CN104007185B - 一种检测扎那米韦及含扎那米韦制剂中杂质的hplc测定方法 - Google Patents
一种检测扎那米韦及含扎那米韦制剂中杂质的hplc测定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104007185B CN104007185B CN201310058607.0A CN201310058607A CN104007185B CN 104007185 B CN104007185 B CN 104007185B CN 201310058607 A CN201310058607 A CN 201310058607A CN 104007185 B CN104007185 B CN 104007185B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- zanamivir
- solution
- mobile phase
- buffer salt
- plus
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 229960001028 zanamivir Drugs 0.000 title claims abstract description 41
- ARAIBEBZBOPLMB-UFGQHTETSA-N zanamivir Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](N=C(N)N)C=C(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO ARAIBEBZBOPLMB-UFGQHTETSA-N 0.000 title claims abstract description 41
- 239000012535 impurity Substances 0.000 title claims abstract description 37
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 238000010268 HPLC based assay Methods 0.000 title claims abstract description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 68
- 238000002013 hydrophilic interaction chromatography Methods 0.000 claims abstract description 35
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 25
- 239000000337 buffer salt Substances 0.000 claims abstract description 22
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical group CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 66
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 65
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 35
- VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N ammonium formate Chemical compound [NH4+].[O-]C=O VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 claims description 12
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 claims description 12
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 claims description 12
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 claims description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 7
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 5
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 229960001866 silicon dioxide Drugs 0.000 claims description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 238000009938 salting Methods 0.000 claims description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 claims 1
- 239000003405 delayed action preparation Substances 0.000 claims 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 abstract description 19
- 239000003495 polar organic solvent Substances 0.000 abstract description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 abstract description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 abstract description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 3
- 238000007689 inspection Methods 0.000 abstract description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 abstract description 2
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 abstract 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 60
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 48
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 31
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 28
- 229940098458 powder spray Drugs 0.000 description 27
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 21
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 15
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 15
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 10
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- -1 ammonium formates Chemical class 0.000 description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 8
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 5
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 150000003217 pyrazoles Chemical class 0.000 description 4
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 4
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 3
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 3
- 230000008832 photodamage Effects 0.000 description 3
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- PGZUMBJQJWIWGJ-ONAKXNSWSA-N oseltamivir phosphate Chemical compound OP(O)(O)=O.CCOC(=O)C1=C[C@@H](OC(CC)CC)[C@H](NC(C)=O)[C@@H](N)C1 PGZUMBJQJWIWGJ-ONAKXNSWSA-N 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical class [H]N([H])* 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- UBCHPRBFMUDMNC-UHFFFAOYSA-N 1-(1-adamantyl)ethanamine Chemical compound C1C(C2)CC3CC2CC1(C(N)C)C3 UBCHPRBFMUDMNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007445 Chromatographic isolation Methods 0.000 description 1
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerol Natural products OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940123424 Neuraminidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 238000000622 liquid--liquid extraction Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 229960002194 oseltamivir phosphate Drugs 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 1
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229960000888 rimantadine Drugs 0.000 description 1
- 239000002911 sialidase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 229940061367 tamiflu Drugs 0.000 description 1
Landscapes
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
Abstract
本发明公开了一种检测扎那米韦及含扎那米韦制剂中杂质的HPLC测定方法，选用亲水作用色谱法（hydrophilic interaction liquid chromatography,HILIC）来分离扎那米韦及其有关物质，具体是以色谱柱为HILIC柱，流动相选自极性有机溶剂‑缓冲盐溶液、极性有机溶剂‑弱酸溶液或者极性有机溶剂水溶液，检测波长200nm~240nm等作为检查扎那米韦及含扎那米韦的相关制剂中杂质的测定方法。本发明的测定方法可快速准确的检测出扎那米韦的工艺杂质和降解产物，具有操作简捷、灵敏度高、重复性好、结果可靠的特点。
Description
技术领域
本发明涉及一种检测扎那米韦及含扎那米韦制剂中杂质的HPLC测定方法，属于药物杂质分析检测领域。
背景技术
扎那米韦由葛兰素史克公司研发，于1999年8月由美国FDA批准上市，主要用于治疗A型和B型流感，与罗氏公司研发的磷酸奥司他韦胶囊（商品名：达菲）为目前国际上公认的流感治疗药物。扎那米韦是自1993年金刚乙胺上市后第一个获得批准的流感治疗药，也是第一个神经氨酸酶抑制剂类流感病毒治疗药。其化学名为：5-乙酰氨基-4-[（氨基亚氨基甲基）-氨基]-2,6-氢-3,4,5-三去氧-D-丙三醇基-D-半乳糖-2-烯醇酸。分子式C12H20N4O7，相对分子量332.3。本品为白色或类白色粉末，20℃是水中的溶解度约为18mg/ml。
现有的扎那米韦杂质分析技术中色谱柱的选择主要有C18色谱柱和氨基柱两类，但都存在明显缺陷。反相体系以C18色谱柱为代表对扎那米韦均不保留，尽管通过选用离子对试剂，能够适当增加扎那米韦的保留，但分析时间过长，不适合作为杂质质量控制的分析方法。另一方面由于扎那米韦显弱酸性，易在氨基柱中键合吸附，造成色谱分离不稳定，因此氨基色谱柱不适用于定量定性用。
HILIC柱是一种新型的色谱柱，是正相色谱的变体，其保留强度与溶质极性成正比，而与流动相成反比。HILIC色谱使用极性固定相，与高有机相比例的流动相。极性固定相从吸附水或其他极性溶剂使固定相表面建立一层水层或极性层，而流动相的主体则是非质子化溶剂。HILIC色谱是多重保留机制同时作用的过程，而首先发生的是液液分配。在分析过程中化合物在流动相与固定相表面的水层或极性层之间进行液液分配，极性化合物倾向于分配进入高极性的水层或极性层获得保留，之后还能与固定相表面发生吸附作用和/或离子交换作用进一步增强保留，因此HILIC色谱能够使极性分析物得到好的保留与分离，并能够提供相对于反相色谱近乎正交的选择性。
HILIC色谱柱适用于在反相色谱柱上不保留的化合物的分离，尤其是对强极性化合物的保留能力增强。除了对极性化合物表现出优异保留能力外，HILIC色谱柱能够提高LC/ESI-MS（液质联用（电喷雾离子源））响应信号，样品溶液直接兼容SPE（固相萃取）洗脱剂，并且与传统反相HPLC具有互补的选择性。
HILIC硅胶柱还具有寿命长，与各种LC（高效液相）检测器兼容，色谱柱间重现性好的特点。
因此，鉴于扎那米韦及含扎那米韦制剂中杂质的现有检测技术的缺陷，对应用HILIC色谱柱检查扎那米韦及含扎那米韦的相关制剂中杂质的测定方法进行研究是十分必要的。
发明内容
本发明的目的在于通过对固定相、流动相、检测波长等方面的改进，提供一种检测扎那米韦及含扎那米韦制剂中杂质的HPLC测定方法。该发明选用HILIC柱进行检测，不但扎那米韦能够得到适当保留，而且流动相配制简单，重现性好，分析时间合适，与MS（质谱）匹配度好，灵敏度高，分析方法稳定，柱寿命长等优势。
本发明采取的技术方案如下：
本发明提供了一种检测扎那米韦及含扎那米韦制剂中杂质的HPLC测定方法，其特征在于：固定相选用HILIC色谱柱，分离机制为亲水作用色谱法（hydrophilic interactionliquid chromatography,HILIC），流动相选自极性有机溶剂-缓冲盐溶液或极性有机溶剂-弱酸溶液或极性有机溶剂水溶液，检测波长范围为200nm~240nm。其中HILIC色谱柱为极性固定相，所述极性固定相选自未衍生化硅胶或修饰氨基、氰基和羟基等极性基团的硅胶柱等。
进一步，流动相为乙腈-缓冲盐溶液或乙腈-弱酸溶液或乙腈-水溶液，优选乙腈-缓冲盐溶液。再进一步，所述的流动相中乙腈与缓冲盐溶液的比例为50~90：50~10，优选60~70：40~30，所述的流动相中乙腈与弱酸溶液的比例为50~90：50~10，优选60~70：40~30，所述的流动相中乙腈与水的比例为50~90：50~10，优选60~70：40~30。
再进一步，所述的缓冲盐溶液选自甲酸铵缓冲盐体系、乙酸铵缓冲盐体系、磷酸盐缓冲盐体系或者它们之间任意配比形成的混合溶液，优选甲酸铵缓冲盐体系或乙酸铵缓冲盐体系。其中所述甲酸铵缓冲盐体系选自甲酸铵溶液、甲酸铵加甲酸溶液、甲酸铵加乙酸溶液；所述乙酸铵缓冲盐溶液选自乙酸铵溶液、乙酸铵加甲酸溶液、乙酸铵加乙酸溶液。
再进一步，所述缓冲盐溶液优选甲酸铵溶液。
再进一步，所述缓冲盐溶液的浓度范围为1mM~200mM，优选1mM~10mM。
再进一步，所述的缓冲盐溶液体系的pH范围为5.0~8.0，优选6.0~7.0。
再进一步，所述的弱酸溶液选自甲酸水溶液、乙酸水溶液。
再进一步，所述的弱酸溶液的浓度范围为1mM~200mM，优选1mM~10mM。
再进一步，所述的弱酸溶液的pH范围为5.0~8.0，优选6.0~7.0。
再进一步，所述的检测波长的范围为200nm~240nm，其中在210nm和234nm双波长下，扎那米韦及其有关物质均能被检测到。
本发明与现有技术相比，主要优势在于：
HILIC色谱柱对极性化合物具有优异的保留能力，能够提高LC/ESI-MS（液质联用（电喷雾离子源））响应信号，样品溶液直接兼容SPE（固相萃取）洗脱剂，并且与传统反相HPLC具有互补的选择性。该发明选用HILIC柱进行检测，不但扎那米韦能够得到适当保留，而且流动相配制简单，重现性好，分析时间合适，与MS（质谱）匹配度好，灵敏度高，分析方法稳定，柱寿命长等优势。
附图说明
图1为210nm波长项下扎那米韦的紫外吸收图谱。
图2为234nm波长项下扎那米韦的紫外吸收图谱。
图3为210nm波长项下检测到的酸破坏样品中的杂质图谱。
图4为234nm波长项下检测到的酸破坏样品中的杂质图谱。
图5为210nm波长项下检测到的碱破坏样品中的杂质图谱。
图6为234nm波长项下检测到的碱破坏样品中的杂质图谱。
图7为210nm波长项下检测到的氧化破坏样品中的杂质图谱。
图8为234nm波长项下检测到的氧化破坏样品中的杂质图谱。
图9为210nm波长项下检测到的光破坏样品中的杂质图谱。
图10为234nm波长项下检测到的光破坏样品中的杂质图谱。
图11为已有检测方法在210nm波长下各添加杂质的杂质图谱。
图12为已有检测方法在234nm波长项下各添加杂质的杂质图谱。
具体实施方案
以下是本发明的具体实施例，用以对本发明的技术方案做进一步的说明，而非对本发明的限制。
以下实施例中检测所用的扎那米韦原料药及吸入粉雾剂均由南京先声东元制药有限公司提供，批号为96110201。
实施例1：1.1样品溶液配制：取吸入粉雾剂适量，精密称定，加适量的水超声溶解后，加流动相稀释制成每1ml中含扎那米韦20mg的溶液，作为供试品溶液。
1.2仪器与色谱条件：
仪器：Agilent 1200高效液相色谱仪；
色谱柱：Waters HILIC Silica(4.6*150mm,3μm)；
流动相：乙腈:10mM甲酸铵（pH6.5）=65:35；
流速：0.5ml/min；
柱温：25℃；
检测波长：210nm和234nm；
1.3测定：取5μl注入高效液相色谱仪，记录图谱（附图1、图2）。
实施例2：
2.1样品溶液配制：取吸入粉雾剂约10mg，加流动相配成0.5mg/ml的供试液，加0.1mol/L的盐酸溶液2ml，放置，加0.1mol/L的氢氧化钠溶液2ml中和，作为酸破环样品溶液。
2.2仪器与色谱条件：
仪器：Agilent 1200高效液相色谱仪；
色谱柱：Waters HILIC Silica(4.6*150mm,3μm)；
流动相：乙腈:10mM甲酸铵（pH6.5）=65:35；
流速：0.5ml/min；
柱温：25℃；
检测波长：210nm和234nm；
2.3测定：取5μl注入高效液相色谱仪，记录图谱（附图3、图4）。
实施例3：
3.1样品溶液配制：取吸入粉雾剂约10mg，加流动相配成0.5mg/ml的供试液，加0.1mol/L的氢氧化钠溶液2ml，放置，加0.1mol/L的盐酸溶液2ml中和，作为碱破环样品溶液。
3.2仪器与色谱条件：
仪器：Agilent 1200高效液相色谱仪；
色谱柱：Waters HILIC Silica(4.6*150mm,3μm)；
流动相：乙腈:10mM甲酸铵（pH6.5）=65:35；
流速：0.5ml/min；
柱温：25℃；
检测波长：210nm和234nm；
3.3测定：取5μl注入高效液相色谱仪，记录图谱（附图5、图6）。
实施例4：
4.1样品溶液配制：取吸入粉雾剂约10mg，用流动相配成0.5mg/ml的供试液，加过氧化氢一滴，室温放置，作为氧化破坏样品溶液。
4.2仪器与色谱条件：
仪器：Agilent 1200高效液相色谱仪；
色谱柱：Waters HILIC Silica(4.6*150mm,3μm)；
流动相：乙腈:10mM甲酸铵（pH6.5）=65:35；
流速：0.5ml/min；
柱温：25℃；
检测波长：210nm和234nm；
4.3测定：取5μl注入高效液相色谱仪，记录图谱（附图7、图8）。
实施例5：
5.1样品溶液配制：取吸入粉雾剂约10mg用流动相配成0.5mg/ml的供试液于4500lx的强光中放置数天，作为光破坏样品溶液。
5.2仪器与色谱条件：
仪器：Agilent 1200高效液相色谱仪；
色谱柱：Waters HILIC Silica(4.6*150mm,3μm)；
流动相：乙腈:10mM甲酸铵（pH6.5）=65:35；
流速：0.5ml/min；
柱温：25℃；
检测波长：210nm和234nm；
5.3测定：取5μl注入高效液相色谱仪，记录图谱（附图9、图10）。
实施例6：
6.1样品溶液配制：取吸入粉雾剂约10mg，加流动相配成0.5mg/ml的供试液，加0.1mol/L的盐酸溶液2ml，放置，加0.1mol/L的氢氧化钠溶液2ml中和，作为酸破环样品；取吸入粉雾剂约10mg，加流动相配成0.5mg/ml的供试液，加0.1mol/L的氢氧化钠溶液2ml，放置，加0.1mol/L的盐酸溶液2ml中和，作为碱破坏样品；取吸入粉雾剂约10mg，用流动相配成0.5mg/ml的供试液，加过氧化氢一滴，室温放置，作为氧化破坏样品。
6.2仪器与色谱条件：
仪器：Agilent 1200高效液相色谱仪；
色谱柱：Waters HILIC Silica(4.6*150mm,5μm)；
流动相：乙腈:水=70:30；
流速：1ml/min；
柱温：30℃；
检测波长：200nm和240nm；
6.3测定：取10μl注入高效液相色谱仪，记录图谱，主峰及各杂质在色谱柱上可分离开。
实施例7：
7.1样品溶液配制：取吸入粉雾剂约10mg，加流动相配成0.5mg/ml的供试液，加0.1mol/L的盐酸溶液2ml，放置，加0.1mol/L的氢氧化钠溶液2ml中和，作为酸破环样品；取吸入粉雾剂约10mg，加流动相配成0.5mg/ml的供试液，加0.1mol/L的氢氧化钠溶液2ml，放置，加0.1mol/L的盐酸溶液2ml中和，作为碱破坏样品；取吸入粉雾剂约10mg，用流动相配成0.5mg/ml的供试液，加过氧化氢一滴，室温放置，作为氧化破坏样品。
7.2仪器与色谱条件：
仪器：Agilent 1200高效液相色谱仪；
色谱柱：Waters HILIC Silica(4.6*150mm,3μm)；
流动相：乙腈:水=70:30；
流速：1ml/min；
柱温：25℃；
检测波长：200nm和234nm；
7.3测定：取20μl注入高效液相色谱仪，记录图谱，主峰及各杂质在色谱柱上可分离开。
实施例8：
8.1样品溶液配制：取吸入粉雾剂约10mg，加流动相配成0.5mg/ml的供试液，加0.1mol/L的盐酸溶液2ml，放置，加0.1mol/L的氢氧化钠溶液2ml中和，作为酸破环样品；取吸入粉雾剂约10mg，加流动相配成0.5mg/ml的供试液，加0.1mol/L的氢氧化钠溶液2ml，放置，加0.1mol/L的盐酸溶液2ml中和，作为碱破坏样品；取吸入粉雾剂约10mg，用流动相配成0.5mg/ml的供试液，加过氧化氢一滴，室温放置，作为氧化破坏样品。
8.2仪器与色谱条件：
仪器：Agilent 1200高效液相色谱仪；
色谱柱：Waters HILIC Silica(4.6*150mm,3μm)；
流动相：乙腈:10mM甲酸铵=65:35；
流速：1ml/min；
柱温：25℃；
检测波长：200nm和234nm；
8.3测定：取20μl注入高效液相色谱仪，记录图谱，主峰及各杂质在色谱柱上可分离开。
实施例9：
9.1样品溶液配制：取吸入粉雾剂约10mg，加流动相配成0.5mg/ml的供试液，加0.1mol/L的盐酸溶液2ml，放置，加0.1mol/L的氢氧化钠溶液2ml中和，作为酸破环样品；取吸入粉雾剂约10mg，加流动相配成0.5mg/ml的供试液，加0.1mol/L的氢氧化钠溶液2ml，放置，加0.1mol/L的盐酸溶液2ml中和，作为碱破坏样品；取吸入粉雾剂约10mg，用流动相配成0.5mg/ml的供试液，加过氧化氢一滴，室温放置，作为氧化破坏样品。
9.2仪器与色谱条件：
仪器：Agilent 1200高效液相色谱仪；
色谱柱：Waters HILIC Silica(4.6*150mm,3μm)；
流动相：乙腈:100mM甲酸铵=60:40；
流速：1ml/min；
柱温：25℃；
检测波长：200nm和234nm；
9.3测定：取20μl注入高效液相色谱仪，记录图谱，主峰及各杂质在色谱柱上可分离开。
实施例10：
10.1样品溶液配制：取吸入粉雾剂约10mg，加流动相配成0.5mg/ml的供试液，加0.1mol/L的盐酸溶液2ml，放置，加0.1mol/L的氢氧化钠溶液2ml中和，作为酸破环样品；取吸入粉雾剂约10mg，加流动相配成0.5mg/ml的供试液，加0.1mol/L的氢氧化钠溶液2ml，放置，加0.1mol/L的盐酸溶液2ml中和，作为碱破坏样品；取吸入粉雾剂约10mg，用流动相配成0.5mg/ml的供试液，加过氧化氢一滴，室温放置，作为氧化破坏样品。
10.2仪器与色谱条件：
仪器：Agilent 1200高效液相色谱仪；
色谱柱：Waters HILIC Silica(4.6*150mm,3μm)；
流动相：乙腈:10mM乙酸铵=70:30；
流速：2ml/min；
柱温：20℃；
检测波长：210nm和234nm；
10.3测定：取20μl注入高效液相色谱仪，记录图谱，主峰及各杂质在色谱柱上分离度良好，峰形好。
实施例11：
11.1样品溶液配制：取吸入粉雾剂约10mg，加流动相配成0.5mg/ml的供试液，加0.1mol/L的盐酸溶液2ml，放置，加0.1mol/L的氢氧化钠溶液2ml中和，作为酸破环样品；取吸入粉雾剂约10mg，加流动相配成0.5mg/ml的供试液，加0.1mol/L的氢氧化钠溶液2ml，放置，加0.1mol/L的盐酸溶液2ml中和，作为碱破坏样品；取吸入粉雾剂约10mg，用流动相配成0.5mg/ml的供试液，加过氧化氢一滴，室温放置，作为氧化破坏样品；
11.2仪器与色谱条件：
仪器：Agilent 1200高效液相色谱仪；
色谱柱：Waters HILIC Silica(4.6*150mm,3μm)；
流动相：乙腈:10mM甲酸铵=70:30；
流速：0.8ml/min；
柱温：25℃；
检测波长：220nm和234nm；
11.3测定：取20μl注入高效液相色谱仪，记录图谱，主峰及各杂质在色谱柱上分离度良好。
实施例12：
12.1样品溶液配制：样品溶液配制：取吸入粉雾剂约10mg，加流动相配成0.5mg/ml的供试液，加0.1mol/L的盐酸溶液2ml，放置，加0.1mol/L的氢氧化钠溶液2ml中和，作为酸破环样品；取吸入粉雾剂约10mg，加流动相配成0.5mg/ml的供试液，加0.1mol/L的氢氧化钠溶液2ml，放置，加0.1mol/L的盐酸溶液2ml中和，作为碱破坏样品；取吸入粉雾剂约10mg，用流动相配成0.5mg/ml的供试液，加过氧化氢一滴，室温放置，作为氧化破坏样品；
12.2仪器与色谱条件：
仪器：Agilent 1200高效液相色谱仪；
色谱柱：Waters HILIC Silica(4.6*150mm,3μm)；
流动相：乙腈:5mM甲酸铵=65:35；
流速：2ml/min；
柱温：30℃；
检测波长：210nm和234nm；
12.3测定：取20μl注入高效液相色谱仪，记录图谱，主峰及各杂质在色谱柱上可分离开，出峰时间较实施例4略有提前。
实施例2~实施例12检测结果比较，见表1。
表1实施例2~实施例12检测结果比较
实施例13：
13.1样品溶液配制：取脒基吡唑对照品、吡唑对照品、唾液酸、扎那米韦原料药，用流动相溶解并稀释制成混合溶液；
13.2仪器与色谱条件：
仪器：Agilent 1200高效液相色谱仪；
色谱柱：Waters HILIC Silica(4.6*150mm,3μm)；
流动相：乙腈:10mM甲酸铵（pH6.5）=65:35；
流速：1ml/min；
柱温：30℃；
检测波长：210nm和234nm；
13.3测定：取20μl注入高效液相色谱仪，记录图谱，主峰及各杂质在色谱柱上分离度良好，峰形好。
实施例14：
14.1样品溶液配制：取脒基吡唑对照品、吡唑对照品、唾液酸、扎那米韦原料药，用流动相溶解并稀释制成混合溶液；
14.2仪器与色谱条件：
仪器：Agilent 1200高效液相色谱仪；
色谱柱：Waters HILIC Silica(4.6*150mm,3μm)；
流动相：乙腈:10mM甲酸铵（pH8）=65:35；
流速：1ml/min；
柱温：40℃；
检测波长：210nm和234nm；
14.3测定：取20μl注入高效液相色谱仪，记录图谱，主峰及各杂质在色谱柱上可分开,但分离度欠佳。
实施例15：
15.1样品溶液配制：取脒基吡唑对照品、吡唑对照品、唾液酸、扎那米韦原料药，用流动相溶解并稀释制成混合溶液；
15.2仪器与色谱条件：
仪器：Agilent 1200高效液相色谱仪；
色谱柱：Waters HILIC Silica(4.6*150mm,3μm)；
流动相：乙腈:10mM甲酸铵（pH5）=65:35；
流速：1ml/min；
柱温：25℃；
检测波长：210nm和234nm；
15.3测定：取20μl注入高效液相色谱仪，记录图谱，主峰及各杂质在色谱柱上可分开，但分离度欠佳。
实施例16：已有的扎那米韦杂质的检查方法。
16.1样品溶液配制：取脒基吡唑对照品、吡唑对照品、唾液酸、扎那米韦原料药，用流动相溶解并稀释制成混合溶液；
16.2仪器与色谱条件：
仪器：Agilent 1200高效液相色谱仪；
色谱柱：Agilent150mm*4.6mmNH2P-50(5μm)；
流动相：乙腈:7.5mM硫酸溶液（用氨水调节pH至6.2±0.005）=60:40；
流速：1ml/min；
检测波长：210nm和234nm；
16.3测定：取10μl注入高效液相色谱仪，记录图谱，主峰及各杂质分离度良好，但该法重现性不佳，柱损失严重。
Claims (5)
1.一种检测扎那米韦及含扎那米韦制剂中杂质的HPLC测定方法，其特征在于，色谱柱为HILIC分析柱，流动相选自乙腈-缓冲盐溶液，检测波长范围为200nm～240nm，色谱柱温度范围为15～40℃，流动相流速选择范围为0.3～2ml/min；其中所述的缓冲盐溶液选自甲酸铵缓冲盐体系、乙酸铵缓冲盐体系、磷酸盐缓冲盐体系或者它们之间任意配比形成的混合溶液；所述的缓冲盐溶液浓度为1～10mM，缓冲盐溶液的pH范围为6.0～7.0；流动相中乙腈与缓冲盐溶液的体积比为60～70:40～30。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：HILIC分析柱为极性固定相，所述极性固定相选自未衍生化硅胶或修饰极性基团的硅胶柱。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的甲酸铵缓冲盐体系选自甲酸铵溶液、甲酸铵加甲酸溶液或者甲酸铵加乙酸溶液；所述的乙酸铵缓冲盐溶液选自乙酸铵溶液、乙酸铵加甲酸溶液或者乙酸铵加乙酸溶液。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于色谱柱温度范围为20～30℃，流动相流速选择范围为0.3～1.0ml/min。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于：含扎那米韦的相关制剂选自片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、控释、缓释制剂或扎那米韦的复方制剂。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310058607.0A CN104007185B (zh) | 2013-02-25 | 2013-02-25 | 一种检测扎那米韦及含扎那米韦制剂中杂质的hplc测定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310058607.0A CN104007185B (zh) | 2013-02-25 | 2013-02-25 | 一种检测扎那米韦及含扎那米韦制剂中杂质的hplc测定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104007185A CN104007185A (zh) | 2014-08-27 |
| CN104007185B true CN104007185B (zh) | 2017-09-12 |
Family
ID=51367939
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310058607.0A Active CN104007185B (zh) | 2013-02-25 | 2013-02-25 | 一种检测扎那米韦及含扎那米韦制剂中杂质的hplc测定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104007185B (zh) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109142552B (zh) * | 2017-06-16 | 2022-07-01 | 先声药业有限公司 | 一种美法仑及其盐的光解杂质及其hplc检测方法 |
| CN112595799A (zh) * | 2020-12-11 | 2021-04-02 | 南京明捷生物医药检测有限公司 | 一种快速筛查药品及中间体中多种仲胺的lc-ms法 |
| CN115078611A (zh) * | 2022-05-06 | 2022-09-20 | 天津国科医工科技发展有限公司 | 液相色谱-质谱法用免疫抑制剂的流动相配方、检测方法 |
-
2013
- 2013-02-25 CN CN201310058607.0A patent/CN104007185B/zh active Active
Non-Patent Citations (7)
| Title |
|---|
| Determination of zanamivir in rat and monkey plasma by positive ion hydrophilic interaction chromatography (HILIC)/tandem mass spectrometry;Todd M.Baughman 等;《Journal of Chromatography B》;20070215;第852卷;文章第2.3节 * |
| HILIC methods in pharmaceutical analysis;Bieke Dejaegher 等;《J.Sep.Sci.》;20101231;第33卷;698–715 * |
| ight quadrupole mass spectrometry for determination of zanamivir in human serum.《Journal of Chromatography B》.2012,第906卷文章第2-3节. * |
| Jing Ge 等.Aqueous normal phase liquid chromatography coupled with tandem time-of-fl * |
| Quantifcation of the anti-infuenza drug zanamivir in plasma using high-throughput HILIC–MS/MS;Niklas Lindegardh 等;《Bioanalysis》;20111213;第3卷(第2期);157–165 * |
| 扎那米韦固体脂质纳米粒的制备及其包封率测定;陈林 等;《苏州大学学报（医学版）》;20121231;第32卷(第3期);369-372 * |
| 高效液相色谱法测定扎那米韦有关物质;季旼 等;《2006第六届中国药学会学术年会论文集》;20061109;4106-4111 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104007185A (zh) | 2014-08-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7055634B2 (ja) | 標識化グリコシルアミンの迅速調製およびそれを生成するグリコシル化生体分子の分析方法 | |
| Zhang et al. | Determination of eight quinolones in milk using immunoaffinity microextraction in a packed syringe and liquid chromatography with fluorescence detection | |
| CN104237421B (zh) | 一种琥珀酸曲格列汀及其制剂的有关物质检测方法 | |
| Ding et al. | Ion chromatographic analysis of tetracyclines using polymeric column and acidic eluent | |
| Li et al. | Simultaneous determination of nine types of phthalate residues in commercial milk products using HPLC-ESI-MS-MS | |
| CN104007185B (zh) | 一种检测扎那米韦及含扎那米韦制剂中杂质的hplc测定方法 | |
| CN111024831B (zh) | 一种高效液相色谱法分离盐酸莫西沙星及其杂质的方法 | |
| CN104678026A (zh) | 一种测定有机药物中四丁基溴化铵含量的方法 | |
| CN113447592A (zh) | 一种甲硝唑凝胶中乙二胺四乙酸二钠的检测方法 | |
| Šatínský et al. | HPLC column-switching technique for sample preparation and fluorescence determination of propranolol in urine using fused-core columns in both dimensions | |
| CN106033079A (zh) | 甲磺酸达比加群酯起始物料f中有关物质咪唑的检测方法 | |
| Rodríguez-Palma et al. | A modified micro-solid phase extraction device for in-port elution and injection into portable liquid chromatography: A proof-of-concept study | |
| Pynnönen et al. | Simultaneous detection of three antiviral and four antibiotic compounds in source‐separated urine with liquid chromatography | |
| CN110954629A (zh) | 一种呋塞米中糠胺含量测定的控制方法 | |
| CN104345114A (zh) | 一种反相分离衍生化亮氨酸和异亮氨酸的方法 | |
| Yu et al. | “Inverse” cloud point extraction coupled with large volume injection ion-pair chromatography: A green route integrating extraction, challenging sample cleanup and on-column concentration into fast simple operation | |
| CN107328874B (zh) | 一种盐酸帕洛诺司琼光学异构体的拆分试剂及分离检测方法 | |
| Yang et al. | A sensitive, high‐throughput, and ecofriendly method for the determination of lumefantrine, artemether, and its active metabolite dihydroartemisinin by supercritical fluid chromatography and tandem mass spectrometry | |
| CN104730194A (zh) | 比拉斯汀的检测方法 | |
| Suo et al. | Analysis of five pharmacologically active compounds from Rhodiola for natural product drug discovery with capillary electrophoresis | |
| Hubert et al. | HPLC determination of verapamil and norverapamil in plasma using automated solid phase extraction for sample preparation and fluorometric detection | |
| Derayea et al. | Applications of ion-exchange chromatography in pharmaceutical analysis | |
| Souverain et al. | Use of monolithic supports for fast analysis of drugs and metabolites in plasma by direct injection | |
| CN110208434A (zh) | 一种左奥硝唑有关物质的检测方法 | |
| CN108169379A (zh) | 倍他斯丁及其制剂的一种高效液相分析方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20150914 Address after: 211800, No. 8, prosperous road, Pukou Economic Development Zone, Jiangsu, Nanjing Applicant after: Nanjing Simcere Dongyuan Pharmaceutical Co., Ltd. Applicant after: Jiangsu Simcere Pharmaceutical Research Company Limited Applicant after: Jiangsu Simcere Pharmaceutical Co., Ltd. Address before: 210042 Xuanwu District, Xuanwu District, Jiangsu, Nanjing No. 699 -18 Applicant before: Jiangsu Simcere Pharmaceutical Research Company Limited Applicant before: Jiangsu Simcere Pharmaceutical Co., Ltd. |
|
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20160711 Address after: 211800 Pukou, Jiangsu Province Economic Development Zone, Nanjing Road, No. prosperous road, No. 8 Applicant after: Nanjing Simcere Dongyuan Pharmaceutical Co., Ltd. Applicant after: Jiangsu Simcere Pharmaceutical Co., Ltd. Address before: 211800 Pukou, Jiangsu Province Economic Development Zone, Nanjing Road, No. prosperous road, No. 8 Applicant before: Nanjing Simcere Dongyuan Pharmaceutical Co., Ltd. Applicant before: Jiangsu Simcere Pharmaceutical Research Company Limited Applicant before: Jiangsu Simcere Pharmaceutical Co., Ltd. |
|
| CB02 | Change of applicant information |
Address after: 211800 Nanjing, Pukou Economic Development Zone, Jiangsu Road, No. 8 Applicant after: Nanjing Simcere Dongyuan Pharmaceutical Co., Ltd. Applicant after: Jiangsu Simcere Pharmaceutical Co., Ltd. Address before: 211800 Pukou, Jiangsu Province Economic Development Zone, Nanjing Road, No. prosperous road, No. 8 Applicant before: Nanjing Simcere Dongyuan Pharmaceutical Co., Ltd. Applicant before: Jiangsu Simcere Pharmaceutical Co., Ltd. |
|
| CB02 | Change of applicant information | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: No.99, Huakang Road, Jiangbei new district, Nanjing, Jiangsu Province, 210032 Patentee after: SIMCERE PHARMACEUTICAL Group Patentee after: JIANGSU SIMCERE PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. Address before: 211800 Nanjing, Pukou Economic Development Zone, Jiangsu Road, No. 8 Patentee before: NANJING SIMCERE DONGYUAN PHARMACEUTICA Co.,Ltd. Patentee before: JIANGSU SIMCERE PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. |
|
| CP03 | Change of name, title or address |