发明内容
本发明公开了一类通式I的化合物及其水合物,经药理实验显示,本发明的化合物对bFGF刺激的人脐静脉内皮细胞增殖具有较强的抑制作用。因此,本发明的式I化合物及其含结晶水的化合物可以用于治疗各种与血管生成相关的疾病,这些疾病包括各种癌症和慢性炎症,以及其它血管原性的疾病。
本发明的化合物通式I如下:
其中G-NH-代表:
Ar代表:
其中Ar优选代表:
Ar进一步优选代表:
本发明化合物的水合物也具有与化合物同样的疗效,其中的水合物以结晶水的形式存在,结晶水的摩尔当量从0.5到10。
本发明部分化合物是:
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖基)-3-苯基丙烯酰胺(I-1)
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖基)-3-(4-乙酰氧基苯基)-丙烯酰胺(I-2)
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖基)-3-(4-甲氧基苯基)-丙烯酰胺(I-3)
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖基)-3-(4-乙酰氨基苯基)-丙烯酰胺(I-4)
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖基)-3-(4-硝基苯基)-丙烯酰胺(I-5)
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖基)-3-(3-硝基苯基)-丙烯酰胺(I-6)
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖基)-3-(4-甲磺酰基苯基)-丙烯酰胺(I-7)
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖基)-3-(3,4-二乙酰氧基苯基)-丙烯酰胺(I-8)
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖基)-3-(3-甲氧基-4-乙酰氧基苯基)-丙烯酰胺(I-9)
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖基)-3-(3,4-二甲氧基苯基)-丙烯酰胺(I-10)
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖基)-3-(3,4-二氯苯基)-丙烯酰胺(1-11)
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖基)-3-(2,3-二氯苯基)-丙烯酰胺(I-12)
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖基)-3-(3,4,5-三甲氧基苯基)-丙烯酰胺(I-13)
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖基)-3-(2,3,4-三甲氧基苯基)-丙烯酰胺(I-14)
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖基)-3-(吡啶-3-基)-丙烯酰胺(I-15)
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖基)-3-(噻吩-2-基)-丙烯酰胺(I-16)
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖基)-3-苯基-丙烯酰胺(I-17)
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖基)-3-(4-乙酰氧基苯基)-丙烯酰胺(I-18)
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖基)-3-(4-甲氧基苯基)-丙烯酰胺(I-19)
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖基)-3-(4-乙酰氨基苯基)-丙烯酰胺(I-20)
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖基)-3-(3-硝基苯基)-丙烯酰胺(I-21)
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖基)-3-(4-甲磺酰基苯基)-丙烯酰胺(I-22)
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖基)-3-(3,4-二乙酰氧基苯基)-丙烯酰胺(I-23)
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖基)-3-(3-甲氧基-4-乙酰氧基苯基)-丙烯酰胺(I-24)
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖基)-3-(3,4-二甲氧基苯基)-丙烯酰胺(I-25)
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖基)-3-(2,4-二氯苯基)-丙烯酰胺(I-26)
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖基)-3-(2-氯苯基)-丙烯酰胺(I-27)
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖基)-3-(3,4,5-三甲氧基苯基)-丙烯酰胺(I-28)
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖基)-3-(2,3,4-三甲氧基苯基)-丙烯酰胺(I-29)
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖基)-3-(吡啶-3-基)-丙烯酰胺(I-30)
本发明通式化合物(I)的制备方法如下:
其中关键中间体G-NH2,的制备方法如下,其中G-NH2代表G1-NH2或G2-NH2:
1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃氨基葡萄糖(G1-NH2)的合成路线如下:
1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃氨基半乳糖(G2-NH2)的合成是以2-氨基半乳糖盐酸盐为原料,方法同G1-NH2.
目标化合物I的制备方法如下:
其中a~e代表反应条件:
a:反应物为苯甲醛;溶剂为氢氧化钠和水。
b:反应物为醋酐;溶剂为吡啶。
c:反应物为HCl;溶剂为丙酮。
d:反应物为醋酸钠;溶剂为水。
e:反应物为草酰氯,或二氯亚砜,或EDCI/HOBt;溶剂为二氯甲烷或DMF。
下面是本发明部分化合物的药理试验及结果。
本发明部分化合物在常氧状态下对血管内皮细胞增殖抑制活性的测试方法如下:
材料:
细胞系:人脐静脉内皮细胞(HUVEC,4000个/孔)
培养基:高糖DMEM(HG-DMEM),10%胎牛血清(FBS)
稀释方法:所有化合物先用DMSO配成0.5mol/L的母液,给药前用新鲜培养基稀释使用。
操作流程:
平底96孔板接种4000个细胞/孔。孵育24小时(37℃,5%CO2)后加入不同浓度,含有重组牛碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的化合物(终浓度10ng/ml)。孵育48hr后,每孔加入20μl MTT(5mg/ml,PBS溶解过滤,4℃避光保存)。37℃孵育4hr。用多道移液器将MTT从96孔板中吸出(小心处理勿损伤细胞)。每孔加100μl DMSO。室温振荡15分钟后,使用Thermo Multiskan系统检测570nm的吸收情况。
使用GWBASIC的logit计算方法,评估化合物对血管内皮细胞增值的抑制作用。结果如下:
表1.本发明部分化合物抑制HUVEC增殖的IC50值
本发明化合物 |
IC50(μmol/L) |
I-1 |
258.0 |
I-9 |
42.4 |
I-19 |
1013.9 |
I-24 |
879.9 |
I-25 |
356.1 |
I-26 |
89.0 |
I-27 |
93.1 |
I-29 |
312.2 |
表1中化合物代号对应的化学结构同实施例。
药理测试结果表明,本发明的化合物对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖有不同程度的抑制作用,其中I-9,I-26和I-27的活性较强。
本发明还提供了一种治疗与血管生成相关的疾病的药物组合物,其中含有治疗有效量的通式I化合物和药学上可接受的载体。所述药物组合物可以是普通片剂或胶囊、缓释片剂或胶囊、控释片剂或胶囊、口服液、注射剂等制剂学上常规的制剂形式。
一般地,本发明的N-糖基-3-芳基丙烯酰胺衍生物用于治疗时,人用剂量范围为1mg~5000mg/天。也可根据剂型的不同和疾病严重程度,使用剂量超出该范围。
具体实施方式
实施例1
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖基)-3-苯基丙烯酰胺半水化合物(I-1)的制备
2-亚苄基-1,3,4,6-四羟基-2-脱氧-β-D-吡喃氨基葡萄糖(II-1)
0℃下将1,3,4,6-四羟基-2-脱氧-D-吡喃氨基葡萄糖盐酸盐10g(46mmol)加入到含有NaOH2.2g(55mmol)的47mL水溶液中,搅拌下缓缓加入苯甲醛5.4mL(53mmol),很快析出白色固体,继续搅拌1h后停止反应,0℃下放置12h,过滤,依次用水、乙醚(V)∶乙醇(V)=4∶1的混合溶剂洗涤,干燥得白色固体混合物10.42g,不纯化直接投入下步反应。
2-亚苄基-1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃氨基葡萄糖(III-1)
含中间体II-1的混合物10.4g加入到60mL吡啶中,冰水浴中搅拌下加入醋酸酐42mL(0.46mol),升温至35℃-40℃,保温6h,30℃下减压蒸出部分溶剂,将剩余反应液倒入冰水中,有白色固体析出,搅拌1h,过滤,依次用水、石油醚洗涤,干燥得白色固体10.2g,产率60%。m.p.153-154.5℃(文献值:m.p.158-160℃[合成化学,2003,11:379-380])
1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃氨基葡萄糖盐酸盐(G1-NH2.HCl)
将中间体III-1 10.42g(23mmol)加入到322mL丙酮中,室温搅拌下缓慢加入含浓HCl0.95mL的11.5mL甲醇溶液,很快析出白色固体,反应1h后加入乙醚停止反应,冷却,0℃下保温1h,过滤,滤饼用乙醚洗涤,干燥得白色固体G1-NH2.HCl 5.27g,产率58%。M.p.229℃(碳化)(文献值:m.p.230℃,[US 4216208].
1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃氨基葡萄糖(G1-NH2)
将中间体G1-NH2.HCl 5.27g(mmol)溶解在28mL水中,加入乙酸钠2.25g,常温下搅拌1h,析出白色固体,氯仿萃取,萃取液减压蒸馏除去溶剂得白色固体,乙醚洗涤后干燥得白色固体4.23g,产率68%,m.p.129-131℃。(文献值:m.p.127-129,[US 4216208]).
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖基)-3-苯基丙烯酰胺半水化合物(I-1)
将肉桂酸0.21g(1.44mmol)和1-羟基苯并三唑(HOBt)0.19g(1.44mmol)悬浮于10mL干燥的CH2Cl2中,然后将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)0.28g(1.44mmol)慢慢加入其中,溶液马上澄清,室温下反应24h后,将中间体G1-NH20.50g(1.44mmol)慢慢加入反应液中,在N2保护下室温反应24h。反应液分别用水(20mL×1),饱和NaHCO3(20mL×2),饱和NaCl(20mL×1)洗涤,无水MgSO4干燥。过滤,滤液浓缩后柱层析(2∶1-1∶1,石油醚/乙酸乙酯),(2∶1,石油醚/乙酸乙酯,Rf=0.14),所得到的固体于真空干燥器中干燥24h得白色固体0.42g,收率61.15%,m.p.200-201℃;
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm):7.62(1H,d,J=15.6Hz,-CH=),7.48(2H,m,aromatic),7.36(3H,m,aromatic),6.30(1H,d,J=15.6Hz,-CH=),5.82(1H,d,J=9.6Hz,H-1),5.76(1H,d,J=9Hz,NH),5.21(2H,m,H-3,4),4.50(1H,q,J=9.6Hz,H-2),4.30(1H,dd,J=4.5Hz,J=12.3Hz,H-6a),4.15(1H,dd,J=2.1Hz,J=12.6Hz,H-6b),3.85(1H,ddd,J=1.8Hz,J=4.2Hz,J=9Hz,H-5),2.108,2.101,2.056,2.029(each 3H,each s,each CH3);
IR(cm-1):3261(NH),3085,2969,2888(CH),1749(ester,C=O),1660,1639(amide,C=O),1551,1230,1130,1091,1074,1042,745,702
MS(ESI(+)70V,m/z):477.6[M+H]+;
Anal.Calcd for C23H27NO10 0.5H2O:C,56.79,H,5.80,N,2.88.Found,C,56.98,H,5.82,N,2.78.
实施例2
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖基)-3-(3,4-二乙酰氧基苯基)-丙烯酰胺(I-8)的制备
冰浴冷却下将咖啡酸1.5g(8.33mmol)加入到1.15g(28.75mmol)NaOH溶于11ml水所形成的溶液中,待全溶后慢慢滴加Ac2O 2.27ml(20.82mmol),滴加完后溶液变浑浊,撤去冰浴常温下搅拌反应1.5h。停止反应,冰浴下用10%H2SO4溶液调pH至2-3左右,继续搅拌20min,过滤,滤饼用水充分洗涤数次,于红外灯下烘干得灰白色固体(全乙酰化咖啡酸)2.01g,收率91.36%。
将全乙酰化咖啡酸0.34g(1.3mmol)悬浮于10mL的干燥CH2Cl2中,慢慢滴加草酰氯0.70g(0.47mL,5.5mmol),溶液有澄清现象,之后滴加一滴无水DMF,大量气泡产生,溶液马上澄清,然后于室温下搅拌反应24h。减压下除去溶剂得到黄色固体,无需纯化直接投入下一步反应。
将中间体G1-NH2 0.5g(1.3mmol)悬浮于7mL的CH2Cl2中,搅拌下加入碳酸钠(0.30g,2.8mmol)溶于水(7mL)所形成的溶液,有机层马上澄清。将制得的酰氯溶于CH2Cl2(4mL)中,然后慢慢滴入到以上的两相溶液中,之后于室温下搅拌反应过夜。将反应液移入分液漏洞中,分出有机层,水层用CH2Cl2(10mL×1)萃取,有机相合并后用饱和NaHCO3溶液(10ml×2)洗涤,无水MgSO4干燥过夜。过滤,滤液减压蒸去溶剂。剩余物柱层析(1∶1,石油醚/乙酸乙酯,Rf=0.18),得淡黄色泡沫状固体0.61g,收率79.1%,m.p.211-212℃;
[α]7 D=+43.86(c 0.14,CH3OH);
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm):7.55(1H,d,J=15.6Hz,-CH=),7.35(1H,d,J=8.4Hz,aromatic),7.32(1H,s,aromatic),7.20(1H,d,J=8.4Hz,aromatic),6.21(1H,d,J=15.3Hz,-CH=),5.74(1H,d,J=8.7Hz,NH),5.66(1H,d,J=9.6Hz,H-1),5.19(2H,m,H-3,4),4.46(1H,m,H-2),4.29(1H,dd,J=4.5Hz,J=12.3Hz,H-6a),4.14(1H,m,H-6b),3.83(1H,m,H-5),2.310,2.300(each 3H,each s,each CH3),2.107,2.100,2.049,2.020(each 3H,each s,each CH3);
13C-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm):171.28,170.66,169.55,169.24(4C,ester C=O),168.08,167.99(2C,ester C=O),165.31(1C,amide C=O),143.31,142.41,140.59,126.35,123.89,120.57(6C,aromatic C),133.24,122.49(2C,CH=CH),92.75(1C,C-1),73.06,72.59,67.78,61.68(4C,C-2,3,4,5),53.10(1C,C-6),20.86,20.71,20.62,20.56(4C,4×CH3);
IR(cm-1):3345(NH),3042,2967,2880(CH),1773,1754(ester,C=O),1666,1635(amide,C=O),1535,1505,1226,1106,1076,1043,835;
MS(EI,70V,m/z):593[M]+;
Anal.Calcd for C27H31NO14:C,54.64,H,5.26,N,2.36.Found,C,54.70,H,5.19,N,2.21.
实施例3
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖基)-3-(3-甲氧基-4-乙酰氧基苯基)-丙烯酰胺(I-9)的制备
将中间体G1-NH2 0.5g(1.3mmol)悬浮于20ml的干燥CH2Cl2中,冰浴下慢慢滴加干燥的三乙胺3ml(22mmol),溶液马上澄清,然后分批加入HOBt 0.175g(1.3mmol),搅拌至溶液澄清。撤去冰浴,于室温下加入乙酰化阿魏酸0.31g(1.3mmol),反应液呈桔黄色,之后再加入EDCI 0.25g(1.3mmol),加完后于室温下搅拌反应24h。反应液依次用水(20ml×2),饱和NaHCO3溶液(20ml×2),饱和食盐水(20ml×2)洗涤,无水Na2SO4干燥过夜。过滤,滤液减压蒸去溶剂。剩余物柱层析(1∶1,石油醚/乙酸乙酯,Rf=0.23),得白色絮状固体0.25g,收率34.0%,m.p.192-194℃;
[α]7 D=+42.56(c 0.125,CH3OH);
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm):7.57(1H,d,J=15.3Hz,-CH=),7.06(3H,m,aromatic),6.23(1H,d,J=15.6Hz,-CH=),5.75(1H,d,J=9Hz,NH),5.67(1H,d,J=9.6Hz,H-1),5.19(2H,m,H-3,4),4.48(1H,m,H-2),4.29(1H,dd,J=12.3Hz,J=4.5Hz,H-6a),4.14(1H,dd,J=2.4Hz,J=9.9Hz,H-6b),3.86(3H,s,OCH3),3.83(1H,m,H-5),2.32(3H,s,CH3),2.110,2.104,2.054,2.047(each 3H,each s,each CH3);
IR(cm-1):3334(NH),3071,2965(CH),1756(ester,C=O),1662,1630(amide,C=O),1601,1532,1515,1223,1125,1043,846;
MS(EI,70V,m/z):565.2[M]+;
Anal.Calcd for C26H31NO13:C,55.22,H,5.53,N,2.48.Found:C,55.11,H,5.45,N,2.20.
实施例4
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖基)-3-(4-甲氧基苯基)-丙烯酰胺(I-19)的制备
2-亚苄基-1,3,4,6-四羟基-2-脱氧-β-D-吡喃氨基半乳糖(II-2)
0℃下将1,3,4,6-四羟基-2-脱氧-D-吡喃氨基葡萄糖盐酸盐10g(46mmol)加入到含有NaOH2.2g(55mmol)的47mL水溶液中,机械搅拌下缓缓加入苯甲醛5.4mL(53mmol),很快析出白色固体,继续搅拌1h后停止反应,0℃下放置12h,过滤,依次用水、乙醚(V)∶乙醇(V)=4∶1的混合溶剂洗涤,干燥得白色固体混合物10g,未经纯化直接投下步反应。
2-亚苄基-1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃氨基半乳糖(III-2)
将含有中间体II-2的混合物10g加入到60mL吡啶中,冰水浴中搅拌下加入醋酸酐42mL(0.46mol),升温至35℃-40℃,保温6h,30℃下减压蒸出部分溶剂,将剩余反应液倒入冰水中,有白色固体析出,搅拌1h,过滤,依次用水、石油醚洗涤,干燥得白色固体11.5g,未经纯化直接投下反应。
1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃氨基半乳糖盐酸盐(G2-NH2.HCl)
将含有中间体III-2的混合物4.4g加入到200mL丙酮中,室温搅拌下缓慢加入含浓HCl4.4g的5mL甲醇溶液,很快析出白色固体,反应1h后加入乙醚停止反应,冷却,0℃下保温1h,过滤,滤饼用乙醚洗涤,干燥得白色固体3.8g,产率100%。mp 200-204℃(炭化)(文献值:m.p.204-206℃[E ur.J.Org.Chem.2006,657-671])
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖基)-3-(4-甲氧基苯基)-丙烯酰胺(I-19)的制备
将化合物G2-NH2.HCl 0.5g(1.3mmol)悬浮于20ml干燥CH2Cl2中,冰浴下缓慢滴加干燥三乙胺0.17ml(1.3mmol),溶液澄清,撤冰浴,于室温下搅拌1h后,分批加入HOBt 0.21g(1.56mmol),再加入4-甲氧基肉桂酸0.28g(1.56mmol),再加入EDCI 0.30g(1.56mmol),室温下搅拌36h。反应液依次用水(20ml×2),饱和NaHCO3溶液(20ml×2),饱和食盐水(20ml×2)洗涤,无水Na2SO4干燥过夜。过滤,滤液减压蒸去溶剂。剩余物柱层析(石油醚/乙酸乙酯=1∶1),得白色固体0.32g,收率48.6%,m.p.181-183℃
[α]24D=+25.68(c 0.19,CHCl3);
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm):7.57(1H,d,J=15.6Hz,-CH=),7.44(2H,d,J=8.7Hz,aromatic),6.89(2H,d,J=8.7Hz,aromatic),6.18(1H,d,J=15.3Hz,-CH=),5.78(1H,d,J=8.7Hz,NH),5.57(1H,d,J=9.6Hz,H-1),5.41(1H,d,J=2.7Hz,H-4),5.17(1H,dd,J=3.3Hz,J=11.4Hz,H-3),4.63(1H,dd,J=9.3Hz,J=10.5Hz,H-2),4.23-4.04(3H,m,H-5,6a,6b),3.83(3H,s,OCH3),2.19,2.11,2.05,2.00(each 3H,each s,each CH3);
IR(cm-1):3329(NH),2941(CH),1745(ester,C=O),1659(amide,C=O),1630(C=C),1538,1451,1370,1221,1080,1041;
MS(ESI(-)70V,m/z):506.0[M-H]-;
Anal.Calcd for C24H29NO11:C,56.80,H,5.76,N,2.76.Found:C,56.95,H,5.85,N,2.75.
实施例5
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖基)-3-(3,4-二乙酰氧基苯基)-丙烯酰胺半水化合物(I-23)的制备
将化合物G2-NH2.HCl 0.5g(1.3mmol)悬浮于20ml干燥CH2Cl2中,冰浴下缓慢滴加干燥三乙胺0.17ml(1.3mmol),溶液澄清,撤冰浴,于室温下搅拌1h后,分批加入HOBt 0.21g(1.56mmol),再加入乙酰化咖啡酸0.41g(1.56mmol),再加入EDCI 0.30g(1.56mmol),室温下搅拌36h。反应液依次用水(20ml×2),饱和NaHCO3溶液(20ml×2),饱和食盐水(20ml×2)洗涤,无水Na2SO4干燥过夜。过滤,滤液减压蒸去溶剂。剩余物柱层析(石油醚/乙酸乙酯=1∶1),得白色固体0.34g,收率44.3%,m.p.115-119℃
[α]19.8D=+24.10(c 0.195,CHCl3);
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm):7.58(1H,d,J=15.6Hz,-CH=),7.37-7.19(3H,m,aromatic),6.26(1H,d,J=15.6Hz,-CH=),5.75(1H,d,J=8.7Hz,NH),5.58(1H,d,J=9.6Hz,H-1),5.41(1H,d,J=3Hz,H-4),5.05(1H,dd,J=3.3Hz,J=11.4Hz,H-3),4.63(1H,dd,J=9.6Hz,J=10.5Hz,H-2),4.19-4.06(3H,m,H-5,6a,6b),2.31(3H,s,COCH3),2.32(3H,s,COCH3),2.19,2.11,2.06,2.00(each 3H,each s,each CH3);
IR(cm-1):3385(NH),2939(CH),1751(ester,C=O),1668(amide,C=O),1632(C=C),1544,1506,1429,1219,1074,1041;
MS(ESI(+)70V,m/z):594.1[M+H]+;
Anal.Calcd for C27H31NO14 0.5H2O:C,53.82,H,5.35,N,2.32.Found:C,53.91,H,5.26,N,1.90.
实施例6
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖基)-3-(3-甲氧基-4-乙酰氧基苯基)-丙烯酰胺(I-24)的制备
将化合物G2-NH2.HCl 0.5g(1.3mmol)悬浮于20ml干燥CH2Cl2中,冰浴下缓慢滴加干燥三乙胺0.17ml(1.3mmol),溶液澄清,撤冰浴,于室温下搅拌1h后,分批加入HOBt 0.175g(1.3mmol),再加入乙酰化阿魏酸0.31g(1.3mmol),再加入EDCI 0.25g(1.3mmol),室温下搅拌36小时。反应液依次用水(20ml×2),饱和NaHCO3溶液(20ml×2),饱和食盐水(20ml×2)洗涤,无水Na2SO4干燥过夜。过滤,滤液减压蒸去溶剂。剩余物柱层析柱层析(石油醚/乙酸乙酯=2∶1),得白色固体0.17g,收率23.3%,m.p.183-185℃
[α]24D=+20.63(c 0.095,CHCl3);
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm):7.56(1H,d,J=15.6Hz,-CH=),7.06(3H,m,aromatic),6.24(1H,d,J=15.6Hz,-CH=),5.77(1H,d,J=8.7Hz,NH),5.56(1H,d,J=9.6Hz,H-1),5.41(1H,d,J=3Hz,H-4),5.15(1H,dd,J=3.3Hz,J=11.4Hz,H-3),4.63(1H,dd,J=9.6Hz,J=10.5Hz,H-2),4.17-4.06(3H,m,H-5,6a,6b),3.86(3H,s,OCH3),2.32(3H,s,COCH3),2.19,2.11,2.06,2.00(each3H,each s,each CH3);
IR(cm-1):3337(NH),2950(CH),1745(ester,C=O),1663(amide,C=O),1630(C=C),1601,1520,1221,1126,1038,860;
MS(ESI(+)70V,m/z):567.0[M+H]+;
MS(ESI(-)70V,m/z):564.0[M-H]-;
Anal.Calcd for C26H31NO13:C,55.22,H,5.53,N,2.48.Found:C,55.32,H,5.46,N,2.47.
实施例7
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖基)-3-(3,4-二甲氧基苯基)-丙烯酰胺(I-25)的制备
将化合物G2-NH2.HCl 0.5g(1.3mmol)悬浮于20ml干燥CH2Cl2中,冰浴下缓慢滴加干燥三乙胺0.17ml(1.3mmol),溶液澄清,撤冰浴,于室温下搅拌1h后,分批加入HOBt 0.21g(1.56mmol),再加入3,4-二甲氧基肉桂酸0.33g(1.56mmol),再加入EDCI 0.30g(1.56mmol),室温下搅拌36h。反应液依次用水(20ml×2),饱和NaHCO3溶液(20ml×2),饱和食盐水(20ml×2)洗涤,无水Na2SO4干燥过夜。过滤,滤液减压蒸去溶剂。剩余物柱层析(石油醚/乙酸乙酯=1∶1),得白色固体0.44g,收率62.8%,m.p.105-108℃
[α]24D=+23.2(c 0.075,CHCl3);
1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm):7.54(1H,d,J=15.5Hz,-CH=),7.07(1H,d,J=8.2Hz,aromatic),7.01(1H,d,J=1.88Hz,aromatic),6.85(1H,d,J=8.5Hz,aromatic),6.17(1H,d,J=15.5Hz,-CH=),5.76(1H,d,J=9Hz,H-1),5.45(1H,d,J=9.5Hz,NH),5.41(1H,d,J=2.5Hz,H-4),5.15(1H,dd,J=3.3Hz,J=11.4Hz,H-3),4.63(1H,dd,J=9.3Hz,J=10.5Hz,H-2),4.22-4.06(3H,m,H-5,6a,6b),3.94(3H,s,OCH3),3.91(3H,s,OCH3),2.19,2.11,2.05,2.00(each 3H,each s,each CH3);IR(cm-1):3457(NH),2939(CH),1750(ester,C=O),1662(amide,C=O),1626(C=C),1516,1423,1370,1264,1220,1074,1040,846,810;
MS(ESI(+)70V,m/z):538.1[M+H]+;
Anal.Calcd for C25H31NO12:C,55.86,H,5.81,N,2.61.Found:C,55.81,H,5.87,N,2.44.
实施例8
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖基)-3-(2,4-二氯苯基)-丙烯酰胺(I-26)的制备
将化合物G2-NH2.HCl 0.5g(1.3mmol)悬浮于20ml干燥CH2Cl2中,冰浴下缓慢滴加干燥三乙胺0.17ml(1.3mmol),溶液澄清,撤冰浴,于室温下搅拌1h后,分批加入HOBt 0.21g(1.56mmol),再加入2,4-二氯肉桂酸0.28g(1.56mmol),再加入EDCI 0.30g(1.56mmol),室温下搅拌36h。反应液依次用水(20ml×2),饱和NaHCO3溶液(20ml×2),饱和食盐水(20ml×2)洗涤,无水Na2SO4干燥过夜。过滤,滤液减压蒸去溶剂。剩余物柱层析(石油醚/乙酸乙酯=1∶1),得白色固体0.38g,收率53.5%,m.p.153-156℃
[α]24D=+16.22(c 0.185,CHCl3);
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm):7.90(1H,d,J=15.6Hz,-CH=),7.49(1H,d,J=8.4Hz,aromatic),7.43(1H,s,,aromatic),7.24(1H,d,J=8.7Hz,aromatic),6.32(1H,d,J=15.6Hz,-CH=),5.86(1H,d,J=9.3Hz,NH),5.80(1H,d,J=8.7Hz,H-1),5.41(1H,d,J=2.4Hz,H-4),5.18(1H,dd,J=3.0Hz,J=11.1Hz,H-3),4.61(1H,dd,J=9.3Hz,J=9.6Hz,H-2),4.23-4.07(3H,m,H-5,6a,6b),2.20,2.12,2.06,2.00(each 3H,each s,each CH3);
IR(cm-1):3342(NH),2940(CH),1748(ester,C=O),1665(amide,C=O),1629(C=C),1532,1471,1373,1223,1081,1044,869;
MS(ESI(-)70V,m/z):543.9[M-H]-;
Anal.Calcd for C23H25Cl2NO10:C,50.56,H,4.61,N,2.56.Found:C,50.40,H,4.64,N,2.15.
实施例9
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖基)-3-(2-氯苯基)-丙烯酰胺(I-27)的制备
将化合物G2-NH2.HCl 0.5g(1.3mmol)悬浮于20ml干燥CH2Cl2中,冰浴下缓慢滴加干燥三乙胺0.17ml(1.3mmol),溶液澄清,撤冰浴,于室温下搅拌1h后,分批加入HOBt 0.21g(1.56mmol),再加入2-氯肉桂酸0.29g(1.56mmol),再加入EDCI 0.30g(1.56mmol),室温下搅拌36h。反应液依次用水(20ml×2),饱和NaHCO3溶液(20ml×2),饱和食盐水(20ml×2)洗涤,无水Na2SO4干燥过夜。过滤,滤液减压蒸去溶剂。剩余物柱层析(石油醚/乙酸乙酯=1∶1),得白色固体0.38g,收率53.5%,m.p.100-102℃
[α]24D=+18.4(c 0.075,CHCl3);
1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm):7.53(1H,d,J=15.6Hz,-CH=),7.47(1H,s,aromatic),7.35-7.27(3H,m,aromatic),6.32(1H,d,J=15.6Hz,-CH=),5.81(2H,d,J=8.8Hz,overlapping,NH,H-1),5.42(1H,d,J=2.8Hz,H-4),5.21(1H,dd,J=3.3Hz,J=11.3Hz,H-3),4.60(1H,dd,J=9.3Hz,J=10.5Hz,H-2),4.22-4.08(3H,m,H-5,6a,6b),2.20,2.11,2.05,2.00(each 3H,each s,each CH3);IR(cm-1):3375(NH),2970(CH),1751(ester,C=O),1666(amide,C=O),1631(C=C),1547,1431,1369,1221,1077,1041,788,745;
MS(ESI(-)70V,m/z):509.9[M-H]-;
Anal.Calcd for C23H26ClNO10:C,53.96,H,5.12,N,2.74.Found:C,53.91,H,5.42,N,2.44.
实施例10
N-(1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖基)-3-(2,3,4-三甲氧基苯基)-丙烯酰胺(I-29)的制备
将化合物G2-NH2.HCl 0.5g(1.3mmol)悬浮于20ml干燥CH2Cl2中,冰浴下缓慢滴加干燥三乙胺0.17ml(1.3mmol),溶液澄清,撤冰浴,于室温下搅拌1h后,分批加入HOBt 0.21g(1.56mmol),再加入2,3,4-三甲氧基肉桂酸0.37g(1.56mmol),再加入EDCI 0.30g(1.56mmol),室温下搅拌36h。反应液依次用水(20ml×2),饱和NaHCO3溶液(20ml×2),饱和食盐水(20ml×2)洗涤,无水Na2SO4干燥过夜。过滤,滤液减压蒸去溶剂。剩余物柱层析(石油醚/乙酸乙酯=1∶1),得白色固体0.47g,收率63.5%,m.p.92-94℃
[α]24D=+21.3(c 0.28,CHCl3);
1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm):7.75(1H,d,J=15.8Hz,-CH=),7.20(1H,d,J=8.8Hz,aromatic),6.67(1H,d,J=8.8Hz,aromatic),6.32(1H,d,J=15.7Hz,-CH=),5.76(1H,d,J=8.8Hz,NH),5.51(1H,d,J=9.6Hz,H-1),5.41(1H,d,J=2.5Hz,H-4),5.15(1H,dd,J=3.3Hz,J=11.4Hz,H-3),4.64(1H,dd,J=9.3Hz,J=10.5Hz,H-2),4.20-4.07(3H,m,H-5,6a,6b),3.90(3H,s,OCH3),3.89(3H,s,OCH3),3.86(3H,s,OCH3),2.19,2.11,2.05,2.00(each 3H,each s,each CH3);
IR(cm-1):3471(NH),2942(CH),1751(ester,C=O),1660(amide,C=O),1624(C=C),1548,1437,1370,1220,1096,1041,800;
MS(ESI(+)70V,m/z):568.2[M+H]+;
MS(ESI(-)70V,m/z):566.1[M-H]-;
Anal.Calcd for C26H33NO13:C,55.02,H,5.86,N,2.47.Found:C,54.71,H,6.02,N,2.24.
实施例11
片剂
取实施例9中所得化合物0.5g,淀粉2g,糊精1g混合,用适量30%乙醇作湿润剂,制粒,压片。