CN101637475A

CN101637475A - 鸡矢藤苷酸或含其的植物提取物的应用

Info

Publication number: CN101637475A
Application number: CN200810041111A
Authority: CN
Inventors: 王曙光; 庄昌龙; 李波; 高雯; 孔德云
Original assignee: Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry
Current assignee: Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry
Priority date: 2008-07-29
Filing date: 2008-07-29
Publication date: 2010-02-03
Anticipated expiration: 2028-07-29
Also published as: CN101637475B

Abstract

本发明公开了如式1所示的鸡矢藤苷酸或含其的植物提取物在制备抗甲型流感病毒药物中的应用。该化合物及含其的植物提取物具有显著的抗甲型流感病毒活性，用于治疗甲型流行性感冒或甲型流感病毒性肺炎有显著效果。

Description

鸡矢藤苷酸或含其的植物提取物的应用

技术领域

本发明涉及鸡矢藤苷酸或含其的植物提取物的应用，尤其涉及鸡矢藤苷酸或含其的植物提取物在制备抗甲型流感病毒药物中的应用。

背景技术

流行性感冒(influenza)，简称流感，是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病。流感病毒有甲、乙、丙三型，由于甲型容易发生变异，它所引起的流感流行传播快、波及面广、影响大，尤其对年老体弱多病和婴幼儿威胁大，常因导致并发症而死亡。目前，流感是我国重点监测疾病，在我国《传染病防治法》中列为丙类传染病进行管理。

目前可用的抗流感病毒药物有：

利巴韦林(三氮唑核苷，病毒唑，Ribavirin)，本品为广谱抗病毒核苷类化合物。但其毒副作用比较大：明确致畸；致肿瘤和溶血性贫血等。主要表现为皮疹等皮肤损害、恶心、呕吐胃肠道反应、过敏性反应等。

金刚烷胺和甲基金刚烷胺，仅对甲型有效，且容易引起神经系统和消化系统的不良反应，长期使用产生耐药性。

扎那米韦(Zanamivir)和奥司它韦(Oseltamivir)刚上市，均为神经氨酸酶抑制剂，虽对甲、乙型流感有效，对流感的全身感染无效，有恶性、呕吐等副作用。

正在研发的抗流感病毒药物：抑制病毒脱壳的普可那利(Pleconaril)：和蛋白酶抑制剂芦普林曲韦(Ruprinhivir)，此两药尚未进入临床应用。

中医药对流感具有疗效显著、价格低廉、标本兼治等优势。从中药中筛选抗流感病毒的有效成分是抗流感药物研发的一种新方向。

鸡矢藤Paederia scandens(Lour.)Merr.，又名鸡屎藤，为茜草科(Rubiaceae)鸡矢藤属(Paederia)植物鸡矢藤的根或全草。鸡矢藤为我国传统中药，中医认为鸡矢藤味甘，微苦，性平，入肝胃大肠经；现代药理研究表明鸡矢藤具有清热解毒、健胃消食、止痛、除湿之功效；临床常用于清热解毒、黄疸、水肿、腹胀、肠痈、风湿疼痛、腹泻痢疾、脘腹疼痛、无名肿毒、跌打损伤等。鸡矢藤主要分布于东南亚各国和我国的陕西、甘肃、山东、江苏、安徽、湖北、湖南、贵州等地方。鸡矢藤的提取物具有镇痛、抗菌等活性。鸡矢藤药材用于多种抗菌、镇痛和治疗黄疸肝炎复方中药。

从鸡矢藤的总环烯醚萜苷提取物中分离鉴定了一种单体化合物：鸡矢藤苷酸(paederosidic acid)，其化学结构式如下式：

其分子式为C₁₈H₂₄O₁₂S，分子量464.44，Beilstein RN为8880784，CAS编号为18842-98-3；

英文化学名(CA)：Cyclopenta[c]pyran-4-carboxylic acid，1-(β-D-glucopyranosyloxy)-1，4a，5，7a-tetrahydro-5-hydroxy-7-[[[(methylthio)carbonyl]oxy]methyl]-，(1S，4aS，5S，7aS)-；

中文化学名：1-(β-D-吡喃葡萄糖氧基)-1，4a，5，7a-四氢-4-羧酸-5-羟基-7-甲硫酰氧甲基-(1S，4aS，5S，7aS)-环戊并[C]吡喃。

鸡矢藤的总环烯醚萜苷提取物的提取方法参见下列文献：

1、Quang，D.N.，T.Hashimoto，et al.(2002).Iridoid glucosides from roots ofVietnamese Paederia scandens.Phytochemistry 60(5)：505-514；

2、Zou，X.，S.Peng，et al.(2006).Sulfur-containing iridoid glucosides fromPaederia scandens.Fitoterapia 77(5)：374-377。

综观国内外的报道，均未见鸡矢藤苷酸及含其的鸡矢藤总环烯醚萜苷提取物具有抗流感病毒药效。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供了如式1所示的鸡矢藤苷酸或含其的植物提取物在制备抗甲型流感病毒药物中的应用。

式1

其中，所述的植物提取物较佳的为鸡矢藤总环烯醚萜苷提取物。所述的鸡矢藤总环烯醚萜苷提取物可用本领域常规的提取鸡矢藤总环烯醚萜苷提取物的方法提取，皆能达到本发明的效果。较佳地可参见文献：

2、Zou，X.，S.Peng，et al.(2006).Sulfur-containing iridoid glucosides fromPaederia scandens.Fitoterapia 77(5)：374-377.

具体方法为：用4-12倍鸡矢藤全草质量的丙酮、甲醇、乙醇以及浓度为30％以上的上述溶剂的水溶液中的一种或多种回流提取鸡矢藤全草2-3小时，浓缩至干，用浓度为10-15％的丙酮水溶液、甲醇水溶液和乙醇水溶液中的一种或多种溶解上述浓缩物，用正丁醇进行萃取，减压浓缩至干即得；百分比为质量百分比。

本发明所述的鸡矢藤总环烯醚萜提取物在体外细胞试验时发现都具有显著地抑制甲型流感病毒-宿主细胞为狗肾传代细胞(MDCK)的生物活性，其在200μg/mL浓度下与利巴韦林200μg/mL效果相当，可以开发成制备抗甲型流感病毒药物或抗甲型流感病毒性肺炎的药物；较佳地开发成治疗甲型流感病毒药物或治疗甲型流感病毒性肺炎药物。

在制备抗甲型流感病毒药物中，鸡矢藤苷酸或含其的植物提取物可单独或以药物组合物的形式使用。所述的药物的给药方法没有特殊限制。可根据病人年龄、性别和其它条件及症状，选择各种剂型的制剂给药。例如，片剂、丸剂、溶液、悬浮液、乳液、颗粒剂和胶囊是口服给药；针剂可以单独给药，或者和注射用输送液(如葡萄糖溶液及氨基酸溶液)混合进行静脉注射，如有必要可以单纯用针剂进行肌肉、皮内、皮下或腹内注射；栓剂为给药到直肠。

本发明中，可以根据服药方法、病人年龄、性别和其它条件以及症状适当地选择用药剂量。

本发明的所有原料和药品均市售可得。

本发明的积极进步效果在于首次将鸡矢藤苷酸或含其的植物提取物应用于抗甲型流感的药物中，该鸡矢藤苷酸或含其的植物提取物来源于天然产物、疗效明显、价格低廉。

具体实施方式

下面用实施例来进一步说明本发明，但本发明并不受其限制。

实施例1提取鸡矢藤总环烯醚萜苷提取物和鸡矢藤苷酸

1)提取鸡矢藤总环烯醚萜苷和分离鸡矢藤苷酸：

参考文献：Quang，D.N.，T.Hashimoto，et al.(2002).Iridoid glucosides fromroots of Vietnamese Paederia scandens.Phytochemistry 60(5)：505-514.

取中药材鸡矢藤1kg，用8kg，75％乙醇回流提取2小时，浓缩至干，10％乙醇溶液溶解后用正丁醇萃取，浓缩至干即得有效部位产物，有效部位产物收率为2.7％，其中总环烯醚萜苷含量超过70％。总环烯醚萜苷经反复硅胶柱层析(400目，30倍有效部位质量，氯仿∶甲醇＝30∶1～1∶1梯度洗脱)和反相硅胶柱层析(400目，50倍有效部位质量，甲醇∶水＝3∶7～10∶0梯度洗脱，)分离得到鸡矢藤苷酸0.3g，收率0.03％。上述百分比皆为质量百分比。

2)结构鉴定

经MS-ESI、¹³C-NMR和¹H-NMR测定，证实本发明鸡矢藤总环烯醚萜提取物含有鸡矢藤苷酸(含量为1.1％，HPLC)。

实施例2体外抗甲型流感病毒试验

体外抗甲型流感病毒试验按照国家卫生部药政局制定的《新药(西药)临床前研究指导原则》(1993)所规定流感病毒细胞方法进行。

1)材料：

鸡矢藤总环烯醚萜苷提取物和鸡矢藤苷酸皆为用实施例1方法制得；

细胞模型：狗肾细胞MDCK细胞，中国医学科学院生物工程研究所提供；

病毒株：流感病毒(A3/京科/30/95)，上海市疾病控制与预防中心提供；

利巴韦林：广东肇庆星湖制药厂。

2)试验过程

参考文献：徐叔云，卞如濂，陈修.《药理实验方法学》，人民卫生出版社，2005(3版)：P1738～1740。

(1)对MDCK细胞的毒性试验：

将MDCK细胞接种于96孔培养板，100μL/孔，培养液为EMEM培养液，含10％(v/v)胎牛血清，100U/ml青霉素，100μg/ml链霉素。置于37℃、5％CO₂培养24h，形成细胞单层。加入不同稀释浓度(400、200、100μg/mL)待测样品溶液。37℃、5％CO₂(v/v)继续培养72小时，显微镜观察细胞形态，并用MTT法检测，计算细胞存活率，以此判断细胞毒性。

细胞存活率(％)＝活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)×100％

当细胞存活率为100％时，表明其没有细胞毒性。

(2)对甲型流感病毒的抑制率检测

将MDCK细胞接种于96孔培养板，100μL/孔，培养液为EMEM培养液，含10％(v/v)胎牛血清，100U/ml青霉素，100μg/ml链霉素。置于37℃、5％CO₂培养24h，形成细胞单层。用10TCID₅₀(10倍的半数组织培养感染量)的病毒液100μL/孔感染细胞，加入在无毒浓度范围内稀释的不同稀释浓度(400、200、100μg/mL)的样品溶液。继续培养72小时，显微镜下观察细胞病变(CPE)情况，计算CPE抑制率。

3)实验结果：

以上实验和结果表明：鸡矢藤总环烯醚萜苷和鸡矢藤苷酸对甲型流感病毒具有显著的抑制作用，鸡矢藤苷酸具有抑制甲型流感病毒的作用，鸡矢藤苷酸在浓度为200μg/mL下与利巴韦林在200μg/mL时效果相当。

Claims

1、如式1所示的鸡矢藤苷酸或含其的植物提取物在制备抗甲型流感病

毒药物中的应用。

2、如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的植物提取物为鸡矢藤总环烯醚萜苷提取物。

3、如权利要求2所述的应用，其特征在于：所述的鸡矢藤总环烯醚萜苷提取物由下述方法制得：用4-12倍鸡矢藤全草质量的丙酮、甲醇、乙醇以及浓度为30％以上的上述溶剂的水溶液中的一种或多种回流提取鸡矢藤全草2-3小时，浓缩至干，用浓度为10-15％的丙酮水溶液、甲醇水溶液和乙醇水溶液中的一种或多种溶解上述浓缩物，用正丁醇进行萃取，减压浓缩至干即得；百分比为质量百分比。

4、如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的抗甲型流感病毒药物为抗甲型流感药物或抗甲型流感病毒性肺炎药物。

5、如权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的抗甲型流感病毒药物为治疗甲型流感药物或治疗甲型流感病毒性肺炎药物。