CN101631568A

CN101631568A - 低聚物-蛋白酶抑制剂偶联物

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Publication number: CN101631568A
Application number: CN200880007943A
Authority: CN
Inventors: J·里吉斯-索希尔; 成林; T·X·维加斯; X·顾; F·J·杜阿特; 张文
Original assignee: Nektar Therapeutics
Current assignee: Nektar Therapeutics; Nektar Therapeutics AL Corp
Priority date: 2007-03-12
Filing date: 2008-03-12
Publication date: 2010-01-20
Anticipated expiration: 2028-03-12
Also published as: AU2008226823A1; IL200846A0; US20110269677A1; JP5687752B2; KR20090118965A; US8598364B2; CA2679482C; EP2522367A1; US20140045770A1; IL200846A; CN102816111A; AU2008226823B2; EP2131865A2; EP2131865B1; KR101518079B1; CN102816111B; US9107956B2; MX2009009850A; WO2008112289A3; JP2014028867A

Abstract

本发明提供由水溶性低聚物的共价连接来化学修饰的小分子药物。本发明的偶联物当通过许多施用途径中的任何一种来施用时，显示出不同于没有连接到水溶性低聚物的小分子的特征。

Description

低聚物-蛋白酶抑制剂偶联物

相关申请的交叉引用

本申请根据35 U.S.C.§119(e)要求2007年3月12日提交的美国临时申请序列号60/906,330的优先权的权益，其通过引用在此并入。

发明领域

本发明提供了化学修饰的小分子蛋白酶抑制剂，其具有超过缺少该化学修饰的小分子蛋白酶抑制剂的某些优势。本文描述的化学修饰的小分子蛋白酶抑制剂涉及并/或应用于(除其他以外)药物开发、药物疗法、生理学、有机化学和高分子化学领域。

发明背景

自从1981年报告了获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的第一个病例，人类免疫缺陷病毒的感染已经增长到大流行的比例，导致估计有6500万感染以及2500万死亡。参见2006年8月11日MMWR55(31)：841-844(疾病控制和预防中心)。蛋白酶抑制剂代表了用于治疗HIV感染的个体的重要的一类化合物，尽管这些化合物还可治疗患有其他病毒感染(例如丙肝)的个体。

就HIV而言，蛋白酶抑制剂用于抑制病毒蛋白酶，该病毒蛋白酶是gag和gag/pol融合多肽的蛋白酶切所需的，而gag和gag/pol融合多肽是感染性病毒颗粒产生所需的。因此，通过抑制这一蛋白酶切，蛋白酶抑制剂降低了较大HIV-融合多肽前体形成有效病毒复制所需的蛋白质的成熟形式的能力。McQuade等人(1990)Science247(4941)：454-456。

基于蛋白酶抑制剂的治疗被认为是对表现出有症状的HIV疾病的患者以及CD4细胞计数低于350/μL但高于200/μL的水平的无症状的患者的初始治疗。Hammer等人(2006)JAMA 296(7)：827-843。在这种情况下，基于蛋白酶抑制剂的方案将包括蛋白酶抑制剂(通常用利托那韦促进)连同两种核苷(或核苷酸)逆转录酶抑制剂的组合。同上。

尽管蛋白酶抑制剂在治疗患有HIV的患者中起到重要的作用，但它们的使用已经被与(除其他事情外)极差的水溶性和强代谢(extensive metabolism)相关的困难所妨碍。为解决这些缺点而提出的一种方法包括制备蛋白酶抑制剂的前药形式，诸如含有酰基和氨基甲酰基(carbamotoyl)葡萄糖的前药(Rouquayrol等人(2001)Carbohydr.Res.336：161-180)和相对大的基于PEG的前药(Gunaseelan等人(2004)Bioconjugate Chem.15：1322-1333)。尽管前药方法可能解决与蛋白酶抑制剂相关的缺点中的一些，但该方法必然导致原始分子的还原(return)，通常伴随着其相关的缺点。例如，认为前药方法不会充分地解决通常用蛋白酶抑制剂所观察到的与强代谢相关的问题。

本发明试图解决本领域的这一需求和其他需求。

发明概述

在一个或多个实施方案中，提供了一种化合物，该化合物包含直接或通过一个或多个原子经稳定的键合共价连接于水溶性非肽低聚物的蛋白酶抑制剂的残基。

在一个或多个实施方案中，提供了一种化合物，该化合物包含直接或通过一个或多个原子经稳定的键合共价连接于水溶性非肽低聚物的蛋白酶抑制剂的残基，其中所述蛋白酶抑制剂由式I涵盖。

在一个或多个实施方案中，提供了一种化合物，该化合物包含直接或通过一个或多个原子经稳定的键合共价连接于水溶性非肽低聚物的蛋白酶抑制剂的残基，其中所述蛋白酶抑制剂由式II涵盖。

在一个或多个实施方案中，提供了一种化合物，该化合物包含直接或通过一个或多个原子经稳定的键合共价连接于水溶性非肽低聚物的蛋白酶抑制剂的残基，其中所述蛋白酶抑制剂由式III涵盖。

在一个或多个实施方案中，提供了一种化合物，该化合物包含直接或通过一个或多个原子经稳定的键合共价连接于水溶性非肽低聚物的蛋白酶抑制剂的残基，其中所述蛋白酶抑制剂由式IV涵盖。

在一个或多个实施方案中，提供了一种化合物，该化合物包含直接或通过一个或多个原子经稳定的键合共价连接于水溶性非肽低聚物的蛋白酶抑制剂的残基，其中所述蛋白酶抑制剂由式V涵盖。

在一个或多个实施方案中，提供了一种化合物，该化合物包含直接或通过一个或多个原子经稳定的键合共价连接于水溶性非肽低聚物的蛋白酶抑制剂的残基，其中所述蛋白酶抑制剂由式VI涵盖。

在一个或多个实施方案中，提供了一种化合物，该化合物包含直接或通过一个或多个原子经稳定的键合共价连接于水溶性非肽低聚物的蛋白酶抑制剂的残基，其中所述蛋白酶抑制剂由式VII涵盖。

在一个或多个实施方案中，提供了一种化合物，该化合物具有以下结构：

其中：

是小分子蛋白酶抑制剂的残基；

(a)是值为1到3的整数，包含1和3；

X每次出现时，是稳定的键合；且

POLY每次出现时，是水溶性非肽低聚物。

在本发明的一个或多个实施方案中，提供了一种组合物，该组合物包含：化合物，其包含直接或通过一个或多个原子经稳定的键合共价连接于水溶性非肽低聚物的蛋白酶抑制剂的残基；和任选地，药学上可接受的赋形剂。

在本发明的一个或多个实施方案中，提供了一种组合物，该组合物包含：

(i)具有以下结构的化合物：

其中：

是小分子蛋白酶抑制剂的残基；

(a)是值为1到3的整数，包含1和3；

X每次出现时，是稳定的键合；且

POLY每次出现时，是水溶性非肽低聚物；以及

(ii)任选地，药学上可接受的赋形剂。

在本发明的一个或多个实施方案中，提供了一种剂型，该剂型包含化合物，所述化合物包含直接或通过一个或多个原子经稳定的键合共价连接于水溶性非肽低聚物的蛋白酶抑制剂的残基。

在本发明的一个或多个实施方案中，提供了一种剂型，该剂型包含具有以下结构的化合物：

其中：

是小分子蛋白酶抑制剂的残基；

(a)是值为1到3的整数，包含1和3；

X每次出现时，是稳定的键合；且

POLY每次出现时，是水溶性非肽低聚物。

在本发明的一个或多个实施方案中，提供了一种方法，该方法包括将水溶性非肽低聚物共价地连接于小分子蛋白酶抑制剂。

在本发明的一个或多个实施方案中，提供了一种方法，该方法包括施用具有以下结构的化合物：

其中：

是小分子蛋白酶抑制剂的残基；

(a)是值为1到3的整数，包含1和3；

X每次出现时，是稳定的键合；且

POLY每次出现时，是水溶性非肽低聚物；以及

(ii)任选地，药学上可接受的赋形剂。

当连同以下详细描述一起阅读时，本发明的这些和其他目的、方面、实施方案和特征将变得更加完全地明显。

发明详述

本说明书中所使用的单数形式“一(a)”、“一(an)”和“所述(the)”包括多个所指对象，除非上下文中明确地另外指出。

在描述和要求保护本发明时，将根据以下描述的定义来使用以下的术语。

“水溶性非肽低聚物”指室温下在水中是至少35％(按重量计)可溶的、优选超过70％(按重量计)并更优选超过95％(按重量计)可溶的低聚物。通常，未过滤的“水溶性”低聚物的含水制剂透射相同溶液过滤后所透射的光量的至少75％、更优选至少95％。然而，非常优选的是，水溶性低聚物在水中至少95％(按重量计)可溶或完全可溶。关于是“非肽的”，当低聚物具有小于35％(按重量计)的氨基酸残基时，该低聚物是非肽的。

术语“单体”、“单体亚单元”和“单体单元”本文中可互换使用，并且指聚合物或低聚物的基本结构单元中的一个。在同低聚物的情况中，单一重复的结构单元形成低聚物。在共低聚物的情况中，两个或更多种结构单元以一方式或随机地重复以形成低聚物。本发明使用的优选的低聚物是同低聚物。水溶性非肽低聚物通常包含一种或多种单体，它们按顺序连接以形成单体链。低聚物可由单一单体类型(即为同低聚物)或由两个或三个单体类型(即为共低聚物)形成。

“低聚物”是具有从约2个至约50个单体、优选从约2个至约30个单体的分子。低聚物的结构可变。本发明中使用的具体低聚物包括那些具有诸如直链、支链或叉状的多种几何形状的低聚物，其在下文中更加详细地描述。

如本文所用，“PEG”或“聚乙二醇”意在包含任何水溶性聚(环氧乙烷)。除非另外指出，“PEG低聚物”(也称为低聚乙二醇)是其中基本所有(且更优选所有)单体亚单元是环氧乙烷亚单元的低聚物。然而，低聚物可含有不同的封端部分或官能团，例如用于偶联。通常，本发明中使用的PEG低聚物将包含以下两个结构之一：“-(CH₂CH₂O)_n-”或“-(CH₂CH₂O)_n-1CH₂CH₂-”，这是根据例如在合成转化期间末端氧是否已经被置换。对于PEG低聚物，“n”从约2到50、优选从约2到约30变化，并且整个PEG的末端基团和构造可变。当PEG进一步包含用于连接到例如小分子药物的官能团A时，该官能团共价地连接于PEG低聚物时不会导致形成(i)氧-氧键(-O-O-，过氧化物键合)或(ii)氮-氧键(N-O，O-N)。

“封端基团”通常是连接于PEG低聚物的末端氧的无反应性含碳基团。示例性封端基团包括C_1-5烷基(诸如甲基、乙基和苄基)，以及芳基、杂芳基、环、杂环以及类似基团。就本发明而言，优选的封端基团具有相对低的分子量，诸如甲基或乙基。封端基团还可包含可检测的标记物。这种标记物包括但不限于荧光剂、化学发光剂、酶标记中使用的部分、比色标记物(例如染料)、金属离子和放射性部分。

涉及低聚物的几何形状或总体结构时，“支链”指具有代表不同的“臂”的两个或更多个聚合物的低聚物，所述“臂”从一个支化点延伸。

涉及低聚物的几何形状或总体结构时，“叉状”指具有从一个支化点延伸的两个或更多个官能团(通常通过一个或多个原子)的低聚物。

“支化点”指包含一个或多个原子的分支点，此处低聚物由直链结构分支或分叉成一个或多个额外的臂。

术语“反应性的”或“活化的”指在有机合成的常规条件下容易地或以实际速率反应的官能团。这不同于不反应或需要强催化剂或不实际的反应条件以便反应的那些基团(即“无反应性”或“惰性”基团)。

涉及存在于反应混合物中的分子上的官能团时，“不容易反应”指在反应混合物中有效产生所需的反应的条件下，基团在很大程度上仍然是完整的。

“保护基”是防止或阻断分子中的特定化学反应官能团在某些反应条件下的反应的部分。保护基将根据所保护的化学反应基的类型以及所使用的反应条件和分子中额外的反应基或保护基的存在而变化。作为实例，可被保护的官能团包括羧酸基团、氨基、羟基、硫醇基、羰基以及类似官能团。羧酸的代表性保护基包括酯(诸如对甲氧苄酯)、酰胺和酰肼；氨基的代表性保护基包括氨基甲酸酯(诸如叔丁氧羰基)和酰胺；羟基的代表性保护基包括醚和酯；硫醇基团的代表性保护基包括硫醚和硫酯；羰基的代表性保护基包括缩醛和缩酮；以及类似的保护基。这种保护基对本领域技术人员来说是公知的，并且描述于例如T.W.Greene和G.M.Wuts，Protecting Groups in Organic Synthesis(有机合成中的保护基)，第三版，Wiley，New York，1999及其中所引用的参考文献。

“保护形式”的官能团指具有保护基的官能团。如本文所用，术语“官能团”或其任何同义词包含其保护形式。

“生理学上可裂解的”或“可水解的”或“可降解的”键是相对不稳定的键，其在普通生理条件下与水反应(即水解)。在普通生理条件下，键在水中水解的趋势将不仅依赖于连接两个中心原子的键合的一般类型，还依赖于连接于这些中心原子的取代基。本领域普通技术人员一般可识别这些键。合适的水解不稳定的或弱的键合包括但不限于羧酸酯、磷酸酯、酸酐、缩醛、缩酮、酰氧基烷基醚、亚胺、原酸酯、肽、寡核苷酸、硫酯和碳酸酯。

“可酶降解的键合”指在普通生理条件下经受一种或多种酶降解的键合。

“稳定的”键合或键指化学部分或键，通常指共价键，其在水中是基本稳定的，即在普通生理条件下，在持续的一段时间内，不经受任何可感知程度的水解。水解稳定键合的实例包括但不限于以下：碳-碳键(例如在脂族链中)、醚、酰胺、尿烷、胺以及类似的键合。一般来说，稳定的键合是表现出在普通生理条件下水解速率小于约每天1％-2％的键合。代表性的化学键的水解速率可见于大多数标准化学教科书。

在描述给定组合物中的低聚物的一致性的上下文中，“基本上”或“大体上”指几乎全部地或完全地，例如某一给定量的95％或更多、更优选97％或更多、又更优选98％或更多、甚至更优选99％或更高、又再更优选99.9％或更多、且最优选99.99％或更多。

“单分散”指这样的一种低聚物组合物：其中如色谱法或质谱法所确定，该组合物中基本上所有的低聚物具有明确的单一分子量和确定数量的单体。单分散低聚物组合物在某种意义上是纯的，即基本包括具有单一和可确定数量的单体而不是几种不同数量的单体(即具有三个或更多个不同低聚物大小的低聚物组合物)的分子。单分散低聚物组合物具有1.0005或更小的MW/Mn值、且更优选1.0000的MW/Mn值。通过扩展，由单分散偶联物组成的组合物指，组合物中基本上所有偶联物的所有低聚物具有单一和可确定数量(作为总数)的单体而没有分布，且如果低聚物没有连接于小分子蛋白酶抑制剂的残基则将拥有1.0005的MW/Mn值、且更优选1.0000的MW/Mn值。然而，由单分散偶联物组成的组合物可包含一种或多种非偶联物质，诸如溶剂、试剂、赋形剂等等。

涉及低聚物组合物时，“双峰”指这样一种低聚物组合物：其中组合物中基本上所有的低聚物具有两个可确定的且不同数量(作为总数)的单体之一而没有分布，并且它们的分子量分布当被绘图为数量部分(number fraction)与分子量的关系曲线时表现为两个分离可辨的峰。优选地，对于本文描述的双峰低聚物组合物，每个峰通常是关于其平均值对称，尽管两个峰的大小可能不同。理论上，双峰分布中每个峰的多分散性指数Mw/Mn是1.01或更小、更优选1.001或更小、且甚至更优选1.0005或更小，并且是最优选1.0000的MW/Mn值。通过扩展，由双峰偶联物组成的组合物指，组合物中基本上所有偶联物的所有低聚物具有两个可确定的且不同数量(作为总数)的单体之一而没有大分布，且如果低聚物没有连接于小分子蛋白酶抑制剂激动剂的残基则将具有1.01或更小、更优选1.001或更小、且甚至更优选1.0005或更小的MW/Mn值，并且具有最优选1.0000的MW/Mn值。然而，由双峰偶联物组成的组合物可包含一种或多种非偶联物质，诸如溶剂、试剂、赋形剂等等。

本文中广泛使用“小分子蛋白酶抑制剂”来提及通常具有小于约1000的分子量且具有一定程度的作为逆转录病毒蛋白酶抑制剂的活性的有机化合物、无机化合物或有机金属化合物。小分子蛋白酶抑制剂包含具有小于约1000的分子量的寡肽和其他生物分子。

“生物膜”是通常由专门的细胞或组织制成的任何膜，其作为针对至少一些外源实体或其他不希望的材料的屏障。如本文所用，“生物膜”包括与生理保护性屏障和黏膜屏障相关的那些膜，所述生理保护性屏障包括例如：血-脑屏障(BBB)；血-脑脊液屏障；血-胎盘屏障；血-乳屏障；血-睾丸屏障；所述黏膜屏障包括阴道黏膜、尿道黏膜、肛门黏膜、颊黏膜、舌下黏膜、直肠黏膜等等。除非上下文明确地另外指出，否则术语“生物膜”不包含与中部胃肠道(例如胃和小肠)相关的那些膜。

如本文所用，“生物膜透过率”提供了化合物透过生物膜(诸如与血-脑屏障相关的膜)的能力的度量。多种方法可用于评价分子跨越任何给定的生物膜的转运。评价与任何给定的生物屏障(例如血-脑脊液屏障、血-胎盘屏障、血-乳屏障、肠屏障等等)相关的生物膜透过率的方法在本领域中是已知的，在本文和/或在相关文献中描述，和/或可由本领域普通技术人员确定。

涉及本发明时，“降低的代谢速率”指与没有连接水溶性低聚物的小分子药物(即小分子药物自身)或参照标准材料的代谢速率对比，水溶性低聚物-小分子药物偶联物的代谢速率的可测量的降低。在“降低的代谢首过率”的具体情况中，需要相同的“降低的代谢速率”，除非小分子药物(或参照标准材料)和对应的偶联物是口服施用。口服施用的药物从胃肠道被吸收到门脉循环中，且在到达体循环前必须通过肝。因为肝是药物代谢或生物转化的主要部位，大量的药物在任何时候到达体循环之前可以被代谢。首过代谢以及由此的其任何的降低的程度可通过许多不同的方法测量。例如，动物血液样本可以定时的间隔收集，并通过液相色谱/质谱法分析血浆或血清的代谢水平。测量与首过代谢和其他代谢过程相关的“降低的代谢速率”的其他技术在本领域中是已知的，在本文和/或在相关文献中描述，和/或可由本领域普通技术人员确定。优选地，本发明的偶联物可提供满足以下值中的至少一个的降低的代谢速率降低：至少约30％；至少约40％；至少约50％；至少约60％；至少约70％；至少约80％；以及至少约90％。“口服生物可利用的”化合物(诸如小分子药物或其偶联物)是当口服施用时优选具有超过25％、优选超过70％的生物利用度的化合物，其中化合物的生物利用度是以未代谢形式到达体循环的所施用的药物的部分。

“烷基”指通常长度范围为从约1个至20个原子的烃链。这种烃链优选地而非必须地是饱和的，且可以是支链或直链，尽管通常优选直链。示例性烷基包括甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、3-甲基戊基以及类似的基团。如本文所用，当涉及三个或更多的碳原子时，“烷基”包括环烷基。“烯基”是具有至少一个碳-碳双键的2个至20个碳原子的烷基。

术语“取代的烷基”或“取代的C_q-r烷基”，其中q和r是标识烷基中含有的碳原子的范围的整数，该术语指由一、二或三个以下基团取代的以上烷基：卤(例如F、Cl、Br、I)、三氟甲基、羟基、C_1-7烷基(例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、丁基、叔丁基等等)、C_1-7烷氧基、C_1-7酰氧基、C_3-7杂环、氨基、苯氧基、硝基、羧基、羧基、酰基、氰基。被取代的烷基可以是用相同或用不同的取代基取代一次、两次或三次。

“低级烷基”指含有1个至6个碳原子的烷基，且可以是直链或支链，如由甲基、乙基、正丁基、异丁基、叔丁基所示例。“低级烯基”指具有至少一个碳-碳双键的2个至6个碳原子的低级烷基。

“无干扰取代基”指当存在于分子中时通常不与该分子中含有的其它官能团反应的那些基团。

“烷氧基”指-O-R基团，其中R是烷基或取代的烷基，优选C₁-C₂₀烷基(例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、苄基等等)，优选C₁-C₇。

“药学上可接受的赋形剂”或“药学上可接受的载体”指可包含于本发明的组合物中以提供具有超过缺少这种组分的组合物的优势(例如更加适合于施用至患者)的组合物并且被认为不会对患者引起显著的不良毒理学影响的组分。

术语“芳基”指具有多达14个碳原子的芳香基。芳基包括苯基、萘基、联苯基、菲基、萘并萘基(naphthacenyl)以及类似的基团。“取代的苯基”和“取代的芳基”分别指用选自卤(F、Cl、Br、I)、羟基、羟基、氰基、硝基、烷基(例如C_1-6烷基)、烷氧基(例如C_1-6烷氧基)、苄氧基、羧基、芳基等等的一、二、三、四或五个(例如1-2、1-3或1-4个)取代基取代的苯基和芳基。

“含有芳烃的部分”是含有至少一个芳基和任选地一个或多个原子的原子集合。合适的含有芳烃的部分在本文中描述。

为简单起见，化学部分通篇主要定义为或称为单价化学部分(例如，烷基、芳基等等)。然而，在本领域技术人员清楚的适当结构环境下，这些术语还用于表达对应的多价部分。例如，尽管“烷基”部分通常指单价基团(例如CH₃-CH₂-)，但在某些情况下，二价连接部分可以是“烷基”，在此情况下，本领域技术人员将理解烷基为二价基团(例如-CH₂-CH₂-)，其等同于术语“亚烷基”。(相似地，在其中需要二价部分并将其陈述为“芳基”的情况下，本领域技术人员应理解，术语“芳基”指对应的二价部分，亚芳基)。应理解，所有的原子具有用于它们键形成的化合价的正常数(即碳为4，N为3，O为2，且S根据S的氧化态，为2、4或6)。

“药理学上有效量”、“生理学上有效量”和“治疗有效量”本文中可互换使用，指在血流或靶组织中提供活性剂和/或偶联物的阀值水平所需的，存在于组合物中的水溶性低聚物-小分子药物偶联物的量。精确的量将取决于许多因素，例如特定的活性剂、组合物的组分和物理特征、预期的患者群体、患者考量(patient consideration)以及类似的因素，并且可由本领域技术人员根据本文提供的以及相关文献中可用的信息容易地确定。

“双官能”低聚物是具有包含于其中，通常在其末端处的两个官能团的低聚物。当官能团相同时，低聚物被称为是同双官能的(homodifunctional)。当官能团不同时，低聚物被称为是异双官能的(heterobifunctional)。

本文描述的碱性反应物或酸性反应物包括中性的、带电的及其任何相应的盐形式。

术语“患者”指患有或易患可通过施用本文描述的偶联物预防或治疗的疾患的活体，并且包括人和哺乳动物，所述偶联物通常，但不必须是以水溶性低聚物-小分子药物偶联物的形式。

“任选的”或“任选地”指随后描述的情况可能但不需要必须发生，所以该描述包括其中该情况发生的实例和其中该情况不发生的实例。

如上文所述，本发明涉及(除其他方面以外)包含直接或通过一个或多个原子经稳定的键合共价连接于水溶性非肽低聚物的蛋白酶抑制剂的残基的化合物。

本发明还提供具有以下结构的化合物：

其中：

是小分子蛋白酶抑制剂的残基；

(a)是值为1到3的整数，包含1和3；

X每次出现时，是稳定的键合；且

POLY每次出现时，是水溶性非肽低聚物。

本发明的化合物是低聚物和蛋白酶抑制剂的偶联物。

认为本发明的偶联物的一个优势是它们保留某种程度的蛋白酶活性而且还表现出代谢降低的能力。尽管不希望受理论束缚，但认为本文描述的含有低聚物的偶联物——相比于未偶联的“原始的”蛋白酶抑制剂——并不同样容易地被代谢，因为低聚物起到降低化合物与可代谢蛋白酶抑制剂的基质的总亲和力的作用。

如上文所述，本发明的化合物包括小分子蛋白酶抑制剂的残基。小分子蛋白酶抑制剂是可降低逆转录病毒蛋白酶活性的任何小分子。用于确定化合物(不论化合物是否是以偶联形式)是否是蛋白酶抑制剂的测定在下文中描述。

作为小分子蛋白酶抑制剂的已知化合物包括选自以下类型的那些化合物：氮杂己烷衍生物(azahexane derivative)；氨基酸衍生物；非肽衍生物；吡喃酮化合物；戊-1-胺衍生物(pentan-1-amine)；己-2-基氨基甲酸酯衍生物；磺酰胺衍生物；以及三取代苯基衍生物。还可使用不必须属于上述类型中的任一种的其他小分子蛋白酶抑制剂。

关于是小分子蛋白酶抑制剂的氮杂己烷衍生物，优选的氮杂己烷衍生物具有下式，及其盐：

(式I)

其中：

R^I1是低级烷氧羰基；

R^I2是仲或叔低级烷基或低级烷基硫代-低级烷基；

R^I3是未取代的或由一个或多个低级烷氧基或C4-8环烷基取代的苯基；

R^I4是苯基或环己基，每个在4位由不饱和的杂环基取代，所述杂环基通过环碳原子键合，具有5个至8个环原子，含有选自基团氮、氧、硫、亚磺酰基(-SO-)和磺酰基(-SO₂-)的1个至4个杂原子，且是未取代的，或由低级烷基或苯基-低级烷基取代；

R^I5是仲或叔低级烷基或低级烷基硫代-低级烷基；且

R^I6是低级烷氧羰基。

一种特别优选的氮杂己烷衍生物是下式的化合物：

其还被称为阿扎那韦。阿扎那韦和其他的氮杂己烷衍生物以及它们的合成方法被描述于美国专利第5,849,911号中。

关于是小分子蛋白酶抑制剂的氨基酸衍生物，优选的氨基酸衍生物具有下式及其药学上可接受的酸加成盐：

(式II)

其中

R^II1是苄氧羰基或2-喹啉基羰基。一种特别优选的氨基酸衍生物是还被称为沙奎那韦的式II的化合物，其中R^II1是2-喹啉基羰基。这种氨基酸衍生物以及它们的合成方法被描述于美国专利第5,196,438号中。

关于是小分子蛋白酶抑制剂的非肽衍生物，优选的非肽衍生物具有以下结构或其药学上可接受的盐：

(式III)

其中：

R^III1和R^III2独立地选自氢、以及取代的和未取代的烷基和芳基，且R^III1和R^III2可与G形成环；

R^III3选自巯基和取代的与未取代的烷氧基、芳氧基、硫醚、氨基、烷基、环烷基、饱和的和部分饱和的杂环、以及芳基；

R^III4、R^III5、R^III6、R^III7和R^III8独立地选自氢、羟基、巯基、硝基、卤、其中J是取代的或未取代的可水解基团的-O-J、和取代的与未取代的烷氧基、芳氧基、硫醚、酰基、亚磺酰基、磺酰基、氨基、烷基、环烷基、饱和的和部分饱和的杂环和芳基，并且此外其中R^III4、R^III5、R^III6、R^III7和R^III8中的任何一个可以是螺环的成员，且R^III4、R^III5、R^III6、R^III7和R^III8中的任何两个可一起为环的成员；

Y和G独立地选自氧、-NH、-N-烷基、硫、硒以及两个氢原子，

D是碳或氮；

E是碳或氮；

R^III9选自氢、卤、羟基、巯基以及取代的和未取代的烷氧基、芳氧基、硫醚、氨基、烷基和芳基，其中R^III9可形成环的一部分；

A是碳环或杂环，其任选地被进一步取代，且

B是碳环或杂环，其任选地被进一步取代。

是小分子蛋白酶抑制剂的一种特别优选的非肽衍生物是下式的化合物：

其还被称为奈非那韦。奈非那韦和其他的非肽衍生物以及它们的合成方法被描述于美国专利第5,484,926号和WO 95/09843中。

关于是小分子蛋白酶抑制剂的吡喃酮化合物，优选的吡喃酮化合物具有以下结构或其药学上可接受的盐：

(式IV)

其中：

R^IV4是H；R^IV2是C_3-5烷基、苯基-(CH₂)₂-、杂环基(heterocycyl)-SO₂NH-(CH₂)₂-、环丙基-(CH₂)₂-、F-苯基-(CH₂)₂-、杂环基-SO₂NH-苯基-或F₃C-(CH₂)₂-；或R^IV1和R^IV2合在一起为双键；

R^IV3是R^IV4-(CH₂)_n′-CH(R^IV5)-、H₃C-[O(CH₂)₂]₂-CH₂-、C_3-5烷基、苯基-(CH₂)₂-、杂环基-SO₂NH-(CH₂)₂-、(HOCH₂)₃C-NH-C(O)-NH-(CH₂)₃-、(H₂C)(H₂N)CH-(CH₂)₂-C(O)-NH-(CH₂)₃-、哌嗪-1-基-C(O)-NH-(CH₂)₃-、HO₃S(CH₂)₂-N(CH₃)-C(O)-(CH₂)₆-C(O)-NH-(CH₂)₃-、环丙基-(CH₂)₂-、F-苯基-(CH₂)₂-、杂环基-SO₂NH-苯基-或F₃-(CH₂)₂-；n′是0、1或2；R^IV4是苯基、杂环基、环丙基、H₃C-[O(CH₂)₂]₂-、杂环基-SO₂NH-、Br-、N₃-或HO₃S(CH₂)₂-N(CH₃)-C(O)-(CH₂)₆-C(O)-NH-；R^IV5是-CH₂-CH₃或-CH₂-环丙基；

R^IV6是环丙基、CH₃-CH₂-或叔丁基；

R^IV7是-NR^IV8SO₂-杂环基、任选地用R^IV9取代的NR^IV8SO₂-苯基、或任选地用R^IV9取代的-CH₂-SO₂-苯基、或-CH₂-SO₂-杂环基；R^IV8是H或-CH₃；R^IV9是-CN、-F、-OH或-NO₂；其中杂环基是5、6或7元饱和的或不饱和的环，其含有选自由氮、氧和硫组成的组的一个至三个杂原子；且包括其中以上杂环中的任何一个稠合于苯环或另一个杂环的任何双环基团，其任选地用-CH₃、-CN、-OH、-C(O)OC₂H₅、-CF₃、-NH₂或-C(O)-NH₂取代。

是小分子蛋白酶抑制剂的一种特别优选的吡喃酮化合物是下式的化合物：

其还被称为替拉那韦。替拉那韦和其他的非肽衍生物以及它们的合成方法被描述于美国专利第6,147,095、6,231,887和5,484,926号中。

关于是小分子蛋白酶抑制剂的戊-1-胺衍生物，优选的戊-1-胺衍生物具有以下结构及其药学上可接受的盐：

(式V)

其中：

R^V0是-OH或-NH₂；

Z^V在每个实例中，独立地是O、S或NH；

R^V1和R^V2独立地是氢、或任选地取代的C_1-4烷基、芳基、杂环、碳环、-NH-SO₂C_1-3烷基、-O-芳基、-S-芳基、-NH-芳基、-O-C(O)-芳基、-S-C(O)-芳基和-NH-C(O)-芳基，或R^V1和R^V2连接到一起以形成单环或双环系统；

R^V3是氢、C_1-4烷基、苄基(取代的或未取代的)；

J¹和J²独立地是-OH、-NH₂或任选地取代的C_1-6烷基、芳基、杂环和碳环，且

B不存在或选自由以下基团组成的组：-NH-CH(CH₃)₂-C(O)-、-NH-CH(CH₃)₂-C(S)-、-NH-CH(CH₃)₂-C(NH)-、-NH-CH(CH₃)(CH₂CH₃)-C(O)-、-NH-CH(CH₃)(CH₂CH₃)-C(S)-、-NH-CH(CH₃)(CH₂CH₃)-C(NH)-、-NH-CH(苯基)-C(O)-、-NH-CH(苯基)-C(S)-和-NH-CH(苯基)-C(NH)-。

是小分子蛋白酶抑制剂的一种特别优选的戊-1-胺衍生物是下式的化合物：

其还被称为茚地那韦。茚地那韦和其他的戊-1-胺衍生物以及它们的合成方法被描述于美国专利第5,413,999号和欧洲专利申请第EP541 168号中。

关于是小分子蛋白酶抑制剂的己-2-基氨基甲酸酯衍生物，优选的己烷衍生物具有以下结构及其药学上可接受的盐、酯或前药：

(式VI)

其中：

R^VI1是单取代的噻唑基、单取代的噁唑基、单取代的异噁唑基或单取代的异噻唑基，其中取代基选自(i)低级烷基；(ii)低级烯基；(iii)环烷基；(iv)环烷基烷基；(v)环烯基；(vi)环烯基烷基；(vii)杂环，其中杂环选自氮杂环丙基、氮杂环丁基(azetidinyl)、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、噻唑基、噁唑基、异噁唑基、异噻唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基和吡嗪基，且其中杂环是未取代的或用选自卤、低级烷基、羟基、烷氧基和硫代烷氧基的取代基取代；(viii)(杂环)烷基，其中杂环如上文定义；(ix)烷氧基烷基；(x)硫代烷氧基烷基；(xi)烷基氨基；(xii)二烷基氨基；(xiii)苯基，其中苯环是未取代的或用选自卤、低级烷基、羟基、烷氧基和硫代烷氧基的取代基取代；(xiv)苯基烷基，其中苯环是未取代的或取代的，如上文所定义；(xv)二烷基氨基烷基；(xvi)烷氧基和(xvii)硫代烷氧基；

n″是1、2或3；

R^VI2是氢或低级烷基；

R^VI3是低级烷基；

R^VI4和R^4a独立地选自苯基、噻唑基和噁唑基，其中苯基、噻唑基和噁唑基环是未取代的，或用选自(i)卤、(ii)低级烷基、(iii)羟基、(iv)烷氧基和(v)硫代烷氧基的取代基取代；

R^VI6是氢或低级烷基；

R^VI7是噻唑基、噁唑基、异噁唑基或异噻唑基，其中噻唑基、噁唑基、异噁唑基或异噻唑基环是未取代的，或用低级烷基取代；

R^VI0是氢且Y^VI是-OH，或X^VI是-OH且Y^VI是氢，条件是当Z^VI是-N(R^VI8)-且R^VI7是未取代的时，X^VI是氢且Y^VI是-OH，且条件是当R^VI3是甲基且R^VI7是未取代的时，X^VI是氢且Y^VI是-OH；且

Z^VI为不存在、-O-、-S-、-CH²-或-N(R^VI8)-，其中R^VI8是低级烷基、环烷基、-OH或-NHR^8a，其中R^8a是氢、低级烷基或胺保护基。

是小分子蛋白酶抑制剂的一种特别优选的己-2-基氨基甲酸酯衍生物是下式的化合物：

其还被称为利托那韦。

是小分子蛋白酶抑制剂的另一种特别优选的己-2-基氨基甲酸酯衍生物是下式的化合物：

其还被称为洛匹那韦。利托那韦、洛匹那韦和其他的己-2-基氨基甲酸酯衍生物以及它们的合成方法被描述于美国专利第5,541,206号和WO 94/14436中。

关于是小分子蛋白酶抑制剂的磺酰胺衍生物，优选的磺酰胺衍生物具有以下结构及其药学上可接受的盐、酯或前药：

(式VII)

其中：

A^VII选自由H、Het、-R^VII1-Het、-R^VII1-C_1-6烷基和-R^VII1-C_2-6烯基组成的组，所述-R^VII1-C_1-6烷基可任选地用选自由羟基、C_1-4烷氧基、Het、-O-Het、-NR^VII2-C(O)-N(R^VII2)(R^VII2)和-C(O)-N(R^VII2)(R^VII2)组成的组的一个或多个基团取代，所述R^VII1-C_2-6烯基可任选地用选自由羟基、C_1-4烷氧基、Het、-O-Het、-NR^VII2C(O)N(R^VII2)(R^VII2)和-C(O)-N(R^VII2)(R^VII2)组成的组的一个或多个基团取代；

每个R^VII1独立地选自由-C(O)-、-SO₂-、-C(O)C(O)-、-O-C(O)-、-SO₂、-S(O)₂-C(O)-和-NR^VII2C(O)-以及-NR^VII2-C(O)-C(O)-组成的组；

每个Het独立地选自由以下基团组成的组：C_3-7环烷基；C_5-7环烯基；C_6-10芳基；以及5-7元饱和的或不饱和的杂环，其含有选自N、N(R^VII2)、O、S和S(O)_n′″的一个或多个杂原子，其中所述杂环可任选地被苯并稠合(benzofused)；且其中所述Het的任何成员可任选地用选自由以下基团组成的组的一个或多个取代基取代：氧代、-OR^VII2、-R^VII2、-N(R^VII2)、-R^VII2-OH、-CN、CO₂R^VII2、-C(O)N(R^VII2)(R^VII2)、SO₂-N(R^VII2)(R^VII2)、-N(R^VII2)-C(O)-R^VII2、-C(O)-R^VII2、-S(O)_n′″-R^VII2、-OCF₃、-S(O)_n′″-Ar、亚甲二氧基、-N(R^VII2)-SO₂(R^VII2)、卤、-CF₃、-NO₂、Ar和-O-Ar；

每个R^VII2独立地选自由H和任选地用Ar取代的C_1-3烷基组成的组；

B^VII当存在时，是-N(R^VII2)-C(R^VII3)(R^VII3)-C(O)-；

x′是0或1；

每个R^VII3独立地选自由H、Het、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_3-6环烷基和C_5-6环烯基组成的组，其中所述R^VII3的任何成员(除了H)可任选地用选自由-OR^VII2、-C(O)-NH-R^VII2、-S(O)_n′″-N(R^VII2)(R^VII2)、Het、-CN、-SR^VII2、-CO₂R^VII2、NR^VII2-C(O)-R^VII2组成的组的一个或多个取代基取代；

每个n′″独立地是1或2；

D和D′独立地选自由以下基团组成的组：Ar；C_1-4烷基，其可任选地用选自C_3-6环烷基、-OR^VII2、-R^VII3、-O-Ar和Ar的一个或多个基团取代；C_2-4烯基，其可任选地用选自由C_3-6环烷基、-OR^VII2、-R^VII3、-O-Ar和Ar组成的组的一个或多个基团取代；C_3-6环烷基，其可任选地用Ar取代或与Ar稠合；以及C_5-6环烯基，其可任选地用Ar取代或与Ar稠合；

每个Ar独立地选自由苯基、3-6元碳环和5-6元杂环组成的组，5-6元杂环含有选自O、N、S、S(O)_n′″和N(R^VII2)的一个或多个杂原子，其中所述碳环或杂环可以是饱和的或不饱和的，且任选地用选自由以下基团组成的组的一个或多个基团取代：氧代、-OR^VII2、-R^VII2、-N(R^VII2)(R^VII2)、-N(R^VII2)-C(O)R^VII2、-R^VII2-OH、-CN、-CO₂R^VII2、-C(O)-N(R^VII2)(R^VII2)、卤和-CF₃；

E选自由以下基团组成的组：Het；O-Het；Het-Het；-O-R^VII3；-NR^VII2R^VII3；C_1-6烷基，其可任选地用选自由R^VII4和Het组成的组的一个或多个基团取代；C_2-6烯基，其可任选地用选自由R^VII4和Het组成的组的一个或多个基团取代；C_3-6饱和碳环，其可任选地用选自由R^VII4和Het组成的组的一个或多个基团取代；以及C_5-6不饱和碳环，其可任选地用选自由R^VII4和Het组成的组的一个或多个基团取代；且

每个R^VII4独立地选自由-OR^VII2、-C(O)-NHR^VII2、SO₂-NHR^VII2、卤、-NR^VII2-C(O)-R^VII3和-CN组成的组。

是小分子蛋白酶抑制剂的一种特别优选的磺酰胺衍生物是下式的化合物：

其还被称为安普那韦。是小分子蛋白酶抑制剂的另一种特别优选的磺酰胺衍生物是下式的化合物：

U-140690。

安普那韦、U-140690和其他的磺酰胺衍生物以及它们的合成方法被描述于美国专利第5,732,490和5,585,397号、WO 93/23368和WO 95/30670中。

磺酰胺衍生物的一种特别优选的前药形式是被称为夫沙那韦(fosamprenavir)的、具有下式的、基于膦酰氧基的前药及其药学上可接受的盐：

夫沙那韦和其他磺酰胺衍生物以及它们的合成方法被描述于美国专利第6,514,953和6,436,989号中。

关于是小分子蛋白酶抑制剂的三取代苯基衍生物，优选的三取代苯基衍生物具有以下结构及其药学上可接受的盐：

(式VIII)

其中：

R^VIII1是苄基；

R^VIII2是苄基或低级烷基；

R^VIII3是低级烷基；且

R^VIII5是

这些和其他小分子蛋白酶抑制剂以及它们的合成方法被描述于WO 97/21685中。

如先前所述，小分子蛋白酶抑制剂可能并不必定归类于前述类之一。然而，这种小分子蛋白酶抑制剂仍可偶联于如本文描述的水溶性非肽低聚物。非限制性的其他小分子蛋白酶抑制剂包括化合物：

DMP-323；

DMP-450；以及

相关的化合物，其公开于WO 93/07128中。

另外其他的小分子蛋白酶抑制剂包括：

BMS 186,613；

和描述于欧洲专利申请第EP 580 402号的其他抑制剂。

另外其他的小分子蛋白酶抑制剂包括：

SC-55389a

和描述于WO 95/06061的其他抑制剂。

另外其他的小分子蛋白酶抑制剂包括：

BILA 1096 BS；

和描述于EP 560268的其他抑制剂。

在一些实施方案中，优选的是，小分子蛋白酶抑制剂选自由安普那韦、阿扎那韦、夫沙那韦、茚地那韦、洛匹那韦、沙奎那韦、奈非那韦、利托那韦、替拉那韦(tipranovir)和地瑞那韦组成的组。

这些(和其他)蛋白酶抑制剂中的每一个可(直接地或通过一个或多个原子)共价连接于水溶性非肽低聚物。

本发明中有用的小分子药物一般具有小于1000Da的分子量。小分子药物的示例性的分子量包括以下分子量：小于约950；小于约900；小于约850；小于约800；小于约750；小于约700；小于约650；小于约600；小于约550；小于约500；小于约450；小于约400；小于约350；以及小于约300。

如果本发明中使用的小分子药物是手性的，那么该小分子药物可以是以外消旋混合物，或旋光形式，例如单一旋光对映体，或对映体的任何组合或比例(即非外消旋混合物(scalemic mixture))。此外，该小分子药物可具有一个或多个几何异构体。就几何异构体而言，组合物可包括单一几何异构体，或两个或更多个几何异构体的混合物。用于本发明的小分子药物可以是以其通常的活性形式，或可具有某种程度的修饰。例如，在低聚物的共价连接之前或之后，小分子药物可具有连接于其的靶向剂(targeting agent)、标记物或运载体(transporter)。可选地，小分子药物可具有连接于其的亲油部分，诸如磷脂(例如二硬酯酰磷脂酰乙醇胺或“DSPE”、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺或“DPPE”等等)或小的脂肪酸。然而，在一些实例中，优选的是，小分子药物部分不包括至亲油部分的连接。

用于偶联于水溶性非肽低聚物的小分子蛋白酶抑制剂具有适合于共价连接于低聚物的游离反应基，诸如羟基、酰胺、羧基、硫代、氨基或类似的基团(即“柄(handle)”)。此外，可通过引入反应基，优选地通过将其现存的官能团之一转化为适合于在低聚物和药物之间形成稳定的共价键合的反应基，来修饰小分子蛋白酶抑制剂。两种方法都阐述于实验部分中。

水溶性非肽低聚物通常包含顺次连接以形成单体链的一个或多个单体。低聚物可由单一单体类型形成(即为同低聚物的)，或由两种或三种单体类型形成(即为共低聚物的)。优选地，每种低聚物是两种单体的共低聚物(co-oligomer)，或更优选，是同低聚物(homo-oligomer)。

因此，每种低聚物主要由至多三种不同的单体类型组成，所述单体类型选自由以下单体类型组成的组：环氧烷，诸如环氧乙烷或环氧丙烷；烯醇，诸如乙烯醇、1-丙烯醇或2-丙烯醇；乙烯基吡咯烷酮；羟烷基甲基丙烯酰胺或羟烷基甲基丙烯酸酯，其中烷基优选是甲基；α-羟酸，诸如乳酸或乙醇酸；磷腈、噁唑啉、氨基酸、糖类诸如单糖、糖类或甘露醇；以及N-丙烯酰吗啉。优选的单体类型包括环氧烷、烯醇、羟烷基甲基丙烯酰胺或羟烷基甲基丙烯酸酯、N-丙烯酰吗啉和α-羟酸。优选地，每种低聚物独立地是选自该组的两种单体类型的共低聚物，或更优选地，是选自该组的一种单体类型的同低聚物。

共低聚物中的两种单体类型可以是相同的单体类型，例如两种环氧烷，诸如环氧乙烷和环氧丙烷。优选地，低聚物是环氧乙烷的同低聚物。尽管不是必须的，但通常封住低聚物的没有共价连接于小分子的一个末端(或多个末端)以使其不起反应。可选地，末端可包含反应基。当末端是反应基时，选择反应基使得其在形成最终低聚物的条件下或在低聚物共价连接于小分子药物期间不起反应，或必要时将其保护。一种常见的末端官能团是羟基或-OH，尤其是对于低聚环氧乙烷(oligoethylene oxide)来说。

水溶性非肽低聚物(例如在偶联物式

中的“POLY”)可具有许多不同几何形状中的任何一个。例如，水容性非肽低聚物可以是直链的、支链的或叉状的。最常见地，水溶性非肽低聚物是直链的或是支链的，例如具有一个支化点。尽管本文讨论的许多聚焦于作为示例性低聚物的聚(环氧乙烷)，但本文中提供的讨论和结构可被容易地延伸以包含以上描述的水溶性非肽低聚物中的任何一个。

不包括连接体(linker)部分的水溶性非肽低聚物的分子量，通常是相对较低的。水溶性聚合物的分子量的示例性值包括：低于约1500道尔顿；低于约1450道尔顿；低于约1400道尔顿；低于约1350道尔顿；低于约1300道尔顿；低于约1250道尔顿；低于约1200道尔顿；低于约1150道尔顿；低于约1100道尔顿；低于约1050道尔顿；低于约1000道尔顿；低于约950道尔顿；低于约900道尔顿；低于约850道尔顿；低于约800道尔顿；低于约750道尔顿；低于约700道尔顿；低于约650道尔顿；低于约600道尔顿；低于约550道尔顿；低于约500道尔顿；低于约450道尔顿；低于约400道尔顿；低于约350道尔顿；低于约300道尔顿；低于约250道尔顿；低于约200道尔顿；低于约150道尔顿；和低于约100道尔顿。

水溶性非肽低聚物(不包括连接体)的分子量的示例性范围包括：从约100至约1400道尔顿；从约100至约1200道尔顿；从约100至约800道尔顿；从约100至约500道尔顿；从约100至约400道尔顿；从约200至约500道尔顿；从约200至约400道尔顿；从约75至1000道尔顿；以及从约75至约750道尔顿。

优选地，水溶性非肽低聚物中的单体数量落在以下范围(包含所提供的每个范围的端点)中的一个或多个中：在约1和约30之间；在约1和约25之间；在约1和约20之间；在约1和约15之间；在约1和约12之间；在约1和约10之间。在某些实例中，低聚物(及其对应的偶联物)中连续的单体的数量是1、2、3、4、5、6、7或8中的一个。在其他的实施方案中，低聚物(及其对应的偶联物)包含9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续的单体。在又进一步的实施方案中，低聚物(及其对应的偶联物)具有21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个连续的单体。因此，例如，当水溶性非肽聚合物包括CH₃-(OCH₂CH₂)_n-时，则“n”是整数，该整数可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30，且可落在以下范围中的一个或多个中：在约1和约25之间；在约1和约20之间；在约1和约15之间；在约1和约12之间；在约1和约10之间。

当水溶性非肽低聚物具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个单体时，这些值分别对应具有约75、119、163、207、251、295、339、383、427和471道尔顿的分子量的甲氧基封端的低聚(环氧乙烷)。当低聚物具有11、12、13、14或15个单体时，这些值分别对应具有相当于约515、559、603、647和691道尔顿的分子量的甲氧基封端的低聚(环氧乙烷)。

当水溶性非肽低聚物连接于小分子蛋白酶抑制剂(与逐步加入一种或多种单体以使低聚物有效地“生长”到小分子蛋白酶抑制剂上不同)时，优选的是，含有活化形式的水溶性非肽低聚物的组合物是单分散的。然而，在其中使用双峰组合物的那些实例中，组合物将具有以单体的以上数量中的任何两个为中心的双峰分布。理论上，双峰分布中的每个峰的多分散性指数Mw/Mn是1.01或更小，并更优选为1.001或更小，并更优选为1.0005或更小。最优选，每个峰具有1.0000的Mw/Mn值。例如，双峰低聚物可具有单体亚单元的以下示例性组合中的任何一个：1-2、1-3、1-4、1-5、1-6、1-7、1-8、1-9、1-10等等；2-3、2-4、2-5、2-6、2-7、2-8、2-9、2-10等等；3-4、3-5、3-6、3-7、3-8、3-9、3-10等等；4-5、4-6、4-7、4-8、4-9、4-10等等；5-6、5-7、5-8、5-9、5-10等等；6-7、6-8、6-9、6-10等等；7-8、7-9、7-10等等；以及8-9、8-10等等。

在一些实例中，含有活化形式的水溶性非肽低聚物的组合物将是三峰的(trimodal)或甚至是四峰的(tetramodal)，其具有如先前描述的一系列单体单元。具有非常明确的低聚物的混合物的低聚物组合物(即为双峰、三峰、四峰等等)可通过混合纯化的单分散低聚物来制备，以获得所需特征的低聚物(仅单体数量不同的两种低聚物的混合物是双峰的；仅单体数量不同的三种低聚物的混合物是三峰的；仅单体数量不同的四种低聚物的混合物是四峰的；)，或可选地，可通过回收“中间馏分(center cut)”从多分散低聚物的柱色谱法获得，以获得所需的和确定的分子量范围的低聚物的混合物。

优选的是，从优选地是单分子或单分散的组合物获得水溶性非肽低聚物。即组合物中的低聚物具有相同的不连续的分子量值，而不是分子量的分布。一些单分散低聚物可从商业来源购买，诸如可获自Sigma-Aldrich的那些，或可选地，可直接从商业上可获得的起始物料(诸如Sigma-Aldrich)制备。可如Chen Y.，Baker，G.L.，J.Org.Chem.，6870-6873(1999)、WO 02/098949和美国专利申请公布2005/0136031中所描述的来制备水溶性非肽低聚物。

连接体或键合(水溶性非肽聚合物通过它们连接于小分子蛋白酶抑制剂)至少包括共价键，并通常包括诸如氧的一个或多个原子、两个原子或多个原子。连接体的性质通常但不必须是直链的。键合“X”(在

中)是稳定的键合，并优选还是酶促稳定的。优选地，键合“X”是具有小于约12个原子，且优选小于约10个原子，且甚至更优选小于约8个原子，且甚至更优选小于约5个原子的链长的键合，由此长度指单链中不计算取代基的原子的数量。例如，脲键合诸如这个R_低聚物-NH-(C＝O)-NH-R′_药物，被认为是具有3个原子(-NH-C(O)-NH-)的链长。在选择的实施方案中，键合不包括另外的间隔基团(spacer group)。

在一些实例中，连接体“X”包括醚、酰胺、尿烷、胺、硫醚、脲或碳-碳键。诸如下文中讨论的和实施例中示例的那些官能团，通常用于形成键合。键合还可较不优选地包括(或邻接于或侧面连接于)间隔基团。在其中由于低聚物的位置相对接近于小分子药物的残基而使偶联物的生物活性显著降低的实例中，间隔物是最有用的，其中间隔物可起到增加低聚物和小分子药物的残基之间的距离的作用。

更加具体地，在选择的实施方案中，间隔部分X可以是以下中的任何一个：“-”(即在小分子蛋白酶抑制剂的残基和水溶性非肽低聚物之间的可以是稳定的或可降解的共价键)、-O-、-NH-、-S-、-C(O)-、C(O)-NH、NH-C(O)-NH、O-C(O)-NH、-C(S)-、-CH₂-、-CH₂-CH₂-、-CH₂-CH₂-CH₂-、-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-、-O-CH₂-、-CH₂-O-、-O-CH₂-CH₂-、-CH₂-O-CH₂-、-CH₂-CH₂-O-、-O-CH₂-CH₂-CH₂-、-CH₂-O-CH₂-CH₂-、-CH₂-CH₂-O-CH₂-、-CH₂-CH₂-CH₂-O-、-O-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-、-CH₂-O-CH₂-CH₂-CH₂-、-CH₂-CH₂-O-CH₂-CH₂-、-CH₂-CH₂-CH₂-O-CH₂-、-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-O-、-C(O)-NH-CH₂-、-C(O)-NH-CH₂-CH₂-、-CH₂-C(O)-NH-CH₂-、-CH₂-CH₂-C(O)-NH-、-C(O)-NH-CH₂-CH₂-CH₂-、-CH₂-C(O)-NH-CH₂-CH₂-、-CH₂-CH₂-C(O)-NH-CH₂-、-CH₂-CH₂-CH₂-C(O)-NH-、-C(O)-NH-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-、-CH₂-C(O)-NH-CH₂-CH₂-CH₂-、-CH₂-CH₂-C(O)-NH-CH₂-CH₂-、-CH₂-CH₂-CH₂-C(O)-NH-CH₂-、-CH₂-CH₂-CH₂-C(O)-NH-CH₂-CH₂-、-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-C(O)-NH-、-NH-C(O)-CH₂-、-CH₂-NH-C(O)-CH₂-、-CH₂-CH₂-NH-C(O)-CH₂-、-NH-C(O)-CH₂-CH₂-、-CH₂-NH-C(O)-CH₂-CH₂、-CH₂-CH₂-NH-C(O)-CH₂-CH₂、-C(O)-NH-CH₂-、-C(O)-NH-CH₂-CH₂-、-O-C(O)-NH-CH₂-、-O-C(O)-NH-CH₂-CH₂-、-NH-CH₂-、-NH-CH₂-CH₂-、-CH₂-NH-CH₂-、-CH₂-CH₂-NH-CH₂-、-C(O)-CH₂-、-C(O)-CH₂-CH₂-、-CH₂-C(O)-CH₂-、-CH₂-CH₂-C(O)-CH₂-、-CH₂-CH₂-C(O)-CH₂-CH₂-、-CH₂-CH₂-C(O)-、-CH₂-CH₂-CH₂-C(O)-NH-CH₂-CH₂-NH-、-CH₂-CH₂-CH₂-C(O)-NH-CH₂-CH₂-NH-C(O)-、-CH₂-CH₂-CH₂-C(O)-NH-CH₂-CH₂-NH-C(O)-CH₂-、二价环烷基、-N(R⁶)-，R⁶是H或选自由以下基团组成的组的有机基：烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基和取代的芳基。

然而，对于本发明来说，当一组原子直接邻接于低聚物部分，且该组原子与低聚物的单体相同，以致该组将表示低聚物链的纯粹的延伸时，该组原子并不被认为是间隔部分。

水溶性非肽低聚物和小分子之间的键合“X”通常通过低聚物(或当需要使低聚物“生长”到蛋白酶抑制剂时的一个或多个单体)的末端上的官能团和蛋白酶抑制剂中的对应官能团的反应来形成。示例性反应在下文中简要描述。例如，低聚物上的氨基可与小分子上的羧酸或活化的羧酸衍生物反应以形成酰胺键合，或反之亦然。可选地，低聚物上的胺与药物上活化的碳酸酯(例如琥珀酰亚胺碳酸酯或苯并三唑基碳酸酯)反应形成氨基甲酸酯键合，或反之亦然。低聚物上的胺与药物上的异氰酸酯(R-N＝C＝O)反应形成脲键合(R-NH-(C＝O)-NH-R′)，或反之亦然。此外，低聚物上的醇(醇盐)基团与药物中的卤代烷或卤化物基团反应形成醚键合，或反之亦然。在又一个偶联方法中，具有醛官能的小分子通过还原性胺化偶联于低聚物的氨基，导致在低聚物和小分子之间形成仲胺键合。

一种特别优选的水溶性非肽低聚物是含有醛官能团的低聚物。在这一点上，低聚物将具有以下结构：CH₃O-(CH₂-CH₂-O)_n-(CH₂)_p-C(O)H，其中(n)是1、2、3、4、5、6、7、8、9和10中的一个，且(p)是1、2、3、4、5、6和7中的一个。优选的(n)值包括3、5和7，且优选的(p)值包括2、3和4。此外，-C(O)H部分α位的碳原子可任选地用烷基取代。

通常，包封不含有官能团的水溶性非肽低聚物的末端以使其不起反应。当低聚物在末端处的确包含除了预期用于形成偶联物的官能团之外的另外的官能团时，选择该基团以使其在形成键合“X”的条件下不起反应，或在形成键合“X”期间保护该基团。

如上所述，偶联前，水溶性非肽低聚物包括至少一个官能团。根据小分子中含有的反应基或引入到小分子中的反应基，该官能团通常包括用于共价连接于小分子的亲电子基团或亲核基团。可存在于低聚物或小分子中的亲核基团的实例包括羟基、胺、肼(-NHNH₂)、酰肼(-C(O)NHNH₂)和硫醇。优选的亲核体包括胺、肼、酰肼和硫醇，特别是胺。用于共价连接于低聚物的大多数小分子药物将具有游离的羟基、氨基、硫代、醛基、酮基或羧基。

可存在于低聚物或小分子中的亲电子官能团的实例包括羧酸、羧酸酯特别是酰亚胺酯、原酸酯、碳酸酯、异氰酸酯、异硫氰酸酯、醛、酮、硫酮、烯基、丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯、丙烯酰胺、砜、马来酰亚胺、二硫化物、碘代、环氧、磺酸酯、硫代磺酸酯、硅烷、烷氧基硅烷和卤代硅烷。这些基团的更加具体的实例包括琥珀酰亚胺基酯或琥珀酰亚胺基碳酸酯、咪唑基(imidazoyl)酯或咪唑基碳酸酯、苯并三唑酯或苯并三唑碳酸酯、乙烯基砜、氯乙基砜、乙烯基吡啶、吡啶基二硫化物(pyridyl disulfide)、碘乙酰胺、乙二醛、二酮、甲磺酸酯、甲苯磺酸酯和三氟乙基磺酸酯(tresylate)(2，2，2-三氟乙烷磺酸酯)。

还包括这些基团中的几种的硫类似物诸如硫酮、硫酮水合物、酮缩硫醇，2-噻唑烷硫酮等等，以及以上部分中的任何一个的水合物或被保护的衍生物(例如，醛水合物、半缩醛、缩醛、酮水合物、半缩酮、缩酮、酮缩硫醇、硫缩醛)。

羧酸的“活化衍生物”指容易地与亲核体反应的羧酸衍生物，其通常远比未衍生化的羧酸更加容易地反应。例如，活化的羧酸包括酰基卤(诸如酰基氯)、酸酐、碳酸酯和酯。这种酯包括通式-(CO)O-N[(CO)-]₂的亚胺酯；例如，N-羟基琥珀酰亚胺基(NHS)酯或N-羟基邻苯二甲酰亚胺基酯。还优选的是咪唑基酯和苯并三唑酯。特别优选的是活化的丙酸酯或丁酸酯，如在共有的美国专利第5,672,662号中所描述的。这些包括式-(CH₂)_2-3C(＝O)O-Q的基团，其中Q优选地选自N-琥珀酰亚胺、N-磺基琥珀酰亚胺、N-邻苯二甲酰亚胺、N-戊二酰亚胺、N-四氢邻苯二甲酰亚胺、N-降冰片烯-2，3-二甲酰亚胺、苯并三唑、7-氮杂苯并三唑和咪唑。

其他优选的亲电子基团包括琥珀酰亚胺基碳酸酯、马来酰亚胺、苯并三唑碳酸酯、缩水甘油醚、咪唑基碳酸酯、对硝基苯基碳酸酯、丙烯酸酯、三氟乙基磺酸酯、醛和邻吡啶基二硫化物。

这些亲电子基团经受与亲核体例如羟基、硫代或氨基的反应以产生不同的键类型。本发明优选的是有利于形成水解稳定的键合的反应。例如，羧酸及其活化的衍生物，包括原酸酯、琥珀酰亚胺基酯、咪唑基酯和苯并三唑酯，分别与以上类型的亲核体反应以形成酯、硫酯和酰胺，其中酰胺是水解上最稳定的。碳酸酯，包括琥珀酰亚胺基碳酸酯、咪唑基碳酸酯和苯并三唑碳酸酯，与氨基反应以形成氨基甲酸酯。异氰酸酯(R-N＝C＝O)分别与羟基或氨基反应以形成氨基甲酸酯(RNH-C(O)-OR′)或脲(RNH-C(O)-NHR′)键合。醛、酮、乙二醛、二酮和它们的水合物或醇加合物(即醛水合物、半缩醛、缩醛、酮水合物、半缩酮和缩酮)优选地与胺反应，随后必要时，还原产生的亚胺以提供胺键合(还原性胺化)。

亲电子官能团中的几种包括亲电子双键，可向该亲电子双键加入亲核基团诸如硫醇以形成，例如硫醚键。这些基团包括马来酰亚胺、乙烯基砜、乙烯基吡啶、丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯和丙烯酰胺。其他的基团包括可由亲核体置换的离去基团；这些基团包括氯乙基砜、吡啶基二硫化物(其包括可裂解的S-S键)、碘乙酰胺、甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、硫代磺酸酯和三氟乙基磺酸酯。环氧化物通过由亲核体开环反应以形成，例如醚键或胺键。将涉及低聚物和小分子上的互补反应基(诸如以上提到的那些反应基)的反应用于制备本发明的偶联物。

在一些实例中，蛋白酶抑制剂可能不具有适合于偶联的官能团。在这一实例中，可以修饰“原始的”蛋白酶抑制剂，使得其具有所需的官能团。例如，如果蛋白酶抑制剂具有酰胺基，但需要胺基时，可通过Hofmann重排、Curtius重排(在酰胺被转化为叠氮化物时)或Lossen重排(在酰胺被转化为羟酰胺(hydroxamide)，随后用亚苄基(tolyene)-2-磺酰氯/碱处理时)将酰胺基修饰成胺基。

可制备含有羧基的小分子蛋白酶抑制剂的偶联物，其中含有羧基的小分子蛋白酶抑制剂偶联于氨基末端的低聚乙二醇，以提供具有将小分子蛋白酶抑制剂激动剂共价连接于低聚物的酰胺基的偶联物。例如，这可通过在偶联试剂(诸如二环己基碳二亚胺或“DCC”)存在下，在无水有机溶剂中，将含有羧基的小分子蛋白酶抑制剂与氨基末端的低聚乙二醇混合来进行。

此外，可制备含有羟基的小分子蛋白酶抑制剂的偶联物，其中含有羟基的小分子蛋白酶抑制剂偶联于低聚乙二醇卤化物，以产生醚(-O-)连接的小分子偶联物。例如，这可通过使用氢化钠将羟基去质子化，随后与卤化物末端的低聚乙二醇反应来进行。

在另一个实例中，通过首先还原酮基以形成对应的羟基，可制备含有酮基的小分子蛋白酶抑制剂的偶联物。此后，现在含有羟基的小分子蛋白酶抑制剂可如本文描述的来偶联。

在又一个实例中，可制备含有胺基的小分子蛋白酶抑制剂的偶联物。在一个方法中，将含有胺基的小分子蛋白酶抑制剂和含有醛的低聚物溶解于合适的缓冲液中，之后加入合适的还原剂(例如NaCNBH₃)。还原后，结果是在含有胺基的小分子蛋白酶抑制剂的胺基和含有醛的低聚物的羰基碳之间形成胺键合。

在用于制备含有胺基的小分子蛋白酶抑制剂的偶联物的另一个方法中，通常在偶联试剂(例如DCC)存在下，将含有羧酸的低聚物与含有胺基的小分子蛋白酶抑制剂混合。结果是在含有胺基的小分子蛋白酶抑制剂的胺基和含有羧酸的低聚物的羰基之间形成酰胺键合。

式I的小分子蛋白酶抑制剂的示例性的偶联物包括具有以下结构的那些偶联物：

(式I-Ca)

(式I-Cb)；和

(式I-Cc)，

其中，对于式I-Ca、式I-Cb和式I-Cc中的每一个：X是稳定的键合；POLY是水溶性非肽低聚物；且R^I1、R^I2、R^I3、R^I4、R^I5和R^I6中的每一个如关于式I所定义的。

小分子蛋白酶抑制剂的优选的偶联物包括具有以下结构的那些偶联物：

其中，在其出现的每个实例中，n是从2至30的整数。

式II的小分子蛋白酶抑制剂的示例性的偶联物包括具有以下结构的那些偶联物：

(式II-Ca)；和

(式II-Cb)，

其中，在其出现的每个实例中：X是稳定的键合；POLY是水溶性非肽低聚物；且R^II1是苄氧羰基或2-喹啉基羰基。

其中，在其出现的每个实例中，n是从2至30的整数。

式III的小分子蛋白酶抑制剂的示例性的偶联物包括具有以下结构的那些偶联物：

(式III-Ca)；和

(式III-Cb)，

其中，在其出现的每个实例中：X是稳定的键合；POLY是水溶性非肽低聚物；且R^III1、R^III2、R^III3、R^III4、R^III5、R^III6、R^III7、R^III8、Y、G、D、E、R^III9、A和B中的每一个如关于式III所定义的。

其中，在其出现的每个实例中，n是从2至30的整数。

式IV的小分子蛋白酶抑制剂的示例性的偶联物包括具有以下结构的那些偶联物：

(式IV-C)

其中：X是稳定的键合；POLY是水溶性非肽低聚物；且R^IV1、R^IV2、R^IV3、R^IV6和R^IV7如关于式IV所定义的。

其中，在其出现的每个实例中，n是从2至30的整数。

式V的小分子蛋白酶抑制剂的示例性的偶联物包括具有以下结构的那些偶联物：

(式V-Ca)；和

(式V-Cb)，

其中，在其出现的每个实例中：X是稳定的键合；POLY是水溶性非肽低聚物；且Z^V、R^V1、R^V2、R^V3、J¹、J²和B中的每一个如关于式V所定义的。

其中，在其出现的每个实例中，n是从2至30的整数。

式VI的小分子蛋白酶抑制剂的示例性的偶联物包括具有以下结构的那些偶联物：

(式VI-C)

其中：X是稳定的键合；POLY是水溶性非肽低聚物；R^VI0是H；且R^VI1、n″、R^VI2、R^VI3、R^VI4、R^4a和Z^VI中的每一个如关于式VI所定义的。

其中，在其出现的每个实例中，n是从2至30的整数。

式VII的小分子蛋白酶抑制剂的示例性的偶联物包括具有以下结构的那些偶联物：

(式VII-C)

其中：X是稳定的键合；POLY是水溶性非肽低聚物；且A^VII、B^VII、x′、D、D′和E^VII中的每一个如关于式VII所定义的。

其中，在其出现的每个实例中，n是从2至30的整数。

式VIII的小分子蛋白酶抑制剂的示例性的偶联物包括具有以下结构的那些偶联物：

(式VIII-Ca)；和

(式VIII-Cb)，

其中：X是稳定的键合；POLY是水溶性非肽低聚物；R^VIII1、R^VIII2和R^VIII3中的每一个如关于式VIII所定义的。

还进一步的示例性的偶联物包括具有以下结构的那些偶联物(其中，关于每个结构，X是稳定的键合且POLY是水溶性非肽低聚物)：

其中，在其出现的每个实例中，X是稳定的键合，POLY是水溶性非肽低聚物，且Val是缬氨酸的残基。

本领域普通技术人员使用常规实验，通过首先制备具有不同重量和官能团的一系列低聚物，且然后通过将偶联物施用于患者，并进行定期的血液和/或尿采样，并测试代谢物的存在和量来获得所需的清除率特征，可确定用于降低代谢的最合适的分子大小和键合。一旦获得每种测试偶联物的一系列代谢特征，则可鉴别合适的偶联物。

为了确定小分子蛋白酶抑制剂或小分子蛋白酶抑制剂和水溶性非肽聚合物的偶联物是否具有抗HIV活性，可测试该化合物。抗HIV活性可按照实验中所描述的来测试。此外，抗HIV活性在人T细胞系中，通过例如Kempf等人(1991)Antimicrob.Agents Chemother.35(11)：2209-2214中公布的方法来测试，HIV-1_3B储备溶液(stock)(每ml 10^4.7 50％组织培养物感染剂量)可稀释100倍，并与每ml 4×10⁵个细胞的MT-4细胞在37℃下孵育1小时(感染复数，每个细胞0.00150％组织培养物感染剂量)。然后将产生的培养物洗涤两次，重新悬浮成每ml培养基10⁵个细胞，以一式三份接种于以一系列半对数单位稀释于培养基中的一体积1％化合物的二甲基亚砜溶液中。病毒对照培养物可以相同的方式处理，除了没有化合物被加入到培养基中。在没有化合物或病毒下，孵育细胞对照。然后，在第5天，通过使用溴化3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四氮唑(MTT)在比色测定中测量光密度(OD)。参见Pauwels等人(1988)J.Virol Methods20：309-321。病毒和对照OD值取六个测定的平均值。HIV细胞病理效应(CPE)的百分比抑制通过下式来计算：[(平均OD-病毒对照OD/(细胞对照OD-病毒对照OD)]×100。通过在没有病毒时，一式两份用化合物的连续稀释液孵育，确定细胞毒性。细胞毒性的百分比根据下式来确定：(平均OD/细胞对照OD)×100。EC₅₀代表提供细胞病理效应的50％抑制的化合物的浓度。CCIC₅₀是提供50％细胞毒性效应的化合物的浓度。应注意，当水溶性非肽低聚物的偶联出现在位于沙奎那韦的26位的羟基时，没有测量到抗HIV活性。参见表1，实施例3。尽管不希望受到理论的束缚，但似乎这一羟基的可用性对于活性来说是需要的(“结合羟基”)。结果，优选的是，在一些实施方案中，偶联物没有与水溶性非肽低聚物在结合羟基处连接。可由本领域普通技术人员通过例如实验测试，和/或通过对比所关注的蛋白酶抑制剂的结构和沙奎那韦的结构，并确定蛋白酶抑制剂中哪个羟基对应沙奎那韦的26位的“结合羟基”，来确定任何给定蛋白酶抑制剂的“结合羟基”。

本发明还包括药物制剂，其包括与药物赋形剂组合的如本文提供的偶联物。一般来说，偶联物自身将是固体形式(例如沉淀物)，其可与合适的药物赋形剂组合，该药物赋形剂可以是固体或液体形式。

示例性的赋形剂包括但不限于，选自由糖类、无机盐、抗微生物剂、抗氧化剂、表面活性剂、缓冲剂、酸、碱及其组合组成的组的那些赋形剂。

糖类，诸如糖、衍生的糖诸如糖醇、糖醛酸、酯化的糖和/或糖聚合物，可提供为赋形剂。具体的糖类赋形剂包括，例如：单糖，诸如果糖、麦芽糖、半乳糖、葡萄糖、D-甘露糖、山梨糖以及类似的单糖；二糖，诸如乳糖、蔗糖、海藻糖、纤维二糖以及类似的二糖；多糖，诸如棉子糖、松三糖、麦芽糖糊精、右旋糖酐、淀粉以及类似的多糖；以及糖醇，诸如甘露醇，木糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、木糖醇、山梨醇(葡糖醇)、吡喃糖基山梨醇(pyranosyl sorbitol)、肌醇以及类似的糖醇。

赋形剂还可包括无机盐或缓冲剂，诸如柠檬酸、氯化钠、氯化钾、硫酸钠、硝酸钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠及其组合。

制剂还可包括用于防止或阻止微生物生长的抗微生物剂。适合于本发明的抗微生物剂的非限制性实例包括苯扎氯铵、苄索氯铵、苄醇、西吡氯铵、氯丁醇、苯酚、苯乙醇、硝酸苯汞、硫柳汞(thimersol)及其组合。

抗氧化剂也可存在于制剂中。抗氧化剂用于防止氧化，从而防止偶联物或制剂的其他组分的变质。用于本发明的合适的抗氧化剂包括，例如抗坏血酸棕榈酸酯、叔丁对甲氧酚、丁基化羟基甲苯、次磷酸、一硫代甘油(monothioglycerol)、没食子酸丙酯、亚硫酸氢钠、甲醛次硫酸氢钠、焦亚硫酸钠及其组合。

表面活性剂可作为赋形剂存在。示例性的表面活性剂包括：聚山梨酯诸如“吐温20”和“吐温80”，以及聚氧丙烯诸如F68和F88(两者都可从BASF，Mount Olive，New Jersey获得)；脱水山梨醇酯；脂质，诸如磷脂，诸如卵磷脂和其他的磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺(尽管优选不以脂质体的形式)、脂肪酸和脂肪酸酯；类固醇，诸如胆固醇；以及螯合剂，诸如EDTA、锌和其他这类合适的阳离子。

在制剂中，酸或碱可作为赋形剂存在。可使用的酸的非限制性实例包括选自由以下的酸组成的组的那些酸：盐酸、乙酸、磷酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、甲酸、三氯乙酸、硝酸、高氯酸、磷酸、硫酸、富马酸及其组合。合适的碱的实例包括但不限于选自由以下的碱组成的组的碱：氢氧化钠、醋酸钠、氢氧化铵、氢氧化钾、醋酸铵、醋酸钾、磷酸钠、磷酸钾、柠檬酸钠、甲酸钠、硫酸钠、硫酸钾、丁烯二酸钾(potassium fumerate)及其组合。

组合物中偶联物的量将根据许多因素而变化，但当组合物被储存于单位剂量容器中时，将最佳为有效治疗剂量。可通过重复施用递增量的偶联物，以便确定哪个量产生了临床所需终点，来实验确定治疗有效剂量。

组合物中的任何单种贼形剂的量将根据赋形剂的活性和组合物的特定需要而变化。通常，任何单种赋形剂的最佳量将通过常规实验确定，即通过制备含有变化量的赋形剂(范围从低到高)的组合物，检查稳定性和其他参数，且然后确定获得最佳性能且没有显著副作用的范围。

然而，一般来说，赋形剂将以按重量计约1％至约99％，优选地按重量计约5％-98％，更优选地按重量计约15％-95％的赋形剂的量存在于组合物中，且最优选浓度小于按重量计30％。

这些上述的药物赋形剂连同其他的赋形剂描述于“Remington：The Science & Practice of Pharmacy(雷明顿：药学科学与实践)”，第19版，Williams & Williams，(1995)；“Physician′s Desk Reference(医师案头参考)”，第52版，Medical Economics，Montvale，NJ(1998)和Kibbe，A.H.，Handbook of Pharmaceutical Excipients(药物赋形剂手册)，第三版，American Pharmaceutical Association，Washington，D.C.，2000。

药物组合物可采用许多形式，且在这一方面本发明不受限制。示例性的制剂最优选以适合于口服施用的形式，诸如片剂、囊片(caplet)、胶囊、凝胶胶囊(gel cap)、锭剂、分散体、悬浮液、溶液、酏剂、糖浆、糖锭、透皮贴片、喷雾剂、栓剂和粉末。

对于口服活性的那些偶联物，口服剂型是优选的，且包括片剂、囊片、胶囊、凝胶胶囊、悬浮液、溶液、酏剂和糖浆，且还可包括被任选地包封的多种颗粒、小珠、粉末或小丸。这种剂型使用药物配制领域的技术人员所知的常规方法来制备，并且描述于相关的教科书中。

例如，可使用标准片剂加工过程和设备来制备片剂和囊片。当制备含有本文描述的偶联物的片剂或囊片时，优选直接压制和制粒技术。除了偶联物之外，片剂和囊片一般将含有无活性的药学上可接受的载体材料，诸如粘合剂、润滑剂、崩解剂、填充剂、稳定剂、表面活性剂、着色剂以及类似物。粘合剂用于向片剂提供粘聚性(cohesivequality)，并因此确保片剂保持完整。合适的粘合剂材料包括但不限于淀粉(包括玉米淀粉和预胶凝淀粉)、明胶、糖(包括蔗糖、葡萄糖、右旋糖和乳糖)、聚乙二醇、蜡以及天然的和合成的树胶例如阿拉伯树胶、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素聚合物(包括羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素以及类似的纤维素)和硅酸镁铝。润滑剂用于促进片剂制备，提供粉末流动，并且防止当释放压力时颗粒顶裂(即颗粒破裂)。有用的润滑剂是硬脂酸镁、硬脂酸钙和硬脂酸。崩解剂用于促进片剂的崩解，且通常是淀粉、粘土、纤维素、褐藻胶、树胶或交联聚合物。填充剂包括例如，诸如二氧化硅、二氧化钛、氧化铝、滑石、高岭土、粉状纤维素和微晶纤维素的物质以及诸如甘露醇、脲、蔗糖、乳糖、右旋糖、氯化钠和山梨醇的可溶物质。如本领域所公知的，稳定剂用于抑制或延迟药物分解反应，药物分解反应包括，作为实例，氧化反应。

胶囊还是优选的口服剂型，在这种情况下，可以包封液体或凝胶(例如在凝胶胶囊的情况下)或固体(包括诸如颗粒、小珠、粉末或小丸的微粒)形式的含有偶联物的组合物。合适的胶囊包括硬胶囊和软胶囊，并通常由明胶、淀粉或纤维素材料制成。两件式(two-piece)硬明胶胶囊优选地，诸如用明胶带或类似物密封。

包括基本干燥形式的胃肠外制剂(通常为冻干物或沉淀物，其可以是粉末或饼的形式)，以及制备用于注射的制剂，该制剂通常是液体，并需要重新构建干燥形式的胃肠外制剂的步骤。用于注射前重新构建固体组合物的合适稀释剂的实例包括用于注射的抑菌水，5％右旋糖水溶液、磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液、盐水、无菌水、去离子水及其组合。

在一些情况下，预期用于胃肠外施用的组合物可采用非水溶液、悬浮液或乳剂的形式，每个通常都是无菌的。非水溶剂或媒介物的实例是丙二醇、聚乙二醇、诸如橄榄油和玉米油的植物油、明胶和可注射有机酯诸如油酸乙酯。

本文描述的胃肠外制剂还可包含佐剂，诸如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。通过加入杀菌剂、通过除菌滤器的过滤、辐射或加热，使制剂无菌。

还可使用常规透皮贴片或其他透皮传递系统，通过皮肤施用偶联物，其中偶联物被包含在作为药物传递设备的、将固定于皮肤的层状结构中。在这样一种结构中，偶联物被包含在上部支持层(backinglayer)下面的层或“储库(reservoir)”中。层状结构可含有单个储库，或其可含有多个储库。

偶联物还可被配制成用于直肠施用的栓剂。关于栓剂，偶联物与栓剂基质材料混合，所述基质材料是(例如，在室温下仍为固体但在体温下软化、熔化或溶解的赋形剂)诸如可可脂(coca butter)(可可油)、聚乙二醇、甘油明胶、脂肪酸及其组合。栓剂可通过例如进行以下步骤来制备(不必按照所提供的顺序)：熔化栓剂基质材料以形成熔体；加入偶联物(在熔化栓剂基质材料之前或之后)；将熔体倾入模具中；冷却熔体(例如将含有熔体的模具放置于室温环境中)以由此形成栓剂；并将栓剂从模具中移出。

本发明还提供用于将本文提供的偶联物施用于患有对用该偶联物治疗有响应的疾患的患者的方法。该方法包括一般口服施用治疗有效量的偶联物(优选地提供为药物制剂的一部分)。还包括其他的施用模式，诸如肺部、鼻、口腔、直肠、舌下、透皮和胃肠外。如本文所用，术语“胃肠外”包括皮下、静脉内、动脉内、腹膜内、心脏内、鞘内和肌内注射以及输注注射。

在使用胃肠外施用的实例中，可能需要使用比先前描述的低聚物稍大的低聚物，该低聚物具有范围为从约500至30K道尔顿的分子量(例如具有约500、1000、2000、2500、3000、5000、7500、10000、15000、20000、25000、30000或更大的分子量)。

施用方法可用于治疗可通过施用特定的偶联物治疗或预防的任何疾患。本领域普通技术人员了解具体的偶联物可有效治疗何种疾患。所施用的实际剂量将根据以下因素而变化：受治疗者的年龄、体重和一般状况以及所治疗的疾患的严重性、保健专家的判断和所施用的偶联物。治疗有效量为本领域技术人员所知，和/或描述于相关的参考文本和文献中，和/或可实验确定。一般来说，治疗有效量是在以下范围中的一个或多个的量：从0.001mg/天至10000mg/天；从0.01mg/天至7500mg/天；从0.10mg/天至5000mg/天；从1mg/天至4000mg/天；和从10mg/天至2000mg/天。

任何给定的偶联物(再次优选提供为药物制剂的一部分)的单位剂量可以根据临床医师的判断、患者的需要等等来以不同的给药方案施用。具体的给药方案将为本领域普通技术人员所知，或可使用常规方法实验确定。示例性的剂量方案包括但不限于一天五次、一天四次、一天三次、一天两次、一天一次、一周三次、一周两次、一周一次、每月两次、每月一次及其任何组合的施用。一旦已经实现临床终点，就停止组合物的给药。

施用本发明的偶联物的一个优势是相对于母体药物，可实现首过代谢的降低。这一结果对基本上通过穿过消化道代谢的许多口服施用的药物来说是有利的。这样，可通过选择低聚物的分子大小、键合和提供所需清除率特性的共价连接的位置，来调节偶联物的清除率。本领域普通技术人员可根据本文的教导确定低聚物的理想分子大小。与对应的未偶联的小药物分子对比，偶联物的首过代谢的优选的降低包括：至少约10％；至少约20％；至少约30；至少约40；至少约50％；至少约60％；至少约70％；至少约80％和至少约90％。

因此，本发明提供了用于降低活性剂代谢的方法。该方法包括以下步骤：提供单分散或双峰偶联物，每个偶联物包含衍生于小分子药物的部分，小分子药物通过稳定的键合共价连接于水溶性低聚物，其中所述偶联物表现出与没有连接到水溶性低聚物的小分子药物的代谢速率相比，降低的代谢速率；以及将偶联物施用于患者。通常，施用经选自由以下组成的组的一种施用类型来进行：口服施用、透皮施用、口腔施用、透黏膜施用、阴道施用、直肠施用、胃肠外施用和肺部施用。

尽管偶联物降低许多类型的代谢(包括I期和II期代谢)的用途可能被削弱，但当小分子药物由肝酶(例如细胞色素P450同工型的一种或多种)和/或一种或多种肠酶代谢时，偶联物是特别有用的。

本文引用的所有文章、书籍、专利、专利公布和其他出版物通过引用以其整体并入。在本说明书中的教导与通过引用并入的技术之间不一致的情况下，应以本说明书中的教导的含义为准。

实验

应理解，尽管已经描述了本发明连同某些优选的和具体的实施方案，但以上的描述以及随后的实施例意在示例，且并不限制本发明的范围。在本发明的范围内的其他方面、优势和改良对本发明所属领域的技术人员来说将是明显的。

在附加的实施例中涉及的所有化学试剂是商业上可获得的，除非另外指出。PEG-mer的制备描述于例如美国专利申请公布第2005/0136031号中。以下实施例中所用的所有低聚(乙二醇)甲醚是单分散和色谱纯的，如反相色谱法所确定的。

实施例1

PEG-沙奎那韦偶联物的合成

沙奎那韦的C₂₆位的羟基处的偶联

A.26-m-PEG-3-O-沙奎那韦(n＝3)的合成

将NaH(60％于矿物油中，72mg，1.8mmol)加入到沙奎那韦游离碱(170mg，0.30mmol)的二甲基甲酰胺(5ml)溶液中。在氮气下于室温，将混合物搅拌15分钟，随后加入在二甲基甲酰胺(1ml)中的Br-(CH₂CH₂O)₃-CH₃(273mg，1.2mmol)。在氮气下，将产生的溶液在50℃的油浴中加热4小时。然后，通过使用旋转蒸发器除去所有的溶剂。通过反相制备型HPLC分离获得纯的26-m-PEG-3-O-沙奎那韦(76mg，0.093mmol，分离收率31％)。

26-m-PEG-7-O-沙奎那韦(n＝7)的合成

将NaH(60％于矿物油中，108mg，2.7mmol)加入到沙奎那韦游离碱(300mg，0.45mmol)的二甲基甲酰胺(10ml)溶液中。在氮气下于室温，将混合物搅拌15分钟，随后加入在二甲基甲酰胺(1ml)中的Br-(CH₂CH₂O)₇-CH₃(724mg，1.8mmol)。在氮气下，将产生的溶液在50℃的油浴中加热4小时。然后，通过使用旋转蒸发器除去所有的溶剂。通过反相制备型HPLC分离获得纯的26-m-PEG-7-O-沙奎那韦(100mg，0.10mmol，分离收率22％)

实施例2

PEG-沙奎那韦偶联物的合成

沙奎那韦的C₁₅位的酰胺基处的偶联

15-m-PEG-7-NHCO-沙奎那韦和15-二-m-PEG-7-NCO-沙奎那韦(n＝7)的合成

26-MEM-O-沙奎那韦的合成。-30℃，在氮气下，将丁基锂(1.58mmol，0.63mL，2.5M在己烷中)通过注射器加入到沙奎那韦游离碱(530mg，0.79mmol)的无水四氢呋喃(～30mL)溶液中。-30℃下搅拌5分钟后，加入在1mL无水四氢呋喃中的MEMCl(118mg，0.95mmol)。将反应溶液缓慢升至室温，并保持过夜(18小时)。HPLC显示几乎所有的游离沙奎那韦已经消失，并且形成收率90％的26-MEM-O-沙奎那韦。通过反相制备型HPLC分离后，获得纯的无色固体26-MEM-O-沙奎那韦。

26-MEM-O-15-m-PEG-7-NHCO-沙奎那韦的合成。将氢化钠(21mg，0.53mmol，60％于矿物油中)加入到26-MEM-O-沙奎那韦(50mg，0.066mmol)的二甲基甲酰胺(～8mL)溶液中。室温下搅拌15分钟后，加入在～1mL的二甲基甲酰胺中的Br-(CH₂CH₂O)₇-CH₃(159mg，0.40mmol)。在氮气下于室温，将反应混合物搅拌2天。HPLC显示形成收率～50％的26-MEM-O-15-m-PEG-7-NHCO-沙奎那韦。然后，通过加入0.1N盐酸溶液(～3mL)以破坏过量的氢化钠来终止反应。50℃下通过旋转蒸发器除去所有的溶剂以获得粘性固体。不纯化该产物，并将其直接用于下一合成步骤。

15-m-PEG-7-NHCO-沙奎那韦的合成。将26-MEM-O-15-m-PEG-7-NHCO-沙奎那韦的反应混合物溶解于～10mL的2N盐酸甲醇溶液中。室温下将溶液搅拌4天。HPLC显示已除去所有的MEM保护基，并形成收率～50％的15-m-PEG-7-NHCO-沙奎那韦。反相制备型HPLC分离后，获得纯的15-m-PEG-7-NHCO-沙奎那韦(35mg，0.035mmol，分离收率53％)，LC-MS：计算值：993.2；实测值：993.5。

26-MEM-O-15-二-m-PEG-7-NCO-沙奎那韦的合成。将氢化钠(26mg，0.64mmol，60％于矿物油中)加入到26-MEM-O-沙奎那韦(30mg，0.040mmol)的二甲基甲酰胺(～5mL)溶液中。室温下搅拌15分钟后，加入在～1mL的二甲基甲酰胺中的Br-(CH₂CH₂O)₇-CH₃(96mg，0.24mmol)。在氮气下于室温，将反应混合物搅拌2天。HPLC显示形成收率～23％的26-MEM-O-15-二-m-PEG-7-NCO-沙奎那韦。然后通过加入0.1N盐酸溶液(～3mL)以破坏过量的氢化钠来终止反应。50℃下通过旋转蒸发器除去所有的溶剂以获得粘性固体。不纯化该产物，并将其直接用于下一合成步骤。

15-二-m-PEG-7-NCO-沙奎那韦的合成。将26-MEM-O-二-15-m-PEG-7-NCO-沙奎那韦的反应混合物溶解于～10mL的2N盐酸甲醇溶液中。室温下将溶液搅拌过夜。HPLC显示已除去所有的MEM保护基，并形成收率～37％的15-二-m-PEG-7-NCO-沙奎那韦。反相制备型HPLC分离后，获得纯的15-二-m-PEG-7-NCO-沙奎那韦(11mg，0.0084mmol，分离收率21％)，LC-MS：计算值：1315.6；实测值：1315.6。

15-m-PEG-3-NHCO-沙奎那韦(n＝3)的合成。

26-MEM-O-15-m-PEG-3-NHCO-沙奎那韦的合成。将氢化钠(37mg，0.92mmol，60％于矿物油中)加入到26-MEM-O-沙奎那韦(88mg，0.12mmol)的二甲基甲酰胺(～20mL)溶液中。室温下搅拌15分钟后，加入在～1mL的二甲基甲酰胺中的Br-(CH₂CH₂O)₃-CH₃(158mg，0.70mmol)。在氮气下于室温，将反应混合物搅拌过夜(～23小时)。HPLC显示形成收率～47％的26-MEM-O-15-m-PEG-3-NHCO-沙奎那韦。然后通过加入0.1N盐酸溶液(～3mL)以破坏过量的氢化钠来终止反应。50℃下通过旋转蒸发器除去所有的溶剂以获得粘性固体。不纯化该产物，并将其直接用于下一合成步骤。

15-m-PEG-3-NHCO-沙奎那韦的合成。将粗的26-MEM-O-15-m-PEG-3-NHCO-沙奎那韦产物溶解于～30mL的2N盐酸甲醇溶液中。室温下将溶液搅拌4小时。HPLC显示已除去所有的MEM保护基，并形成收率～41％的15-m-PEG-3-NHCO-沙奎那韦。反相制备型HPLC分离后，获得纯的15-m-PEG-3-NHCO-沙奎那韦(20mg，0.024mmol，分离收率20％)，LC-MS：计算值：817.0；实测值：817.5。

15-m-PEG-5-NHCO-沙奎那韦(n＝5)的合成

26-MEM-O-15-m-PEG-5-NHCO-沙奎那韦的合成。将氢化钠(59mg，1.48mmol，60％于矿物油中)加入到26-MEM-O-沙奎那韦(140mg，0.18mmol)的二甲基甲酰胺(～30mL)溶液中。室温下搅拌15分钟后，加入在～1mL的二甲基甲酰胺中的Br-(CH₂CH₂O)₅-CH₃(349mg，1.11mmol)。在氮气下于室温，将反应混合物搅拌2天。HPLC显示形成收率～52％的26-MEM-O-15-m-PEG-5-NHCO-沙奎那韦。然后通过加入0.1N盐酸溶液(～3mL)以破坏过量的氢化钠来终止反应。50℃下通过旋转蒸发器除去所有的溶剂以获得粘性固体。不纯化该产物，并将其直接用于下一合成步骤。

15-m-PEG-5-NHCO-沙奎那韦的合成。将26-MEM-O-15-m-PEG-5-NHCO-沙奎那韦的反应混合物溶解于～15mL的2N盐酸甲醇溶液中。室温下将溶液搅拌4小时。HPLC显示已除去所有的MEM保护基，并形成收率～50％的15-m-PEG-5-NHCO-沙奎那韦。反相制备型HPLC分离后，获得纯的15-m-PEG-5-NHCO-沙奎那韦(32mg，0.035mmol，分离收率20％)，LC-MS：计算值：905.1；实测值：905.5。

实施例3

在CEM-SS细胞中抗HIV-1效力的评价

以化合物在DMSO中的1.0μM的高测试浓度测试。在用于抗病毒测定前，使CEM-SS细胞在T-75瓶中传代。在进行测定当天，将细胞分为1∶2，以便确保在感染时，它们处于指数生长期。使用血细胞计数器和锥虫蓝排除法来进行总细胞和存活率定量。应用于测定的细胞的细胞存活率超过95％。将细胞以5×10⁴个细胞/mL重新悬浮于组织培养基中，并将其加入体积50μL的含有药物的微量滴定板中。

所用的病毒是嗜淋巴细胞病毒株HIV-1_RF。该病毒从NIH AIDS研究和参考试剂计划获得，并在CEM-SS细胞中生长，用于制备储备病毒库。对于每个测定，从冷冻器中取出预先滴定的等份病毒，并使其在生物安全柜中缓慢解冻至室温。将病毒再次悬浮并稀释到组织培养基中，使得加入到50μL体积的各孔中的病毒的量是确定在感染后6天中提供约90％的细胞杀死的量。通过在CEM-SS细胞中的终点滴定计算的TCID₅₀表明，这些测定中感染复数约为0.01。

每个板包括细胞对照孔(仅有细胞)、病毒对照孔(细胞加病毒)、化合物细胞毒性孔(仅有细胞加化合物)、化合物比色对照孔(仅有化合物)以及实验孔(化合物加细胞加病毒)。用一式三份抗病毒效力的测量和一式两份细胞毒性的测量来评价样品。使用以半对数稀释的六个浓度，以便确定IC₅₀值并测量细胞的细胞毒性(如果可测量)。

测定结束时，测定板用基于可溶的四氮唑的染料MTS(CellTiterReagent，Promega)染色，以确定细胞存活率并定量化合物的细胞毒性。MTS由代谢活性细胞的线粒体酶代谢以产生可溶的甲(formazan)产物，允许快速定量分析细胞存活率和化合物的细胞毒性。MTS是稳定的溶液，不需要在使用前制备。测定结束时，向每个孔加入20μL的MTS。各孔在37℃下孵育4个到6个小时。粘板密封物(adhesive plate sealer)代替盖使用，将密封的板倒转数次以混合可溶的甲

产物，并在490/650nm下用Molecular Devices Vmax读板器分光光度读板。

使用计算机程序(Southern Research Institute，Frederick MD)，确定各种值，包括IC₅₀(病毒复制的50％抑制)、TC₅₀(细胞存活率的50％降低)和抗病毒指数(抗病毒指数＝TC₅₀/IC₅₀)。值在下表1中提供。

表1

CEM-SS细胞中的抗HIV-1效力

性质	沙奎那韦	26-m-PEG-3-O-沙奎那韦	26-m-PEG-7-O-沙奎那韦	15-m-PEG-7-NHCO-沙奎那韦	二-15-m-PEG-7-NCO-沙奎那韦
性质	沙奎那韦	26-m-PEG-3-O-沙奎那韦	26-m-PEG-7-O-沙奎那韦	15-m-PEG-7-NHCO-沙奎那韦	二-15-m-PEG-7-NCO-沙奎那韦	体外活性IC₅₀(μM)	0.002	无活性	无活性	0.05	0.56
细胞毒性TC₅₀(μM)	＞0.10	＞1.00	＞1.00	＞1.00	＞1.00	体外活性IC₅₀(μM)	0.002	无活性	无活性	0.05	0.56
细胞毒性TC₅₀(μM)	＞0.10	＞1.00	＞1.00	＞1.00	＞1.00	抗病毒指数	＞26.3	----	----	＞19.6	＞1.8

实施例4

PEG-阿扎那韦的合成

制备PEG-阿扎那韦。本实施例依据的方法图示显示如下(方案中粗体的化合物数字仅对应本实施例4的文本中提供的化合物数字)。

合成试剂的图示

mPEG₃-SC-碳酸酯

将mPEG₃-OH(2.0g，12.1mmol)和无水二氯甲烷(25mL)置于100mL烧瓶中。将澄清溶液冷却至0℃，且然后缓慢加入三乙胺(1.86mL，13.4mmol，1.1当量)。将溶液在0℃下搅拌15分钟，且然后加入到含有DSC(3.1g，12.1mmol)的二氯甲烷(20mL)悬浮液的第二个烧瓶中。使反应混合物平衡至室温。约18小时后，用二氯甲烷(60mL)稀释淡黄色的反应混合物，将其转移至分液漏斗，并用去离子水(100mL)分配。水层用二氯甲烷(4×80mL)萃取。合并的有机物用水、饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠洗涤。将干燥的有机层过滤、减压下浓缩并在高真空下干燥过夜，以获得2.79g(75％)淡黄色油状mPEG₃-SC-碳酸酯。¹H NMR(CDCl₃)δ4.40(m，2H)，3.80(m，2H)，3.70(bs，6H)，3.60(m，2H)，3.35(s，3H)，2.80(s，4H)；LC/MS＝306(M+1)。

mPEG₅-SC-碳酸酯

将mPEG₅-OH(2.0g，7.92mmol)和无水二氯甲烷(15mL)置于100mL烧瓶中。将澄清溶液冷却至0℃，且然后缓慢加入三乙胺(1.32mL，9.51mmol，1.2当量)。将溶液在0℃下搅拌15分钟，且然后加入到含有DSC(2.02g，7.92mmol)的二氯甲烷(15mL)悬浮液的第二个烧瓶中。使反应混合物平衡至室温。约18小时后，用二氯甲烷(40mL)稀释淡黄色的反应混合物，将其转移至分液漏斗，并用去离子水(80mL)分配。水层用二氯甲烷(4×50mL)萃取。合并的有机物用水、饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠洗涤。将干燥的有机层过滤、减压下浓缩并在高真空下干燥过夜，以获得2.59g(83％)淡黄色油状mPEG₅-SC-碳酸酯。¹H NMR(CDCl₃)δ4.45(m，2H)，3.75(m，2H)，3.68(bs，16H)，3.55(m，2H)，3.34(s，3H)，2.80(s，4H)；LC/MS＝394(M+1)。

mPEG₆-SC-碳酸酯

将mPEG₆-OH(2.0g，6.74mmol)和无水二氯甲烷(12mL)置于100mL烧瓶中。将澄清溶液冷却至0℃，且然后缓慢加入三乙胺(1.12mL，8.10mmol，1.2当量)。将溶液在0℃下搅拌15分钟，且然后加入到含有DSC(1.73g，6.74mmol)的二氯甲烷(15mL)悬浮液的第二个烧瓶中。使反应混合物平衡至室温。约18小时后，用二氯甲烷(50mL)稀释淡黄色的反应混合物，将其转移至分液漏斗，并用去离子水(80mL)分配。水层用二氯甲烷(4×50mL)萃取。合并的有机物用水、饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠洗涤。将干燥的有机层过滤、减压下浓缩并在高真空下干燥过夜，以获得1.92g(65％)淡黄色油状mPEG₆-SC-碳酸酯。¹H NMR(CDCl₃)δ4.48(m，2H)，3.78(m，2H)，3.68(bs，20H)，3.58(m，2H)，3.38(s，3H)，2.84(s，4H)；LC/MS＝438(M+1)。

mPEG₇-SC-碳酸酯

将mPEG₇-OH(2.0g，5.87mmol)和无水二氯甲烷(15mL)置于100mL烧瓶中。将澄清溶液冷却至0℃，且然后缓慢加入三乙胺(1.22mL，8.81mmol，1.5当量)。将溶液在0℃下搅拌15分钟，且然后加入到含有DSC(2.25g，8.81mmol)的二氯甲烷(15mL)悬浮液的第二个烧瓶中。使反应混合物平衡至室温。约18小时后，用二氯甲烷(50mL)稀释淡黄色的反应混合物，将其转移至分液漏斗，并用去离子水(80mL)分配。水层用二氯甲烷(4×50mL)萃取。合并的有机物用水、饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠洗涤。将干燥的有机层过滤、减压下浓缩并在高真空下干燥过夜，以获得2.82g(90％)淡黄色油状mPEG₇-SC-碳酸酯。¹H NMR(CDCl₃)δ4.45(m，2H)，3.78(m，2H)，3.65(bs，24H)，3.58(m，2H)，3.39(s，3H)，2.85(s，4H)；LC/MS＝482(M+1)。

mPEG₃-L-叔亮氨酸

将L-叔亮氨酸(0.43g，3.27mmol)和去离子水(12mL)置于125mL烧瓶中。将溶液搅拌30分钟，直到澄清，随后加入固体碳酸氢钠(1.27g，15.0mmol，4.6当量)。在氮气下于室温，搅拌混浊的溶液。在第二个烧瓶中，将mPEG₃-SC-碳酸酯(1.24g，4.09mmol，1.25当量)吸收于去离子水(12mL)中，并将这一溶液一次性全部加入到碱性L-叔亮氨酸溶液中。在氮气下于室温，搅拌混浊的淡黄色反应混合物。约20个小时后，将澄清的混合物冷却至0℃，并用2N HCl小心地酸化至pH 1(20mL)。将酸性混合物转移至分液漏斗，并用二氯甲烷(50mL)和额外的水(50mL)分配。水层用二氯甲烷(4×50mL)萃取。合并的有机层用水和饱和氯化钠洗涤，并用硫酸钠干燥。将干燥的有机层过滤、减压下浓缩并在高真空下干燥过夜，以获得0.83g(79％)浅黄色油状mPEG₃-L-叔亮氨酸。¹H NMR(CDCl₃)δ5.45(d，1H)，4.26-4.35(m，2H)，4.14(m，1H)，3.70(bs，17H)，3.65(m，2H)，3.32(s，3H)，0.96(s，9H)；LC/MS＝322(M+1)。

mPEG₅-L-叔亮氨酸

将L-叔亮氨酸(0.68g，5.21mmol)和去离子水(20mL)置于250mL烧瓶中。将溶液搅拌30分钟，直到澄清，随后加入固体碳酸氢钠(1.96g，23.3mmol，4.5当量)。在氮气下于室温，搅拌混浊的溶液。在第二个烧瓶中，将mPEG₅-SC-碳酸酯(3)吸收于去离子水(20mL)中，并将这一溶液一次性全部加入到碱性L-叔亮氨酸溶液中。在氮气下于室温，搅拌混浊的淡黄色反应混合物。约18个小时后，将澄清的混合物冷却至0℃，并用2N HCl小心地酸化至pH 1(18mL)。将酸性混合物转移至分液漏斗，并用二氯甲烷(50mL)和额外的水(50mL)分配。水层用二氯甲烷(4×50mL)萃取。合并的有机层用水和饱和氯化钠洗涤，并用硫酸钠干燥。将干燥的有机层过滤、减压下浓缩并在高真空下干燥过夜，以获得2.04g(96％)浅黄色油状mPEG₅-L-叔亮氨酸。¹H NMR(CDCl₃)δ5.45(d，1H)，4.26-4.35(m，2H)，4.14(m，1H)，3.70(bs，，17H)，3.65(m，2H)，3.38(s，3H)，1.02(s，9H)；LC/MS＝410(M+1)。

mPEG₆-L-叔亮氨酸

将L-叔亮氨酸(0.45g，3.47mmol)和去离子水(15mL)置于250mL烧瓶中。将溶液搅拌30分钟，直到澄清，随后加入固体碳酸氢钠(1.31g，15.6mmol，4.5当量)。在氮气下于室温，搅拌混浊的溶液。在第二个烧瓶中，将mPEG₆-SC-碳酸酯(1.9gm，4.34mmol，1.25当量)吸收于去离子水(15mL)中，并将这一溶液一次性全部加入到碱性L-叔亮氨酸溶液中。在氮气下于室温，搅拌混浊的淡黄色反应混合物。约18个小时后，将澄清的混合物冷却至0℃，并用2N HCl小心地酸化至pH 1(10mL)。将酸性混合物转移至分液漏斗，并用二氯甲烷(50mL)和额外的水(50mL)分配。水层用二氯甲烷(4×50mL)萃取。合并的有机层用水和饱和氯化钠洗涤，并用硫酸钠干燥。将干燥的有机层过滤、减压下浓缩并在高真空下干燥过夜，以获得1.39g(90％)浅黄色油状mPEG₆-L-叔亮氨酸。¹H NMR(CDCl₃)δ5.47(d，1H)，4.10-4.30(m，2H)，4.14(m，1H)，3.70(bs，20H)，3.65(m，2H)，3.38(s，3H)，1.02(s，9H)；LC/MS＝454(M+1)。

mPEG₇-L-叔亮氨酸

将L-叔亮氨酸(0.31g，2.32mmol)和去离子水(15mL)置于250mL烧瓶中。将溶液搅拌30分钟，直到澄清，随后加入固体碳酸氢钠(0.89g，10.6mmol，4.5当量)。在氮气下于室温，搅拌混浊的溶液。在第二个烧瓶中，将mPEG₇-SC-碳酸酯(1.4gm，2.91mmol，1.25当量)吸收于去离子水(15mL)中，并将这一溶液一次性全部加入到碱性L-叔亮氨酸溶液中。在氮气下于室温，搅拌混浊的淡黄色反应混合物。约18个小时后，将澄清的混合物冷却至0℃，并用2N HCl小心地酸化至pH 1(8mL)。将酸性混合物转移至分液漏斗，并用二氯甲烷(50mL)和额外的水(50mL)分配。水层用二氯甲烷(4×50mL)萃取。合并的有机层用水和饱和氯化钠洗涤，并用硫酸钠干燥。将干燥的有机层过滤、减压下浓缩并在高真空下干燥过夜，以获得1.0g(85％)浅黄色油状mPEG₇-L-叔亮氨酸。¹H NMR(CDCl₃)δ5.46(d，1H)，4.10-4.25(m，2H)，4.14(m，1H)，3.70(bs，24H)，3.65(m，2H)，3.38(s，3H)，1.02(s，9H)；LC/MS＝498(M+1)。

合成PEG-阿扎那韦的方案

方法

在氮气氛下进行对空气或湿气敏感的反应物和溶剂的所有反应。一般来说，试剂和溶剂(除了基于PEG的试剂外)如所购买的使用，不进一步纯化。分析薄层色谱法在二氧化硅F₂₅₄玻璃板(Biotage)上进行。成分通过254nm的紫外光或通过用磷钼酸喷洒显像(visulalized)。在Biotage SP4系统上进行快速色谱法。¹H NMR谱：Bruker 300MHz；信号的化学位移表达为百万分率(ppm)，且参照所用的氘代溶剂。MS谱：快速拆分Zorbax C18柱；4.6×50mm；1.8μm。HPLC方法具有以下参数：柱，Betasil C18，5-μm(100×2.1mm)；流速，0.5mL/分钟；梯度，0-23分钟，水/0.1％TFA中的20％乙腈/0.1％TFA到100％乙腈/0.1％TFA；检测230nm。t_R指保留时间。缩写：TPTU，O-(1，2-二氢-2-氧代-1-吡啶基)-N，N，N′，N′-四甲基四氟硼酸脲；DIPEA，N，N′-二异丙基乙胺。

4-吡啶-2-基-苯甲醛(3)

将4-甲酰基-苯基硼酸(5.0g，33.0mmol)和2-溴吡啶(5.53g，35.0mmol，1.05当量)在265mL的4∶3甲苯/95％乙醇中的混合物用氮气脱气30分钟，且然后在氮气氛下加热，产生澄清溶液。加入在50mL的4∶4甲苯和95％乙醇的混合物中的Pd(PPh₃)₄(0.77g)的浆状物，随后加入50mL的3M Na₂CO₃水溶液。将产生的混合物在77℃下温和地回流。16个小时后，将反应混合物冷却至室温，并通过过滤除去固体。将滤液转移至分液漏斗，并分层。水层用甲苯(3×50mL)萃取。合并的有机物用水，然后用饱和氯化钠洗涤，并用硫酸钠干躁。过滤溶液，且将滤液在减压下浓缩以获得黄色油。通过Biotage色谱(40+M柱体；梯度，0％至5％甲醇/二氯甲烷)纯化获得4.13g(68％)淡黄色固体(3)。TLC R_f(己烷/乙酸乙酯，2∶1)＝0.25；¹H NMR(CDCl₃)δ10.1(s，HCO)，8.77(d，1H)，8.20(d，2H)，8.00(d，2H)，7.81(m，2H)，7.31(q，1H)；MS(M)⁺＝184；HPLC t_R 1.2分钟。

N-1-(叔丁氧羰基)-N-2-[4-(吡啶-2基)苯亚甲基]-腙(4)

将(3)(0.50g，2.73mmol)、肼基甲酸叔丁酯(0.36g，2.73mmol)、2-丙醇(3.0mL)和甲苯(3.0mL)加入到100mL烧瓶中。在惰性气氛下，将混合物加热至回流(85℃)，持续2小时，逐渐地冷却至室温，并在氮气下搅拌过夜。16小时后，过滤反应混合物，并用甲苯和己烷(1∶3；100mL)的冷混合物洗涤滤饼。真空下干燥该滤饼以获得0.73g(90％)灰白色固体(4)。TLC R_f(己烷/乙酸乙酯，1∶2)＝0.38；¹H NMR(CDCl₃)δ8.70(d，1H)，8.02(m，3H)，7.87(s，1H)，7.81(s，1H)，7.76(m，3H)，7.25(m，1H)，1.55(s，9H)；MS(M)⁺＝298；HPLC t_R 2.1分钟。

N’-(4-吡啶-2-基-苄基)-肼羧酸叔丁基酯(5)

将在THF(3.0mL)中的(4)(0.45g，1.50mmol)置于100mL烧瓶中。将99％的氰基硼氢化钠(0.12g，1.80mmol，1.2当量)加入这一溶液，随后加入p-TsOH(0.35g，1.80mmol，1.2当量)的THF(3.0mL)溶液。1.5小时后，加入额外的p-TsOH(0.35g，1.80mmol，1.2当量)的THF(3.0mL)溶液。室温下16小时后，减压下除去THF。白色残留物在乙酸乙酯(35mL)和水(35mL)之间分配。水层用乙酸乙酯(3×35mL)萃取。合并的有机物用水，然后用饱和氯化钠洗涤，且然后用硫酸钠干燥。过滤后，在减压下浓缩，并在高真空下干燥6小时，获得0.41g(91％)白色固体(5)。TLC R_f(己烷/乙酸乙酯，1∶2)＝0.30；¹HNMR(DMSO-d₆)δ8.64(d，1H)，8.26(sb，HN)，8.02(d，2H)，7.93(d，1H)，7.85(dd，1H)，7.42(d，2H)，7.32(dd，1H)，4.80(m，HN)，3.92(d，2H)，1.38(s，9H)；MS(M)⁺＝300；HPLC t_R 7.0分钟。

N′-(3-叔丁氧羰基氨基-2-羟基-4-苯基-丁基)-N′-(4-吡啶-2-基-苄基)-肼羧酸叔丁基酯(7)

将(5)(1.0g，3.34mmol)、(6)(2S，3S)-1，2-环氧-3-(Boc-氨基)-4-苯基丁烷(2.78g，10.5mmol，3.16当量)和2-丙醇(15mL)置于100mL烧瓶中。将反应加热至回流。回流约61小时后，撤去加热，并将混合物冷却至室温。将水/冰(50mL)加入到冷却的混合物中。将二氯甲烷(50mL)加入到含水的混合物中，且然后将该混合物转移至分液漏斗。水层用二氯甲烷(3×50mL)萃取。合并的有机物用水，然后用饱和氯化钠洗涤，且然后用硫酸钠干燥。过滤干燥的有机溶液，并将滤液在减压下浓缩，且然后在高真空下干燥过夜。黄色泡沫通过Biotage色谱(40+M柱体；0％至5％甲醇/二氯甲烷，超过25CV)纯化以获得1.24g白色固体(7)(66％)。TLC R_f(己烷/乙酸乙酯，1∶2)＝0.45；¹HNMR(CD₃OD)δ8.60(d，1H)，7.88(m 4H)，7.50(d，2H)，7.36(m，1H)，7.25(m，4H)，7.18(m，1H)，3.93(m，2H)，3.70(m，2H)，3.0-2.6(m，4H)，1.33(s，9H)，1.30(s，9H)；MS(M)⁺＝563；HPLC t_R 9.6分钟。

3-氨基-4-苯基-1-[N-(4-吡啶-2-基-苄基)-肼基]-丁-2-醇三盐酸盐(8)

将Boc-氮杂-等排体(7)(1.2g，2.1mmol)吸收于1，4-二氧六环(16mL)中，并于室温在氮气下搅拌。5分钟后，经注射器加入4N HCl(12mL)。立即有沉淀物形成，且然后将混合物于室温在氮气下搅拌。约18小时后，在减压下除去二氧六环。黄色残留物用甲苯(3×25mL)共沸，且然后在高真空下干燥。高真空下6小时后，获得0.92g(91％)黄色固体(8)。¹H NMR(CD₃OD)δ8.87(d，1H)，8.69(m，1H)，8.42(d，1H)，8.06(m，3H)，7.80(d，2H)，7.28(m，6H)，4.25(m，3H)，3.13(m，2H)，2.88(d，2H)；MS(M)⁺＝472。

二-mPEG _n -阿扎那韦的合成

二-mPEG₃-阿扎那韦的合成

将在无水二氯甲烷(3mL)中的mPEG₃-叔亮氨酸(0.34gm，1.05mmol，3.0当量)置于100mL烧瓶中，并冷却至0℃。然后，加入TPTU(0.31gm，1.05mmol，3.0当量)和Hunigs碱(0.36mL，2.11mmol，6.0当量)。将混浊的溶液在0℃下搅拌15分钟，且然后加入固体二氨基主链三盐酸盐(8)(0.16gm，0.35mmol)，随后二氯甲烷漂洗(3mL)。撤去冰浴，并使反应混合物平衡至室温。约20小时后，用二氯甲烷(20mL)稀释反应混合物。将混合物转移至分液漏斗，并用去离子水(50mL)分配。水层用二氯甲烷(4×30mL)萃取。合并的有机物用水、饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠洗涤。有机层用硫酸钠干燥。滤掉干燥剂，并在减压下浓缩滤液以获得黄色油。使用Biotage(40+M柱体；梯度洗脱：0％至5％甲醇/二氯甲烷)进行纯化以获得0.14gm(45％)澄清油状二-mPEG₃-阿扎那韦。TLC R_f(5％甲醇/二氯甲烷)＝0.22；¹H NMR(CDCl₃)δ8.71(d，1H)，7.98(d，2H)，7.81(m，2H)，7.45(d，2H)，7.10-7.30(m，10H)，6.22(d，1H)，5.35(d，1H)，4.25(m，4H)，4.01(m，4H)，3.50-3.80(m，24H)，3.38(s，3H)，2.70-3.0(m，4H)，0.85(d，18H)；MS(M)⁺＝969；HPLC t_R 7.85分钟。(96％纯度)。

二-mPEG₅-阿扎那韦

将在无水二氯甲烷(10mL)中的m-PEG₅-叔亮氨酸(2.0gm，4.88mmol，4.6当量)置于100mL烧瓶中，并冷却至0℃。然后，加入TPTU(1.45gm，4.88mmol，4.6当量)和Hunigs碱(1.85mL，10.6mmol，10.0当量)。将混浊的溶液在0℃下搅拌15分钟，且然后加入固体二氨基主链三盐酸盐(8)(0.50gm，1.06mmol)，随后二氯甲烷漂洗(10mL)。撤去冰浴，并使反应混合物平衡至室温。约20小时后，用二氯甲烷(40mL)稀释反应混合物。将混合物转移至分液漏斗，并用去离子水(60mL)分配。水层用二氯甲烷(4×50mL)萃取。合并的有机物用水、饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠洗涤。有机层用硫酸钠干燥。滤掉干燥剂，并在减压下浓缩滤液以获得黄色油。使用Biotage(40+M柱体；梯度洗脱：0％至5％甲醇/二氯甲烷)进行纯化以获得0.70gm(58％)淡黄色油状二-mPEG₅-阿扎那韦。TLC R_f(5％甲醇/二氯甲烷)＝0.23；¹H NMR(CDCl₃)δ8.60(d，1H)，7.88(d，2H)，7.65(m，2H)，7.38(d，2H)，7.10-7.25(m，8H)，6.18(d，1H)，5.30(m，2H)，4.15(m，4H)，3.92(m，3H)，3.45-3.65(m，40H)，3.30(s，3H)，2.65-2.90(m，4H)，0.80(d，18H)；MS(M)⁺＝1146；HPLC t_R 7.72分钟。(98％纯度)。

二-mPEG₆-阿扎那韦

将在无水二氯甲烷(3mL)中的mPEG₆-叔亮氨酸(0.81gm，1.78mmol，3.0当量)置于100mL烧瓶中，并冷却至0℃。然后，加入EDC(0.34gm，1.78mmol，3.0当量)和HOBT(0.24gm，1.78mmol，3.0当量)。将混浊的溶液在0℃下搅拌15分钟，且然后加入固体二氨基主链三盐酸盐(8)(0.28gm，0.59mmol)，随后二氯甲烷漂洗(5mL)。撤去冰浴，并使反应混合物平衡至室温。约28小时后，用二氯甲烷(35mL)稀释反应混合物。将混合物转移至分液漏斗，并用去离子水(60mL)分配。水层用二氯甲烷(4×50mL)萃取。合并的有机物用水、饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠洗涤。有机层用硫酸钠干燥。滤掉干燥剂，并在减压下浓缩滤液以获得黄色油。使用Biotage(40+M柱体；梯度洗脱：0％至5％甲醇/二氯甲烷)进行纯化以获得0.27gm(40％)澄清油状二-mPEG₆-阿扎那韦。TLC R_f(5％甲醇/二氯甲烷)＝0.17；¹H NMR(CDCl₃)δ8.75(d，1H)，78.02(d，2H)，7.85(m，2H)，7.50(d，2H)，7.10-7.25(m，6H)，6.22(d，1H)，5.40(m，2H)，4.20(m，4H)，4.15(m，3H)，3.52-3.70(m，48H)，3.38(s，3H)，2.75-2.92(m，4H)，0.85(d，18H)；MS(M)⁺＝1234；HPLC t_R 7.70分钟。(96％纯度)。

二-mPEG₇-阿扎那韦：将在无水二氯甲烷(10mL)中的mPEG₇-叔亮氨酸(2.13gm，4.29mmol，4.6当量)置于100mL烧瓶中，并冷却至0℃。然后，加入TPTU(1.28gm，4.29mmol，4.6当量)和Hunigs碱(1.14mL，6.53mmol，7.0当量)。将混浊的溶液在0℃下搅拌15分钟，且然后加入固体二氨基主链三盐酸盐(0.44gm，0.93mmol)，随后二氯甲烷漂洗(10mL)。撤去冰浴，并使反应混合物平衡至室温。约22小时后，用二氯甲烷(30mL)稀释反应混合物。将混合物转移至分液漏斗，并用去离子水(50mL)分配。水层用二氯甲烷(4×50mL)萃取。合并的有机物用水、饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠洗涤。有机层用硫酸钠干燥。滤掉干燥剂，并在减压下浓缩滤液以获得黄色油。使用Biotage(40+M柱体；梯度洗脱：0％至5％甲醇/二氯甲烷)进行纯化以获得0.47gm(38％)淡黄色油状二-mPEG₇-阿扎那韦。¹H NMR(CDCl₃)δ8.60(d，1H)，7.90(d，2H)，7.70(m，2H)，7.35(d，2H)，7.10-7.25(m，8H)，6.12(d，1H)，5.30(m，2H)，4.10(m，4H)，3.92(m，3H)，3.50-3.70(m，56H)，3.28(s，3H)，2.62-2.90(m，4H)，0.78(d，18H)；MS(M)⁺＝1321；HPLC t_R 7.69分钟。(96％纯度)。

实施例5

PEG-地瑞那韦的合成-“方法A”

使用第一种方法制备PEG-地瑞那韦。这一实施例依据的方法图示显示如下(图示中粗体的化合物数字仅对应本实施例5的文本中提供的化合物数字)。

L-古洛糖酸-1，4-内酯(2)的合成

50℃和50psi氢压下，在Parr氢化器中使用10％Pd/C(2.2g)氢化170ml水中的L-抗坏血酸(23.1g，0.13mol)溶液，持续24小时。通过过滤除去催化剂，并真空下除去水以获得23.2g白色结晶固体(0.13mol，99％)。当在甲醇-乙酸乙酯中重结晶后，获得22.0g所需的产物。¹H NMR(DMSO)：δ5.80(d，1H).5.30(d，1H)，4.95(d，1H)，4.65(t，1H)，4.45(m，1H)，4.23-4.15(m，2H)，3.75(m，1H)，3.48(m，2H)。

5，6-异亚丙基-L-古洛糖酸-1，4-内酯(3)的合成

将L-古洛糖酸-1，4-内酯(11.08g，62.0mmol)的二甲基甲酰胺(100ml)溶液冷却至10℃，并在搅拌下分批加入对甲苯磺酸(0.09g，0.50mmol)。10℃下，将异丙烯基甲醚(5.83g，80.5mmol)滴加于产生的溶液。撤去冷却浴，并将溶液在室温下进一步搅拌24小时。然后用碳酸钠十水合物(11g)处理该溶液，并将悬浮液剧烈搅拌2小时。通过过滤除去固体，并使用旋转蒸发器浓缩母液(滤液)。将黄色残留物在甲苯(25ml)中重结晶。通过抽吸分离产物，用己烷/乙醇(9∶1，50ml)洗涤，并干燥：无色晶体(3)收率：11.22g(82.7％)。¹H NMR(DMSO)：δ5.87(d，1H)，5.42(br.1H)，4.43(t，1H)，4.41-4.21(m，3H).4.06(m，1H)，3.75(m，1H)，1.35(s，3H)，1.30，(s，3H)。

E-R-3-(2，2-二甲基-[1，3]二氧戊环-4-基)-丙烯酸乙酯(5)的合成

32-34℃下，在3小时内，向良好搅拌的水(24g)中的KIO₄(10.60g，0.046mol，2.3当量)、KHCO₃(4.60g，0.046mol，2.3当量)的浆状物中滴加L-5，6-O-异亚丙基-古洛糖酸-1，4-内酯(4.37g，0.020mol)的水(2.70g)和THF(22.90g)溶液。将反应混合物在32℃下搅拌4.5小时。将反应混合物冷却至5℃，并在此温度下保持14个小时。通过过滤除去固体，滤饼通过再次成浆用THF(3.0mL)和另一部分THF(4.0mL)洗涤。13-17℃下，25分钟内，在搅拌下向滤液滴加膦酰乙酸三乙酯(TEPA，3.90g，0.017mol)。随后，17-25℃下，在30分钟内分批加入K₂CO₃(16.80g)。将反应混合物在20℃下搅拌另外17个小时。分离水和THF相，并用100mL甲苯萃取水相两次。合并的THF和甲苯相在真空下浓缩，获得2.80g淡黄色液体。¹H NMR显示存在E-R-3-(2，2-二甲基-[1，3]二氧戊环-4-基)-丙烯酸乙酯(5，78％)。因此，按照(3)计，(5)的粗收率是70％收率。0.50g上述残留物通过快速色谱法在硅胶上使用3/7(v/v)乙酸乙酯/正庚烷作为洗脱液来纯化。这提供了具有纯度96％的0.37g(5)。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)6.79(1H，dd，J＝16.0，5.3Hz)，6.01(1H，dd，J＝16.0，0.9Hz)，4.58(1H，q，J＝6.0Hz)，4.16-4.06(3H，m)，3.58(1H，t，J＝7.6Hz)，1.35(3H，s)，1.31(3H，s)，1.20(3H，t，J＝7.0Hz)。¹³C NMR(75MHz，CDCl₃)

166.0(C)，144.7(CH)，122.4(CH)，110.2(C)，75.0(CH)，68.8(CH₂)，60.6(CH₂)，26.5(CH₃)，25.8(CH3)，14.2(CH₃)。LC-MS，C₁₀H₁₇O₄(M+H⁺)的计算值201.1，实测值201.1。

(3aS，4S，6aR)-4-甲氧基-四氢-呋喃并[3，4-b]呋喃-2(3H)-酮(α-7)

将1.75g未色谱纯化的(5)(78wt％纯，1.37g，6.80mmol)加入到5.0mL甲醇中的硝基甲烷(458mg，7.50mmol)中，并将溶液冷却至10℃。随后，10-21℃下，在35分钟内滴加DBU(1.03g，6.80mmol)。20℃下搅拌18小时后，将产生的暗红色溶液冷却至0℃，并在0℃下，在30分钟内滴加NaOMe(15mL的0.50M甲醇溶液，7.50mmol)。0℃下搅拌30分钟后，在0-5℃下通过在剧烈搅拌下滴加3小时，使反应混合物在H₂SO₄(2.43g，96％，23.80mmol)的甲醇(2.43g)溶液中淬灭。0-2℃下搅拌2小时后，在0-6℃，通过滴加1小时，使反应混合物在搅拌的KHCO₃(3.53g)的水(6.80mL)浆状物中淬灭。0℃下，用H₂SO₄(96％)将pH调至4.1。加热至20℃后，通过过滤除去盐，并用乙酸乙酯(3×3.75mL)洗涤。洗液在后续的萃取中使用。真空下浓缩过滤的母液以除去甲醇。向产生的残留物中加入水(0.80g)，并用H₂SO₄(96％)将pH调至4.1。产生的水溶液用乙酸乙酯(7.0mL，4×5.0mL)萃取。35-40℃下，在真空中浓缩合并的有机相。挥发物与异丙醇(3×1.40g)共蒸发，获得由(α-7)和(β-7)的粗混合物组成的残留物(1.46g)，将它们在70℃下溶解于异丙醇(2.02g)中。除去不溶的材料，并将滤液冷却，使(α-7)自发结晶。晶体通过过滤分离，用异丙醇(2×1.0mL，0℃)洗涤，并在40℃下在真空中干燥，直到实现恒重，获得灰白色结晶产物(α-7)[390mg，按(5)计，收率37％]。纯度＞99％。将母液和第一次(α-7)结晶的洗液在真空中浓缩，加入甲醇(1.20mL)，并在真空中浓缩产生的混合物。再次加入甲醇(1.20mL)，并在真空中再次浓缩该混合物。向残留物加入甲醇(0.45g)和甲磺酸(MeSO₃H，0.027g，0.28mmol)，并将该溶液加热至回流。回流(60-65℃)一小时后，将溶液冷却至33℃，用三乙胺(0.029g，按MeSO₃H计，1.05当量)中和，并在真空中浓缩。向产生的残留物加入异丙醇(1.20mL)，并将该混合物在真空中浓缩以获得0.88g粗产物。47℃下，将残留物溶解于异丙醇(0.37g)中。在2.5小时内，将产生的溶液冷却至2℃。通过过滤分离结晶产物，用异丙醇(3×0.20mL，0℃)洗涤，并在40℃下在真空中干躁，直到实现恒重，获得第二批灰白色结晶产物(α-7)(0.098g)。纯度＞99％。第一批和第二批(α-7)的总收率按(5)计是46％。

用Agilent 6890GC(EPC)和25mm的并具有5μm的膜厚度的CP-Sil 5CB柱(部件号CP7680(Varian)或等同物)，使用5.1kPa的柱头压，40mL/分钟的分流和250℃的注射温度，进行化合物(α-7)和(β-7)的GC测定。所用的升温速率为：初始温度50℃(5分钟)，速率10℃/分钟，最终温度250℃(15分钟)。在250℃的温度下，用FID检测器进行检测。保留时间如下：氯苯(内标)17.0分钟，(α-7)24.9分钟，(β-7)25.5分钟。通过在甲醇中在环境温度下使用0.2当量MeSO₃H，在16小时内，将纯的(α-7)(如上制备)差向异构为(α-7)和(β-7)的约3∶1的混合物，来确定(β-7)的保留时间(¹H NMR和GC-MS确认，仅形成(β-7))。对于(β-7)的定量，已假设(β-7)的响应因子与(α-7)的响应因子相同。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ5.15(1H，dd，J＝7.4，3.8Hz)，4.88(1H，s)，4.10(1H，d，J＝11.1Hz)，3.96(1H，dd，J＝10.9，3.8Hz)，3.33(3H，s)，3.10-2.99(1H，m)，2.84(1H，dd，J＝18.2，11.0Hz)，2.51(1H，dd，J＝18.3，3.7Hz)。¹³C NMR(75MHz，CDCl₃)δ175.9(C)，110.0(CH)，83.0(CH)，70.6(CH₂)，54.5(CH₃)，45.1(CH)，31.7(CH₂)。LC-MS：C₇H₁₁O₄(M+H⁺)的计算值159.06，实测值159.06.e.e.＞99％(由GC确定)。

(3R，3aS，6aR)-六氢-呋喃并[2，3-b]呋喃-3-醇(8)

30分钟内，将10％LiBH₄(2.16g，1.1当量)的溶液滴加于(α-7)(1.42g，9.0mmo1)的THF(8.0g)溶液中，并在50℃下，将反应混合物搅拌2.5小时。将获得的悬浮液冷却至-10℃，并在4小时的时间段内滴加32％HCl水溶液(1.36g，0.012mol，按LiBH₄计1.3当量)，且保持温度＜-5℃。-10℃下，搅拌额外的2小时后，在1小时内滴加三乙胺(1.325g，0.013mol，按HCl计1.1当量)，且保持温度＜0℃。将反应混合物升温，并在大气压下浓缩至残留物重量约5.0g，将残留物吸收于乙酸乙酯(18.0g)中，并在大气压下再次浓缩至残留物重量约5.0g。将残留物吸收于乙酸乙酯(18.0g)中，搅拌回流15分钟，并冷却至0℃。通过过滤除去盐，并用冷(0℃)的乙酸乙酯(2×1.5g)洗涤。＜40℃下，将合并的滤液真空浓缩至无色油，其含有0.94g的(8)[7.23mmol，按(α-7)计80％，依据¹H NMR，纯度87wt％]。通过快速色谱法在硅胶上使用乙酸乙酯作为洗脱液(R_f＝0.56)纯化该油。这获得0.89g(6.85mmol)的(8)，且纯度99％，其对应按(α-7)计的76％的收率。¹HNMR(300MHz，DMSO-d₆)δ5.52(1H，d，J＝4.8Hz)，5.14(1H，d，J＝4.5Hz)，4.27-4.17(1H，m)，3.84-3.74(2H，m)，3.72-3.62(1H，m)，3.33(1H，dd，J＝22.6，14.1Hz)，2.77-2.66(1H，m)，2.24-2.14(1H，m)，1.75-1.59(1H，m)。¹³C NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ108.8(CH)，72.1(CH₂)，69.4(CH)，68.8(CH₂)，45.8(CH)，24.6(CH₂)。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ5.62(1H，d，J＝4.9Hz)，4.36(1H，q，J＝7.2Hz)，3.94-3.77(3H，m)，3.52(1H，dd，J＝8.9，7.1Hz)，3.20(1H，s)，2.84-2.73(1H，m)，2.30-2.20(1H，m)，1.87-1.72(1H，m)。¹³C NMR(75MHz，CDCl₃)δ109.3(CH)，72.7(CH₂)，70.4(CH)，69.7(CH₂)，46.3(CH)，24.7(CH₂).GC-MS：C₆H₁₁O₃(M+H+)的计算值131.0，实测值131.0。e.e.＞99％(由GC确定)。用HP 5890GC以及60mm的和0.25mm内径的且具有0.25μm膜厚度的Supelco 24305Betadex柱，使用30psi的柱头压，1.4mL/分钟的柱流，37.5mL/分钟的分流和250℃的注射温度，进行8的e.e.确定。所用的升温速率为：初始温度80℃(1分钟)，速率4℃/分钟，最终温度180℃(5分钟)。在250℃的温度下，用FID检测器进行检测。保留时间如下：(8)27.1分钟，(3S，3aR，6aS)-六氢-呋喃并[2，3-b]呋喃-3-醇[(8)的对映体]27.3分钟。e.e.确定所需的外消旋的(8)根据与针对旋光(8)所描述的相同的过程制备，除了使用外消旋的(α-7)作为起始物料之外。

化合物(9)的合成

将三乙胺(1.10mL，10.40mmol)加入到化合物(8)(500mg，3.85mmol)和N，N-二琥珀酰亚胺(1.47g，5.75mmol)的20mL CH₃CN溶液中。将产生的溶液在室温下搅拌7小时。减压下浓缩反应混合物。产生的残留物用20mL饱和KHCO₃处理，且然后用乙酸乙酯(150mL×3)萃取。有机相用水(150mL×3)洗涤，并用Na₂SO₄干燥。除去溶剂，并在真空下干燥后，获得化合物(9)(827mg，收率79％)。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ2.00(m，1H).2.15(m，1H)，2.87(br.，4H)，3.14(m，1H)，3.96(m，2H)，4.03(m，1H)，4.12(m，1H)5.28(m，1H)，5.76(d，1H)。

化合物(11)的合成

室温下，将异丁胺(1.60g，21.92mmol)加入到搅拌的化合物(10)(962mg，3.65mmol)的2-丙醇(40mL)溶液中。产生的混合物在75℃下反应6小时。这一时期后，减压下浓缩反应混合物。将产生的残留物溶解于5ml的2-丙醇中，并再次减压下浓缩。获得所需的白色固体产物(1.17g，收率：95％)；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ0.91(d，3H)，0.93(d，3H)，1.37(s，9H)，1.72(m，1H)，2.42(d，2H)，2.70(d，2H)，2.86(m，1H)，3.01(dd，1H)，3.48(m，1H)，3.84(br.，1H)，4.74(d，1H)，7.20-7.33(m，5H)；LC-MS(m/z)计算值336.25，实测值337.25[M+H]+。

化合物(12)的合成

23℃下，将4-硝基苯磺酰氯(1.16g，5.21mmol)加入到搅拌的先前制备的胺(1.16g，3.48mmol)在CH₂Cl₂(30mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)的混合物中的溶液中。产生的混合物在室温下搅拌16小时。然后用CH₂Cl₂萃取混合物，并用无水Na₂SO₄干燥。减压下除去溶剂，随后经硅胶柱色谱法(3％EtOAc于CH₂Cl₂中作为洗脱液)，产生白色无定形固体化合物(12)(1.29g，72％)：¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ0.86(d，3H)，0.87(d，3H)，1.36(s，9H)，1.84-1.92(m，1H)，2.86-2.95(m，2H)，2.98(d，2H)，3.19(d，2H)，3.75-3.82(m，2H)，4.64(d，1H)，7.22-7.32(m，5H)，7.95(d，2H)，8.32(d，2H)；LC-MS(m/z)计算值521.22，实测值544.3[M+Na]+。

化合物(13)的合成

将Pd/C(100mg)加入到化合物(12)(1.28g，2.40mmol)的EtOAc(20mL)溶液中。于室温在氢气(15psi)下，将混合物搅拌10小时。反应混合物经硅藻土(Celite)过滤，并用EtOAc洗涤滤饼。减压下除去溶剂，随后经硅胶柱色谱法(7％EtOAc于CHCl₃中作为洗脱液)，获得白色固体的对应的芳香胺(1.16g，98％)：¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ0.86(d，3H)，0.89(d，3H)，1.34(s，9H)，1.86(m，1H)，2.77(dd，1H)，2.89-3.15(m，5H)，3.85(br.，2H)，4.05(br.，1H)，4.17(s，2H)，4.65(br.，1H)，6.71(d，2H)，7.19-7.30(m，5H)，7.58(d，2H)；LC-MS(m/z)计算值491.3，实测值：492.3[M+H]⁺，514.23[M+Na]⁺。

化合物(16)的合成(16a、16b和16c的通用过程)

85℃下，将化合物(13)(98mg，0.20mmol)和mPEG_n-CHO(n＝3、5或7，分别进行)(0.30mmol)的CH₃OH(10mL)溶液在共沸条件下搅拌90分钟(已除去4.0ml CH₃OH)。这一时期后，将反应混合物冷却至室温，并分批加入硼氢化钠(20当量)。50℃下，将混合物搅拌2小时，且然后用碳酸氢钠淬灭反应。加入150ml DCM。溶液用H₂O(3×150ml)洗涤。有机相用硫酸钠干燥，且然后减压下浓缩。残留物通过硅胶柱色谱法(2％MeOH于CHCl₃中作为洗脱液)纯化以分别获得无色油状化合物(16a)、(16b)或(16c)(收率70-80％)。化合物(16a)(n＝3)，¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ0.86(d，3H)，0.89(d，3H)，1.33(s，9H)，1.82(m，1H)，2.77(dd，1H)，2.89-2.92(m，2H)，2.99-3.11(m，3H)，3.75-3.80(m，2H)，3.32(m，2H)，3.38(s，3H)，3.57(m，2H)，3.60-3.90(m，11H)，4.04(br.，1H)，4.62(d，1H)，4.85(t，1H)，6.60(d，2H)，7.19-7.30(m，5H)，7.54(d，2H)；LC-MS(m/z)计算值637.3，实测值：638.3[M+H]⁺。化合物(16b)(n＝5)，¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ0.86(d，3H)，0.89(d，3H)，1.34(s，9H)，1.80-1.86(m，1H)，2.77(dd，1H)，2.89-2.92(m，3H)，2.99-3.11(m，2H)，3.32(m，2H)，3.36(s，3H)，3.54(m，2H)，3.58-3.90(m，19H)，4.65(d，1H)，4.98(t，1H)，6.59(d，2H)，7.19-7.30(m，5H)，7.54(d，2H)。化合物(16c)(n＝7)，¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ0.86(d，3H)，0.89(d，3H)，1.34(s，9H)，1.80-1.86(m，1H)，2.77(dd，1H)，2.89-3.11(m，5H)，3.32(m，2H)，3.36(s，3H)，3.54(m，2H)，3.58-3.90(m，27H)，4.65(d，1H)，4.98(t，1H)，6.59(d，2H)，7.19-7.30(m，5H)，7.54(d，2H)。

化合物(17)的合成(17a、17b和17c的通用过程)

将化合物(17a)、(17b)或(17c)(每个分别进行)(0.151mmol)在30％三氟乙酸的CH₂Cl₂(4mL)混合物中的溶液搅拌60分钟。这一时期后，减压下浓缩反应混合物，并将产生的残留物再次溶解于CH₂Cl₂(5.0mL)中。向这一溶液加入化合物9(45mg，0.17mmol)和三乙胺(0.155mL，1.51mmol)。将产生的混合物搅拌2小时。然后，减压下浓缩反应混合物，并通过硅胶柱色谱法纯化残留物(2％MeOH于CHCl₃中作为洗脱液)以分别获得油状化合物(17a)、(17b)和(17c)(收率：80-89％)。化合物(17a)(n＝3)，¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ0.87(d，3H)，0.93(d，3H)，1.42-1.46(m，1H)，1.57-1.65(m，1H)，1.79-1.85(m，1H)，2.75-2.81(m，2H)，2.87-2.98(m，3H)，3.05-3.16(m，2H)，3.34(m，2H)，3.38(s，3H)，3.58(m，2H)，3.64-3.74(m，10H)，3.82-4.00(m，5H)，4.97-5.01(m，2H)，5.63(d，1H)，6.67(d，2H)，7.18-7.28(m，5H)，7.53(d，2H)；LC-MS(m/z)计算值：693.3，实测值694.3[M+H]⁺。化合物(17b)(n＝5)，¹HNMR(300MHz，CDCl₃)δ0.87(d，3H)，0.93(d，3H)，1.46(m，1H)，1.60(m，1H)，1.82(m，1H)，2.75-2.81(m，2H)，2.87-2.98(m，3H)，3.05-3.16(m，2H)，3.32(m，2H)，3.36(s，3H)，3.54(m，2H)，3.64-3.74(m，18H)，3.82-3.92(m，5H)，4.97-5.01(m，2H)，5.63(d，1H)，6.67(d，2H)，7.18-7.28(m，5H)，7.54(d，2H)；LC-MS(m/z)计算值781.4，实测值782.5[M+H]⁺。化合物(17c)(n＝7)，¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ0.87(d，3H)，0.92(d，3H)，1.46(m，1H)，1.60(m，1H)，1.82(m，1H)，2.75-2.81(m，2H)，2.87-2.98(m，3H)，3.05-3.16(m，2H)，3.30(m，2H)，3.36(s，3H)，3.54(m，2H)，3.64-3.74(m，26H)，3.82-3.92(m，5H)，4.97-5.05(m，3H)，5.63(d，1H)，6.62(d，2H)，7.18-7.28(m，5H)，7.53(d，2H)；LC-MS(m/z)计算值：869.4，实测值870.3[M+H]⁺。

实施例6

PEG-地瑞那韦的合成-“方法B”

使用第二种方法制备PEG-地瑞那韦。这一实施例依据的方法图示显示如下(图示中粗体的化合物数字仅对应本实施例6的文本中提供的化合物数字)。

化合物(18)的合成

23℃下，将mPEG₃-NH₂(489mg，3.0mmol)加入到搅拌的化合物(10)(264mg，1.0mmol)[根据实施例12中合成化合物(10)的过程制备]的2-丙醇(10mL)溶液中。将产生的混合物在75℃下搅拌6小时。这一时期后，减压下浓缩反应混合物。残留物通过硅胶柱色谱法(biotage，CH₃OH/DCM，4-15％CH₃OH，20CV)纯化。获得390mg的粘性油状的对应的胺(18)(收率91.5％)。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)

1.35(s，9H)，1.85-1.89(m，1H)，2.70(m，1H)，2.86(m，4H)，3.00(dd，1H)，3.35(s，3H)，3.54-3.75(m，10H)，3.85(m，1H)，4.70(d，1H)，7.10-7.40(m，5H)；LC-MS(m/z)计算值426.3，实测值427.2[M+H]⁺。

化合物(19)的合成

23℃下，将4-硝基苯磺酰氯(304mg，1.38mmol)加入到搅拌的先前制备的胺(18)(390mg，0.92mmol)在CH₂Cl₂(15mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)的混合物中的溶液中。将产生的混合物在室温下搅拌16小时。然后，用CH₂Cl₂萃取混合物，并用无水Na₂SO₄干燥。减压下除去溶剂，随后经硅胶柱色谱法(biotage，DCM/CH₃OH，CH₃OH：1-6％，20CV)，获得所需的粘性油状产物(19)(455mg，81％)：¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ1.37(s，9H)，2.85(m，1H)，3.10(m，2H)，3.30(m，1H)，3.41(m，2H)，3.38(s，3H)，3.50-3.85(m，11H)，3.90(m，1H)，4.45(d，1H)，4.95(d，1H)，7.22-7.32(m，5H)，7.95(d，2H)，8.32(d，2H)。LC-MS(m/z)计算值611.3，实测值612.3[M+H]⁺。

化合物(20)的合成

将Pd/C(40mg，10％)加入到化合物(19)(455mg，0.74mmol)的EtOAc(10mL)溶液中。于室温在氢气(30psi)下，将混合物搅拌4.0小时。将反应混合物经硅藻土过滤，并用EtOAc洗涤滤饼。减压下除去溶剂，获得白色固体状的对应的芳香胺(420mg，98％)：¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ1.36(s，9H)，2.90-3.10(m，3H)，3.10-3.30(m，3H)，3.37(s，3H)，3.56(m，2H)，3.63-3.90(m，11H)，4.54(br.，1H)，4.88(d，1H)，6.65(d，2H)，7.19-7.30(m，5H)，7.53(d，2H)；LC-MS(m/z)，计算值581.3，实测值：582.3[M+H]⁺。

化合物(21)的合成

室温下，将化合物(20)(116mg，0.2mmol)在30％三氟乙酸的CH₂Cl₂(4mL)混合物中的溶液搅拌1.0小时。这一时期后，减压下浓缩反应混合物，并将残留物溶解于CH₂Cl₂(5.0mL)中。向该溶液加入(3R，3aS，6aR)-3羟基六氢呋喃并[2，3-b]呋喃基琥珀酰亚胺基碳酸酯[化合物(9)](54mg，0.2mmol)和三乙胺(0.5mL)。将产生的混合物搅拌2小时。此时，减压下浓缩溶液。产生的残留物通过柱色谱法(biotage，DCM/CH₃OH，CH₃OH：2-6％，20CV)纯化以获得油状化合物(21)(102mg，80％)。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ1.40-1.60(m，1H)，1.60-1.80(m，1H)，1.90(br.，1H)，2.75(m，1H)，2.90(m，1H)，3.00-3.15(m，2H)，3.15-3.30(m，3H)，3.37(s，3H)，3.50-3.85(m，12H)，3.85-3.98(m，4H)，4.23(br.，2H)，4.50(br.，1H)，5.02(m，1H)，5.40(d，1H)，5.64(d，1H)，6.67(d，2H，J)8.6Hz)，7.18-7.28(m，5H)，7.51(d，2H)；LC-MS(m/z)，计算值637.2；实测值638.2[M+H]⁺。

实施例7

PEG-地瑞那韦的合成-“方法C”

使用第三种方法制备PEG-地瑞那韦。这一实施例依据的方法图示显示如下(图示中粗体的化合物数字仅对应本实施例7的文本中提供的化合物数字)。

化合物(23)的合成

将BnBr(6.00g，0.035mol)加入到搅拌的Boc-Tyr-OMe[化合物(22)，10.33g，0.035mol]和碳酸钾(7.20g，0.052mol)的丙酮(45mL)溶液。将产生的混合物在60℃下搅拌16个小时。这一时期后，通过过滤除去固体，并减压下浓缩反应混合物。产生的残留物通过柱色谱法(biotage：DCM/CH₃OH，CH₃OH，0-6％，15CV)纯化。获得白色固体产物(23)(13.0g，96％)；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ1.44(s，9H)，3.05(m，2H)，3.72(s，3H)，4.55(m，1H)，5.00(m，1H)，5.05(s，2H)，6.90(d，2H)，7.10(d，2H)，7.20-7.38(m，5H)；LC-MS(m/z)计算值385.2，实测值408.2[M+Na]⁺。

化合物(25)的合成

将在无水THF(150ml)中的化合物(23)(12.74g，0.033mol)和碘氯甲烷(23.35g，0.132mol)冷却至-78℃，并滴加LDA(83ml，0.165mol)。当添加完成后，将溶液在-75℃下搅拌额外的15分钟。滴加乙酸溶液(20ml THF+20ml HOAc)，且保持温度低于-70℃。加入200ml甲苯后，继续搅拌15分钟，然后加入100ml 1％HCl。有机相用0.5MNaHCO₃(10ml)洗涤，并将其分离。向该溶液加入100ml乙醇，并冷却至-78℃。加入NaBH₄(6.3g，0.17mol)。-78℃下，将混合物搅拌1小时，且然后通过加入100ml饱和KHSO₄淬灭反应。有机相用水洗涤，并用Na₂SO₄干燥。除去溶剂后，产生的固体用己烷洗涤，且然后在乙酸乙酯中重结晶。获得黄色固体化合物(25a)[3.5g，按化合物(23)计30％]。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ1.39(s，9H)，2.91(m，2H)，3.17(br.，1H)，3.57(m，1H)，3.67(m，1H)，3.84(m，2H)，4.57(m，1H)，5.05(s，2H)，6.92(d，2H)，7.13(d，2H)，7.20-7.38(m，5H)；LC-MS(m/z)计算值405.2，实测值428.2[M+Na]+。

化合物(26)的合成

将化合物(25a)(2.18g，5.38mmol)悬浮于0.1N的氢氧化钾的甲醇溶液(5.92mmol，59.2ml)中。将产生的混合物在50℃下搅拌1.5小时。减压下除去溶剂，并将固体溶解于100ml DCM，随后其用水(100mL×3)洗涤。干燥溶液，并在减压下除去溶剂。获得所需的黄色固体产物(1.74g，88％)。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ1.40(s，9H)，2.77(m，3H)，2.92(m，2H)，3.65(br.，1H)，4.44(br.，1H)，5.05(s，2H)，6.92(d，2H)，7.15(d，2H)，7.26-7.38(m，5H)；LC-MS(m/z)计算值369.2，实测值370.2[M+H]+，392.2[M+Na]⁺。

化合物(27)&(28)的合成

23℃下，将异丁胺(2.20g，30mmol)加入到搅拌的化合物(26)(1.74g，4.80mmol)的2-丙醇(60mL)溶液中。产生的混合物在75℃下反应6小时。这一时期后，减压下浓缩反应混合物。将残留物溶解于5ml 2-丙醇中，并再次减压下浓缩。获得黄色固体化合物(27)(1.97g)，该化合物没有进一步纯化，就用于下一反应。

23℃下，将4-硝基苯磺酰氯(1.48g，6.67mmol)加入到搅拌的化合物(27)(1.97g，4.45mmol)在CH₂Cl₂(40mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)的混合物中的溶液中。室温下，将产生的混合物搅拌16小时。然后用CH₂Cl₂(150mL×2)萃取混合物。有机相用水(150mL×3)洗涤，并用无水Na₂SO₄干燥。减压下除去溶剂，随后经柱色谱法(biotage：DCM/CH₃OH，CH₃OH，1-6％，15CV，6-8％5CV)获得白色无定形固体化合物(28)(2.14g，77％)：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ0.87(d，3H)，0.89(d，3H)，1.37(s，9H)，1.87(m，1H)，2.86(m，2H)，2.99(d，2H)，3.19(d，2H)，3.72(m，1H)，3.79(m，2H)，4.61(d，1H)，5.05(s，2H)，6.90(d，2H)，7.14(d，2H)，7.35(m，1H)，7.44(m，4H)，7.95(d，2H)，8.34(d，2H)；LC-MS(m/z)计算值627.26，实测值650.3[M+Na]⁺。

化合物(29)的合成

将Pd/C(428mg)加入到化合物(28)(2.14g，3.41mmol)的THF(20mL)溶液中。于室温在氢气气氛(45psi)下，将混合物搅拌48.0小时。反应混合物经硅藻土过滤，并用THF洗涤滤饼。减压下除去溶剂，获得对应的白色固体芳香胺(1.48g，86％)：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ0.86(d，3H)，0.90(d，3H)，1.36(s，9H)，1.85(m，1H)，2.77(m，1H)，2.84(m，1H)，2.90(m，2H)，2.92(d，1H)，3.07(m，1H)，3.71(m，1H)，3.77(m，1H)，4.16(br.，2H)，4.72(d，1H)，6.66(d，2H)，6.75(d，2H)，7.09(d，2H)，7.52(d，2H)。

化合物(30a)、(30b)和(30c)的合成的通用过程

70℃下，将化合物(29)(152mg，0.30mmol)和mPEG_n-Br(n＝3、5和7，三个分别进行)(0.45mmol)的丙酮(10mL)溶液搅拌20小时。这一时期后，将反应混合物冷却至室温，并加入150mL DCM。溶液用水(150mL×2)洗涤。有机相用硫酸钠干燥，且然后在减压下浓缩。产生的残留物通过柱色谱法(biotage：DCM/CH₃OH，CH₃OH，3-6％，15CV，6-8％5CV)纯化以分别获得无色油状化合物(30a)、(30b)和(30c)(收率70-80％)。化合物(30a)(n＝3)：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ0.83(d，3H)，0.89(d，3H)，1.36(s，9H)，1.82(m，1H)，2.62(m，1H)，2.69(m，1H)，2.86(m，1H)，2.92(m，3H)，3.36(s，3H)，3.53(m，2H)，3.62(m，2H)，3.68(m，2H)，3.74(m，4H)，3.85(m，3H)，4.08(m，2H)，4.40(br.，2H)，4.77(d，1H)，6.62(d，2H)，6.82(d，2H)，7.14(d，2H)，7.38(d，2H)；LC-MS(m/z)计算值653.3；实测值654.4[M+H]⁺。化合物(30b)(n＝5)：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ0.83(d，3H)，0.89(d，3H)，1.37(s，9H)，1.81(m，1H)，2.60(m，2H)，2.85(m，1H)，2.92(m，3H)，3.35(s，3H)，3.52(m，2H)，3.61-3.65(m，11H)，3.70(m，2H)，3.75(m，5H)，3.85(m，2H)，4.07(m，2H)，4.49(br.，2H)，4.73(d，1H)，6.62(d，2H)，6.82(d，2H)，7.15(d，2H)，7.34(d，2H)；LC-MS(m/z)计算值741.4，实测值742.5[M+H]+，764.4.[M+Na]⁺。化合物(30c)(n＝7)：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ0.82(d，3H)，0.89(d，3H)，1.36(s，9H)，1.80(m，1H)，2.85(m，1H)，2.92(m，3H)，3.35(s，3H)，3.52(m，2H)，3.61-3.65(m，19H)，3.70(m，2H)，3.75(m，5H)，3.85(m，2H)，4.07(m，2H)，4.49(s，2H)，4.73(d，1H)，6.61(d，2H)，6.82(d，2H)，7.14(d，2H)，7.35(d，2H)；LC-MS(m/z)计算值829.4，实测值830.5[M+H]+。

化合物(31a)、(31b)和(31c)的合成的通用过程

室温下，将化合物(30a)、(30b)和(30c)(0.20mmol，三个分开进行)在30％三氟乙酸的CH₂Cl₂混合物(4.0mL)中的溶液搅拌40分钟。这一时期后，减压下浓缩反应混合物，并将残留物再次溶解于CH₂Cl₂(5.0mL)。向该溶液加入(3R，3aS，6aR)-3羟基六氢呋喃并[2，3-b]呋喃基琥珀酰亚胺基碳酸酯(54mg，0.20mmol)和三乙胺(0.155mL，1.51mmol)。将产生的混合物搅拌1小时。然后在减压下浓缩反应混合物，并通过柱色谱法(biotage，DCM/CH₃OH，CH₃OH：0-4％，20CV，4-6％，10CV)纯化残留物以分别获得无色油状化合物(31a)、(31b)和(31c)(收率：75-80％)。化合物(31a)(n＝3)：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ0.83(d，3H)，0.88(d，3H)，1.58(m，1H)，1.64(m，1H)，1.77(m，1H)，2.65(m，1H)，2.72(m，2H)，2.90(m，2H)，2.98(m，2H)，3.35(s，3H)，3.52(m，2H)，3.60(m，2H)，3.64(m，3H)，3.69(m，4H)，3.81(m，5H)，3.92(m，1H)，4.03(m，2H)，4.46(s，2H)，5.00(m，1H)，5.16(d，1H)，5.62(d，1H)，6.60(d，2H)，6.78(d，2H)，7.08(d，2H)，7.38(d，2H)；LC-MS(m/z)计算值：709.3，实测值710.3[M+H]⁺。化合物(31b)(n＝5)：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ0.86(d，3H)，0.92(d，3H)，1.71-1.85(m，3H)，2.65(m，2H)，2.78(m，1H)，2.97(m，4H)，3.36(s，3H)，3.54(m，2H)，3.64(m，10H)，3.68(m，3H)，3.75(m，4H)，3.69(m，4H)，3.85(m，4H)，3.90(m，1H)，4.00(m，1H)，4.10(m，2H)，4.50(br.，2H)，5.06(m，1H)，5.12(d，1H)，5.66(d，1H)，6.64(d，2H)，6.82(d，2H)，7.13(d，2H)，7.37(d，2H)；LC-MS(m/z)计算值：797.4，实测值798.4[M+H]⁺。化合物(31c)(n＝7)，¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ0.86(d，3H)，0.92(d，3H)，1.71-1.85(m，3H)，2.62(m，2H)，2.78(m，1H)，2.97(m，4H)，3.37(s，3H)，3.54(m，2H)，3.64(m，19H)，3.68(m，3H)，3.73(m，4H)，3.85(m，4H)，3.90(m，1H)，4.00(m，1H)，4.08(m，2H)，4.52(br.，2H)，5.06(m，1H)，5.12(d，1H)，5.66(d，1H)，6.64(d，2H)，6.82(d，2H)，7.13(d，2H)，7.37(d，2H)；LC-MS(m/z)计算值：885.4，实测值886.5[M+H]⁺。

实施例8

PEG-替拉那韦的合成

制备PEG-替拉那韦。这一实施例依据的方法图示显示如下(其中Xa代表噁唑啉酮，且示例中粗体的化合物数字仅对应本实施例8的文本中提供的化合物数字)。

在进行这一合成中，使用了以下材料。氢化钙(CaH₂)、乙二醇、原乙酸三甲酯、氢氧化钠、氯化钛(IV)、N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)、高氯酸60％(HCLO₄)、苯乙基氯化镁(1.0M在THF中)、丁醛(butyaldehyde)、科里试剂(PCC)、异丙氧基钛(IV)、叔丁醇钾(KOBut)、钯/碳(10wt％)、草酰氯[(COCl)₂]、二甲基亚砜(DMSO)、无水甲醇、硼氢化钠(NaBH₄)和吡啶购买于Sigma-Aldrich(St Louis，MO)。mPEG_n-OH(n＝3、5、7)购买于TCI America。5-三氟甲基-2-吡啶磺酰氯购买于Toronto Research Chemicals，Inc.(North York，ON，Canada)。DCM由CaH₂蒸馏。四氢呋喃(THF)和其他有机溶剂购买后直接使用。2-(E)-戊烯酸、亚硫酰氯、(R)-(-)-4-苯基-2-噁唑啉酮、正丁基锂(1M，己烷)、3-[双(三甲硅烷基)氨基]苯基氯化镁(1.0M，THF)、溴化铜(I)-二甲硫、苄基溴和氯化铵购买于Sigma-Aldrich(StLouis，MO)。氢氧化铵、硫酸钠、乙酸乙酯和己烷购买于FisherScientific(Fair Lawn，NJ)。硫酸镁、碳酸氢钠和碳酸钠购买于EMScience(Gibbstown，NJ)。DCM由CaH₂蒸馏。THF(无水)和乙腈也购买于Sigma-Aldrich，且购买后直接使用。

酰基氯制备(2A)

氮气下，将2-(E)-戊烯酸(15.4mL，152mmol)加入到装有回流冷凝管的100ml烧瓶中。将反应烧瓶安装于水浴中后，然后缓慢加入亚硫酰氯(10.5mL，144mmol)，使其在水浴中保持额外的10分钟，然后将反应体系移出并使其升至室温。将反应体系保持在室温下，过夜，且然后在油浴中加热至110℃(外温)，持续30分钟，并在这一温度下保持额外的30分钟。在开始真空蒸馏之前，将溶液冷却至40℃以下。在45-55℃(外温)/8mmHg，真空蒸馏提供所需的产物2(13.8g，收率81％)，其为无色液体。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ1.13(t，3H，J＝7.5Hz)，2.29-2.39(m，2H)，6.07(dt，1H，J＝1.5，15.3Hz)，7.28(dt，1H，J＝6.3，15.3Hz)。

噁唑啉酮酰胺键的形成(4A)

将噁唑啉酮(3A)(6.90g，42.3mmol)加入到用氮气保护的500-mL烧瓶中，并加满无水THF(265mL)。在干冰浴中，将THF溶液冷却至-78℃。然后缓慢加入n-BuLi(1.6M于己烷中，27.8mL，44.4mmol)(约12分钟)。在7分钟内缓慢加入2-(E)-戊烯酰氯(2A)(5.51g，46.5mmol)之前，将反应体系在此温度下保持30分钟。完成添加酰基氯后，立即撤去干冰浴，并将反应溶液在40分钟内升至室温。然后，由NH₄Cl的饱和溶液(400mL)淬灭反应。加入少量的纯去离子水以溶解NH₄Cl沉淀。分离有机THF相，并用EtOAc(100mL×2)萃取水相。将有机相合并，用MgSO₄干燥，并浓缩至约25mL。当搅拌时，加入己烷(200mL)，且然后在几分钟内沉淀出粗产物。过滤后，将溶液浓缩至约10mL，并用己烷(约180mL)二次沉淀。浓缩母液，并在Biotage(EtOAc/己烷6％-50％，20CV)上纯化产生的残留物。合并三个部分的无色产物(4A)(9.95g，收率96％)。R_f＝0.45(己烷∶EtOAc＝3∶1)，RP-HPLC(betasil C18，0.5mL/min，60-100％ACN，在8分钟内)7.40min，LC-MS(ESI，MH⁺)246.1。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ1.08(t，3H，J＝7.5Hz)，2.28(p，2H，J＝6.3Hz)，4.28(dd，1H，J＝3.9，9.0Hz)，4.70(t，1H，J＝8.7Hz)，5.49(dd，1H，J＝3.9，8.7Hz)，7.09-7.18(m，1H)，7.23-7.42(m，6H)。

不对称Michael加成：

将溴化铜(I)-二甲硫(7.44g，36.2mmol)加入到用氮气保护的500-mL烧瓶中，随后加入无水THF(75mL)。将溶液用干冰/乙腈冷却至-45℃，然后在30分钟内滴加3-[双(三甲硅烷基)氨基]苯基氯化镁(1.0M，36.2mL，36.2mmol)。将反应在-40℃至0℃之间的温度下保持20分钟。在20分钟内，滴加以上起始物料(4A)(7.1g，29.0mmol)的THF(19.3mL)溶液。然后将反应在10分钟内升至0℃，且然后进一步在15分钟内升至室温。室温下，用添加NH₄Cl水溶液(70mL)15分钟来淬灭反应混合物。然后，通过添加NH₄OH(5mL)将水相调至pH＝8。然后，将溶液倾入醚溶液(250mL)中，并分离水相。醚相用NaHCO₃(80mL×2)洗涤，直到水相对pH试纸不再呈蓝色。然后，用Na₂SO₄干燥醚相，并在真空中浓缩。将产生的残留物载入反相柱(40M×3，每个约8g粗产物)，并由20％-70％ACN以20CV纯化。收集级分，并蒸发乙腈。然后，水相用DCM(50mL×3)萃取。合并有机溶液，用Na₂SO₄干燥，浓缩以获得产物(6A)(8.73g，收率89％)。R_f＝0.11(己烷∶EtOAc＝3∶1)，RP-HPLC(betasil C18，0.5mL/min，60-100％ACN，在8分钟内)5.67min，LC-MS(ESI，MH⁺)339.2。¹HNMR(500MHz，CDCl₃)δ0.76(t，3H，J＝7.2Hz)，1.50-1.68(m，2H)，2.90-3.00(m，1H)，3.06(dd，1H，J＝7.2，15.6Hz)，3.48(dd，1H，J＝7.5，15.6Hz)，4.17(dd，1H，J＝4.2，9.3Hz)，4.64(t，1H，J＝9.0Hz)，5.38(dd，1H，J＝3.9，8.7Hz)，6.51-6.61(m，3H)，6.99-7.07(m，3H)，7.22-7.28(m，3H)。

胺的苄基保护：

在500-mL烧瓶中，将以上产物(6A)(13.5g，40mmol)溶解于DCM(146mL)和H₂O(106mL)中。加入固体碳酸钠(25g，240mmol)和苄基溴(19.0mL，160mmol)。在通过TLC检查之前，将溶液加热至(52℃外温)回流过夜(20小时)。反应体系用NaHCO₃(300mL)稀释，并从溶液中分离DCM。然后用DCM(60mL×2)萃取水相，并合并有机相。溶液用Na₂SO₄干燥，并浓缩。残留物通过6-22％EtOAc/己烷以18CV载入Biotage(40M×2，每个14g粗产物)。收集产物级分，并蒸发以获得无色软固体产物(2)(17.5g，84％)。R_f＝0.42(己烷∶EtOAc＝3∶1)，RP-HPLC(betasil C18，0.5mL/min，60-100％ACN，在8分钟内，100％8-12分钟)9.80min，LC-MS(ESI，MH⁺)519.2。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ0.65(t，3H，J＝7.2Hz)，1.40-1.55(m，2H)，2.84-2.94(m，1H)，3.02(dd，1H，J＝7.2，15.6Hz)，3.42(dd，1H，J＝7.5，15.6Hz)，4.15(dd，1H，J＝3.9，8.7Hz)，4.53-4.67(m，5H)，5.35(dd，1H，J＝3.9，8.7Hz)，6.50-6.61(m，3H)，6.98-7.07(m，3H)，7.18-7.29(m，13H)。

乙二醇原酸酯，化合物(3)的合成

新制的CaH₂蒸馏的起始物料(26.3g，219mmol)与乙二醇(11mL，197mmol)在室温下混合。加入H₂SO₄(3-4滴，0.25％)，并在此温度下搅拌。将具有固体NaOH干燥瓶的水喷雾真空系统(water spray vacuosystem)和水银压力计安装于蒸馏反应系统。将真空调至低于95mmHg(不低于55mmHg)，并使温度逐渐升高(每10分钟10℃)。收集初馏物(～2g)之后，在68-71℃/58-62mmHg下收集无色产物(16.2g，收率70％)。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ1.55(3H，s)，3.28(3H，s)，3.97-4.12(4H，m)。

制备化合物(4)的TiCl₄活化的C-C偶联

氮气保护下，将预先真空干燥的起始物料(2)(6.45g，12.4mmol)溶解于DCM(50mL)中。然后使其在干冰/丙酮浴中冷却至-78℃。滴加TiCl₄(2.45mL，22.3mmol)，并在加入DIPEA(4.11mL，23.6mmol)之前，将反应体系在此温度下保持5分钟。立即撤去该浴，并在冰盐浴中将反应升至0℃。将再次冷却至-78℃之前，在此温度下，保持烯醇化物形成，持续30分钟。缓慢加入乙二醇原酸酯(3)(3.66mL，31mmol)。加入后，将反应升至0℃，并在此温度下保持2.5小时。反应用半饱和NH₄Cl和水淬灭。溶液用水稀释，并用DCM(50mL×3)萃取。合并的有机相用NaHCO₃洗涤，并用Na₂SO₄干燥。TLC显示反应完成，但剩余～10％的起始物料。Biotage纯化(40M×5次)提供没有杂质的无色产物(5.47g，收率73％)。R_f＝0.51(己烷∶EtOAc＝3∶1)，LC-MS(ESI，MH⁺)605.3。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ_δ0.55(3H，t，J＝7.2Hz)，0.86(3H，s)，1.40-1.51(2H，m)2.89(1H，dt，J＝3.6，11.1Hz)，3.03(1H，q，J＝6.9Hz)，3.44-3.50(1H，m)，3.54(1H，q，J＝6.9Hz)，3.62-3.72(1H，m)，4.26(1H，dd，J＝3.6，9.0Hz)，4.55-4.67(5H，m)，4.80(1H，d，J＝10.8Hz)，5.46(1H，dd，J＝3.3，8.4Hz)，6.59-6.63(3H，m)，7.08(1H，t，J＝7.5Hz)，7.19-7.37(15H，m)。

形成化合物(5)的缩醛酸水解

将缩醛产物(4)(5.47g，9.06mmol)溶解于无水THF(18mL)中。加入去离子水(3.6mL)和HClO₄(3.6mL)。在40℃(外温)的温度下，在油浴中开始反应，持续2.5小时。冷却至室温后，溶液用NaHCO₃缓慢中和至pH＝8～9。混合物溶液用水(100mL)稀释，并用DCM(80mL×3)萃取。有机相用Na₂SO₄干燥，并真空浓缩。将残留物装入具有梯度洗脱(16CV的4-13％EtOAc/己烷)的Biotage柱(25M)。高真空干燥后，收集无色固体(5.18g，收率＞100％)。R_f＝0.43(己烷∶EtOAc＝3∶1)，RP-HPLC(betasil C18，0.5mL/min，60-100％ACN在10分钟内)6.40min，LC-MS(ESI，MH⁺)561.3。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ0.61(3H，t，J＝7.2Hz)，1.63(3H，s)，1.07(1H，dt，J＝3.3，10.8Hz)，4.22(1H，dd，J＝3.9，8.7Hz)，4.61(4H，s)，4.67(1H，t，J＝9.0Hz)，4.98(1H，d，J＝10.5Hz)，5.42(1H，dd，J＝3.6，8.7Hz)，6.54-6.64(3H，m)，7.09(1H，t，J＝8.1Hz)，7.21-7.39(15H，m)。

化合物(6)的合成

将苯乙基氯化镁(1M于THF中，120mmol)与THF(180mL)一起用导管导入500-mL烧瓶中。然后，在滴加丁醛(10.2mL，114mmol)之前，使用冰水浴，将以上混合物溶液冷却至0℃。在此温度下，1小时后，TLC显示完全反应。然后，用NH₄Cl(150mL)淬灭反应，并分离THF。THF溶液用饱和盐水洗涤，然后其用Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。获得超过20克仲醇产物(收率＞100％)，且不进一步纯化。

将仲醇产物(4.56g，25.6mmol)与DCM(128mL)在室温下混合。加入PCC(6.62g，30.7mmol)。反应在室温下保持2小时。因为TLC显示约15％的剩余起物材料，所以加入另一部份PCC(1.11g，5.1mmol)，且反应在2小时内结束。溶液混合物通过硅藻土和硅胶的层过滤。然后，蒸发过滤的溶液，并在Biotage柱(40S)上纯化残留物。收集无色化合物(6)(2.79g，收率62％)。NMR质谱显示产物具有＜1％的杂质。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ0.89(3H，t，J＝7.2Hz)，1.56-1.63(2H，m)，2.37(2H，t，J＝7.2Hz)，2.72(2H，t，J＝7.2Hz)，2.90(2H，t，J＝7.5Hz)，7.17-7.21(3H，m)，7.26-7.28(2H，m)。

形成化合物(7)的Ti-活化的C-C偶联，醛醇缩合反应

将刚刚蒸馏的DCM(22mL)加入到氮气保护的100-mL烧瓶中。按照顺序加入Ti(OPr)₄(373μL，1.27mmol)和TiCl₄(377μL，3.44mmol)。将反应溶液在丙酮-干冰浴中冷却至-78℃，并缓慢加入化合物(5)(1.93g，3.44mmol)的DCM(6mL)溶液。溶液呈淡红色，并在加入DIPEA(899μL，5.16mmol)之前，在此温度下保持5分钟。在使用冰水浴之前，撤去丙酮-干冰浴并升至0℃。在丙酮-干冰浴中再次冷却至-78℃之前，0℃下，保持烯醇化物形成，持续1小时。缓慢加入化合物(6)(1.21mL，6.88mmol)。然后，将溶液升至0℃，并经由冰水浴在此温度下保持1小时。由饱和NH₄Cl溶液(30mL)淬灭反应，并由DCM(40mL×3)萃取稀释的混合物。然后，合并的有机相用Na₂SO₄干燥，并在真空中浓缩。将残留物装入具有梯度(16CV的8-18％EtOAc/己烷)的Biotage柱(40S)。收集淡黄色产物(1.90g，收率75％)。R_f＝0.42(己烷∶EtOAc＝3∶1)，RP-HPLC(betasil C18，0.5mL/分钟，60-100％ACN，在10分钟)9.13分钟，LC-MS(ESI，MH⁺)737.5。

合成化合物(8)的碱水解和内酯化

在氮气下，将醛醇产物(7)混合物(1.68g，2.28mmol)溶解于THF(50mL)中。样品溶解后，使溶液在冰水浴中冷却5分钟，然后加入KOBu^t(1M，2.74mL)。将反应在此温度下保持20分钟。用NH₄Cl(50mL)将其淬灭，并用EtOAc(150mL)稀释有机相。然后分离水相(确定pH＜7)，并用饱和盐水(50mL)洗涤醚相。然后，其用Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。将干燥的残留物装入Biotage柱(25M)，并纯化(16CV的6-22％EtOAc/己烷)四次。高真空干躁后，使淡黄色苄胺化合物(8)(712.1mg，收率54.5％)固化。R_f＝0.41(己烷∶EtOAc＝3∶1)，RP-HPLC(betasil C18，0.5mL/分钟，60-100％ACN，在十分钟内)5.23分钟，LC-MS(ESI，MH⁺)574.4。

Pd/C氢化以合成(R)-3-((R)-1-(3-氨基苯基)丙基)-5，6-二氢-4-羟基-6-苯乙基-6-丙基吡喃-2-酮(9)

将苄胺化合物(8)(265.8mg，0.464mmol)溶解于EtOAc(6.5mL)和MeOH(6.5mL)的混合物溶液中。在加入催化剂之前，溶液小瓶用氮气鼓泡换气至少15分钟。停止搅拌，并缓慢(或以小部分)加入Pd/C催化剂(43mg，8wt％×2)。将系统排空，并重新充入氢气(＜50psi)三次(真空期间，停止搅拌)。然后于室温在50psi下，保持氢解过夜(16小时)至完成。释放压力后，在进行过滤之前，反应混合物首先用HPLC检查以了解完全性。用甲醇小心洗涤催化剂残留物和滤纸。然后，蒸发溶液，并真空干燥以获得类油状化合物(9)(182mg，收率100％)。无需进一步纯化。RP-HPLC(betasil C18，0.5mL/分钟，10-100％ACN，在8分钟内)4.58分钟，LC-MS(ESI，MH⁺)394.2。

经mPEGn-OH的Swern氧化制备化合物(10)

将DCM(105mL)和草酰氯(2M，7.5mL，15mmol)加入到氮气保护的250-mL烧瓶中。溶液在于冰丙酮浴中冷却至-78℃，持续5分钟，然后加入DMSO (1.42mL，20.0mmol)。将其在此温度下剧烈搅拌20分钟，然后加入mPEG₇-OH(3.40g，10.0mmol)和DCM(10mL)的混合物。反应在此温度下保持另外的20分钟，然后加入TEA(5.5mL，39.6mmol)。反应在干冰浴中保持3分钟，然后撤去该浴以逐渐升至环境温度，持续25分钟。其用饱和NaHCO₃(70mL)淬灭，并稀释DCM溶液(120mL)。分离有机相，并用DCM(20mL×2)萃取水相。其用Na₂SO₄干燥，且然后浓缩，并在氮气下储存内部具有一些固体的淡黄色液体(2.78g，收率82％)。NMR显示为64％的转化混合物。Biotage FCC(16CV的3-10％MeOH的DCM溶液)提供还原性胺化的纯产物。R_f＝0.32(DCM∶MeOH＝10∶1)。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ3.39(s，3H)，3.54-3.57(m，2H)，3.66(s，20H)，3.72-3.75(m，2H)，4.17(s，2H)，9.74(s，1H)。

以相似的方法合成mPEG₅-CHO。粗产物显示为具有99％收率的86％的醛。Biotage FCC(16CV的3-10％MeOH的DCM溶液)提供具有56％收率的75％的醛产物，和具有25％收率的15％醛混合物。R_f＝0.34(DCM∶MeOH＝10∶1)，¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ3.38(s，3H)，3.38-3.57(m，2H)，3.67(s，11H)，3.70-3.75(m，3H)，4.17(s，2H)，9.74(s，1H)。

合成化合物(11)的还原性胺化

将化合物(9)(69.6mg，0.177mmol)溶解于甲醇(3.4mL)中。搅拌，并滴加mPEG₅-CHO(235mg，纯度75％，0.708mmol)。使反应进行18分钟，此后移至室温水浴。分几部分加入NaBH₄(54mg，1.42mmol)。三分钟后，使用HPLC检查反应，并证实反应完成了77％的转化。反应用NaHCO₃(10mL)淬灭，并用水和EtOAc稀释。然后，分离有机相，并用Na₂SO₄干燥。HPLC显示反应具有81％的转化，并剩余13％的起物材料。溶液用NaHCO₃水溶液稀释，并用DCM(30mL×3)萃取。蒸发合并的有机溶液以提供粗样品(178mg)。将其溶解于ACN(6mL)和水(2mL)中，并在AKTA(40-57％，5CV×2，12.10分钟)上纯化。蒸发收集的产物的乙腈溶液，并用NaCl饱和。其用DCM(30mL×3)萃取，且合并的溶液用NaSO₄干燥，过滤，真空下浓缩。获得具有纯度超过99％的淡黄色产物(75.9mg，收率69％)。RP-HPLC(betasil C18，0.5mL/分钟，30-100％ACN，在十分钟内)5.53分钟，LC-MS(ESI，MH⁺)628.2。

按照这一合成过程，除了用mPEG₃-CHO代替mPEG₅-CHO。用过量的醛(1.6当量)，完成后，产物混合物显示72％的转化。AKTA纯化(3CV的40-50％ACN，13.2分钟)提供收率42％的具有纯度＞99％的产物。RP-HPLC(betasil C18，0.5mL/分钟，30-100％ACN，在十分钟内)5.65分钟，LC-MS(ESI，MH⁺)540.3。

按照这一合成过程，除了用mPEG₇-CHO代替mPEG₅-CHO。用过量的醛(4.5当量)，完成后，产物混合物显示78％的转化。AKTA纯化(40-57％，5CV)提供收率73％的纯产物(＞99％)。RP-HPLC(betasil C18，0.5mL/分钟，60-100％ACN，在八分钟内)5.06分钟，LC-MS(ESI，MH⁺)716.4。

化合物(13a)的合成

将以上AKTA纯化的产物(11a)(96.8mg，0.180mmol)溶解于DCM(1.6mL)。溶解后，将溶液在冰水浴中冷却，并加入三氟吡啶磺酰氯(48.6mg，0.198mmol)。然后加入吡啶(44μL，0.54mmol)，并在过夜反应期间使反应升温。HPLC显示起物材料的保留时间结束，然后反应用NH₄Cl(10mL)淬灭。其用DCM稀释，并用盐水洗涤分离的有机相。然后，有机相用Na₂SO₄干燥并浓缩。粗产物(159.4mg)在Biotage(16CV的10-50％EtOAc的己烷溶液)上纯化，提供淡黄色产物(13a)(73.1mg)，和较差纯度的产物(35.7mg)，且总收率约62％。R_f＝0.22(己烷∶EtOAc＝1∶1)，RP-HPLC(betasil C18，0.5mL/分钟，60-100％ACN，在8分钟内)4.20分钟，LC-MS(ESI，MH⁺)749.3。

按照与合成化合物(13a)相似的过程，化合物(11b)(154.9mg)产生所需的产物(13b)(36.0mg，纯度93％)和产物的混合物(71.2mg)，收率～52％。经Biotage硅胶柱(16CV的1-7％MeOH的DCM溶液)纯化。R_f＝0.54(EtOAc)，RP-HPLC(betasil C18，0.5mL/分钟，60-100％ACN，在8分钟内)4.36分钟，LC-MS(ESI，MH⁺)837.4。

按照与合成化合物(13a)相似的过程，化合物(11c)(167.7mg)产生所需的产物(13c)(39.9mg，纯度95％)和产物的混合物(82.3mg)，收率～50％。经Biotage硅胶柱(16CV的2-7％MeOH的DCM溶液)纯化。R_f＝0.25(EtOAc)，RP-HPLC(betasil C18，0.5mL/分钟，60-100％ACN，在8分钟内)3.78分钟，LC-MS(ESI，MH⁺)925.5。

实施例9

偶联物的评价

按照在细胞和无细胞测定中评价活性和效力的标准过程(且例如在实施例3中所列)，阿扎那韦偶联物(参见实施例4)、替拉那韦偶联物(参见实施例8)和地瑞那韦偶联物(参见实施例5至7)。结果显示于以下表2至表8中。

表2

在CEM-SS细胞中的抗HIV-1效力

化合物	CEM-SS/HIV-1_RFEC₅₀(μM)	CEM-SSTC₅₀(μM)	治疗指数
化合物	CEM-SS/HIV-1_RFEC₅₀(μM)	CEM-SSTC₅₀(μM)	治疗指数	AZT	0.001	＞1.0	＞1000.0
阿扎那韦	0.012	54.9	4578.2	AZT	0.001	＞1.0	＞1000.0
阿扎那韦	0.012	54.9	4578.2	二-mPEG-3-阿扎那韦	0.038	95.7	2519.3
二-mPEG-5-阿扎那韦	1.1	＞200.0	＞181.0	二-mPEG-3-阿扎那韦	0.038	95.7	2519.3
二-mPEG-5-阿扎那韦	1.1	＞200.0	＞181.0	二-mPEG-6-阿扎那韦	2.5	158.6	62.4
二-mPEG-7-阿扎那韦	8.4	＞200.0	＞24.0	二-mPEG-6-阿扎那韦	2.5	158.6	62.4

表5

基于细胞的测定中替拉那韦偶联物

化合物	CEM-SS/HIV-1_RFEC₅₀(μM)	CEM-SSTC₅₀(μM)	治疗指数
化合物	CEM-SS/HIV-1_RFEC₅₀(μM)	CEM-SSTC₅₀(μM)	治疗指数	AZT	0.002	＞1.0	＞500.0
替拉那韦	0.12	30.6	263.8	AZT	0.002	＞1.0	＞500.0
替拉那韦	0.12	30.6	263.8	mPEG₃-酰胺-替拉那韦	0.08	1.3	15.5
mPEG₅-酰胺-替拉那韦	＞200.0	12.8	---	mPEG₃-酰胺-替拉那韦	0.08	1.3	15.5
mPEG₅-酰胺-替拉那韦	＞200.0	12.8	---	mPEG₇-酰胺-替拉那韦	＞200.0	14.5	---

表6

无细胞测定中的替拉那韦偶联物

化合物	IC50(nM)
化合物	IC50(nM)	沙奎那韦	0.079
替拉那韦	7.2	沙奎那韦	0.079
替拉那韦	7.2	mPEG₃-酰胺-替拉那韦	---
mPEG₅-酰胺-替拉那韦	---	mPEG₃-酰胺-替拉那韦	---
mPEG₅-酰胺-替拉那韦	---	mPEG₇-酰胺-替拉那韦	12.2

表7

基于细胞的测定中的地瑞那韦偶联物

化合物	CEM-SS/HIV-1_RFEC₅₀(μM)	CEM-SSTC₅₀(μM)	治疗指数
化合物	CEM-SS/HIV-1_RFEC₅₀(μM)	CEM-SSTC₅₀(μM)	治疗指数	AZT	0.005	＞1.0	＞200.0
地瑞那韦	＜0.0007	118.8	＞180,000.0	AZT	0.005	＞1.0	＞200.0
地瑞那韦	＜0.0007	118.8	＞180,000.0	mPEG₃-地瑞那韦	＜0.0007	93.9	＞142,272.7
mPEG₅-地瑞那韦	0.011	40.7	3697.3	mPEG₃-地瑞那韦	＜0.0007	93.9	＞142,272.7
mPEG₅-地瑞那韦	0.011	40.7	3697.3	mPEG₇-地瑞那韦	0.014	167.6	11,974.9

表6

无细胞测定中的地瑞那韦偶联物

化合物	IC₅₀(nM)
化合物	IC₅₀(nM)	地瑞那韦	1.5
mPEG₃-地瑞那韦	5.3	地瑞那韦	1.5
mPEG₃-地瑞那韦	5.3	mPEG₅-地瑞那韦	1.1
mPEG₇-地瑞那韦	5.2	mPEG₅-地瑞那韦	1.1
mPEG₇-地瑞那韦	5.2	沙奎那韦	0.001

Claims

1.一种化合物，其包含共价连接于水溶性非肽低聚物的小分子蛋白酶抑制剂的残基。

2.如权利要求1所述的化合物，其中所述小分子蛋白酶抑制剂来自小分子蛋白酶抑制剂的氮杂己烷衍生物类。

3.如权利要求1所述的化合物，其中所述小分子蛋白酶抑制剂来自小分子蛋白酶抑制剂的氨基酸衍生物类。

4.如权利要求1所述的化合物，其中所述小分子蛋白酶抑制剂来自小分子蛋白酶抑制剂的非肽衍生物类。

5.如权利要求1所述的化合物，其中所述小分子蛋白酶抑制剂来自小分子蛋白酶抑制剂的吡喃酮类。

6.如权利要求1所述的化合物，其中所述小分子蛋白酶抑制剂来自小分子蛋白酶抑制剂的戊-1-胺衍生物类。

7.如权利要求1所述的化合物，其中所述小分子蛋白酶抑制剂来自小分子蛋白酶抑制剂的己-2-基氨基甲酸酯衍生物类。

8.如权利要求1所述的化合物，其中所述小分子蛋白酶抑制剂来自小分子蛋白酶抑制剂的磺酰胺衍生物类。

9.如权利要求1所述的化合物，其中所述小分子蛋白酶抑制剂来自小分子蛋白酶抑制剂的三取代苯基衍生物类。

10.如权利要求1所述的化合物，其中所述小分子蛋白酶抑制剂选自由安普那韦、阿扎那韦、夫沙那韦、茚地那韦、洛匹那韦、沙奎那韦、奈非那韦、利托那韦、替拉那韦和地瑞那韦组成的组。

11.如权利要求1所述的化合物，其中所述小分子蛋白酶抑制剂选自由DMP-323、DMP-450、BMS 186613、SC-55389a和BILA 1096 BS组成的组。

12.如权利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9、10和11中任一项所述的化合物，其中所述水溶性非肽低聚物是聚(环氧烷)。

13.如权利要求12所述的化合物，其中所述聚(环氧烷)是聚(环氧乙烷环氧乙烷)。

14.如权利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9、10和11中任一项所述的化合物，其中所述水溶性非肽低聚物是由1个和30个之间的单体组成。

15.如权利要求14所述的化合物，其中所述水溶性非肽低聚物是由1个和10个之间的单体组成。

16.如权利要求12所述的化合物，其中所述聚(环氧烷)包括烷氧基或羟基封端部分。

17.如权利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9、10和11中任一项所述的化合物，其中单一水溶性非肽低聚物共价地连接于所述小分子蛋白酶抑制剂的残基。

18.如权利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9、10和11中任一项所述的化合物，其中多于一种水溶性非肽低聚物共价地连接于所述小分子蛋白酶抑制剂的残基。

19.如权利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9、10和11中任一项所述的化合物，其中所述小分子蛋白酶抑制剂的残基经稳定的键合共价地连接。

20.如权利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9、10和11中任一项所述的化合物，其中所述小分子蛋白酶抑制剂的残基经可降解的键合共价地连接。

21.如权利要求1所述的化合物，其中所述小分子蛋白酶抑制剂的残基经醚键合共价地连接于所述水溶性非肽低聚物。

22.如权利要求1所述的化合物，其中所述小分子蛋白酶抑制剂的残基经酰胺键合共价地连接于所述水溶性非肽低聚物。

23.如权利要求1所述的化合物，其中所述小分子蛋白酶抑制剂的残基经氨基甲酸酯键合共价地连接于所述水溶性非肽低聚物。

24.如权利要求1所述的化合物，其中所述小分子蛋白酶抑制剂的残基经胺键合共价地连接于所述水溶性非肽低聚物。

25.一种组合物，其包括含有共价地连接于水溶性非肽低聚物的小分子蛋白酶抑制剂的残基的化合物，以及任选地，药学上可接受的赋形剂。

26.一种物质组合物，其包括含有共价地连接于水溶性非肽低聚物的小分子蛋白酶抑制剂的残基的化合物，其中所述化合物以一种剂型存在。

27.一种方法，其包括将水溶性非肽低聚物共价地连接于小分子蛋白酶抑制剂。

28.一种方法，其包括施用含有共价地连接于水溶性非肽低聚物的小分子蛋白酶抑制剂的残基的化合物。