CN105688182A - 一种鹿瓜多肽注射制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医药技术领域，本发明公开了一种鹿瓜多肽注射制剂；该注射制剂的制备方法为：其中鹿骨提取液制备方法为：取鹿骨，加入复合酶，采用高温水提取，酸调pH值，加热，20-30℃静置，浓缩后20-30℃静置，碱调pH值，浓缩后20-30℃静置，酸调pH值，梯度超滤，低温保存，获得鹿骨提取液；其中甜瓜子提取液制备方法为：取甜瓜子采用高温水提取，酸调pH值，20-30℃静置，浓缩后离心、超滤、碱调pH值，梯度温度冷冻保存，解冻后浓缩，离心，离心后酸调pH值，梯度超滤，低温保存，获得甜瓜子提取液；将鹿骨提取液和甜瓜子提取液混合后，超滤，制备成注射制剂。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种鹿瓜多肽注射制剂。
背景技术
以鹿骨和甜瓜子为原料的药物制剂，主要是鹿瓜多肽注射制剂，该制剂具有调节骨代谢、刺激成骨细胞增殖、促进新骨形成的作用，亦可调节钙鳞代谢、增加骨钙沉积、防止骨质疏松，并具有抗炎、镇痛、抗风湿等作用，已在临床广泛使用。临床应用表明，以鹿骨和甜瓜子为原料的注射制剂是治疗骨折不愈合、骨质疏松症、风湿、类风湿性关节炎、腕舟状骨缺血性坏死和软组织损伤等的有效药物，在骨科的应用前景广阔。
中国专利CN02125357.9公开了以鹿骨和甜瓜子为原料制备注射剂，该专利方法为：分别对鹿骨和甜瓜子进行提取、酸调pH值、碱调pH值，合并提取液后再超滤制备成注射制剂；中国专利CN200410013602.7公开了鹿骨和甜瓜子为原料制备成注射制剂，该专利的方法为：鹿骨进行提取、酸调pH值、碱调pH值、超滤，甜瓜子提取、超滤，合并提取液制备成注射剂；中国专利200510108157.7公开了鹿瓜多肽注射剂的制备方法，该方法为：鹿骨提取，经过三次超滤，甜瓜子提取、三次超滤，合并提取液，制备成注射剂；中国专利CN200910167155.3公开了鹿瓜多肽注射剂的制备方法，该方法为：分别将鹿骨和甜瓜子提取、酸调pH值、加热后超滤、离心、碱调pH值、离心、调pH值、三步超滤、超滤液制备成注射剂；中国专利CN201210328858.1公开了鹿瓜多肽注射剂的制备方法，该方法为：鹿骨提取后，经过三次超滤，甜瓜子提取后，经过三次超滤，合并提取液制备成注射制剂。上述方法虽然可以获得鹿瓜多肽注射剂，但都没有充分考虑鹿瓜多肽中无效成分的含量，因此，上述制备方法有待商榷。
鹿瓜多肽注射剂是多组分生化药品，该制剂的活性成分为多肽类成分，将其质量进一步提高，将会给患者带来巨大的福音。
发明内容
基于上述原因，申请人通过经过创造性的研究，得到一种新的鹿瓜多肽注射制剂，该制剂中游离氨基酸以及高分子量物质含量变化较小，通过筛选得到新的工艺方法，该工艺方法为：该注射制剂是原料为鹿骨和甜瓜子，其中鹿骨提取液制备方法为：取鹿骨，加入复合酶，采用高温水提取，酸调pH值，加热，20-30℃静置，浓缩后20-30℃静置，碱调pH值，浓缩后20-30℃静置，酸调pH值，梯度超滤，低温保存，获得鹿骨提取液；其中甜瓜子提取液制备方法为：取甜瓜子采用高温水提取，酸调pH值，20-30℃静置，浓缩后离心、超滤、碱调pH值，梯度温度冷冻保存，解冻后浓缩，离心，离心后酸调pH值，梯度超滤，低温保存，获得甜瓜子提取液；将鹿骨提取液和甜瓜子提取液混合后，超滤，制备成注射制剂。
本发明所述的鹿骨提取液的方法优势如下：采用复合酶处理鹿骨原料，提高得率的基础上，降低提取次数；酸调一定pH值后，通过加热使鹿骨中蛋白质分解成多肽较完全(提高得率)；酸调pH之后，20-30℃静置，条件温和，避免剧烈条件使无效成分快速沉淀而裹挟多肽类成分，浓缩后再静置，可以进一步去除无效成分；碱调pH值后，20-30℃静置，条件温和，避免剧烈条件使无效成分快速沉淀而裹挟多肽类成分；盐酸调至一定pH值后，通过10万、1万、8千梯度超滤后，在保证多肽类成分的基础上，最大限度的去除高分子量物质。上述方法是将一定的pH数值与不同方法结合，从而达到去除高分量物质以及游离氨基酸的目的，并且进一步提高得率。
本发明所述的甜瓜子提取液的方法优势如下：酸调一定pH值，温度25-35℃离心，离心液超滤，可以很好的得到目标产物；碱调pH值后，梯度低温冷冻，浓缩后在离心，可以很好的去除游离氨基酸以及高分子量物质；离心液调至一定pH值，通过10万、1万、8千梯度超滤后，在保证多肽类成分的基础上，最大限度的去除高分子量物质。上述方法是将一定pH数值与不同方法有机结合，从而达到去除高分量物质以及游离氨基酸的目的，并且进一步提高得率。
本发明通过下述技术方案实现的。
一种鹿骨和甜瓜子为原料的注射制剂，注射制剂包括注射液和粉针剂，该注射制剂的制备方法为：鹿骨经过提取得到鹿骨提取液，甜瓜子经过提取得到甜瓜子提取液；其中鹿骨提取液制备方法为：取鹿骨，加入复合酶，采用高温水提取，酸调pH值，加热，20-30℃静置，浓缩后20-30℃静置，碱调pH值，浓缩后20-30℃静置，酸调pH值，梯度超滤，低温保存，获得鹿骨提取液；其中甜瓜子提取液制备方法为：取甜瓜子采用高温水提取，酸调pH值，20-30℃静置，浓缩后离心、超滤、碱调pH值，梯度温度冷冻保存，解冻后浓缩，离心，离心后酸调pH值，梯度超滤，低温保存，获得甜瓜子提取液；将鹿骨提取液和甜瓜子提取液混合后，超滤，制备成注射制剂。
其中鹿骨提取液的制备方法包括：取鹿骨，去除骨髓，称重，加2-3倍鹿骨投料量的水，加入鹿骨重量1.5％-2.5％的复合酶，保存1-2小时，121-130℃提取，保持60分钟，提取液在除油罐中，静置，撇去上浮油脂，得到鹿骨初提液，鹿骨初提液加1-3摩尔/升盐酸溶液，调pH值至3.0-3.5，加热至80-100℃，保持25-35分钟，20-30℃静置12小时-18小时，取上清液，弃去底部沉淀，浓缩至鹿骨投料量的0.2-0.4倍，20-30℃静置12-18小时，取上清液，弃去底部沉淀，用30μm预处理柱过滤，滤液用4-6摩尔/升氢氧化钠溶液调pH值至8.5-8.9，浓缩至鹿骨投料量0.2-0.4倍，20-30℃静置12-18小时，取上清液，弃去底部沉淀，上清液加入1-3摩尔/升盐酸溶液调pH值至6.0-6.4后，依次用截取分子量十万超滤系统、截取分子量一万超滤系统、截取分子量八千超滤机组，进行超滤，保留透过液，得到鹿骨提取液，转入冷库零下15至零下20℃保存。
其中复合酶为木瓜蛋白酶和胰蛋白酶，木瓜蛋白酶和胰蛋白酶的重量比为0.25-0.40:1。
其中甜瓜子提取液制备方法包括：取甜瓜子每次加1-3倍量的水，经121-130℃提取三次，每次60分钟，合并提取液，得到甜瓜子初提液；甜瓜子初提液加入1-3摩尔/升盐酸溶液，调pH值至3.0-3.5，20-30℃静置12-18小时，浓缩至甜瓜子投料量的2-4倍，降温至25-35℃，用离心机离心，离心液再用截取分子量十万超滤系统超滤，保留透过液，得甜瓜子酸处理液；甜瓜子酸处理液加4-6摩尔/升氢氧化钠溶液，调pH值至8.5-8.9，得甜瓜子碱处理液，碱处理液先在-25℃至-30℃冷库冻12-18小时，再转入-15℃至-20℃冷库冷冻保存72-96小时；将甜瓜子碱处理液解冻后，浓缩至投料量的2-4倍，降温至25-35℃，离心，离心液中加入1-3摩尔/升盐酸溶液，调pH值至6.0-6.4，得甜瓜子中和液；甜瓜子中和液依次用截取分子量十万超滤系统、截取分子量一万超滤系统、截取分子量八千超滤机组，进行超滤，保留透过液，得甜瓜子提取液，转入冷库零下15至零下20℃保存。
其中注射液的制备方法为：取鹿骨提取液和甜瓜子提取液解冻后，按照多肽含量重量比1-3：0.5-1混合混合制得鹿瓜多肽提取液，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为3-6mg/ml，灌装，得到注射液。
其中粉针剂的制备方法为：按照多肽含量重量比1-3：0.5-1混合鹿骨提取液和甜瓜子提取液，混合完全，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为3-6mg/ml，灌装，冷冻干燥，得到冻干粉针剂。
本发明所述鹿骨为：为经检疫合格的东北地区成年(年龄2～4年)健康的鹿骨。本发明所述甜瓜子为：为葫芦科植物甜瓜CucumismeloL.的干燥成熟种子。
本发明所述的木瓜蛋白酶购自上海士锋生物科技有限公司；本发明所述胰蛋白酶购自上海甄准生物科技有限公司。本发明下述试验是在多次创造性试验基础上，针对本发明保护的技术方案进行的结论性试验。
一、筛选试验
试验1组：取鹿骨，去除骨髓，称重，加2.5倍鹿骨投料量的水，加入鹿骨重量2.0％的木瓜蛋白酶，保存1.5小时，125℃提取，保持60分钟，提取液在除油罐中，静置，撇去上浮油脂，得到鹿骨初提液，鹿骨初提液加2摩尔/升盐酸溶液，调pH值至2.5，0℃静置16小时，取上清液，弃去底部沉淀，浓缩至鹿骨投料量的0.3倍，0℃静置16小时，取上清液，弃去底部沉淀，用30μm预处理柱过滤，滤液用5摩尔/升氢氧化钠溶液调pH值至9.5，浓缩至鹿骨投料量0.4倍，0℃静置16小时，取上清液，弃去底部沉淀，上清液加入2摩尔/升盐酸溶液调pH值至6.5后，依次用截取分子量十万超滤系统、截取分子量一万超滤系统、截取分子量八千超滤机组，进行超滤，保留透过液，得到鹿骨提取液，转入冷库零下18℃保存。
取甜瓜子每次加2倍量的水，经125℃提取三次，每次60分钟，合并提取液，得到甜瓜子初提液；甜瓜子初提液加入2摩尔/升盐酸溶液，调pH值至2.5，0℃静置16小时，浓缩至甜瓜子投料量的3倍，降温至30℃，用离心机离心，离心液再用截取分子量十万超滤系统超滤，保留透过液，得甜瓜子酸处理液；甜瓜子酸处理液加5摩尔/升氢氧化钠溶液，调pH值至9.2，得甜瓜子碱处理液，浓缩至投料量的2-4倍，降温至30℃，离心，离心液中加入2摩尔/升盐酸溶液，调pH值至6.6，得甜瓜子中和液；甜瓜子中和液依次用截取分子量十万超滤系统、截取分子量一万超滤系统、截取分子量八千超滤机组，进行超滤，保留透过液，得甜瓜子提取液，转入冷库零下18℃保存。
取鹿骨提取液和甜瓜子提取液解冻后，按照多肽含量重量比2：0.8混合混合制得鹿瓜多肽提取液，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为4.5mg/ml，灌装，得到注射液100支。
试验2组：取鹿骨，去除骨髓，称重，加2.5倍鹿骨投料量的水，加入鹿骨重量2.0％的胰蛋白酶，保存1.5小时，125℃提取，保持60分钟，提取液在除油罐中，静置，撇去上浮油脂，得到鹿骨初提液，鹿骨初提液加2摩尔/升盐酸溶液，调pH值至4.0，0℃静置16小时，取上清液，弃去底部沉淀，浓缩至鹿骨投料量的0.3倍，5℃静置16小时，取上清液，弃去底部沉淀，用30μm预处理柱过滤，滤液用5摩尔/升氢氧化钠溶液调pH值至9.5，浓缩至鹿骨投料量0.3倍，5℃静置16小时，取上清液，弃去底部沉淀，上清液加入2摩尔/升盐酸溶液调pH值至7.0后，依次用截取分子量十万超滤系统、截取分子量一万超滤系统、截取分子量八千超滤机组，进行超滤，保留透过液，得到鹿骨提取液，转入冷库零下18℃保存。
甜瓜子提取液制备方法包括：取甜瓜子每次加2倍量的水，经121℃提取三次，每次60分钟，合并提取液，得到甜瓜子初提液；甜瓜子初提液加入2摩尔/升盐酸溶液，调pH值至4.0，5℃静置16小时，浓缩至甜瓜子投料量的3倍，降温至30℃，用离心机离心，离心液再用截取分子量十万超滤系统超滤，保留透过液，得甜瓜子酸处理液；甜瓜子酸处理液加5摩尔/升氢氧化钠溶液，调pH值至9.5，得甜瓜子碱处理液，碱处理液5℃静置18小时，浓缩至投料量的3倍，降温至30℃，离心，离心液中加入2摩尔/升盐酸溶液，调pH值至7.0，得甜瓜子中和液；甜瓜子中和液依次用截取分子量十万超滤系统、截取分子量一万超滤系统、截取分子量八千超滤机组，进行超滤，保留透过液，得甜瓜子提取液，转入冷库零下18℃保存。
取鹿骨提取液和甜瓜子提取液解冻后，按照多肽含量重量比2：0.8混合混合制得鹿瓜多肽提取液，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为4.5mg/ml，灌装，得到注射液100支。
试验3组：取鹿骨，去除骨髓，称重，加2.5倍鹿骨投料量的水，加入鹿骨重量1.0％的木瓜蛋白酶和胰蛋白酶，其中内切酶与胃蛋白酶的重量比为0.5：1，撇去上浮油脂，得到鹿骨初提液，鹿骨初提液加2摩尔/升盐酸溶液，调pH值至3.3，加热至100℃，保持20分钟，25℃静置16小时，取上清液，弃去底部沉淀，浓缩至鹿骨投料量的0.3倍，25℃静置16小时，取上清液，弃去底部沉淀，用30μm预处理柱过滤，滤液用5摩尔/升氢氧化钠溶液调pH值至8.8，浓缩至鹿骨投料量0.3倍，25℃静置16小时，取上清液，弃去底部沉淀，上清液加入2摩尔/升盐酸溶液调pH值至7.0后，依次用截取分子量十万超滤系统、截取分子量一万超滤系统、截取分子量六千超滤机组，进行超滤，保留透过液，得到鹿骨提取液，转入冷库零下18℃保存。
取甜瓜子每次加2倍量的水，经125℃提取三次，每次60分钟，合并提取液，得到甜瓜子初提液；甜瓜子初提液加入2摩尔/升盐酸溶液，调pH值至3.3，25℃静置16小时，浓缩至甜瓜子投料量的3倍，降温至30℃，用离心机离心，离心液再用截取分子量十万超滤系统超滤，保留透过液，得甜瓜子酸处理液；甜瓜子酸处理液加5摩尔/升氢氧化钠溶液，调pH值至8.8，得甜瓜子碱处理液，碱处理液先在-28℃冷库速冻16小时；将甜瓜子碱处理液解冻后，浓缩至投料量的3倍，降温至30℃，离心，离心液中加入2摩尔/升盐酸溶液，调pH值至6.2，得甜瓜子中和液；甜瓜子中和液依次用截取分子量十万超滤系统、截取分子量一万超滤系统、截取分子量六千超滤机组，进行超滤，保留透过液，得甜瓜子提取液，转入冷库零下18℃保存。
取鹿骨提取液和甜瓜子提取液解冻后，按照多肽含量重量比2：0.8混合混合制得鹿瓜多肽提取液，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为4.5mg/ml，灌装，得到注射液100支。
试验4组(本发明试验方法)：取鹿骨，去除骨髓，称重，加2.5倍鹿骨投料量的水，加入鹿骨重量2.0％的木瓜蛋白酶和胰蛋白酶，木瓜蛋白酶与胰蛋白酶的重量比为0.30:1，保存1.5小时，125℃提取，保持60分钟，提取液在除油罐中，静置，撇去上浮油脂，得到鹿骨初提液，鹿骨初提液加2摩尔/升盐酸溶液，调pH值至3.3，加热至90℃，保持30分钟，25℃静置16小时，取上清液，弃去底部沉淀，浓缩至鹿骨投料量的0.3倍，25℃静置16小时，取上清液，弃去底部沉淀，用30μm预处理柱过滤，滤液用5摩尔/升氢氧化钠溶液调pH值至8.8，浓缩至鹿骨投料量0.3倍，25℃静置16小时，取上清液，弃去底部沉淀，上清液加入2摩尔/升盐酸溶液调pH值至6.2后，依次用截取分子量十万超滤系统、截取分子量一万超滤系统、截取分子量八千超滤机组，进行超滤，保留透过液，得到鹿骨提取液，转入冷库零下18℃保存。
取甜瓜子每次加2倍量的水，经125℃提取三次，每次60分钟，合并提取液，得到甜瓜子初提液；甜瓜子初提液加入2摩尔/升盐酸溶液，调pH值至3.3，25℃静置16小时，浓缩至甜瓜子投料量的3倍，降温至30℃，用离心机离心，离心液再用截取分子量十万超滤系统超滤，保留透过液，得甜瓜子酸处理液；甜瓜子酸处理液加5摩尔/升氢氧化钠溶液，调pH值至8.8，得甜瓜子碱处理液，碱处理液先在-28℃冷库速冻16小时，再转入-18℃冷库冷冻保存88小时；将甜瓜子碱处理液解冻后，浓缩至投料量的3倍，降温至30℃，离心，离心液中加入2摩尔/升盐酸溶液，调pH值至6.2，得甜瓜子中和液；甜瓜子中和液依次用截取分子量十万超滤系统、截取分子量一万超滤系统、截取分子量八千超滤机组，进行超滤，保留透过液，得甜瓜子提取液，转入冷库零下18℃保存。
取鹿骨提取液和甜瓜子提取液解冻后，按照多肽含量重量比2：0.8混合混合制得鹿瓜多肽提取液，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为4.5mg/ml，灌装，得到注射液100支。
试验5组(本发明试验方法)：取鹿骨，去除骨髓，称重，加2.5倍鹿骨投料量的水，加入鹿骨重量2.0％的木瓜蛋白酶和胰蛋白酶，木瓜蛋白酶与胰蛋白酶的重量比为0.30:1，保存1.5小时，125℃提取，保持60分钟，提取液在除油罐中，静置，撇去上浮油脂，得到鹿骨初提液，鹿骨初提液加2摩尔/升盐酸溶液，调pH值至3.5，加热至85℃，保持34分钟，20℃静置14小时，取上清液，弃去底部沉淀，浓缩至鹿骨投料量的0.25倍，30℃静置13小时，取上清液，弃去底部沉淀，用30μm预处理柱过滤，滤液用5摩尔/升氢氧化钠溶液调pH值至8.9，浓缩至鹿骨投料量0.4倍，28℃静置12.5小时，取上清液，弃去底部沉淀，上清液加入2摩尔/升盐酸溶液调pH值至6.0后，依次用截取分子量十万超滤系统、截取分子量一万超滤系统、截取分子量八千超滤机组，进行超滤，保留透过液，得到鹿骨提取液，转入冷库零下18℃保存。
取甜瓜子每次加2倍量的水，经125℃提取三次，每次60分钟，合并提取液，得到甜瓜子初提液；甜瓜子初提液加入2摩尔/升盐酸溶液，调pH值至3.5，28℃静置12小时，浓缩至甜瓜子投料量的3倍，降温至25℃，用离心机离心，离心液再用截取分子量十万超滤系统超滤，保留透过液，得甜瓜子酸处理液；甜瓜子酸处理液加5摩尔/升氢氧化钠溶液，调pH值至8.6，得甜瓜子碱处理液，碱处理液先在-25℃冷库速冻17小时，再转入-16℃冷库冷冻保存96小时；将甜瓜子碱处理液解冻后，浓缩至投料量的2倍，降温至25℃，离心，离心液中加入2摩尔/升盐酸溶液，调pH值至6.0，得甜瓜子中和液；甜瓜子中和液依次用截取分子量十万超滤系统、截取分子量一万超滤系统、截取分子量八千超滤机组，进行超滤，保留透过液，得甜瓜子提取液，转入冷库零下18℃保存。
取鹿骨提取液和甜瓜子提取液解冻后，按照多肽含量重量比2：0.8混合混合制得鹿瓜多肽提取液，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为4.5mg/ml，灌装，得到注射液100支。
【多肽含量测定】精密量取本品1ml，置25ml量瓶中，加0.1mol/L氢氧化钠溶液溶液稀释至刻度，作为供试品溶液，照福林酚测定法测定。
福林酚测定法
试剂碱性铜试液取氢氧化钠10g，碳酸钠50g，加水400ml使溶解，作为甲液；取酒石酸钾0.5g，加水50ml使溶解，另取硫酸铜0.25g，加水30ml使溶解，将两液混合，作为乙液。
临用前，合并甲、乙两液，并加水至500ml。
操作法对照品溶液的制备取牛血清白蛋白对照品，加水制成每1ml中含0.3mg的溶液。
供试品溶液的制备照各品种项下规定的方法制备。
标准曲线的制备精密量取对照品溶液0.0ml、0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml、0.9ml，分别置具塞试管中，各加水至1.0ml，再分别加入碱性铜试液1.0ml，摇匀，各加入福林酚试液(取福林试液中的贮备液1→16)4.0ml，立即混匀，置55℃水浴中准确反应5分钟，置冷水浴10分钟，照紫外-可见分光光度法(中国药典2005年版二部附录ⅣA)，在650nm的波长处测定吸收度；以0号管作为空白。以对照品溶液浓度与相应的吸收度计算回归方程。
测定法精密量取供试品溶液1.0ml，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入碱性铜试液”起，依法测定，从回归方程计算多肽的含量，并乘以稀释倍数，即得。
【游离氨基酸测定法】
精密量取氨基酸对照品溶液和供试品溶液200μL，分别置一1ml离心管中，精密加入正亮氨酸内标溶液(1mg/ml)20μl，加入0.1mol/L异硫氰酸苯酯(PITC)乙腈溶液100μl，1mol/L三乙胺乙腈溶液100μl，混匀，室温放置1小时，加入400μl正己烷，振荡，放置10分钟，取下层溶液，用0.45μm滤器过滤。
色谱条件：色谱柱：AgelaXBP-C18柱250mm*4.6mm，5μm；流动相：A液：0.1mol/L醋酸钠(pH6.5)/乙腈＝93/7，B液：乙腈/水＝4/1；检测波长：254nm；柱温：43℃；进样量：2μL。
流动相梯度表
取不同制剂照氨基酸测定法测定，含游离氨基酸(门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸)总量不超过500μg/ml。。
【高分子量物质】照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录ⅤD)测定。
色谱条件与系统适用性试验用凝胶色谱柱(TSKgelG2000SW)；流动相为乙腈－水－三氟乙酸(35:65:0.1)；流速为0.7ml/mim；检测波长为214nm。理论板数按核糖核酸酶A峰计算不低于2000。
标准曲线的制备分别取核糖核酸酶A(分子量13700)、人胰岛素(分子量5808)、胸腺肽α1(分子量3108)、生长抑素(分子量1638)适量，用流动相制成每1ml中各含0.5mg的溶液作为分子量标准溶液。分别取分子量标准溶液10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，重复进样，其保留时间相对偏差不得大于2.0％。以各峰的保留时间为横坐标，分子量对数为纵坐标作标准曲线，进行线性回归，相关系数不得小于0.99。
测定法取供试品10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，以面积归一化法计算，供试品中分子量大于10000道尔顿的组分不得过5.0％。
低温循环试验：取上述不同试验组制剂，1～10℃放置2天，再于40℃放置两天为1次循环，循环三次，检测。
试验结果见表1。
表1不同试验组制剂比较试验
试验结论：上述试验表明，试验1组、试验2组在0天时，游离氨基酸含量含量大于500μg/mL、高分子量物质大于5.0％，已经不符合新的质量标准的要求；试验3组经过低温循环后，游离氨基酸含量含量大于500μg/mL、高分子量物质大于5.0％，不符合质量标准的要求；而本发明试验方法(试验4组、试验5组)在0天、低温循环试验，游离氨基酸含量、高分子量物质含量均符合质量标准要求；充分说明，本发明工艺方法具有重要科学意义。
二、过敏反应试验
试验动物：雄性BN大鼠，SPF级，体重180-200g。
试验方法：取大鼠，随机分组，对照组、实施例1组和实施例2组，按临床等倍剂量腹腔注射给予BN大鼠，0.8mL/kg，隔日注射1次，连续3次。对照组注射无菌生理盐水。第3次注射药物隔日，再给予药物1.6mL/kg，尾静脉注射给药，对照组给予无菌生理盐水，各组动物给药30分钟，取眼眶血，采血后将动物处死，取出肺脏和气管，取血清用于检测组胺含量。取大鼠的肺、支气管组织100mg，加入1mL匀浆液，液氮中反复冻融3次，每次10min，然后在冰浴中超声3×4s，4℃12000r/min离心30min。取上清，蛋白定量后，ELISA测组胺含量，采用试剂盒提供的方法进行测定。
试验结果：见表2。
表2对BN大鼠血清和组织中组胺含量的影响
试验结论：统计学研究表明，本发明工艺方法得到的制剂与对照组比较没有统计学意义，充分说明本发明工艺制备的制剂具有更好的安全性。
三、药效学试验研究
增加骨密度试验
试验动物：ICR小鼠，雄性。
试验仪器：骨密度测定仪。
试验方法：将小鼠按体重随机分组，除正常对照组15只外，其余各组均为17只。分组后的第2d，称重，腹腔注射0.1％戊巴比妥钠(0.1ml/10g)麻醉，手术野常规消毒后摘除睾丸，止血钳夹闭，不缝合。手术后腹腔注射环丙沙星(0.1ml/10g)，连续3d，手术7d后给药。除正常对照组外，其余各组均每周肌注地塞米松2次，每次0.1ml(0.01mg/10g)。各试验药物组腹腔给药，给药量为1.5mg/kg，每天1次，连续给药15天，测定处死小鼠，取右侧股骨测骨密度。
试验结果见表3。
表3对骨质疏松症模型小鼠骨密度的影响
| 组别 | 骨密度 |
| 正常对照组 | 0.102±0.023** |
| 模型组 | 0.043±0.013 |
| 实施例1组 | 0.089±0.014* |
| 实施例2组 | 0.089±0.007* |
| 实施例3组 | 0.083±0.012* |
注：与模型组比较**P<0.01，*P<0.05。
试验结论：试验表明，本发明工艺方法获得的制剂，具有更好的药理效果。
制备实施例
实施例1
取鹿骨，去除骨髓，称重200kg，加500kg的水，加入木瓜蛋白酶1kg，胰蛋白酶3kg，保存1小时后，采用121℃提取保持60分钟，提取液在除油罐中，静置，撇去上浮油脂，得到鹿骨初提液，鹿骨初提液加1.5摩尔/升盐酸溶液，调pH值至3.3，加热至90℃，保持30分钟，25℃静置16小时，取上清液，弃去底部沉淀，浓缩至鹿骨投料量的0.3倍，25℃静置16小时，取上清液，弃去底部沉淀，用30μm预处理柱过滤，滤液用4.5摩尔/升氢氧化钠溶液调pH值至8.8，浓缩至鹿骨投料量0.3倍，25℃静置16小时，取上清液，弃去底部沉淀，上清液加入1.5摩尔/升盐酸溶液调pH值至6.2后，依次用截取分子量十万超滤系统、截取分子量一万超滤系统、截取分子量八千超滤机组，进行超滤，保留透过液，得到鹿骨提取液(多肽为3.02kg)，转入冷库零下18℃保存。
取甜瓜子200kg，每次加400kg的水，经125℃提取三次，每次60分钟，合并提取液，得到甜瓜子初提液；甜瓜子初提液加入1.5摩尔/升盐酸溶液，调pH值至3.3，25℃静置16小时，浓缩至甜瓜子投料量的3倍，降温至30℃，用离心机离心，离心液再用截取分子量十万超滤系统超滤，保留透过液，得甜瓜子酸处理液；甜瓜子酸处理液加4.5摩尔/升氢氧化钠溶液，调pH值至8.8，得甜瓜子碱处理液，碱处理液先在-28℃冷库速冻16小时，再转入-18℃冷库冷冻保存88小时；将甜瓜子碱处理液解冻后，浓缩至投料量的3倍，降温至30℃，离心，离心液中加入1.5摩尔/升盐酸溶液，调pH值至6.2，得甜瓜子中和液；甜瓜子中和液依次用截取分子量十万超滤系统、截取分子量一万超滤系统、截取分子量八千超滤机组，进行超滤，保留透过液，得甜瓜子提取液(多肽为2.23kg)，转入冷库零下18℃保存。
取鹿骨提取液和甜瓜子提取液解冻后，按照多肽含量重量比2：0.8混合混合制得鹿瓜多肽提取液，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为4.5mg/ml，灌装，得到注射液1000支。
实施例2
取鹿骨，去除骨髓，称重200kg，加500kg的水，加入木瓜蛋白酶0.60kg，胰蛋白酶2.40kg，保存1.5小时后，采用125℃提取，保持60分钟，提取液在除油罐中，静置，撇去上浮油脂，得到鹿骨初提液，鹿骨初提液加2.5摩尔/升盐酸溶液，调pH值至3.5，加热至80℃，保持34分钟，20℃静置14小时，取上清液，弃去底部沉淀，浓缩至鹿骨投料量的0.25倍，30℃静置13小时，取上清液，弃去底部沉淀，用30μm预处理柱过滤，滤液用5.5摩尔/升氢氧化钠溶液调pH值至8.9，浓缩至鹿骨投料量0.4倍，28℃静置12.5小时，取上清液，弃去底部沉淀，上清液加入2.5摩尔/升盐酸溶液调pH值至6.0后，依次用截取分子量十万超滤系统、截取分子量一万超滤系统、截取分子量八千超滤机组，进行超滤，保留透过液，得到鹿骨提取液(多肽为3.09kg)，转入冷库零下18℃保存。
取甜瓜子200kg，每次加400kg的水，经125℃提取三次，每次60分钟，合并提取液，得到甜瓜子初提液；甜瓜子初提液加入2.5摩尔/升盐酸溶液，调pH值至3.5，28℃静置12小时，浓缩至甜瓜子投料量的3倍，降温至25℃，用离心机离心，离心液再用截取分子量十万超滤系统超滤，保留透过液，得甜瓜子酸处理液；甜瓜子酸处理液加5.5摩尔/升氢氧化钠溶液，调pH值至8.6，得甜瓜子碱处理液，碱处理液先在-25℃冷库速冻17小时，再转入-16℃冷库冷冻保存96小时；将甜瓜子碱处理液解冻后，浓缩至投料量的2倍，降温至25℃，离心，离心液中加入2.5摩尔/升盐酸溶液，调pH值至6.0，得甜瓜子中和液；甜瓜子中和液依次用截取分子量十万超滤系统、截取分子量一万超滤系统、截取分子量八千超滤机组，进行超滤，保留透过液，得甜瓜子提取液(多肽为2.30kg)，转入冷库零下18℃保存。
取鹿骨提取液和甜瓜子提取液解冻后，按照多肽含量重量比2：0.8混合混合制得鹿瓜多肽提取液，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为4.5mg/ml，灌装，得到注射液1000支。
实施例3
取鹿骨，去除骨髓，称重200kg，加400kg的水，加入木瓜蛋白酶1.42kg，胰蛋白酶3.58kg，保存2小时后，采用130℃提取，保持60分钟，提取液在除油罐中，静置，撇去上浮油脂，得到鹿骨初提液，鹿骨初提液加1摩尔/升盐酸溶液，调pH值至3.0，加热至100℃，保持25分钟，20℃静置12小时，取上清液，弃去底部沉淀，浓缩至鹿骨投料量的0.2倍，20℃静置12小时，取上清液，弃去底部沉淀，用30μm预处理柱过滤，滤液用5摩尔/升氢氧化钠溶液调pH值至8.5，浓缩至鹿骨投料量0.2倍，20℃静置12小时，取上清液，弃去底部沉淀，上清液加入1摩尔/升盐酸溶液调pH值至6.0后，依次用截取分子量十万超滤系统、截取分子量一万超滤系统、截取分子量八千超滤机组，进行超滤，保留透过液，得到鹿骨提取液(多肽为3.01kg)，转入冷库零下15℃保存。
取甜瓜子200kg，每次加200kg的水，经123℃提取三次，每次60分钟，合并提取液，得到甜瓜子初提液；甜瓜子初提液加入1摩尔/升盐酸溶液，调pH值至3.0，20℃静置12小时，浓缩至甜瓜子投料量的2倍，降温至25℃，用离心机离心，离心液再用截取分子量十万超滤系统超滤，保留透过液，得甜瓜子酸处理液；甜瓜子酸处理液加5摩尔/升氢氧化钠溶液，调pH值至8.5，得甜瓜子碱处理液，碱处理液先在-25℃冷库速冻12小时，再转入-15℃冷库冷冻保存72小时；将甜瓜子碱处理液解冻后，浓缩至投料量的2倍，降温至25℃，离心，离心液中加入1摩尔/升盐酸溶液，调pH值至6.0，得甜瓜子中和液；甜瓜子中和液依次用截取分子量十万超滤系统、截取分子量一万超滤系统、截取分子量八千超滤机组，进行超滤，保留透过液，得甜瓜子提取液(多肽为2.22kg)，转入冷库零下15℃保存。
取鹿骨提取液和甜瓜子提取液解冻后，按照多肽含量重量比1：1混合混合制得鹿瓜多肽提取液，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为3mg/ml，灌装，得到注射液1000支。
实施例4
取鹿骨，去除骨髓，称重200kg，加450kg的水，加入木瓜蛋白酶0.93kg，胰蛋白酶2.67kg，保存1.2小时后，采用130℃提取，保持60分钟，提取液在除油罐中，静置，撇去上浮油脂，得到鹿骨初提液，鹿骨初提液加3摩尔/升盐酸溶液，调pH值至3.5，加热至80℃，保持34分钟，20℃静置14小时，取上清液，弃去底部沉淀，浓缩至鹿骨投料量的0.25倍，30℃静置13小时，取上清液，弃去底部沉淀，用30μm预处理柱过滤，滤液用6摩尔/升氢氧化钠溶液调pH值至8.9，浓缩至鹿骨投料量0.4倍，28℃静置12.5小时，取上清液，弃去底部沉淀，上清液加入3摩尔/升盐酸溶液调pH值至6.0后，依次用截取分子量十万超滤系统、截取分子量一万超滤系统、截取分子量八千超滤机组，进行超滤，保留透过液，得到鹿骨提取液(多肽为2.91kg)，转入冷库零下18℃保存。
取甜瓜子200kg，每次加560kg的水，经125℃提取三次，每次60分钟，合并提取液，得到甜瓜子初提液；甜瓜子初提液加入3摩尔/升盐酸溶液，调pH值至3.5，28℃静置12小时，浓缩至甜瓜子投料量的3倍，降温至25℃，用离心机离心，离心液再用截取分子量十万超滤系统超滤，保留透过液，得甜瓜子酸处理液；甜瓜子酸处理液加6摩尔/升氢氧化钠溶液，调pH值至8.6，得甜瓜子碱处理液，碱处理液先在-25℃冷库速冻17小时，再转入-16℃冷库冷冻保存96小时；将甜瓜子碱处理液解冻后，浓缩至投料量的2倍，降温至25℃，离心，离心液中加入3摩尔/升盐酸溶液，调pH值至6.0，得甜瓜子中和液；甜瓜子中和液依次用截取分子量十万超滤系统、截取分子量一万超滤系统、截取分子量八千超滤机组，进行超滤，保留透过液，得甜瓜子提取液(多肽为2.30kg)，转入冷库零下18℃保存。
取鹿骨提取液和甜瓜子提取液解冻后，按照多肽含量重量比2.5：0.5混合混合制得鹿瓜多肽提取液，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为6mg/ml，灌装，得到注射液1000支。
实施例5
取鹿骨，去除骨髓，称重200kg，加480kg的水，加入木瓜蛋白酶0.96kg，胰蛋白酶3.44kg，保存1.5小时后，采用130℃提取，保持60分钟，提取液在除油罐中，静置，撇去上浮油脂，得到鹿骨初提液，鹿骨初提液加2摩尔/升盐酸溶液，调pH值至3.5，加热至80℃，保持34分钟，20℃静置14小时，取上清液，弃去底部沉淀，浓缩至鹿骨投料量的0.25倍，30℃静置13小时，取上清液，弃去底部沉淀，用30μm预处理柱过滤，滤液用5摩尔/升氢氧化钠溶液调pH值至8.9，浓缩至鹿骨投料量0.4倍，28℃静置12.5小时，取上清液，弃去底部沉淀，上清液加入2摩尔/升盐酸溶液调pH值至6.0后，依次用截取分子量十万超滤系统、截取分子量一万超滤系统、截取分子量八千超滤机组，进行超滤，保留透过液(多肽为2.98kg)，得到鹿骨提取液，转入冷库零下18℃保存。
取甜瓜子200kg，每次加475kg的水，经125℃提取三次，每次60分钟，合并提取液，得到甜瓜子初提液；甜瓜子初提液加入2摩尔/升盐酸溶液，调pH值至3.5，28℃静置12小时，浓缩至甜瓜子投料量的3倍，降温至25℃，用离心机离心，离心液再用截取分子量十万超滤系统超滤，保留透过液，得甜瓜子酸处理液；甜瓜子酸处理液加5摩尔/升氢氧化钠溶液，调pH值至8.6，得甜瓜子碱处理液，碱处理液先在-25℃冷库速冻17小时，再转入-16℃冷库冷冻保存96小时；将甜瓜子碱处理液解冻后，浓缩至投料量的2倍，降温至25℃，离心，离心液中加入2摩尔/升盐酸溶液，调pH值至6.0，得甜瓜子中和液；甜瓜子中和液依次用截取分子量十万超滤系统、截取分子量一万超滤系统、截取分子量八千超滤机组，进行超滤，保留透过液，得甜瓜子提取液(多肽为2.28kg)，转入冷库零下18℃保存。
取鹿骨提取液和甜瓜子提取液解冻后，按照多肽含量重量比3：0.5混合混合制得鹿瓜多肽提取液，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为3.5mg/ml，灌装，得到注射液1000支。
实施例6
取鹿骨，去除骨髓，称重200kg，加520kg的水，加入木瓜蛋白酶1.1kg，胰蛋白酶3.47kg，保存1.6小时后，采用130℃提取，保持60分钟，提取液在除油罐中，静置，撇去上浮油脂，得到鹿骨初提液，鹿骨初提液加2摩尔/升盐酸溶液，调pH值至3.5，加热至80℃，保持34分钟，20℃静置14小时，取上清液，弃去底部沉淀，浓缩至鹿骨投料量的0.25倍，30℃静置13小时，取上清液，弃去底部沉淀，用30μm预处理柱过滤，滤液用5摩尔/升氢氧化钠溶液调pH值至8.9，浓缩至鹿骨投料量0.4倍，28℃静置12.5小时，取上清液，弃去底部沉淀，上清液加入2摩尔/升盐酸溶液调pH值至6.0后，依次用截取分子量十万超滤系统、截取分子量一万超滤系统、截取分子量八千超滤机组，进行超滤，保留透过液，得到鹿骨提取液(多肽为2.97kg)，转入冷库零下18℃保存。
取甜瓜子200kg，每次加515kg的水，经125℃提取三次，每次60分钟，合并提取液，得到甜瓜子初提液；甜瓜子初提液加入2摩尔/升盐酸溶液，调pH值至3.5，28℃静置12小时，浓缩至甜瓜子投料量的3倍，降温至25℃，用离心机离心，离心液再用截取分子量十万超滤系统超滤，保留透过液，得甜瓜子酸处理液；甜瓜子酸处理液加5摩尔/升氢氧化钠溶液，调pH值至8.6，得甜瓜子碱处理液，碱处理液先在-25℃冷库速冻17小时，再转入-16℃冷库冷冻保存96小时；将甜瓜子碱处理液解冻后，浓缩至投料量的2倍，降温至25℃，离心，离心液中加入2摩尔/升盐酸溶液，调pH值至6.0，得甜瓜子中和液；甜瓜子中和液依次用截取分子量十万超滤系统、截取分子量一万超滤系统、截取分子量八千超滤机组，进行超滤，保留透过液，得甜瓜子提取液(多肽为2.18kg)，转入冷库零下18℃保存。
取鹿骨提取液和甜瓜子提取液解冻后，按照多肽含量重量比1：1混合混合制得鹿瓜多肽提取液，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为5.5mg/ml，灌装，得到注射液1000支。
或者按照多肽含量重量比1：1混合鹿骨提取液和甜瓜子提取液，混合完全，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为4mg/ml，灌装，冷冻干燥，得到冻干粉针剂1000支。
或者按照多肽含量重量比2：1混合鹿骨提取液和甜瓜子提取液，混合完全，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为3mg/ml，灌装，冷冻干燥，得到冻干粉针剂1000支。
或者按照多肽含量重量比2.5：0.75混合鹿骨提取液和甜瓜子提取液，混合完全，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为5.5mg/ml，灌装，冷冻干燥，得到冻干粉针剂1000支。
本发明所述实施例包括但不限于上述。
Claims (6)
1.一种鹿骨和甜瓜子为原料的注射制剂，注射制剂包括注射液和粉针剂，其特征在于：该注射制剂的制备方法为：鹿骨经过提取得到鹿骨提取液，甜瓜子经过提取得到甜瓜子提取液；其中鹿骨提取液制备方法为：取鹿骨，加入复合酶，采用高温水提取，酸调pH值，加热，20-30℃静置，浓缩后20-30℃静置，碱调pH值，浓缩后20-30℃静置，酸调pH值，梯度超滤，低温保存，获得鹿骨提取液；其中甜瓜子提取液制备方法为：取甜瓜子采用高温水提取，酸调pH值，20-30℃静置，浓缩后离心、超滤、碱调pH值，梯度温度冷冻保存，解冻后浓缩，离心，离心后酸调pH值，梯度超滤，低温保存，获得甜瓜子提取液；将鹿骨提取液和甜瓜子提取液混合后，超滤，制备成注射制剂。
2.根据权利要求1所述的一种鹿骨和甜瓜子为原料的注射制剂，其中鹿骨提取液的制备方法包括：取鹿骨，去除骨髓，称重，加2-3倍鹿骨投料量的水，加入鹿骨重量1.5％-2.5％的复合酶，保存1-2小时，121-130℃提取，保持60分钟，提取液在除油罐中，静置，撇去上浮油脂，得到鹿骨初提液，鹿骨初提液加1-3mol/L盐酸溶液，调pH值至3.0-3.5，加热至80-100℃，保持25-35分钟，20-30℃静置12小时-18小时，取上清液，弃去底部沉淀，浓缩至鹿骨投料量的0.2-0.4倍，20-30℃静置12-18小时，取上清液，弃去底部沉淀，用30μm预处理柱过滤，滤液用4-6mol/L氢氧化钠溶液调pH值至8.5-8.9，浓缩至鹿骨投料量0.2-0.4倍，20-30℃静置12-18小时，取上清液，弃去底部沉淀，上清液加入1-3mol/L盐酸溶液调pH值至6.0-6.4后，依次用截取分子量十万超滤系统、截取分子量一万超滤系统、截取分子量八千超滤机组，进行超滤，保留透过液，得到鹿骨提取液，转入冷库零下15至零下20℃保存。
3.根据权利要求1或2所述的一种鹿骨和甜瓜子为原料的注射制剂，其中复合酶为木瓜蛋白酶和胰蛋白酶，木瓜蛋白酶和胰蛋白酶的重量比为0.25-0.40:1。
4.根据权利要求1所述的一种鹿骨和甜瓜子为原料的注射制剂，其中甜瓜子提取液制备方法包括：取甜瓜子每次加1-3倍量的水，经121-130℃提取三次，每次60分钟，合并提取液，得到甜瓜子初提液；甜瓜子初提液加入1-3mol/L盐酸溶液，调pH值至3.0-3.5，20-30℃静置12-18小时，浓缩至甜瓜子投料量的2-4倍，降温至25-35℃，用离心机离心，离心液再用截取分子量十万超滤系统超滤，保留透过液，得甜瓜子酸处理液；甜瓜子酸处理液加4-6mol/L氢氧化钠溶液，调pH值至8.5-8.9，得甜瓜子碱处理液，碱处理液先在-25℃至-30℃冷库冻12-18小时，再转入-15℃至-20℃冷库冷冻保存72-96小时；将甜瓜子碱处理液解冻后，浓缩至投料量的2-4倍，降温至25-35℃，离心，离心液中加入1-3mol/L盐酸溶液，调pH值至6.0-6.4，得甜瓜子中和液；甜瓜子中和液依次用截取分子量十万超滤系统、截取分子量一万超滤系统、截取分子量八千超滤机组，进行超滤，保留透过液，得甜瓜子提取液，转入冷库零下15至零下20℃保存。
5.根据权利要求1所述的一种鹿骨和甜瓜子为原料的注射制剂，其中注射液的制备方法为：取鹿骨提取液和甜瓜子提取液解冻后，按照多肽含量重量比1-3：0.5-1混合混合制得鹿瓜多肽提取液，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为3-6mg/ml，灌装，得到注射液。
6.根据权利要求1所述的一种鹿骨和甜瓜子为原料的注射制剂，其中粉针剂的制备方法为：按照多肽含量重量比1-3：0.5-1混合鹿骨提取液和甜瓜子提取液，混合完全，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为3-6mg/ml，灌装，冷冻干燥，得到冻干粉针剂。
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| CN107988302A (zh) * | 2018-01-23 | 2018-05-04 | 吉林省吉诺生物工程有限责任公司 | 一种鹿瓜多肽的制备方法及鹿瓜多肽在制备特殊医学用途食品中的应用 |
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