CN101619331A - 兽疫链球菌发酵产透明质酸的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种兽疫链球菌发酵产透明质酸的方法，本方法在兽疫链球菌发酵过程中添加正己烷，可以显著提高发酵产物中透明质酸的含量。当添加占发酵液总体积0.50％(体积百分含量)的正己烷时，HA产量达到最大值0.406g/L，比对照提高了33.56％。
Description
技术领域
本发明涉及透明质酸的生产方法，尤其是一种微生物发酵产透明质酸的方法。
背景技术
透明质酸(Hyaluronic Acid，HA)又名玻璃酸，是一种酸性大分子粘多糖。目前，透明质酸主要由微生物发酵得到。公开号为CN 86100913的中国专利公开了一种产透明质酸的兽疫链球菌，其保藏号为HA-116 ATCC 39920。该菌株就有较好的产透明质酸的能力。但在发酵生产HA的过程中，随着发酵的进行，发酵液粘度变大，溶氧受到限制，抑制了HA的形成。提高搅拌转速虽可增大溶氧，但同时增大了能量消耗，增加了生产成本，且不利于HA的形成。
发明内容
本发明的目的是提供一种兽疫链球菌发酵产透明质酸的方法。
本发明的技术方案是：采用兽疫链球菌HA-116 ATCC 39920为发酵菌株，经液体发酵生产透明质酸，在发酵体系中添加正己烷。
氧载体是一种与水不互溶、对微生物无毒、具有较高溶氧能力的有机物，添加氧载体可以提高某些发酵过程的传氧系数。液态烷烃如正己烷、正己烷等均可作为氧载体。由于传氧系数的提高，透明质酸的产量也会有显著的提高。当添加占发酵液总体积0.50％(体积百分含量)的正己烷时，添加时间为发酵进行12h时，HA产量达到最大值0.406g/L，比对照提高了33.56％。
作为本发明的一种改进，在发酵体积中添加的正己烷的量为发酵液体积的0.1％-5.0％(在发酵液中的体积百分含量)。
作为本发明的一种改进，在发酵体积中添加的正己烷的量为发酵液体积的0.5％(在发酵液中的体积百分含量)。
作为本发明的一种改进，在发酵体积中添加正己烷的时间为发酵开始时到发酵进行24h时。
本发明的透明质酸的发酵方法采用兽疫链球菌(Streptococcuszooepidemicus)HA-116 ATCC 39920作为出发菌株，经液体发酵生产透明质酸，发酵培养基组成为：葡萄糖2％，蛋白胨1％(质量百分含量)，酵母膏0.5％(质量百分含量)，KH2PO4 0.2％(质量百分含量)，MgSO4·7H2O 0.05％(质量百分含量)，pH 7.5，121℃灭菌30min，工艺条件为：接种量10％(体积百分含量)，培养温度37.5℃。
具体实施方式：
实施例1：
采用兽疫链球菌(Streptococcus zooepidemicus)HA-116 ATCC 39920作为出发菌株，经液体发酵生产透明质酸，发酵培养基组成为：葡萄糖2％(质量百分含量)，蛋白胨1％(质量百分含量)，酵母膏0.5％(质量百分含量)，KH2PO40.2％(质量百分含量)，MgSO4·7H2O 0.05％(质量百分含量)，pH 7.5，121℃灭菌30min。工艺条件为：接种量10％(体积百分含量)，培养温度37.5℃。正己烷的添加量为：0.1％(在发酵液中的体积百分含量)，透明质酸的添加时间为发酵开始时。发酵48h后，所得培养液中透明质酸的含量为0.352g/L。
对比实施例：
采用兽疫链球菌(Streptococcus zooepidemicus)HA-116 ATCC 39920作为出发菌株，经液体发酵生产透明质酸，发酵培养基组成为：葡萄糖2％(质量百分含量)，蛋白胨1％(质量百分含量)，酵母膏0.5％(质量百分含量)，KH2PO40.2％(质量百分含量)，MgSO4·7H2O 0.05％(质量百分含量)，pH 7.5，121℃灭菌30min。工艺条件为：接种量10％(体积百分含量)，培养温度37.5℃。发酵48h后，所得培养液中透明质酸的含量为0.304g/L。
实施例2：
采用兽疫链球菌(Streptococcus zooepidemicus)HA-116 ATCC 39920作为出发菌株，经液体发酵生产透明质酸，发酵培养基组成为：葡萄糖2％(质量百分含量)，蛋白胨1％(质量百分含量)，酵母膏0.5％(质量百分含量)，KH2PO40.2％(质量百分含量)，MgSO4·7H2O 0.05％(质量百分含量)，pH 7.5，121℃灭菌30min。工艺条件为：接种量10％(体积百分含量)，培养温度37.5℃。正己烷的添加量为：0.5％(体积百分含量)，透明质酸的添加时间为发酵开始时。发酵48h后，所得培养液中透明质酸的含量为0.374g/L。
实施例3：
采用兽疫链球菌(Streptococcus zooepidemicus)HA-116 ATCC 39920作为出发菌株，经液体发酵生产透明质酸，发酵培养基组成为：葡萄糖2％(质量百分含量)，蛋白胨1％(质量百分含量)，酵母膏0.5％(质量百分含量)，KH2PO40.2％(质量百分含量)，MgSO4·7H2O 0.05％(质量百分含量)，pH 7.5，121℃灭菌30min。工艺条件为：接种量10％(体积百分含量)，培养温度37.5℃。正己烷的添加量为：0.5％(在发酵液中的体积百分含量)，透明质酸的添加时间为发酵进行到12h时。发酵48h后，所得培养液中透明质酸的含量为0.406g/L。
实施例4：
采用兽疫链球菌(Streptococcus zooepidemicus)HA-116 ATCC 39920作为出发菌株，经液体发酵生产透明质酸，发酵培养基组成为：葡萄糖2％(质量百分含量)，蛋白胨1％(质量百分含量)，酵母膏0.5％(质量百分含量)，KH2PO40.2％(质量百分含量)，MgSO4·7H2O 0.05％(质量百分含量)，pH 7.5，121℃灭菌30min。工艺条件为：接种量10％(体积百分含量)，培养温度37.5℃。正己烷的添加量为：0.5％(在发酵液中的体积百分含量)，透明质酸的添加时间为发酵进行到24h时。发酵48h后，所得培养液中透明质酸的含量为0.362g/L。
实施例5：
采用兽疫链球菌(Streptococcus zooepidemicus)HA-116 ATCC 39920作为出发菌株，经液体发酵生产透明质酸，发酵培养基组成为：葡萄糖2％(质量百分含量)，蛋白胨1％(质量百分含量)，酵母膏0.5％(质量百分含量)，KH2PO40.2％(质量百分含量)，MgSO4·7H2O 0.05％(质量百分含量)，pH 7.5，121℃灭菌30min。工艺条件为：接种量10％(体积百分含量)，培养温度37.5℃。正己烷的添加量为：1.0％(在发酵液中的体积百分含量)，透明质酸的添加时间为发酵进行到12h时。发酵48h后，所得培养液中透明质酸的含量为0.354g/L。
实施例6：
采用兽疫链球菌(Streptococcus zooepidemicus)HA-116 ATCC 39920作为出发菌株，经液体发酵生产透明质酸，发酵培养基组成为：葡萄糖2％(质量百分含量)，蛋白胨1％(质量百分含量)，酵母膏0.5％(质量百分含量)，KH2PO40.2％(质量百分含量)，MgSO4·7H2O 0.05％(质量百分含量)，pH 7.5，121℃灭菌30min。工艺条件为：接种量10％(体积百分含量)，培养温度37.5℃。正己烷的添加量为：0.1％(在发酵液中的体积百分含量)，透明质酸的添加时间为发酵进行到12h时。发酵48h后，所得培养液中透明质酸的含量为0.352g/L。
实施例7：
采用兽疫链球菌(Streptococcus zooepidemicus)HA-116 ATCC 39920作为出发菌株，经液体发酵生产透明质酸，发酵培养基组成为：葡萄糖2％(质量百分含量)，蛋白胨1％(质量百分含量)，酵母膏0.5％(质量百分含量)，KH2PO40.2％(质量百分含量)，MgSO4·7H2O 0.05％(质量百分含量)，pH 7.5，121℃灭菌30min。工艺条件为：接种量10％(体积百分含量)，培养温度37.5℃。正己烷的添加量为：1.5％(在发酵液中的体积百分含量)，透明质酸的添加时间为发酵进行到24h时。发酵48h后，所得培养液中透明质酸的含量为0.348g/L。
实施例8：
采用兽疫链球菌(Streptococcus zooepidemicus)HA-116 ATCC 39920作为出发菌株，经液体发酵生产透明质酸，发酵培养基组成为：葡萄糖2％(质量百分含量)，蛋白胨1％(质量百分含量)，酵母膏0.5％(质量百分含量)，KH2PO40.2％(质量百分含量)，MgSO4·7H2O 0.05％(质量百分含量)，pH 7.5，121℃灭菌30min。工艺条件为：接种量10％(体积百分含量)，培养温度37.5℃。正己烷的添加量为：3.0％(在发酵液中的体积百分含量)，透明质酸的添加时间为发酵开始时。发酵48h后，所得培养液中透明质酸的含量为0.326g/L。
实施例9：
采用兽疫链球菌(Streptococcus zooepidemicus)HA-116 ATCC 39920作为出发菌株，经液体发酵生产透明质酸，发酵培养基组成为：葡萄糖2％(质量百分含量)，蛋白胨1％(质量百分含量)，酵母膏0.5％(质量百分含量)，KH2PO40.2％(质量百分含量)，MgSO4·7H2O 0.05％(质量百分含量)，pH 7.5，121℃灭菌30min。工艺条件为：接种量10％(体积百分含量)，培养温度37.5℃。正己烷的添加量为：5.0％(在发酵液中的体积百分含量)，透明质酸的添加时间为发酵进行到12h时。发酵48h后，所得培养液中透明质酸的含量为0.321g/L。
Claims (6)
1.兽疫链球菌发酵产透明质酸的方法，其特征在于：发酵体系中添加有正己烷。
2.根据权利要求1所述的兽疫链球菌发酵产透明质酸的方法，其特征在于：所述添加的正己烷的浓度为0.1％-5.0％(在发酵液中的体积百分含量)。
3.根据权利要求2所述的兽疫链球菌发酵产透明质酸的方法，其特征在于：所述添加的正己烷的浓度为0.5％(在发酵液中的体积百分含量)。
4.根据权利要求1、2或3所述的兽疫链球菌发酵产透明质酸的方法，其特征在于：所述添加的正己烷在添加的时间为发酵开始时到发酵进行24h时。
5.根据权利要求1、2或3所述的兽疫链球菌发酵产透明质酸的方法，其特征在于：所述透明质酸的发酵方法采用兽疫链球菌(Streptococcus zooepidemicus)HA-116 ATCC 39920作为出发菌株.
6.根据权利要求5所述的兽疫链球菌发酵产透明质酸的方法，其特征在于：所述透明质酸的发酵方法采用的发酵培养基组成为：葡萄糖2％，蛋白胨1％(质量百分含量)，酵母膏0.5％(质量百分含量)，KH2PO4 0.2％(质量百分含量)，MgSO4·7H2O 0.05％(质量百分含量)，pH 7.5，工艺条件为：接种量10％(体积百分含量)，培养温度37.5℃。
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