JPS6348299A - 新規な軟骨由来の白血球エラスタ−ゼ阻害剤 - Google Patents

新規な軟骨由来の白血球エラスタ−ゼ阻害剤

Info

Publication number
JPS6348299A
JPS6348299A JP62187881A JP18788187A JPS6348299A JP S6348299 A JPS6348299 A JP S6348299A JP 62187881 A JP62187881 A JP 62187881A JP 18788187 A JP18788187 A JP 18788187A JP S6348299 A JPS6348299 A JP S6348299A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
protein
acceptable salt
pharmaceutically acceptable
protein according
amino acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP62187881A
Other languages
English (en)
Inventor
クラウス・イー・クエツトナー
マイクル・テイー・デイミユージオ
デイートリヒ・ブロツクス
ドミニク・トリピーア
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hoechst AG
Original Assignee
Hoechst AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hoechst AG filed Critical Hoechst AG
Publication of JPS6348299A publication Critical patent/JPS6348299A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/81—Protease inhibitors
    • C07K14/8107—Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) inhibitors
    • C07K14/811—Serine protease (E.C. 3.4.21) inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/02—Drugs for disorders of the urinary system of urine or of the urinary tract, e.g. urine acidifiers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B24—GRINDING; POLISHING
    • B24B—MACHINES, DEVICES, OR PROCESSES FOR GRINDING OR POLISHING; DRESSING OR CONDITIONING OF ABRADING SURFACES; FEEDING OF GRINDING, POLISHING, OR LAPPING AGENTS
    • B24B53/00—Devices or means for dressing or conditioning abrasive surfaces
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
    • Y10S530/84—Bones; tendons; teeth; cartilage

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Mechanical Engineering (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は生体内および試験管内で多形核好中球（ＰＭＮ
）エラスターゼを阻害する新しいタンパクであるカルテ
リン（ｃａｒｔｅｌｉｎ　）に関する。より詳細には、
本発明はその新しいタンノ臂りをエラスターゼ介在組織
傷害疾患の人体治療に用いることに関する。
これらの疾患において、転移細胞または炎症細胞例えば
白血球が組織に拡散する。ＰＭＮエラスターゼおよびそ
の群の酵素は、無定形弾性および結合組織成分、例えば
コラーゲン・タイプ■（これは肺、血管および腸結合組
織の支持成分である）、コラーゲン・タイプ■（これは
上皮および内皮基礎膜の一体性にとって重要である）、
およびフィブロネクチン（これは細胞付着分子である）
などを含む内生基質に対し、広い特異性を有する。
これらに関連する疾患には、肺気腫、慢性気管支炎、嚢
胞性繊維症、気管支拡張症、成人呼吸窮迫症候群、アテ
ローム性動脈硬化症、関節炎、乾癖、脈管炎、糸球体腎
炎、グラム陽性菌性敗血症関連消費性凝固障害および白
血病などが含まれる。更に、コラーゲン分解を伴う新生
物細胞による転移における組織侵入もエラスターゼ阻害
により抑えられるであろう。
一部の軟骨が腫瘍細胞および白血球の侵入を固有的に遅
延させるという知見が得られている。
この抵抗性は部分的に、細胞外マ）　ＩＪクスの組成、
組織および部面性によるものである。
侵入に対するこの自然防衛は、抗侵入因子（ａｎｔｉ−
１ｎｖａｓｉｖｅ−ｆａｃｔｏｒ　：略してＡＩＦ　）
と称される抽出可能な軟骨マトリクス化合物に含ま′れ
ているものと思われる。ｒ　Ｂｏｎｅ　Ｍｅｔａｓｔａ
ｓｉｓ　Ｊ、（）、に、　Ｈａｌｌ著、Ｍｅｄｉｃａｌ
　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、　Ｂｏｓｔｏｎ。
Ｍａｓｓ、、　１９８１　、　ｌ１ｐ１５３〜１５４参
照。またその記載を本明細書の一部に含める。このタン
パク混合物中には、一部は精製されている多くのプロテ
アーゼ阻害剤および成長調節因子が存在する。
ＡＩＦについての初期の研究は、それが白血球エラスタ
ーゼに対する阻害活性を含むことを示している。従って
、この阻害剤は、転移に対する自然防御を担っているか
もしれないという仮説がたてられている。
本発明において、分析および分取りロマトグラフイおよ
び電気泳動法を用いてＡＩＦのＰＭＮ　−エラスターゼ
阻害活性を検討した。精製工程は、クロモゲン基質を利
用する白血球エラスターゼ試験を用いて阻害活性を測定
することによりモニターした。特異的ＰＭＮ−エラスタ
ーゼ阻害剤が単離され、また高い陽イオン特性（９，５
を超えるＰＩ　（等電点）および強い疎水性の挙動を有
する１５，０００ダルトン（５ＤＳ−ＰＡＧＥ　）のタ
ンパクとして特徴付けられた。
アミン末端配列およびトリブチツクペプチドの配列は、
その他のタンｉ４りまたはプロテアーゼ阻害剤またはそ
れらのヌクレオチド翻訳に対し相同性を全く示さ、なか
った。検出された配列は、新規阻害剤に極めて特徴的で
あり、　ｃＤＮＡ補乳動物軟骨細胞ライブラリーの探索
および遺伝子のクローニングのためのノ〜イブリダイゼ
ーション・プローブの合成に用いることができる。
本発明はタンノ９りまたはその薬学的に許容し得る塩に
関する。本発明のタン・ｆりは１０．ＯＤＤ〜３０．０
００ダルトンの分子量、９５より大きい等電点、 Ｌｅｕ−Ｘ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ａｌａ−（式中Ｘは天然
アミノ酸を表わす） で示されるアミノ末端アミノ酸配列、または−Ｇｌｙ−
Ａｌａ７Ａｓｎ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−で示される
アミノ酸配列を有するトリプシン分解生成物を示す。
本発明のタンノックは、様々な無機および有機酸と共に
塩を形成するが、それら塩も本発明の範叩内にある。、
塩を作ることのできる酸としては、例えばＨＣｌ　１１
）ＩＢｒ　、　Ｅ２ＳＯ４、Ｈ３ｐｏ４、メタンスルホ
ン酸、トルエンスルホン酸、マレイン酸、フマール酸、
およびカンファースルホン酸などが挙げられる。非毒性
の生理学的に許容し得る塩が好ましいが、その他の塩も
（例えば生成物の単離または精製上）有用である。
本発明はまた、そのタンノ母りを抽出法、メンプラン濾
過およびクロマトグラフィ法の組合せを用いて軟骨から
単離することより成る、この精製タン・やりの単離方法
にも関する。
新規ＰＭＮエラスターゼ阻害剤が単離される因子は、幼
若動物から層殺後速やかに除去きれる（従って軟骨の血
液汚染は回避される）生臭中隔の細胞外抽出物である。
次いで阻害剤のプロテプーゼ分解を防止すΣために低温
で寸断薄片を食塩水抽出する。この抽出手順を２回反復
し、そして抽出液を、５０，０００以上のＷのサイズ排
除（ＸＭ−５０）および１０００のサイズ排除（ｔＪＭ
−２）のＡｍ１ｃｏｎ　’Ｍｅｍｂｒａｎｅ　′！ｉ″
用いて行われる濾過により高分子量および低分子量の汚
染物質を分離することによって精製される。
新規阻害剤は、第１のメンプランを移動・通過するが、
第２のメンプランによって保持される。メンプランの閉
塞を避けるには、塩含有量の高い（３Ｍ　ＮａＣｔ）緩
衝液中で濾過を行い、次いで’５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ−
２５で粗抽出液を脱塩してから＠５ｅｐｈａｃｒｙｌ　
Ｓ　−２Ｄ　Ｏでのゲル浸透クロマトグラフィによる分
画にかけるのが有利であることが判明した（第１図参照
）。
競合的で濃度依存性のＰＭＮ−エラスターゼ阻害剤は、
１０〜４０　ＫＤの低分子量画分に見出された。生検切
採中に軟骨の血液汚染が避けられないため、高分子量画
分は、若干の血清アルブミン（分子量：６８ＫＤ）’ｔ
−含有する。
この少量の血清アルブミンはＰＭＮ−エラスターゼをあ
る程度阻害することが示された。次の精製工程まで微量
物質として残るこの汚染物質は、陽イオン交換クロマト
グラフィにより除かれる。　５ｅｐｈａｃｒｙｌ　Ｓ　
−２００カラムの各画分のタンパク含量を、牛血清アル
ブミンを標準として用いる色素結合法（Ｅ’ｉｏ　Ｒａ
ｄタンノ４り・アッセイ）によりアッセイすると共に、
その酵素活性をアッセイした。
ＰＭＮ−エラスターゼは、Ｒｅｃｅｎｔ　Ａｄｖａｎｃ
ｅｓ　ＩｎＣｏｎｎｅ’ｃｔ’ｉｖｅ　Ｔｉ５ｓｕｅ　
Ｒｅ５ｅａｒＣｈ＋　１９８６　ｒ　Ｂｕｋｈａｕｓｅ
’ｒｖｅｒｌａｇｌ　Ｂａ５ｅ１．　ＢｏｓｔＯｎ、　
Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ＋　Ｃ，Ａｒ５ｅｎｉｓ。
ｇ、ｓ、−Ｍ、Ａ、　Ｔｈｏｍａｒおよびに、Ｅ、　Ｋ
ｕｅｔｔｎｅｒ、　６３〜６８頁に記載（その記載を本
明細書の記載の一部として含める）されているように、
ヒト好中球か５単離され精製された。それは本質的にカ
テプシ／’−Ｇ活性を有していない。その酵素をその天
然基質、例えばタイプ■コラーゲン、不溶性無定形エラ
スチンに対して、また特異釣合酸基質であるメトキシス
クシニル−Ｌ　−７５ニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリ
ル−Ｌ−バリル−ｐ−ニトローアニリＰ（それを用いて
ＤＭＳ　Ｏ原液を作った）に対して試験した。Ｔｈｅ　
Ｊｏｕ’ｒｎａｌｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙ、　Ｖｏｌ、　２５４．　ｐｐ−４’０２
７〜４０３２　＊　１９７９　＋　Ｋ、Ｎａｋａｊｉｍ
ａ、　Ｊ、Ｃ，Ｐｏｗｅｒｓ。
Ｂ、Ｍ、’　ＡｓｈｅおよびＭ、　Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ
参照（その記載を本明細書の記載の一部として含める）
。アリフォートを各測定についてアッセイ用緩衝液で希
釈した。
ＰＭＮ−エラスターゼ阻害性画分をプールし、緩衝液交
換を打った（２０麿ホスフエート、−６、３）　’５ｅ
ｐｈａｄｅｘ　Ｇ−２５で脱塩し、そして空隙容量（テ
イドデリューム）をカルブキシ−メチルセルロースカラ
ム（ＣＭ　’５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ−５０）に吸着させ
庭。塩含有量の低い緩衝液（２０ｍＭホスフェート、ｐ
Ｈ６，３）で洗浄することにより、微量の血清アルブミ
ンをカラムから放出させた。
塩濃度の高い緩衝液は、　ＰＭＮ−エラスターゼ阻害剤
を溶出した（　２Ｍ　ＮａＣ４，２０ｍＭホスフェート
、−＆６）。
カラム溶出液を粗く分画しく２ｍ／）、そして活性画分
をプールし、＠８ｅｐｈａｄｅｘ　（）−８５で脱塩し
、そして凍結乾燥した。最終的なＮ製は、逆相様材料を
用いたＥＰＬＣで行った。
ステンレス−スチール製カラムに、５ミクロンの粒度お
よび３００Ｘの細孔径を有するジビニルベンゼンとスチ
レンとの共重合体を充填した。この材料はＣ−１８逆相
材料特性を示す。
この材料は、予め行なった試験において、高いタンパク
およびペプチド回収率を与えることが示された。これは
、一般に用いられる逆相材料の製造に用いられるシリカ
上に存在する不可逆的吸収部位が存在しないためである
。
タンパクまたはペプチドの溶出は、Ｑ〜１００チベータ
の直線濃度勾配を用いて行った。使用された移動相は、
ペプチドおよびタンパクが容易に回収される周知の水／
アセトニトリル／トリフルオロ酢酸系であった。第２図
に示されるクロマトグラム１は、イオン交換カラムで精
製された材料の溶出パターンを示す。
各ピークをクロマトグラムの各ターニング・ポイントで
分画することによりマニュアル的に集め、そしてアリフ
ォートのＰＭＮ−エラスターゼ阻害をアッセイした。Ｐ
ＭＮ−エラスターゼ阻害活性は第２図のビーク７および
８に見出された。
ビーク７および８は再度クロマトグラフィにかけた（第
３図に示されるクロマトグラム２参照）。精製物質をＰ
Ｍト〜エラスターゼ阻害試験およびアミノ酸および配列
分析に付した。純度は、５Ｄ８−ＰＡＧＥ　（１７チア
クリルアミド）を用いて試験した。
活性はピーク７にのみ見出された。５ＤＳ−ＰＡＧＥ（
銀染色手順を３回反復）により、単離された化合物の等
質性が確認された。
遁アリクオー）１−酸化を受けやすいアミノ酸の分解を
防ぐためにフェノールでスＡ？イキングした６Ｎ　’Ｅ
Ｃ１の蒸気相中で加水分解（１１σ６：％　２２時間）
した（　Ｗａｔｅｒｓ　Ａｓ５ｏｃｉａｔｅｓのＰｉ　
ｃｏ−Ｔａｇシステム）。
Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ　Ｗａｔｅｒｓ　Ｃｈｒｏｍａｔｏ
ｇｒａｐｈ　ＤｉｖｉｓｉｏｎＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ
　５ｈｅｅｔ　Ｔ８５／８１５０５　１９Ｂ４年８月、
Ｓ、Ａ、Ｃｏｈｅｎ、　Ｔ−Ｌ、　Ｔａｒｖｉｎ、　Ｂ
、Ａ、　ＢｉｌｉｎｇＢ１１１ｎ参照（その記載を本明
細書の記載の一部に含める）。
その加水分解物ｆ　Ｂｅｃｋｍａｎ　Ａｍ１ｎｏ　Ａｃ
１ｄＡｎａ１７Ｓｅｒ　６３００のスタート用緩衝液に
溶解し、そしてオルトフタルジアルデヒドによるカラム
後誘導体形成および螢光モニタリング（励起一３５６ｎ
、発光４５０ｎｍ）　　を用いた標準的方法を用いて分
析した。
この方法は、第一級アミンに対しては高い感度を示すが
、第二級アミンに対しては全く感応しない。それ故ヒス
チジンを分析できず、従って新規阻害剤のヒスチジン残
基の数は目下のところ測定できない。
明白な理由から１０〜１５チの幅で変動し得るＰＭＰ−
エラスターゼ阻害剤のアミノ酸分析は次のとおりである
。
軟骨由来１５，０００ダルトンエラス ターゼ阻害剤のアミノ酸分析 Ｃｙｓ　　　　　　６．８ Ａｓｐ　　　　　１６．８ Ｔｈｒ　　　　　　７．６ Ｓｅｒ　　　　　　５．８ Ｇｌｕ　　　　　ＩＱ、４ Ｇｌｙ　　　　　　７．８ 残基　　　　　個数／分子 Ａｌａ　　　　　　　　　１Ｑ、４ Ｖａｌ　　　　　　　　４．Ｉ Ｍｅｔ　　　　　　　　　　　１．０ 工ｌｅ２．０ Ｌｅｕ　　　　　’　　１２−２ Ｔｙｒ　　　　　　　　！Ｌ８ Ｐｈｅ　　　　　　　　５．Ｏ Ｈｉ　ｓ　　　　　　　　　　　　−−−−Ｌｙｓ　　
　　　　　３７．４ Ａｒｇ　　　　　　　１６．６ 配列分析は、Ｂｅｃｋｍａｎ　８９０Ｍ　５ｅｑｕｅｎ
ｃｅｒで供給元のプログラムのレビジョンＣ’）用いて
行った。遊離されたフェニルチオヒダントイン−アミノ
酸（ＰＴＨ）は、粒度５ミクロンの逆相材料（Ｃ−１８
）で充填されたＡｌｔｅｘ　Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ　
ＯＤＳカラム（４，６ｘ２５０ｍ）を装着したＷａｔｅ
ｒｓシステムでのＨＰＬＣ分析を用いて同定された。
ステップ濃度勾配および使用緩衝液は、適合化のために
マイナーな変更を加えたほかは、基本的にＡｎｄ、　Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ、　１２０　、　！１０２〜３１１　、　
（１９８２）Ｄ、　Ｈａｗｋｅ、　Ｐａｎ−Ｍｉａｎ　
Ｙｕａｎ、　Ｊ　、Ｅ、　５ｈｉｌｖｅｙに記載のもの
とした（その記載を本明細書の記載の一部に含める）。
シーケンサ−からＩ（ＰＬＯ同定システムへのＰＴＨの
マニュアル式移動ｔ−モニターするための内標単として
、転化後にジエチルフタレートをＦＴＨに添加した。Ｕ
、Ｖ、モニタリングは２６５　ｎｍで行った。
新規阻害剤のアミン末端配列は、次のとおりである。
１５１゜ ）１−Ｌｙｓ−Ｘ−Ｐｈａ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−
Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−ＡｌａＬｅｕ−Ｘ−Ｐｈｅ−
Ａｓｎ−Ａｌａ　−（式中、Ｘはいずれの天然アミノ酸
であってよいが、好ましくはグリコジル化部位であり得
る残基、例、１ｊＬ−セリン、Ｌ−スレオニン、Ｌ−グ
ルタミン、Ｌ−アスノぞラギンなどであり、あるいは任
意の翻訳後修飾アミノ酸例えばトリメチルリジンまたは
γ−カルデキシグルタミン酸などである） Ｘについては、この配列位置にこの分解工程ではペプチ
ドから遊離することのない半一シスチンが存在すること
から、Ｘの同定が困難となる可能性がある。
約２ＤマイクログラムのＰＭＮ−エラスターゼ阻害剤全
０．２マイクログラムのＴＲＣＫ−）リプシンを用いた
トリプシン消化にかけた。全消化物ｉ　ＨＰＬｃ−カラ
ムに注入し、そしてスワロ−スリーブ（ｓｗａｌｌｏｗ
　５ｌｏｐｅｄ　）　１１１度勾配を用いて溶出して第
４図に示されるクロマトグラム３を得た。
ピーク全マニュアル的に集め、そして斜線を施したピー
クを直接配列決定して次の結果を得た。
Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｓｎ　＝
−本発明によるポリペプチドは、非経腸的に、例えば皮
下的にまたは静脈内に、あるいは粘膜を介して例えば経
鼻的にまたは経皮的に用いることができる。
非経腸投与用量は、疾病のタイプにもよるが、１０１〜
５０■／′Ｉｎ２体表面積７日である。重症の場合には
未だ毒性がみられないことから、それを増加することも
できる。
特に重症のときは、１週間あたり数回の投与を数週間に
わたって行うことが推奨される。特別な吸収特性の結果
経鼻投与用量は相応に高くする必要がある。
皮下、静脈内、または経鼻投与には、本発明化合物また
はそれらの生理学的に許容し得る塩を、所望により慣用
物質例えば可溶化剤、乳化剤またはその他の助剤と共に
、溶液、懸濁液または乳濁液、に変える。
新規活性化合物および相当する生理学的に許容し得る塩
に対して可能な溶媒例は次のとおりである：水、生理学
的食塩水またはアルコール、例えばエタノール、ゾロノ
４ンジオール、またはグリセロール、および糖溶液、例
えばグルコースまたはマンニトール溶液、または前述の
各種溶媒の混合物。
非経腸投与は例えば外部のまたは植込みの計量供給装置
、例えば自動ポンプを用いてまたは連続滴注の形態で行
うこともできる。この場合、変性に対して安定化させる
化合物、例えば欧州特許出願第１８６０９号に記載（そ
の記載を本明細書の記載の一部に含める）の化合物を添
加するのが有利である。
本発明化合物は、徐放作用を有する医薬の形で投与する
こともできる。注射液の場合、このような徐放作用は、
例えば医薬を油性ビヒクル中に溶解または懸濁し、粘度
を増加し溶存医薬の拡散を遅延させる高分子を添加し、
医薬を適当な担体分子例えば水酸化アルミニウムに吸着
させ、または結晶懸濁液を用いることによって達成でき
る。
分析されたアミノ酸配列に基づいて、これらプローブを
用いて比較的厳密でない条件下にゲノムまたはｃＤＮＡ
遺伝子ライブラリーを探索する場合、カルテリン遺伝子
とハイブリダイズするプローブを構築することができる
。その後に、同じか、または異なるプローブを用いてよ
り厳密な条件下に陽性クローンを探索すれば、カルテリ
ンをコードする完全なりＮＡまたはその実質的部分を含
む少数のクローンが得られる。後者の場合、この部分Ｄ
ＮＡ配列を用いた新しい探索により、完全なりＮＡ配列
が得られる。
プローブ１　：　Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ｖ
ａｌＴＴＣＡＡＡ　　ＧＴＡ　　ＧＡＣＧＴＧＣＴ １４マープローブ、６２倍縮退 プローブ２　：　Ａｓｎ−Ａｌａ−Ｖａｌ−ＡｓｎＡＡ
ＣＧＣＡ　　ＧＴＡ　　ＡＡ ＣＣ Ｇ Ｔ １４マープｐ−ブ、３２倍縮退 プ筒−ブ３　：　Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ｖ
ａｌ−ＬｅｕＴＴＣＡＡＡ　ＧＴ工ＧＡＣ（）’ｒ工Ｃ
ＴＩＧ １８マー、８倍縮退 「縮退」は、哺乳動物について知られているコード用法
を考慮することにより更に減少させることができる。
例えば、任意の所望のアミノＩｌｌ任意の所定のアミノ
酸と交換できるホスファイト法などにより合成遺伝子を
作ることによってカルテリンの様々なバリエーションを
構築することができる。すなわち、アミノ末端アミノ酸
配列の遺伝子において、Ｘは任意の遺伝子的にコード可
能なアミノ酸、好１しくはＳｅｒ　％Ｔｈｒ　、　Ｇｌ
ｎ　１Ｃｙｓ　１　ｆｔはＡｓｎ％特に好ましくはＳｅ
ｒのコｒンであってよい。
同様に１遺伝子的にコード可能なアミノ酸の欠失または
挿入も可能である。
当業者であれば本明細書の教示に照らして、本発明の教
示を特定の課題または状況に適用できることは理解され
たい。以下の実施例は、本発明の代表例ではあるが、そ
れらを限定するものではない。
実施例　１ 粗抽出物の調製 １８月令の牛の鼻中隔から調製された新鮮な硝子軟骨の
スライスを５客（重／容）の食塩水、（Ｉ　Ｍ　ＮａＣ
ｔ、　０．０５Ｍ酢酸ナトリウム、ｐＨ５，８：２４時
間：４℃）で抽出した。その抽出液を組織から傾瀉し、
２枚のガーゼを通して濾過し、ＮａＣ４の添加により５
ＭＮａＣｔに調節し、そしてＸＭ−５０メンプランを用
いて、２０　ｐｓｉおよび４℃でＡｍ１ｃｏｎ　濾過に
より精製した。その限外ろ液’ｉＵＭ−２メンプランに
対し４０　ｐｓｉおよび４℃で加圧した。そのＵＭ−２
残渣を食塩水（［］、５５ＭＮａＣ４，２ｏ　ｍＭ　Ｔ
ｒｉｓ　ｐｃｔ　、　ｐｌ（７，３）で２回洗浄した。
実施例　２ ゲル濾過クロマトグラフィ 前記粗抽出物を”５ｅｐｈａｄｅｘ　ｏ−２５（Ｉ　Ｘ
　１０ｃＩｒＬ）カラムで濃縮しく　０．５ＮａＣｔ、
　　２０ｍＭ　Ｔｒｉｓ　ＨＣｌ１ｐＨ７，３）　、そ
して空隙容量ピークを分析用（１ｘ１５０ｃＩｒＬ）の
’５ｅｐｈａｃｒｙｌ　Ｓ　−２００カラムでのクロマ
トグラフィにかけた。溶出液の各両分（Ｉｌｌｌｌ）の
タンパク（Ｂｉｏ−Ｒａｄ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａｓ５ａ
ｙ）およびＰＭＮ−エラスターゼ阻害活性をアッセイし
、そして低分子量（１０〜４０ＫＤ）の活性画分をプー
ルした。
実施例　３ 陽イオン交換クロマトグラフィ ’５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ−２５（１Ｘ　１０ｃｒＩＬ）
カラムで緩衝液交換（２０ｍＭホスフェート、ｐＨ６，
３）ｔ−行い、そして空隙カラムビークを短いカルブキ
シ−メチル−セルロース（ＣＭ−■５ｅｐｈａｄｅｘ　
Ｇ−５Ｑ　）カラムに給送した。その方ラムをカラムの
６倍容のホスフェート緩衝液で洗浄し、そして食塩水（
ＩＭ　ＮａＣ２，，２０ｍＭホスフェート、ｐＨ６，３
）で溶出した。分画された溶出液（６酎〕のタンパク含
量および酵素活性をアッセイした。活性画分全プールし
、そして２３　ｍＭホスフェート（−４６，３）ｉ用い
て■５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ−２’ｉで脱塩した。
実施例　４ 阻害アッセイ ６０マイクロリツトル（２，５〜１５マイクログラムの
タンノぐり／１）のＰＭＮ−エラスターゼを９６穴式プ
レートに注ぎ、７０マイクロリツトルのサンプルを添加
しそして３０’Ｃで６０分間インキュベートした。１０
０マイクロリツトルの基質（メトキシ−スクシニル−Ｌ
−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−バリル
−ｐ−ニトロアニリド）のＤＭ、ＳＯ浴溶液添加後、２
０　ｒｍ４　Ｔｒｉｓおよび５００　ｍＭ　、ＮａＣｔ
より成る緩衝溶液（ｐＨ７，３）　’、ｒ：用いて３　
ｍＭまで希釈した（最終ＤＭＳＯ濃度１０％）。分裂バ
ラニトロアニリドの４０５　ｎｍにおける吸収をモニタ
ーし、そしてゼロ時間値と対比することにより反応をフ
ォロ−した。酵素量を様々に変えることにより、半定量
的関係を得た。
実施例　５ ＨＰＬＣ分析 粒度゛５ミクロンおよび３００Ａの細孔径のＰＬＲＰ材
料（Ｐｏｌｙｍｅｒ　Ｌａｂｓ　ＬＴＳ　Ａｍｈｅｒｓ
ｔ、　ＭＡ）で充填された４、６Ｘ２５０ｍｚカラムを
装着したＷａｔｅｒｓ　Ａｓ５ｏｃｉａｔｅｓ　Ｓｙｓ
ｔｅｍでＥＩＰＬＣＴｈ行った。
カラム流出液（１１７分）を２１６　ｎｍでモニターし
た。移動相の構成は、次のとおりとした。
Ａ：１０％アセトニトリル／水中の０．１％トリフルオ
ロ酢酸（ＴＦＡ）。
Ｂ：９０チアセトニトリル／水中のｃＬ１チＴＦＡ　。
濃度勾配は傾きが１係／分とする直線とした。
実施例　６ トリプシン消化 ＰＭＮ、、壬うスターゼ阻害剤の１００マイクロリット
ルのＣＬ２Ｎメチルモルホリン−アセテート緩衝液（ｐ
Ｈ＆１）中の溶液を、ａ２マイクログラムのＴｏｓ−Ｐ
ｈｓ−ＣＥ２Ｃ！を処理トリプシン（Ｍｅｒｃｋ社）を
含有する１０マイクロリツトルの緩衝液と混合し、そし
て３７℃で５時間インキュベートした。反応を凍結によ
り停止させた。そのトリプチツクペゾチＰｔ？、０〜１
００チペータ（傾き１５チ／分）の濃度勾配を用いてＨ
ＰＬＣで分離した。
本発明の方法と物に対して様々な改変を加えることがで
きることは、当業者にとって明らかであろう。すなわち
、本発明は、本発明の改変が特許請求の範囲内、または
その均等の範囲内にある限り、それらの改変を包含する
ものである。
【図面の簡単な説明】
第１図は、５ｅｐｈａｃｒｙｌ　８−２００における、
ＰＭＮ　−エラスターゼ阻害剤粗抽出物の溶出プルフィ
ールである。阻害活性は、画分７５を中心とする低分子
域の溶出タン／４’り中に認められた。 第２図は、　ＰＬＲＰ−カラムにおけるカルボキシ−メ
チル−セルロース精製画分の逆相ＥＰＬＣ。 各ピークをマニュアル的に集め阻害活性をアッセイした
ところ、活性はピーク７および８に認められた。 第３図は、前記クロマト夛ラム（第２図）のピーク７お
よび８の再クロマトグラフィ。競合的阻害活性はピーク
１に認められた。 第４図は、活性画分のトリプシン消化物の逆相ＢＰＬＣ
，全消化物をカラムに注入しそしてピークラマニュアル
的に集めた。斜線部のピークについて配列決定した。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １）１０，０００〜３０，０００ダルトンの分子量、９
    ．５より大きい等電点、および ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｘの各々は同一であるかまたは異なつていてもよ
    く、そして各々は天然アミノ酸を表わす） で示されるアミノ末端アミノ酸配列を有し、または −Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−
    で示されるアミノ酸配列を有するトリプシン分解生成物
    を与えるタンパクまたはその薬学的に許容し得る塩。 ２）１２，０００〜２０，０００ダルトンの分子量を有
    する特許請求の範囲第１項記載のタンパクまたはその薬
    学的に許容し得る塩。 ３）１４，０００〜１８，０００ダルトンの分子量を有
    する特許請求の範囲第１項記載のタンパクまたはその薬
    学的に許容し得る塩。 ４）約１５，０００ダルトンの分子量を有する特許請求
    の範囲第１項記載のタンパクまたはその薬学的に許容し
    得る塩。 ５）ＸがＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、ＡｓｎおよびＣｙｓ
    より成る群より選択される特許請求の範囲第１ないし４
    項のいずれか１項に記載のタンパクまたはその薬学的に
    許容し得る塩。 ６）ＸがＳｅｒを表わす特許請求の範囲第１ないし５項
    のいずれか１項に記載のタンパクまたはその薬学的に許
    容し得る塩。 ７）ラジカルＸのいずれか一方または両方がグリコシル
    化されている特許請求の範囲第１ないし６項のいずれか
    １項に記載のタンパクまたは薬学的に許容し得る塩。 ８）アミノ酸分析が Ｃｙｓ　６．８±１５％ Ａｓｐ　１６．８±１５％ Ｔｈｒ　７．６±１５％ Ｓｅｒ　５．８±１５％ Ｇｌｕ　１０．４±１５％ Ｇｌｙ　７．８±１５％ Ａｌａ　１０．４±１５％ Ｖａｌ　４．１±１５％ Ｍｅｔ　１．０±１５％ Ｉｌｅ　２．０±１５％ Ｌｅｕ　１２．２±１５％ Ｔｙｒ　３．８±１５％ Ｐｈｅ　５．０±１５％ Ｌｙｓ　３７．４±１５％ Ａｒｇ　１６．６±１５％ である、特許請求の範囲第１ないし７項のいずれか１項
    に記載のタンパクまたはその薬学的に許容し得る塩。 ９）アミノ酸分析が Ｃｙｓ　６．８±１０％ Ａｓｐ　１６．８±１０％ Ｔｈｒ　７．６±１０％ Ｓｅｒ　５．８±１０％ Ｇｌｕ　１０．４±１０％ Ｇｌｙ　７．８±１０％ Ａｌａ　１０．４±１０％ Ｖａｌ　４．１±１０％ Ｍｅｔ　１．０±１０％ Ｉｌｅ　２．０±１０％ Ｌｅｕ　１２．２±１０％ Ｔｙｒ　３．８±１０％ Ｐｈｅ　５．０±１０％ Ｌｙｓ　３７．４±１０％ Ａｒｇ　１６．６±１０％ である、特許請求の範囲第１ないし７項のいずれか１項
    に記載のタンパクまたはその薬学的に許容し得る塩。 １０）特許請求の範囲第１ないし９項のいずれか１項に
    記載の精製タンパクの単離方法であつて、そのタンパク
    を、抽出法、メンブラン濾過およびクロマトグラフィ法
    の組合せを用いて軟骨から単離し、場合によりそのタン
    パクを酵素的に分解し、そして場合により得られたタン
    パクをその生理学的に許容し得る塩に変えることより成
    る前記単離方法。 １１）特許請求の範囲第１ないし９項のいずれか１項に
    記載のタンパクの医薬としての使用。 １２）ＰＭＮエラスターゼ阻害のための特許請求の範囲
    第１ないし９項のいずれか１項に記載のタンパクの使用
    。 １３）肺気腫、慢性気管支炎、嚢胞性繊維症、気管支拡
    張症、成人呼吸窮迫症候群、アテローム性動脈硬化症、
    関節炎、乾癖、脈管炎、糸球体腎炎、グラム陽性菌性敗
    血症関連消費性凝固障害、および白血病の治療のための
    特許請求の範囲第１ないし９項のいずれか１項に記載の
    タンパクの使用。 １４）６個またはそれ以上のアミノ酸より成る、特許請
    求の範囲第１ないし４項のいずれか１項に記載のタンパ
    クまたはその薬学的に許容し得る塩の酵素的ペプチド分
    解生成物。
JP62187881A 1986-07-30 1987-07-29 新規な軟骨由来の白血球エラスタ−ゼ阻害剤 Pending JPS6348299A (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US890749 1986-07-30
US06/890,749 US4746729A (en) 1986-07-30 1986-07-30 Cartilage-derived leukocyte elastase-inhibitor

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JPS6348299A true JPS6348299A (ja) 1988-02-29

Family

ID=25397101

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP62187881A Pending JPS6348299A (ja) 1986-07-30 1987-07-29 新規な軟骨由来の白血球エラスタ−ゼ阻害剤

Country Status (8)

Country Link
US (1) US4746729A (ja)
EP (1) EP0257312A3 (ja)
JP (1) JPS6348299A (ja)
KR (1) KR880001699A (ja)
AU (1) AU7624287A (ja)
DK (1) DK395687A (ja)
PT (1) PT85443B (ja)
ZA (1) ZA875581B (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003518635A (ja) * 1999-12-24 2003-06-10 ローベルト ボッシュ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 車両の周囲領域内の対象を検出して評価する方法と装置

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4876332A (en) * 1987-10-08 1989-10-24 Regents Of The Univeristy Of Minnesota Polypeptides with type IV collagen activity
NO177716C (no) * 1989-06-09 1995-11-08 Zeneca Ltd Fremgangsmåte for fremstilling av terapeutisk aktive polypeptider, DNA-sekvens, ekspresjonsvektor og antistoff
US5270303A (en) * 1991-08-05 1993-12-14 Mitsubishi Kasei Corporation Chondromodulin-II protein
ATE420628T1 (de) 1993-07-19 2009-01-15 Angiotech Pharm Inc Anti-angiogene mittel und verfahren zu deren verwendung
US5618925A (en) * 1994-04-28 1997-04-08 Les Laboratories Aeterna Inc. Extracts of shark cartilage having an anti-angiogenic activity and an effect on tumor regression; process of making thereof
US6028118A (en) * 1996-08-08 2000-02-22 Les Laboratoires Aeterna Inc. Methods of using extracts of shark cartilage
US6380366B1 (en) * 1994-04-28 2002-04-30 Les Laboratoires Aeterna Inc. Shark cartilage extract:process of making, methods of using and compositions thereof
US6025334A (en) * 1994-04-28 2000-02-15 Les Laboratoires Aeterna Inc. Extracts of shark cartilage having anti-collagenolytic, anti-inflammatory, anti-angiogenic and anti-tumoral activities; process of making, methods of using and compositions thereof
DE69815310T2 (de) 1997-03-11 2004-04-22 Les Laboratoires Aeterna Inc. Zubereitungen zur tumorbehandlung enthaltend hai-knorpelextrakte und antineoplastische mittel
US6168807B1 (en) 1998-07-23 2001-01-02 Les Laboratoires Aeterna Inc. Low molecular weight components of shark cartilage, processes for their preparation and therapeutic uses thereof
US7034132B2 (en) * 2001-06-04 2006-04-25 Anderson David W Therapeutic polypeptides, nucleic acids encoding same, and methods of use
WO2002099116A2 (en) * 2001-06-04 2002-12-12 Curagen Corporation Therapeutic polypeptides, nucleic acids encoding same, and methods of use
WO2003018620A2 (en) * 2001-08-27 2003-03-06 Les Laboratoires Aeterna Inc. Serine protease inhibitor and processes for the preparation thereof

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
USRE30239E (en) * 1975-11-10 1980-03-25 Cell proliferation and tissue invasion inhibitor
US4042457A (en) * 1975-11-10 1977-08-16 Rush-Presbyterian-St. Luke's Medical Center Preparation of tissue invasion inhibitor and method of treatment utilizing the inhibitor
US4356261A (en) * 1980-04-22 1982-10-26 Rush-Presbyterian-St. Luke's Medical Center Anti-invasion factor containing cultures
FR2487198A1 (fr) * 1980-07-28 1982-01-29 Berri Balzac Sa Nouvelle substance immuno-suppressive, son procede d'isolement et son application en therapeutique
DE3109629A1 (de) * 1981-03-13 1982-09-23 Behringwerke Ag, 3550 Marburg "neues protein (pp(pfeil abwaerts)1(pfeil abwaerts)(pfeil abwaerts)6(pfeil abwaerts)), verfahren zu seiner anreicherung und gewinnung sowie seine verwendung"
JPS6028999A (ja) * 1983-06-30 1985-02-14 Maruho Kk 細胞増殖促進作用を有するたんぱく質、その組成物と製造方法

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003518635A (ja) * 1999-12-24 2003-06-10 ローベルト ボッシュ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 車両の周囲領域内の対象を検出して評価する方法と装置

Also Published As

Publication number Publication date
KR880001699A (ko) 1988-04-26
PT85443B (en) 1989-12-07
ZA875581B (en) 1990-06-27
EP0257312A2 (en) 1988-03-02
DK395687D0 (da) 1987-07-29
EP0257312A3 (en) 1989-10-25
PT85443A (en) 1987-08-01
DK395687A (da) 1988-01-31
US4746729A (en) 1988-05-24
AU7624287A (en) 1988-02-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Miller Isolation and characterization of the cyanogen bromide peptides from the. alpha. 1 (II) chain of chick cartilage collagen
Laki et al. Chemistry and physiology of the fibrinogen-fibrin transition
CA1172978A (en) .alpha.-AMYLASE INACTIVATOR, A PROCESS FOR ITS PREPARATION, AN AGENT BASED ON THIS INACTIVATOR AND ITS USE
JPS60136597A (ja) デスルフアトヒルジン、その製造及びそれを含む製薬組成物
Sheela et al. In vitro degradation of radiolabelled, intact basement membrane mediated by cellular plasminogen activator
JPS6348299A (ja) 新規な軟骨由来の白血球エラスタ−ゼ阻害剤
CA2071538C (en) Hpth (1-37) fragment, its production, drug containing it and its use
JPH0822876B2 (ja) ペプチドホルモンカルジオジラチン及びその製造法
WO1986006079A1 (en) Purified protein having angiogenic activity and methods of preparation
KR20000029783A (ko) 골다공증치료를위한부갑상선호르몬유사체
DE3587526T2 (de) Serinproteaseinhibitoren und isolierungsverfahren dazu.
IBRAHIM et al. Reproductive tract secretions and bull spermatozoa contain different clusterin isoforms that cluster cells and inhibit complement‐induced cytolysis
SHULDINER et al. Isolation and characterization of two different insulins from an amphibian, Xenopus laevis
Highberger et al. Amino acid sequence of chick skin collagen. alpha. 1 (I)-CB8 and the complete primary structure of the helical portion of the chick skin collagen. alpha. 1 (I) chain
EP0310887B1 (en) Vasoconstrictor peptide
JP3378279B2 (ja) ペプチドおよびその製造方法
HENSCHEN et al. Novel structure elucidation strategy for genetically abnormal fibrinogens with incomplete fibrinopeptide release as applied to fibrinogen Schwarzach
JP2010150277A (ja) 腎臓上皮細胞に対するインビトロおよびインビボでの増殖促進タンパク質およびペプチド
FI91484C (fi) Menetelmä uuden solun kasvua säätelevän tekijän, onkostatiini M:n valmistamiseksi
US7550438B2 (en) Methods for production of growth-promoting proteins and peptides for kidney epithelial cells
DK175408B1 (da) Isohirudiner, fremgangsmåde til deres fremstilling, pharmaceutisk middel samt fremgangsmåde til dets fremstilling
EP0070569B1 (en) Novel heptadecapeptide, a method for its preparation and a pharmaceutical composition containing the same
JP3160013B2 (ja) 新規ペプチド
JP3612348B2 (ja) 肝実質細胞増殖因子誘導体
Low et al. [15] Thymosin α1 and polypeptide β1