CN101647821A - 一种动物药仿生酶解产物及其用途 - Google Patents
一种动物药仿生酶解产物及其用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101647821A CN101647821A CN200810118149A CN200810118149A CN101647821A CN 101647821 A CN101647821 A CN 101647821A CN 200810118149 A CN200810118149 A CN 200810118149A CN 200810118149 A CN200810118149 A CN 200810118149A CN 101647821 A CN101647821 A CN 101647821A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- animal
- enzymolysis
- add
- enzymatic hydrolysate
- medicaments
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种动物药的仿生酶解产物及其在眼科疾病中的应用，属于中药领域。其技术方案是采用仿生酶解的方法，取动物药，加水匀浆后，在适当的条件下，先以胃蛋白酶保温酶解，再以胰酶或胰蛋白酶保温酶解。所得的仿生酶解物产物较目前现有技术的产物具有更强的生物活性，在眼科应用中对各种眼科炎症、青光眼及干眼症等具有较好的治疗效果。
Description
技术领域
本发明涉及一种动物药的仿生酶解产物及其在眼科疾病中的应用，属于中药领域。
背景技术
动物药作为传统中药，临床应用很广泛，在入药的方式上通常采用原药材粉碎后直接服用，或水提或醇提或水提醇沉后服用，其所采取的提取方法比较传统。现在研究表明，小分子的寡肽类物质和氨基酸是很容易被小肠吸收的，而大分子的蛋白类在小肠里很难被吸收。传统的原粉直接服用，原药粉中大分子蛋白，只有少量在体内经过胃肠道的分解，变成小分子的寡肽而被吸收，由于药材粉碎的细度、胃肠道pH的变化造成水解的不完成，有效成分被吸收利用的少，造成大量药材的浪费疗效大大降低。水提、水提醇沉的提取工艺使得有大部分不溶入水、醇的蛋白被滤过除去，造成大量的药材浪费，疗效同样大大降低。
随着人们对动物药的认识深入，有人从动物药中提取的单一的蛋白制成制剂，但制成口服制剂，由于经过胃肠道，容易被胃酶、胰酶酶解掉，其活性损失；若制成注射液，由于大分子的蛋白类容易引起免疫原性，存在一定的安全隐患。
应用酶解法水解动物蛋白，获得具有一定生理活性的生物活性肽是目前国内外研究的热点。由于不同的酶水解的部位不一样，得到的酶解产物也大不相同，比如胃蛋白酶主要酶解的部位为苯丙氨酸、酪氨酸和亮氨酸组成的肽键，胰蛋白酶主要酶解的部位为精氨酸、赖氨酸等碱性氨基酸组成的肽键，用单一的胃蛋白酶、胰酶或其他蛋白酶来酶解，均不能使蛋白被有效的吸收利用，这样就迫切的需要一种新的酶解方法——在动物或人体生物进化过程中已被证实、疗效确切的、模拟人体的消化过程的仿生酶解方法，将动物药中有效成分更容易吸收，更加安全的利用，同时更加充分利用原药材。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种更有效的、安全的动物药仿生酶解产物，该仿生酶解产物是动物药经过仿生酶解而得到的。
第二目的是提供该仿生酶解产物在治疗各种眼科炎症、青光眼及干眼症等眼科疾病方面的应用。
具体的说：
本发明主要涉及一种动物药仿生酶解产物，该仿生酶解产物是按以下方法制备的：
取动物药，加水匀浆，调节pH至1.0～3.0，加入胃蛋白酶于35～45℃保温酶解0.5～4小时，调节pH至7.5～8.5，加入胰酶或胰蛋白酶于40～50℃保温酶解2～8小时。
进一步优选，该提取物按以下方法制备：
取动物药，加水匀浆，调节pH至1.5～2.5，加入动物药量0.5～5％的胃蛋白酶于35～45℃保温酶解1～3小时，再调节pH至7.5～8.5，加入动物药量0.5～5％的胰酶或胰蛋白酶于40～50℃保温酶解3～6小时，即得。
再优选，该酶解产物按以下方法制备：
取动物药，加水匀浆，调节pH至2.0，加入动物药量1～2％的胃蛋白酶于40℃保温酶解1～3小时，再调节pH至8.0，加入动物药量1～2％的胰酶或胰蛋白酶于50℃保温酶解3～6小时，即得。
发明人经过试验筛选，动物药药材加水匀浆后，可预先加热至80～100℃，保温15～30分钟，再放冷至酶解所需温度，按以上操作酶解，其效果更强。按本发明技术方案进行酶解，当胃蛋白酶的酶活力达到1200U/g，胰蛋白酶的酶活力达到2500U/mg，胰酶的酪蛋白转化力达到25.0时，效果较为充分；酶活力越高，酶解速度越快、效果越好。按本发明的方法操作，动物药的抗凝血、活血、抗炎等活性大大增强，优于以往常用的动物药原粉、水提液、醇提液及水提醇沉液。
本发明中的动物药选自水蛭、地龙、土鳖虫、全蝎、蜈蚣、蝉蜕、僵蚕等，其均具有活血化瘀功效，并具有坚实的临床应用基础。
本领域技术人员可以方便地将本发明的仿生酶解产物配合适当的药用辅料，制备成滴眼液、眼用凝胶、眼用即型凝胶、眼膏、眼用膜剂等各种眼用常规制剂，如：
a、将酶解液加热至85℃杀酶后，滤过，滤液以超滤膜超滤，分取截留分子量10kD以下的溶液，可加入等渗调节剂、pH调节剂、抑菌剂等制成滴眼液。
b、将酶解液滤过，滤液以超滤膜超滤，截留分子量10kD以下的溶液，或滤液直接加卡波姆、壳聚糖、羟丙基甲基纤维素等眼用制剂常规辅料，制成眼用凝胶剂。
c、将酶解液滤过，滤液以超滤膜超滤，截留分子量10kD以下的溶液，加入结冷胶、泊洛沙姆等眼用制剂常规辅料，制成眼用即型凝胶剂。
本发明提供的动物药仿生酶解产物可以单独使用，也可以与其他药物成分联合使用，即：在药物活性成分中，可以只有该产物，还可以是其与其他药物的混合物，达到配合治疗、辅助治疗的目的。
本发明中的动物药仿生酶解产物，针对其活血化瘀的作用可以用于治疗各种眼科炎症，如结膜炎、角膜炎、沙眼、眼睑炎、睑缘炎、巩膜炎、角膜溃疡等，也可以用于治疗青光眼及干眼症等眼科疾病。
有益效果
为进一步验证本发明产物相对于现有技术的进步效果，发明人进行了动物药效学的对比实验，实验中的“仿生酶解组”即为按本发明技术方案制得的动物药酶解产物。
试验一、体外抗凝血活性试验(全蝎)
试验材料
胃蛋白酶，购自国药集团化学试剂有限公司，批号：F20070914；胰蛋白酶，购自国药集团化学试剂有限公司，批号：F20071228；胰酶，购自国药集团化学试剂有限公司，批号：F20071025；牛纤维蛋白原，供凝血酶效价测定用，购自中检所，批号：140626-200608；凝血酶，购自珠海经济开发区生物化学制药厂，批号：20071101。
试验动物
Wister大鼠，购自北京大学实验动物科学部。
供试样品的制备
未酶解组：取全蝎药材细粉(80目)50g，加入10倍量生理盐水，匀浆30分钟，搅匀，取1/4量，微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得；
胃蛋白酶酶解组：取1/4匀浆液，加入1％胃蛋白酶(酶活力为1200U/g)，同时调节pH至2，温度为40℃±2℃，保温同时搅拌酶解4h，85℃保温20min，放冷，微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得；
胰蛋白酶酶解组：取1/4匀浆液，加入1％胰蛋白酶(酶活力为2500U/mg)，同时调节pH至8，温度为50℃±2℃，保温同时搅拌酶解4h，85℃保温20min，放冷，微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得；
仿生酶解组：取1/4匀浆液，加入1％胃蛋白酶(酶活力为1200U/g)，同时调节pH至2，温度为40℃±2℃，保温同时搅拌酶解4h，然后调pH至8，加入1％胰蛋白酶(酶活力为2500U/mg)，温度为50℃±2℃，保温同时搅拌酶解4h，85℃保温20min，放冷，微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得；
空白组：即生理盐水组。
试验方法
大鼠腹腔静脉取血，3.8％枸橼酸钠(1∶9)抗凝，混合后，以3000r/min离心15分钟，取上清液，得到贫血小板血浆(PPP)。取血浆0.1ml，加入动物药不同酶解液0.1ml，混匀，37℃保温3min，再加入已预温的凝血酶(10U/ml)0.2ml，混匀，记录出现絮状沉淀所需时间，即为凝血酶原时间(PT)。结果见表1。
表1 凝血酶原时间(PT)测定结果(n＝5)
| 编号 | 凝血酶原时间(秒) |
| 未酶解样品组 | 32±4.16 |
| 胃蛋白酶酶解样品组 | 57±2.12 |
| 胰蛋白酶酶解样品组 | 61±1.56* |
| 仿生酶解样品组 | 289±2.48** |
| 生理盐水组 | 18±2.01 |
注：与空白对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01。
上述试验结果表明，仿生酶解工艺大大增加了全蝎的抗凝血活性，均比其余酶解工艺理想，较未酶解样品具有极显著性差异(P＜0.01)。
试验二、纤溶活性试验(水蛭)
1、材料
1.1供试样品
未酶解组：取水蛭药材细粉(80目)40g，加入10倍量生理盐水，匀浆30分钟，搅匀，取1/4量，微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得；
胃蛋白酶酶解组：取1/4匀浆液，加入1％胃蛋白酶(酶活力为1200U/g)，同时调节pH至2，温度为40℃±2℃，保温同时搅拌酶解4h，85℃保温20min，放冷，微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得；
胰蛋白酶酶解组：取1/4匀浆液，加入1％胰蛋白酶(酶活力为2500U/mg)，同时调节pH至8，温度为50℃±2℃，保温同时搅拌酶解4h，85℃保温20min，放冷，微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得；
仿生酶解组：取1/4匀浆液，加入1％胃蛋白酶(酶活力为1200U/g)，同时调节pH至2，温度为40℃±2℃，保温同时搅拌酶解4h，然后调pH至8，加入1％胰蛋白酶(酶活力为2500U/mg)，温度为50℃±2℃，保温同时搅拌酶解4h，85℃保温20min，放冷，微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得；
空白组：即生理盐水组。
1.2试剂琼脂糖，购自北京奥博星生物技术有限责任公司，批号：20080204；考马斯亮蓝R-250，购自上海展云化工有限公司，批号：0708019；胃蛋白酶，购自国药基团化学试剂有限公司，批号：F20070914；胰蛋白酶，购自国药基团化学试剂有限公司，批号：F20071228；胰酶，购自国药基团化学试剂有限公司，批号：F20071130；牛纤维蛋白原，供凝血酶效价测定用，购自中检所，批号：140626-200608；凝血酶，购自珠海经济开发区生物化学制药厂，批号：20071101。
2、方法与结果
2.1试验方法 取0.08g琼脂糖，加入磷酸盐缓冲液(PH7.6)10ml，加热使溶解，冷却至55℃，加入纤维蛋白原溶液(7mg/ml)0.8ml及凝血酶溶液(5U/ml)0.5ml，混匀，立即倒入已预热的培养皿中，待基本冷却后转移至7℃冰箱中放置20min，用直径0.5厘米打孔器打孔，即得。每个孔中均加入20μl对应样品液，以生理盐水做对照。于37℃培养箱中培养22h。取出，用考马斯亮蓝R-250染色20～30min，脱色液脱色，观察纤维蛋白溶圈，记录溶圈直径。
2.2试验结果 水蛭不同酶解工艺对应的纤溶活性测定结果见表2。
表2 水蛭纤维蛋白溶圈测定结果(n＝5)
| 编号 | 溶圈直径(mm) | 溶圈面积(mm2) |
| 未酶解样品组 | 18±3.12 | 234.72±25.46** |
| 胃蛋白酶酶解样品组 | 22±2.86 | 360.32±33.53*** |
| 胰蛋白酶酶解样品组 | 24±2.67 | 432.54±28.21*** |
| 仿生酶解样品组 | 28±3.18* | 595.82±36.07*** |
| 空白对照组 | 6.5±3.26 | 13.54±30.52 |
注：与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
上述试验结果表明，仿生酶解工艺大大增加了水蛭的纤溶活性，均比其余酶解工艺理想，较未酶解样品具有显著性差异。
试验三、对家兔细菌性角膜炎的药效学试验研究(土鳖虫)
试验材料
绿脓杆菌(ACTT27853)，浓度1×106CFU·ml-1；
金黄色葡萄球菌(ACTT25923)，浓度2.5×109CFU·ml-1；
大肠杆菌(ACTT25922)，浓度1.8×109CFU·ml-1；均由北京市中医院检验科细菌室临床分离而得。
供试样品的制备
土鳖虫滴眼液I(未酶解组)：取土鳖虫50g，加8倍量水匀浆，粗滤，再以10kD的超滤膜截取分子量小于10kD的部分，加入2g尼泊金乙酯，加热使溶解，再加入硼酸12g、硼砂0.6g，加注射用水至1000ml，搅匀，加入0.5g透明质酸钠，充分润胀24h，无菌条件下以微孔滤膜(0.22μm)滤过，罐装，即得。
土鳖虫滴眼液II(胃蛋白酶酶解组)：取土鳖虫50g，加8倍量注射用水匀浆，调节pH至2.0，加入1g胃蛋白酶于40℃保温酶解2小时，粗滤，再以10kD的超滤膜截取分子量小于10kD的部分，加入2g尼泊金乙酯，加热使溶解，再加入硼酸12g、硼砂0.6g，加注射用水至1000ml，搅匀，加入0.5g透明质酸钠，充分润胀24h，无菌条件下以微孔滤膜(0.22μm)滤过，罐装，即得。
土鳖虫滴眼液III(胰酶酶解组)：取土鳖虫50g，加8倍量注射用水匀浆，调节pH至8.0，加入1g胰酶(酪蛋白转化力25.4)于50℃保温酶解5小时，粗滤，再以10kD的超滤膜截取分子量小于10kD的部分，加入2g尼泊金乙酯，加热使溶解，再加入硼酸12g、硼砂0.6g，加注射用水至1000ml，搅匀，加入0.5g透明质酸钠，充分润胀24h，无菌条件下以微孔滤膜(0.22μm)滤过，罐装，即得。
土鳖虫滴眼液IV(仿生酶解组)：取土鳖虫50g，加8倍量注射用水匀浆，调节pH至2.0，加入1g胃蛋白酶于40℃保温酶解2小时，再调节pH至8.0，加入1g胰酶(酪蛋白转化力25.4)于50℃保温酶解5小时，粗滤，再以10kD的超滤膜截取分子量小于10kD的部分，加入2g尼泊金乙酯，加热使溶解，再加入硼酸12g、硼砂0.6g，加注射用水至1000ml，搅匀，加入0.5g透明质酸钠，充分润胀24h，无菌条件下以微孔滤膜(0.22μm)滤过，罐装，即得。
试验动物
新西兰兔，雌雄兼用，2.2～2.5kg，共50只，购自北京大学实验动物科学部。
试验方法
1、细菌性角膜炎模型建立：用兔座夹固定家兔，以0.5％丁卡因2～3滴滴眼，待其失去知觉后用1ml注射器抽取0.1ml含菌培养液(含绿脓杆菌1×106CFU，金黄色葡萄球菌2.5×109CFU或大肠杆菌1.8×109CFU)自眼角膜近中央部位注人角膜实质层内，使造成直径约2～3min的白色菌斑，分别放入单笼饲养治疗。
2、动物分组治疗与给药方法：模型家兔50只，分为土鳖虫未酶解组、土鳖虫胃蛋白酶酶解组、土鳖虫胰酶酶解组、土鳖虫仿生酶解组和空白对照组(给予注射用水)。给药4次/d，1～2滴/次，以造模后12h开始用药，为期5d，每天进行相关观测工作。
3、观察指标：角膜炎病变治愈程度(肉眼观察)于角膜接种细菌6h后开始，每天观察记录一般情况和积脓、红肿、角膜浑浊、溃疡等角膜炎症表现，并予以分级评分：
0分(正常)：无积脓、无红肿、无角膜浑浊、无溃疡；
1分(轻度)：眼球角膜、无积脓、有红肿、无角膜浑浊、无溃疡；
2分(中度)：眼角膜有积脓、有红肿、无角膜浑浊、轻度溃疡；
3分(重度)：眼角膜积脓红肿、角膜浑浊、溃疡。
于接种治疗后第6天处死动物，取一侧10只眼角膜作切片HE染色于显微镜观察角膜厚度、溃疡、炎细胞浸润、成纤维细胞增生等炎症表现评分。另一侧10只眼角膜作24h细菌培养分离检测、金黄色葡萄球菌，绿脓杆菌和大肠杆菌计数对比统计。并与下述病原体转阴率检测数据一起统计处理。
试验结果
家兔用绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌接种后分组照上述治疗后第5天借助眼科反光镜肉眼观察角膜炎症评分及治疗后第6天处死家兔，取一侧10眼角膜切片HE染色显微镜观察角膜炎症评分，两组20眼综合统计见表3。计算公式如下。
治愈率(％)＝(空白炎症分值-各组炎症分值)/空白炎症分值×100％
表3 土鳖虫滴眼液治疗兔眼角膜炎试验结果表
| 组别 | 正常(0分) | 轻度(1分) | 中度(2分) | 重度(3分) | 总分 | 治愈率(％) |
| 未酶解滴眼液 | 2 | 5 | 8 | 5 | 36 | 37.9 |
| 胃蛋白酶酶解滴眼液 | 3 | 7 | 6 | 4 | 31 | 46.6 |
| 胰酶酶解滴眼液 | 8 | 5 | 5 | 2 | 21 | 63.8 |
| 仿生酶解滴眼液 | 15 | 4 | 1 | 0 | 6 | 89.7* |
| 空白组滴眼液 | 0 | 0 | 2 | 18 | 58 | -- |
注：与空白对照组比较*P＜0.05
结果表明，经仿生酶解工艺制备的土鳖虫滴眼液对兔细菌性角膜炎具有较好的治疗效果，均优于未酶解、胃蛋白酶酶解、胰酶酶解的土鳖虫滴眼液。与空白对照组比较具有显著性差异。
试验四、对家兔病毒性结膜炎的药效学试验研究(地龙)
试验材料
病毒株：单纯疱疹病毒I型(HSV-I)，TCID50为10-9，由北京药品生物制品检定所提供。
供试样品的制备
地龙滴眼液I(未酶解组)：取地龙30g，加8倍量水匀浆，粗滤，再以5kD的超滤膜截取分子量小于5kD的部分，加入2g尼泊金乙酯，加热使溶解，再加入硼酸12g、硼砂0.6g，加注射用水至1000ml，搅匀，加入0.5g透明质酸钠，充分润胀24h，无菌条件下以微孔滤膜(0.22μm)滤过，罐装，即得。
地龙滴眼液II(胃蛋白酶酶解组)：取地龙30g，加8倍量注射用水匀浆，调节pH至2.0，加入1g胃蛋白酶于40℃保温酶解2小时，粗滤，再以5kD的超滤膜截取分子量小于5kD的部分，加入2g尼泊金乙酯，加热使溶解，再加入硼酸12g、硼砂0.6g，加注射用水至1000ml，搅匀，加入0.5g透明质酸钠，充分润胀24h，无菌条件下以微孔滤膜(0.22μm)滤过，罐装，即得。
地龙滴眼液III(胰酶酶解组)：取地龙30g，加8倍量注射用水匀浆，调节pH至8.0，加入1g胰酶(酪蛋白转化力25.4)于50℃保温酶解5小时，粗滤，再以5kD的超滤膜截取分子量小于5kD的部分，加入2g尼泊金乙酯，加热使溶解，再加入硼酸12g、硼砂0.6g，加注射用水至1000ml，搅匀，加入0.5g透明质酸钠，充分润胀24h，无菌条件下以微孔滤膜(0.22μm)滤过，罐装，即得。
地龙滴眼液IV(仿生酶解组)：取地龙30g，加8倍量注射用水匀浆，调节pH至2.0，加入1g胃蛋白酶于40℃保温酶解2小时，再调节pH至8.0，加入1g胰酶(酪蛋白转化力25.4)于50℃保温酶解5小时，粗滤，再以5kD的超滤膜截取分子量小于5kD的部分，加入2g尼泊金乙酯，加热使溶解，再加入硼酸12g、硼砂0.6g，加注射用水至1000ml，搅匀，加入0.5g透明质酸钠，充分润胀24h，无菌条件下以微孔滤膜(0.22μm)滤过，罐装，即得。
试验动物
新西兰兔，雌雄兼用，2.2～2.5kg，共40只，购自北京大学实验动物科学部。
试验方法
(1)结膜炎模型的复制方法：对家兔两只眼的下眼脸与球结膜交界处注射单纯疱疹病毒I型的混悬液(TCID50为10-9)0.1mL/眼，造成感染性单纯疱疹病毒I型结膜炎模型。
(2)分组与药物剂量：在注射单纯疱疹病毒I型造成结膜炎模型24小时后(第2天)根据病情轻重程度将家兔50只按性别均匀搭配分成5组，分为地龙未酶解组、地龙胃蛋白酶酶解组、地龙胰酶酶解组、地龙仿生酶解组和空白对照组(给予注射用水)。给药4次/d，1～2滴/次，以造模后12h开始用药，为期7d，每天上午第1次滴眼药水之前，先按综合评分方法观察和记录结膜炎症程度分值后再分别滴眼药液。结果见表4。
(3)观察指标：结膜炎病变治愈程度(肉眼观察)于角膜接种细菌6h后开始，每天观察记录一般情况和积脓、红肿、角膜浑浊、溃疡等角膜炎症表现，并予以分级评分。
0分(正常)：血管正常，无水肿，无分泌物；
1分(轻度)：血管充血呈鲜红色，轻微水肿，少量分泌物；
2分(中度)：血管充血呈深红色，血管不易分辨，明显水肿，伴有部分眼睑外翻，分泌物使眼睑和睫毛潮湿或粘着；
3分(重度)：弥漫性充血呈紫红色，水肿至眼睑近半闭合，分泌物使整个眼区和睫毛潮湿或粘着。
4分(极重度)：水肿至眼睑超过半闭合。
表4 地龙滴眼液治疗兔眼结膜炎试验结果表
| 组别 | 正常(0分) | 轻度(1分) | 中度(2分) | 重度(3分) | 极重度(4分) | 总分 | 治愈率(％) |
| 未酶解滴眼液 | 2 | 3 | 8 | 7 | 0 | 40 | 32.2 |
| 胃蛋白酶酶解滴眼液 | 3 | 6 | 5 | 6 | 0 | 34 | 42.4 |
| 胰酶酶解滴眼液 | 8 | 5 | 5 | 2 | 0 | 21 | 64.4 |
| 仿生酶解滴眼液 | 13 | 5 | 2 | 0 | 0 | 9 | 84.7* |
| 空白组滴眼液 | 0 | 0 | 3 | 15 | 2 | 59 | -- |
注：与空白对照组比较*P＜0.05
结果表明，经仿生酶解工艺制备的地龙滴眼液兔病毒性结膜炎具有较好的治疗效果，均优于未酶解、胃蛋白酶酶解、胰酶酶解的地龙滴眼液。与空白对照组比较具有显著性差异。
具体实施方式
以下通过具体的实施例进一步说明本发明，但以下实施例仅用于说明本发明而对本发明没有限制。
实施例一：
处方：土鳖虫100g 透明质酸钠1g
制法：取土鳖虫，粗粉碎，加8倍量注射用水匀浆，加盐酸调节pH至2.0，加入2g胃蛋白酶于40℃保温酶解2小时，再以10％氢氧化钠溶液调节pH至8.0，加入2g胰酶于50℃保温酶解5小时，粗滤，再以10kD的超滤膜截取分子量小于10kD的成分，加入4g尼泊金乙酯，加热使溶解，再加入硼酸24g、硼砂1.2g，加注射用水至2000ml，搅匀，加入透明质酸钠，充分润胀使溶解，无菌条件下以微孔滤膜(0.22μm)滤过，无菌分装，即得。
实施例二：
处方：地龙120g 冰片1.5g 结冷胶18g
制法：取地龙，加6倍量注射用水匀浆，调节pH至2.0，加入1.2g胃蛋白酶于40℃保温酶解3小时，再调节pH至8.5，加入2.4g胰蛋白酶于50℃保温酶解5小时，粗滤，再以10kD的超滤膜截取分子量小于10kD的成分，加入结冷胶，搅拌均匀，置沸水浴中，搅拌至澄清，加入三乙醇胺及甘油，加入尼泊金乙酯7.5g，搅拌使溶解，加入乙醇溶解的冰片，至50℃水浴中搅拌使溶解，滤过，加注射用水至3000g，以微孔滤膜(0.22μm)滤过，无菌分装，即得。
实施例三：
处方：蜈蚣80g 野菊花60g 薄荷脑0.6g
制法：取蜈蚣，加5倍量注射用水匀浆，加热至85℃，保温30分钟，再放冷至40℃调节pH至1.0，加入0.4g胃蛋白酶于40℃保温酶解3小时，再调节pH至8.5，加入1.6g胰酶于50℃保温酶解6小时，粗滤，再以10kD的超滤膜截取分子量小于10kD的成分，备用；另取苯氧乙醇加入到1000ml已加热至约80℃的注射用水中，搅匀，趁热加入硼酸24g、硼砂1.2g，搅拌使溶解，放冷，加入到蜈蚣酶解液中，搅匀，缓慢加入乙醇溶解的薄荷脑，继续搅拌至完全溶解，并加注射用水至2000ml，过微孔滤膜(0.22μm)滤过，滤液再加热至50℃，趁热加入羟丙甲纤维素(50000～70000mpa·s)，搅拌至室温，加注射用水至2000g，搅匀，形成均匀的凝胶，滤过(0.80μm)，无菌分装，即得。
实施例四：
处方：蝉蜕30g 水蛭20g
制法：取蝉蜕、水蛭，加5倍量注射用水匀浆，加热至90℃，保温20分钟，再放冷至35℃调节pH至2.0，加入2.7g胃蛋白酶于35℃保温酶解1小时，再调节pH至8，加入2.7g胰蛋白酶于45℃保温酶解3小时，粗滤，再以10kD的超滤膜截取分子量小于10kD的成分，减压浓缩至适量，加入到经灭菌、滤过后放冷的液体石蜡20g中，搅匀，再加入到已干热灭菌、滤过并冷至约50℃的凡士林890g和羊毛脂40g中搅匀凝固，即得。
实施例五：
处方：僵蚕50g
制法：取僵蚕，加6倍量注射用水匀浆，加热至100℃，保温15分钟，再放冷至45℃调节pH至3，加入3g胃蛋白酶于45℃保温酶解3小时，再调节pH至7.5，加入2.4g胰酶于40℃保温酶解6小时，粗滤，再以10kD的超滤膜截取分子量小于10kD的成分，减压浓缩至适量，备用；取聚乙烯醇30g、甘油5g，加入50ml注射用水中，浸泡至完全润透，至水浴上加热至80℃溶解，即得成膜材料原液，将僵蚕提取液加入上述成膜材料原液中，搅匀，置80℃水浴保温30min，再倒入玻璃板(预先以液体石蜡涂抹)上，手工制膜约2000cm2，80℃鼓风干燥，立即脱膜，取出在紫外灯下灭菌45min，切小块，无菌包装即得。
实施例六：
取实施例三所得眼用凝胶剂治疗病毒性角膜炎患者共26例，共48只眼，其中男性18例，女性8例，年龄为21～55岁。给药4次/d，1～2滴/次，同时全身应用抗病毒药物，7天为一疗程，2个疗程后观察。疗效标准分为治愈(自觉症状消失，角膜无明显充血，角膜无浸润或遗留点状云翁)、显效(自觉症状及体征较治疗前明显减轻)、有效(自觉症状及体症较治疗前减轻)、无效(自觉症状及体征与治疗前无变化)四个等级。结果，治愈17例，治愈率为65％；显效4例，显效率为15％；有效3例，有效率为12％；无效2例，无效率为8％；总有效率达到92％。
实施例七：
取实施例一所得滴眼液治疗巩膜炎患者22例，共38只眼，其中男性14例，女性8例。给药4次/d，1～2滴/次，5天为一疗程，2个疗程后观察。结果，局部充血基本消失、隆起结节及触痛消失(治愈)者15例，占68％；局部充血明显减退、白色结节缩小、触痛减轻(显效)者5例，占23％；可见紫红色限局性充血、局部触痛明显(无效)者2例，占9％。结果总有效率达到91％。
实施例八：
取实施例二所得眼用即型凝胶治疗干眼症患者46例，其中男性30例，女性16例，年龄19～56岁。患者连续用眼后视物模糊，眼部酸胀不适，甚至头痛，临床检查排除其它眼疾，确定为干眼症。给药4次/d，1～2滴/次，7天为一疗程，2个疗程后观察。以视力减退，复视，眼部疲倦，眼部灼热感，眼部痒感，眼部干涩，眼部胀痛，结膜充血，泪多，睑缘红肿糜烂，头痛，难以久视，视物昏花，头昏，睡眠差，腰膝酸软16项临床表现评分，阳性评1分，阴性评0分，其累计分数即为积分。其疗效指数大于70为显效，50～70为有效，小于50为无效。结果，显效者35例，占76％；有效者8例，占17％；无效者3例，占7％。结果总有效率达到93％。
Claims (9)
1、一种动物药的仿生酶解产物，其特征在于该产物是按以下方法制备的：取动物药，加水匀浆，调节pH至1.0～3.0，加入胃蛋白酶于35～45℃保温酶解0.5～4小时，再调节pH至7.5～8.5，加入胰酶或胰蛋白酶于40～50℃保温酶解2～8小时，即得。
2、根据权利要求1所述的动物药仿生酶解产物，其特征在于该产物是按以下方法制备的：取动物药，加水匀浆，调节pH至1.5～2.5，加入动物药量0.5％～5％的胃蛋白酶于35～45℃保温酶解1～3小时，再调节pH至7.5～8.5，加入动物药量0.5％～5％的胰酶或胰蛋白酶于40～50℃保温酶解3～6小时，即得。
3、根据权利要求2所述的动物药仿生酶解产物，其特征在于该产物是按以下方法制备的：取动物药，加水匀浆，调节pH至2.0，加入动物药量1％～2％的胃蛋白酶于40℃保温酶解1～3小时，再调节pH至8.0，加入动物药量1％～2％的胰酶或胰蛋白酶于50℃保温酶解3～6小时，即得。
4、根据权利要求1至3中任一所述的动物药仿生酶解产物，其特征在于将动物药加水匀浆后先加热至80～100℃并保温15～30分钟后，再放冷至所需温度进行酶解。
5、根据权利要求1至3中任一所述的动物药仿生酶解产物，其特征在于所用的胃蛋白酶的酶活力不低于1200U/g，胰蛋白酶的酶活力不低于2500U/mg，胰酶的酪蛋白转化力不低于25.0。6、根据权利要求1至5中任一所述的动物药仿生酶解产物，其特征在于所述的动物药为水蛭、地龙、土鳖虫、全蝎、蜈蚣、蝉蜕、僵蚕中的任一种或几种。
7、权利要求1至6中任一所述的动物药仿生酶解产物方法。
8、权利要求1至6中任一所述的动物药仿生酶解产物在制备用于治疗眼科炎症的药物中的应用。
9、权利要求1至6中任一所述的动物药仿生酶解产物在制备用于治疗青光眼的药物中的应用。
10、权利要求1至6中任一所述的动物药仿生酶解产物在制备用于治疗干眼症的药物中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN200810118149A CN101647821A (zh) | 2008-08-13 | 2008-08-13 | 一种动物药仿生酶解产物及其用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN200810118149A CN101647821A (zh) | 2008-08-13 | 2008-08-13 | 一种动物药仿生酶解产物及其用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101647821A true CN101647821A (zh) | 2010-02-17 |
Family
ID=41670217
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN200810118149A Pending CN101647821A (zh) | 2008-08-13 | 2008-08-13 | 一种动物药仿生酶解产物及其用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101647821A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102283893A (zh) * | 2010-06-18 | 2011-12-21 | 中国中医科学院中医基础理论研究所 | 一种分离、纯化中药整体效应分子组的生物模拟集成技术 |
-
2008
- 2008-08-13 CN CN200810118149A patent/CN101647821A/zh active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102283893A (zh) * | 2010-06-18 | 2011-12-21 | 中国中医科学院中医基础理论研究所 | 一种分离、纯化中药整体效应分子组的生物模拟集成技术 |
| CN102283893B (zh) * | 2010-06-18 | 2013-10-02 | 中国中医科学院中医基础理论研究所 | 一种分离、纯化中药整体效应分子组的生物模拟集成技术 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101648018A (zh) | 一种治疗眼科炎症的中药组合物及其用途 | |
| CN101648004B (zh) | 一种用于治疗眼科疾病的药物组合物及其用途 | |
| CN101879283B (zh) | 一种用于皮肤外伤的喷膜制剂及制备方法 | |
| CN101716214B (zh) | 含有蒲公英提取物的药物组合物及其制药用途和制备方法 | |
| CN102362924B (zh) | 一种治疗眼科疾病的药物组合物及其制备方法 | |
| CN101020715B (zh) | 鹿茸神经生长因子(deer ngf)提取及其制备方法 | |
| CN101647822A (zh) | 一种土鳖虫的仿生酶解产物及其用途 | |
| CN114425033B (zh) | 一种含有间充质干细胞外泌体的眼用凝胶及其制备方法 | |
| CN101648019A (zh) | 一种治疗眼科炎症的药物组合物及其用途 | |
| CN104163847A (zh) | 蝇蛆活性蛋白肽的制备方法与所制备的蝇蛆活性蛋白肽及其用途 | |
| CN109700998B (zh) | 一种复方肌肤损伤再生修复剂及其制备方法 | |
| CN108125996A (zh) | 一种用于视疲劳、干眼的眼用制剂 | |
| CN102961324B (zh) | 一种溶菌酶眼用凝胶剂及其制备方法 | |
| CN102210856A (zh) | 一种胶原蛋白滴眼液及其制备方法 | |
| CN101947307B (zh) | 人胎盘肽在制备治疗干眼症等眼表疾病药物中的应用 | |
| CN104857287B (zh) | 一种治疗干眼症的中药滴眼液及其制备方法 | |
| CN103656622B (zh) | 重组人角质细胞因子kgf-2环境敏感型眼部传递系统及其应用 | |
| CN103006706B (zh) | 一种用于眼表重建的羊膜脂质体及其制备方法和应用 | |
| CN101647821A (zh) | 一种动物药仿生酶解产物及其用途 | |
| CN101648015A (zh) | 一种治疗青光眼的中药组合物及其用途 | |
| WO2014107828A1 (zh) | 一种杀灭抗酸染色阳性（红色）杆菌的药物 | |
| CN102836152B (zh) | 酸浆苦素b在制备治疗和/或预防血吸虫病药物中的应用 | |
| CN105943718B (zh) | 一种沉香复方中药组合物及其制备方法、应用 | |
| EP2389924A1 (en) | An eyedrops of the deproteinized calf blood extract | |
| CN105616445A (zh) | 一种治疗病毒性角膜炎的nk细胞分泌的蛋白滴眼液及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: BEIJING HERUN CHUANGXIN PHARMACEUTICAL TECHNOLOGY Free format text: FORMER OWNER: KAIRUI INNOVATION MEDICINE TECH CO., LTD., BEIJING Effective date: 20101229 |
|
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: ADDRESS; FROM: 100086 ROOM 1706B3, QINGYUN DANGDAI BUILDING, BUILDING 9, MANTING FANGYUAN RESIDENTIAL QUATER, QINGYUNLI, HAIDIAN DISTRICT, BEIJING TO: 100086 ROOM 2001, QINGYUN DANGDAI BUILDING, BUILDING 9, MANTING FANGYUAN RESIDENTIAL QUATER, QINGYUNLI, HAIDIAN DISTRICT, BEIJING |
|
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20101229 Address after: 100086 Beijing city Haidian District Qingyun aromatic garden Ting Building 9, Tsing Wun contemporary building room 2001 Applicant after: Beijing Herun Chuangxin Pharmaceutical Technology Development Co., Ltd. Address before: 100086 Beijing city Haidian District Qingyun aromatic garden Ting Building 9, Tsing Wun contemporary building room 1706B3 Applicant before: Beijing Kairui Chuangxin Pharmaceutical Sci. & Tech. Co., Ltd. |
|
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20100217 |