CN101603084A - 吸烟引发肺癌风险基因测评及套组方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种吸烟引发肺癌风险基因测评及套组方法，包括步骤：1)提取受检者样本DNA；2)对样本DNA进行目的基因的PCR扩增、纯化、片段化及荧光素标记；3)荧光素标记的PCR产物进行基因芯片杂交，检测目的基因的SNP位点；4)对样本DNA进行GSTM1和GSTT1基因的PCR扩增，然后进行琼脂糖凝胶电泳检测GSTM1和GSTT1基因的缺失情况；5)根据步骤3)、4)得到的基因分型结果，分析受检者肺癌的风险率。通过相关基因分型，可以对吸烟者进行肺癌风险预估，从而制订最科学健康管理计划，降低甚或避免肺癌发生。
Description
技术领域
本发明涉及一种癌症风险基因测评及套组方法，特别是涉及一种吸烟引发肺癌风险基因测评及套组方法。
背景技术
肺癌即发生在肺部的恶性肿瘤，其发病率和死亡率在全球范围内一直不断上升。肺癌总发病数占全部恶性肿瘤发病的20％，死亡占全部恶性肿瘤死亡的23.8％，位居癌症中的第1位。全球范围内肺癌的发病率男性为77.7/10万，女性为52.5/10万；死亡率男性为70.5/10万，女性为40.9/10万。预计在2009年，全球共有约219,440名新增肺癌患者(116,090名男性和103,350女性)，并有约159,390人因肺癌而死亡。
在我国，肺癌死亡率由20世纪70年代位居癌症死因第4位，跃居2000年的第1位，是增长最快的恶性肿瘤。2000-2005年间，中国肺癌的发病人数估计增加12万人，其中，男性肺癌患者增加7万人，女性肺癌患者增加5万人。目前我国肺癌发病率每年增长26.9％，如不及时采取有效控制措施，预计到2025年，我国肺癌病人将达到100万，位居世界第一。同时，肺癌发病愈来愈呈现年轻化趋势，发病人群已由中老年龄段向中青年龄段转移。
肺癌的高发病率和高死亡率已引起了人们的关注，对其采取及时有效的预防手段，以及准确合理的诊断和治疗措施显得尤为迫切。引起肺癌发病的因素有很多，其中吸烟是目前公认的肺癌病因中最重要的因素。在肺癌患者中，87％是由吸烟，包括被动吸烟引起的。吸烟者的肺癌死亡率是不吸烟者的10倍以上。
另外，遗传也是肺癌发病不可或缺的因素之一。当前不少的国内外研究都已发现人基因组中存在着与吸烟引发肺癌密切相关的易感基因。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种吸烟引发肺癌风险基因测评及套组方法，通过对这些基因中的关键性基因遗传位点进行检测，判断具体基因型，能够评估个体患上肺癌的风险几率，从而对加强肺癌防治起到积极作用。
为解决上述技术问题，本发明的吸烟引发肺癌风险基因测评及套组方法，包括步骤：
1)提取受检者样本DNA；
2)对样本DNA进行目的基因的PCR扩增、纯化、片段化及荧光素标记，所述目的基因包括：细胞色素P4501B1(cytochrome P450，family 1，subfamily b，polypeptide1，CYP1B1)基因，MIR196A2基因，TP53基因，硫酸基转移酶(sulfotransferaselA1，SULT1A1)基因，切除修复交叉互补基因1(Excision repair cross-complementing group 1，ERCC1)基因，MDM2(Murine double minute-2)基因，KRAS基因，细胞色素P4501A1(cytochrome P450，family 1，subfamily b，polypeptide 1，CYP1A1)基因，CHRNA5(cholinergic receptor，nicotinic，alpha polypeptide 5)基因，CHRNA3(cholinergic receptor，nicotinic，alpha polypeptide 3)基因，rs6983267位点和GSTP1(glutathione S-transferase P1)基因；
3)荧光素标记的PCR产物进行基因芯片杂交，检测目的基因的SNP(SingleNucleotide Polymorphism，SNP)位点，所述目的基因的SNP位点包括：CYP1B1基因的rs1056836位点，MIR196A2基因的rs11614913位点，TP53基因的rs1042522位点，SULT1A1基因的rs9282861位点，ERCC1基因的rs3212986位点，MDM2基因的rs2279744位点，KRAS基因的rs61764370位点，CYP1A1基因的rs2606345和rs1048943位点，CHRNA5基因的rs667282位点，CHRNA3基因的rs1051730位点，rs6983267位点及GSTP1基因的rs1695位点；
4)对样本DNA进行GSTM1(glutathione S-transferase M1)和GSTT1(glutathioneS-transferase theta 1)基因的PCR扩增，然后进行琼脂糖凝胶电泳检测GSTM1和GSTT1基因的缺失情况；
5)根据步骤3)、4)得到的基因分型结果，分析受检者肺癌的风险率。
所述步骤2)中的CYP1B1基因的引物是SEQ ID NO：27～28所示序列的引物，MIR196A2基因的引物是SEQ ID NO：29～30所示序列的引物，TP53基因的引物是SEQID NO：31～32所示序列的引物，SULT1A1基因的引物是SEQ ID NO：33～34所示序列的引物，ERCC1基因的引物是SEQ ID NO：35～36所示序列的引物，MDM2基因的引物是SEQ ID NO：37～38所示序列的引物，KRAS基因的引物是SEQ ID NO：39～40所示序列的引物，CYP1A1基因的引物是SEQ ID NO：41～44所示序列的引物，CHRNA5基因的引物是SEQ ID NO：45～46所示序列的引物，CHRNA3基因的引物是SEQ ID NO：47～48所示序列的引物，rs6983267位点的引物是SEQ ID NO：49～50所示序列的引物、GSTP1基因的引物是SEQ ID NO：51～52所示序列的引物。
所述步骤2)中的片段化是将纯化的PCR产物经测定浓度后，用DNase I进行片段化；所述荧光素标记是将片段化PCR产物利用脱氧核苷酸转移酶在3’末端进行荧光素标记。
所述步骤3)基因芯片的制备是将预先设计并合成好的探针通过接触式点样或喷墨式点样点载到玻片或硅片材质的固相载体片基上，其中，探针是SEQ ID NO：1～SEQ IDNO：26所示序列的DNA探针。
所述步骤4)中的GSTM1基因的引物是SEQ ID NO：53～54所示序列的引物、GSTT1基因的引物是SEQ ID NO：55～56所示序列的引物。
所述步骤5)中的基因分型结果可导入吸烟肺癌评估软件进行受检者肺癌风险指数和风险率评估。
肺癌风险指数评估标准：一个易感基因为+1分；一个保护基因为-1分；无易感基因和保护基因为0分；60岁及以上+4分；肿瘤家族史为+2分；其中，易感基因是指增加个体肺癌风险性的基因，其比数比(Odd Ratio，OR)大于1；保护基因是指降低个体肺癌风险性的基因，其比数比(Odd Ratio，OR)小于1。
所述风险率评估标准：肺癌风险指数1～3分，个体患肺癌的风险为中度；肺癌风险指数4～6分，个体患肺癌的风险为高度；肺癌风险指数6分以上，患肺癌的风险为极高度。
本发明中的易感基因和SNP位点的理论依据：
CYP1B1是细胞色素P450家族的一员，在体内多种物质的代谢过程中起关键作用。如果其CYP1B1基因的rs1056836位点发生突变，会导致对烟草中尼古丁等有毒物质的代谢分解能力降低，使肺癌发病风险增加。
MIR196A2基因的rs11614913位点。作为一种肿瘤抑制因子，MIR196A2在调控基因表达过程中起广泛作用。该基因的rs11614913突变会导致其抑癌活性降低。
TP53是目前发现的与肿瘤相关性最高的一种抑癌基因，是多种肿瘤的分子标志物。研究发现它在肺癌中的突变率可达60％～90％，而TP53基因的rs1042522位点与肺癌密切相关。
SULT1A1参与了体内激素、神经递质、药物等化合物的代谢过程，也参与了烟草中有毒物质的代谢过程。SULT1A1基因的rs9282861突变会致使SULT1A1解毒能力减弱。
ERCC1所起的作用是DNA修复，而吸烟可导致DNA损伤，如果ERCC1基因的rs3212986位点发生突变，ERCC1的修复能力下降，致使吸烟引发的肺癌发病风险增加。
MDM2是TP53的靶基因之一，并且参与了TP53的负反馈调节。MDM2基因的rs2279744突变能上调MDM2的mRNA和蛋白表达水平，进而减弱TP53的作用效果。
KRAS基因3’端的rs61764370位点位于let-7miRNA与靶序列的结合部位，影响了let-7miRNA的作为转录调节因子的功能。而let-7miRNA能够调节肺癌原癌基因的表达，因此rs61764370与肺癌密切相关。
CYP1A1同样是细胞色素P450家族中的一员，在分解代谢有毒有害物质，保护细胞不受外来损伤方面起重要作用。其rs2606345和rs1048943位点与肺癌发病相关性密切。
CHRNA5和CHRNA3都属于烟碱乙酰胆碱能受体，介导突触间神经递质的传递。研究表明，CHRNA5基因的rs667282与CHRNA3基因的rs1051730的突变能影响到神经中枢对于烟草的依赖性，进而影响到吸烟所引发的肺癌发病几率。
位于第8号染色体上的rs6983267位点是癌症易感研究的热点，在许多研究中都被证实与吸烟人群中的肺癌显著相关。
GSTP1是一种谷胱甘肽硫转移酶，能催化底物与还原性谷胱甘肽反应，起解毒作用。rs1695位点的突变使GSTP1的活性降低，解毒能力下降，无法有效保护细胞免受烟草中有毒物质的损害。
GSTM1和GSTT1基因都属于谷胱甘肽硫转移酶家族，在体内起分解代谢有毒有害物质的作用。基因缺失的个体较易受吸烟的影响，发生肺癌的危险性增加。
本发明的有益效果：
随着吸烟者肺癌易感位点增多，肺癌患病风险大大增加。通过相关基因分型，可以对吸烟者进行肺癌风险预估，从而制订最科学健康管理计划，降低甚或避免肺癌发生。
附图说明
下面结合附图与具体实施方式对本发明作进一步详细的说明：
图1是多重PCR扩增后的电泳检测结果图；
图2是PCR产物片段化后的电泳检测结果图；
图3是检测芯片杂交结果图；
图4是电泳检测基因缺失结果图。
具体实施方式
实施例1：样本DNA的提取
健康人1460份(平均年龄52岁，女性30％)，肺癌患者1692份(平均年龄50岁，女性28％)。所有肺癌患者均经病理学诊断。每个参加者均有详细的资料，包括：年龄、性别、祖籍、疾病史、家族史、吸烟及吸烟量、戒烟及戒烟时间、生化检测、临床症状、病理诊断、药物治疗、CT和MRI等。所有样本采用FlexiGene DNA Kit(QIAGEN，Cat.No.51206)试剂盒抽提人外周血中基因组DNA。
具体方法为：向300μl血液样本中加入750μl Buffer FG1，上下颠倒5次使其混匀。接着在12,000rpm转速下离心1min。离心后倒掉上层清液，再加入150μl Buffer FG2及1.5μl蛋白酶溶液，立即振荡，直至沉淀完全溶解。接下来离心3～5s，然后65℃水浴5min。当溶液从红色变为橄榄绿色后，加入150μl 100％异丙醇，上下充分颠倒离心管，使其混合，直至DNA析出，呈肉眼可见的线状或块状。然后在12,000rpm转速下离心3min。离心后倒掉上层清液，再加入150μl 70％乙醇，并振荡5s。接着重新在12,000rpm转速下离心3min，离心后倒掉上层清液，自然风干沉淀，直至所有的液体都蒸发掉。最后向离心管中加入200μl Buffer FG3，振荡5s，然后65℃水浴10min，使DNA溶解。
使用ND-1000核酸浓度分析仪对所抽提的DNA定量。DNA工作液浓度校正至10ng/μl，置于-20℃冰箱保存。
实施例2：芯片杂交检测SNP位点
1.基因芯片的制备
(1)探针溶解
将SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：26所示序列探针的每条探针用TE溶液稀释，终浓度为10mM。将浓度为10mM的探针与浓度为200mM的PBS溶液于384孔板中等体积混合，以粘胶片封好384孔板，室温下振荡2分钟，离心，-20℃保存，以备点样使用。
表1不同SNP位点的探针
(2)点样
将预先设计并合成好的探针通过接触式点样或喷墨式点样点载到玻片、硅片等材质的固相载体片基上。片基采用Cell Associates CSS-100醛基片基，GeneMachine公司的Ominigrid 100型号的点样仪，在湿度：65-75％(以FullMoon片基为准)，温度为25℃的条件下点样，点样完毕后，放置半小时后，将芯片取出，室温干燥保存。
2.待测样品的处理和标记
(1)目的基因的扩增
用CYP1B1基因的引物(SEQ ID NO：27～28)、MIR196A2基因的引物(SEQ IDNO：29～30)、TP53基因的引物(SEQ ID NO：31～32)、SULT1A1基因的引物(SEQ IDNO：33～34)、ERCC1基因的引物(SEQ ID NO：35～36)、MDM2基因的引物(SEQ IDNO：37～38)、KRAS基因的引物(SEQ ID NO：39～40)、CYP1A1基因的引物(SEQ IDNO：41～44)、CHRNA5基因的引物(SEQ ID NO：45～46)、CHRNA3基因的引物(SEQ IDNO：47～48)、rs6983267位点的引物(SEQ ID NO：49～50)、GSTP1基因的引物(SEQ IDNO：51～52)对样本DNA进行PCR扩增。PCR扩增用30μl反应体系进行，反应体系是0.3mM dNTP、10mM Tris-HCl、50mM KCl、2mM MgCl2、20％Q solution(Qiagen)、上游和下游引物的浓度0.16μM、基因组DNA 10ng，Taq酶0.6U(Takara)。应用Touch-down PCR反应程序：94℃变性5min；94℃变性40s，64℃退火1min，每个循环降低0.5℃，72℃延伸50s，共10个循环；然后94℃变性40s，59℃退火40s，72℃延伸50s，共30个循环；最后72℃延伸5min。PCR结束后用1.5％琼脂糖凝胶检测扩增结果。
当进行多重PCR反应时，将SEQ ID NO：27～SEQ ID NO：52所示序列的引物放入一个反应体系中进行扩增，体系为50μl。多重PCR的反应体系为：每种dNTP 0.3μmol/L，Tricine-KOH(PH＝8.7)40mmol/L，KCl 16mmol/L，MgCl2 3.5mmol/L，BSA 3.75μg/ml，每条引物2μmol/L，DNA 80ng和2.2×Titanium Taq DNA聚合酶(Clontech，USA)。多重PCR反应条件：95℃变性3min；95℃变性30s，66℃退火2min，68℃延伸4min，共40个循环；最后68℃延长10min。PCR扩增后，取3μl PCR反应产物做琼脂糖凝胶电泳，这些PCR产物经处理后可用于下面的杂交步骤。
(2)PCR产物纯化和片段化
每个样品的所有PCR产物混合，用QIA quick PCR Purification Kit(Qiagen，Cat.No.28106)纯化。纯化的PCR产物经测定浓度后，用DNase I(脱氧核糖核酸酶I)进行片段化。片段化的反应体系包括：30μl纯化PCR产物(10μg)，4μl的10×DNase I缓冲液，0.12μl的DNase I，5.88μl的ddH2O。反应条件为37℃温浴5min，然后95℃15min。片段化后的产物跑4％琼脂糖凝胶，保证绝大多数的片段处于30-200个碱基对。
(3)荧光素标记
利用脱氧核苷酸转移酶在3’末端进行荧光素标记，标记的40μl反应体系包括：25μl片段化PCR产物，8μl的5×脱氧核苷酸转移酶缓冲液，1μl的CY3-N6-ddCTP(1mM)，3μl的脱氧核苷酸转移酶(20U/μl)，3μl的ddH2O。反应条件为37℃温浴120min，然后95℃加热15min。
3.杂交、洗涤和结果检测
荧光标记的PCR产物95℃变性10min，立即置于冰上，用于杂交，杂交反应20μl体系包括：荧光素标记的PCR产物15μl，20×SSPE 1.2μl，1％Triton 0.2μl，10×Denhandts 0.9μl，甲酰胺0.5μl，ddH2O 2.2μl。反应条件为48℃温浴120min，然后相继用1×洗涤缓冲液I(5×SSC，0.1％SDS)、1×洗涤缓冲液II(2×SSC，0.1％SDS)和1×洗涤缓冲液III(1×SSC)在42℃各洗涤10min，最后用ddH2O洗涤0.5min。
洗涤后的芯片，经甩干后，用GenePix 4000B共聚焦激光扫描仪进行扫描(也可以用其他的激光扫描仪)。扫描杂交后的芯片得到杂交结果，再用GenePix Pro处理图像得到数据文件，然后对数据文件进行分析就可以得到肺癌易感基因检测结果。
实施例3：电泳检测基因缺失
用GSTM1基因的引物(SEQ ID NO：53～54)、GSTT1基因的引物(SEQ ID NO：55～56)对样本DNA进行PCR扩增。PCR反应体积为15μl，反应体系是0.4mM dNTP、10mMTris-HCl、50mM KCl、2mM MgCl2、上游和下游引物的浓度0.16μM、基因组DNA 10ng，Taq酶0.4U(Takara)。应用Touch-down PCR反应程序：95℃变性5min；95℃变性30s，64℃退火40s，每个循环降低0.5℃，72℃延伸35s，共10个循环；然后95℃变性30s，59℃退火40s，72℃延伸35s，共30个循环；最后72℃延伸5min。PCR结束后用1.5％琼脂糖凝胶检测扩增结果。当样本基因组中有GSTM1基因时，出现650bp条带；有GSTT1基因时，出现480bp条带。GSTM1或GSTT1基因缺失时，则不会出现相对应的条带。
实施例4：风险预估
按照实施例2和实施例3方法，对1000例肺癌和1000例健康人进行分析。通过多个位点和环境因素等交互作用，分析吸烟者患肺癌的风险率，统计结果表明不同人群携带易感基因数量具有显著的统计学意义。
本实施例中，易感基因是指增加个体肺癌风险性的基因，其比数比(Odd Ratio，OR)大于1；保护基因是指降低个体肺癌风险性的基因，其比数比(Odd Ratio，OR)小于1。
健康人群中肺癌易感基因携带个数在1-5之间，平均数是2个；肺癌患者肺癌易感基因个数在3-13之间，平均数是6个。其中非吸烟肺癌患者易感基因个数在5-14之间，平均数是7个；吸烟肺癌患者携带易感基因个数在3-9之间，平均数是4个。对非遗传因素分析发现，60岁及以上和肿瘤家族史对肺癌OR(Odd Ratio)分别为3.78和1.95。同时检测结果也显示，随着吸烟量增高，吸烟肺癌患者携带的易感基因数逐步降低的趋势，该结果接近统计学意义。
根据上述结果，制定了肺癌风险指数标准，并制作了相应的吸烟肺癌风险性评估软件(上海新春苗生物科技有限公司，上海，中国)，标准如下：每个易感基因为+1分；保护基因为-1分；60岁及以上+4分；肿瘤家族史为+2分。利用吸烟肺癌风险性评估软件分析发现，健康人肺癌风险指数平均值是2.6分，肺癌患者风险指数平均值是6.2分。因此，我们定义：肺癌风险指数1～3分，个体患肺癌的风险为中度；肺癌风险指数4～6分，个体患肺癌的风险为高度；肺癌风险指数6分以上，患肺癌的风险为极高度。
对上述结果，我们在另外一个独立的样本组(460例健康吸烟者和692例肺癌患者)中进行了验证。该独立样本组中，吸烟肺癌风险性评估软件评定为极高度肺癌风险的吸烟者中，93％均是肺癌患者；评估软件评定为高度肺癌易感性的吸烟者中，76％均是肺癌患者；评估软件评定为中度肺癌风险的吸烟者中，49％为肺癌患者。结果表明对于肺癌极高度和高度风险性的吸烟者预测准确性很高，对于这些人群，必须立即进行戒烟，并根据临床医生建议，进行相应的检测或者治疗。另一方面，从上述结果中，也看到吸烟可大大提高肺癌的风险性，对于肺癌中度风险性的吸烟者，仍很有必要戒烟。
实施例5：受检者的肺癌的风险率评估
样本：一吸烟受检者(男性，51岁，无肺病和肿瘤家族史)
按照实施例1-3的检测操作流程进行检测，其中，该受检者目的基因多重PCR扩增后的电泳检测结果见图1，PCR产物片段化后的电泳检测结果见图2，检测芯片杂交结果见图3，电泳检测基因缺失结果见图4。将所得检测结果导入吸烟肺癌评估软件，得到本实施例中的受检者的肺癌风险指数为2分，肺癌风险性为中度。建议仍很有必要戒烟。
序列表
<110>上海新春苗生物科技发展有限公司
<120>吸烟引发肺癌风险基因测评及套组方法
<130>NP-09-13294
<160>56
<170>PatentIn version 3.3
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tcaccggatc atggccagca 20
Claims (9)
1、一种吸烟引发肺癌风险基因测评及套组方法，包括步骤：
1)提取受检者样本DNA；
2)对样本DNA进行目的基因的PCR扩增、纯化、片段化及荧光素标记，所述目的基因包括CYP1B1基因，MIR196A2基因，TP53基因，SULT1A1基因，ERCC1基因，MDM2基因，KRAS基因，CYP1A1基因，CHRNA5基因，CHRNA3基因，rs6983267位点和GSTP1基因；
3)荧光素标记的PCR产物进行基因芯片杂交，检测目的基因的SNP位点；
4)对样本DNA进行GSTM1和GSTT1基因的PCR扩增，然后进行琼脂糖凝胶电泳检测GSTM1和GSTT1基因的缺失情况；
5)根据步骤3)、4)得到的基因分型结果，分析受检者肺癌的风险率。
2、如权利要求1所述的吸烟引发肺癌风险基因测评及套组方法，其特征在于：所述步骤2)中的CYP1B1基因的引物是SEQ ID NO：27～28所示序列的引物，MIR196A2基因的引物是SEQ ID NO：29～30所示序列的引物，TP53基因的引物是SEQID NO：31～32所示序列的引物，SULT1A1基因的引物是SEQ ID NO：33～34所示序列的引物，ERCC1基因的引物是SEQ ID NO：35～36所示序列的引物，MDM2基因的引物是SEQ ID NO：37～38所示序列的引物，KRAS基因的引物是SEQ ID NO：39～40所示序列的引物，CYP1A1基因的引物是SEQ ID NO：41～44所示序列的引物，CHRNA5基因的引物是SEQ ID NO：45～46所示序列的引物，CHRNA3基因的引物是SEQ IDNO：47～48所示序列的引物，rs6983267位点的引物是SEQ ID NO：49～50所示序列的引物，GSTP1基因的引物是SEQ ID NO：51～52所示序列的引物。
3、如权利要求1所述的吸烟引发肺癌风险基因测评及套组方法，其特征在于：所述步骤2)中的片段化是将纯化的PCR产物经测定浓度后，用DNase I进行片段化；
所述荧光素标记是将片段化PCR产物利用脱氧核苷酸转移酶在3’末端进行荧光素标记。
4、如权利要求1所述的吸烟引发肺癌风险基因测评及套组方法，其特征在于：所述步骤3)基因芯片的制备是将预先设计并合成好的探针通过接触式点样或喷墨式点样点载到玻片或硅片材质的固相载体片基上，其中，探针是SEQ ID NO：1～SEQ IDNO：26所示序列的DNA探针。
5、如权利要求1所述的吸烟引发肺癌风险基因测评及套组方法，其特征在于：所述步骤3)目的基因的SNP位点包括：CYP1B1基因的rs1056836位点，MIR196A2基因的rs11614913位点，TP53基因的rs1042522位点，SULT1A1基因的rs9282861位点，ERCC1基因的rs3212986位点，MDM2基因的rs2279744位点，KRAS基因的rs61764370位点，CYP1A1基因的rs2606345和rs1048943位点，CHRNA5基因的rs667282位点，CHRNA3基因的rs1051730位点，rs6983267位点及GSTP1基因的rs1695位点。
6、如权利要求1所述的吸烟引发肺癌风险基因测评及套组方法，其特征在于：所述步骤4)中的GSTM1基因的引物是SEQ ID NO：53～54所示序列的引物、GSTT1基因的引物是SEQ ID NO：55～56所示序列的引物。
7、如权利要求1所述的吸烟引发肺癌风险基因测评及套组方法，其特征在于：所述步骤5)中的基因分型结果导入吸烟肺癌评估软件进行受检者肺癌风险指数和风险率评估。
8、如权利要求1或7所述的吸烟引发肺癌风险基因测评及套组方法，其特征在于：所述肺癌风险指数评估标准：一个易感基因为+1分；一个保护基因为-1分；无易感基因和保护基因为0分；60岁及以上+4分；肿瘤家族史为+2分；其中，易感基因是指增加个体肺癌风险性的基因，其比数比大于1；保护基因是指降低个体肺癌风险性的基因，其比数比小于1。
9、如权利要求8所述的吸烟引发肺癌风险基因测评及套组方法，其特征在于：所述风险率评估标准：肺癌风险指数1～3分，个体患肺癌的风险为中度；肺癌风险指数4～6分，个体患肺癌的风险为高度；肺癌风险指数6分以上，患肺癌的风险为极高度。
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|
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20091216 |