CN101614710A - 高效液相色谱法分离测定地西他滨有关物质及其对应异构体的方法 - Google Patents

高效液相色谱法分离测定地西他滨有关物质及其对应异构体的方法 Download PDF

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汪娟
王蕾
李星
刘方
刘丹梅
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    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/30—Partition chromatography
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Abstract

本发明公开了一种高效液相色谱法分离测定地西他滨有关物质及其对应异构体的方法。本发明采用高效液相色谱法，采用亲水键合硅胶柱，以乙腈－水为流动相，以含有氢氧化钠或碳酸钠或碳酸氢钠或氢氧化钾和磷酸二氢钾的溶液为溶剂，既保证了地西他滨的溶解性，又增加了地西他滨的稳定性，可用于地西他滨和含有地西他滨的药物组合物的质量控制。

Description

高效液相色谱法分离测定地西他滨有关物质及其对应异构体的方法
技术领域：
本发明涉及一种高效液相色谱方法，特别是一种地西他滨有关物质及其对映异构体的高效液相色谱分离测定方法。
背景技术：
地西他滨是一类低甲基化试剂，具有独特的作用机制。地西他滨经磷酸化后，直接掺入至DNA甲基转移酶中，使DNA甲基化，导致细胞分化或凋亡，从而发挥抗肿瘤作用。MGI Pharma公司于2006年4月和5月由欧洲EMEA和美国FDA批准上市，用于治疗骨髓增生异常综合征的治疗，适合于包括所有法国-美国-英国(FAB)分型的已接受治疗和未接受治疗的、新发病的和继发性的MDS患者，以及按IPSS系统分为高危险、中度2级危险、中度1级危险的MDS患者。分子式为C8H12N4O4，化学结构式为：
Figure A20091008957400031
地西他滨的主要杂质为α型构型地西他滨，在合成过程中产生，并且由于地西他滨在水溶液中极不稳定，水溶液环境中的水分对其5-杂氮胞嘧啶环进行亲核攻击，使得5-杂氮胞嘧啶环发生断裂，降解为其α型无活性同分异构体。因此，地西他滨的质量控制显得极为重要。
普通的反相C18色谱柱上检测地西他滨有关物质存在杂质分离度不够或检测不出的问题，使用HILIC色谱柱实现了杂质的良好分离。采用含有氢氧化钠和磷酸二氢钾的溶液作为溶解地西他滨的溶剂，既保证了地西他滨的良好溶解又增加了其稳定性，从而保证了地西他滨的质量可控性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用高效液相色谱法分离测定地西他滨有关物质及其对映异构体的方法，可用于地西他滨的质量控制。
本发明提供一种用高效液相色谱法分离测定地西他滨有关物质及其对映异构体的方法，选用HILIC色谱柱。
本发明提供一种用高效液相色谱法分离测定地西他滨有关物质及其对映异构体的方法，选用的流动相为乙腈-水，乙腈与水的体积比可为80∶20～99∶1。
本发明提供一种用高效液相色谱法分离测定地西他滨有关物质及其对映异构体的方法，溶解地西他滨的溶剂为含有氢氧化钠或碳酸钠或碳酸氢钠或氢氧化钾和磷酸二氢钾的溶液，此溶剂中氢氧化钠或碳酸钠或碳酸氢钠或氢氧化钾的百分比(w/v)可为0.02％～0.2％，磷酸二氢钾的百分比(w/v)可为0.2％～2.0％。
本发明提供一种用高效液相色谱法分离测定地西他滨有关物质及其对映异构体的方法，样品溶液的制备其特征在于：取地西他滨5～50mg，用含有氢氧化钠或碳酸钠或碳酸氢钠或氢氧化钾和磷酸二氢钾的溶剂1～5mL溶解，用乙腈稀释至50～100mL。
本发明提供一种用高效液相色谱法分离测定地西他滨有关物质及其对映异构体的方法，可按以下方法实现：取地西他滨5～50mg，用溶剂溶解并用乙腈稀释定容，选用HILIC色谱柱，乙腈-水为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长为244nm，室温。取样品溶液20μL，注入液相色谱仪，完成地西他滨有关物质及其对映异构体的分离测定。
附图说明
图1流动相为乙腈∶水＝(85∶15)的HPLC图。
图1中10号峰为地西他滨的色谱峰(β-型)，9号峰为地西他滨对映异构体(α-型)的色谱峰。
图2流动相为乙腈∶水＝(90∶10)的HPLC图。
图2中10号峰为地西他滨的色谱峰(β-型)，9号峰为地西他滨对映异构体(α-型)的色谱峰。
图3流动相为乙腈∶水＝(96∶4)的HPLC图。
图3中10号峰为地西他滨的色谱峰(β-型)，9号峰为地西他滨对映异构体(α-型)的色谱峰。
具体实施方式：
以下为本发明的具体实施例，但不限于本实施的范围。
采用不同比例流动相分离测定地西他滨有关物质及其对映异构体的具体实施例
实施例1
仪器与条件
高效液相色谱仪：岛津：LC-10ATvp
色谱柱：Venusil HILIC(丙基酰胺键合硅胶)柱(4.6×150mm，5μm)
流动相：乙腈∶水＝(85∶15)
紫外检测波长：244nm
流速：1.0mL/min
进样量：20μL
实验步骤
溶剂的制备：取氢氧化钠58mg，磷酸二氢钾540mg，用水稀释至100mL，即得。
取地西他滨约5mg，置于50mL量瓶中，加5mL溶剂溶解并用乙腈稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，按上述色谱条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图1。
图1中10号峰为地西他滨的色谱峰(β-型)，9号峰为地西他滨对映异构体(α-型)的色谱峰。
实施例2
仪器与条件
高效液相色谱仪：岛津：LC-10ATvp
色谱柱：Venusil HILIC(丙基酰胺键合硅胶)柱(4.6×150mm，5μm)
流动相：乙腈∶水＝(90∶10)
紫外检测波长：244nm
流速：1.0mL/min
进样量：20μL
实验步骤
溶剂的制备：取氢氧化钠58mg，磷酸二氢钾540mg，用水稀释至100mL，即得。
取地西他滨约5mg，置于50mL量瓶中，加5mL溶剂溶解并用乙腈稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，按上述色谱条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图1。
图2中10号峰为地西他滨的色谱峰(β-型)，9号峰为地西他滨对映异构体(α-型)的色谱峰。
实施例3
仪器与条件
高效液相色谱仪：岛津：LC-10ATvp
色谱柱：Venusil HILIC(丙基酰胺键合硅胶)柱(4.6×150mm，5μm)
流动相：乙腈∶水＝(96∶4)
紫外检测波长：244nm
流速：1.0mL/min
进样量：20μL
实验步骤
溶剂的制备：取氢氧化钠58mg，磷酸二氢钾540mg，用水稀释至100mL，即得。
取地西他滨约5mg，置于50mL量瓶中，加5mL溶剂溶解并用乙腈稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，按上述色谱条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图1。
图3中10号峰为地西他滨的色谱峰(β-型)，9号峰为地西他滨对映异构体(α-型)的色谱峰。
地西他滨有关物质及其对映异构体稳定性试验的具体实施例
实施例1
仪器与条件
高效液相色谱仪：岛津：LC-10ATvp
色谱柱：Venusil HILIC(丙基酰胺键合硅胶)柱(4.6×150mm，5μm)
流动相：乙腈∶水＝(96∶4)
紫外检测波长：244nm
流速：1.0mL/min
进样量：20μL
实验步骤
溶剂的制备：取碳酸钠20mg，磷酸二氢钾2.0g，用水稀释至100mL，即得。
取地西他滨约5mg，置于50mL量瓶中，加1mL溶剂溶解并用乙腈稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，按上述色谱条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，地西他滨在8h内的稳定性测定结果见表1。
表1以碳酸钠和磷酸二氢钾溶液为溶剂时地西他滨的稳定性
Figure A20091008957400071
实施例2
仪器与条件
高效液相色谱仪：岛津：LC-10ATvp
色谱柱：Venusil HILIC(丙基酰胺键合硅胶)柱(4.6×150mm，5μm)
流动相：乙腈∶水＝(96∶4)
紫外检测波长：244nm
流速：1.0mL/min
进样量：20μL
实验步骤
溶剂的制备：取碳酸氢钠100mg，磷酸二氢钾1.0g，用水稀释至100mL，即得。
取地西他滨约20mg，置于50mL量瓶中，加5mL溶剂溶解并用乙腈稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，按上述色谱条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，地西他滨在8h内的稳定性测定结果见表2。
表2以碳酸氢钠和磷酸二氢钾溶液为溶剂时地西他滨的稳定性
实施例3
仪器与条件
高效液相色谱仪：岛津：LC-10ATvp
色谱柱：Venusil HILIC(丙基酰胺键合硅胶)柱(4.6×150mm，5μm)
流动相：乙腈∶水＝(96∶4)
紫外检测波长：244nm
流速：1.0mL/min
进样量：20μL
实验步骤
溶剂的制备：取氢氧化钾200mg，磷酸二氢钾500mg，用水稀释至100mL，即得。
取地西他滨约40mg，置于100mL量瓶中，加5mL溶剂溶解并用乙腈稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，按上述色谱条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，地西他滨在8h内的稳定性测定结果见表3。
表3以氢氧化钾和磷酸二氢钾溶液为溶剂时地西他滨的稳定性
Figure A20091008957400082

Claims (6)

1.一种用高效液相色谱法分离测定地西他滨有关物质及其对映异构体的方法，其特征在于选用HILIC色谱柱，以乙腈-水溶液作为流动相，以含有氢氧化钠或碳酸钠或碳酸氢钠或氢氧化钾和磷酸二氢钾的溶液为溶剂制备样品溶液。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于选用HILIC色谱柱。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于选用的流动相为乙腈-水，乙腈与水的体积比可为80∶20～99∶1。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于溶解地西他滨的溶剂为含有氢氧化钠或碳酸钠或碳酸氢钠或氢氧化钾和磷酸二氢钾的溶液，此溶剂中氢氧化钠或碳酸钠或碳酸氢钠或氢氧化钾的百分比(w/v)可为0.02％～0.2％，磷酸二氢钾的百分比(w/v)可为0.2％～2.0％。
5.根据权利要求1所述的方法，样品溶液的制备其特征在于：取地西他滨5～50mg，用含有氢氧化钠或碳酸钠或碳酸氢钠或氢氧化钾和磷酸二氢钾的溶剂1～5mL溶解，用乙腈稀释至50～100mL。
6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于：取地西他滨5～50mg，，用溶剂溶解并用乙腈稀释定容，选用HILIC色谱柱，乙腈-水为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长为244nm，室温。取样品溶液20μL，注入液相色谱仪，完成地西他滨有关物质及其对映异构体的分离测定。
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PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
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WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Open date: 20091230