10％～20％；所述在发酵罐中发酵的发酵过程控制为：发酵液的pH6～10，温度28～30℃，搅拌速度80～120rpm，通气量(V/V)，0～6h时，为1∶(0.6～0.8)，36h以后，为1∶(1～1.6)；罐压控制，0～6h时，为80～100kPa，36h以后，为120～180kPa，每4～6h进行一次清除附壁物处理，用无菌水补充通气带走的水液，添加消泡剂消泡。

本发明针对解决液体深层发酵生产木霉分生孢子的的关键性技术难题，如菌丝附壁生长和培养基附壁物的清除、生产用培养基配方、生产工艺和发酵装置等，提供一种采用液体深层发酵制备木霉分生孢子的方法和装置。与现有技术相比，本发明提供的液体深层发酵制备木霉分生孢子的装置和方法，具有如下的突出优点：

1)由于发酵罐设有清壁系统，能清除附壁物，因此解决了丝状真菌液体深层发酵尚未根本解决的技术难题，对丝状真菌液体深层发酵工业的发展具有重要的意义；

2)由于设有清壁系统，保证了可以使用高通气量和高罐压，为孢子的形成创造了关键性的氧环境条件，因此不会发生丝状真菌附壁生长和发酵物料挂壁的严重情况；

3)由于磁力驱动搅拌器安装在发酵罐底部，既可防止空气污染，又为清壁器提供了合适的安装部位，而且清壁器选用的循环泵为耐高温的不锈钢隔膜泵，可进行在线灭菌，密封性极好，无空气泄漏污染，扬程高，因此可形成对罐壁挂壁物的高速冲洗效果，可进行工艺过程的自动控制；

4)由于出料管口朝上，出料时向罐内充入无菌压缩空气将料液压出，因此可以避免一般安装在罐底放料时存在的灭菌死角；

5)由于在培养基配制时，革去了人工方法马铃薯去皮，切成小块煮汁过滤的实验室工艺，而使用马铃薯清洗脱皮机对马铃薯进行清洗脱皮，用打浆机打浆过滤去渣，按比例加入葡萄糖后，直接用蒸气加热滤液制成发酵培养基的机械化工艺，使经典的仅适用于生物实验室的培养基配制方法，一步成为适用于工业化生产的机械化工艺，因此工艺简单可行，产孢率高，产孢时间短，成本低；

6)由于采用带清壁器系统的发酵罐、改进的马铃薯葡萄糖培养基及其机械化制备工艺与高罐压大通气量的发酵控制条件(这是本发明提供的液体深层发酵制备木霉分生孢子的方法和装置的三大特点)，保证了液体深层发酵木霉菌丝形成分生孢子的条件，因此发酵周期短，仅5～6天，平均产孢量既高又稳定，可达1.31×10⁸个/ml。

本发明提供的一种采用液体深层发酵制备木霉分生孢子的方法和装置，不但可用于木霉分生孢子的生产，而且可用于一般丝状真菌的液体深层发酵生产，如液体深层发酵生产纤维素酶和厚垣孢子等的生产。

附图说明

图1为本发明实施例的发酵罐结构示意图。

图2为本发明实施例的清壁器结构示意图。

图3为本发明实施例的平板式玻璃液位观察窗结构示意图。

在图1～3中，各标记为：循环泵1，循环液管2，第1连接法兰3，第2连接法兰4，法兰轴承5，清壁器与法兰轴承的法兰相固定螺丝6，液体分布室7，喷液管8，喷头9，底部磁力驱动搅拌器10，出料管11，无菌空气进气管12，无菌空气排气管13，无菌空气分布器14，夹套15，空压机16，发酵罐17，电磁阀18，时间控制器19，视窗式玻璃液位计20。

具体实施方式

以下实施例将结合附图对本发明作进一步的说明。

如图1～3所示，液体深层发酵制备木霉分生孢子的装置设有发酵罐17、空压机16、时间控制器19和电磁阀18。

发酵罐17设有清除附壁物功能的清壁系统、底部磁力驱动搅拌器10、出料管11、无菌空气进气管12、无菌空气排气管13、无菌空气分布器14、夹套15和视窗式玻璃液位计20，清壁系统设有循环泵1、循环液管2、第1连接法兰3、第2连接法兰4、法兰轴承5和清壁器；清壁器设有液体分布室7和至少2个液体喷射器，每个液体喷射器由喷液管8和圆锥形的喷头9组成，液体分布室7的上端口焊有第2连接法兰4，法兰轴承5的内套套在循环液管2出口的外部。清壁器通过清壁器与法兰轴承的法兰相固定螺丝6固定在法兰轴承5上。循环泵1用压缩空气管依次与电磁阀18和空压机16相连，电磁阀18与时间控制器19连接，出料管11设于发酵罐17的底部，无菌空气进气管12穿过发酵罐17并与无菌空气分布器14连接，无菌空气排气管13设于发酵罐17的顶部，无菌空气分布器14设于搅拌器10的下部，夹套15套在发酵罐17外，液位计20设在发酵罐17上。

发酵罐内壁的表面粗糙度为Ra0.42～0.01μm，发酵罐的径高比为1∶(3～4)，以适当增加气泡在发酵液中的路程和接触时间。

出料管11的出料口朝上，循环泵1为不锈钢隔膜泵和不锈钢磁力泵等，采用不锈钢聚四氟乙烯隔膜泵，可进行在线灭菌。液体喷射器沿水平方向均匀安装在液体分布室7靠近底部的外侧。清壁器由圆桶形的液体分布室7和沿水平方向均匀安装在液体分布室7靠近底部的外侧的至少2个液体喷射器组成，安装时使喷头9向下倾斜，与水平方向成45°～60°角，与发酵罐的内壁成45°～60°的入射角，且喷头与发酵罐17的内壁相距1.5～10cm。

当工作时，打开电磁阀18，由压缩空气起动循环泵1，将发酵罐17内的液体吸出，经循环液管2进入液体分布室7，而后经喷液管8、喷头9高速喷出，以45°～60°的入射角喷射到发酵罐17的内壁上，将附在发酵罐17内壁上的附壁物冲洗到发酵液内，高速喷出液的反冲力作用在喷液管8的力臂上，推动喷头9沿水平方向作圆周运动，依次将发酵罐17内壁上的附壁物全部冲洗下来，冲洗的程度及需要连续冲洗的时间，通过视窗式玻璃液位计20即时观察确定。

发酵罐内具有清除附壁物功能的清壁器，既可以是如以上所述，高速喷出液的反冲力，作用在喷液管8的力臂上，推动喷头9沿水平方向作圆周运动式的，在喷头9设置较多时，清壁器也可以是直接固定在循环液管2出口上的固定式，采用固定式时可省去法兰轴承5，在此种情况下，可以达到同样的清壁效果。清壁器的喷头9既可以是圆锥形的，也可以是扇型等。通过清壁器冲洗罐壁上的附壁物的介质，既可以是循环泵1推动的发酵液，也可以是无菌压缩空气直接引入清壁器，推动喷头沿水平方向作圆周运动，通过高速喷出的气流冲洗罐壁上的附壁物。

搅拌器10为底部磁力驱动搅拌器，搅拌器10的桨叶下部为环状的无菌空气分布器14，无菌空气分布器14的气孔朝下，为了避免灭菌的死角，出料管11的出料口朝上，出料时向罐内充无菌空气将料液压出。

以下给出本发明所述采用液体深层发酵制备木霉分生孢子的装置制备木霉分生孢子的具体方法。

本实施例使用的菌种是里氏木霉(Trichoderma reesei)6LZ11A。

1)制备种子的步骤：可采用试管斜面接种培养、三角瓶种子培养或种子罐种子培养的方法制备种子。

所述试管斜面接种培养采用PDA培养基，灭菌接种后，28℃培养7～8天，斜面上可长满绿色的木霉分生孢子。

所述三角瓶种子培养采用发酵培养基，将配好的发酵培养基搅匀，分装入250ml的三角瓶中，每瓶装100ml，灭菌后，用无菌水洗下试管斜面孢子接种，培养温度为28～30℃，摇床转速120rpm，每隔8～12h，用人工方法将附在三角瓶瓶壁上的菌丝摇下，培养48～72h后，即生长成丰满绿色的木霉分生孢子。

所述种子罐种子培养采用发酵培养基，发酵培养基装料为种子罐容量的70％，灭菌冷却后，用三角瓶种子培养的种子接种，接种量为10％～15％，培养条件为28～30℃，搅拌速度为90～120rpm，通气量(V/V)0～12h时，为1∶(0.6～0.8)，12h后，为1∶1，培养时间为32～37h，菌丝体生长达到对数生长期，即得发酵罐用的种子。

所述发酵培养基，按质量百分比的组成为脱皮后的马铃薯8％～16％，葡萄糖0.7％～2％，余为水。

所述发酵培养基的配制方法为：

(1)马铃薯用清洗脱皮机清洗脱皮后，用打浆机打浆，60～120目过滤去渣，滤液一边搅拌，一边蒸气加热80～90℃，至淀粉呈分散于水中的溶胶态悬浮物。

(2)按比例加入葡萄糖，以消泡剂消泡，加水冲稀到100％，调培养基的pH为6～10，得种子培养基。

2)发酵罐生产木霉分生孢子的步骤：采用发酵培养基，发酵培养基装料为发酵罐容量的70％，灭菌冷却后，用种子罐培养的种子接种，在发酵罐中发酵5～7天，得木霉分生孢子。

所述种子接种的接种量为10％～20％；所述在发酵罐中发酵的发酵过程控制为：发酵液的pH6～10，温度28～30℃，搅拌速度80～120rpm，通气量(V/V)，0～6h时，为1∶(0.6～0.8)，36h以后，为1∶(1～1.6)；罐压控制，0～6h时，为80～100kPa，36h以后，为120～180kPa，每4～6h进行一次清除附壁物处理，用无菌水补充通气带走的水液，添加消泡剂消泡。

本发明制备的木霉分生孢子液可用于浅盘固态发酵，生产纤维素酶高速接种器接种，也可用于制备复合微生物肥和生物农药。在纤维素酶的中试中，共成功生产了6批次，所产的木霉分生孢子液都用于浅盘固态发酵生产纤维素酶的接种。本发明所述带有清壁器系统的发酵罐，可用于一般丝状真菌的液体发酵生产，例如生物酶制剂，生物医药、生物有机酸、生物农药等的生产。

Claims (12)

1.液体深层发酵制备木霉分生孢子的装置，其特征在于设有发酵罐、空压机、电磁阀和时间控制器；

发酵罐设有清除附壁物功能的清壁系统、搅拌器、出料管、无菌空气进气管、无菌空气排气管、无菌空气分布器、夹套和液位计；清壁系统设有循环泵、循环液管、法兰轴承和清壁器；清壁器设有液体分布室和至少2个液体喷射器，每个液体喷射器由喷液管和圆锥形的喷头组成；法兰轴承的内套套在循环液管出口的外部，液体分布室的上端口设有连接法兰，清壁器固定在法兰轴承上，循环泵用压缩空气管依次与电磁阀和空压机相连，电磁阀与时间控制器连接，出料管设于发酵罐的底部，无菌空气进气管穿过发酵罐并与无菌空气分布器连接，无菌空气排气管设于发酵罐的顶部，无菌空气分布器设于搅拌器的下部，夹套套在发酵罐外，液位计设在发酵罐上。

2.如权利要求1所述的液体深层发酵制备木霉分生孢子的装置，其特征在于发酵罐内壁的表面粗糙度为Ra0.42～0.01μm，发酵罐的径高比为1∶3～4。

3.如权利要求1所述的液体深层发酵制备木霉分生孢子的装置，其特征在于所述出料管的出料口朝上。

4.如权利要求1所述的液体深层发酵制备木霉分生孢子的装置，其特征在于所述液体喷射器沿水平方向均匀安装在液体分布室靠近底部的外侧；所述喷头向下倾斜，喷头与水平方向成45°～60°角，喷头与发酵罐的内壁成45°～60°的入射角，喷头与发酵罐的内壁相距1.5～10cm。

5.如权利要求1所述的液体深层发酵制备木霉分生孢子的装置，其特征在于所述清壁器通过螺丝固定在法兰轴承上；所述液体分布室为圆桶形液体分布室。

6.一种液态深层发酵制备木霉分生孢子的方法，采用如权利要求1～5任意一种所述液体深层发酵制备木霉分生孢子的装置，其特征在于包括以下步骤：

1)制备种子的步骤，所述制备种子采用试管斜面接种培养、三角瓶种子培养或种子罐种子培养的方法制备种子；

2)发酵罐生产木霉分生孢子的步骤：采用发酵培养基，发酵培养基装料为发酵罐容量的70％，灭菌冷却后，用步骤1)制备的种子接种，在发酵罐中发酵5～7天，得木霉分生孢子；所述发酵培养基按质量百分比的组成为脱皮后的马铃薯8％～16％，葡萄糖0.7％～2％，余为水。

7.如权利要求6所述的一种液态深层发酵制备木霉分生孢子的方法，其特征在于所述试管斜面接种培养采用PDA培养基，灭菌接种后，28℃培养7～8天，斜面上长满绿色的木霉分生孢子。

8.如权利要求6所述的一种液态深层发酵制备木霉分生孢子的方法，其特征在于所述三角瓶种子培养采用发酵培养基，将配好的发酵培养基搅匀，分装入250ml的三角瓶中，每瓶装100ml，灭菌后，用无菌水洗下试管斜面孢子接种，培养温度为28～30℃，摇床转速120rpm，每隔8～12h，用人工方法将附在三角瓶瓶壁上的菌丝摇下，培养48～72h后，即生长成丰满绿色的木霉分生孢子。

9.如权利要求6所述的一种液态深层发酵制备木霉分生孢子的方法，其特征在于所述种子罐种子培养，采用发酵培养基，发酵培养基装料为种子罐容量的70％，灭菌冷却后，用三角瓶种子培养的种子接种，接种量为10％～15％，培养条件为28～30℃，搅拌速度为90～120rpm，通气量(V/V)0～12h时，为1∶0.6～0.8，12h后，为1∶1，培养时间为32～37h，菌丝体生长达到对数生长期，即得发酵罐用的种子；所述发酵培养基按质量百分比的组成为脱皮后的马铃薯8％～16％，葡萄糖0.7％～2％，余为水。

10.如权利要求6或9所述的一种液态深层发酵制备木霉分生孢子的方法，其特征在于所述发酵培养基的配制方法包括以下步骤：

1)马铃薯用清洗脱皮机清洗脱皮后，用打浆机打浆，60～120目过滤去渣，滤液一边搅拌一边蒸气加热，至淀粉呈分散于水中的溶胶态悬浮物，所述加热的温度为80～90℃；

2)按比例加入葡萄糖，以消泡剂消泡，加水冲稀到100％，调培养基的pH为6～10，得发酵培养基。

11.如权利要求6所述的一种液态深层发酵制备木霉分生孢子的方法，其特征在于在步骤2)中，所述种子接种的接种量为10％～20％。

12.如权利要求6所述的一种液态深层发酵制备木霉分生孢子的方法，其特征在于在步骤2)中，所述在发酵罐中发酵的发酵过程控制为：发酵液的pH6～10，温度28～30℃，搅拌速度80～120rpm，通气量(V/V)，0～6h时，为1∶0.6～0.8，36h以后，为1∶1～1.6；罐压控制，0～6h时，为80～100kPa，36h以后，为120～180kPa，每4～6h进行一次清除附壁物处理，用无菌水补充通气带走的水液，添加消泡剂消泡。

Images