CN101613380A - 一种氨基糖衍生物,其制备方法及其医药用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药物化学领域，涉及一种氨基糖衍生物、其制备方法及其医药用途，具体涉及化合物N－(1，3，4，6－四－O－乙酰基－2－脱氧－β－D－吡喃半乳糖基)－3－(2，4－二氯苯基)－丙烯酰胺(I)。药理试验证明，本发明的化合物I对鸡胚尿囊膜新生血管形成具有抑制作用，可用于临床治疗肿瘤或慢性炎症。

Description

一种氨基糖衍生物,其制备方法及其医药用途

技术领域

本发明涉及药物化学领域，具体涉及化合物N-(1，3，4，6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖基)-3-(2，4-二氯苯基)-丙烯酰胺、其制备方法、以及对鸡胚尿囊膜新生血管形成的抑制作用。

背景技术

肿瘤血管生成抑制剂(Tumor Angiogenesis Inhibitor，TAI)能够破坏或抑制血管生成，有效阻止肿瘤的生长、转移和复发，与传统抗肿瘤药物比较显示出了巨大的优势。目前已知的TAI基于其作用机理可分为作用于单一信号通路的特异性作用机制药物和多靶点药物。特异性机制药物包括，如VEGF/VEGFR信号通路抑制剂贝伐单抗(Bevacizumab)等。多靶点药物包括多靶点酪氨酸激酶抑制剂索拉非尼(Sorafenib)，沙利度胺(Thailidomide)等。

由于仅抑制单一信号传导通路的作用会促使大量其他类型促血管生成因子的释放并最终导致耐药性的产生。如在临床治疗中发现，贝伐单抗的使用可提高PIGF的体内水平，从而引起耐药性。人们逐渐认识到肿瘤血管生成涉及多重信号传导通路，阻断单一信号传导通路不能起到持续的临床治疗效果。鉴于此多靶点药物是目前的研究热点。而目前在临床研究和应用的多靶点TAI大多是结构复杂的分子，药物的制备比较困难，病人的治疗花费大。因此寻找多靶点、结构简单、易于制备、成本低、毒副作用小的TAI是目前该类药物的研究趋势。

肝素是一种内源性多靶点大分子化合物，能调节VEGF以及FGF的活性。其中，VEGF是促血管生成活性最强的生长因子并在肿瘤血管生成中起重要作用。而FGF可诱导内皮细胞的增殖和迁移。FGF与VEGF对促血管生成具有协同效应，后者可使内皮细胞FGF生成增多，VEGF体外促血管生成的作用及诱导纤溶酶原激活物(PA)的能力也有赖于内皮细胞产生的FGF。有报道称，抗VEGFR2抗体治疗可引起FGF-2分泌上调。

肝素是一种内源性多靶点大分子化合物，能调节FGF以及VFGF的活性。PI-88是一种肝素的类似物，大约含有90％的磷酸甘露戊糖硫酸酯(Phosphomannopentaose sulfate，1，R＝SO₃Na或H，约占2/3～3/5)和磷酸甘露四糖硫酸酯(Phosphomannotetraose sulfate，2，R＝SO₃Na或H，约占1/3～2/5)。目前正在进行III期临床研究[Khachigian L.M.et al.Cardiovascular Drug Reviews.2004，22(1)：1-6]。PI-88作为硫酸乙酰肝素的竞争剂与VEGF和FGF-2相互作用，并作为乙酰肝素酶的抑制剂阻止其水解细胞外基质(Extracellular Matrix，ECM)中的硫酸乙酰肝素，从而抑制肿瘤的生长和转移。也有报道二糖或三糖可模拟肝素的生物活性。但是这些糖类化合物结构复杂，较难分析和制备，难以进行工业化生产。

发明内容

本发明公开了N-(1，3，4，6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖基)-3-(2，4-二氯苯基)-丙烯酰胺及其水合物，经药理实验显示，本发明的该化合物对鸡胚尿囊膜新生血管形成具有较强的抑制作用。因此，本发明的该化合物及其含结晶水的化合物可以用于治疗各种与血管生成相关的疾病，这些疾病包括各种癌症和慢性炎症，以及其它血管原性的疾病。

本发明的化合物结构式如下：

化学名为N-(1，3，4，6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖基)-3-(2，4-二氯苯基)-丙烯酰胺(I)。

发明化合物的水合物也具有与化合物同样的疗效，其中的水合物以结晶水的形式存在，结晶水的摩尔当量从0.5到10。

本发明化合物的制备方法如下：

其中a～e代表反应条件：

a：反应物为苯甲醛；溶剂为氢氧化钠和水。

b：反应物为醋酐；溶剂为吡啶。

c：反应物为HCl；溶剂为丙酮。

d：反应物为碳酸钠；溶剂为水。

e：反应物为草酰氯，或二氯亚砜，或EDCI/HOBt；溶剂为二氯甲烷或DMF。

下面是本发明化合物I的药理试验及结果。

本发明部分化合物对鸡胚尿囊膜新生血管作用测试方法如下：

材料：

种蛋：受精4天，100只，购自浙江光大种禽业有限公司。

TPT冻干粉：黄石飞云制药有限公司。

DMSO：Sigma公司。

稀释方法：化合物I先用DMSO配成母液，给药前用新鲜培养基稀释使用。

操作流程：

将种蛋用温水清洗2次，于1∶1000新洁尔灭中浸泡3min后放入37℃孵化箱相对湿度65％，种蛋气室向上，翻转种蛋1次/h，至孵蛋第6天，在照蛋灯下观察种蛋生长情况，剔除未受精卵。用解剖针在气室顶端扎1小洞，可使鸡胚的尿囊绒毛膜(Chorio AllantiocMembrane，CAM)与鸡蛋的内壳膜分开。照蛋灯下寻找胚头，在受精卵距胎头前1cm两条前卵黄静脉之间的卵壳投影部位标记1.0cm×1.0cm的正方形区域，用砂轮沿这个区域磨切透卵壳至蛋壳表面划刻出凹痕，轻揭凹陷处蛋皮，轻轻撕掉内壳膜，此时可见该处CAM连同鸡胚下陷，假气室形成(区别于自身的气室)。用透明胶带纸封贴假气室，形成透明观察窗，继续放入37℃孵化箱孵化1天。

于第二天取出鸡蛋，剔除变质鸡蛋。将剩余鸡蛋分成：模型组，DMSO组，TPT组(10μg/个)，和化合物，每组各3只，轻轻撕掉透明胶带纸，取直径约0.5cm的混合纤维素微孔滤膜片(预先高压灭菌)作为载体，置于正对观察窗的CAM表面，避开大血管，用无菌加样器吸取各组相应的药液滴于载体表面中央。加药2d后，去除透明胶带纸，将甲醇与丙酮各半的固定液滴入观察窗，将CAM固定，去除鸡胚，分离观察窗周围CAM。

用Image-Pro Plus 5.0图像分析软件，对化合物I抗新生血管形成能力进行半定量分析。结果如下：

表1.化合物I抗新生血管形成能力

与对照组比：^*：p＜0.05，^**：p＜0.01 ^***：P＜0.001

表1中，control为空白对照，DMSO为溶剂对照，TPT为阳性对照(阳性对照药为喜树碱)。

药理测试结果表明，本发明的化合物(10μg，p＜0.05)能抑制鸡胚尿囊膜新生血管形成。

本发明还提供了一种治疗与血管生成相关的疾病的药物组合物，其中含有治疗有效量的本发明化合物I和药学上可接受的载体。所述药物组合物可以是普通片剂或胶囊、缓释片剂或胶囊、控释片剂或胶囊、口服液、注射剂等制剂学上常规的制剂形式。

一般地，本发明的N-(1，3，4，6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖基)-3-(2，4-二氯苯基)-丙烯酰胺用于治疗时，人用剂量范围为1mg～5000mg/天。也可根据剂型的不同和疾病严重程度，使用剂量超出该范围。

具体实施方式

实施例1

N-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-1-脱氧-β-D-吡喃半乳糖基)-3-(2，4-二氯苯基)-2-丙烯酰胺(I)的制备2-亚苄基-1，3，4，6-四羟基-2-脱氧-β-D-吡喃氨基半乳糖(4)

0℃下将1，3，4，6-四羟基-2-脱氧-D-吡喃氨基半乳糖盐酸盐10g(46mmol)加入到含有NaOH2.2g(55mmol)的47mL水溶液中，机械搅拌下缓缓加入苯甲醛5.4mL(53mmol)，很快析出白色固体，继续搅拌1h后停止反应，0℃下放置12h，过滤，依次用水、V(乙醚)∶V(乙醇)＝4∶1的混合溶剂洗涤，红外灯下干燥得白色固体混合物10g，未经纯化直接投下步反应。

2-亚苄基-1，3，4，6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃氨基半乳糖(5)

将含有中间体4的混合物10g加入到60mL吡啶中，冰水浴中搅拌下加入醋酸酐42mL(0.46mol)，升温至35℃～40℃，保温6h，30℃下减压蒸出部分溶剂，将剩余反应液倒入100ml冰水中，有白色固体析出，搅拌1h，过滤，依次用水、石油醚洗涤，红外灯下干燥得白色固体11.5g，未经纯化直接投下步反应。

1，3，4，6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃氨基半乳糖盐酸盐(6)

将含有中间体5的混合物4.4g加入到200mL丙酮中，滤出少量不溶物，滤液室温搅拌下缓慢加入含浓HCl 4.4g的5mL甲醇溶液，很快析出白色固体，反应1h后加入乙醚停止反应，冷却，0℃下保温1h，过滤，滤饼用乙醚洗涤，红外灯下干燥得白色固体3.8g，产率100％，m.p.200～204℃(炭化)(文献值：m.p.204～206℃[European Journal of Organic Chemistry，2006，61，657-671])

N-(1，3，4，6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖基)-3-(2，4-二氯苯基)-丙烯酰胺(I)

将2，4-二氯肉桂酸(0.38g，1.73mmol)悬浮于1ml二氯亚砜中，加热至回流，2h后停止反应，减压除去溶剂得白色油状物，无需纯化直接投入下一步反应。

化合物60.5g(1.44mmol)溶于7mLCH₂Cl₂中，搅拌下加入碳酸钠(0.15g，1.4mmol)的水(7mL)溶液。将新鲜制得的酰氯溶于4ml CH₂Cl₂中，缓慢滴入到以上的两相溶液中，于室温下搅拌24h。将反应液移入分液漏斗中，分出有机层，水层用CH₂Cl₂(10mL×1)萃取，有机相合并后依次用饱和NaHCO₃溶液(10ml×2))，饱和NaCl溶液洗涤，无水Na₂SO₄干燥过夜。过滤，滤液减压蒸去溶剂。剩余物硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯＝3∶2)，得白色固体即化合物I0.52g，收率66.3％，m.p.95～97℃；

[α]^16.6 _D＝-3.06(c 0.085，CHCl₃)；

¹H-NMR(300MHz，CDCl₃)δ(ppm)：7.96(1H，d，J＝15.6Hz，-CH＝)，7.52～7.26(3H，m，ArH)，6.50(1H，d，J＝8.4Hz，NH)，6.32(1H，d，J＝15.6Hz，-CH＝)，5.47(1H，d，J＝1.5Hz，H-4)，5.37(1H，t，J＝9.0Hz，H-1)，5.19-5.17(2H，m，J＝9.6Hz，H-2，H-3)，4.12-4.10(3H，m，H-5，H-6a，H-6b)，2.16，2.07，2.05，2.01(each 3H，each s，4×OAc)；

¹³C-NMR(300MHz，CDCl₃)δ(ppm)：171.60，170.34，169.97，169.69(4C，ester C＝O)，165.07(1C，amide C＝O)，136.32，135.59，131.28，130.64，128.40，127.55(6C，ArC)，137.85，122.68(2C，CH＝CH)，78.90，72.48，70.82，68.53，67.26，61.17(6C，carbohydrate ring carbons)，20.77，20.64，20.56，20.50(4C，4×CH₃)；

IR(cm^-1)：3369(NH)，2961，2935(CH)，1751(ester，C＝O)，1688(amide，C＝O)，1632(C＝C)，1584，1537，1370，1225，1123，1084，1051，789；

MS(ESI(+)70V，m/z)：546.0[M+H]+；

Anal.Calcd for C₂₃H₂₅C₁₂NO₁₀：C，50.56，H，4.61，N，2.56.Found：C，50.27H，4.61，N，2.48.

实施例2

片剂

取实施例1中所得化合物I 500mg，淀粉2g，糊精1g混合，用适量30％乙醇作湿润剂，制成软材，常规方法制粒，加入适量硬脂酸镁，制成片剂。

Claims (5)

1、下列结构式I的化合物或其水合物：

2、权利要求1中的化合物或其水合物，其中的水合物以结晶水的形式存在，结晶水的摩尔当量从0.5到10。

3、一种药物组合物，其中含有权利要求1的化合物或其水合物和药学上可接受的载体。

4、权利要求1的化合物或其水合物在制备治疗血管生成性疾病的药物中的用途。

5、权利要求4的用途，其中血管生成性疾病是肿瘤或慢性炎症。