CN101638391B

CN101638391B - 2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯苄基)-3h-嘧啶-4-酮类衍生物及其制备方法与应用

Info

Publication number: CN101638391B
Application number: CN2009100177250A
Authority: CN
Inventors: 刘新泳; 于明艳
Original assignee: Shandong University
Current assignee: Shandong University
Priority date: 2009-08-21
Filing date: 2009-08-21
Publication date: 2011-04-27
Anticipated expiration: 2029-08-21
Also published as: CN101638391A

Abstract

本发明提供了一种2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮类衍生物，结构通式如下：

其中R₁为：H或甲基；R₂为4-氯、4-甲氧基、4-硝基、3，4-二氯、4-溴、3，4-二氟、3-氯-4-氟、3，4-二甲氧基或4-甲基。本发明还涉及该类化合物的制备方法及其作为HIV抑制剂的应用。

Description

2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮类衍生物及其制备方法与应用

技术领域

本发明涉及一种衍生物及其制备方法，具体涉及2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮类衍生物及其制备方法和应用，属于有机化合物合成与医药应用技术领域。

背景技术

艾滋病(AIDS)是由人类免疫缺陷病毒(HIV)引起，严重危害人类生命健康的重大传染性疾病。HIV是一种逆转录病毒，逆转录酶在病毒生命周期中的重要作用使其成为抗病毒治疗的重要靶点。逆转录酶抑制剂分为两类：核苷类逆转录酶抑制剂和非核苷类逆转录酶抑制剂。非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTIs)因具有高效、低毒、高选择性等特点而倍受关注。但是由于耐药毒株的蔓延使该类药物迅速丧失临床效价。因此新型、高效、低毒、广谱抗耐药的NNRTIs的研发是目前抗HIV药物研究的重要方向之一。

迄今已报道50多类NNRTIs，其中二氢烷氧苄基嘧啶酮(Dihydro-alkylthio-benzyl-oxopyrimidines，DABOs)衍生物是较为典型的一类。DABO类衍生物能够提高分子构象的柔性及在靶点中的位置可适应性，有效的抑制靶点的突变，进而抑制耐药性的产生。随着对DABOs的结构改造，以硫取代C₂侧链，得到了系列2-硫基DABO类似物(S-DABOs)，使抗HIV-1 RT活性有了显著提高，成为一类具有开发前景的NNRTIs。目前为止，以S-DABOs嘧啶母环为基本骨架，对其C_2-，C_3-，C_4-，C_5-，C_6-进行了一系列的结构修饰，已经发现了许多高活性的S-DABOs衍生物，并对其进行了构效关系(SAR)研究。

因此，以S-DABOs嘧啶母环为基本骨架，利用先导化合物构效关系的有效信息，对其2位侧链进行结构改造，对发现广谱高效抗HIV药物具有重要意义。

发明内容

本发明旨在提供2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮类衍生物及其制备方法，本发明还提供上述化合物的用途。

本发明的技术方案如下：

1.2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮类衍生物

本发明的2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮类衍生物，结构通式如下：

其中R₁为：H或甲基；R₂为：4-氯、4-甲氧基、4-硝基、3，4-二氯、4-溴、3，4-二氟、3-氯-4-氟、3，4-二甲氧基或4-甲基。

2.2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮类衍生物的合成路线如下：

试剂：(i)(a)MgCl₂，Et₃N，CH₃CN；(b)2，6-二氯苯乙酸，N，N-羰基二咪唑；(ii)硫脲，EtONa；(iii)取代氯乙酰苯胺，碳酸钾(K₂CO₃)，N，N-二甲基甲酰胺(DMF)。

3.中间体6-(2，6-二氯苯甲基)-2-巯基-3H-嘧啶-4-酮3的制备方法

将0.1mol的丙二酸二乙酯(甲基丙二酸二乙酯)1置于150mL无水乙腈中，依次加入0.12mol的无水MgCl₂，0.152mol Et₃N，室温搅拌2个小时；将0.048mol的2，6-二氯苯乙酸和0.05mol的N，N-羰基二咪唑置于150mL乙腈中反应15-20min.，然后将反应混合液加入丙二酸二乙酯(甲基丙二酸二乙酯)、无水MgCl₂和Et₃N的混合液中；室温搅拌12-24h，加热回流2h，TLC跟踪至反应完全；冰浴环境下滴加13％的盐酸150mL，滴毕搅拌15-20min.，分层取有机层蒸干，加入150ml乙酸乙酯；将乙酸乙酯的混合液先用NaHCO₃溶液洗3次，每次用量200mL，再用NaCl溶液洗3次，每次用量200ml，最后用无水Na₂SO₄干燥，减压蒸馏得β酮酸酯2的粗品，可不经纯化直接用于下一步；所述百分比数均为质量百分比，下同。

在干燥的反应瓶中，将10g，0.43mol的钠分批加入300mL无水乙醇中，待钠溶解冷却后，一次性加入24g，0.315mol的硫脲，然后加入粗产品β-酮酸酯2，将混合物加热回流，TLC跟踪至β-酮酸酯原料点消失后停止加热，冷却后减压蒸出溶剂，将残余物溶解于300mL水中，过滤，用10％的盐酸，冰醋酸调pH＝4，有白色沉淀产生；过滤，滤饼用10mL冰乙醇、10mL冰乙醚依次洗涤2次，可得白色固体3；含纯品90％以上，可不经纯化直接用于下一步目标化合物的合成。

4.2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮类衍生物4的制备方法

将上述中间体6-(2，6-二氯苯甲基)-2-巯基-3H-嘧啶-4-酮3，与取代氯乙酰苯胺进行烃化反应，然后经重结晶纯化得到2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮类衍生物4，所述的取代氯乙酰苯胺选自：2-氯-N-(4-硝基苯基)乙酰胺，2-氯-N-(4-氯苯基)乙酰胺，2-氯-N-(4-甲氧基苯基)乙酰胺，2-氯-N-(4-溴苯基)乙酰胺，2-氯-N-(4-甲基苯基)乙酰胺，2-氯-N-(3，4-二氯苯基)乙酰胺，2-氯-N-(3-氯-4-氟苯基)乙酰胺，2-氯-N-(3，4-二甲氧基苯基)乙酰胺或2-氯-N-(3，4-二氟苯基)乙酰胺，所得目标化合物4a-4q，结构见表1。

以下提供优选的操作步骤：

将2mmol的6-(2，6-二氯苯甲基)-2-巯基-3H-嘧啶-4-酮3和2mmol的K₂CO₃置于反应瓶中，加入无水N，N-二甲基甲酰胺(DMF)15mL，于室温搅拌20min后，加入取代氯乙酰苯胺2.2mmol，室温搅拌，TLC跟踪至原料点消失，停止反应；加入冰水100mL，有白色沉淀产生；过滤，用乙醇(EtOH)或乙醇-N，N-二甲基甲酰胺(EtOH-DMF)混合溶剂重结晶得目标化合物4a-4q。

表1、目标化合物4a-4q的结构式

5.2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮类衍生物药物组合物

一种抗HIV-1药物组合物，含有上述的2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮类衍生物与药用辅料，制成不同剂型的药物。

6.2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮类衍生物应用

本发明的2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮类衍生物可作为HIV-1非核苷类抑制剂应用。具体地说，作为HIV-1抑制剂用于制备抗艾滋病药物。

本发明在分子模拟的基础上，C₆-采用活性基团2，6-二氯苄基，在C₂-侧链引入合适的取代苯氨基羰基甲硫基，以增加抑制剂分子与周围氨基酸残基的疏水和氢键作用，合成了一系列的2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮类衍生物。该系列化合物具有较高的抗HIV活性，且细胞毒性较低，具有进一步药用开发价值。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步说明，所有目标化合物的编号与表1相同。所述百分比数均为质量百分比。

实施例1：中间体6-(2，6-二氯苯甲基)-2-巯基-3H-嘧啶-4-酮的制备方法

将0.1mol的丙二酸二乙酯(甲基丙二酸二乙酯)1置于150mL无水乙腈中，依次加入0.12mol的无水MgCl₂，0.152mol Et₃N，室温搅拌2个小时。将0.048mol的2，6-二氯苯乙酸和0.05mol的N，N-羰基二咪唑置于150mL乙腈中反应15-20min，然后将反应混合液加入丙二酸二乙酯(甲基丙二酸二乙酯)，无水MgCl₂，Et₃N的混合液中。室温搅拌12-24h，加热回流2h，TLC跟踪至反应完全。冰浴环境下滴加13％的盐酸150mL，滴毕搅拌15min-20min，分层取有机层蒸干，加入150ml乙酸乙酯。将乙酸乙酯的混合液先用NaHCO₃溶液洗3次，每次用量200mL，再用NaCl溶液洗3次，每次用量200ml，最后用无水Na₂SO₄干燥，减压蒸馏得β酮酸酯2的粗品，可不经纯化直接用于下一步。

在干燥的反应瓶中，将钠(10g，0.43mol)分批加入300mL无水乙醇中，待钠溶解冷却后，一次性加入硫脲(24g，0.315mol)，然后加入粗产品β-酮酸酯2(可累计获得)，将混合物加热回流，TLC跟踪至β-酮酸酯原料点消失后停止加热，冷却后减压蒸出溶剂，将残余物溶解于水中(300mL)，过滤，用10％的盐酸，冰醋酸调PH＝4，有白色沉淀产生。过滤，滤饼用10mL冰乙醇、10mL冰乙醚依次洗涤2次，可得白色固体3，含纯品95％。可不经纯化直接用于下一步反应。

6-(2，6-二氯苯甲基)-2-巯基-3H-嘧啶-4-酮：白色固物，产率64.2％。

6-(2，6-二氯苯甲基)-2-巯基-5-甲基-3H-嘧啶-4-酮：白色固物，产率21％。

实施例2：2-[(4-甲氧基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮4a的制备将6-(2，6-二氯苯甲基)-2-巯基-3H-嘧啶-4-酮3(2mmol，0.574g)和K₂CO₃(2mmol，0.276g)置于反应瓶中，加入无水N，N-二甲基甲酰胺(DMF)15mL，于室温搅拌20min后，加入2-氯-N-(4-甲氧基苯基)乙酰胺(0.439g，2.2mmol)，室温搅拌，TLC跟踪至原料点消失，停止反应。加入冰水100mL，有白色沉淀产生。过滤，用乙醇-N，N-二甲基甲酰胺(EtOH-DMF)混合溶剂重结晶得目标化合物4a。白色晶体，产率25.4％，mp：238-240℃(dec).

产物光谱分析数据：

¹H-NMR(DMSO-d₆，ppm)δ：12.80(s，1H，NH)，10.08(s，1H，NH)，7.45-7.29(m，7H)，5.41(s，1H，CH＝C＝O)，4.05(s，2H，S-CH₂)，3.99(s，2H，CH₂)，3.69(s，OCH₃，3H)；IR(KBr，cm^-1)：3276(υ_NH)，3075(υ_NH)，1661(υ_C＝O)，1247(υ_C-N).ESI-MS：m/z 450.6(M+1)，472.7(M+Na).C₂₀H₁₇Cl₂N₃O₃S(449.04).

实施例3.2-[(4-氯苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮4b，

制备方法同实施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺选用2-氯-N-(4-氯苯基)乙酰胺。

所得产品2-[(4-氯苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮4b为白色晶体，产率23.6％，mp：223-225℃(dec).

产物光谱分析数据：

¹H-NMR(DMSO-d₆，ppm)δ：12.77(s，1H，NH)，10.37(s，1H，NH)，7.57-7.24(m，7H)，5.44(s，1H，C-5H pyrimidine ring)，4.00(4H，CH₂，S-CH₂).IR(KBr，cm^-1)：3317(υ_NH)，3052(υ_NH)，1657(υ_C＝O).ESI-MS：m/z 456.3(M+1)，478.3(M+Na).C₁₉H₁₄Cl₃N₂S₂O(454.96).

实施例4.2-[(4-溴苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮4c

制备方法同实施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺选用2-氯-N-(4-溴苯基)乙酰胺。

所得产品2-[(4-溴苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮4c为白色晶体，产率23.1％，mp：232-233℃(dec).

产物光谱分析数据：

¹H-NMR(DMSO-d₆，ppm)δ：12.82(s，1H，NH)，10.34(s，1H，NH)，7.54(d，J＝9.0Hz，2H)，7.49(d，J＝9.0Hz，2H)，7.44(d，J＝8.4Hz，2H)，7.26(d，J＝8.4Hz，H)，5.44(s，1H，CH＝C＝O)，4.03(s，2H，S-CH₂)，3.97(s，2H，CH₂)；IR(KBr，cm^-1)：3320(υ_NH)，3051(υ_NH)，1656(υ_C＝O)，1239(υ_C-N)，1206(υ_C-N).ESI-MS：m/z 498.3(M+1)，520.2(M+Na).C₁₉H₁₄BrCl₂N₃O₂S(496.94).

实施例5.2-[(4-甲基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮4d

制备方法同实施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺选用2-氯-N-(4-甲基苯基)乙酰胺。

所得产品2-[(4-甲基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮4d为白色晶体，产率26.7％，mp：235-237℃(dec).

产物光谱分析数据：

¹H-NMR(DMSO-d₆，ppm)δ：12.84(s，1H，NH)，10.11(s，1H，NH)，7.45-7.12(m，7H)，5.45(s，1H，CH＝C＝O)，4.05(s，2H，S-CH₂)，3.95(s，2H，CH₂)，2.25(S，3H，CH₃)；IR(KBr，cm^-1)：3287(υ_NH)，3034(υ_NH)，1663(υ_C＝O)，1241(υ_C-N).ESI-MS：m/z434.7(M+1)，456.5(M+Na).C₂₀H₁₇Cl₂N₃O₂S(433.34).

实施例6.2-[(4-硝基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮4e

制备方法同实施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺选用2-氯-N-(4-硝基苯基)乙酰胺。

所得产品2-[(4-硝基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮4e为白色晶体，产率29.6％，mp：227-229℃(dec).

产物光谱分析数据：

¹H-NMR(DMSO-d₆，ppm)δ：12.78(s，1H，NH)，10.82(s，1H，NH)，7.56(dd，J₁＝9.6Hz，J₂＝2.4Hz，2H)，7.8(dd，J₁＝9.6Hz，J₂＝2.4Hz，2H)，7.36(d，J＝7.8Hz，2H)，7.23(d，J＝7.8Hz，H)，5.52(s，1H，CH＝C＝O)，4.08(s，2H，S-CH₂)，4.02(s，2H，CH₂).IR(KBr，cm^-1)3323(υ_NH)，3077(υ_NH)，1655(υ_C＝O)，1241(υ_C-N)，1205(υ_C-N).ESI-MS：m/z 465.5(M+1).C₁₉H₁₄Cl₂N₄O₄S(464.01).

实施例7.2-[(3，4-二甲氧基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮4f

制备方法同实施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺选用2-氯-N-(3，4-二甲氧基苯基)乙酰胺。

所得产品2-[(3，4-二甲氧基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮4f为白色晶体，产率22.6％，mp：221-223℃(dec).

产物光谱分析数据：

¹H-NMR(DMSO-d₆，ppm)δ：12.80(s，1H，NH)，10.03(s，1H，NH)，7.51-6.86(m，6H)，5.47(s，1H，CH＝C＝O)，4.08(s，2H，S-CH₂)，4.02(s，2H，CH₂)，3.72(2×OCH₃，6H)；IR(KBr，cm^-1)3292(υ_NH)，3136(υ_NH)，1664(υ_C＝O)，1231.65(υ_C-N)，1218(υ_C-N).ESI-MS：m/z 482.4(M+3).C₂₁H₁₉Cl₂N₃O₄S(479.05).

实施例8.2-[(3，4-二氟苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮4g

制备方法同实施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺选用2-氯-N-(3，4-二氟苯基)乙酰胺。

所得产品2-[(3，4-二氟苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮4g为白色晶体，产率24.2％，mp：228-230℃(dec).

产物光谱分析数据：

¹H-NMR(DMSO-d₆，ppm)δ：12.78(s，1H，NH)，10.45(s，1H，NH)，7.74-7.28(m，6H)，5.52(s，1H，CH＝C＝O)，4.05(s，2H，S-CH₂)，3.93(s，2H，CH₂)；IR(KBr，cm^-1)：3297(υ_NH)，3085(υ_NH)，1659(υ_C＝O)，1241(υ_C-N)，1210(υ_C-N).ESI-MS：m/z 456.5(M+1)，478.5(M+Na).C₁₉H₁₃Cl₂F₂N₃O₂S(455.01).

实施例9.2-[(3，4-二氯苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮4h

制备方法同实施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺选用2-氯-N-(3，4-二氯苯基)乙酰胺。

所得产品2-[(3，4-二氯苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮4h为白色晶体，产率26.8％，mp：236-238℃(dec)

产物光谱分析数据：

¹H-NMR(DMSO-d₆，ppm)δ：12.87(s，1H，NH)，10.50(s，1H，NH)，7.95(d，J＝2.4Hz，H)，7.58(d，J＝8.4Hz，H)，7.45(dd，J₁＝8.4Hz，J₂＝2.4Hz，H)，7.42(d，J＝7.8Hz，2H)，7.25(d，J＝7.8Hz，1H)，5.44(s，1H，CH＝C＝O)，4.04(s，2H，S-CH₂)，3.95(s，2H，CH₂)；IR(KBr，cm^-1)：3291(υ_NH)，3091(υ_NH)，1660(υ_C＝O)，1234(υ_C-N)，1206(υ_C-N).ESI-MS：m/z 488.3(M+1)，510.1(M+Na).C₁₉H₁₃Cl₄N₃O₂S(486.95).

实施例10.2-[(3-氯-4-氟苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮4i

制备方法同实施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺选用2-氯-N-(3-氯-4-氟苯基)乙酰胺。

所得产品2-[(3-氯-4-氟苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮4i为白色晶体，产率21.8％，mp：237-239℃(dec).

产物光谱分析数据：

¹H-NMR(DMSO-d₆，ppm)δ：12.75(s，1H，NH)，10.41(s，1H，NH)，7.87-7.25(m，6H)，5.50(s，1H，CH＝C＝O)，4.02(s，2H，S-CH₂)，3.93(s，2H，CH₂)；IR(KBr，cm^-1)：3290(υ_NH)，3042(υ_NH)，1658(υ_C＝O)，1221(υ_C-N).ESI-MS：m/z 472.6(M+1)，494.6(M+Na).C₁₉H₁₃Cl₃FN₃O₂S(470.98).

实施例11.2-[(4-甲氧基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-5-甲基-3H-嘧啶-4-酮4j

制备方法同实施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺选用2-氯-N-(4-甲氧基苯基)乙酰胺。

所得产品2-[(4-甲氧基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-5-甲基-3H-嘧啶-4-酮4j为白色晶体，产率54.0％，mp：248-251℃(dec).

产物光谱分析数据：

¹H-NMR(DMSO-d₆，ppm)δ：12.71(s，1H，NH)，9.72(s，1H，NH)，7.40-6.68(m，7H)，4.05(s，2H，S-CH₂)，3.99(s，2H，CH₂)，2.04(s，CH₃，3H)；IR(KBr，cm^-1)：3323(υ_NH)，3041(υ_NH)，1654(υ_C＝O)，1248(υ_C-N).ESI-MS：m/z 464.5(M+1)，502.6(M+K).C₂₁H₁₉Cl₂N₃O₃S(463.05).

实施例12.2-[(4-氯苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-5-甲基-3H-嘧啶-4-酮4k

所得产品2-[(4-氯苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-5-甲基-3H-嘧啶-4-酮4k为白色晶体，产率27.6％，mp：256-258℃(dec).

产物光谱分析数据：

¹H-NMR(DMSO-d₆，ppm)δ：12.71(s，1H，NH)，10.00(s，1H，NH)，7.53(d，J＝8.4Hz，2H)，7.37(d，J＝8.4Hz，2H)，7.24(d，J＝7.8Hz，2H)，7.04(d，J＝7.8Hz，H)，4.11(s，2H，S-CH₂)，3.72(s，2H，CH₂)，2.04(s，CH₃，3H)；IR(KBr，cm^-1)3327(υ_NH)，3053(υ_NH)，1660(υ_C＝O)，1260(υ_C-N)，1243(υ_C-N).ESI-MS：m/z 468.5(M+1).C₂₀H₁₆Cl₃N₃O₂S(467).

实施例13.2-[(4-溴苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-5-甲基-3H-嘧啶-4-酮4l

所得产品2-[(4-溴苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-5-甲基-3H-嘧啶-4-酮4l为白色晶体，产率29.2％，mp：259-261℃(dec).

产物光谱分析数据：

¹H-NMR(DMSO-d₆，ppm)δ：12.70(s，1H，NH)，9.99(s，1H，NH)，7.49-7.04(m，7H)，4.11(s，2H，S-CH₂)，3.72(s，2H，CH₂)，2.04(s，CH₃，3H)；IR(KBr，cm^-1)：3307(υ_NH)，3051(υ_NH)，1656(υ_C＝O)，1256(υ_C-N)，1242(υ_C-N).ESI-MS：m/z 514.5(M+3).C₂₀H₁₆BrCl₂N₃O₂S(510.95).

实施例14.2-[(4-硝基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-5-甲基-3H-嘧啶-4-酮4m

所得产品2-[(4-硝基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-5-甲基-3H-嘧啶-4-酮4m为白色晶体，产率24.8％，mp：250-252℃(dec).

产物光谱分析数据：

¹H-NMR(DMSO-d₆，ppm)δ：12.76(s，1H，NH)，10.47(s，1H，NH)，8.25-6.97(m，7H)，4.10(s，2H，S-CH₂)，3.79(s，2H，CH₂)，2.03(s，CH₃，3H)；IR(KBr，cm^-1)：3412(υ_NH)，3085(υ_NH)，1649(υ_C＝O)，1620(υ_C＝O)，1331(υ_C-N)，1307(υ_C-N).ESI-MS：m/z 479.2(M+1)，501.2(M+Na).C₂₀H₁₆Cl₂N₄O₄S(478.03).

实施例15.2-[(3，4-二甲氧基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-5-甲基-3H-嘧啶-4-酮4n

所得产品2-[(3，4-二甲氧基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-5-甲基-3H-嘧啶-4-酮4n为白色晶体，产率52.3％，mp：246-249℃(dec).

产物光谱分析数据：

¹H-NMR(DMSO-d₆，ppm)δ：12.68(s，1H，NH)，9.75(s，1H，NH)，7.29-6.89(m，6H)，4.13(s，2H，S-CH₂)，3.73-3.72(2×OCH₃，6H)，3.67(s，2H，CH₂)，2.04(s，CH₃，3H)；IR(KBr，cm^-1)：3272(υ_NH)，3050(υ_NH)，1671(υ_C＝O)，1651(υ_C＝O)，1262(υ_C-N)，1234(υ_C-N).ESI-MS：m/z 494.3(M+1)，516.3(M+Na).C₂₂H₂₁Cl₂N₃O₄S(493.06).

实施例16.2-[(3，4-二氟苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-5-甲基-3H-嘧啶-4-酮4o制备

方法同实施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺选用2-氯-N-(3，4-二氟苯基)乙酰胺

所得产品2-[(3，4-二氟苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-5-甲基-3H-嘧啶-4-酮4o为白色晶体，产率29.6％，mp：247-250℃(dec).

产物光谱分析数据：

¹H-NMR(DMSO-d₆，ppm)δ：12.71(s，1H，NH)，10.10(s，1H，NH)，7.68-7.03(m，6H)，4.11(s，2H，S-CH₂)，3.72(s，2H，CH₂)，2.04(s，CH₃，3H)；IR(KBr，cm^-1)：3313(υ_NH)，3060(υ_NH)，1675(υ_C＝O)，1647(υ_C＝O)，1257(υ_C-N)，1206(υ_C-N).ESI-MS：m/z 470.3(M+1)，492.1(M+Na).C₂₀H₁₅Cl₂F₂N₃O₂S(469.02).

实施例17.2-[(3，4-二氯苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-5-甲基-3H-嘧啶-4-酮4p制备

方法同实施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺选用2-氯-N-(3，-二氯苯基)乙酰胺。

所得产品2-[(3，4-二氯苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-5-甲基-3H-嘧啶-4-酮4p为白色晶体，产率25.7％，mp：256-258℃(dec)

产物光谱分析数据：

¹H-NMR(DMSO-d₆，ppm)δ：12.74(s，1H，NH)，10.14(s，1H，NH)，7.87(d，J＝7.8Hz，1H)，7.58(d，J＝9Hz，1H)，7.38(dd，J₁＝9Hz，J₂＝1.8Hz，1H)，7.21(d，J＝7.8Hz，2H)，7.02(d，J＝7.8Hz，1H)，4.11(s，2H，S-CH₂)，3.73(s，2H，CH₂)，2.04(s，CH₃，3H)；IR(KBr，cm^-1)：3283(υ_NH)，3040(υ_NH)，1673(υ_C＝O)，1646(υ_C＝O)，1257(υ_C-N)，1236(υ_C-N).ESI-MS：m/z 504.3(M+3).C₂₀H₁₅Cl₄N₃O₂S(500.96).

实施例18.2-[(3-氯-4-氟苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-5-甲基-3H-嘧啶-4-酮4q制备

方法同实施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺选用2-氯-N-(3-氯-4-氟苯基)乙酰胺。

所得产品2-[(3-氯-4-氟苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-5-甲基-3H-嘧啶-4-酮4q为白色晶体，产率26.6％，mp：259-261℃(dec).

产物光谱分析数据：

¹H-NMR(DMSO-d₆，ppm)δ：12.68(s，1H，NH)，10.06(s，1H，NH)，7.96-7.02(m，6H)，4.11(s，2H，S-CH₂)，3.72(s，2H，CH₂)，2.04(s，CH₃，3H)；IR(KBr，cm^-1)：3294(υ_NH)，3052(υ_NH)，1673(υ_C＝O)，1648(υ_C＝O)，1260(υ_C-N)，1221(υ_C-N).ESI-MS：m/z 488.2(M+3).C₂₀H₁₅Cl₃FN₃O₂S(484.99).

实施例19：抗HIV细胞活性筛选试验

术语说明：

MTT法：噻唑蓝法；

MT-4：人急性淋巴母细胞；

CCID50：细胞培养半数感染量；

DMSO：二甲基亚砜；

EC₅₀：保护50％感染HIV-1的MT-4细胞免于细胞病变的化合物浓度；

CC₅₀：使50％未感染HIV-1的细胞发生病变的化合物浓度；

SI：选择性系数，即CC₅₀/EC₅₀(HIV-1 III_B)的比值；

HIV-1(III_B)：HIV-1病毒株III_B亚型；

HIV-2(ROD)：HIV-2病毒株ROD亚型。

化合物抗HIV活性试验，采用噻唑蓝法(MTT法)：在96孔细胞培养板上，加入50uL含1×10⁴MT-4细胞(人急性淋巴母细胞)培养液，再分别加入20uL感染HIV-1(III_B)或HIV-2(ROD)的MT-4细胞混悬液(每毫升含100倍细胞培养半数感染量CCID50)，然后加入不同浓度的待测化合物溶液，每个浓度3个孔，经过在37℃一定时间(5天)的培养后，向每个孔中加入20uL(5mg/ml)MTT溶液，继续培养2小时，然后加入溶解液二甲基亚砜(DMSO)，与酶标仪上，在540nm测定吸收度，计算化合物不同浓度下的细胞增值率P％。同时设空白组，由此计算化合物保护50％的细胞免于HIV诱导的细胞病变所需浓度(EC₅₀)。

化合物毒性测定：在未感染的MT-4细胞中，与化合物抗HIV活性试验平行操作，用MTT法测定化合物使50％未感染细胞发生细胞病变的浓度，即毒性浓度(CC₅₀)。

选择指数的计算：SI＝CC₅₀/EC₅₀。

对上述合成的17个化合物4a-4q进行了抗HIV-1(III_B)及HIV-2(ROD)活性筛选，它们的活性和毒性数据列于表2中，其中临床应用的核苷类逆转录酶抑制剂奈韦拉平(NVP)、地拉韦啶(DLV)、依法韦仑(EFV)和齐多夫定(AZT)作为阳性对照。由表可以看出，该类化合物对HIV-2(ROD)无抑制作用，但对HIV-1(III_B)表现出了一定的抑制活性，其中活性最好的两个化合物4k(EC₅₀＝0.32±0.11μM，CC₅₀＞266.65μM，SI＞836)和4l(EC₅₀＝0.18±0.06μM，CC₅₀＞243.56μM，SI＞1326)。可作为抗HIV的先导化合物加以利用。

表2化合物4a-q的抗HIV-1(III_B)及HIV-2(ROD)的活性和毒性(MT-4细胞)

Claims

1.2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮类衍生物结构通式如下：

其中R₁为：H或甲基；R₂为4-氯、4-甲氧基、4-硝基、3，4-二氯、4-溴、3，4-二氟、3-氯-4-氟、3，4-二甲氧基或4-甲基。

2.如权利要求1所述的2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮类衍生物在制备HIV-1抑制剂的药物中的应用。

3.一种抗HIV药物组合物，其包含权利要求1所述的2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯苄基)-3H-嘧啶-4-酮类衍生物与药用辅料。