CN101638404A - 高纯度丹酚酸b、制备方法及应用 - Google Patents
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Abstract
高纯度丹酚酸B、制备方法及应用。现有技术的不足是得到的丹酚酸B纯度都低于92%,获得92%以上丹酚酸B的步骤非常多,成本非常高,无法用于工业化生产。本发明组成包括:提取、预柱、聚酰胺层析、收集,所述的预柱是提取液过滤上DA-201型极性树脂柱,先用水除杂,再以低浓度的C1-C5的低级醇除杂,以C1-C5的低级醇解吸,分段收集含丹酚酸B的组分,减压浓缩。本发明的产品应用于治疗心脑血管疾病、肾病、肺炎、肺心病、胰腺炎、糖尿病、颈椎病、眼底血管性疾病、眼底神经性疾病、偏头痛、慢性胃炎、眩晕、骨伤科疾病、老年痴呆症的药物。
Description
技术领域:
本发明涉及一种一种从中药材丹参中提取并分离丹酚酸B的方法及丹酚酸B的应用。
背景技术:
唇形科植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bge),为多年生草本植物,具有祛瘀止痛,活血通经,清心除烦的功效。现代临床中,广泛将其用于预防和治疗心脑血管疾病,肾病,肝病等。因提取物中成分复杂,难于向世界推广。
丹酚酸B是从丹参中分离得到的一种水溶性的酚酸类物质,其分子式为C36H30O16,分子量为718.614,结构式为:
临床医学证明,丹酚酸B具有保护心脏、心血管等功能。
现有技术中的丹酚酸B的提取和分离方法,是将药材粉碎成末或微波破壁或浸提或煎提,进一步通过大孔吸附树脂、聚酰胺层析等方法获得。现有技术的不足是得到的丹酚酸B纯度都低于92%,获得92%以上丹酚酸B的步骤非常多,成本非常高,无法用于工业化生产。
发明内容:
本发明的目的是提供一种丹酚酸B的新制备方法,得到的丹酚酸B,纯度高,成本低适合工业化生产。
上述的目的通过以下的技术方案实现:
高纯度丹酚酸B的制备方法,其组成包括:提取、上预柱、聚酰胺层析、收集
a.所述的提取是将中药材丹参粉碎,第一次在去离子水100度的条件下加入粉碎的丹参提取1小时,用丹参重量5倍量的水,然后在PH1-7.0的条件下提取2---4次,每次时间40分钟,用丹参重量3倍量的水;
b.所述的预柱是提取液过滤上DA-201型极性树脂柱。先用水除杂,再以低浓度的C1---C5的低级醇除杂,以C1---C5的低级醇解吸,分段收集含丹酚酸B的组分,减压浓缩;
c.所述的聚酰胺层析是浓缩液再用聚酰胺层析柱层析,以高浓度的C1---C5的低级醇解吸,分段收集含丹酚酸B的组分,减压浓缩,调PH值;
d.所述的收集是将c的浓缩液立刻过葡聚糖凝胶柱,分段收集含丹酚B的组分,减压浓缩,冷冻干燥,得到高纯度的丹酚酸B。
所述的高纯度丹酚酸B的制备方法,在a、b、c、d步骤中要用PH值调节物质将PH值调节至1-6.5。
所述的高纯度丹酚酸B的制备方法,所述的C1-C5的低级醇为乙醇,所述的低浓度的C1-C5的低级醇为10---80%,所述的高浓度的C1-C5的低级醇为80---99.99%,所述的PH值调节物质为无机酸或有机酸或酸性氨基酸或其混合物或氢氧化钠或碳酸钠或碳酸氢钠。
所述的高纯度丹酚酸B的制备方法,所述的步骤b和c的聚酰胺层析的过程中,通过薄层层析或HPLC检测方法,检测解吸液中丹酚酸B的含量。
以上的制作方法制做的丹酚酸B在制备治疗心脑血管疾病、肾病、肺炎、肺心病、胰腺炎、糖尿病、颈椎病、眼底血管性疾病、眼底神经性疾病、偏头痛、慢性胃炎、眩晕、骨伤科疾病、老年痴呆症的药物方面的应用。
一种高纯度丹酚酸B,是以上述的方法制备得到的。
本发明的有益效果:
1.得到的丹酚酸B的纯度高,为92%以上。大量的为98%以上,为该产品以单体的方式制作药品制剂,进入临床,为广大患者服务,提供了最必要的条件;而现有技术中没有以丹酚酸B单体为原料制作的药品制剂和化学药品制剂。
2.原有的制作丹酚酸B的技术步骤多,工艺复杂。制作高纯度的丹酚酸B的成本非常高,不能进行工业化生产。只能用于科学研究。而我方的生产技术成本低廉,工艺简单,适合工业化生产。低成本的生产技术为该产品制作成药品,进入临床,提供了可行的道路。
3.根据现行的《药品注册管理办法》,丹酚酸B为从植物当中提取的单体成分,注册药品分类为化学药品。而不是原有的含量多为80%左右的中药制剂。作为化学药品,该产品第一次作为药品走向国际市场提供了更理想的条件。
4.本发明所用的溶剂为可回收的、环保的溶剂,符合国家环保的规定;用的提取材料为环保、可回收、可再生的产品。而原有技术当中,很多萃取和洗脱溶剂是挥发性有害的,不利于环保生产,严重损害身体健康和生态环境。
5本发明采用的溶剂价格低廉,基本无毒,降低了药品的不良反应。
6在现有的技术中,含有丹酚酸B的药品都作为中药存在,一般的丹酚酸B的含量都在80%以下,剩余的20%的成分都说不清楚,也导致了临床应用时产品的质量不稳定,副作用大,容易导致不良反应.而本发明从植物中提取到单体,明确了有效药物成分,减少了毒副作用,质量可以很好控制。
7丹酚酸B是丹参的主要活性成分,其药效、药理作用已被证实。而我方的技术工艺提取的丹酚酸B纯品的药理作用明显,临床疗效比已有的非纯品更确切。
8实验证明本发明提取的丹酚酸B纯品比提取物含量为80%的丹酚酸B更稳定,有利于实际应用中丹酚酸B的储存。
9传统工艺中采用聚酰胺提取丹酚酸B最后用80%以下乙醇解吸,纯度一般达不到98%。而本发明用大于80%的乙醇解吸,即可收集到大量的98%以上的纯品,达到我方的发明目的。
本发明的具体实施方式:
实施例1:
取丹参药材1000g粉碎,加去离子水在100℃的条件下加热提取1小时,用丹参重量5倍的水,然后在PH4.8的条件下煎提2次,每次40分钟,用丹参重量3倍的水。提取液滤过,调PH至3,使用DA-201极性树脂层析,以水洗脱去杂质,,再用10%的乙醇除杂,80%乙醇解吸。收集含丹酚酸B的组分,减压回收。所得溶液再用聚酰胺层析柱层析,用95%的乙醇解吸,得到含丹酚酸B的成分,分段收集纯度大于98.5%的部分,减压浓缩,调PH至4.8。浓缩液过葡聚糖凝胶柱,分段收集纯度大于98.5%的部分,减压浓缩,冷冻干燥后,得到高纯度的丹酚酸B。
用以上方法制成的丹酚酸B可制成药学上可接受的各种药品剂型。
实施例2:
取丹参药材1500g粉碎,加去离子水在100℃的条件下加热提取1小时,用5倍的水,然后在PH4.8的条件下煎提3次,每次40分钟,用3倍的水。提取液过滤,调PH至2,使用DA-201极性树脂层析,以水洗脱去杂质,再用20%的乙醇除杂,90%乙醇解吸。收集含丹酚酸B的组分,减压回收。所得溶液再用聚酰胺层析柱层析,用90%的乙醇解吸,得到含丹酚酸B的成分,分段收集纯度大于98%的部分,减压浓缩,调PH至5。浓缩液过葡聚糖凝胶柱,分段收集纯度大于98.5%的部分,减压浓缩,冷冻干燥后,得到高纯度的丹酚酸B。
实施例3
取丹参药材2000g粉碎,加去离子水在100℃微沸的条件下加热提取1小时,用5倍的水,然后在PH4.8的条件下煎提2次,每次40分钟,用3倍的水。提取液过滤,调PH至4,使用DA-201极性树脂层析,以水洗脱去杂质,再用10%的乙醇除杂,用95%的乙醇解吸,收集含丹酚酸B的组分,减压回收乙醇.所得产物再用聚酰胺层析柱层析,用95%的乙醇解吸,分段收集纯度大于98%的部分,减压浓缩,调PH至4.8。浓缩液过葡聚糖凝胶柱,分段收集纯度大于98.5%的部分,减压浓缩,冷冻干燥后,得到高纯度的丹酚酸B。
实施例4:
取丹参药材1500g粉碎,加去离子水在100℃的条件下加热提取1小时,用5倍的水,然后在PH4.8的条件下煎提2次,每次40分钟,用3倍的水。提取液过滤,调PH至3.5,使用DA-201极性树脂层析,以水洗脱去杂质,再用60%的乙醇除杂,用无水乙醇解吸,收集含丹酚酸B的组分,减压回收乙醇.所得产物再用聚酰胺层析柱层析,用95%的乙醇解吸,分段收集纯度大于98.5%的部分,减压浓缩,调PH至4.0。浓缩液过葡聚糖凝胶柱,分段收集纯度大于98.5%的部分,减压浓缩,冷冻干燥后,得到纯度为99.2%的丹酚酸B。
实施例5:
取丹参药材1000g粉碎,加去离子水在100℃的条件下加热提取1小时,用5倍的水,然后在PH4.8的条件下煎提4次,每次40分钟,用3倍的水。提取液过滤,调PH至4.5,使用DA-201极性树脂层析,以水洗脱去杂质,再用25%的乙醇除杂,用无水乙醇解吸,收集含丹酚酸B的组分,减压回收乙醇。所得产物再用聚酰胺层析柱层析,用90%的乙醇解吸,分段收集纯度大于98.5%的部分,减压浓缩,调PH至5.0。浓缩液过葡聚糖凝胶柱,分段收集纯度大于98.5%的部分,减压浓缩,冷冻干燥后,得到纯度为99%的丹酚酸B。
实施例6:
取丹参药材1000g粉碎,加去离子水在100℃的条件下加热提取1小时,用5倍的水,然后在PH4.8的条件下煎提2次,每次40分钟,用3倍的水。提取液过滤,调PH至4.8。使用DA-201极性树脂层析,以水洗脱去杂质,再用20%的乙醇除杂,用无水乙醇解吸,收集含丹酚酸B的组分,减压回收乙醇.所得产物再用聚酰胺层析柱层析,用无水乙醇解吸,分段收集纯度大于98%的部分,减压浓缩,调PH至5.5。浓缩液过葡聚糖凝胶柱,分段收集纯度大于98.5%的部分,减压浓缩,冷冻干燥后,得到纯度为98.7%的丹酚酸B。
实施例7:
取丹参药材1000g粉碎,加去离子水在100℃的条件下加热提取1小时,用5倍的水,然后在PH4.8的条件下煎提2次,每次40分钟,用3倍的水。提取液过滤,调PH至2,使用DA-201极性树脂层析,以水洗脱去杂质,再用20%的乙醇除杂,用80%的乙醇解吸,收集含丹酚酸B的组分,减压回收乙醇。所得产物再用聚酰胺层析柱层析,用无水乙醇解吸,分段收集纯度大于98%的部分,减压浓缩,调PH至6.0。浓缩液过葡聚糖凝胶柱,分段收集纯度大于98.5%的部分,减压浓缩,冷冻干燥后,得到纯度为99%的丹酚酸B。
实施例8:
取丹参药材1000g粉碎,加去离子水在100℃的条件下加热提取1小时,用5倍的水,然后在PH4.8的条件下煎提2次,每次40分钟,用3倍的水。提取液过滤,调PH至3,使用DA-201极性树脂层析,以水洗脱去杂质,再用20%的乙醇除杂,用80%的乙醇解吸,收集含丹酚酸B的组分,减压回收乙醇。所得产物再用聚酰胺层析柱层析,用95%乙醇解吸,分段收集纯度大于98%的部分,减压浓缩,得到的溶液用2%的NaOH调PH为6。浓缩液过葡聚糖凝胶柱,分段收集纯度大于98.5%的部分,减压浓缩,立即冷冻干燥,得到纯度为98.3%的丹酚酸B。
实施例9:
取丹参药材1000g粉碎,加去离子水在100℃的条件下加热提取1小时,用5倍的水,然后在PH4.8的条件下煎提2次,每次40分钟,用3倍的水。提取液过滤,调PH至3,使用DA-201极性树脂层析,以水洗脱去杂质,再用30%的乙醇除杂,用60%的乙醇解吸,收集含丹酚酸B的组分,减压回收乙醇.所得产物再用聚酰胺层析柱层析,用95%乙醇解吸,分段收集纯度大于98%的部分,减压浓缩,得到的溶液用2%的NaOH调PH为6。浓缩液过葡聚糖凝胶柱,分段收集纯度大于98.5%的部分,减压浓缩,立即冷冻干燥,得到纯度为98.6%的丹酚酸B。
实施例10:
取丹参药材1000g粉碎,加去离子水在100℃的条件下加热提取1小时,用5倍的水,然后在PH4.8的条件下煎提2次,每次40分钟,用3倍的水。提取液过滤,调PH至3.1,使用DA-201极性树脂层析,以水洗脱去杂质,再用20%的乙醇除杂,用70%的乙醇解吸,收集含丹酚酸B的组分,减压回收乙醇.所得产物再用聚酰胺层析柱层析,用95%乙醇解吸,分段收集纯度大于99%的部分,减压浓缩,得到的溶液用2%的NaOH调PH为6。浓缩液过葡聚糖凝胶柱,分段收集纯度大于98.5%的部分,减压浓缩,立即冷冻干燥,得到纯度为99.3%的丹酚酸B。
实施例11:
取丹参药材1000g粉碎,加去离子水在100℃的条件下加热提取1小时,用5倍的水,然后在PH4.8的条件下煎提2次,每次40分钟,用3倍的水。提取液过滤,调PH至3.1,使用DA-201极性树脂层析,以水洗脱去杂质,用10%的乙醇除杂,再用20%的乙醇除杂,用95%乙醇解吸,分段收集含丹酚酸B的组分,减压回收乙醇。所得产物再用聚酰胺层析柱层析,用95%乙醇解吸,分段收集纯度大于99%的部分,减压浓缩,得到的溶液用2%的NaOH调PH为6。浓缩液过葡聚糖凝胶柱,分段收集纯度大于98.5%的部分,减压浓缩,立即冷冻干燥,得到纯度为99.3%的丹酚酸B。
实施例12:
取丹参药材1000g粉碎,加去离子水在100℃的条件下加热提取1小时,用5倍的水,然后在PH4.8的条件下煎提2次,每次40分钟,用3倍的水。提取液过滤,调PH至4,使用DA-201极性树脂层析,以水洗脱去杂质,再用20%、30%的乙醇除杂,用95%乙醇解吸,分段收集含丹酚酸B的组分,减压回收乙醇。所得产物再用聚酰胺层析柱层析,用无水乙醇解吸,分段收集纯度大于98%的部分,减压浓缩,得到的溶液用2%的NaOH调PH为6。浓缩液过葡聚糖凝胶柱,分段收集纯度大于98.5%的部分,减压浓缩,立即冷冻干燥,得到纯度为98.3%的丹酚酸B。
实施例13:
取丹参药材1000g粉碎,加去离子水在100℃的条件下加热提取1小时,用5倍的水,然后在PH4.8的条件下煎提2次,每次40分钟,用3倍的水。提取液过滤,调PH至2,使用DA-201极性树脂层析,以水洗脱去杂质,再用10%、25%的乙醇除杂,用无水乙醇解吸,分段收集含丹酚酸B的组分,减压回收乙醇。所得产物再用聚酰胺层析柱层析,用90%乙醇解吸,分段收集纯度大于98%的部分,减压浓缩,调PH至5.5。浓缩液过葡聚糖凝胶柱,分段收集纯度大于98.5%的部分,减压浓缩,,冷冻干燥后,得到纯度为98.7%的丹酚酸B。
实施例14:
取丹参药材1500g粉碎,加去离子水在100℃的条件下加热提取1小时,用5倍的水,然后在PH4.8的条件下煎提3次,每次40分钟,用3倍的水。提取液过滤,调PH至2,使用DA-201极性树脂层析,以水洗脱去杂质,再用20%的乙醇除杂,用90%的乙醇解吸,分段收集含丹酚酸B的组分,减压回收乙醇。所得产物再用聚酰胺层析柱层析,用95%乙醇解吸,分段收集纯度大于98%的部分,减压浓缩,调PH至5。浓缩液过葡聚糖凝胶柱,分段收集纯度大于98.5%的部分,减压浓缩,冷冻干燥后,得到高纯度的丹酚酸B。
实施例15:
取丹参药材1000g粉碎,加去离子水在100℃的条件下加热提取1小时,用丹参重量5倍的水,然后在PH4.8的条件下煎提2次,每次40分钟,用丹参重量3倍的水。提取液滤过,调PH至3,使用DA-201极性树脂层析,以水洗脱去杂质,再用10%、15%的乙醇除杂,用95%的乙醇解吸,分段收集含丹酚酸B的组分,减压回收乙醇。所得产物再用聚酰胺层析柱层析,用95%乙醇解吸,分段收集纯度大于98.5%的部分,减压浓缩,调PH至4.8。浓缩液过葡聚糖凝胶柱,分段收集纯度大于98.5%的部分,减压浓缩,冷冻干燥后,得到高纯度的丹酚酸B。
实施例16:所有步骤用PH调节物质调至PH1---6.5
实施例17:
以上的制作方法制做的丹酚酸B在制备治疗心脑血管疾病、肾病、肺炎、肺心病、胰腺炎、糖尿病、颈椎病、眼底血管性疾病、眼底神经性疾病、偏头痛、慢性胃炎、眩晕、骨伤科疾病、老年痴呆症的药物方面的应用。
Claims (9)
1.一种高纯度丹酚酸B的制备方法,其组成包括:提取、预柱、聚酰胺层析、收集,其特征是:
a.所述的提取是将中药材丹参粉碎,第一次在去离子水100度的条件下加入粉碎的丹参提取1小时,用丹参重量5倍量的水,然后在PH1-7.0的条件下提取2---4次,每次时间40分钟,用丹参重量3倍量的水;
b.所述的预柱是提取液过滤上DA-201型极性树脂柱,先用水除杂,再以低浓度的C1---C5的低级醇除杂,以C1---C5的低级醇解吸,分段收集含丹酚酸B的组分,减压浓缩;
c.所述的聚酰胺层析是浓缩液再用聚酰胺层析柱层析,以高浓度的C1---C5的低级醇解吸,分段收集含丹酚酸B的组分,减压浓缩,调PH值;
d.所述的收集是将c的浓缩液立刻过葡聚糖凝胶柱,分段收集含丹酚B的组分,减压浓缩,冷冻干燥,得到高纯度的丹酚酸B。
2.根据权利要求1所述的高纯度丹酚酸B的制备方法,其特征是:在a、b、c、d步骤中要用PH值调节物质将PH值调节至1-6.5。
3.根据权利要求1所述的高纯度丹酚酸B的制备方法,其特征是:所述的C1-C5的低级醇为乙醇,所述的低浓度的C1-C5的低级醇为10---80%,所述的高浓度的C1-C5的低级醇为80---99.99%,所述的PH值调节物质为无机酸或有机酸或酸性氨基酸或其混合物或氢氧化钠或碳酸钠或碳酸氢钠。
4.根据权利要求2所述的高纯度丹酚酸B的制备方法,其特征是:所述的C1-C5的低级醇为乙醇,所述的低浓度的C1-C5的低级醇为10---80%,所述的高浓度的C1-C5的低级醇为80---99.99%,所述的PH值调节物质为无机酸或有机酸或酸性氨基酸或其混合物或氢氧化钠或碳酸钠或碳酸氢钠。
5.根据权利要求1或4所述的高纯度丹酚酸B的制备方法,其特征是:所述的步骤b和c的聚酰胺层析的过程中,通过薄层层析或HPLC检测方法,检测解吸液中丹酚酸B的含量。
6.根据权利要求2所述的高纯度丹酚酸B的制备方法,其特征是:所述的步骤b和c的聚酰胺层析的过程中,通过薄层层析或HPLC检测方法,检测解吸液中丹酚酸B的含量。
7.根据权利要求3所述的高纯度丹酚酸B的制备方法,其特征是:所述的步骤b和c的聚酰胺层析的过程中,通过薄层层析或HPLC检测方法,检测解吸液中丹酚酸B的含量。
8.一种以上的制作方法制做的丹酚酸B在制备治疗心脑血管疾病、肾病、肺炎、肺心病、胰腺炎、糖尿病、颈椎病、眼底血管性疾病、眼底神经性疾病、偏头痛、慢性胃炎、眩晕、骨伤科疾病、老年痴呆症的药物方面的应用。
9.一种高纯度丹酚酸B,其特征是:以权利要求1-7的方法制备得到。
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