CN101628025B - 包含鹿骨提取物和甜瓜籽提取物的药物组合物 - Google Patents
包含鹿骨提取物和甜瓜籽提取物的药物组合物 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种包含鹿骨提取物和甜瓜籽提取物的药物组合物,该药物组合物的制备方法包括:(1)鹿骨和甜瓜籽分别用水热压提取后过滤,分别调节滤液的pH值为3.0~6.0;(2)将步骤(1)制得的滤液分别在-10~0℃下静置后过滤;(3)将步骤(2)制得的滤液分别在90~100℃下加热后超滤;(4)将步骤(3)制得的滤液分别离心,分别调节上清液的pH值为10.0~11.0;(5)将步骤(4)制得的上清液分别在室温下静置后过滤;(6)将步骤(5)制得的滤液分别离心,分别调节上清液的pH值为中性;(7)将步骤(6)制得的上清液分别超滤,分别得到鹿骨提取液和甜瓜籽提取液;(8)将步骤(7)制得的鹿骨提取液和甜瓜籽提取液合并,经微孔膜过滤即得。
Description
技术领域
本发明涉及一种包含鹿骨提取物和甜瓜籽提取物的药物组合物及其制备方法,特别涉及一种包含鹿骨提取物和甜瓜籽提取物的用于注射的药物组合物及其制备方法。
背景技术
包含鹿骨提取物和甜瓜籽提取物的鹿瓜多肽药物组合物中含有多种骨代谢的活性肽类物质,钙、磷、铁等无机元素,以及多种游离氨基酸等。该鹿瓜多肽药物组合物能够刺激成骨细胞增殖,促进膜内骨化及软骨化,促进新骨形成;调节钙、磷代谢,增加骨钙、磷沉积,防止骨质疏松;还具有镇痛、抗炎的作用,能明显地降低骨折局部毛细血管的通透性,减少炎性渗出,促进局部血液循环,为骨细胞提供一个良好的供血环境。临床实验表明鹿瓜多肽药物组合物对骨折疗效显著,对多种骨损伤性疾病、风湿性关节炎和类风湿性关节炎也有疗效。
目前,包含鹿骨提取物和甜瓜籽提取物的药物组合物制剂已经广泛地应用于临床,但是在实践中发现:随着药物组合物制剂贮藏时间的延长,部分成品会有沉淀析出,从而导致了可见异物、不溶性微粒不符合药典的规定。这不但影响了药品的质量,而且也给临床应用带来了巨大的危险性。发生此问题的原因是鹿骨与甜瓜籽中均含有大量的无药效活性的杂质蛋白。
中国发明专利申请200510108157.7公开了一种注射用鹿瓜多肽药物组合物及其制备方法,该药物组合物是将鹿骨与甜瓜籽分别经热压提取、离心、超滤制备而成的,但其中没有去除杂质蛋白。中国发明专利申请200410013602.7公开了一种注射用鹿瓜多肽及其制备工艺,该制备工艺包括将鹿骨热压提取、酸碱去除杂质蛋白、离心、超滤;将甜瓜籽经热压提取、离心、超滤,制备得到注射用鹿瓜多肽,但其中并未去除甜瓜籽含有的杂质蛋白。中国发明专利申请021253570.9公开了一种促进骨折愈合和骨关节损伤修复的药物组合物,该药物组合物是由鹿骨与甜瓜籽分别经热压提取、离心、超滤制备而成的,其中分别采用了酸碱、冷冻和加热的方法去除来自鹿骨与甜瓜籽的杂蛋白,但是该工艺方法操作复杂,能耗和成本较高,不利于产业化实施。
发明内容
为了解决上述问题,本发明的研究人员经过反复的试验验证,摸索出一种既能保证成品质量和制剂稳定性,又能以较低的能耗和成本制备包含鹿骨提取物和甜瓜籽提取物的药物组合物,特别是注射用药物组合物的方法,从而为广大患者提供了一种质量更稳定、更安全、更有效且更廉价的鹿瓜多肽药物组合物制剂。
一方面,本发明提供了一种包含鹿骨提取物和甜瓜籽提取物的药物组合物,该药物组合物的制备方法包括以下步骤:
(1)鹿骨和甜瓜籽分别用水热压提取后过滤,分别调节滤液的pH值为3.0~6.0;
(2)将步骤(1)制得的滤液分别在-10~0℃下静置后过滤;
(3)将步骤(2)制得的滤液分别在90~100℃下加热后超滤;
(4)将步骤(3)制得的滤液分别离心,分别调节上清液的pH值为10.0~11.0;
(5)将步骤(4)制得的上清液分别在室温下静置后过滤;
(6)将步骤(5)制得的滤液分别离心,分别调节上清液的pH值为中性;
(7)将步骤(6)制得的上清液分别超滤,分别得到鹿骨提取液和甜瓜籽提取液;
(8)将步骤(7)制得的鹿骨提取液和甜瓜籽提取液合并,经微孔膜过滤即得。
本申请发明人经大量试验研究发现:在上述的步骤(2)中,将调节pH值后的滤液在低于-10℃下保存,会出现复溶时杂质过多的现象;而在高于0℃下保存,会出现pH值降低现象,因此本申请的步骤(2)中将调节pH值后的滤液置于-10~0℃下保存,既可以使滤液中的杂质沉淀,同时不会破坏滤液中药物的有效物质。在上述的步骤(3)中,将滤液加热至90~100℃的目的是为了高温灭菌,而用10万道尔顿的超滤膜过滤的目的在于进一步去除滤液中的杂质。在上述的步骤(4)和(5)中,将上清液的pH值调节到10.0~11.0并于室温下放置,就可以使上清液中的杂质沉淀,同时不会破坏上清液中的药物的有效物质;而原有的制备方法将pH值调节到7.5~9.5,需要在冷冻条件下静置8~24小时,由此可见本发明的制备方法更为简便,在保证产品质量的前提下,节省生产成本,降低能耗。在上述的步骤(6)中,将离心后的上清液调节至中性是为了便于满足注射用的药物组合物的pH值要求。
在上述制备方法的步骤(1)中,鹿骨优选为梅花鹿骨。甜瓜籽与鹿骨的重量比优选为1∶0.5~2;热压提取时水的重量可以分别为鹿骨重量和甜瓜籽重量的3~5倍;热压提取的温度可以为120~123℃;压力可以为0.1~0.11MPa;时间可以为3~5小时。热压提取优选为1~3次。
在上述制备方法的步骤(2)中,静置的时间优选为12~24小时。
在上述制备方法的步骤(3)中,超滤优选采用10万道尔顿的超滤膜。
在上述制备方法的步骤(5)中,静置的时间优选为1~4小时。
在上述制备方法的步骤(7)中,超滤优选采用10万、1万和5000道尔顿的超滤膜。将鹿骨提取液与甜瓜子提取液分别用分子量为10万、1万、5000道尔顿的超滤膜超滤,收集了分子量小于5000道尔顿的超滤液,经过药效学试验证明了此分子量范围的超滤液与其他分子量范围的溶液相比疗效更好,同时不会影响产品的稳定性。
在上述制备方法的步骤(8)中,鹿骨提取液与甜瓜籽提取液优选以1~2∶1的重量比合并。优选地,步骤(8)为将步骤(7)制得的鹿骨提取液和甜瓜籽提取液合并后,调节pH值为4.5~7.5,经微孔膜过滤即得。微孔膜的孔径可以为0.22~0.45μm,优选为0.22μm。步骤(8)中还可以包括将经微孔膜过滤的滤液真空干燥;或者步骤(8)中还可以包括向经微孔膜过滤的滤液中加入药学上可接受的载体和/或赋形剂,例如氯化钠和/或葡萄糖;或者步骤(8)中还可以包括向经微孔膜过滤的滤液中加入药学上可接受的冻干载体,例如一种或几种选自甘露醇、右旋糖苷、葡萄糖、聚乙二醇和乳糖的冻干载体;并在-50~0℃下冻干。
在本发明的一个具体实施方案中,包含鹿骨提取物和甜瓜籽提取物的药物组合物的制备方法由以下步骤组成:
a.鹿骨提取液的制备:
(1)鹿骨的预处理;
(2)将预处理后的鹿骨粉碎,加入3~5倍鹿骨重量的注射用水,在120~123℃和0.1~0.11MPa的条件下提取3~5小时,过滤,收集滤液;
(3)将滤液的pH值调节至3.0~6.0;
(4)将调节pH值后的滤液在-10~0℃下保存12~24小时,过滤,收集滤液,再将滤液加热至100℃,并用10万道尔顿的超滤膜过滤,收集滤液,然后将滤液进行离心分离,收集上清液,调节上清液的pH值为10.0~11.0;
(5)将调节pH值后的上清液在室温下放置1~4小时,过滤,收集滤液,再将滤液进行离心分离,收集上清液,调节上清液的pH值为中性;
(6)将步骤(5)得到的中性上清液依次经分子量为10万、1万、5000道尔顿的超滤膜过滤,收集超滤液,得到鹿骨提取液;
b.甜瓜籽提取液的制备:
以甜瓜籽为原料重复上述步骤(1)至(6),得到甜瓜籽提取液;
c.注射用药物组合物的制备:
将得到的鹿骨提取液和甜瓜籽提取液合并,向合并后的提取液中加入药学上可接受的辅料,调节合并后溶液的pH值为4.5~7.5,用微孔膜过滤,收集滤液,得到所述的注射用鹿骨及甜瓜籽药物组合物。
上述药物组合物优选为注射液或粉针剂。
就药物组合物的安全性和稳定性要求而言,注射用药物组合物要高于其它剂型的药物组合物,因此本发明的制备方法在制备鹿骨提取液和甜瓜籽提取液时都首先进行了调节pH值的操作,还将调节pH值后的提取液在-10~0℃下保存(例如12~24小时),再将保存后并经过滤得到的滤液加热至90~100℃,采用超滤膜(例如10万道尔顿)过滤,然后将得到的滤液离心分离,收集上清液并调节上清液的pH值为10.0~11.0,并将调节pH值后的上清液室温下放置(例如1~4小时),过滤收集滤液,离心分离滤液,收集上清液,调节上清液的pH值为中性。严格控制以上的操作条件,在最大程度去除提取液中杂质蛋白的同时保留了产品中的活性蛋白,确保产品质量稳定,因此本发明制备的包含鹿骨提取物和甜瓜籽提取物的药物组合物具有保质期长、质量稳定性好、安全有效等优点。得到的鹿骨提取液和甜瓜籽提取液还可以与注射用的载体和/或赋形剂组合制备注射液或粉针剂,也不会影响到注射液或粉针剂的稳定性,保证了产品的安全性。本发明的鹿骨及甜瓜籽药物组合物用于注射给药时,产品的稳定性好、安全性高,这对于注射药品来说有非常重要的作用。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明,本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是示例性的,并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是,在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换,但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
实施例1
(1)鹿骨提取液的制备:取新鲜健康鹿骨20kg,去除表面的结缔组织,洗净,打碎成小块,加入3倍重量的注射用水(即60kg),在121℃,0.1MPa压力下提取3个小时,过滤,收集滤液。同样方法将过滤滤渣热压提取,过滤,收集滤液,合并两次得到的滤液。向合并后的滤液中加入3mol/L盐酸水溶液调节pH值至4.0,再将滤液在-5℃冷冻保存16小时,过滤,收集滤液,再将滤液加热到100℃,超滤,收集滤液,将滤液进行离心分离,收集上清液。向上清液中加入3mol/L氢氧化钠水溶液调节pH值至10.0,室温放置1小时,过滤,收集滤液,离心分离滤液,收集上清液。调节上清液的pH值为中性,即7.0。中性上清液依次经分子量为10万、1万、5000道尔顿的超滤膜超滤,收集超滤液,制得鹿骨提取液。
(2)甜瓜籽提取液的制备:取成熟的甜瓜籽40kg,洗净,粉碎成粉,加入3倍重量的注射用水(即240kg),在121℃,0.1MPa压力下提取3个小时,过滤,收集滤液。同样方法将过滤滤渣热压提取,过滤,收集滤液,合并两次得到的滤液。向合并后的滤液中加入3mol/L盐酸水溶液调节pH值至4.0,再将合并滤液在-5℃冷冻保存16小时,过滤,收集滤液,再将滤液加热到100℃,超滤收集滤液,将滤液离心,收集上清液。向上清液中加入3mol/L氢氧化钠水溶液调节pH值至10.0,室温放置1小时,过滤,收集滤液,离心分离滤液,收集上清液。调节上清液的pH值至中性,即7.0。中性上清液依次经分子量为10万、1万、5000道尔顿的超滤膜超滤,收集超滤液,制得甜瓜籽提取液。
(3)按照1∶1重量比合并鹿骨提取液与甜瓜籽提取液,加入适量的葡萄糖,用HCl调节溶液的pH值为4.5,用0.22μm的微孔滤膜过滤,收集滤液,制得包含鹿骨提取物和甜瓜籽提取物的药物组合物注射液。
实施例2
(1)鹿骨提取液的制备:取新鲜健康鹿骨50kg,除去表面的结缔组织,洗净,打碎成小块,加入4倍重量的注射用水(即200kg),在121℃,0.1MPa压力下提取4个小时,过滤,收集滤液。同样方法将过滤残渣热压提取,过滤,收集滤液,合并两次得到的滤液。向合并后的滤液中加入4mol/L盐酸水溶液调节pH值至5.0,再将滤液在0℃冷冻保存12小时,过滤,收集滤液,再将滤液加热到100℃,超滤,收集滤液,再将滤液离心分离,收集上清液,向上清液中加入3mol/L的NaOH水溶液调节pH值为11.0,将调节pH值后的上清液室温放置3小时,过滤,收集滤液,再将滤液进行离心分离,收集上清液。调节上清液的pH值至中性,即7.0。中性上清液依次经分子量为10万、1万、5000道尔顿的超滤膜超滤,收集超滤液,制得鹿骨提取液。
(2)甜瓜籽提取液的制备:取成熟的甜瓜籽25kg,洗净,粉碎成粉加入4倍重量的注射用水(即100kg),于121℃,0.1MPa压力下提取4个小时,过滤,收集滤液。同样方法将过滤滤渣热压提取,过滤,收集滤液,合并两次得到的滤液。向合并后的滤液中加入4mol/L盐酸溶液调节pH值至5.0,再将滤液在0℃下冷冻保存12小时,过滤,收集滤液,再将滤液加热到100℃,超滤收集滤液,再将滤液离心,收集上清液。向上清液中加入4mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至10.0,室温放置3小时,过滤,收集滤液,离心分离滤液,收集上清液。调节上清液的pH值至7.0,中性上清液依次经分子量为10万、1万、5000道尔顿的超滤膜超滤,收集超滤液。滤液用0.22μm的微孔滤膜过滤,收集滤液,制得甜瓜籽提取液。
(3)按照2∶1比例合并鹿骨提取液与甜瓜籽提取液,加入适量的蔗糖和糖精钠,调节溶液的pH值为6.0,用0.22μm的微孔滤膜过滤,收集滤液,向该滤液中加入甘露醇(作冻干辅料用),用0.22μm的微孔滤膜过滤,在-50℃下进行冻干,得到鹿骨及甜瓜籽药物组合物的冻干粉针剂。
实施例3
(1)鹿骨提取液的制备:取新鲜健康鹿骨100kg,除去表面的结缔组织,洗净,打碎成小块,加入5倍重量的注射用水(即500kg),在121℃,0.1MPa压力下提取5个小时,过滤,收集滤液。同样方法将过滤滤渣热压提取,过滤,收集滤液,合并两次得到的滤液。向合并后的滤液中加入5mol/L盐酸溶液调节pH值至6.0,再将合并滤液在-5℃冷冻保存24小时,过滤,收集滤液,再将滤液加热到100℃,超滤,收集滤液,再将滤液进行离心分离,收集上清液。向上清液中加入5mol/L氢氧化钠水溶液调节pH值至11.0,室温放置4小时,过滤,收集滤液,离心分离滤液,收集上清液。调节上清液的pH值至中性,即7.0。中性上清液分别经分子量为10万、1万、5000道尔顿的超滤膜超滤,收集超滤液,制得鹿骨提取液。
(2)甜瓜籽提取液的制备:取成熟的甜瓜籽200kg,洗净,粉碎成粉,加入5倍重量的注射用水(即1000kg),在121℃,0.11MPa压力下提取5个小时,过滤,收集滤液。同样方法将过滤滤渣热压提取,过滤,收集滤液,合并两次得到的滤液。向合并后的滤液中加入5mol/L盐酸水溶液调节pH值至6.0,再将合并滤液在-5℃冷冻保存24小时,过滤,收集滤液,再将滤液加热到90℃,超滤收集滤液,将滤液离心,收集上清液。向上清液中加入5mol/L氢氧化钠水溶液调节pH值至11.0,室温放置4小时,过滤,收集滤液,离心分离滤液,收集上清液。调节上清液的pH值至中性,pH=7.0。中性液依次经分子量为10万、1万、5000道尔顿的超滤膜超滤,收集超滤液,制得甜瓜籽提取液。
(3)按照1∶2重量比例合并鹿骨提取液与甜瓜籽提取液,加入适量的乳糖或者右旋糖苷,调节溶液的pH值为7.5,用0.22μm的微孔滤膜过滤,收集滤液,对得到的滤液进行真空干燥,得到注射用鹿骨及甜瓜籽药物组合物的粉针剂。
试验例1
稳定性试验:
为了考查本发明方法所制备的包含鹿骨提取物和甜瓜籽提取物的药物组合物的质量稳定性,分别将注射液和粉针剂两种剂型的药物组合物样品按长期试验条件放置,温度是25℃,按照《中国药典》2005年版二部附录相关检验要求,考察48个月内样品中的可见异物和不溶性微粒的稳定性情况。《中国药典》2005年版二部附录不溶性微粒检查法规定:标示装量为100ml以下的静脉注射液、静脉注射用无菌粉末及注射用浓溶液,每个供试品容器中含有10μm以上的微粒不得过6000粒,含25μm以上的微粒不得过600粒;可见异物检查法规定:取供试品,应不得检出可见异物。具体结果如下:
表1注射液稳定性考察结果
表2粉针剂稳定性考察结果
结果:样品按照加速试验条件放置48个月,样品的可见异物和不溶性微粒检查均符合药典的规定,证明本发明产品质量稳定,发明工艺可以控制产品的质量。
试验例2
药效学试验:
为了考查本发明方法所制备的包含鹿骨提取物和甜瓜籽提取物的药物组合物是否安全、有效,分别将注射液和粉针剂两种剂型的药物组合物进行以下药效学试验,具体试验如下:
本次试验阳性对照药为市售注射用的鹿骨及甜瓜籽药物组合物制剂,阴性对照药为0.9%氯化钠注射液,受试药物为实施例1制备的包含鹿骨提取物和甜瓜籽提取物的药物组合物。取已编号的大鼠称重,随机分为3组,每组各8只,体重为140±30g,阳性对照药组1组,阴性对照组1组、受试药物组1组。取各组大鼠分别在其右后肢关节处划线,并用足趾容积测量仪测量并记录各大鼠的右后足跖的容积。取各组大鼠腹腔注射各试验样品,阳性对照药组每只大鼠分别注射2.0ml,阴性对照药组每只大鼠分别注射2.0ml,受试药物组每只大鼠分别注射2.0ml(0.5mg/ml)。分别于各组大鼠注射给药后0.5小时无菌操作给大鼠右后足跖皮下注射1%角叉菜胶0.05ml进行致炎。分别于致炎后1、2、3、4、5、6小时测量并记录各组大鼠右后足跖容积。统计各组大鼠试验结果,分别进行阳性对照药组和受试药物组与阴性对照组t检验,比较组间的差异性。结果:阳性对照药组与受试药物组致炎后1~6小时,T值均大于2.447,则P值均小于0.05,与阴性对照组比较均有显著性差异。且受试药物组较阳性对照药组效果更显著。结论:此药效学试验证明本发明样品疗效更显著。
表3对角叉菜胶致足肿胀大鼠肿胀抑制率的影响(%,x±s,n=10)
与阴性对照组相比*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001
Claims (20)
1.一种包含鹿骨提取物和甜瓜籽提取物的药物组合物,该药物组合物的制备方法包括以下步骤:
(1)鹿骨和甜瓜籽分别用水热压提取后过滤,分别调节滤液的pH值为3.0~6.0;
(2)将步骤(1)制得的滤液分别在-10~0℃下静置后过滤;
(3)将步骤(2)制得的滤液分别在90~100℃下加热后超滤;
(4)将步骤(3)制得的滤液分别离心,分别调节上清液的pH值为10.0~11.0;
(5)将步骤(4)制得的上清液分别在室温下静置后过滤;
(6)将步骤(5)制得的滤液分别离心,分别调节上清液的pH值为中性;
(7)将步骤(6)制得的上清液分别超滤,分别得到鹿骨提取液和甜瓜籽提取液;
(8)将步骤(7)制得的鹿骨提取液和甜瓜籽提取液合并,经微孔膜过滤即得。
2.根据权利要求1所述的药物组合物,其特征在于,所述步骤(1)中甜瓜籽与鹿骨的重量比为1∶0.5~2。
3.根据权利要求1或2所述的药物组合物,其特征在于,所述步骤(1)中热压提取时水的重量分别为鹿骨重量和甜瓜籽重量的3~5倍。
4.根据权利要求1至2中任一项所述的药物组合物,其特征在于,所述步骤(1)中热压提取的温度为120~123℃;压力为0.1~0.11MPa;时间为3~5小时。
5.根据权利要求1至2中任一项所述的药物组合物,其特征在于,所述步骤(1)中热压提取为1~3次。
6.根据权利要求1至2中任一项所述的药物组合物,其特征在于,所述步骤(2)中静置的时间为12~24小时。
7.根据权利要求1至2中任一项所述的药物组合物,其特征在于,所述步骤(3)中超滤采用10万道尔顿的超滤膜。
8.根据权利要求1至2中任一项所述的药物组合物,其特征在于,所述步骤(5)中静置的时间为1~4小时。
9.根据权利要求1至2中任一项所述的药物组合物,其特征在于,所述步骤(7)中超滤采用10万、1万和5000道尔顿的超滤膜。
10.根据权利要求1至2中任一项所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(8)中鹿骨提取液与甜瓜籽提取液以1~2∶1的重量比合并。
11.根据权利要求1至2中任一项所述的药物组合物,其特征在于,所述步骤(8)为将步骤(7)制得的鹿骨提取液和甜瓜籽提取液合并后,调节pH值为4.5~7.5,经微孔膜过滤即得。
12.根据权利要求1至2中任一项所述的药物组合物,其特征在于,所述微孔膜的孔径为0.22~0.45μm。
13.根据权利要求12所述的药物组合物,其特征在于,所述微孔膜的孔径为0.22μm。
14.根据权利要求1至2中任一项所述的药物组合物,其特征在于,所述步骤(8)中还包括将经微孔膜过滤的滤液真空干燥。
15.根据权利要求1至2中任一项所述的药物组合物,其特征在于,所述步骤(8)中还包括向经微孔膜过滤的滤液中加入药学上可接受的载体和/或赋形剂。
16.根据权利要求15所述的药物组合物,其特征在于,所述步骤(8)中还包括向经微孔膜过滤的滤液中加入氯化钠和/或葡萄糖。
17.根据权利要求1至2中任一项所述的药物组合物,其特征在于,所述步骤(8)中还包括向经微孔膜过滤的滤液中加入药学上可接受的冻干载体;并在-50~0℃下冻干。
18.根据权利要求17所述的药物组合物,其特征在于,所述步骤(8)中还包括向经微孔膜过滤的滤液中加入一种或几种选自甘露醇、右旋糖苷、葡萄糖、聚乙二醇和乳糖的冻干载体;并在-50~0℃下冻干。
19.根据权利要求1至2中任一项所述的药物组合物,其特征在于,所述鹿骨为梅花鹿骨。
20.根据权利要求1至2中任一项所述的药物组合物,其特征在于,所述药物组合物为注射液或粉针剂。
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