CN101650303A - 一种蒽酮比色法测定人参总皂苷的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种蒽酮比色法测定人参总皂苷的方法，通过对样品进行提取、上柱、洗涤、洗脱，然后向样品和标准品加入蒽酮显色剂后进行显色并在分光光度计下测定其吸光度，通过计算得到样品的人参总皂苷含量。本发明的方法具有测定速度快、显色稳定、重复性好、准确度高、相对误差小等优点，可广泛用于各类参类产品的测定。

Description

一种蒽酮比色法测定人参总皂苷的方法

【技术领域】

本发明属于人参总皂苷定量技术领域，更具体地，本发明涉及蒽酮比色法测定人参总皂苷的方法。

【技术背景】

人参皂苷是人参和西洋参中主要活性成分，是食品、保健品、药品的主要原料，对于这类产品的质量控制，人参总皂苷含量是必测的指标。人参和西洋参为五加科植物，早在东汉《神农本草经》已将人参列为上品，距今已有1600年的历史，西洋参于十八世纪在我国开始栽培利用已有200多年历史。根据2005版《中国药典》记载，它们能治疗体虚欲脱，肢冷脉弱，肺虚喘咳，津伤口渴，内热消渴，久病虚羸，惊悸失眠，阳痿宫冷，心力衰竭等。

目前测定人参皂苷单一成分如Re、Rb₁、Rb₂、Rc、Rg₁等有薄层扫描和高效液相色谱法，而测定人参总皂苷则大多采用人参皂苷Re为标准品，香草醛(香兰素)比色法测定，其原理是在酸性条件下将人参皂苷分子水解为苷元和糖基，即：

通过香草醛与苷元反应生成紫红色化合物，其颜色深浅与含量呈正比，用分光光度计或紫外可见光光度计在波长560nm处测定吸光度，计算人参总皂苷含量。由于香草醛显色体系不同，常有香草醛-冰醋酸-高氯酸、香草醛-乙醇-硫酸、香草醛-冰醋酸-硫酸等。但是，香草醛显色体系不稳定，测定结果重复性差，误差大，各实验室间测定误差达4-5倍，甚至有的更高。该方法一直沿用至今而没有改变。

为了解决现有技术的不利之处，本发明人经过多次试验，研究出本发明方法。此外，国内外尚未有采用本发明方法测定人参总皂苷的报道。

【发明内容】

[要解决的技术问题]

本发明的目的是提供一种蒽酮比色法测定人参总皂苷的方法，该方法具有测定速度快、重复性好、误差小等优点。

[技术方案]

本发明的原理是在酸性条件下将人参皂苷分子水解为苷元和糖基后，通过蒽酮和糖基反应生成蓝绿色化合物，其颜色深浅与含量呈正比，用分光光度计或紫外可见分光光计在波长590nm处测定吸光度，根据吸光度值确定人参总皂苷的含量。

本发明是通过下述技术方案实现的：

一种蒽酮比色法测定人参总皂苷的方法，该方法的步骤如下：

(1)玻璃层析柱制备

该玻璃层析柱由15mm×120mm玻璃柱、柱底有砂芯隔板与控制流速的柱活塞组成，柱内装5-10g大孔吸附树脂，在大孔吸附树脂上覆盖1-3g中性氧化铝，在柱装好后先用25ml 70％(V/V)乙醇水溶液洗柱，然后用25ml蒸馏水洗去保留在柱内的乙醇，使柱内大孔吸附树脂达到平衡；

(2)样品纯化

含有人参总皂苷的液体样品，用干滤纸过滤得到滤液，取所述滤液1-2ml置于大孔吸附树脂玻璃层析柱中，先用40-50ml蒸馏水进行洗涤，随后用25-30ml的20-30％(V/V)乙醇水溶液洗涤，再用25-30ml的70-80％(V/V)乙醇水溶液洗脱，洗脱液用蒸发皿收集，然后在沸水浴中蒸干，得到纯化样品；

(3)标准样品制备

取人参皂苷Re和蒸馏水以10-200μg/ml比例置于100ml容量瓶中，混合、溶解并定溶至刻度，取1-2ml所得溶液置于所述大孔吸附树脂玻璃层析柱上，先用40-50ml蒸馏水洗涤，随后用25-30ml的20-30％(V/V)乙醇水溶液洗涤，再用25-30ml的70-80％(V/V)乙醇水溶液洗脱，洗脱液用蒸发皿收集，然后在沸水浴中蒸干，得到标准样品；

(4)显色步骤

将步骤(2)得到的纯化样品和步骤(3)得到的标准样品分别加入2ml蒸馏水；另取一个蒸发皿加入2ml蒸馏水作试剂空白；将0.1-0.3g蒽酮试剂溶于100ml 95-98％(重量)浓硫酸中得到蒽酮显色剂，分别向上述三个蒸发皿加入6ml所述的蒽酮显色剂，放在水浴上加热，此时溶液显蓝绿色；

(5)吸光度测定步骤

让步骤(4)得到的样品、标准样品和试剂空白溶液降至室温，用分光光度计或紫外可见光分光光度计在波长580-620nm处以空白校零，分别测定样品和标准品的吸光度；

(6)人参总皂苷的计算步骤

在步骤(5)测定得到的样品和标准样品的吸光度，按照下述公式计算样品中的人参总皂苷含量：

式中：

C-样品吸光度相当于标准品的含量，单位为μg；C＝标准品含量×样品的吸光度÷标准品的吸光度

V₂-样品滤液总体积(ml)；

V₁-样品上柱体积(ml)；

m-样品质量(g)或样品体积(ml)。

根据一种本发明的优选实施方式，使用酚硫酸试剂作为显色剂，在波长480-500nm处测定其吸光度。

所述的液体样品为含参类酒类样品时采用下述方法处理后进行测定：把该酒样置于瓷蒸发皿中，用沸水浴蒸干，该残留物用蒸馏水转移至50ml容量瓶中，摇匀并定容至刻度，用干滤纸过滤得到滤液，再进行测定。

所述的液体样品为含参类的非酒类液体时，用干滤纸过滤得到的滤液进行测定。

所述的样品为含参类的固体时，将精确称取的80目以上人参或西洋参粉末、含参粉剂、胶囊剂或颗粒剂置于50ml容量瓶中，加蒸馏水40ml，超声波提取10-20min，置于室温下，摇匀并定容至刻度，用干滤纸过滤得到滤液，再进行测定。

根据本发明的一种优选实施方案，所述水浴温度是90-100℃。

根据本发明的另一种优选实施方案，所述玻璃层析柱平衡、洗涤和洗脱时将流速控制在2-3ml/min。

根据本发明的另一种优选实施方案，所述的大孔吸附树脂是AmberliteXAD-2大孔吸附树脂或D101大孔吸附树脂。

根据本发明的另一种优选实施方案，所述固体样品提取溶剂还可以是70％(V/V)乙醇水溶液或50％(V/V)甲醇水溶液。

下面更详细地说明本发明。

一种蒽酮比色法测定人参总皂苷的方法，该方法的步骤如下：

(1)玻璃层析柱制备

该玻璃层析柱由15mm×120mm玻璃柱、柱底有砂芯隔板与控制流速的柱活塞组成，柱内装5-10g大孔吸附树脂，在大孔吸附树脂上覆盖1-3g中性氧化铝，在柱装好后先用25ml 70％(V/V)乙醇水溶液洗涤，然后用25ml蒸馏水洗去保留在柱内的乙醇，使柱内大孔吸附树脂达到平衡；

大孔吸附树脂是一种不溶于酸、碱及各种有机溶剂的有机高分子聚合物，大孔吸附树脂的孔径与比表面积都比较大，在树脂内部具有三维空间立体孔结构，具有物理化学稳定性高、比表面积大、吸附容量大、选择性好、吸附速度快、解吸条件温和、再生处理方便、使用周期长等诸多优点，是分离中草药水溶性成分的一种有效方法。

在本发明中，所述的大孔吸附树脂可以是Sigma公司销售的AmberliteXAD-2或天津南开大学化工厂生产的大孔吸附树脂D101。

色谱用的氧化铝可分酸性、中性和碱性三种。酸性氧化铝pH约为4-4.5，用于分离羧酸、氨基酸等酸性物质；中性氧化铝pH值为7.5，用于分离中性物质，应用最广；碱性氧化铝pH为9-10，用于分离生物碱、胺和其它碱性化合物等。本发明使用的中性氧化铝是国药集团化学试剂有限公司销售的产品。

(2)样品纯化

含有人参总皂苷的液体样品，用干滤纸过滤得到滤液，取所述滤液1-2ml置于上述制备的大孔吸附树脂玻璃层析柱中，先以2-3ml/min速度用40-50ml蒸馏水进行洗涤，洗去该样品中的水溶性杂质，含有水溶性杂质的洗脱液弃去；随后水洗涤的样品再以同样的速度用25-30ml的20-30％(V/V)乙醇水溶液洗涤，洗去该样品中存在的低脂溶性杂质，含有低脂溶性杂质的洗脱液弃去；除去低脂溶性杂质的样品再用25-30ml的70-80％(V/V)乙醇水溶液洗脱吸附在柱体内的人参总皂苷，得到的洗脱液收集在蒸发皿中，然后在沸水浴中蒸干，这样得到了纯化样品。

人参皂苷(Ginsenoside)是一种固醇类化合物的三萜皂苷。它们只是在人参属植物中可见到。人参皂苷被视为是人参中的活性成分，因而成为研究的目标。人参皂苷都具有相似的基本结构，都含有由17个碳原子排列成四个环的gonane类固醇核。它们依糖苷基(苷元，Genin)架构的不同而被分为三组：达玛烷型(Damumarane)、齐墩果烷型(Oleanane)和奥克梯龙型(Ocotillol)。达玛烷类型包括两类：人参二醇类和人参三醇类。人参二醇类包含了最多的人参皂苷，如人参皂苷Rb₁、Rb₂、Rb₃、Rc、Rd、Rg₃、Rh₂及糖苷基PD；人参三醇类包含了人参皂苷Re、Rg₁、Rg₂、Rh₁及糖苷基PT。奥克梯龙型主要是西洋参皂苷F₁₁。

本发明的方法是测定人参总皂苷。

(3)标准样品制备

取人参皂苷Re和蒸馏水以10-200μg/ml比例置于100ml容量瓶中，混合、溶解并定溶至刻度，得到人参皂苷标准样品。然后，取1-2ml所述人参皂苷标准样品溶液置于上述制备的大孔吸附树脂玻璃层析柱上，先用40-50ml蒸馏水洗涤，然后用25-30ml的70-80％(V/V)乙醇水溶液洗脱，洗脱液用蒸发皿收集，然后在沸水浴中蒸干，得到标准样品；

(4)显色步骤

将步骤(2)得到的纯化样品和步骤(3)得到的标准样品分别加入2ml蒸馏水；另取一个蒸发皿加入2ml蒸馏水作试剂空白；

准确称取0.1-0.3g蒽酮试剂，将其蒽酮试剂溶于100ml 95-98％(重量)浓硫酸中得到蒽酮显色剂；

然后分别向上述三个蒸发皿加入6ml所述的蒽酮显色剂，放在水浴上加热，所述水浴的优选温度是90-100℃，加热5-15min，此时溶液显蓝绿色。

(5)吸光度测定步骤

让步骤(4)得到的样品、标准样品和试剂空白溶液降至室温，用分光光度计或紫外可见光分光光度计在波长580-620nm处以空白校零，分别测定样品和标准品的吸光度；

所述的分光光度计或紫外可见光分光光度计都是本技术领域中普遍使用的分析仪器，在本发明中例如使用天津喀纳斯光学分析仪器有限公司销售的721型分光光度计，756型紫外可见光分光光度计。

吸光度的具体测定方法是本技术领域的技术人员所熟知的，或者按照所述的分光光度计或紫外可见光分光光度计说明书进行操作。

(6)人参总皂苷的计算步骤

在步骤(5)测定得到的样品和标准样品的吸光度，按照下述公式计算样品中的人参总皂苷含量：

式中：

C-样品吸光度相当于标准品的含量，单位为μg；C＝标准品含量×样品的吸光度÷标准品的吸光度

V₂-样品滤液总体积(ml)；

V₁-样品上柱体积(ml)；

m-样品质量(g)或样品体积(ml)。

误差分析：按照本步骤选取任何一个测试样品进行称样、提取、上柱、洗涤、洗脱、显色、测定吸光度、计算含量，重复测定6次，RSD＜5％。

根据一种本发明的优选实施方式，使用酚硫酸试剂作为显色剂，结合物为黄色，在波长480-500nm处测定其吸光度。使用酚硫酸试剂显色剂在方法原理与实施步骤方面与使用蒽酮显色剂相同，只是测定波长不相同，蒽酮显色剂为580-620nm，而酚硫酸显色剂为480-500nm。在本发明的条件下，蒽酮显色剂使用量为6ml，而酚硫酸试剂也为6ml。酚硫酸试剂包括1ml苯酚试剂(将3-5g苯酚溶于100ml蒸馏水中)，5ml浓硫酸，混合均匀得到所述的显色剂。

所述的液体样品为含参类酒类样品时采用下述方法处理后进行测定：把该酒样置于瓷蒸发皿中，用沸水浴蒸干，该残留物用蒸馏水转移至50ml容量瓶中，摇匀并定容至刻度，用干滤纸过滤得到滤液，再进行测定。

所述的液体样品为含参类的非酒类液体时，用干滤纸过滤得到的滤液进行测定。

所述的样品为含参类的固体时，将精确称取的80目以上人参或西洋参粉末、含参粉剂、胶囊剂或颗粒剂置于50ml容量瓶中，加蒸馏水40ml，超声波提取10-20min，置于室温下，摇匀并定容至刻度，用干滤纸过滤得到滤液，再进行测定。

根据本发明的一种优选实施方案，所述水浴温度是90-100℃。

根据本发明的另一种优选实施方案，所述玻璃层析柱平衡、洗涤和洗脱时将流速控制在2-3ml/min。

[有益效果]

采用本发明方法及步骤测定人参总皂苷，具有测定速度快、显色稳定、重复性好、准确度高，各实验室间的测定相对误差(RSD)小于5％，可广泛用于各类参类产品的测定。

【具体实施方式】

下面结合实施例对本发明做进一步说明。

实施例1：

某含参类酒的人参总皂苷测定：

精确吸取该酒样5ml于100ml瓷蒸发皿中，在沸水浴中蒸干，挥发去除乙醇，用蒸馏水转移至50ml容量瓶中，并定溶至刻度，摇匀，干滤纸过滤，精确吸取滤液1ml上柱，样品上柱后，先用50ml蒸馏水洗涤杂质，再用25ml 20％(V/V)的乙醇水溶液洗涤杂质，洗去杂质后，用25ml 70％(V/V)乙醇洗脱吸附在柱上的人参总皂苷，用100ml瓷蒸发皿接收洗脱液，在沸水浴中蒸干，同时，精确吸取100μg/ml由中国药品生物制品检定所销售的人参皂苷Re标准品1ml，按照与上述样品上柱、洗涤、洗脱、收集、蒸干同样方式进行。向蒸干的样品和标准品中分别准确加入2ml蒸馏水，将蒸干的人参总皂苷荡入底部。另取一只洁净的100ml瓷蒸发皿，同样加入2ml蒸馏水作为试剂空白。再分别向样品、标准品、试剂空白中准确加入本发明制备的6ml 0.2％(g/L)蒽酮显色剂，在90℃水浴上加热15min，放至室温，用天津喀纳斯光学分析仪器有限公司销售的721型分光光度计，在波长590nm处以空白校零，再分别测定样品和标准品吸光度，若测得样品的吸光度为0.421，标准品吸光度0.325，则：

误差：在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算数平均值的10％。

实施例2：

某含参类非酒类口服液的人参总皂苷测定：

先将样品用干滤纸过滤，精确吸取滤液5ml至100ml容量瓶中，加蒸馏水定溶至刻度，摇匀，精确吸取稀释后的滤液1.5ml上柱，先用40ml蒸馏水洗涤杂质，再用25ml 30％(V/V)的乙醇水溶液洗涤杂质，洗去杂质后，用25ml 80％(V/V)乙醇水溶液洗脱吸附在柱上的人参总皂苷，用100ml瓷蒸发皿接收洗脱液，在沸水浴中蒸干。同时，精确吸取150μg/ml由中国药品生物制品检定所销售的人参皂苷Re标准品1ml按照与上述样品上柱、洗涤、洗脱、收集、蒸干同样方式进行。向蒸干的样品和标准品中分别准确加入2ml蒸馏水，将蒸干的人参总皂苷荡入底部。另取一只洁净的100ml瓷蒸发皿，同样加入2ml蒸馏水作为试剂空白。再分别向样品、标准品、试剂空白准确加入本发明制备的6ml 0.3％(g/L)蒽酮显色剂，在沸水浴上加热10min，再放至室温，用天津喀纳斯光学分析仪器有限公司销售的756型紫外可见光分光光度计型在波长595nm处以空白校零，再分别测定样品和标准品吸光度，若样品的吸光度为0.415，标准品吸光度0.395，

误差：在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算数平均值的10％。

实施例3

参类块根的人参总皂苷测定：

先用粉碎机将其粉碎通过80目筛孔，人们知道这类产品含人参总皂苷一般约为3000-5000mg/100g，因此，精确称取通过80目的粉碎粉0.5g，于100ml容量瓶中，加蒸馏水约50ml，超声提取20min，放至室温，并定溶至刻度，摇匀，干滤纸过滤，精确吸取1ml滤液上柱，先用45ml蒸馏水洗涤杂质，再用30ml 20％(V/V)乙醇水溶液洗涤杂质，洗去杂质后，用30ml70％(V/V)乙醇洗水溶液脱吸附柱上的人参总皂苷，用100ml瓷蒸发皿接收洗脱液，在沸水浴中蒸干。同时，精确吸取200μg/ml(g/V)由中国药品生物制品检定所销售的人参皂苷Re标准品1ml，按照与上述样品上柱、洗涤、洗脱、收集、蒸干同样方式进行。向蒸干的样品和标准品中分别准确加入2ml蒸馏水，将蒸干的人参总皂苷荡入底部。另取一只洁净的100ml瓷蒸发皿，同样加入2ml蒸馏水作为试剂空白。再分别向样品、标准品、试剂空白准确加入本发明制备的6ml 0.1％(g/L)蒽酮显色剂，沸水浴上加热10min，用天津喀纳斯光学分析仪器有限公司销售的721型紫外可见光分光光度计在波长580nm处以空白校零，再分别测定样品和标准品吸光度，若样品的吸光度为0.725，标准品吸光度0.688，

误差：在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算数平均值的10％。

实施例4：

某含参类颗粒剂的人参总皂苷测定：

精确称取样品1g至100ml容量瓶中，加50％(V/V)甲醇约50ml，超声波提取15min，放至室温，用50％(V/V)甲醇水溶液定溶至刻度，摇匀，干滤纸过滤，精确吸取5ml滤液，于100ml瓷蒸发皿中，在沸水浴中蒸干，挥发去除甲醇，因为甲醇存在，人参总皂苷不易被大孔吸附树脂和中性氧化铝吸附，达不到纯化样品的目的。蒸干残留物用蒸馏水转移至50ml容量瓶中，并定溶至刻度，摇匀，准确吸取1ml滤液上柱，先用50ml蒸馏水洗涤杂质，再用25ml 20％(V/V)乙醇洗涤杂质，洗去杂质后，用30ml 70％(V/V)乙醇水溶液洗脱吸附在柱上的人参总皂苷，用100ml瓷蒸发皿接收洗脱液，在沸水浴中蒸干。同时，精确吸取50μg/ml(g/V)由中国药品生物制品检定所销售的人参皂苷Re标准品2ml，按照与上述样品上柱、洗涤、洗脱、收集、蒸干同样方式进行。向蒸干的样品和标准品中分别准确加入2ml蒸馏水。将蒸干的人参总皂苷荡入底部。另取一只洁净的100ml瓷蒸发皿，同样加入2ml蒸馏水作为试剂空白。再分别向样品、标准品、试剂空白准确加入6ml 0.2％(g/L)蒽酮显色剂，用沸水浴加热10min，用天津喀纳斯光学分析仪器有限公司销售的721型紫外可见光分光光度计在波长620nm处以空白校零，再分别测定样品和标准品吸光度，若样品的吸光度为0.245，标准品吸光度0.310，则：

误差：在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算数平均值的10％。

通过以上实施例可以测定发现，本发明的方法远远优于现有的香草醛比色法，具体表现为：

1、其线性范围宽，相关性好，在5-200μg/ml范围内呈直线回归，其回归方程y＝0.369+0.994X，相关系数r＝0.9995；

2、稳定性好，显色后的标准品和样品在10min、20min、30min、40min、50min、60min吸光度基本不变；

3、精密度(重复性)好。通过称取6份样品，按发明的方法经过提取、上柱、洗涤、洗脱、显色、测定吸光度，其吸光度值分别为0.424、0.401、0.437、0.393、0.448、0.419，具有较高的精密度，重复性好，误差小，RSD为4.99％；

4、回收率(准确度)高，按照发明方法制备3种不同浓度样品本底，再分别加入3种不同浓度的人参皂苷Re标准品，每种浓度重复3次，共9个样本，其回收率为91.3-103.4％；

5、可测定多种参类产品，按照发明方法，测定了超细西洋参胶囊、青春宝永真片、康富来洋参含片、万基洋参胶囊、金日心源素胶囊、洋参切片7种不同类型参类产品，均取得了令人满意的效果；

6、该发明各实验室间测定误差小，按照本发明，利用同一样品经无锡、南京、上海多家质检、卫检、商检进行测定，经统计RSD＜5％。

Claims (9)

1、一种蒽酮比色法测定人参总皂苷的方法，其特征在于该方法的步骤如下：

(1)玻璃层析柱制备

该玻璃层析柱由15mm×120mm玻璃柱、柱底有砂芯隔板与控制流速的柱活塞组成，柱内装5-10g大孔吸附树脂，在大孔吸附树脂上覆盖1-3g中性氧化铝，在柱装好后，先用25ml 70％(V/V)乙醇水溶液洗柱，然后用25ml蒸馏水洗去保留在柱内的乙醇，使柱内大孔吸附树脂达到平衡；

(2)样品纯化

含有人参总皂苷的液体样品，用干滤纸过滤得到滤液，取所述滤液1-2ml置于大孔吸附树脂玻璃层析柱上，先用40-50ml蒸馏水进行洗涤，随后用25-30ml的20-30％(V/V)乙醇水溶液洗涤，再用25-30ml的70-80％(V/V)乙醇水溶液洗脱，洗脱液用蒸发皿收集，然后在沸水浴中蒸干，得到纯化样品；

(3)标准样品制备

取人参皂苷Re和蒸馏水以10-200μg/ml比例置于100ml容量瓶中，混合、溶解并定溶至刻度，取1-2ml所得溶液置于所述大孔吸附树脂玻璃层析柱上，先用40-50ml蒸馏水洗涤，随后用25-30ml的20-30％(V/V)乙醇水溶液洗涤，再用25-30ml的70-80％(V/V)乙醇水溶液洗脱，洗脱液用蒸发皿收集，然后在沸水浴中蒸干，得到标准样品；

(4)显色步骤

将步骤(2)得到的纯化样品和步骤(3)得到的标准样品分别加入2ml蒸馏水；另取一个蒸发皿加入2ml蒸馏水作试剂空白；将0.1-0.3g蒽酮试剂溶于100ml 95-98％(重量)浓硫酸中得到蒽酮显色剂，分别向上述三个蒸发皿加入6ml所述的蒽酮显色剂，放在水浴上加热，此时溶液显蓝绿色；

(5)吸光度测定步骤

让步骤(4)得到的样品、标准样品和试剂空白溶液降至室温，用分光光度计或紫外可见光分光光度计在波长580-620nm处以空白校零，分别测定样品和标准品的吸光度；

(6)人参总皂苷的计算步骤

在步骤(5)测定得到的样品和标准样品的吸光度，按照下述公式计算样品中的人参总皂苷含量：

式中：

C-样品吸光度相当于标准品的含量，单位为μg；C＝标准品含量×样品的吸光度÷标准品的吸光度

V₂-样品滤波总体积(ml)；

V₁-样品上柱体积(ml)；

m-样品质量(g)或样品体积(ml)。

2、根据权利要求1所述的方法，其特征在于使用酚硫酸试剂作为显色剂，在波长480-500nm处测定其吸光度。

3、根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述的液体样品为含参类酒类样品时采用下述方法处理后进行测定：把该酒样置于瓷蒸发皿中，用沸水浴蒸干，该残留物用蒸馏水转移至50ml容量瓶中，摇匀并定容至刻度，用干滤纸过滤得到滤液，再进行测定。

4、根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述的液体样品为含参类的非酒类液体时，用干滤纸过滤得到的滤液进行测定。

5、根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述的样品为含参类的固体时，将精确称取的80目以上人参或西洋参粉末、含参粉剂、胶囊剂或颗粒剂置于50ml容量瓶中，加蒸馏水40ml，超声波提取10-20min，置于室温下，摇匀并定容至刻度，用干滤纸过滤得到滤液，再进行测定。

6、根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于步骤(4)所述水浴温度是90-100℃，显色加热时间为5-15min，显色后的测定时间为10-60min。

7、根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述玻璃层析柱平衡、洗涤和洗脱时将流速控制在2-3ml/min。

8、根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述的大孔吸附树脂是Amberlite XAD-2大孔吸附树脂或D101大孔吸附树脂。

9、根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述固体样品提取溶剂是70％(V/V)乙醇水溶液或50％(V/V)甲醇水溶液。